JPS5834115B2 - 抗生物質 - Google Patents

Description

【発明の詳細な説明】 抗生物質チェナマイシン（ｔｈｉｅｎａｍｙｃｉｎ ）
はグラム陽性及び陰性菌の両者に対して有効である。

本抗生物質は新しく発見された未記載のストレプトマイ
セス種を適当な醗酵培地中で増殖させて生産する。

ペニシリンの顕著な抗生物質活性の発見はこの分野に大
きな興味を鼓舞し、他のペニシリン、ストレプトマイシ
ン、バシトラシン、テトラサイクリン、クロラムフェニ
コール、エリスロマイシン等の多くの他の貴重な抗生物
質の発見をもたらした。

一般にこれらの各抗生物質の抗菌活性はある種の臨床上
重要な病原菌を含まない。

例えば、あるものは主にダラム陽性菌に対してのみ有効
である。

細菌感染の治療において既存の抗生物質の広汎な使用過
程で獲得された抵抗性は深刻な耐性の問題を引起してい
る。

従って既知抗生物質の欠陥はある微生物の耐性株ととも
により広汎な病原菌に対して有効な抗生物質を発見する
更なる研究を鼓舞している。

本発明は新規抗生物質に関する。

より詳しくは本発明はこの中でチェナマイシンと呼ぶ新
規抗生物質に関する。

本発明は希釈形体、粗濃縮物及び純粋形体の抗生物質を
含む。

種々のダラム陰性及び陽性菌の増殖の阻止に非常に有効
な新規の有用な抗生物質を提供することが本発明の目的
である。

他の目的は未記載の微生物で栄養培地を醗酵させること
による本新規抗生物質の調製法を提供することである。

他の目的は以後の本発明の詳細な記述から明らかとなる
だろう。

本発明の新規抗生物質はこれまで未記載の微生物ストレ
プトマイセスカトレヤ（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ Ｃ
ａｔｔｌｅｙａ）を制御条件下増殖させて生産する。

詳細な分類学的研究に基いて、土壌試料から単離したス
トレプトマイセスカトレヤ（Ｓ ｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅ
ｓ Ｃａｔｔｌｅｙａ ）はこれまで未記載のアクチ
ノミセーテと同定され、メルク社、ローウェイ、ニュー
シャーシー州（ＭＥＲＫＣｏ 、 Ｉｕｃ 、Ｒａｈｗ
ａｙ、Ｎ、 Ｊ ）の収集菌株（ｃｕｌｔｕｒｅ ｃ
ｏｌｌｅｃｔｉｏｎ ）においてＭＡ −４２９７と命
名された。

この菌株は北部研究所、北部利用研究及び開発部門、農
業研究施設、合衆国農務省、ペオリア、イリノイ州（ｔ
ｈｅ ＮｏｒｔｈｅｒｎＢｅｇｉｏｎａｌ Ｒｅ５ｅ
ａｒｏｈ ｈａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ。

Ｎｏｒｔｈｅｒｎ Ｕｔｉｌｉｚａｔｉｏｎ Ｒｅ５ｅ
ａｒｃｈ ａｎｄＤｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ Ｄｉｖｉ
ｓｉｏｎ 、 ＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌＲｅｓｅａｒ
ｃｈ ５ｅｒｖｉｃｅ、 Ｕ、Ｓ、Ｄｅｐａｒｔｍｅ
ｎｔ ｏｆＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒｅｌＰｅｏｒｉａ、
Ｉｌｌ ）の永久寄託に対し、受託番号ＮＲＲＬ８０
５７と定められた。

ストレプトマイセス カトレヤＭＡ−４２９７微生物受
託番号微工研菌寄第３３０９号 パージ（Ｂｅｒｇｅｙ ）のマニュアル・オブ・デター
ミネーテテイブバクテリオロジー（Ｍａｎｕａｌｏｆ
Ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｖｅ Ｂａｃｔｅｒｉｏｌｏｇ
ｙ ） ７版、１９５７年及びＳ、Ａ ワックスマン（
Ｗａｋｓ ｍ ａｎ ）によるジ・アクチノミセーテス
（Ｔｈｅ Ａｃｔｉｎｏｍｙｃｅｔｅｓ ） ２巻（１９６１年）
及びＥ、Ｂ、シャーリング（Ｓｈｉｒｌｉｎｇ ）及び
り、ゴツトリーブ（Ｇｏｔｌｉｅｂ ）による゛ストレ
プトマイセス（Ｓ ｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ ）のタイ
プカルチャーノ協同論文”インターナショナル・ジャー
ナル・オプ・システマテイツクバクテリオロジー （Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ Ｊｏｕｒｎａｌ
ｏｆ ＳｙｓｔｅｍａｔｉｃＢａｃｔｅｒｉｏｌｏｇ
ｙ） １８．６９−１８９（１９６８）１８．２７９
−３９２（１９６８）、１９．３９１−５１２（１９６
９）及び２２．２６５３９４（１９７２）中にみられる
ストレプトマイセス（Ｓ ｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ ）
属のための分類の鍵及びストレプトマイセス（Ｓ ｔｒ
ｅｐｔｏｍｙｃｅｓ ）種の菌株の記載を調べてＭＡ−
４２９７に類似した形態的及び培養上の特徴をもつスト
レプトマイセス（Ｓ ｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ ）種を
探した。

これらの古典的な参考書中にはＭＡ−４２９７の特徴を
なす気菌糸が淡紫色に呈色し可溶性色素を出さないスト
レプトマイセス（Ｓ ｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ ）種は
記載されていない。

これらの考案は新ストレプトマイセス（Ｓ ｔｒｅｐｔ
ｏｍｙｃｅｓ ）種をあてがうことを正当化しかつ必要
とする。

ストレプトマイセスカトレヤ（Ｓ ｔｒｅｐｔｏｍｙｃ
ｅｓＣａｔｔｌｅｙａ ）の形態上及び培養上の特徴を
次表に示す。

形態 胞子柄は気菌糸上に側及び端末分岐として生じ詰ったラ
セン状である。

胞子は楕円ないし円筒形で、大きさは０．９μ×１．２
μであり１０個以上の鎖をなしている。

培養 トマスペーストーオートミール寒天 栄養菌糸の増殖−裏一黄かつ色、扁平状、豊富（Ｓｐｒ
ｅａｄｉｎｇ ） ： 気菌糸−白色の混った淡紫色（１０ｇｃ）：可溶性色素
−無 ツアペックドックス（Ｃｚａｐｅｋ Ｄｏｘ ）寒天（
蔗糖硝酸塩寒天） 栄養菌糸の増殖−無色、扁平状、豊富： 気菌糸−希薄、ピンクがかった白； 可溶性色素−無 卵アルブミン寒天 栄養菌糸の増殖−灰色がかった淡紫色気味の黄かつ色、
扁平状、豊富； 気菌糸−淡紫色の明るい影及びいくらか白の混った淡紫
色（１０ｇｃ）： 可溶性色素−無 グリセリンアスパラギン寒天 栄養菌糸の増殖−裏一灰色がかったピンク気味の黄かつ
色、扁平状、豊富； 気菌糸−いくらか白の混った淡紫色（１０ｇｃ）：可溶
性色素−無 酵母エキス−グルコース＋塩寒天 栄養菌糸の増殖−灰色がかったピンク気味の黄かっ色； 気菌糸−ピンクがかった白の混った淡紫色（１０ｇｃ
） ： 可溶性色素−無 酵母エキス−麦芽エキス寒天 栄養菌糸の増殖−黄かっ色； 気菌糸−ピンクがかった白の混った淡紫色（１０ｇｃ）
； 可溶性色素−無 ペプトンー鉄−酵母エキス寒天 栄養菌糸の増殖−黄かっ色； 気菌糸−無 可溶性色素−培地を少し褐色にする； メラニン−陰性 Ｈ２Ｓ生産−陰性 栄養寒天 栄養菌糸の増殖−明黄かっ色； 気菌糸−無 可溶性色素一無 栄養澱粉寒天 栄養菌糸の増殖−クリーム色ないし黄かっ色；気菌糸−
無 可溶性色素−無 澱粉の加水分解−中位 栄養ゼラチン寒天 栄養菌糸の増殖−クリーム色； 気菌糸−無 可溶性色素一無 ゼラチンの液化−中位 ゼラチン穿刺 栄養菌子の増殖−黄かっ色； 気菌糸−無 可溶性色素一無 ゼラチン液化−中位 じゃがいもフラッグ（Ｐｌｕｇ） 栄養菌糸の増殖−中位、黄かっ色； 気菌糸−希薄、灰色がかったピンク気味の白色；可溶性
色素−無 ロエフラー血清（Ｌｏｅｆｆｌｅｒｓ Ｂｌｏｏｄ
ｓｅｒｕｍ ）栄養菌糸の増殖−クリーム色； 気菌糸−無 可溶性色素一無 液化一無 脱脂乳寒天 栄養菌糸の増殖−黄かっ色； 気菌糸−希薄、白色 可溶性色素−培地をわずかにかつ色にする；カゼインの
加水分解−陽性 リトマス乳 栄養菌糸の増殖−黄かつ色ないし褐色： 気菌糸−無 色−可溶性色素生成せず、リドマス指示薬は青色になる
； 凝固及び／又はペプトン化一部分的にペプトン化、アル
カリ性になる 脱脂乳 栄養菌糸の増殖−黄かっ色： 気菌糸−無 可溶性色素一無 凝固及び／又はペプトン化一部分的にペプトン化、アル
カリ性になる チロシン寒天 栄養菌糸−黄かっ色； 気菌糸−淡紫色（１０ｇｃ ）及び白色の混合；可溶性
色素−無 チロジンの分解−陽性 上に報告した判定の全ては、別に記した以外は２８℃で
３週間培養後に行った。

これらの実験において使用した培地のｐＨは大体中性即
ちｐＨ６．８〜７．２であった。

記述中に用いた色調表現はカラハーモニイーｑ＝ユアル
（ｃｏｌｏｒ ＨａｒｍｏｎｙＭａｎｕａｌ ） ４
版（１９５８）、コンテイナー・コーポレーション・オ
ブ・アメリカ（Ｃｏｎｔａｉｎｅｒｃｏｒｐｏｒａｔｉ
ｏｎ ｏｆ Ａｍｅｒｉｃａ ）シカゴ、イリノイ州
の定義に従った。

ストレプトマイセスカトレヤ（Ｓ ｔｒｅｐｔｏｍｙｃ
ｅｓＣａｔｔｌｅｙａ）は又種々の炭水化物を利用する
即ち同化する能力について試験した。

この目的のために菌を１％の炭水化物を含む基礎合成培
地（プリダム及びコツトリーブ上で２８℃３週間培養し
た。

実験に用いた培地のｐＨは大体中性であった（６．８〜
７．２）。

表１はストレプトマイセスカトレヤ（Ｓｔｒｅｐｔｏｍ
ｙｃｅｓ Ｃａｔｔｌｅｙａ ） によるこれらの
炭水化物源の利用性を示している：＋その炭水化物上の
良好な増殖を示す、士貧弱な増殖、増殖せず。

菌の温度変化による増殖量、酸素要求及び硝酸塩に対す
る影響は次の通りである： 温度範囲（酵母エキス−グルコース＋塩寒天）；２８℃
〜良好 ３７℃−中位 ５０℃−増殖せず 酸素要求（酵母エキス−グルコース＋塩寒天中の穿刺培
養）； 好気性 硝酸塩還元性−陽性 本発明の新規抗生物質の生産のために、本発明は説明の
目的のために提示したストレプトマイセスカド′ヤ（Ｓ
ｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ Ｃａｔｔｌｅｙａ ）又を
ま上の増殖及び顕微鏡的特徴に完全にかなう微生物に限
定されるものではないことを理解すべきである。

事実、Ｘ線照射、紫外線照射、ナイトロジエンマスター
ド、ファージ感染等の種々の方法によって上述の微生物
から作られた変異株の使用を含むことが望ましくそして
意図されている。

本発明の新規抗生物質、チェナマイシンはストレプトマ
イセスカトレヤ（Ｓ ｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓＣａｔｔ
ｌｅｙａ ）の接種による適当な水性栄養培地の制御条
件下の好気醗酵の間に生産される。

他の抗生物質の生産に使用されるような水性培地がチェ
ナマイシンの生産のために適当である。

そのような培地は微生物によって同化されうる炭素、窒
素及び無機塩源を含む。

一般に糖類例えばグルコース、フラクトース、マルトー
ス、シュークロース、キシロース、マンニット等の炭水
化物及び穀類例えばオート麦、ライ麦、コーンスターチ
、コーンシール等の澱粉カ単−又は組合せて栄養培地中
の同化炭素源として使用できる。

培地中の炭水化物源の厳密な量は一部は培地中の他の成
分に依存するが、一般に炭水化物の量は通常培地重量の
約１％から６％の間である。

これらの炭素源は個々に使用することができ、又いくつ
かのそのような炭素源を培地中で組合せることもできる
。

一般に、多くの蛋白性物質を醗酵過程の窒素源として使
用できる。

適当な窒素源は例えば酵母加水分解物、酵母末、大豆粉
、綿実粉、カゼイン加水分解物、コーンスタープリカー
、デイステイラーズソリュープル又はトマトペースト等
を含む。

窒素源は単−又は組合せて水性培地重量の約０．２％か
ら６％の範囲で使用する。

培養培地中に使用できる栄養無機塩にはす） ＩＪウム
、カリウム、アンモニウム、カルシウム、リン酸、硫酸
、塩酸、炭酸等のイオンを生ずることのできる通常の塩
が含まれる。

更にコバルト、マンカン、鉄及びマグネシウムのような
微量金属も含まれる。

例中に述べる培地は単に使用できる培地の多様性を例示
しているのであり、限定のためではないことに留意すべ
きである。

醗酵は約２０℃から３７℃の範囲の温度で行うが、最良
の結果を得るためには醗酵を約２２℃から３０°Ｃの温
度で行うことが好ましい。

ストレプトマイセスカトレヤ（Ｓ ｔｒｅｐｔｏｍｙｃ
ｅｓ Ｃａｔｔｌｅｙａ ）の増殖及びチェナマイシン
の生産に適当な栄養培地のｐＨは約６．０から８．０ま
で変えることができる。

新規抗生物質チェナマイシンは表向及び液内培養の両方
によって生産されるが、醗酵を液内状態で行うことが好
ましい。

抗生物質の小規模醗酵は適当な栄養培地に抗生物質生産
菌を接種し、生産培地に移した後、振盪機上約２４℃の
温度で数日間醗酵させて行う。

醗酵は種拡大の１又はそれ以上の段階を経て培地を含む
滅菌フラスコ中で開始する。

種段階のための栄養培地は炭素及び窒素源のどのような
適当な組合せでもよい。

種フラスコを恒温室中で約２８℃で２日間又は増殖が十
分になるまで振盪し、生じた培養液の一部を第２段種又
は生産培地に接種するために使用する。

中間膜種フラスコを使用する時は、実質上同じ方法で拡
大する：即ち前の種段階からのフラスコの内容物の一部
を生産培地に接種するために使用する。

接種したフラスコを恒温で数日間振盪し、培養期間の後
フラスコの内容物を遠心分離するか又は濾過する。

大規模醗酵のためには醗酵を攪拌機及び通気装置付きの
適当なタンク中で行うことが好ましい。

この方法に従って栄養培地をタンク中で調製し、温度を
約１２０℃まで上げて殺菌する。

冷却後、殺菌培地に生産菌の前もって増殖させた種を接
種し、栄養培地を攪拌及び／又は通気し、温度を約２４
℃に保ちながら醗酵を一定期間例えば３から５日間行う
。

チェナマイシンのこの生産法は大量の抗生物質の調製に
適している。

チェナマイシンの物理化学的性質 チェナマイシンは水に非常に可溶でメタノールに少し溶
ける白色固体である。

リン酸緩衝液中の見かけの分子量は短カラム沈降法及び
３００ｎ７１Ｌに吸収をもつ物質の沈降帯を検出するた
めの紫外線吸収光学を使用して分析超遠心分離によって
決定し約２８２ダルトン（Ｄａｌｔｏｎｓ ）と計算さ
れる。

電界脱着（Ｆｉｅｌｄ−ｄｅｓｏｒｐｔｉｏｎ ）、質
量スペクトルは２７２０分子量を示す。

走査電子顕微鏡のビーム下抗生物質が発するＸ線のエネ
ルギー分散分析から、結合分子量２９０±２０を有意量
存在する原子番号９以上の唯一の元素である硫黄に基い
て、確定した。

チェナマイシンは高分解能質量分析から推論して実験式
Ｃ１゜Ｈ１６Ｎ２０４Ｓを有する。

この実験式に対応する計算元素組成は炭素４８．５２％
、水素５．９２％、窒素１０．２９％、酸素２３．５％
及び硫黄１１．７７％である。

チェナマイシンの又ショール中の赤外吸収スペクトル（
図１）は次の吸収ピークを示す：１７６５ｃｒｒＬ ’
の鋭いピーク １６５０〜１５５０ｃｒＩＬ−１ ２８００〜２５００Ｃ１ｒＬ−１及び ３５００〜３１００ｃｒＩＬ−１の幅広いピーク他の吸
収帯は１２９０，１２４５．１１５０〜１１３０．１０
６５．９９５．９７０．９４５〜９３５．８８５．８０
５．７８５及び７２０（ｍ’ にみられる。

重水から凍結乾燥したチェナマイシンの濃度１．５ｍ９
１０．４ｒｎｌＤ２０ 、少量の内部基準物質２・２−
ジメチル−２−シラペンタン−５−スルホン酸ナトリウ
ムを含む１００ ＭＨｚ のＮＭＲスペクトルは次の
ピークを示す： δ １．２７５、ｄ、３Ｈ，Ｊ＝６．８ ；δ３．１５
、ｍ、６Ｈ： δ３，３９、ｄｄ 、ＩＨ，Ｊ＝６．０．２．９；δ４
．２０．ｍ、２Ｈ チェナマイシンは比旋光度〔α９１７°Ｃ＋８２．７（
Ｃ＝０．１％、Ｗ／Ｖ、１０ｍＭリン酸バッファー中、
ｐＨ６，９５）を有する。

旋光分散は３１１１１ｍにピーク、２４２Ｈｍに谷をも
つ一つの正のコツトン効果を示す、円偏光二色性は２８
７．５ｎｍに正の極大を２１６ｎｍに負の極大を示す。

ｐＨ４から８の範囲の水溶液中のチェナマイシンの紫外
線吸収スペクトルは２９６．５ｎｍにピー１％ り（Ｅ ＝２９０、ε−７９００）を２４２ｃｒｒ
Ｌ １％ ｎｍに谷（Ｅ ＝８８）を示す。

ｐＨ２の溶液ＣｒｒＬ の調製直後にとったスペクトルは吸収極太の３０９ｎｍ
への赤色移動を示す。

ｐＨ１２に調製直後にとったスペクトルは吸収極大の３
００．５ｎｍへの赤色移動を示す。

チェナマイシンは内部的に中和されている両性物質で、
その酸性関数（ａｃｉｄｉｃ ｆｕｎｃｔｉｏｎ ）
は３０ ｍＭ ’）ン酸バッファー中で紫外線吸収ス
ペクトル中のｐＨ起因の移動を利用して測定するとｐｋ
ａｌ＝３．０８を有する。

ニンヒドリン、ヨード白金酸塩及びフォリン（Ｆｏｌｉ
ｎ ）試薬に対しては陽性呈色反応を示す。

板目試験は陰性である。

チェナマイシンを螢光試薬を含むセルロース板の薄層ク
ロマトグラフィーに付し、エタノール：水（７０：３０
）で展開すると、別々に用いた次の基準の各々によって
Ｒｆ値０．４５から０．５０に検出される：（１）検定
菌スタフィロコッカスアウレウス（Ｓ ｔａｐｈｙｌｏ
ｃｏｃｃｕｓ ａｕｒｅｕｓ ）ＭＢ −１０８。

今後スタフィロコッカスアウレウス （Ｓ ｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ａｕｒｅｕｓ ）
ＡＴＣＣ６５３８Ｐと呼ぶ、を接種した寒天板上の生物
検定法 （Ｂ ｉｏａｕｔｏｇｒａｐｈｙ ） （２） 投射
紫外線によって励起された螢光の消滅、（３）ニンヒド
リン噴霧及び加熱による桃色呈色反応、（４）ヨード白
金酸塩噴霧試薬のゆつ（すした漂白。

いくつかの他のクロマトグラフィー系におけるチェナマ
イシンの移動性を次に示す： アビセルは結晶セルロースに対するアメリカンビスコー
ス社（Ａｍｅｒｉｃａｎ ＵｉｓｃｏｓｅＣｏｒｐｏｒ
ａｔ ｉ ｏｎ ）の商標である。

Ｒｆ値は原点から溶媒先端の距離で割った原点から生物
活性の中心（スタフィロコッカスアウレウス （Ｓ ｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ａｕｒｅｕｓ
） ＡＴＣＣ６５３８Ｐの生物検定で決定）の距離を意
味する。

モデルＫＬＡ −８Ｈｉｔａｓｈｉ −Ｄｅｒｈｉｎ
−Ｅ１ｍｅｒ分析機で行ったチェナマイシンの酸加水分
解物のアミノ酸分析は１個の主要なニンヒドリン反応性
成分を示し、それはアラニンとグリシンの中間の保持時
間をもち、４４０ｎｍの吸収が５４０ｎｍのそれの３倍
であるニンヒドリン反応生成物を与える。

抗生物質をチオエーテル及びスルフヒドリルを各々スル
ホン及びスルホン酸に変換するために使用する典型的な
方法で、冷遇ギ酸続いて具化水素と反応させた後加水分
解すると、アミノ酸分析はアスパラギン酸よりも少し大
きな保持時間をもつ１つの主要なニンヒドリン反応性成
分を示し、これは５４０ｎ７７Ｌの吸光度が４２Ｏｎ７
７Ｌのそれの３．２倍であるニンヒドリン反応生成物を
与える。

この成分は同様の酸化及び加水分解に付した標準物質の
溶出時間との比較からタウリン（２−アミノエタンスル
ホン酸）と同一であった。

この比較から回収したタウリンの割合は反応させたチェ
ナマイシン■当り０．８μモルであると決定した。

チェナマイシンは１ ｒｎ９／ｒｒＬｌ以下の濃度でｐ
Ｈを６から７の間に保つリン酸バッファーの存在下に保
持する時、水溶液中の最良の安定性を示す。

例えば水中１１ｎ９／１ｒＬｌ溶液（ｐＨ７，０）は０
℃に保つと、２０日間の半減期（ｈａｌｆｌｉｆｅ ）
をもち、一方１０ｍＭリン酸カリウム（ｐＨ７，０）中
同じ濃度では半減期は３７日に増大する。

しかしながら、抗生物質の１０ｍＭ！Ｊン酸バッファー
中１２■／ｍｌ溶液を１０℃に保つと、それはわずか３
日の半減期を示す。

この溶液は初めは黄白色であるが、４８時間の貯蔵後は
濃コハク色を呈する。

チェナマイシンの酸性のｐＨ範囲での室温下の半減期は
１３４６分、ｐＨ４，０；３０分、ｐＨ３，０；６．７
分、ｐＨ２，０であり、各々の場合に３０ｍＭリン酸バ
ッファーを水素イオン調整のために使用する。

アルカリ性下３０℃における半減期は１１０分、ｐＨ８
，２； ５．７分、ｐＨ８，８（ホウ酸バッファー）及
び２，１分、ｐＨ１２（０，０１Ｍ水酸化ナトリウム）
である。

ｒｕｌ当り抗生物質０．０５μモル及びヒドロキシルア
ミン４μモルを含む反応混合物中ｐＨ７，０で２０℃に
保つと、抗生物質活性及び２９６．５μｍで測定する紫
外線吸光度は半減期５．７分の正確な割合で減少する。

試薬がｒｒＬｌ当り４μモルのシスティンでｐＨ７，０
で２０℃に保つと２．５分の半減期が観察される。

最後に抗生物質活性及び吸光度はエンテロバクダークロ
アセ（Ｅｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒｃｌｏａｃｏｅ ）株
の超音波破壊で得られたβ−ラクタマーゼで処理すると
消失する。

チェナマイシンは次のような分子構造をもつと思われる
： 従って、本発明は該一般式で表わされる化合物（チェナ
マイシン）、及び該一般式で示される化合物（チェナマ
イシン）を主成分とする細菌感染症治療剤に関する。

更に詳細には、該一般式で示される化合物（チェナマイ
シン）の含有量が少なくとも５０単位／ｒＩｌｌである
前記細菌感染症治療剤、及び該一般式で示される化合物
（チェナマイシン）の含有量が少なくとも２単位／■（
固体）である＊＊前記細菌感染症治療剤に関するもので
ある。

チェナマイシンは次の抗菌スペクトルによって更に特徴
づけられる。

試験はバウアーキルビイ（Ｂ ａｕｅｒ −Ｋ １ｒｂ
ｙ ）のディスク拡散法を用いて、ここで使用した２關
の寒天の厚さの点のみ修正して行った。

阻止円の直続をミリメートルで表わした結果を表１に示
す。

十分に純粋な抗生物質の更なる評価は寒天希釈法を用い
た。

２Ｘ１０’からｌＸｌ０”個の菌を含む０．００２ｍ１
の滴を、０．０１から７３ｔｔ？／ｒＩｌｌの範囲の抗
生物質の順次の２倍の希釈液を含むミューラーヒントン
（Ｍｕｅｌｌｅｒ −Ｈｌｎｔｏｎ ）寒天表面に接種
する。

結果（表２）を最低阻止濃度μ９ ／ｒｕｌとして報告
するが、これは試験菌の増殖が３７℃で１８時間にわた
って阻止される最低の抗生物質濃度である。

チェナマイシンはグラム陰性及びグラム陽性菌に対して
インウイボ活性を示し、それ故宿主動物における細菌感
染の制御に有効である。

インウイボ活性を測定するために、チェナマイシンを０
．１５Ｍ ＮａＣ１，０，０１Ｍリン酸ナトリウム、
ｐＨ７，０で溶解及び希釈して試験のための薬の４倍稀
釈液の５段階の濃度を得る。

平均体重的２１１のメスの白スイスマウスに培養液中懸
濁した試験菌を腹腔内及び皮下に感染させた。

注射した細菌数は標準プレート計数法によって決定した
。

感染時及び６時間後に再びマウスある抗生物質を腹腔内
、皮下及び経口的に処置した。

５匹のマウスを試験する薬の各濃度に対して使用した。

更に感染させない２匹のマウスに抗生物質を処置して注
射した薬の量が有毒か否かを調べた。

感染細菌の数段階の希釈液の各々に対して５匹のマウス
をコントロールに用いて、感染させて処置しなかったマ
ウスの５０％を死亡させる細菌数（ＬＤ ５０ ）を計
算した。

この計算は感染７日後の生存数を用いて行い、この時に
感染マウスの５０％を生存させる薬量（ＥＤ５０）を計
算した。

この挑戦を受は抗生物質で処置しなかった動物の全ては
感染４８時間以内に死亡した。

即当９３００００単位の濃度のチェナマイシンの効力を
表３に報告する： マウスの体重ｋｇ当り５００ηの抗生物質を静注投与後
７日間、悪影響が観察されないことから、哺乳動物に対
する低毒性が確認された。

チェナマイシンは種々のダラム陽性及び陰性菌に対して
有効な価値ある抗生物質であり従って人間及び動物の医
療に使用できる。

本発明の抗生物質はダラム陽性又は陰性菌による感染の
処置のための抗菌剤として例えばスタフィロコッカスア
ウレウス（５ｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ａｕｒｅｕ
ｓ ）、プロテウスミラビリス（Ｐｒｏｔｅｕｓ ｍ１
ｒａｂｉｌｉｓ）、エスケリツチャコリ（Ｅｓｃｈｅｒ
ｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ ）、クレブジーラニューモニエ
（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ Ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ ）、
シュードモナスアエルギノーサ（Ｐｓｅｕｄｎｍｎｎａ
ｓａｅｒｕｇｉｎｏｓａ ）及びエンテロバクタ−クロ
アセ（Ｅｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒ ｃｌｏａｃａｅ ）
に対して使用できる。

本発明の抗菌物質は更に動物飼料の添加剤として、食品
の保存のために及び殺菌剤として使用できる。

例えば本抗生物質は溶液中１００万分の０．１から１０
０部の範囲の濃度の水溶液成分として、医科及び歯科器
具上の有毒細菌の増殖を破壊及び阻止するために、又工
業面において例えば水性ペンキ及び製紙工業の白水中で
の有害細菌の増殖を阻止する殺菌剤として使用できる。

本発明の抗生物質は単−活性成分としであるいは１個又
はそれ以上の他の抗生物質と混合しであるいは１個又は
それ以上の薬として活性な物質と混合して種々の製薬調
剤のいづれにおいても使用できる。

前者の例として、ゲンタミシン（ｇｅｎｔａｍｉｃｉｎ
）のようなアミノシクリトール抗生物質を耐性菌が生
ずる機会を最小化するためにいっしょに投与できる。

後者の例として、ジンエノキシレート及びアトロピンを
胃腸炎の治療のための投与形体において混合することが
できる。

抗生物質はカプセル体で又は錠剤、粉末又は溶液として
又は懸濁液又はエリキシルとして使用できる。

それは経口的、局所的、腹腔内又は筋肉内に投与できる
。

経口投与のための錠剤及びカプセル剤は単位投与形体に
することができ、結合剤例えばシロップ、アラビアゴム
、ゼラチン、ソルビトール、トラガカント、又はポリビ
ニルピロリドン；充填剤例えばラクトース、砂糖、とう
もろこしでんぷん、リン酸カルシウム、ソルビトール又
はグリシン：潤滑剤例えばステアリン酸マグネシウム、
滑石、ポリエチレングリコール、シリカ：潮解剤例えば
じゃがいもでんぷん又はナトリウムラウリルサルフェー
トのような受容できる湿潤剤等の通常の賦形剤を含有で
きる。

錠剤は常法に従って剤皮で被うことができる。

経口液体調剤は水又は油濁液、溶液、乳液、シロップ、
エリキシル等の形にするととができ、又使用前に水又は
他の適当な担体と再構成するための乾燥品として提出す
ることができる。

そのような液体調剤は懸濁剤例えばソルビトール、シロ
ップ、メチルセルロース、クルコース／砂糖シロップ、
ゼラチン、ヒドロキシメチルセルロース、カルボキシメ
チルセルロース、ステアリン酸アルミニウムゲル又は水
素添加食用脂肪：乳化剤例えばレシチン、モノオレイン
酸ソルビタン又はアラビアゴム；食用油例えばアーモン
ド油、分画したココナツ油、油状エステル、プロピレン
グリコール、又はエチルアルコールを含む非水担体；保
存剤例えばＰ−ヒドロキシ安息香酸メチル又はプロピル
又はソルビン酸のような通常の添加剤を含むことができ
る。

生薬は通常の生薬基剤例えばココアバター又は他のグリ
セリドを含む。

注射用の組成はアンプル中又は保存剤を含む多投専用容
器中の単位投与形体として提出できる。

組成は油状又は水性担体中の懸濁液、溶液、乳液のよう
な形成をとることができ、懸濁剤、安定剤及び／又は分
散剤のような形成剤を含有できる。

別法として、活性成分は使用前に適当な担体例えばピロ
ジエンを含まない滅菌水と再構成するための粉末形体と
することができる。

組成は又鼻及びのどの粘膜又は気管支組織を通って吸収
される適当な形体に調製でき、そして粉末又は液体スプ
レー又は吸入剤、ロゼンジ、咽喉塗布剤等の形体を都合
よくとることができる。

目及び耳へ投薬するために調剤は液体又は半固体の個々
のカプセル剤として提供することができ、又点滴剤とし
て使用することができる。

局所剤は軟膏、クリームローション、塗布剤、粉剤等の
疎水性又は親水性基剤中で形成することができる。

又、担体に加えて、本発明は安定剤、結合剤、抗酸化剤
１．保存剤、潤滑剤、懸濁剤、粘稠剤又は香料等の他の
成分を含むことができる。

にわとり、牛、羊、豚等の治療のような獣医療において
は組成は例えば長時間作用するか又は早く潮解する基剤
中の乳腺内調剤として形成することができる。

施すべき投与量は治療すべき対象の症状、宿主の体重、
感染型、投与経路及び回数に大幅に依存するが非経口的
投与が一般的な感染に対して好ましく経口投与が腸内感
染に対して好ましい。

人間の細菌感染の治療においては、本発明の化合物を抗
生物質投与の常法に従って、約２から６００ ｍｙ／ｋ
ｇ１日好ましくは約５から１００■／ｋｙ／日の量を好
ましい分割投与で例えば１日３ないし４回、経口的又は
非経口的に投与する。

それらは例えば２５．２５０．５００又は１０００■の
活性成分を適当な生理的に受容しうる担体又は賦形剤と
ともに含む投与単位として投与できる。

投与単位は溶液又は懸濁液のような液体調剤の形にする
ことができ又錠剤又はカプセル剤のような固体とするこ
ともできる。

もちろん与えられた例における最適投与量は治療すべき
感染の型及び軽重に依存し、小児用には少量を使用する
ことを理解すべきであり、これらの調整の全てはこの分
野の専門家には明らかである。

ここに述べた方法に従って製造した抗生物質を含む醗酵
液は、スタフィロコッカスアウレウス（５ｔａｐｈｙｌ
ｏｃｏｃｃｕｓ ａｕｒｅｕｓ ） ＡＴＣＣ６５３８
Ｐを用いたディスク拡散法で検定すると１′ｌｌ当り約
５０から４００単位の活性を有する。

少なくとも■当り２単位を有する抗生物質調製物を精製
し抗生物質を数々の方法で回収することができる。

そのような方法の１つはチェナマイシンを強陽イオン交
換樹脂に吸着させることを特徴とする。

そのような樹脂の例には、スチレンジビニルベンゼン架
橋をもつスルホン酸型のそれ、例えばポリスチレン核ス
ルホン酸樹脂ダウエックス（Ｄｏｗｅｘ ） ５ Ｑ
Ｘ４１ダウケミ力ル社製、ミドランド、ミシガン州（Ｄ
ｏｗ ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｃｏ１Ｍ１ｄｌａｎｄ Ｍｉ
ｃｈｉｇａｎ ） ）のナトリウム型がある。

強陽イオン交換樹脂の他の代表例は次のものを含む：ダ
ウエックス５０×４、ダウエックス５０Ｘ８（ダウケミ
カル社製、ミドランド、ミシガン州）、アンバーライト （Ａｍｂｅｒｌｉｔｅ ） ＩＲ１２０（ローム及ハー
ス社製、フィラデルフィア、ペンシルバニア州（Ｒｏｒ
ｍ＆Ｈａａｓ Ｃｏ 、Ｐｈ１ｌａｄｅｌｐｈｉａ Ｐ
ｅｎｎ５ｙｌｖａｎｉａ ））、デュオライト（Ｄｕｏ
ｌｉｔｅ ）Ｃ２５Ｄ Ｃケミカルプロセス社製レッド
ウッドシティ、カリフォルニア州（Ｃｈｅｍｉｃａｌ
Ｐｒｏｃｅｓｓ （：０．Ｒｅｄｗｏｏｄ Ｃ１ｔｙ
。

Ｃａ１ｉｆｏｒｎｉａ ） ）、パームチイツト（Ｐｅ
ｒｍｕｔｉｔ ）Ｑ〔パームチイツト社製、ハーミンガ
ム、ニューシャーシー州（Ｐｅｒｍｕｔｉｔ Ｃｏ、Ｂ
ｉｒｍｉｎｇｈａｍ。

Ｎｅｗｊｅｒｓｅｙ ） ）、イオナック（Ｉｏｎａｃ
） Ｃ２４９（イオナックケミカル社製、バーミンガ
ム、ニューシャーシー州（Ｉｏｎａｃ Ｃｈｅｍｉｃ
ａｌ Ｃｏ。

Ｂｉｒｍｉｎｇｈａｍ １Ｎｅｗｊｅｒｓｅｙ ） ）
及びアンバーライ） （Ａｍｂｅｒｌｉｔｅ ） ２０
０ 。

更に精製したチェナマイシンを得る方法は１８００以上
の分子量を有する分子を排斥する孔径をもつポリアクリ
ルアミドゲルを通すゲル濾過ノ使用である。

好ましいゲルはバイオゲル（Ｂｉ。−Ｇｅｌ ） Ｐ
−２（バイオ・ラッド製すッチモンド、カリフォルニア
州（Ｂｉｏ −Ｒａｄ 、 Ｒｉｃｈｍｏｎｄ 。

Ｃａ１ｉｆｏｒｎｉａ ） ）である。

吸着した抗生物質はアンモニア又はピリジン、ピコリン
、ルチジン、コリジン及びアルキルアミンのような有機
塩基の水溶液で陽イオン交換樹脂から容易に溶出する。

こうして得た溶出液は望むなら他の精製法で更に精製で
きる。

このように溶出液はそれをＸＡＤ−７又は８のようなポ
リエステルポリマーに通すか、ＸＡＤ−１，２及び４、
好ましくはＸＡＤ−２のようなポリスチレン疎水性架橋
ジビニルベンゼンポリマーに通して精製できる。

精製チェナマイシンを回収する好ましい方法は醗酵濾液
のような抗生物質を含む溶液をｐＨを４から５の間に調
整して、スルホン酸型の強陽イオン交換樹脂（ダウエッ
クス５０Ｘ２）を含むカラムのナトリウム型に通すこと
である。

次に生じた吸着物を２％ピリジン水溶液のような適当な
溶出液で溶出する。

溶出液を分取するが、分画量は使用するカラムの大きさ
による。

更なる精製は次のクロマト溶媒を含む＝連の方法によっ
て得られる：ポリスチレンートリエチルアンモニウム型
の陰イオン交換樹脂（例えばダウエックス−ｌの塩酸型
）ポリスチレン−スルホン酸型の陽イオン交換樹脂（例
えばダウエックス−５０の２・６−ルチジニウム型）、
ゲル口過樹脂〔例えばパイオーゲルＰ−２、ポリアクリ
ルアミド樹脂〕及びポリマー性吸着剤（例えば、ＸＡＤ
−２ポリスチレン樹脂）溶出液の生物活性は、溶出液を
スタフィロコッカスアウレウス（５ｔａｐｈｙｌｏｃｏ
ｃｃｕｓ ａｕｒｏｕｓ ）ＡＴＣＣ６５３８Ｐを試験
菌として使用して検定することにより測定する。

次の例は本発明の生成物を得る方法を説明している。

しかしながら例は説明のためだけのものであり、本発明
は機能的に等価な生成物及びそれらの調製法を含むこと
はこの分野の専門家には明らかであろう。

それ故同−生成物を生成する。ここに述べる方法の修正
は類似法を構成すると解釈すべきである。

記述する方法は力隔な変更及び修正が可能でありわずか
な離脱又は拡大は専門家の知識内のものであり、本発明
の範囲に含まれると考えられる。

検定 抗菌活性の検定は他に示した場合以外は次のディスク拡
散法に従って行う。

検定プレートを次の方法で調製する。

栄養培地＋０．２％酵母エキス中検定菌、スタフィロコ
ッカスアウレウス （５ｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ａｕｒｅｕｓ ）
ＡＴＣＣ６５３８Ｐの１晩培養液を栄養培地＋０．２％
酵母エキスで６６０ｍμの波長で５５％の透過率をもつ
懸濁液にまで希釈する。

この懸濁液にもディフコ（Ｄｉｆｃｏ）酵母エキス２．
０？／ｌを加えたティノコ（Ｄｉｆｃｏ ）栄養寒天に
４７℃から４８℃で加え、寒天リットル当り懸濁液３３
．２ｍｌを含む組成を得る。

この懸濁液５ＴｒＬｌを直径８５７ＩＬ１Ｌのペトリ皿
に注ぎ、このプレートを冷却し使用するまで４℃に保つ
（最大５日間）。

検定すべき抗生物質試料をｐＨ７のリン酸バッファー中
適当な濃度に希釈する。

直径１２．７ｍｍの口紙ディスクを試験溶液に浸し、検
定グレートの表面に置く、通常各試料に対して２枚のデ
ィスクをプレートの両側に置く。

プレートを３７℃で１晩培養し、阻止円を直径の間とし
て測定する。

直径の關で測定した阻止円は相対濃度又はセファロチン
のような精製対照標準と比較した場合は単位／就の抗生
物質濃度を決定する。

例４から７において報告する活性単位は８．４．２及び
１μ？ ／ｒｕｌのセファロチン標準溶液に基づく。

１単位はセファロチン１μ？／ｒｒｄｌと同じ阻止を示
すと計算される即ち阻止円が直径１６から２１間の間で
ある量と定義される。

例１ ストレプトマイセスカトレヤ（Ｓ ｔｒｅｐｔｏｍｙｃ
ｅｓＣａｔｔｌｅｙａ ）の凍結乾燥管を無菌的に開封
し、内容物を次の組成をもつ滅菌デイヴイス（Ｄａｖｉ
ｓ ）塩０．７ｍｌを含む試験管中に懸濁する；デイヴ
イス（Ｉ）ａｖｉｓ ）塩 接種スラントを２８℃で８日間培養し、その後４℃に保
存する。

このスラントの胞子及び気菌糸部分を培地Ａ（寒天なし
）５０ｍｌを含む２５０ｍ１ひだ付エーレンメイヤ一種
フラスコに接種するため使用する。

この種フラスコを２８℃で２２ Ｏｒｐｍ振盪機（２イ
ンチ振幅）上、２日間振盪すると、増殖が十分になる。

各々培地Ｂ４０ｒＩＬｌを含む１５個の２５０ｍ１工−
レンメイヤーフラスコを種フラスコからの培養液でフラ
スコ当り１ ｍｌ接種する。

培地Ｂは次の組成をもつ： 培地Ｂ これらの１５個の生産フラスコを２８℃で２２ Ｏｒｐ
ｍ振盪機（２インチ振幅）上３日間まで振盪し、醗酵期
間中検定を行う。

検定は遠心分離した培養液を用いて行う。

検定前に培養液のｐＨを次表に示したように調整する。

５３時間齢に、１３個のフラスコからの培養液を集める
。

一部を遠心分離し検定する。残りの培養液を口過し、ｐ
Ｈ７に調整し、５００ｍ１を凍結乾燥して固形物１０．
７ｆｌを得る。

この固形物の１．５ｉをｎ−ブチルアルコール：水（１
：９９）２５ｍｌに溶解する。

溶液のｐＨは７．０である。こノ溶液をあらかじめｎ−
ブチルアルコール：水で平衡化したバイオゲル（Ｂｉｏ
−Ｇｅｌ ） Ｐ−２（２００−４００メツシユ）の
５×１１８ＣｒｆＬカラムにかげる。

ゲルを同じ溶液で１０ｍ１／分で展開し、６５０ＴＬｌ
前展開した後２０ｍ１ずつ７５分画を集める。

溶出液をメコマチック記録差屈折計（Ｍｅｃｃｏ −ｍ
ａｔｉｃｒｅｃｏｒｄｉｎｇ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａ
ｌｒｅｆｒａｃｔｏｍｅｔｅｒ ）で監視する。

各分画の抗菌活性を検定する。

チェナマイシンは分画３４から４０に分画３７に最大を
もって見い出される。

分画３７のｌＱｍｌを凍結乾燥し固形物２．０ｍ９を得
た。

得られた固形物を検定のために水５ｍＩＣ溶解する。

検定プレートを２８°Ｃ１晩培養する。

結果を下の表に示す： ストレプトマイセスカトレヤ（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅ
ｓＣａｔｔｌｅｙａ ）の凍結乾燥管を無菌的に開封し
、内容物を次の組成をもつ滅菌ディヴイス（Ｄａｖｉｓ
）塩０、８ ｍｌ中に懸濁する： デイヴイス塩 この懸濁液を次の組成をもつ培地Ａ（足す寒天）の４本
のスラントに接種するために使用する：培地Ａ スラント用：寒天２５．０ ？／ｌを加える接種スラン
トを２８℃で１週間培養した後４℃に保存する。

１本のスラントの胞子及び気菌糸部分を培地Ａ３０１１
１１を含むひだ付２５０ＴＬｌエーレンメイヤー（Ｅｒ
ｌｅｎｍｅｙｅｒ ）種フラスコに接種するために使用
する。

この種フラスコを２８℃で２２０ｒｐｒｎ振盪機（２イ
ンチ振幅→上２日間培養すると、増殖が十分になる。

各々培地Ｂ４Ｏｍ１を含む１５個）２５０ｒｒｔｌエ−
レイメイヤーフラスコをフラスコ当り１＝ｌの種フラス
コからの培養液で接種する。

培地Ｂは次の組成をもつ： これらのフラスコを２８°Ｃで２２ Ｏｒｐｍ振盪機（
２インチ振幅）上３日間培養し、醗酵期間中検定を行う
。

検定は遠心分離した培養液の上清を用いて行う。

結果は次のようである：５３時間齢で、１３個のフラス
コからの培養液を集め口過する。

口液の４００ａ部のｐＨを希塩酸で４．８に調整し、こ
れをダウエックス５０×２Ｎａ＋ １４０ ｒｎｌＥに
１４ｒｒＬｌ／分の速度で吸着させる。

吸着物を脱イオン水２００ｒｒｌｌで洗い、水中２％ピ
リジンで溶出して６Ｘ７０ｍ１分画を集める。

分画のｐＨを７．０に調整する。

全ての分画を検定すると阻止円直径は次の表の通りであ
る： これらの検定は活性の４５％が溶出液中に含まれること
を示す。

溶出分画＃２を凍結乾燥し固形物１１７ｒｒＵ？を得る
。

固形物１１７％をｎ−ブチルアルコール：水（１： ９
９ ） １．５ＩＩＩｌに溶解する。

溶液をあらかじめｎ−ブチルアルコール：水で平衡化し
たバイオゲル（Ｂｉｏ −Ｇｅｌ ） Ｐ−２の１．４
Ｘ８１．５ＣＩＩｌカラムにかげる。

ゲルをｎ−ブチルアルコール：水で１ｒｎｌ１分で展開
し、２ｍ１分画を集める。

溶出流をメコーマチック記録屈折計で監視する。

分画の抗菌活性を１：２０希釈で検定する。

生物活性ピークは分画４４から５３にみもれる。

分画４６から４９及び分画５００半分を合せる。

合せた分画のＬｒｕｌ試料を再検定のため除き、残りを
凍結乾燥して部分精製抗生物質４．２Ｉｎｇを得る。

例３ ストレプトマイセスカトレヤ（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅ
ｓＣａｔｔｌｅｙａ ）の凍結乾燥管を無菌的に開封し
内容物を次の組成をもつ滅菌ディヴイス塩０．８ｍｌ中
に懸濁する。

この懸濁液を次の組成をもつ培地Ａ（足す寒天）の４本
のスラントに接種するために使用する：培地Ａ 接種スラントを２８℃で１晩培養し、４℃に保存する。

１本のスラントの胞子及び気菌糸部分を各々培地Ａ３０
ｍ１を含む３個のひだ付２５０ｍ１エーレンメイヤ一種
フラスコに接種するために使用する。

これらの種フラスコを２８℃で２２０ ｒｐｍ振盪機（
２インチ振幅）上１日間振盪すると、増・殖は十分であ
る。

各々培地Ｃ２Ｃ２５Ｏを含む１２個の２ｏｏｏｍｌエー
レンメイヤーフラスコを、３個の種フラスコの内容物を
無菌的に集めた懸濁液７ｍｌで接種する。

培地Ｃは次の組成をもっ： 培地に れらのフラスコを２８℃で２２０ ｒｐｍ振盪機（２イ
ンチ振幅）上７２時間振盪する。

培養液を集め、一部を検定のため遠心分離する。

集めた培養液はｐＨ７，４であり、遠心上清を用いた抗
菌活性は４３１ｒＬ７１Ｌである。

培養液を口過し両液をｐＨを希ＨＣＩで４．０に調整し
、３０００ｍｌをダウエックス５０×２Ｎａ＋３００ｍ
１に３０ｍ１１分の速度で吸着させる。

吸着物を脱イオン水３００ｍ１で洗い２％ピリジンで溶
出して８×１５０Ｉ７Ｉ１分画を集める。

分画のｐＨを７．０に調整する。

溶出分画＃２及び＃３．３００ｍ１を集めると、これは
ダウエックス５０×２Ｎａ十カラムにかげた全生物活性
物質の４８％を含む。

上で得られたｐＨ７，０のダウエックス５０×２Ｎａ十
溶出液を集めた分画の２８０ｍ１部をダウエックスｌＸ
２Ｃ１−型樹脂の４０ｒｎｌカラムに通す。

樹脂を脱イオン水１６０ｍ１で洗う。通過液を集め溶液
４４０ｍ１を得る。

この溶液を希水酸化ナトリウムでｐＨ８，２に調整し減
圧濃縮して３００ｍ１にし、希ＨＣＩでｐＨ７，０に調
整し凍結乾燥して固形物１８９■を得る。

上で得られた凍結乾燥固形物１８９ｒｖをｎ−フチルア
ルコール：水（１：９９）に溶解する。

溶液２５ｍ１をあらかじめｎ−ブチルアルコール：水で
平衡化したバイオゲル（Ｂｌｏ−Ｇｅ１） Ｐ−２（２
００−４００メツシユ）カラム、５Ｘ１０８αにかげる
。

次にゲルをｎ−ブチルアルコール：水で６．７ｍｌ／分
で展開する。

溶出流をメコマチック記録差屈折計で監視する。

５００ｍ１の前溶出液を取った後、２０ｍ１ずつ分画す
る。

各分画の抗菌活性を１：２５希釈で検定する。

生物活性は分画３７から４２にみられ、最大は分画３９
である。

全量８０ｍ１をもつ分画３８から４１を合せる。

溶液を１０ｍ１に濃縮し、ｐＨ７，０にして凍結乾燥す
る。

凍結乾燥固形物１３．５７／ｌｐはスタフィロコッカス
アウレウス（５ｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ａｕｒｅ
ｕｓ ）ディスク拡散法検定による比較に基づいて、バ
イオゲルＰ−２カラムにかげた試料の活性の約６倍の相
対活性をもつ。

例４ ストレプトマイセスカトレヤ（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅ
ｓＣａｔｔｌｅｙａ ）の凍結乾燥管を無菌的に開封し
内容物を次の組成をもつ滅菌デイヴイス塩０．８ｍｌ中
に懸濁する： この懸濁液を次の組成をもつ培地Ａ（足す寒天）の４本
のスラントに接種するために使用する：接種スラントを
２８℃で１週間培養し、次に４℃で保存する。

培地Ａ１０Ｔｌｌをこれらのスラントの１本に無菌的に
移し、胞子及び気菌糸をかき取って懸濁させ、この懸濁
液の３．３ ｍｌを培地Ａ３００ｍ１を含む２ｔひだ付
エーレンメイヤーブラスコに接種するために使用する。

この種フラスコを２８℃で１６゜ｒｐｍ振盪機（２イン
チ振幅）上４８時間振盪すると増殖が十分になる。

この種フラスコからの培養液を培地Ａ１６０ｔを含ム１
９０１ステンレススチ一ル種タンクに接種するために使
用する。

このタンクを２８℃で攪拌数１５ Ｏｒｐｍ及び通気量
８５ｔ／分を用いて２４時間操作する。

消泡剤、ポリグリコール２０００（ダウケミカル社）を
必要なだけ加えるが、０．１％を越えてはならない。

ｐＨ測定を行った結果は次のようである： この種タンクの培養液の４３ｔを次の組成をもつ培地Ｅ
４６７ｔを含む７５６ｔステンレススチール醗酵槽に接
種するために用いる： 培地Ｅ このタンクを２４°Ｃで、攪拌数９５ｒｐｍ及び通気量
２８３ 、ｆｆ／分を用いて１２０時間運転する。

更に消泡剤、ポリグリコール２０００を必要なだけ加え
るが０．１％を越えてはならない。

抗菌検定を行ったデータは次の通りである： いて口過する。

（エチレン−２−二トリル）４酢酸ナトリウム塩１．２
ｙ′を両液に加える。

両液を６°Ｃに冷却し、ｐＨ４，０±０．２に調整し、
６℃に保つ、冷口液をダウエックス５０Ｘ４Ｎａ＋（２
０−５０メツシユ）３８．／−に４７／分で吸着させる
。

吸着物を２％ピリジン水溶液で溶出し各々１９ｔ’の３
つの分画を集め検定する。

抗菌検定は溶出分画２及び３がチャージした活性の２２
％を含むことを示す。

これらの分画を合せ、濃縮して３．８ｔとしｐＨを７に
調整する。

上で得た濃縮物３，８ｔをダウエックス１×２．５０か
ら１００メツシユ、塩酸型樹脂２．５ｔに２０ ｏ’ｒ
ｕｌ１分で吸着させる。

樹脂を脱イオン水で同じ速度で溶出する。

１０個の１を分画を集め各分画を必要ならｐＨ７，０に
調整する。

検定は生物活性の７５％が分画５から８にあることを示
す。

これらの分画な合せ０．４５ミクロンのミリホア（Ｍｉ
ｌｌｉＰｏｒｅ ）を用いて口過する。

両液の３を部を凍結乾燥し７０単位／１ｎ９の活性をも
つ固形物１６．６１を得る。

上で得た凍結乾燥固形物４１を０．１Ｍ２・６ルチジン
酢酸バツフア一５Ｑｍ中に溶解する。

ｐＨ６，３の溶液を次のように調製したダウエックス５
０×８カラムにかける二 ２．５１のダウエックス５０Ｘ８（２００４００メツシ
ユ）水素型樹脂を２・６−ルチジン型に変える。

樹脂をカラム容の６倍の０．１ Ｍ ２・６−ルチジン
酢酸、ｐＨ６−３、バッファーで平衡化する。

平衡化した樹脂カラムの大きさは５×１１４ｃｍである
。

カラムを０．１Ｍバッファーで１４ＴＬｌ／分で展開す
る。

溶出流をメコマチツク記録差屈折計で監視する。

展開を２ｏｍｌずつ２２０分画を集めるまで行う。

４４から１４２の１本おきの分画を１：５０希釈で検定
する。

生物活性は分画７８から１３６にみられ、分画から９２
から９４において最大になる。

分画８２から１１６を選択して合せ溶液７００ｍ１を得
る。

溶液を２つの３５０ｍ１部に分は凍結乾燥する。

凍結乾燥固形物の一方を０．１ Ｍ ２・６−ルチジン
酢酸、ｐＨ７，０、バッファーに溶解する。

溶液２７＋７１１をあらかじめ０．１Ｍバッファーで平
衡化ししたバイオゲル（Ｂｉｏ −Ｇｅｌ ） Ｐ−
２（２００４００メツシユ）５Ｘ１０８ｃＩＩＬカラム
にかげる。

次にゲルを同じバッファーで１０ｍ１／分で展開する。

溶出流をメコマチック記録差屈折計で監視する。

展開を２０ｍ１ずつ１０５分画を集めるまで続ける。

５１から９０の各分画を１：５ｏ希釈で検定する。

検定は活性ピークを分画６７から７５に示し、分画７０
から７１に最大をもつ。

分画６８から７５を合せ１６２１ｒＬｌを得る。

合せた分画１４５１ｒＬｌに３６０ｍＭ、ｐＨ７，０リ
ン酸ナトリウムバツフア一３ｍｌを加え、溶液を９ｒｕ
ｌに濃縮する。

バイオゲルＰ−２カラムにかげた全生物活性物質の７８
％を含むこの濃縮物を凍結乾燥し１８５１ｎ９を得る。

分画６８から７５の残りの１７７７１１アリクオートを
凍結乾燥し、１０５０単位／ｍ９の活性をもつ固形物１
．９■を得る。

例５ ストレプトマイセスカトレヤ（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅ
ｓＣａ ｔｔｌ ｅｙａ ）の凍結乾燥管を無菌的に開
封し内容物を次の組成をもつ滅菌テイヴイス塩０．８ｍ
ｌ中に懸濁する： この懸濁液を次の組成をもつ培地Ａ（足す寒天）の４本
のスラントに接種するために使用する：接種スラントを
２８℃で１週間培養した後、４℃で保存する。

培地Ａ １０ ｍｌを無菌的にこれらのスラントの１本
に移し、胞子及び気菌糸をかき取って懸濁させ、３、３
ｍ１ｔａ：培地Ａ ５００ ｒｎｌヲ含む２ｅひだ付
エーレンメイヤーフラスコに接種するために使用する。

この種フラスコを２８℃で１６ Ｏｒｐｍ振盪機（２イ
ンチ振幅）上４８時間振盪する。

こノ種フラスコからの培養液を培地Ａ１６０Ｊを含む１
９０Ｊステンレススチ一ル種タンクに接種するために使
用する。

このタンクを２８℃で攪拌数１５ Ｏｒｐｍ及び通気量
８５１／分を使用して２４時間操作する。

消泡剤、ポリグリコール２０００ （ダウケミカル社）
を必要なだけ使用するが０．１％を越えてはならない。

ｐＨを測定した結果は次の通りである： この種タンク中の培養液３５Ｊを次の組成をもつ培地Ｅ
４６７Ｊを含む７５６１ステンレススチール醗酵槽に接
種するために使用する： このタンクを２４℃で攪拌数９５ ｒｐｒｒｌ及び通気
量２８３１／分を使用して１２０２０時間操る。

消泡剤、ポリグリコール２０００を必要なだけ加えるが
０．１％を越えてはならない。

抗菌検定を行ったデータは次の通りである： 全培養液４００Ｊを圧搾口過機及び４０％Ｗ／Ｖの口過
助剤を用いて口過する。

（エチレン−２−ニトリル）４酢酸ナトリウム塩１，２
？を両液に加える。

両液を６°Ｃに冷却しｐＨ４，０±０．２に調整し、６
℃に保つ。

冷口液をダウエックス５０ｘ４Ｎａ”、（２０−５０メ
ツシユ）３８１に４１／分で吸着させる。

吸着物を２％ピリジン水溶液で溶出し、各１９７の３分
画を集め検定する。

検定はかげた生物活性の２７％が分画２及び３に含まれ
ることを示す。

溶出分画２及び３を合せ、３．７１に濃縮しｐＨ７に調
整する。

溶出液濃縮物３．７１をｐＨ７，４に調整しダウエック
ス１Ｘ２ｃｌ−型樹脂（５０−１００メツシユ）２．５
Ｊに２００ｒｎｌ１分で吸着させる。

次に樹脂を脱イオン水で同じ速度で溶出する。

２×２１、ｌＸ８００ｍ１１１Ｘ４．Ｊ及び１Ｘ２１分
画を集め、必要ならばｐＨを７．０に調整する。

濃縮物中の活性の５０％を含む分画４（４，Ｊ）を０．
４５５ミフロンミリホアＭｉｌｌｉｐｏｒｅ ）口紙を
使用して口過する。

澄明な両液を凍結乾燥して活性２７０単位／■の彫物１
２．４？を得た。

凍結乾燥固形物４１をＯ，１Ｍ２・６−ルチジン酢酸バ
ッファーｐＨ６，３に溶かす。

溶液５０ｒｒＬｌを酢酸を加えてｐＨ６，３に調整し、
あらかじめ０．１Ｍバッファーで平衡化したダウエック
ス５０×８．２・６−ルチジン型樹脂（２００−４００
メツシユ）カラム、５Ｘ１１４ｃｒｆＬにかげる。

次に樹脂を同じＯｌＩＭｐＨ６，３バツフアーで１４７
７１１／分で展開する。

溶出流をメコマチツク記録差屈折計で監視する。

展開を２０ｒＩＬｌずつ１５０分画を集めるまで行う。

７２から１５０の１本おきの分画を１：５０希釈で検定
する。

１個の生物活性ピークが分画７６から１４８に、分画９
２から１０２に最大をもってみられる。

分画８６から１１３を合せダウエックス５０×８カラム
にかげた生物活性の７１％を含む溶液５８０ｒＩ′Ｌｌ
を得る。

この溶液を次に凍結乾燥する。

得られた凍結乾燥固形物を０．１ Ｍ ２・６−ルチジ
ン酢酸ｐＨ７，０バツフアーに溶かし２５＋７１１とす
る。

この溶液をあらかじめ０．１Ｍバッファーで平衡化した
バイオゲル（Ｂｉｏ −Ｇｅｌ ） Ｐ −２（２０
０−４００メツシユ）カラム、５Ｘ １０８温にかげる
。

次にゲルを同じバッファーで９ｒｕ１３／分で展開する
。

溶出流をメコマチツク記録屈折計で監視する。

展開を２０ｍ１ずつ１０５分画を集めるまで行う。

６５から８０の各分画を１：２００希釈で検定する。

生物活性ピークは分画６７から７６にみられる。

分画７０から７２を合せ、凍結乾燥して１３８００単位
／■の活性を持つ１６．０■を得る。

分画６９，７３及び７４を合せ、凍結乾燥して５２００
単位／■の活性をもつ２０．２７７９を得る。

凍結乾燥固形物１６■を０．１ Ｍ ２・６−ルチジン
酢酸ｐＨ７，０バツフアーに溶かし１０ｍとする。

溶液をあらかじめ同じバッファーで平衡化したバイオゲ
ルＰ−２（２００−４００メツシユ）カラム、５Ｘ１０
８ｃＩｒＬにかける。

ゲルをバッファーで９ｒｒＬｌ／分で展開する。

溶出流をメコマチツク記録差屈折計で監視する。

展開を２０ｍ１ずつ１０５分画を集めるまで続ける。

６５から８０の全ての分画を１：２００希釈で検定する
。

生物活性ピークは分画６７から７５にみられる。

分画６８から７２を合せ凍結乾燥して１５０００単位／
■の活性をもつ９−１ｍ９を得る。

例６ ストレプトマイセスカトレヤ（Ｓ ｔｒｅｐｔｏｍｙｃ
ｅｓＣａｔｔｌｅｙａ ）の凍結乾燥管を無菌的に開封
し、内容物を２５０ＴＬｌひだ付エーレンメイヤーフラ
スコ中に含まれる滅菌培地Ａ３０ｒｕｌ中に懸濁させる
。

培地Ａは次の組成をもつ： 接種フラスコを２８℃で２２ Ｏｒｐｍ振盪機（２イン
チ振幅）上４８時間振盪する。

４８時間培養液４０１ｒＬｌを無菌的に取り、滅菌２０
％（ｖ／ｖ）グリセリン４０ｒｎｌと混合する。

生じた混合物の２ａ量を滅菌した３、９ｒｆＬｌガラス
びん（１ｄｒａｍｖｉａｌｓ ）にピペットで入れ、次
に液体窒素冷凍庫の気相中で凍結させ、保存する。

凍結したガラスびん内容物を培地Ａ３０ｍ７を含む２５
０ＴｒＬｌひだ付エーレンメイヤーフラスコに接種する
ために使用する。

この種フラスコを２８℃で１６ Ｏｒｐｍ振盪機上２４
時間振盪する。

この種フラスコからの１０ｒｕｌを培地Ａ５００１７１
１を含む２１ひだ付エーレンメイヤーフラスコに接種す
るために使用する。

これらの種フラスコを１６０ ｒｐｍ振盪機上２８℃で
２４時間振盪する。

これらの種フラスコの集めた内容物の１０００ｒｒｔｌ
を培地Ａ４６７１を含む７５．６Ｊステンレススチール
醗酵槽に接種するために使用する。

このタンクを２８℃で攪拌数１３ Ｏｒｐｍ及び通気量
２８３１／分を用いて２４時間運転する。

ポリグリコール２０００（ダウケミカル社）を必要なだ
げ消泡剤として使用するが０．１％を越えてはならない
。

ｐＨ及びデキストロースの測定を行った結果は次のよう
である： このタンクを２４℃で攪拌数７ Ｏｒｐｍ及び通気量１
５３８１／分を用いて１４４時間運転する。

消泡剤、ポリグリコール２０００を必要なだけ加えるが
０．１％を越えてはならない。

検定を遠心上清を用いて行う。

結果を”ＡＴＣＣ６５３８ｐに対する抗菌活性″という
見出しの下表に示す。

検定を又９．５ｃｒｒＬ口紙ディスク及び１０ｍ１検定
プレートを用いてディスク拡散法によって行い、結果を
見出し゛抗菌活性（１０ｍＡ’プレート）″の下表に示
す。

１ｏｒｎｌ検定プレートは次のように調製する：検定菌
、スタフィロコッカスアウレウス （５ｔａｐｔｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ａｕｒｅｕｓ ）
ＡＴＣＣ６５３８Ｐの栄養培地＋０．２％酵母エキス中
のｌ晩培養液を栄養培地＋０．２％酵母エキスで希釈し
６６０ｍμの波長で透過率４０％の懸濁液を得る。

この懸濁液をディフコ（Ｄｉｆｃｏ ）酵母エキス２．
０？／ｌを加えたディフコ栄養寒天に４７℃から４８℃
で加え、寒天リットル当り懸濁液３３．２ＴＬｌを含む
組成を得る。

この懸濁液１０ｒｒＬｌを直径８５ｍｍのペトリ皿に注
ぎ、フレートを冷却し使用するまで４℃に保つ（最大５
日間）。

醗酵液４０８２Ｊを７６ｃＩｆＬ圧搾口過器及び４％Ｗ
／Ｖの口過助剤を用いて口過する。

（エチレン−２−二トリル）４酢酸ナトリウム塩１２２
量を両液に加える。

両液を６℃に保つ。冷口液をダウエックス５０Ｘ４Ｎａ
＋（２０−５０メツシユ）４８０１に約４８１／分で吸
着させる。

吸着物を脱イオン水４８０１で洗い、次に２％ピリジン
水溶液テ２４ ｌ７分で溶出し、３００．Ｊ、５２０．
ｇ及び２４０１の３分画を集め、ｐＨ７，０で検定する
。

検定は溶出液がダウエックス５０Ｘ４Ｎａ＋カラムにか
げた生物活性の各々４％、１６％及び６％を含むことを
示す。

溶出分画２を４８Ｊに濃縮し、ｐＨ７に調整する。

濃縮物４８ＪをｐＨ７，３に調整し、ダウエックスｌＸ
２．５０Ｘ１００メツシユ、塩酸型樹脂７６１に７．６
１７分で吸着させる。

樹脂を脱イオン水で同じ速度で溶出する。

４分画２Ｘ４８７、ｌＸ７０７及び１Ｘ４８１を集める
。

集めた分画をｐＨ７に調整する。

検定は出発生物活性の６８％が７Ｏ１分画にあることを
示す。

この分画をｐＨ７，０で１８Ｊに濃縮し０．４５５ミフ
ロンミリホア Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ ）口紙を用いて口
過する。

両液を凍結乾燥し３１０単位／■の活性をもつ生成物９
９グを得る。

凍結乾燥固形物ｌｏｇを０．１ Ｍ ２・６−ルチジン
酢酸バッファー、ｐＨ６，３に溶かす。

溶液１２５１ｎｌを酢酸でｐＨ６，３に再調整し、あら
かじめバッファーで平衡化したダウエックス５０×８（
２００−４００メツシユ）カラム２・６−ルチジン型、
７．６Ｘ１４２Ｃｒｎにかげ０．１Ｍバッファーで２５
ＴＬｌ／分で展開する。

前溶出液３１を集め、続いて２０ｍ１ずつ２００分画を
集める。

３６から１９２の３本おきの分画を１：２００希釈で検
定する。

生物活性は分画５６から１９２に含まれ、分画９２から
９６で最大に達する。

分画８０から１３６を合せ、脱イオン水５９ＴＩＬｌを
加えて１７６０ｍ１を得る。

ダウエックス５０×８カラムにかけた出発生物活性の６
２％を含む、集めた希釈溶液を凍結乾燥する。

凍結乾燥固形物を０．１ Ｍ ２・６−ルチジン酢酸ｐ
Ｈ７，０バツフアーに溶かす。

溶液２７ｒｎｌをあらかじめ０．１Ｍバッファーで平衡
化したバイオゲルＰ−２（２００−４００メツシユ）カ
ラム、５×１１２ｃｍにかげる。

次にゲルを同じバッファーで１０１ｒＬｌ／分で展開す
る。

溶出流をメコマチツク（Ｍｅｃｃｏｍａｔｉｃ ）記録
差屈折計で監視する。

展開を２０ｍ１ずつ１０５分画を集めるまで続ける。

７０から９３の分画を１：３００希釈で検定する。

生物活性は分画７３から８２にみられ、分画７７から７
８で最大に達する０分画７５から８０を凍結乾燥し平均
活性１００００単位／■の抗生物質９０■を得る。

凍結乾燥固形物９０■を０．ＯＩＭＩＪン酸カリウムバ
ッフ７’ （ｐＨ７） ４ｒＩＬｌＫ浴かす。

５９６ヒドロキシルモ シン濃度の測定は本例の最後に述べる）を含むこの溶液
を前洗滌したＸＡＤ −２，９０ｒａｌを充填し使用前
に０．０１Ｍリン酸カリウムバッファー、ｐＨ７で５℃
で平衡化した直径１．７ＣｒＩＬカラムにがげる。

ＸＡＤは使用前に、（１）５倍容０） Ｎａ ＯＨ、続
いて通過液が中性になるまで脱イオン水（２）５倍容の
ｌＮＨＣｌ続いて通過液が中性になるまで脱イオン水（
３）各々５倍容のメタノール、アセトン、０．００１Ｍ
ＥＤＴＡ４ナトリウム、及び最後に蒸留水で次々に洗
滌する。

全ての溶媒は使用前に真空脱気する。

試料をカラムにかげた後リン酸バッファー２ｍｌを２回
加える。

カラムを５℃でバッファーで２ ｒｕｌ／分の流速で展
開する。

溶出液４１ｒｌ１分画を集める。溶出液１００ｍ１以降
２５３ＴＬｌまでの分画を合せ、１０℃以下でロータリ
ーエヴアポレーターで真空濃縮し６ｍｌとする。

４３６ヒドロキシルモ この溶液を上のように前洗滌したＸＡＤ−２，９０ｍ１
をつめ５０℃で蒸留水で平衡化した直径１．７ＣｒｒＬ
カラムにかげる。

試料に続いて蒸留水２ＴｒＬｌを２回加える。

カラムを蒸留水で流速２７７１１／分で展開する。溶出
液４ＴｒＬ１分画を集める。

溶出液１００就以降１５１ ｍｌまでの分画を集めロー
タリーエヴアポレーターで２．７ｍｌに濃縮し、溶液を
凍結乾燥してチェナマイシン６．４９１を得る。

１５２ｍ７から３４５ｍ１の間の分画を集めロータリー
エヴアポレーターで３．３４ｍ１に濃縮し、凍結乾燥し
て抗生物質１１．５３労を得る。

これらの分画は全部で３６９シトロキシルモ これは最初のＸＡＤ −２カラムにかげた物質に対して
３．１倍精製を意味し、計算活性３１．０００単位／ｍ
Ｉ？を与える。

本生成物の試料θつ分光光度分析はリン酸バッファー中
でＩＵＩＪ定した場合２９７ｎｍ１％ でＥ ＝２５３を示す。

ｃｒｒＬ ヒドロキシルアミン消失吸収 不純試料の２９７ｎｍにおける吸収のうちの抗生物質に
由来する割合は希ヒドロキシルアミンとの反応によるこ
の吸収の選択的消失によって決定する（抗生物質活性の
不活性化を伴う）。

試料は０．０１Ｍリン酸カリウムバッファーｐＨ７，０
中で０．０５から２０の間の初期Ａ２９７をもつように
調製する。

新しく調製した中性ヒドロキシルアミン（ＮＨ２ＯＨ−
ＨＣｌ足す最終ｐＨが７となるまでのＮａＯＨ）を最終
濃度１０ｍＭまで加え、反応を室温下少なくとも３０分
間進行させる。

生じたＡ２９７を最初の読みから引くと（加えた試薬に
よる希釈に対して補正後に）ヒドロキシルアミン消失吸
収を与える。

純粋なチェナマイシン溶液は９４．５％のヒドロキシル
アミン消失吸収を示す。

例７ 例６のダウエックスｌＸ２精製によって得た凍結乾燥固
形物９９グのＩＯＰ部を０． Ｉ ＩＶＩ ２・６ルチ
ジン酢酸バツフアー、ｐＨ６，３に溶かす。

溶液１２５ｍ１を酢酸でｐＨ６，３に再調整し、あらか
じめバッファーで平衡化したダウエックス５０×８の７
．６×１４２ｃＩＩｌカラム２・６−ルチジン型にかげ
る。

カラムを０，１Ｍバッファーで３５ｒＩＬｌ／分で展開
する。

前溶出３．６１に続いて２ｏｒＩＬｌずつ２００分画を
集める。

６から１９４まで３本おきの分画を１：２００希釈で検
定する。

生物活性ピークは分画１８から１７８に含まれ、分画６
２から８２で最高に達する。

分画４２から１０２を合せ脱イオン水６４０ｒｎｌを加
えて１９２０１７１１とする。

ダウエックス５０×８カラムにかげた生物活性の６３％
を含む集めた希釈溶液を凍結乾燥する。

凍結乾燥固形物を０．１ Ｍ ２・６−ルチジン酢酸、
ｐＨ７，０バツフアーに溶かす。

溶液２５ｍ１をあらかじめ０．１Ｍバッファーで平衡化
したバイオゲルＰ−２（２００−４００メツシユ）５Ｘ
１１２Ｃｍカラムにかげる。

次にゲルを同じバッファーで１０ｍ１１分で展開する。

溶出液をメコマチツク記録差屈折計で監視する。

展開を２０ｍ１ずつ１２５分画を集めるまで続ける。

７０から８９の全ての分画をｌ ： ３００希釈で検定
する。

生物活性は分画７２から８１にみられ、分画７７で最高
に達する。

分画７５から７９を凍結乾燥し活性８３２０単位／Ｉｎ
９の抗生物質１００．５Ｔｎ９を得る。

凍結乾燥固形物１００．５■を０．０１ＭＩＪン酸カリ
ウムバッファー、ｐＨ７に溶かす。

６９２ヒドロキシルモ 洗滌したＸＡＤ −２，９０ｒＩＬｌでつめ使用前に０
．０１Ｍリン酸カリウムバッファー、ｐＨ７で５℃で平
衡化した直径１．７ＣｒｒＬカラムにかげる。

ＸＡＤ−２カラムは使用前に、（１） ５ 倍容のｌＮ
ＮａＯＨ続いて通過液が中性になるまで脱イオン水（２
）５倍容のｌＮＨＣｌ続いて通過液が中性になるまで脱
イオン水（３）各々５倍容のメタノール、アセトン、０
．００１ＭＥＤＴＡ ４ナトリウム及び最後に蒸留水
で次々に洗滌する。

全ての溶媒は使用前に真空脱気する。試料をカラムにか
げた後リン酸バッファー２ｍｌを２回加える。

カラムを５℃でバッフアーチ流速２ｍ１１分で展開する
。

溶出液４ｆｎ１分画を集める。溶出液１０９ｍ１以降３
０９ｍ１までの分画な合せる。

この合せた溶液に例６から得られた１８６ヒトロキシル
モ 物質試料１１．５３ｍ９を加える。

合せた溶液を加えた抗生物質とともに１０℃以下の温度
でロータリーエヴアポレーター上で真空濃縮し７ＴＬｌ
とする。

７２０ヒドロキシルアミン消失光度単位をもつこの溶液
を上述のように前洗滌したＸＡＤ−２，９０１′ｒＬｌ
を充填し、使用前に蒸留水で５℃で平衡化した直径１．
７に７７１カラムにかげる。

試料に続いて蒸留水２ｒｕｌを２回加える。

このカラムを蒸留水で流速２ｍ１１分で展開する。

溶出液４ｍ１分画を集める。溶出液１０９−以降３０１
ｍｌまでの分画な合せロータリーエヴアポレーターで
濃縮して１０．３１ｒＬｌとする。

５８９ヒドロキシルモもつこの溶液を凍結乾燥して計算
活性３０．１４０単位／ＴｒＬ９の抗生物質２３．６７
ｎ９を得る。

このようにして調製した抗生物質は白色繊維状無定形固
形物でガラスキャピラリー中で３℃／分の速度で上昇す
る温度にさらすと、液体状態を経ることなく次の段階で
分解する：軟化が１３０から１４０℃で起り固体容積の
収縮が１７０から１７４℃まで続き、この範囲では物質
は黄色である：シンタリング（ｓｉｎｔｅｒｉｎｇ ）
及び色調の赤褐色への徐々の変化が１８０から２００℃
の間にみられ、最後に２０５℃で炭素化及び固形物のわ
ずかな残渣がみられる。

本物質の試料は分光光度分析において２９６．５ＨｍＫ
Ｅ”％−２６８．２の吸収ピークを示す。

元Ｌｃｍ 素分析は次の結果を与える：（１）室温下４時間真空乾
燥すると５．６７％の重量損失、及び（２）炭素４７．
６８％、水素６．２２％、窒素１１．４８％の組成。

これらの結果は実験式％式％ 実験式に対応する元素組成計算値はＣ＝４７．６８％、
Ｈ＝６．１３％、Ｎ＝１１．５２％、５＝１１．５７％
及び０＝２３．１％である。

本物質のｌ０ｍＭリン酸１ウムバツフアー中１■／ｒｎ
ｌ溶液の旋光分析は比旋光度〔−α〕３７℃＋８０を示
した。

本物質のメジヨー中での赤外線吸収スペクトル（図１）
は１７６５に７７１ ’ 、１６５０−１５５０ｃｒｒ
ｔ’２８００−２５００Ｃ１ｒＬ ’ 、及び３５００
３１００ｃ１′ｒＬ ’ に特徴的な吸収ピークを示し
た。

Ｄ２０に溶解した本物質の試料の１００ ＭＨｚ で
のＮＭＲスペクトルはδ１．２７５に２重線、δ３．３
９に１対の２重線及びδ３．１５及びδ４．２゜に多重
線を示し、これらのピークはチェナマイシンに特徴的で
ある。

本抗生物質を含む組成はいくつかの単位投与形体、例え
ば固体又は液体経口投与形体で投与することができる。

単位投与当りの組成は液体又は固体のいづれにしろ０．
１％から９９％の活性物質を含み、好ましい範囲は約１
０から６０％である。

組成は一般に組成全重量に基づいて約２５■から約１０
００■の活性成分を含む、しかしながら一般に約２５０
■から１０００■の範囲の投与量を使用することが好ま
しい。

非経口投与においては単位投与形体は通常わずかに酸性
の滅菌水中の又は溶液にするための可溶性粉末の形の純
粋な化合物である。

代表的な調剤は次の方法によって調製する： 上の例においては活性物質及び希釈剤を混合し、均一な
混合物を得、次にこれをＮＯ，０硬ゼラチンカプセルに
手又は適当な機械で必要なだけつめる。

混合及び充填は相対湿度４０％以下の空気中で行うこと
が好ましい。

上の例においては活性成分をリン酸カルシウム、ラクト
ース及び約半分のコーンスターチと混合する。

混合物を１５％コーンスターチペーストで粒状化し、粗
ふるいにかげ、更にＮ０１６ふるいでふるう、コーンス
ターチの残り及びステアリン酸マグネシウムを加え混合
物を直径約１＋−α、重量ＳＯＯ■の錠剤に圧縮する。

別法として活性成分をリン酸カルシウム、ラクトース及
び半分のコーンスターチと混合する。

混合物を重い能率プレス（ｈｅａｖｙ ｄｕｔｙ
ｐｒｅｓｓ ）につめて、錠剤のような塊に圧縮する。

これらを１６番メツシュの粒子に破壊する。

コーンスターチの残り及びステアリン酸マグネシウムを
加え混合物を直径約Ｌ３ｃＩｒＬ、重量８００ｍ９の錠
剤に圧縮する。

上の例においては活性成分を示した割合で十分量の注射
用水中に溶かす。

溶液をセラスろうそく（５ｅｌａｓ ｃａｎｄｌｅｓ
）又はミリポア（Ｍ ｉｌ １ｉｐｏｒｅ）口過膜を
通して口過し除菌する。

溶液を滅菌ガラスびんに分別する。

ガラスびん及び内容物を凍結し、水を凍結乾燥によって
無菌的に除去する。

滅菌乾燥固形物を含むガラスびんを無菌的に密封する。

注射投与用にもどすには滅菌注射用水５ｍｌをガラスび
んの内容物に加える。

シュークロース及びグリコースを水約４００ｒｌｌｌに
加熱して溶かし補助溶液を得る。

この溶液を冷却し、安息香酸ナトリウム続いて濃オレン
ジ油を加える。

溶液に水を加えて約９００ｒｎｌにし抗生物質を加える
。

溶液を粗い口過器で口過して澄明にする。

【図面の簡単な説明】

第１図は本発明のチェナマイシンの赤外吸収スペクトル
図である。

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １ 一般式 で示される化合物（チェナマイシン）。 ２ 一般式 で示される化合物（チェナマイシン）を主成分とする細
   菌感染症治療剤。 ３ 該一般式で示される化合物（チェナマイシン）の含
   有量が少なくとも５０単位／ｍｌである特許請求の範囲
   第２項記載の細菌感染症治療剤。 ４ 該一般式で示される化合物（チェナマイシン）の含
   有量が少なくとも２単位／即（固体）である特許請求の
   範囲第２項記載の細菌感染症治療剤。