JPS583675B2 - 水溶液中に含まれている生化学化合物を増成又は減成する方法 - Google Patents
水溶液中に含まれている生化学化合物を増成又は減成する方法Info
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Description
【発明の詳細な説明】
本発明は，マグネシウムイオン及び／又はカルシウムイ
オン並びにカリウムイオンを少なくとも０．５ｍＭ／ｌ
含有する水溶液に溶解している生化学化合物を、増成又
は減成を促進する酵素によって増成又は減成する方法に
関する。
オン並びにカリウムイオンを少なくとも０．５ｍＭ／ｌ
含有する水溶液に溶解している生化学化合物を、増成又
は減成を促進する酵素によって増成又は減成する方法に
関する。
この方策の目的は，経済的やり方で生物化学的な且つ薬
学的な製品を製造することであって、こうしたことは例
えば蔗糖をグルコースとフルクトースとに分解する際に
行なわれている処である。
学的な製品を製造することであって、こうしたことは例
えば蔗糖をグルコースとフルクトースとに分解する際に
行なわれている処である。
それだけでなく、毒作用を呈する物質の分解例えば血液
中での尿素の二酸化炭素並びにアンモニアへの分解の達
成が努められる。
中での尿素の二酸化炭素並びにアンモニアへの分解の達
成が努められる。
酵素の触媒作用を物質の増成にまた減成に使用すること
は公知である。
は公知である。
斯くして例えば，酵素を無機の又は有機の担体に吸着さ
せることそしてそれら酵素をこうした手法で作用を発揮
させることが提案されている。
せることそしてそれら酵素をこうした手法で作用を発揮
させることが提案されている。
酵素を酵素物質の増成又は減成の目的でゲルの細孔中に
封入することも亦知られている。
封入することも亦知られている。
最後に，酵素を諸物質の増成又は減成の目的で易反応性
の重合体マトリックスに結合することも亦公知技術に属
する。
の重合体マトリックスに結合することも亦公知技術に属
する。
凡てのこれら公知方法は然し，酵素の作用程度が割合僅
少であったので増成されるべき又は減成されるべき物質
の収率が甚だ小さかったのでそれら方法は実地作用する
には経済的に充分でないという大きな欠点がある。
少であったので増成されるべき又は減成されるべき物質
の収率が甚だ小さかったのでそれら方法は実地作用する
には経済的に充分でないという大きな欠点がある。
本発明の課題は、そうしたわけで，水溶液中に溶存する
物質を無機又は有機の触媒作用を有する物質の使用下に
組立てるための又は減成するための方法，但し経済的手
法で遂行でき且つ割合短かい時間内で充分な収率を保証
するような方法，を調達することである。
物質を無機又は有機の触媒作用を有する物質の使用下に
組立てるための又は減成するための方法，但し経済的手
法で遂行でき且つ割合短かい時間内で充分な収率を保証
するような方法，を調達することである。
この課題は，冒頭に示した種類の方法によって，ａ）マ
グネシウムイオン及び／又はカルシウムイオン並びにカ
リウムイオンを少なくとも０．５ｍＭ／ｌ含有する水溶
液のオスモル濃度と適度に相違するオスモル濃度を細胞
含有物が有するような生物即ち血球又は藻類（Ａｌｇｅ
ｎ）の細胞を，前記細胞含有物のオスモル濃度に比して
オスモル濃度が細胞の膜の透過性の上昇が起るほど低い
しかも酵素を含有する溶液の中へ入れること、 ｂ）そして，膜として働く今や透過性の高まった細胞膜
による物質交換のために平衡状態において細胞含有物が
前記の酵素含有溶液と事実上一致するまで，前記の酵素
含有溶液の中に前記細胞膜を放置すること． ｃ）そして次に，前記の酵素含有溶液のオスモル濃度を
，浸透活性物質例えばカルシウムイオン，カリウムイオ
ン，ナトリウムイオンを加えることによって，前記の最
初に入れた細胞の細胞含有物のオスモル濃度に高めるこ
と、 ｄ）次に，前記処理ステップａ）ないしｃ）によりつく
られた膜胞を前記の酵素含有溶液から分離すること， ｅ）次に、生化学化合物が膜の透過性のために前記膜胞
の内部へ移動して該化合物の増成又は減成が終り且つ前
記物質が前記膜を通って前記水溶液中へ移動してしまう
まで，前記膜胞を前記水溶液中に入れること， ｆ）次に，増成文は減成された化合物を既知の方法で前
記水溶液から分離すること によって解決される。
グネシウムイオン及び／又はカルシウムイオン並びにカ
リウムイオンを少なくとも０．５ｍＭ／ｌ含有する水溶
液のオスモル濃度と適度に相違するオスモル濃度を細胞
含有物が有するような生物即ち血球又は藻類（Ａｌｇｅ
ｎ）の細胞を，前記細胞含有物のオスモル濃度に比して
オスモル濃度が細胞の膜の透過性の上昇が起るほど低い
しかも酵素を含有する溶液の中へ入れること、 ｂ）そして，膜として働く今や透過性の高まった細胞膜
による物質交換のために平衡状態において細胞含有物が
前記の酵素含有溶液と事実上一致するまで，前記の酵素
含有溶液の中に前記細胞膜を放置すること． ｃ）そして次に，前記の酵素含有溶液のオスモル濃度を
，浸透活性物質例えばカルシウムイオン，カリウムイオ
ン，ナトリウムイオンを加えることによって，前記の最
初に入れた細胞の細胞含有物のオスモル濃度に高めるこ
と、 ｄ）次に，前記処理ステップａ）ないしｃ）によりつく
られた膜胞を前記の酵素含有溶液から分離すること， ｅ）次に、生化学化合物が膜の透過性のために前記膜胞
の内部へ移動して該化合物の増成又は減成が終り且つ前
記物質が前記膜を通って前記水溶液中へ移動してしまう
まで，前記膜胞を前記水溶液中に入れること， ｆ）次に，増成文は減成された化合物を既知の方法で前
記水溶液から分離すること によって解決される。
本発明方法は次ぎのことの確認に基づいている。
即ち，当該細胞が細胞含有物にくらべてより低いオスモ
ル濃度を有するような溶液中に投入されたときには当の
細胞膜は問題の触媒作用を有する物質にとって，透過性
になること、また触媒作用を有する物質を含有する溶液
中に浸透活性物質が投入されたときには細胞膜は細胞内
部へ移動した触媒作用を有する物質にとって不透過性に
なること，そしてまた細胞膜は増成されるべき物質にと
ってもまた増成された物質にとっても且つ又同様に減成
されるべき物質にとっても減成された物質にとっても、
その際につくられた触媒作用を有する物質を含有する溶
液を含む膜胞がオスモル濃度が最初の細胞含有物のオス
モル濃度に一致する溶液の中に投入された後には，透過
性になること，の確認を基礎にしているのである。
ル濃度を有するような溶液中に投入されたときには当の
細胞膜は問題の触媒作用を有する物質にとって，透過性
になること、また触媒作用を有する物質を含有する溶液
中に浸透活性物質が投入されたときには細胞膜は細胞内
部へ移動した触媒作用を有する物質にとって不透過性に
なること，そしてまた細胞膜は増成されるべき物質にと
ってもまた増成された物質にとっても且つ又同様に減成
されるべき物質にとっても減成された物質にとっても、
その際につくられた触媒作用を有する物質を含有する溶
液を含む膜胞がオスモル濃度が最初の細胞含有物のオス
モル濃度に一致する溶液の中に投入された後には，透過
性になること，の確認を基礎にしているのである。
細胞としてはバクテリア細胞が使用され且つ，細胞壁を
除去することが必要である場合を対象としては，公知方
法（エッチ・アール・カバツク「バクテリア膜」，メソ
ーズ・オブ・エンチモロジー誌第２２巻，１９７１年第
９９頁参照）に準じて当の生活細胞として使用されるバ
クテリア細胞は１５℃と４０℃との間の温度に於いて，
該バクテリア細胞・細胞含有物よりもオスモル濃度が低
いような溶液中に投入される。
除去することが必要である場合を対象としては，公知方
法（エッチ・アール・カバツク「バクテリア膜」，メソ
ーズ・オブ・エンチモロジー誌第２２巻，１９７１年第
９９頁参照）に準じて当の生活細胞として使用されるバ
クテリア細胞は１５℃と４０℃との間の温度に於いて，
該バクテリア細胞・細胞含有物よりもオスモル濃度が低
いような溶液中に投入される。
而してその場合前記溶液のＰＨ値は約８に持来たされ，
斯く形成された媒質に，次いで，エチレンジアミン四酢
酸のカリウム塩並びにリゾチームが添加される。
斯く形成された媒質に，次いで，エチレンジアミン四酢
酸のカリウム塩並びにリゾチームが添加される。
そうすることによって当のバクテリア細胞は細胞壁を失
うので細胞含有物は外囲媒質からただ細胞膜によっての
み分離されている。
うので細胞含有物は外囲媒質からただ細胞膜によっての
み分離されている。
本発明の方法は，それがもとで、そのまま細胞壁のある
ような細胞の使用下でも遂行できる。
ような細胞の使用下でも遂行できる。
当該方法はその場合，酵素が，細胞含有物にくらべて引
下げられたオスモル濃度を有する溶液に添加されるよう
にして遂行される。
下げられたオスモル濃度を有する溶液に添加されるよう
にして遂行される。
本発明方法の有利な一実施態様は，それによれば収率が
更に高められるのであるが，次のことにある。
更に高められるのであるが，次のことにある。
即ち、水溶液中に溶存する浸透活性物質の７０％を超え
ないような浸透活性物質含量を有するような溶液中に当
該細胞が投入されその場合該溶液中に含まれている物質
の少なくとも半分は細胞膜安定化性のイオン例えばマグ
ネシウムイオン及び（又は）カルシウムイオン並びにカ
リウムイオンであるが，それから細胞膜安定化性イオン
及びその他の浸透活性物質を、酵素含有溶液中でのこれ
ら浸透活性物質の総括濃度が，該水溶液中に含まれてい
る浸透活性物質濃度から２０％以上も外れたりはしない
ようなそのような量で添加した後その場合の細胞は１乃
至２時間前記溶液中に保持されるということである。
ないような浸透活性物質含量を有するような溶液中に当
該細胞が投入されその場合該溶液中に含まれている物質
の少なくとも半分は細胞膜安定化性のイオン例えばマグ
ネシウムイオン及び（又は）カルシウムイオン並びにカ
リウムイオンであるが，それから細胞膜安定化性イオン
及びその他の浸透活性物質を、酵素含有溶液中でのこれ
ら浸透活性物質の総括濃度が，該水溶液中に含まれてい
る浸透活性物質濃度から２０％以上も外れたりはしない
ようなそのような量で添加した後その場合の細胞は１乃
至２時間前記溶液中に保持されるということである。
酵素含有溶液による細胞含有物の交換は０℃で遂行する
のが適当である．当該水溶液からの増成された又は減成
された物質の分離は種々な手法で行なうことができる。
のが適当である．当該水溶液からの増成された又は減成
された物質の分離は種々な手法で行なうことができる。
本発明の方法によれば初めて，例えば蔗糖のグルコース
並びにフルクトースへの分解を酵素インベルターゼによ
って達成することが可能になる。
並びにフルクトースへの分解を酵素インベルターゼによ
って達成することが可能になる。
しかもその場合当該酵素が蔗糖溶液中で溶解したり又は
他の不可避な、溶解度低下性処置によってその触媒的活
性を失ったりすることはない。
他の不可避な、溶解度低下性処置によってその触媒的活
性を失ったりすることはない。
胞胞を水溶液から回収することも勿論また可能である。
それは浮選、沈澱、濾過又は遠心分離によって行なうこ
とができる。
とができる。
実施例 １
ＰＨ値７．２のトリス溶液に赤血球を投入したところ、
前記水溶液中赤血球の４０．９％のサスペンジョン密度
が調整された。
前記水溶液中赤血球の４０．９％のサスペンジョン密度
が調整された。
この溶液５０ｍｌに、ＭｇＳＯ４５ｍＭ毎リットル及び
１ｍｇ％インベルターゼを含んだ溶液５００ｍｌを添加
した。
１ｍｇ％インベルターゼを含んだ溶液５００ｍｌを添加
した。
斯く製造した溶液を３０分間０℃に保持した。
それに続いて，前記溶液のオスモル濃度を原のトリス溶
液のオスモル濃度に調整し，その場合ＮａＣｌ１ ５５
ｍＭ毎リットル含有の溶液の適宜量を添加した。
液のオスモル濃度に調整し，その場合ＮａＣｌ１ ５５
ｍＭ毎リットル含有の溶液の適宜量を添加した。
同時に，この溶液の温度を３７℃にあげてこの温度を５
０分間堅持した。
０分間堅持した。
これらの酵素インベルターゼ含有膜泡を次いで遠心分離
器中３０，０００ｇで遠心分離した。
器中３０，０００ｇで遠心分離した。
これらの遠心分離された膜泡を、そこで，ＰＨ値７．５
の等張トリス溶液，但し蔗糖１０−３ＭＯｌ毎リットル
含有の溶液１００ｍｌに添加した。
の等張トリス溶液，但し蔗糖１０−３ＭＯｌ毎リットル
含有の溶液１００ｍｌに添加した。
これら膜泡を約３０分間当の転化する蔗糖を含んだ溶液
中に放置した後、遠心分離によって分離した。
中に放置した後、遠心分離によって分離した。
残留溶液中の蔗糖濃度を測定したところ蔗糖のグルコー
ス並びにフルクトースへの転化が９０％にも達している
ことが判った。
ス並びにフルクトースへの転化が９０％にも達している
ことが判った。
実施例 ２
赤血球を，２回等張のリン酸塩で緩衝した塩化ナトリウ
ム溶液中に入れて各場合の溶液を遠心分離で除くことに
より洗浄した。
ム溶液中に入れて各場合の溶液を遠心分離で除くことに
より洗浄した。
この溶液は１３８ｍＭ／ｌの塩化ナトリウム，１２．３
ｍＭ／ｌのリン酸水素二ナトリウム及び２．７ｍＭ／ｌ
のリン酸水素ナトリウムを含んでいた。
ｍＭ／ｌのリン酸水素二ナトリウム及び２．７ｍＭ／ｌ
のリン酸水素ナトリウムを含んでいた。
この溶液のｐＨ値は７．４であった。
洗浄した赤血球を次に，前記塩化ナトリウム溶液１容量
部に対して赤血球約１容量部の割合で入れ，このように
してつくった赤血球を含む液を攪拌しながら０℃で，そ
のほかに５ｍｇ／１００ｍｌのウレアーゼを含有する４
ｍＭ／ｌの硫酸マグネシウムの溶液の中へ１：１０の体
積比で入れた。
部に対して赤血球約１容量部の割合で入れ，このように
してつくった赤血球を含む液を攪拌しながら０℃で，そ
のほかに５ｍｇ／１００ｍｌのウレアーゼを含有する４
ｍＭ／ｌの硫酸マグネシウムの溶液の中へ１：１０の体
積比で入れた。
今や赤血球を含む液のオスモル濃度を５分後に，等張に
達するまで２モルの塩化カリウムの溶液を加えて高めた
。
達するまで２モルの塩化カリウムの溶液を加えて高めた
。
更に５分後、約３０分間で温度を３７℃に高めた。
その後、今や酵素ウレアーゼを含んでいる（本願明細書
において「小泡」と呼ぶ）そのようにしてつくった膜胞 （Ｍｅｍｂｒａｎｖｅｓｉｋｅｌｎ）を、該膜胞の外表
面に或いは付着していることがあるウレアーゼを除くた
めに，リン酸塩で緩衝した等張な上記組成の塩化ナトリ
ウム溶液から５回遠心分離することによって洗浄した。
において「小泡」と呼ぶ）そのようにしてつくった膜胞 （Ｍｅｍｂｒａｎｖｅｓｉｋｅｌｎ）を、該膜胞の外表
面に或いは付着していることがあるウレアーゼを除くた
めに，リン酸塩で緩衝した等張な上記組成の塩化ナトリ
ウム溶液から５回遠心分離することによって洗浄した。
このウレアーゼを含む膜胞を次に，リン酸塩で緩衝した
等張な２０ｍＭ／ｌの尿素を含む上記組成の塩化ナトリ
ウム溶液の中へ入れて定温にすることによって，尿素の
分解に使用した。
等張な２０ｍＭ／ｌの尿素を含む上記組成の塩化ナトリ
ウム溶液の中へ入れて定温にすることによって，尿素の
分解に使用した。
尿素の分解によって生じたアンモニウムイオンをベルト
ウロー反応（Ｂｅｒｔｈｅｌｏｔ Ｒｅａｋｔｉｏｎ）
の方法で測光により測定した：なおこのために、膜胞か
ら前もって分離した一部分の溶液を使用した。
ウロー反応（Ｂｅｒｔｈｅｌｏｔ Ｒｅａｋｔｉｏｎ）
の方法で測光により測定した：なおこのために、膜胞か
ら前もって分離した一部分の溶液を使用した。
測定の結果，細胞中に入っているウレアーゼの活性は，
１間当り且つ膜胞１ｍｌ当り尿素０．４μＭＯｌであっ
た。
１間当り且つ膜胞１ｍｌ当り尿素０．４μＭＯｌであっ
た。
対照に赤血球を前記の膜胞の製造方法によって処理した
が、酵素ウレアーゼをより低いオスモル濃度を示す溶液
の中へ入れることはしなかった。
が、酵素ウレアーゼをより低いオスモル濃度を示す溶液
の中へ入れることはしなかった。
従って、酵素を入れることなく膜胞がつくられた。
透過性を高くしてから，従って膜胞を製造してから、該
膜胞を数分間、ウレアーゼを含有する溶液の中へ入れた
。
膜胞を数分間、ウレアーゼを含有する溶液の中へ入れた
。
次に該膜胞を前記のようにして，塩化ナトリウム溶液か
ら５回遠心分離することによって洗浄した。
ら５回遠心分離することによって洗浄した。
その後に上記のようにして行われた膜胞を使用する処理
工程ではアンモニウムイオンが全く生じなかった。
工程ではアンモニウムイオンが全く生じなかった。
上記実施例のアンモニウムイオンの生成は膜胞の表面に
付着したウレアーゼでは起らなかったということがこの
ようにして保証された。
付着したウレアーゼでは起らなかったということがこの
ようにして保証された。
実施例 ３
赤血球から出発して実施例２と同様に膜胞を製造したが
その際酵素ウレアーゼの代りに酵素グルコース−オキシ
ターゼを，４ｍＭ／ｌの硫酸マグネシウムを含有する溶
液の中へ入れた。
その際酵素ウレアーゼの代りに酵素グルコース−オキシ
ターゼを，４ｍＭ／ｌの硫酸マグネシウムを含有する溶
液の中へ入れた。
このグルコース−オキシターゼを含む膜胞を次に，２０
ｍＭ／ｌのグルコースを更に含有する実施例２に記載し
た組成の、リン酸塩で緩衝した塩化ナトリウム溶液の中
へ入れて空気をみたして定温にすることによって、グル
コン酸の合成に使用した。
ｍＭ／ｌのグルコースを更に含有する実施例２に記載し
た組成の、リン酸塩で緩衝した塩化ナトリウム溶液の中
へ入れて空気をみたして定温にすることによって、グル
コン酸の合成に使用した。
グルコースと酸素とからつくられたグルコン酸を薄層ク
ロマトグラフイーの方法で測定した。
ロマトグラフイーの方法で測定した。
このために、実施例２におけるように，膜胞から分離し
た一部分の溶液を使用した。
た一部分の溶液を使用した。
膜胞の表面に付着しているグルコース−オキシダーゼで
はグルコン酸は生じなかったとということが対照試験で
明らかになった。
はグルコン酸は生じなかったとということが対照試験で
明らかになった。
実施例 ４
下記の分量の成分を含有する溶液で栽培した藻類のデュ
ナリエラ（Ｄｕｎａｌｉｅｌｌａ−Ａｌｇｅｎ）を細胞
として使用した。
ナリエラ（Ｄｕｎａｌｉｅｌｌａ−Ａｌｇｅｎ）を細胞
として使用した。
ＮａＣｌ １．５ｍＭ／ｌ、ＭｇＳＯ４ ２４ｍＭ／ｌ
，ＭｇＣｌ２ ２０ｍＭ／ｌ、ＣａＣｌ２ １０ｍＭ／
ｌ，ＮａＮＯ３ ４ｍＭ，ＫＮＯ３ １ｍＭ／ｌ，Ｋ２
ＨＰＯ４ ０．１ｍＭ／ｌ、ＦｅＣｌ３ １．５μＭ／
ｌ，ＥＤＴＡ ３０μＭ／ｌ，Ｈ３ＢＯ３ １８５μＭ
，ＭｎＣｌ２ ７μＭ，ＺｎＣｌ２ ０．８μＭ／ｌ，
ＣｏＣｌ２ ０．０２μＭ／ｌ，ＣｕＣｌ２ ０．２μ
Ｍ／ｌ及びトリス−Ｃｌ ２０ｍＭ／ｌ。
，ＭｇＣｌ２ ２０ｍＭ／ｌ、ＣａＣｌ２ １０ｍＭ／
ｌ，ＮａＮＯ３ ４ｍＭ，ＫＮＯ３ １ｍＭ／ｌ，Ｋ２
ＨＰＯ４ ０．１ｍＭ／ｌ、ＦｅＣｌ３ １．５μＭ／
ｌ，ＥＤＴＡ ３０μＭ／ｌ，Ｈ３ＢＯ３ １８５μＭ
，ＭｎＣｌ２ ７μＭ，ＺｎＣｌ２ ０．８μＭ／ｌ，
ＣｏＣｌ２ ０．０２μＭ／ｌ，ＣｕＣｌ２ ０．２μ
Ｍ／ｌ及びトリス−Ｃｌ ２０ｍＭ／ｌ。
溶液のｐＨ値は７．４であった。
前記の発育媒質を遠心分離した後，前記藻類に１：１の
重量比で次の組成の媒質を加えた：ＮａＣｌ １．５Ｍ
／ｌ，ＭｇＣｌ２ １０ｍＭ／ｌ，ＫＨ２ＰＯ４ ２１
．３ｍＭ／ｌ，Ｎａ２ＨＰＯ４ ３．７ｍＭ／ｌ。
重量比で次の組成の媒質を加えた：ＮａＣｌ １．５Ｍ
／ｌ，ＭｇＣｌ２ １０ｍＭ／ｌ，ＫＨ２ＰＯ４ ２１
．３ｍＭ／ｌ，Ｎａ２ＨＰＯ４ ３．７ｍＭ／ｌ。
この溶液のｐＨ値は７．５であった。
酵素を含む膜胞を製造するためのこのようにしてつくっ
たサスペンジョン１ｍｌを、ウレアーゼ０．５〜を含有
する０．４５Ｍ／ｌの塩化ナトリウム溶液１０ｍｌに加
えた。
たサスペンジョン１ｍｌを、ウレアーゼ０．５〜を含有
する０．４５Ｍ／ｌの塩化ナトリウム溶液１０ｍｌに加
えた。
この液の温度は１５℃であった。
３０分後に、相当する量の３Ｍ／ｌの塩化ナトリウム溶
液を加えることによって最初のオスモル濃度にもどし、
前記藻類を更に３０分間１５℃で溶液中に放置した。
液を加えることによって最初のオスモル濃度にもどし、
前記藻類を更に３０分間１５℃で溶液中に放置した。
その後に細胞を，或いは付着しているかも知れないウレ
アーゼを除くために，５回夫々遠心分離で、サスペンジ
ョンをつくるために使用した媒質で洗浄した。
アーゼを除くために，５回夫々遠心分離で、サスペンジ
ョンをつくるために使用した媒質で洗浄した。
このウレアーゼを含む膜胞をその後に、洗浄に使用した
媒質の中へ入れて定温にすることによって，尿素の分解
に使用した：該媒質にはそのために更に２０ｍＭ／ｌの
尿素を加えておいた。
媒質の中へ入れて定温にすることによって，尿素の分解
に使用した：該媒質にはそのために更に２０ｍＭ／ｌの
尿素を加えておいた。
尿素の分解によって生じたアンモニウムイオンを一定の
時間間隔で測光によってベルトウロー反応の方法で測定
した。
時間間隔で測光によってベルトウロー反応の方法で測定
した。
測定の結果、膜胞中に入っているウレアーゼの活性は１
分間当りそして膜胞１ｍｌ当り尿素０．０３μＭであっ
た。
分間当りそして膜胞１ｍｌ当り尿素０．０３μＭであっ
た。
この値は，実施例２に記載した対照試験に従って製造し
た対照につくったサスペンジョンの本来のウレアーゼ活
性を差引いて得られた。
た対照につくったサスペンジョンの本来のウレアーゼ活
性を差引いて得られた。
以上を要するに本発明の主題とする処は前掲特許請求の
範囲に定義した通りの水溶液中に含まれている生化学化
合物を増成又は減成する方法であるが、その実施態様に
ついてはなお下記の条件を付し得るものとする。
範囲に定義した通りの水溶液中に含まれている生化学化
合物を増成又は減成する方法であるが、その実施態様に
ついてはなお下記の条件を付し得るものとする。
即ち（１）特許請求の範囲に準ずる方法に於いて．生活
細胞として使用されるバクテリア細胞が，１５℃と４０
℃との間の温度で．該バクテリア細胞の細胞含有物より
もオスモル濃度が低い溶液の中に投入されるが．その場
合前記溶液のｐＨ値は約８に持来たされまた斯くして形
成された媒質にはその次ぎにエチレンンジアミン四酢酸
のカリウム塩並びにリゾチームが添加されること，（２
）特許請求の範囲及び上記（１）に準ずる方法に於いて
．前記水溶液中に溶存する浸透活性物質の７０％より大
きくはないような浸透活性物質含量を有する溶液中に前
記細胞が投入され．その場合該溶液中に含まれている物
質の少なくとも半分はマグネシウムイオン及び、（又は
）カルシウムイオン並びにカリウムイオンなどの細胞膜
安定化性イオンであるがそれから酵素、細胞膜安定化性
イオン及びその他の浸透性物質を，酵素含有溶液中での
これら浸透活性物質の総括の濃度が．該水溶液中に含ま
れている浸透活性物質の濃度から２０％以上も外れたり
しないようなそのような量で添加した後その場合の細胞
は約１乃至２時間前記溶液中に保持されること，（３）
上記（２）に準ずる方法に於いて、酵素含有液による細
胞含有物の交換は０℃に於いて遂行されること， がこれである。
細胞として使用されるバクテリア細胞が，１５℃と４０
℃との間の温度で．該バクテリア細胞の細胞含有物より
もオスモル濃度が低い溶液の中に投入されるが．その場
合前記溶液のｐＨ値は約８に持来たされまた斯くして形
成された媒質にはその次ぎにエチレンンジアミン四酢酸
のカリウム塩並びにリゾチームが添加されること，（２
）特許請求の範囲及び上記（１）に準ずる方法に於いて
．前記水溶液中に溶存する浸透活性物質の７０％より大
きくはないような浸透活性物質含量を有する溶液中に前
記細胞が投入され．その場合該溶液中に含まれている物
質の少なくとも半分はマグネシウムイオン及び、（又は
）カルシウムイオン並びにカリウムイオンなどの細胞膜
安定化性イオンであるがそれから酵素、細胞膜安定化性
イオン及びその他の浸透性物質を，酵素含有溶液中での
これら浸透活性物質の総括の濃度が．該水溶液中に含ま
れている浸透活性物質の濃度から２０％以上も外れたり
しないようなそのような量で添加した後その場合の細胞
は約１乃至２時間前記溶液中に保持されること，（３）
上記（２）に準ずる方法に於いて、酵素含有液による細
胞含有物の交換は０℃に於いて遂行されること， がこれである。
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 １ マグネシウムイオン及び／又はカルシウムイオン並
びにカリウムイオンを少なくとも０．５ｍＭ／ｌ含有す
る水溶液に溶解している生化学化合物を，増成又は減成
を促進する酵素によって増成又は減成する方法にして， ａ）マグネシウムイオン及び／又はカルシウムイオン並
びにカリウムイオンを少なくとも０．５ｍＭ／ｌ含有す
る水溶液のオスモル濃度と適度に相違するオスモル濃度
を細胞含有物が有するような生物即ち赤血球又は藻類の
細胞を，前記細胞含有物のオスモル濃度に比してオスモ
ル濃度が細胞の膜の透過性の上昇が起るほど低いしかも
酵素を含有する溶液の中へ入れること，ｂ）そして，膜
として働く今や透過性の高まった細胞膜による物質交換
のために平衡状態において細胞含有物が前記の酵素含有
溶液と事実上一致するまで，前記の酵素含有溶液の中に
前記細胞を放置すること， ｃ）そして次に，前記の酵素含有溶液のオスモル濃度を
、浸透活性物質例えばカルシウムイオンカリウムイオン
，ナトリウムイオンを加えることによって，前記の最初
に入れた細胞の細胞含有物のオスモル濃度に高めること
， ｄ）次に，前記処理ステップａ）ないしｃ）によりつく
られた膜胞を前記の酵素含有溶液から分離すること， ｅ）次に，生化学化合物が膜の透過性のために前記膜胞
の内部へ移動して該化合物の増成又は減成が終り且つ前
記物質が前記膜を通って前記水溶液中へ移動してしまう
まで．前記膜胞を前記水溶液中に入れること， ｆ）次に，増成又は減成された化合物を既知の方法で前
記水溶液から分離すること， を特徴とする方法。
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| DE2326161A DE2326161C2 (de) | 1973-05-23 | 1973-05-23 | Verfahren zum Aufbau oder zum Abbau von durch chemische Eigenschaften ausgezeichneten, in einer wäßrigen Lösung enthaltenen Stoffen |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS5035388A JPS5035388A (ja) | 1975-04-04 |
| JPS583675B2 true JPS583675B2 (ja) | 1983-01-22 |
Family
ID=5881831
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP49056809A Expired JPS583675B2 (ja) | 1973-05-23 | 1974-05-22 | 水溶液中に含まれている生化学化合物を増成又は減成する方法 |
Country Status (9)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US4420559A (ja) |
| JP (1) | JPS583675B2 (ja) |
| CH (1) | CH582530A5 (ja) |
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