JPS5842863B2 - Ｓ，ｓ′−ビスシクロテトラペプチド及びその製造方法 - Google Patents

Description

【発明の詳細な説明】 本発明は、イオン包接化剤として有用な新規なビスシク
ロテトラペプチド及びその製造方法に関するものである
。

金属イオンと複合体を形成するイオン包接化剤としての
特質を有するペプチドとして、すでに１０個のアミノ酸
から戒るアンタマニドなどが知られているが、これらは
単環型の化合物である。

これらの単環型のペプチドにおいて、金属イオン※※錯
体形成能は、ペプチドカルボニル基とイオンとの有効な
イオン−双極子相互作用に左右されるの゛で、有効な相
互作用が行われるためには、構成アミノ酸の数が１０以
上のペプチドでなげればならない。

本発明者は、構成アミノ酸の数が１０未満で、従来のペ
プチド以上のイオン包接力を有する化合物を開発すべく
鋭意研究を重ねた結果、特定のビスシクロテトラペプチ
ドがすぐれたイオン包接力を有することを見いだし、こ
の知見に基づいて本発明をなすに至った。

すなわち、本発明は、一般式 （式中のＲはメチル基である） で表わされるｓ −ｓ’−ビスシクロテトラペプチドを
提供するものである。

＊七 この一般式（Ｉ）で表
わされる化合物は、いずれも文献未載の新規な化合物で
あり、例えば一般式 （式中のＲはメチル基、部ま活性エステル基、Ｒ“はス
ルフヒドリル保護基である） で表わされるテトラペプチドを環化したのちスルフヒド
リル保護基Ｒ／／を脱離させ、次いでこれを三量化する
ことにより製造することができる。

また、この際の原料化合物として用いられる前記一般式
（Ｉ［）のテトラペプチドは、例えば先ずアミノ基を保
護したサルコシンをＬ−プロリンアルキルエステルと反
応させてジペプチドとし、次いでアミノ保護基を脱離さ
せたのち、これにアミノ基及びスルフヒドリル基を保護
したＬ−システィンを反応させてトリペプチドとし、さ
らにアミノ保護基を脱離させたのち、これにアミン基を
保護したグリシンを反応させてテトラペプチドとし、次
にこのテトラペプチドのアルキルエステル部分を加水分
解後活性エステルに変換し、アミノ保護基を脱離させる
ことによって得られる。

前記一般式（ＩＦ）における活性エステル基Ｒ′とシテ
は、ｐ−ニトロフェニルエステル基、ヒドロキシコハク
酸イミドエステル基を、またスルフヒドリル保護基とし
ては、無水フッ化水素酸の処理により脱離しうる基例え
ばベンジル基、ｐ−メトキシベンジル基などを挙げるこ
とができる。

前記一般式（ｎ）のテトラペプチドを製造する際のアミ
ン保護基としてに−［通常のペプチド合成において用い
られている第三ブチルオキシカルボニル基、ベンジルオ
キシカルボニル基、ｐ−メトキシベンジルオキシカルボ
ニル基、ｏ−ニトロフェニルスルフェニル基を、またカ
ルボキシル基の保護のためのアルキルエステル基として
（東メチルエステル、エチルエステルなどを用いること
ができる。

一般式（ｎ）のテトラペプチドを形成させる際の、ペプ
チド結合生成反応は、ＤＣＣ法（ジシクロへキシルカル
ボジイミド法）、活性エステル法、混合酸無水物法など
の従来知られている方法を適当に組み合わせて用いるこ
とができる。

原料合成中間体のアミノ基及びスルフヒドリル基を保護
したＬ−シスチル−サルコシル−プロリンアルキルエス
テルの合成及び原料化合物のアミン基を保護したグリシ
ル−スルフヒドリル基を保護したＬ−シスチル−サルコ
シル−Ｌ−プロリンアルキルエステルの合成においては
、ＤＣＣ法が最も適しており、高収率、高純度でこれら
のペプチドを得ることができる。

本発明のｓ−ｓ’−ビスシクロテトラペプチドの合成中
間体であるペプチド類は、いずれも酸及びアルカリで洗
い、再結晶することにより容易に単離・精製することが
できる。

本発明方法の原料化合物であるスルフヒドリル基を保護
したテトラペプチド活性エステルは酸塩の形で用いるの
が好ましい。

この酸塩としては、塩酸塩、臭化水素酸塩、フッ化水素
酸塩などがある。

本発明方法における環化反応は、大量の不活性溶媒、例
えばピリジン、ジメチルホルムアミドなどの溶媒中で、
３０〜９０℃の温度で行うことができる。

このようにして得られた環状テトラペプチドからスルフ
ヒドリル保護基を脱離するには、アニソール存在下に無
水フッ化水素酸で処理すればよい。

Ｓ−８結合の生成による三量化反応は、遊離のスルフヒ
ドリル基を有する環状テトラペプチドをメタノール、エ
タノールなどのアルコール中で、１・２−ショートエタ
ン、ヨウ素など適当な触媒の存在下に、空気酸化により
行われる。

反応は１〜２日で完了し、ｓ−ｓ’−ビスシクロテトラ
ペプチドが析出する。

本発明の化合物（″Ｊ、、赤外線吸収スペクトルで１６
６０ｃｒｒＬ−１にアミド結合カルボニル基に由来する
特性吸収を示し、ニンヒドリン反応及びニトロプルジッ
ド反応は共に負であり、これらによって生成物な同定す
ることができる。

本発明の化合物は、構成アミノ酸の数が８であるにもか
かわらず、アルカリ金属イオン及びアルカリ土類金属イ
オンと複合体を形成するイオン包接化剤としての特性を
有し、イオンセンサーとして分析、医薬及び農業の分野
に広く利用することができる。

次に本発明を実施例によりさらに詳細に説明する。

参考例 （Ａ） サルコシル−Ｌ−プロリンメチルエステル塩
酸塩の合成 ｔ−７”チルオキシカルボニルサルコシン６、ＯＯＰを
クロロホルム４０ｍ１に溶解し、この中にＮ−メチルモ
ルホリン３．４９ｍ１とインプチルクｏｏホーメート４
．１５７ｄを一１８℃の温度で加え、２分間かきまぜた
。

次に、この溶液に、プロリンメチルエステル５．２１’
とＮ−メチルモルホリン３．４９ｍ１を溶かしたクロロ
ホルム溶液１ｏｍｌを加え、−１８℃の温度で１時間、
さらに室温で一夜かきまぜた。

反応混合物を沢過し、Ｆ液を水、４％炭酸水素ナトリウ
ム水溶液、飽和食塩水で順次洗い、無水硫酸ナトリウム
で乾燥した。

次いで、減圧下に溶媒を留去し、残留した油状物９．５
２Ｐ（収率１００％）を酢酸エチル２０ｍ１に溶解し、
乾燥塩化水素ガスを酢酸エチルに溶解させ濃度を４規定
に調整した溶液２８０ｍ１を加えて室温で１時間反応さ
せた。

反応終了後、溶媒を留去し、残留物を酢酸エチルとエチ
ルエーテルの混合溶媒で結晶化させると、融点１６７〜
１６８℃の目的化合物６．１２ｆ（収率８２％）が得ら
れた。

このものの物理的性質は次の通りである。

薄層クロマトグラフィーのＲｆ値 Ｒｆ１＝０．１７ （展開溶媒 クロロホルム：メタノ
ール＝５：１） Ｒｆ２＝０．０３ （展開溶媒 クロロホルム：メタノ
ール：酢酸＝９５：５：１） 元素分析値（Ｃ９Ｈ１□０３Ｎ２Ｃ１として）ＨＮ 計算値（％） ４５．６４ ７．２４ １１．８３実
測値（％）４５．６４ ７．２３ １１．８１（Ｂ）
５−ｐ−メトキシベンジル−Ｌ−シスチル−サルコシ
ル−Ｌ−フロリンメチルエステル塩酸塩の合成 第三ブチルオキシカルボニル−８−ｐ−メトキシベンジ
ル−Ｌ−システィン・ジシクロヘキシルアミン塩４．９
４ｆとサルコシン−Ｌ−プロリンメチルエステル塩酸塩
２．２４Ｐをり□ロホルムに溶かした溶液６０ｍ１に、
ジシクロへキシルカルボジイミド１．９５Ｐをクロロホ
ルムに溶かした溶液１０ｍ１を一１０℃で加えた。

次いで１０℃で５時間、さらに室温で一夜かきまぜて反
応させた。

反応混合物を沢過し、ｐ液を減圧濃縮し、残留物を酢酸
エチル５０ｍ１に溶解し、再び沢過し、沢液を１０％ク
エン酸水溶液、５％炭酸水素ナトリウム水溶液、水で順
次洗い、無水硫酸ナトリウムで乾燥した。

次いで、減圧下に溶媒を留去し、残留物をｎ−ヘキサン
で固化させ得られた第三ブチルオキシカルボニル−８−
ｐ−メトキシベンジル−Ｌ−シスチル−サルコシル−Ｌ
−７０リンメチルエステル４．２４Ｐ（収率１００％）
を乾燥塩化水素ガスを酢酸エチルに溶解して濃度４規定
に調整した溶液７０ｍ１に溶かし室温で１時間反応させ
た。

反応終了後、溶媒を留去し、残留物をエチルエーテルで
結晶化させると融点８３〜８４℃の目的化合物３．８５
Ｐ（収率８６％）が得られた。

Ｒｆ１＝０．５４、Ｒｆ２＝０．４４ 元素分析値（Ｃ２０Ｈ３００５Ｎ３ＳＣ１として）ＣＫ
Ｎ 計算値（％） ５２．２２ ６．５７ ９．１３実測
値（％） ５２．１８ ６．６４ ９．１１（ｑ 第
三ブチルオキシカルボニルグリシル−８−ｐ−メトキシ
ベンジル−Ｌ−シスチル−サルコシル−Ｌ −７’ロリ
ン−ｐ−ニトロフェニルエステルの合成 第三ブチルオキシカルボニルグリシン・ジシクロヘキシ
ルアミン塩１．４３Ｓ’と５−ｐ−メトキシベンジル−
Ｌ−シスチル−サルコシル−Ｌ−プロリンメチルエステ
ル１．８５ Ｐヲクロロホルムに溶かした溶液５０ｍ１
に、ジシクロへキシルカルボジイミド０．８３Ｐをクロ
ロホルムに溶かした溶液３ｍｌを一１０℃で加えた。

次い”Ｃ１Ｂ）における第三ブチルオキシカルボニル−
８−ｐ−メトキシベンジルーＬ−シスチル−サルコシル
−Ｌ−プロリンメチルエステルの製法と同様にして、第
三ブチルオキシカルボニルグリシル−５−ｐ−メトキシ
ベンジル−Ｌ−シスチルサルコシル−Ｌ −フロリンメ
チルエステルをアモルファス物ｉ、 ｓ ｏ ｙ （収
率７７％）として得た。

この化合物１．６５Ｐをメタノール１０ｒＩＬｌに溶解
し、ｌＮ−ＮａＯＨ５，７ｍｌを加えて室温で１時間反
応させた。

反応終了後、反応混合物に水１０１ｒＬｌを加え、メタ
ノールを減圧除去し、残留する水溶液をエーテルで洗い
、次いで１０％クエン酸水溶液でｐＨを３〜４に調節し
て油状物を得た。

これを石油エーテルで固化すると融点８２〜８４℃の第
三ブチルオキシカルボニルグリシル−８−ｐ−メトキシ
ベンジル−Ｌ−シスチル−サルコシル−Ｌ−プロリン１
．３０ｆ（収率８１％）が得られた。

次に、この化合物１．１９ｆとｐ−ニトロフェノール０
．２９Ｆをクロロホルム１５−に溶解し、これにジシク
ロへキシルカルボジイミド０．４３？をクロロホルムに
溶かした溶液３ｍｌを０℃で加え、０℃で一夜かきまぜ
て反応させた。

反応終了後、反応混合物を沢過し、涙液を減圧濃縮し、
残留物を酢酸２滴を含むアセトン５−に溶解し、再び沢
過した。

ｐ液の溶媒を留去すると油状物が得られ、これをエーテ
ルとｎ−へキサンの混合溶媒で結晶化すると融点５９〜
６０℃の目的物１．３４１（収率９３％）が得られた。

Ｒｆ、＝０．７６、Ｒｆ２−０．０７ 元素分析値（Ｃ３２Ｈ４１０ｔ ＯＨ５Ｓとして）ＨＮ 計算値（％） ５５．８８ ６．０１ １０．１８実
測値（％） ５６．１８ ５．９８ ９．９２実施
例 （Ａ） シクロ−ＣＪ’）シル−８−ｐ−メトキシベ
ンジル−Ｌ−シスチル−サルコシル−Ｌ−フロリル）の
合成 第三ブチルオキシカルボニル−８−ｐ−メトキシベンジ
ル−Ｌ−シスチル−サルコシル−Ｌ−プロリル−ｐ−ニ
トロフェニルエステル１．２０Ｓ’を、乾燥塩化水素ガ
スを酢酸エチルに溶解して濃度４規定に調整した溶液で
水冷下に１時間処理し、次いで溶媒を留去し、残留物を
エーテルで固化させるとグリシル−８−ｐ−メトキシベ
ンジル−Ｌ−シスチル−サルコシルプロリン−ｐ−ニト
ロフェニルエステル・塩酸塩１．１０Ｓ’（収率１００
％）が得られた。

これをジメチルホルムアミド８ｍｌに溶かし、得られた
溶液を６０℃でピリジン６００ｍ１の中に３時間かげて
滴下し、次いで一夜かきまぜて反応させた。

反応終了後、溶媒を留去し、残留物を水とメタノールの
混合溶媒に溶かし、同じ溶媒で洗浄したＨ十型とＯＨ−
型のイオン交換樹脂カラムの中を通し、未反応物を除去
した。

次いで、溶媒を留去し、残留物をメタノールに溶かし、
セファデックスＬＨ−２０（登録商標名、ファルマシア
ファインケミカルズ社）のカラムを通してゲル沢過を行
って精製したのち、メタノールから再結晶すると、融点
１４２−１４３℃のシクロテトラペプチド４８０■（収
率６１％）が得られた。

この化合物はニンヒドリン反応及びニトロプルジッド反
応が共に負で、赤外線吸収スペクト１ ルでシｍａＸ−１６６０ｃｆｒＬ １５２０ＣｒＩ
Ｌ １１２５５ｃｒＩＬ ’ に吸収があり、マススペ
クトルはＭ＋−４４８であった。

Ｒｆ、 ＝ ０．４７、Ｒｆ２−０ 元素分析値（Ｃ２１Ｈ２８０５Ｎ４Ｓ・１／２Ｈ２０と
して） ＨＮ 計算値（％） ５５．１３ ６．３９ １２．２５実
測値（％） ５５．１７ ６．１２ １２．１２８）
Ｓ−８’−ビスシクロ（グリシル−Ｌ−へミシスチルー
サルコシル−Ｌ−７”ロリル）の合成シクロ（クリシル
−８−ｐ−メトキシベンジル−Ｌ−シスチル−サルコシ
ル−Ｌ −７”ロリン）１００ｒｎ９を、アニソ−）’
Ｌｙ０．３ｍｌと無水フッ化水素酸１０ｍ１の混合物に
溶かし、０℃で１時間反応させた。

次いで、無水フッ化水素酸を０℃で留去して得られた残
留物はニトロプルジッド反応が正であった。

これをメタノールに溶かし、１・２−ショートエタン６
５ｍ９を加え、乾燥空気をニトロプルジッド反応が負に
なるまで導入した。

反応が完了すると目的物が析出した。これをアルコール
で洗浄すると融点（分解）２８０〜２８５℃の白色結晶
として目的物３０■（収率４１％）が得られた。

この化合物は、ニンヒドリン反応及びニトロプルジッド
反応が共に負で、赤外線吸収スペクトルでシｍａｘ−１
６４０ＣｒＩＬ ” １５４０ＣｒｆＬ ”に吸収が
あった。

Ｒｆ１＝０．１１、Ｒｆ２＝０ 元素分析値（Ｃ２６Ｈ３８０８Ｎ８ Ｓ２・３Ｈ２０と
して） ＨＮ

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １一般式 （式中のＲはメチル基である） で表わされるｓ−ｓ’−ビスシクロテトラペプチト。 ＊＊２ 一般式 （式中のＲはメチル基、ＲＱＩｉ活性エステル基、Ｒ１
   ′はスルフヒドリル保護基である） で表わされるテトラペプチドを環化縮合させたのち、無
   水フッ化水素酸で処理してスルフヒドリル保護基を脱離
   させ、次いでことを三量化することを特徴とする、一般
   式 （式中のＲは前記と同じ意味をもつ） で表わされるｓ −ｓ’−ビスシクロテトラペプチドの
   製造方法。