JPS5867629A - 抗血友性第８因子の回収方法 - Google Patents
抗血友性第８因子の回収方法Info
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- JPS5867629A JPS5867629A JP57074468A JP7446882A JPS5867629A JP S5867629 A JPS5867629 A JP S5867629A JP 57074468 A JP57074468 A JP 57074468A JP 7446882 A JP7446882 A JP 7446882A JP S5867629 A JPS5867629 A JP S5867629A
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- plasma
- factor
- precipitate
- blood
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- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/745—Blood coagulation or fibrinolysis factors
- C07K14/755—Factors VIII, e.g. factor VIII C (AHF), factor VIII Ag (VWF)
-
- A—HUMAN NECESSITIES
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- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
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- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
- Polysaccharides And Polysaccharide Derivatives (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
本！＠明は、低温沈澱法を適用して第■因子蛋白質を純
化する改良法を包含する方法による第■因子（Ｆａ＠ｔ
ｏｒ■）濃厚物の調製に関する。
化する改良法を包含する方法による第■因子（Ｆａ＠ｔ
ｏｒ■）濃厚物の調製に関する。
１９８０年５月２０日にゲイシム。霞ツタ（Ｇａ％Ｉ
Ａ、 Ｒｏｃｋ）に対して発行された米国特許第４，２
０３，８９１号ｆｊｉＪ細書には全血液あるいは血漿成
分中のカルシウムおよび／または他のイオンの生理学的
−匣の維持に基いて、全血液、血漿ま次は血漿フラクシ
ョンから得られる抗血友性第■因子（Ａ＋１Ｉｔｉｈ＠
ｍｏｐｈｌ１１ｅ Ｆａ＠ｔｅｒ■：ＡＨＦ）の収率を
大巾に上昇させる方法が記載されている。この方法にお
いては、可能な限り血漿中の初期の第鴇因子活性度（ａ
ｌｔｉマ５ｔｙ）を保持しようとする試みと、同時に、
血漿から調製されｔり２イオ沈澱物（ｃｒｙ＋ｅｐｒ＠
ｅｉｐ口ａｔ＠）中の第１因子の回収を改善する試みが
なされている。
Ａ、 Ｒｏｃｋ）に対して発行された米国特許第４，２
０３，８９１号ｆｊｉＪ細書には全血液あるいは血漿成
分中のカルシウムおよび／または他のイオンの生理学的
−匣の維持に基いて、全血液、血漿ま次は血漿フラクシ
ョンから得られる抗血友性第■因子（Ａ＋１Ｉｔｉｈ＠
ｍｏｐｈｌ１１ｅ Ｆａ＠ｔｅｒ■：ＡＨＦ）の収率を
大巾に上昇させる方法が記載されている。この方法にお
いては、可能な限り血漿中の初期の第鴇因子活性度（ａ
ｌｔｉマ５ｔｙ）を保持しようとする試みと、同時に、
血漿から調製されｔり２イオ沈澱物（ｃｒｙ＋ｅｐｒ＠
ｅｉｐ口ａｔ＠）中の第１因子の回収を改善する試みが
なされている。
１９８１年１１月１５日に、ゲイルアンロック（Ｇａｉ
ｌ Ａｎｎ Ｒｏｃｋ）およびダブラｘ スｆｙｘ−ｙ
パーマ−（Ｄｏｕｇｌａｓ Ｓｔ＠ｐｈ＊ｎ Ｐａｌｍ
ａｒ ）の名のも・とに発行された米国特許第４，２８
９，６９１号明細書（１９８０年１月１８日に出願され
たシリアル４３４４．０００カナダ明細書に対応する）
には箒■因子を得る方法が記載され、この方法は、路程
因子の製造に至る低温不溶性グロブリン（Ｃｏｌｄ １
ｎａｏｌｎｂｌ＠ｇｌｏｂｔｌｌｌｎ ； Ｃ１ｊ ）
またはフイゾロネクデイン（ｆｌｂｒｏａ・ｅｔｌｎ
ンの導入工程を含み、その結果クライオ沈澱物中の第鴇
因子の収量が著しく増加し、同様にクライオ沈澱物から
得られる低温不溶性グロブリンあるいはフイブロキクテ
ィン中の収量も増す。この特許にお−て議論されている
ように、フイブロネクテインおよびフイブリノゲン（ｆ
１ｂｒｉｎｏｇ＠ｎ ）のクライオ沈澱物は％１９７２
年の元のフエケテ（Ｆ＠に＊＊＊ ）の特許（１９７８
年７月１１日にＲ・２９，６９８として発行され九）に
先立って何年も前に確立された手法で６つ九。低温での
フイブロネクナインの沈澱を奥行するためには、ヘパリ
ンあるいは他の多糖類化合物を添加することが必要であ
ることは一般に知られている。しかしながら、第鴇因子
の製造に向けての低温不溶性グロブリンまたはフイプロ
ネクテインの適用に関しては、いかなる点においても、
文献には示唆されず、また、教示されていない。１！際
、Ｊ、Ｂ、Ｃ，２Ｉｓ Ｏ： ６６１４，１９７５の［
フィブリン安定化因子による低温不＃Ｉ性グａｆ９ｙの
果樹Ｊ（”Ｃｒｏｓｓ Ｌｉｎｋｉｎｇ ｏｆ Ｃｏ１
４−Ｉｎｓｏｌｔ＋ｂｌ＠Ｇｌｏｂｉ１−１１！ｌ ｂ
ｙ Ｐ”１ｂｒ１ｍ−８ｔａｂｌ１１ｍ１ｍｇ Ｆａａ
ｔｏｒ ’ ）なる標題のモツシャ−（Ｍｏ１ｈ＠ｒ
）の論文によれば、アンノ酸分析、’＊アガ四−スゲル
からの溶離位置およびポリアクリルアミド中の電気泳動
によって、低温不溶性グロブリンは抗血真性因子＜ｔｉ
ｉｔ■因子）から峻別される。
ｌ Ａｎｎ Ｒｏｃｋ）およびダブラｘ スｆｙｘ−ｙ
パーマ−（Ｄｏｕｇｌａｓ Ｓｔ＠ｐｈ＊ｎ Ｐａｌｍ
ａｒ ）の名のも・とに発行された米国特許第４，２８
９，６９１号明細書（１９８０年１月１８日に出願され
たシリアル４３４４．０００カナダ明細書に対応する）
には箒■因子を得る方法が記載され、この方法は、路程
因子の製造に至る低温不溶性グロブリン（Ｃｏｌｄ １
ｎａｏｌｎｂｌ＠ｇｌｏｂｔｌｌｌｎ ； Ｃ１ｊ ）
またはフイゾロネクデイン（ｆｌｂｒｏａ・ｅｔｌｎ
ンの導入工程を含み、その結果クライオ沈澱物中の第鴇
因子の収量が著しく増加し、同様にクライオ沈澱物から
得られる低温不溶性グロブリンあるいはフイブロキクテ
ィン中の収量も増す。この特許にお−て議論されている
ように、フイブロネクテインおよびフイブリノゲン（ｆ
１ｂｒｉｎｏｇ＠ｎ ）のクライオ沈澱物は％１９７２
年の元のフエケテ（Ｆ＠に＊＊＊ ）の特許（１９７８
年７月１１日にＲ・２９，６９８として発行され九）に
先立って何年も前に確立された手法で６つ九。低温での
フイブロネクナインの沈澱を奥行するためには、ヘパリ
ンあるいは他の多糖類化合物を添加することが必要であ
ることは一般に知られている。しかしながら、第鴇因子
の製造に向けての低温不溶性グロブリンまたはフイプロ
ネクテインの適用に関しては、いかなる点においても、
文献には示唆されず、また、教示されていない。１！際
、Ｊ、Ｂ、Ｃ，２Ｉｓ Ｏ： ６６１４，１９７５の［
フィブリン安定化因子による低温不＃Ｉ性グａｆ９ｙの
果樹Ｊ（”Ｃｒｏｓｓ Ｌｉｎｋｉｎｇ ｏｆ Ｃｏ１
４−Ｉｎｓｏｌｔ＋ｂｌ＠Ｇｌｏｂｉ１−１１！ｌ ｂ
ｙ Ｐ”１ｂｒ１ｍ−８ｔａｂｌ１１ｍ１ｍｇ Ｆａａ
ｔｏｒ ’ ）なる標題のモツシャ−（Ｍｏ１ｈ＠ｒ
）の論文によれば、アンノ酸分析、’＊アガ四−スゲル
からの溶離位置およびポリアクリルアミド中の電気泳動
によって、低温不溶性グロブリンは抗血真性因子＜ｔｉ
ｉｔ■因子）から峻別される。
このように、先打する米国特許第４，２８９，６９１号
明細書の発明では、フイブロネクテインあるいは低温不
溶性グロブリンの製造手法を第１因子の製造への適用を
取力扱っている。路程因子の製造に至る低温不溶性グロ
ブリンのクライオ沈澱の導入によって、クライオ沈澱物
中の路程因子の収量が著しく増加し、同様にこのクライ
オ沈澱物から得られる次の低温不溶性グロブリンフラク
ション中の収量も増加する。この手法を用いることによ
り８１−の第鴇因子がクライオ沈澱物中で回収される、
次の低温不溶性グロブリン７ラクシヨンは初期の第１因
子活性度の６２優を含んでいた。よって、鰍初の血漿の
１リツトル尚たル６６６単位（ｕｎｉ ｔ ）の最終的
な回収が得られ、また、蛋白質の童は最初の血漿に対し
て１−以下に減少した。さらに、この手法は献血者セン
ターで行なうこともできるし。
明細書の発明では、フイブロネクテインあるいは低温不
溶性グロブリンの製造手法を第１因子の製造への適用を
取力扱っている。路程因子の製造に至る低温不溶性グロ
ブリンのクライオ沈澱の導入によって、クライオ沈澱物
中の路程因子の収量が著しく増加し、同様にこのクライ
オ沈澱物から得られる次の低温不溶性グロブリンフラク
ション中の収量も増加する。この手法を用いることによ
り８１−の第鴇因子がクライオ沈澱物中で回収される、
次の低温不溶性グロブリン７ラクシヨンは初期の第１因
子活性度の６２優を含んでいた。よって、鰍初の血漿の
１リツトル尚たル６６６単位（ｕｎｉ ｔ ）の最終的
な回収が得られ、また、蛋白質の童は最初の血漿に対し
て１−以下に減少した。さらに、この手法は献血者セン
ターで行なうこともできるし。
勿論、第鴇因子のよシ大きな規模での回収を意図するも
のでもある。この方法において、ＣＰＤプラズマ（ＣＰ
Ｄ：クエン酸塩−リン徽−デキストロース抗凝結剤、＠
１ｔｒａｔ＠ｐｈｏｓｐｈ＠ｔ＠ｄ＠ｘ−１ｒａｇｓ
）から得られたクライオ沈澱物の効率は、ヘノ々リン抗
凝結剤の添加およびクエン酸塩−食塩−へＩｑリン緩衡
剤（ａ１ｔｒａｔ＠ａａｌ１ｇ＋＠ｈ＠ｐａｒ１ｎｂｕ
ｔｔ＠ｒ ）を用いる低温熟成工程によって改善された
。この出願において最高の結果は、血漿１ＷｄＫ対して
１単位のヘノリンを用いた場合に得られた。この量のへ
バリンにより最善の結果が得られることが判シ、ここで
クライオ沈澱効率は増加し、８０チまでの第鴇因子の収
率が得られた。さらに、初期のまたはゼ四活性度のいく
らかの改善も得られた。１つの比較として、従来の抗凝
結剤中に集められた血漿のり２イオ沈澱効率は４０〜５
０チである。このように、低温不溶性グロブリン法は、
中間純度の路程因子を単離するのにはるかに優れた方法
である。
のでもある。この方法において、ＣＰＤプラズマ（ＣＰ
Ｄ：クエン酸塩−リン徽−デキストロース抗凝結剤、＠
１ｔｒａｔ＠ｐｈｏｓｐｈ＠ｔ＠ｄ＠ｘ−１ｒａｇｓ
）から得られたクライオ沈澱物の効率は、ヘノ々リン抗
凝結剤の添加およびクエン酸塩−食塩−へＩｑリン緩衡
剤（ａ１ｔｒａｔ＠ａａｌ１ｇ＋＠ｈ＠ｐａｒ１ｎｂｕ
ｔｔ＠ｒ ）を用いる低温熟成工程によって改善された
。この出願において最高の結果は、血漿１ＷｄＫ対して
１単位のヘノリンを用いた場合に得られた。この量のへ
バリンにより最善の結果が得られることが判シ、ここで
クライオ沈澱効率は増加し、８０チまでの第鴇因子の収
率が得られた。さらに、初期のまたはゼ四活性度のいく
らかの改善も得られた。１つの比較として、従来の抗凝
結剤中に集められた血漿のり２イオ沈澱効率は４０〜５
０チである。このように、低温不溶性グロブリン法は、
中間純度の路程因子を単離するのにはるかに優れた方法
である。
ヘパリン、ナトリウムへ／々リン（ｍｅｄｉｕｍｈ＠ｐ
ａｒ１ｍ ）もしくはこれらの混合物中に集められた血
液まπ紘血漿から得られたクライオ沈澱物（５ｒｙｏｐ
ｒｅ＊１ｐ１ｔａｌｅｓ ） Ｋ低温不溶性グロブリン
法を適用することにより、高純度の第１因子が得られる
ことが判った。特には、ヘノ々りン中に血液または血漿
を集めるプａセスと低温熟成工程とを−＃にすることに
より、第１因子に非常に富んだ低温不溶性グ胃ゾリン様
の物質が帰られる。この新しい方法によれば、高純度の
第１因子の１製が可能であル、これは血液銀行において
容易になされ、また、クライオ沈澱工程は分別プラント
においても與施することができる。
ａｒ１ｍ ）もしくはこれらの混合物中に集められた血
液まπ紘血漿から得られたクライオ沈澱物（５ｒｙｏｐ
ｒｅ＊１ｐ１ｔａｌｅｓ ） Ｋ低温不溶性グロブリン
法を適用することにより、高純度の第１因子が得られる
ことが判った。特には、ヘノ々りン中に血液または血漿
を集めるプａセスと低温熟成工程とを−＃にすることに
より、第１因子に非常に富んだ低温不溶性グ胃ゾリン様
の物質が帰られる。この新しい方法によれば、高純度の
第１因子の１製が可能であル、これは血液銀行において
容易になされ、また、クライオ沈澱工程は分別プラント
においても與施することができる。
本発明の方法は、全血液が直接にヘパリン、ナトリウム
へバリンまたはこれらの混合物から選ばれる抗凝結剤中
に新鮮に＃ｌめられ、また、ヘノ臂リンが血液ｌ−あた
ｂ６〜８単位あるいは血液１ｍあた力３．５〜４単位用
−られる。全血液または血漿あるい紘血漿フラクション
からの抗血友性第鴇因子の回収方法であって、最初に血
漿と赤血球を分離し及び又はへノ々リン処理した血漿を
冷凍し、この血漿を溶解化し、この血漿からクライオ沈
澱物を分離しこのクライオ沈澱物を溶解化し、この溶解
化したクライオ沈澱物にへ／＃リン、食塩溶液を加え、
この溶解化したクライオ沈澱物を約０〜４℃の温度で少
なくとも２時間熟成し、これにより、低温不溶性グロブ
リンを沈澱可能なヘパリンを用いて、クライオ沈澱物中
に存在する第１因子を分離せしめて低温不溶性グロブリ
ンをも含む第１因子に富んだ沈澱物を得、この第１因子
に冨んだ沈澱物を分離し、ついでこれからｉｖｍ因子を
分離することを特徴とする抗血友性第Ｘ厘因子の回収方
法である。
へバリンまたはこれらの混合物から選ばれる抗凝結剤中
に新鮮に＃ｌめられ、また、ヘノ臂リンが血液ｌ−あた
ｂ６〜８単位あるいは血液１ｍあた力３．５〜４単位用
−られる。全血液または血漿あるい紘血漿フラクション
からの抗血友性第鴇因子の回収方法であって、最初に血
漿と赤血球を分離し及び又はへノ々リン処理した血漿を
冷凍し、この血漿を溶解化し、この血漿からクライオ沈
澱物を分離しこのクライオ沈澱物を溶解化し、この溶解
化したクライオ沈澱物にへ／＃リン、食塩溶液を加え、
この溶解化したクライオ沈澱物を約０〜４℃の温度で少
なくとも２時間熟成し、これにより、低温不溶性グロブ
リンを沈澱可能なヘパリンを用いて、クライオ沈澱物中
に存在する第１因子を分離せしめて低温不溶性グロブリ
ンをも含む第１因子に富んだ沈澱物を得、この第１因子
に冨んだ沈澱物を分離し、ついでこれからｉｖｍ因子を
分離することを特徴とする抗血友性第Ｘ厘因子の回収方
法である。
上記したように、血液は血漿１ＩＲ１当たり約６〜８単
位、好ましくは８単位のへ７９リンを用いてヘパリン中
に新鮮に集められ、あるいはクエン酸塩−リン酸塩−デ
キストレース（ＣＰＤ）よりむしろ抗凝結剤としてへ／
臂りンを用い血液搬は血漿から分離され、つりで、血漿
は通常の血液銀行の方法に従って冷凍され、血漿からク
ライオ沈澱物が得られる。ついで、クライオ沈澱物は溶
解化され、前記のような低温不溶性沈澱−を得る方法に
従ってプールされる。
位、好ましくは８単位のへ７９リンを用いてヘパリン中
に新鮮に集められ、あるいはクエン酸塩−リン酸塩−デ
キストレース（ＣＰＤ）よりむしろ抗凝結剤としてへ／
臂りンを用い血液搬は血漿から分離され、つりで、血漿
は通常の血液銀行の方法に従って冷凍され、血漿からク
ライオ沈澱物が得られる。ついで、クライオ沈澱物は溶
解化され、前記のような低温不溶性沈澱−を得る方法に
従ってプールされる。
この方法では食塩−ヘパリン溶液が用いられまた、好ま
じりものでもあるが、上記の米−特許第４，２８９，５
９１号明細書に記載されたようなりエン酸塩−食塩−へ
ノリンＩＩｋＩＩｉ液も同様に用いることができる。し
かしながら、クエン酸塩−食塩−ヘノリン緩衝液を使用
するとｇｖｍ因子の祝意が低下し、それ故、この緩衝液
が食塩−ヘパリン溶液に比べて明らかに集用的でない３
゜本発明の方法について東に具体的に記すれば次のよう
になる。８単位へバリン／−の新鮮なヘノ臂リンプラズ
マは一８０℃に冷凍され、ついで４℃で７５分間溶解化
され、その後、０℃で７分間、７０００Ｇで遠心分離さ
れる。得られたクライオ沈澱物は３７℃２〜５分間で溶
解化され、その後、クライオ沈澱物ノ；ッグ（ｗｒｙ・
−ｐｒ＠ａ１．ｐｔａｔ＠ｂａｇ ） ”ｉ ７？：
’） ２．５ ｍｌのヘパリン−食塩緩衝液（ｐＨ７，
２）が加えられる。ついで、溶解化され、プールされた
クライオ沈澱物は冷却Ｌｌ水浴中で０℃、２時間熟成さ
れる。クライオ沈澱物プール中に存在する第鴇因子は、
この段階で低温不溶性グロブリンと共に不溶町し、つい
で、不溶性沈澱の金蓋が遠心分＠ （７０００Ｇ、７分
、０℃）によって、第１因子の乏しい濠面層から分離さ
れる。表面層を排出した後、低温不溶性の沈＋）１ｍ、
０℃で最初のバッグ当た９２〜４１１Ｌｌの低温の食塩
−ヘノ臂りン溶液を用いて洗浄され、排出され、そして
最初の低温沈澱バッグ尚た夛２〜１０−の、好ましくは
２ｄの食塩−ヘノ臂リン溶液を用いて３７℃で５分間溶
解化される。２２℃でさらに遠心分＠ （８７００Ｇ、
６分）が実施され、表園層中の第橿因子に冨んだ溶液が
沈原屑から分離される。
じりものでもあるが、上記の米−特許第４，２８９，５
９１号明細書に記載されたようなりエン酸塩−食塩−へ
ノリンＩＩｋＩＩｉ液も同様に用いることができる。し
かしながら、クエン酸塩−食塩−ヘノリン緩衝液を使用
するとｇｖｍ因子の祝意が低下し、それ故、この緩衝液
が食塩−ヘパリン溶液に比べて明らかに集用的でない３
゜本発明の方法について東に具体的に記すれば次のよう
になる。８単位へバリン／−の新鮮なヘノ臂リンプラズ
マは一８０℃に冷凍され、ついで４℃で７５分間溶解化
され、その後、０℃で７分間、７０００Ｇで遠心分離さ
れる。得られたクライオ沈澱物は３７℃２〜５分間で溶
解化され、その後、クライオ沈澱物ノ；ッグ（ｗｒｙ・
−ｐｒ＠ａ１．ｐｔａｔ＠ｂａｇ ） ”ｉ ７？：
’） ２．５ ｍｌのヘパリン−食塩緩衝液（ｐＨ７，
２）が加えられる。ついで、溶解化され、プールされた
クライオ沈澱物は冷却Ｌｌ水浴中で０℃、２時間熟成さ
れる。クライオ沈澱物プール中に存在する第鴇因子は、
この段階で低温不溶性グロブリンと共に不溶町し、つい
で、不溶性沈澱の金蓋が遠心分＠ （７０００Ｇ、７分
、０℃）によって、第１因子の乏しい濠面層から分離さ
れる。表面層を排出した後、低温不溶性の沈＋）１ｍ、
０℃で最初のバッグ当た９２〜４１１Ｌｌの低温の食塩
−ヘノ臂りン溶液を用いて洗浄され、排出され、そして
最初の低温沈澱バッグ尚た夛２〜１０−の、好ましくは
２ｄの食塩−ヘノ臂リン溶液を用いて３７℃で５分間溶
解化される。２２℃でさらに遠心分＠ （８７００Ｇ、
６分）が実施され、表園層中の第橿因子に冨んだ溶液が
沈原屑から分離される。
以下の工程シートは本発明を説明する次めのものであり
、上記したような手順の特定の工程についての説＃４を
助けるフローシートである。
、上記したような手順の特定の工程についての説＃４を
助けるフローシートである。
（以下余白）
以下の表からも明らかなように、本発明の新しい方法を
用いることにより、初期の第鴇因子のｓｏｂ以上の活性
度で最初の血漿ＩＩ４たフ８００単位←ｕｎｌｔｍ ）
の最終収量で、高純度かつ高収率で第鴇因子を得ること
ができる。
用いることにより、初期の第鴇因子のｓｏｂ以上の活性
度で最初の血漿ＩＩ４たフ８００単位←ｕｎｌｔｍ ）
の最終収量で、高純度かつ高収率で第鴇因子を得ること
ができる。
すでに述べた特詐明細書においては、最終生成物は、し
ばしば中間純屓の＃Ｉｇｖｌ因子であり、一方、本性に
よれば常に高純度の生成物が得られる。これは非常に有
利である。と−うのは、；−ン（Ｃ５ｈｎ ）の分別法
において用−られるようなエタノールおよび塩のような
化学的沈澱剤あるいは、硫酸アンモニウム、示すエチレ
ングリコール、高分子電解質のような他の沈澱剤を必要
とせず、さらに、ｐＨの調整も必要としない。
ばしば中間純屓の＃Ｉｇｖｌ因子であり、一方、本性に
よれば常に高純度の生成物が得られる。これは非常に有
利である。と−うのは、；−ン（Ｃ５ｈｎ ）の分別法
において用−られるようなエタノールおよび塩のような
化学的沈澱剤あるいは、硫酸アンモニウム、示すエチレ
ングリコール、高分子電解質のような他の沈澱剤を必要
とせず、さらに、ｐＨの調整も必要としない。
得られた智質は凍結真空乾燥することができ、あるいは
貯蔵や注入のために調製することもできる。
貯蔵や注入のために調製することもできる。
（以下余白）
本方法は血液バッグ（ｂｌｅｅｄ ｂａｇ）中で行なう
ことができる。即ち、希釈剤を必要としない。
ことができる。即ち、希釈剤を必要としない。
また、十分なへＡ リンが全工程を通じて保持されると
思われる。このように、本性蝶小さな採血センターでも
行なうことができる。
思われる。このように、本性蝶小さな採血センターでも
行なうことができる。
本発明により得られる効果を要約すれば次の通りである
。
。
（１）従来の蛋白質沈澱剤やｐＨｗｉｌｌ整の必要がな
い。
い。
（２）工程が単純で、必要な技術も小さな血液銀行の能
力範囲のものである。′ｔた、大きなスケールの分別工
程にも容易に適用できる。
力範囲のものである。′ｔた、大きなスケールの分別工
程にも容易に適用できる。
（Ｓ） Ｏ℃での熟成に先立っていくつかのノ９ッグ
をプールすることが好ましいが、工程は完全に最初のク
ライオ沈澱物バッグの中で行なうことができる。
をプールすることが好ましいが、工程は完全に最初のク
ライオ沈澱物バッグの中で行なうことができる。
（４） ＃Ｐ！生成物は直ちに投与することができ、
また、その後の投与のために凍結乾燥あるいは冷凍する
こともできる。これはバッグ自体の中ですることもでき
、ま次、必要ならば、適当な他のＶ器に無菌状態で移し
換えること（５） 本方法は早く、一般的に、溶解化
し九血漿りライオ沈澱吻についての０℃での熟成に２時
間あれば足、す、その後の遠心分離工程は短かい時間で
すむ。
また、その後の投与のために凍結乾燥あるいは冷凍する
こともできる。これはバッグ自体の中ですることもでき
、ま次、必要ならば、適当な他のＶ器に無菌状態で移し
換えること（５） 本方法は早く、一般的に、溶解化
し九血漿りライオ沈澱吻についての０℃での熟成に２時
間あれば足、す、その後の遠心分離工程は短かい時間で
すむ。
（６） 本方法によれば、生理学的カルシラムレ４ル
と少しアルカリ性のｐＨとすることにより分別中の路程
因子は安定化し、第鴇因子凝結活性度は維持される。
と少しアルカリ性のｐＨとすることにより分別中の路程
因子は安定化し、第鴇因子凝結活性度は維持される。
（７）所望により最終生成物は従来の手法によシ、さら
に分別することができる。
に分別することができる。
より詳しくは、最終生成物は高収率、高純度の第鴇因子
濃縮物であり、容積ｌ〇−嶺たり２５０単位の第鴇因子
、２ｓｑ／ゴの蛋白質含量、ｓ、ｔｑ／ＷＬｌのフイブ
リノゲン、１０単位／―のヘパリンレベルである。全体
の回収量は最初の血漿１１尚た９７００〜ＳＯＯ単位で
ある。最終生成物は高収率かつ高純度であるので、血液
銀行は血友病者の九めに十分な量の第鴇因子濃縮物を製
造することができる。本発明の方法を用いることにより
、５０００〜５ｏｏｏの献血に対して１００万単位の第
鴇因子を提供することがで龜る。
濃縮物であり、容積ｌ〇−嶺たり２５０単位の第鴇因子
、２ｓｑ／ゴの蛋白質含量、ｓ、ｔｑ／ＷＬｌのフイブ
リノゲン、１０単位／―のヘパリンレベルである。全体
の回収量は最初の血漿１１尚た９７００〜ＳＯＯ単位で
ある。最終生成物は高収率かつ高純度であるので、血液
銀行は血友病者の九めに十分な量の第鴇因子濃縮物を製
造することができる。本発明の方法を用いることにより
、５０００〜５ｏｏｏの献血に対して１００万単位の第
鴇因子を提供することがで龜る。
特詐出願人 ゲイル アン ロック
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 １、 全血液が直接にヘノ臂リン、ナトリウムへ）臂リ
ンまたはこれらの混合１から泗ばれる抗凝結剤中に新鮮
に集められ、また、ヘパリンが血液Ｉ Ｗｔｌ＆＊６６
〜８単位あるいは血液１ｙｉｌあ危り３．５〜４単位用
いられる、全血液ま几は血漿あるーは血漿アラクショ／
からの抗血友性第■因子の回収方法であって、最初に血
漿と赤血球を分離し及び／又はヘパリフ処理した血漿を
冷凍し、この血漿を湊解化し、この血漿からクライオ沈
澱物を分離しくのクライオ沈澱物を溶解化し、この溶解
化したクライオ沈澱物にヘパリン−食塩溶液を加え、こ
の溶解化したクライオ沈澱物を約０〜４℃の温度で少な
くとも２時間熟成し、これにより、低温不溶性グｑプリ
ンを沈澱可能なヘノリンを用いて、クライオ沈澱−中に
存在する菖■因子を分離せしめて低温不溶性グロブリン
をも含む第■因子に富んだ沈澱物を得、この第■因子に
富んだ沈澱物を分離し、ついでこれから第■因子を分離
することを特徴とする抗血友性第■因子の回収方法。 λ 全血液が血漿１１機たり約８単位を用いてヘパリン
中に新鮮に集められる特許請求の範囲第１項に記載の方
法。 λ 実質的にカルシ９ムキレート化抗凝結剤が存在せず
、抗凝結剤が実質的にヘパリン、ナトリウムヘノ看リン
ｔｔはこれらの混合物からなり、血液搬出法を用いて血
漿が新鮮に集められた全血液から得られる特許請求の範
ｖ！Ａ餓１項ｔた抹第２項に記載の方法。
Applications Claiming Priority (2)
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|---|---|---|---|
| CA387063 | 1981-10-01 | ||
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Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS5867629A true JPS5867629A (ja) | 1983-04-22 |
| JPS6029686B2 JPS6029686B2 (ja) | 1985-07-12 |
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| JP (1) | JPS6029686B2 (ja) |
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Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
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-
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- 1982-07-28 EP EP82303985A patent/EP0077119A3/en not_active Withdrawn
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| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
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| Publication number | Publication date |
|---|---|
| EP0077119A2 (en) | 1983-04-20 |
| EP0077119A3 (en) | 1985-01-16 |
| US4383989A (en) | 1983-05-17 |
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| JPS6029686B2 (ja) | 1985-07-12 |
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