JPS5883260A - 高速液体クロマトグラフィー用充填剤 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 本発明は液体クロマトグラフィー用充填剤に関する。

臨床検査技術の進歩に伴ない、血清や尿のような生体液
中の低分子量区分を分離し、測定することが何なわれて
お〉、例えばカテコールアミン、グアニジノ化合物、胆
汁酸、ビタミン、ステロイドホル毫ン、！１−等の分画
が行なわれているｅ従来はこの低分子量成分を分離する
方法として、トリクロル酢酸、過塩素酸等を１１１いて
高分子量の蛋白貧を除き、更に夾雑物の影響を除くため
に゛適当な１０処理を行なった徒、高速液体クロマトグ
ラブイーで分離、定量を行なうことが多い、しかし高分
子量の蛋白質を除去する操作を省略して、そのま＼血清
あるいは尿等の生体液を高速液体りａマドグラフィー用
カラムに導入すると幅広い蛋白質のピークが低分子量成
分のビークＫｌｉなり、低分子量成分の分離定量ができ
なくなつ九り、充填剤に蛋白質が不可逆吸着して充填剤
の寿命が短かくなり、又低分子量成分の分離挙動が変っ
たりする。

このため従来の液体りａマドグラフィーでは除蛋白操作
は、省略できないものとされてきた。しかしながら除蛋
白操作ＫＦｉ遠心分臘を２０分以上。

２回繰返す必要があり、操作が繁雑で時間がか＼りすぎ
る欠点があった。　１ｊＫＩＩ＆蛋白操作によに。

蛋白１Ｒｔ−沈殿として取除くＷｉＫ、低分子量成分が
その沈殿内に取込まれ１回収本が低下しやすい欠点があ
った。特に低分子量成分は極めて微量にしか含まれてい
ないことが多く、除蛋白操作によって回収率が低下し、
検出そのものができなくなつ九り測定精度が悪くなった
シしていた。

本発明は、か＼る除蛋白操作を省略し、しかも低分子量
成分の分離定量ができる液体クロマトグラフィー用充填
剤を提供することを目的とする。

本発明の婁旨は、疎水性単量体と親水性単量体との共重
合体よシなる多孔性粒子であって、排除眼界値（ＰＬ値
：　Ｐｅｒｍｅａｔｉｏｎ　Ｌ−ロ）がｚ、ｏｏｏ〜６
０、０００の範囲内に存するものであることを特徴とす
る。液体クロマトグラフィー弔充填剤に存する。

次に本発明液体クロマトグラフィー弔充填剤に一、：）
　イテｌ　Ｋ　＄Ｐｌｉ　Ｋ　Ｉｔ明する。

本発明における液体クロマトグラフィー弔充填剤は、疎
水性単量体と親水性単量体との共重合体よりなる。疎水
性単量体が共重合成分とされることＶＣよって、液体ク
ロマトグツフィーに際し疎水性部分を有する低分子物質
に対する分離能が付与されることになり、又親水性単量
体が共重合成分とされることＫよって、水系溶離液を用
い九分離が０Ｉ屹となる。疎水性単量体としては、例え
ばスチレン、エチルスチレン、ジビニルベンゼン、ビニ
ルトルエン、ビニルナ７タレン、Ｎ−ビニルカルバゾー
ル等が使用される。

疎水性単量体としては上記のようなフェニル基を有する
ビニル系単量体がｑ遍である。これは゛カテコールアミ
ン、フェニルアラニン、チロシン等の芳香族アミノ酸等
の芳香族系水溶性物質を分離するために＃−１、芳香族
系水溶性物質のフェニル基との相互作用を有することが
叶ましいからである。

親水性単量体としては、＃えはテトラデシルグリコール
ジメタクリレート、ジエチレングリコールジメタクリレ
ート、ポリエチレングリコールジ（メタ）アクリレート
、ボリプロビレングリコールジ（メタ）アクリレート、
β−ハイドロキエチルメタアクリレート、ｆＰトツメチ
ロールグロ／唱ン（モノ、ジ、トリ）アクリレート、（
メタ）アクリルアミド、アルコキシメチル（メタ）アク
リルアミド、　Ｎ　、　Ｎ’−ジメチルアミノエチル（
メタ）アクリレートＱＦが使用される。

共重合体における疎水性単量体の共重合成分量が、４０
−９５＠＠％であって、親水性の単量体の共電合成分量
は６Ｇ−ｍｉｌｌｉ％とされるのが好ましい、疎水性単
量体の共重合成分量がｅｓｔ量ｔよりも多量であって親
水性単量体の共重合成分−が１１％よシも少量であると
、共重合体は水に対する濡れが悪くなり、水系溶離液か
らの生体液中の低分子量成分の分離がし難くなる。又、
疎水性単量体の共重合成分量が４０重量鴨よりも少量で
あって製水性単量体の共重合成分量が６００Ｉ屹よにも
多量になると、共重合体は疎水性部分を有する低分量成
分に対する分離能か低いものとなる。

父、共重合体の溶解度パラメーター＃’ｊ＆４以上のも
のが使用されるのがｑましいが、これは共重合体の水系
Ｓ＊液中での濡れをよくするためである。共重合体の溶
解度パラメーターが８．４よりも小さくなると、共電合
体ｄ水に対する濡れが悪くなり、水系溶離液からの生体
液中の低分子量成分の分離に適さないものとなる。

溶解度パラメーター（ＳＰ値：　Ｓｏｌｕｂｉｌｉｔｙ
Ｐａｒａｍｅｔｅｒ　）は、親水性の１度を表わす数値
でありで、密度（Ｐ）、分子量（Ｍ）、凝集エネルギ一
定数（Ｇ）から次の弐によって求められる。

Ｓ　Ｐ＝ＦΣＧ／Ｍ 例えば親水性単量体が次式、 ＣＨ，ＯＯＣＨ。

で表わされる物質で、鳳＝１４の場合はテトラデシルグ
リコールジメタクリレートであるが、溶解度、（ラメ−
クーが１６．９であり、疎水性単量体がジビニルベンゼ
ンの場合ｆｌｌ溶解度／クラメーター８０であシ、共重
合体成分としてテトラデシルグリコールジメタクリレー
トを５．０重量層含有する共重合体の溶解度／曵うメー
ターがＬ４となり、水に濡れる程度の親木性と生体液中
の低分子量成分の分離に充分なジビニルベンゼンを含有
するものとなる。

本発明液体クロマトグラフィー用充填剤は、多孔性の粒
子であり、粒子径はＳ−４０ｐｘｘの範囲に存するもの
とされることＫより、液体クロマトグラフィー用充填剤
としてｑ適なものと々る０粒子ａ、水性ｍ濁重合により
共重合体を得たものを更に必＃に応じ分級することによ
りなしうる。又細孔は粒子径により異なるが一般に粒子
の内１１に向って５Ｏ−Ｘ２０００λの範囲内に存する
のが好ましい。

粒子内の細孔容量は粒子容量の暴〜ＳＯ％を占めるもの
とされるのが誓適である。この場合には粒子内１ｉｉｉ
積が増加し、生体液中の低分子量成分と共重合体との疎
水性相互作用が大きくなり、その結果低分子緻成分の分
離がよくなる。しかしながら細孔容量が粒子容量のｇｏ
％よりも大きくなると、粒子が軟かくな砂すぎて＊ａ、
収縮を生ずるおそれがあり、又Ｓ％よにも少なくなると
低分子を成分と共重合体との疎水性相互作用が低下し。

低分子量成分の分離が充分にできないものとなりやすい
。

粒子内の細孔容量の測定は、水銀圧λ法を適用して行な
うことができ、ディラドメーター中の試料に真空状態で
水銀を含浸しえのち、圧力容器中で圧力をかけ鍼糾中へ
の水銀の侵入による体積減少を測定して求めるこ七がで
き、この細孔容量を粒子容量に対する割合で表示する。

粒子の細孔容量の調整は、水性懸濁重合によに充填剤粒
子を得るに際し、有機溶媒の種類１組合せ、使用量＃＃
釡変えることによりなしうる。

未発明における液体りａマトグクフイー用充填剤は、排
除限界値（ＰＬ値）がｚｏｏｏ　〜ｓｏ、。

００の範囲内に存するものとされる。

排除限界値とは、標準試料としてポリスチレンのテトラ
ヒドロフラン溶液を用い、溶離液としてテトラヒドラ７
ランを使用し、液体クロマトグツフィーＫかけた際Ｋ、
充填剤粒子の細孔に込抄込まないものとなる前記標準試
料の分子量をいう。

そしてこの排除限界値は、換言すれば、充填剤粒子が有
する細孔の大きさを標準試料となるポリスチレンの分子
量の大きさに換算して表現したものである。

排除限界値の測定ＫＦｉ、分子量がわかっておりしかも
種々相違するポリスチレンのテトラヒドロフラン溶液を
用い、溶離液としてテトラヒドロフランを使用し、液体
クロマトグラフィーにかけて充填剤粒子の細孔に保持さ
れないものとなるポリスチレンの分子量を求めればよい
、充填剤の排除限界値がλ０００〜・１１，０００の範
囲内に存するものとされるのけ、生体液中の蛋白質成分
は、アルブミン（分子量６．　Ｓ万）１着蛋白（分子量
６万〜３０万）、リボ蛋白（分子量３０万〜３００万）
、補体（分子量７万〜４０万）、免疫グロブリン（分子
１ｔｏ万〜１０（１万）、アイプリノーダン（分子１ｌ
Ｉ３４万）等であり、これらは充填剤の排除限界値を６
万よりも穴壽くすることＫよって粒子の細孔に入り込ま
ないものとすることができ、又低分子１ｉｔｉ、分はカ
テコールアミン（分子１ｋ　１５０）、グアニジノ化合
物（分子量ｔｏｏ−ｗｏｏ）、アミノ酸（分子量ｉｏｏ
−ｗｏｏ）、ビタミン（分１ｍ１ｍ！ｌ−一■ととＫよ
って粒子の細孔に保持されるものとすることができるか
らである。排除限界値がｚ、　ｏ　ｏ　ｏ〜ａ　ｏ、ｏ
　ｏ　ｏの範囲内に存するものとされることによって、
充填剤の粒子の孔に蛋白質は保持されず、細孔外を通っ
て早く溶出し、低分子Ｉｉ酸成分細孔により保持される
ため蛋白質よりも遅れて溶出される。又低分子量成分間
では疎水性の違いにより分離がなされる。

本発明液体クロマトグラフィー用充填剤は、疎水性単量
体と親木性単量体を懸濁重合させることにより得られる
が、水性懸濁重合を行なわせるＫは、疎水性単量体と親
木性単量体の混合物を溶解するが、共重合体を溶解しな
い有機溶媒の存在Ｆに共重合反応を行なわせる。上記有
機溶媒としては例えばトルエン、キシレン、ジエチルベ
ンゼン。

ドデシにベンゼン等の芳香族炭化水嵩類、ヘキサン、ヘ
ゲタン、オクタン、デカン等の飽和炭化水素類、インア
ミルアルコール、ヘキシルアルコール、オクチルアルコ
ール等のアルコール類がアケられる。

有機溶媒により前記混合物は均一に溶解されて、前記混
合物が水性ｌＩ！ｆＩ４菖合されるので、＃ｌられた電
合体粒子中に有機溶媒が分散して存在しており、直合終
了後上記有機嬉厳を粒子中から取り除くことにより多孔
性で球状の共重合体が得られる。

又水性ａｍ重合は、九とえば前記有機溶媒ｋ。

前記混合物及びラジカル発生触媒を溶解し、得られた溶
液をポリビニルアルコール、リン酸カルシウム等の懸濁
重合安定剤の分散され九水相に添加し攪拌しながら５ｏ
−ｘｏ６ｔ：に加熱することＫより行なわれる。

Ｅ記うジカル発生触厳は反応聞始削としてラジカルを発
生する触媒であるが、該触媒としてはたとえばベンゾイ
ル／４−オキナイド、クメンノー−オキサイド等の有機
過酸化物、過酸化水素、過硫酸カリ９ム、過硫−アンモ
ニウム等の無機過酸化物、アゾビスイソブチロニトリル
、アゾビスイソブチロアミド等のアゾ化合物など公知の
任意のラジカル発生触媒がｌｌ１ｊｌ！される。

上記本性ＪＩＩＩ１重合によって重合された共重合体粒
子は加熱等Ｋｊシ乾燥され粒子中の有機溶媒が放出され
るととＫよって多孔性で球状の共重合体となされ、液体
クロマトグラフィー用光填剤となされるのである。

排除限界値の調整を行なうには、水性ＩＩｌ陶菫合によ
り疎水性単量体と親木性単量体を共重合させるに際し、
共重合体の溶解度／（ラメ−ターと近似する溶解度パラ
メーターの有機溶媒を使用することによりなしうる。ｎ
、ｔはテトラデシルエチレングリコールジメタクリレー
トの共重合成分量が５．０重量％であり、又ジビニルベ
ンゼンの共重合成分量が９ｓ、、０１１ｍ％である共重
合体の溶解度）囃りメーターｉｊ　＠、　４であるが、
ここで有機溶媒として溶解度バクメーターがＩＬ９であ
るトルエンを選択して水性懸濁重合を行なうと、排除限
界値がｔ　ｏ、ｏ　ｏ　。

の充填剤粒子を得ることができる。

本発明液体クロマトグラフィー用充填剤によれば、血清
や尿等の生体液中のカテコールアミン。

グアニジノ化合物１ｍ汁酸、ビタミン、ステロイドホル
モン、薬物等の低分子量酸分を蛋白質等の高分子成分か
ら分離し定量する性能がすぐれており、除蛋白操作を省
略するととにより掃作時開、一定時間を短縮することが
できる。

次に本発明の実施例を記す。

貞總何１ 冷却器、員拌機、温度肚および滴下ロートの設置された
２１セ／鳴ラブルフラスコに４１量％のポリビニルアル
コール水溶液４０Ｇ−とテトラデシルエチレングリコー
ルジメタアクリレート１０＃、ジビニルベンゼン＠Ｏｆ
、）ルエン１００＃およびベンゾイルパーオキナイドＬ
ｌｌｉｔよシなる混合液を供給しえ１次Ｋ　４　Ｇ　Ｏ
ｆｐｍの攪拌適度で攪拌しながら５ｏ１６（昇温し１０
時闇電合反応を行って冷却した。冷却後重合生成物を母
波分離し喪黴、熱水及びアセトンで洗浄して粒子径が１
−ｘｓｐ厘の多孔性で球状の共重合体を得え。

得られ九多孔性で球状の共重合体のうち、微粒子及び組
粒子を取Ｗｋｈて粒子長８〜１０μ譚の範囲のものを使
用し友、この共重合体の共重合成分量はテトラデシルエ
チレングリコールジメタアクリレートが参〇０重量％ｈ
シ、ジビニルベンゼンの共直合成分量が１０重量鳴であ
った。

父、共重合体の溶解度パラメーターｉｊ　８．１１であ
り、粒子内の細孔容量は粒子容量の３５％を占めるもの
であった。

かくして得られた充填剤４０−をｌｏｏｌＩＩｇのテト
ラヒドロフラン／パークロルエチレン（１／ｌ　）混合
液に分散し、ステンレスカラム（直径７．９■、長さ５
０　ｅｘ　）　Ｋ高圧定流量ポンプによりテトラヒドロ
７ラン／パークロルエチレン（１／１）の混合液で１５
　ｄ　／分の速度で圧送して充填しマドグツ７に接続し
、溶離液としてテトラヒドロ７クンを用い、Ｉｌ準試料
としてポリスチレンを使用して排除ｉｌｌｌｌ上値め九
結果１０．００（１であった。

父、水／メタノール（１／ｌ）ｓ合液に分散し。

ステンレスカラム（直ａＳ■、長さ２５　ｃｍａ　）　
Ｋ高圧定流量ポンプにより水／メタノール（１／１）の
混合液で２５　ｍｌ　／分の適度で圧送して充填した。

得られたカラムを高速液体クロマトグラブに接続し、溶
離液としてＱ、１Ｍリン酸−カリクム水溶液ＣｐＨｘ、
ｏ＞／メチルアルコール（８７２）混合液を用い、試料
として標準力テコ−１１１５２３種（ノルアドレナリン
、アトルナリン、ドーノ曵ミン）を添加し九標準血清を
用いて分離を行なった。その結果を第１図に示す。Ｐ。

は血清蛋白、Ｐ、はカテコールアミンの吸光度ピークで
あり、血清蛋白は単一ピークとして溶出され、その後に
３＠のカテコールアミンがＭ−位１１に＠出された。＊
＊図では分子量分割能のみで蛋白質とカテコールアミン
が分離しているため、蛋白質Ｆ！排除阪界値の位置（Ｖ
ｏ）ＩＣ溶出され、又３種のカテコールアミンは分子量
が殆んど同一であるので、同一位置に溶出されている。

更に低分子量成分である８種のカテコールアミンを夫々
分離するため１に、溶離液として０１Ｍリン酸−カリク
ム水溶液（ＰＨｍ、ｏ）を使用して分離した。その結果
１１２図に示すように血清蛋白（Ｐｍ　）は排除限界値
の位置（Ｖ・）Ｋ＃１出され、ノルアドレナリン（Ｐａ
　）、アドレナリン（Ｐｉ）、ドーパミン（Ｐａ）Ｆｉ
逆相分配によって夫々分かれて溶出された。

実施例２ ジビニルベンゼン８０＃、β−ハイドロキシエチルメタ
アクリレ−）！Ｏ＃、）ルエン１００ｔ、ベンゾイル／
（−オキサイ）Ｌｓｔよりなる温合液を使用し、実施例
１と同様にして水性懸濁重合を行ない多孔性で球状の共
重合体を得た。

得られ九多孔性で球状の共重合体のうち、微粒子及び粗
粒子を除き１粒子ｌ１６〜９μ厘のものを使用した。

この共重合体の共直合区分量はジビニルベンゼンが８０
重鰍鴨であ〉、β−ハイドロキシエチルメタアクリレー
トが！Ｏ重量嘔であった。

又、共重合体の溶解度／１ラメ−ターはａＳであり、粒
子内の細孔容量は粒子容量の２４％を占めるものであっ
た。

かくして得られた充填剤を水／１セトニトリル（１／３
）混合１［３０ｄＫ分散させ、ステンレスカラム（直径
５■、長さ２　Ｓ　ｔｘ　）に高圧定流量ポンプにより
、水／１セトニトリル（７７ｓ）Ｓ合献を２．５　ｍ　
／分の適度で圧送して充填した。

得られたカラムを実施例Ｉにおいて使用し九高速液体り
ロマトグテフに接続し、実施例１と同様にして排除限界
値を求め九とζろ２へ０００であった。を九溶離液とし
て水／アセトニトリル（７ム１混合液を喝い、試料とし
てプール血清に抗てんかん剤であるフエノパルビクール
のメタノール溶液を添加したものを用いて分離を行なっ
た。その結果を第３ＷＡＫ示すｓＰｆは血清蛋白の吸光
度ピークでｈ）、排除限界値の位置（Ｖｏ）に溶出した
。Ｐ・はフェノパルビクールの吸光度ピークであシ、血
清蛋白とは完全に分離した。

実施例３ ジビニルベンゼン９０＃、アクリルアＥＦＩＯｔ、トル
エン１００＃、ペンゾイルパーオキデイドＬｓ＃よりな
る温合液を使用し、実施例１と同様にして水性懸濁重合
を行＆−多孔性で球状の共重合体を得た。

得られた多孔性で球状の共重合体のうち、微粒子及び粗
粒子を除き、粒子径１０〜１３μ鱈のものを使用した。

この共重合体の共重合成分量はりビニルベンゼンが９０
重量鴨であ＃）、アクリルアミドが１０重量へであった
。又共重合体の溶解度ノ嘴ラメ−ターけＬ７であり、粒
子内の細孔容量は粒子容量の１６％を占めるもので６つ
九。

かくして得られた充填剤を水／メタノール（１／ｌ）の
混合液に分散させ、ステンレスカラム（電機５■、長さ
２５　ｅｘ　）　Ｋ　ｊｉ圧定連流ポンプにより、水／
メタノール（１／ｌ）の滉壺濠をｌ　ｍ　ｍｌ　／分の
速度で圧送して充填しえ。

得られた充填剤の排除限界値を夷ｔＩＩＡ例１と同様に
して求めたと仁ろス亀ＯＯＯで多つ九。

又実施例１と同じ高速液体クロマトグラフＫかけ、試料
としてブール血清Ｋ１１ｌ準胆汁酸（クルンダオキシコ
ール酸、コール酸、ケノデオキシコール酸、リトコール
Ｉｌりのエタノール溶液を添加したものを用いて分離を
行ない、蛍光光度計で検出した。七の結果を第４図に示
す。

Ｐ−は血清蛋白の蛍光度ピークであり、排除限界値の位
置（Ｖｏ）ＫｔＪｌ出し九ａ　ＰＩＯはクルソダオキシ
コール陵、Ｐｌｔ　ｕコール酸、Ｐｕｔｊケ／ダオキシ
コール酸、Ｐｌｌはりトコール酸の蛍光度ピークであり
、４種の胆汁酸はそれぞれ分離した。

比較例１ 実施例１においてトルエン１０　Ｏｔ　Ｏ代ｔ）　Ｋ　
１１−オクチルアルコールを１００＃を使用した以外は
実施例１と崗様にして水性懸濁重合を行ない、多孔性で
球状の共重合体を得た。

得られた多孔性で球状の共重合体のうち、微粒子＆び粗
粒子を除き、粒子径８〜１ＯｐＨ１のものを使用し良。

コノ共重合体の共重合成分量はテトラデシルエチレング
リコールジメタ１クリレートが１０３１量１であシ、ジ
ビニルベンゼンの共電合成分量が９０重量鳴であり九、
又共重合体の溶解度−噛テメーターｄＬ９で番り、粒子
内の細孔容量は粒子容量の３２％を占めるものであった
。

次いでこの光ＪＸ剤を実施例１と同様忙してステンレス
カラムに充填し、実施例１と同様にして＃除限界値を求
めたところ４ｏへ０００であった。

更に実施例１と同様にしてｌＩ準カテコールアミンを添
加し九標準血清を用いて分離を行なった。

その結果を第５図に示す＠Ｐ１４は血清蛋白−ＰＳＩは
ツルアＦレナリン、Ｐ１６はアドレナリン、ＰｌｌＦｉ
Ｆ−Δミンの吸光度ピークであるがカテコールアミンは
幅広いピークと重なり定量できなかツｆｒニー、コノ幅
広ｒヒークＳ分を分取してアセテート膜で電気泳動分析
を行なった結果、血清蛋白であるｒ−グロブリンが検出
されえ。

【図面の簡単な説明】

第１図は実施例１におけるカテコールアミン添加ｔＩＡ
＃血清のクロマトグラム、餡２図は実施例１において、
カテコールアミンを分離したクロマトグラム、ＩＩ３図
は実施例２における抗てんかん剤添加プール血清のクロ
マトグラム、ＩＩａ図Ｆｉ夷譲Ｎｓにおける標準胆汁酸
添加プール血清のクロマトグラム、第５凶は比較ｆｌＩ
４１におけるカテフールアミン添加株準血清のクロマト
グラムである。 特許出願人 積水化学工業株式会社 代量者藤沼基利 才　１ＥＪ ｉ１Ｅ神４１ 才　２　店 帰行）量 才３因 ｆ手　ｍ ｒ嗜 帰５Ｘ−ｔ。

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １、疎水性単量体と親水性単量体との共重合体よりなる
   多孔性粒子であって、排除限界値（ＰＬ値）が２．００
   ０〜６へ０００の範囲内に存するものであることを特徴
   とする。液体クロマトグラフィー用充填剤 ２共重合体における疎水性単量体の共重合成分量が４０
   〜９５重置１であり、親水性単量体の共重合成分量が６
   ０〜５重量鴨である、特許請求の範１１！１１項記旗の
   液体クロ臂トゲラフイー用充填剤 親疎水性単量体が、フェニル基を有するビニル系単量体
   である、特許請求の範囲第１項又Ｆｉ第２項記載の液体
   クロ１トゲラフイー用充填削４、共重合体の溶解度バク
   メーター（ＳＰ値）が８．４以上である。特ＩＩＦ請求
   の範囲１１１項から第３項のいずれか記載の液体クロマ
   トグツフィー出光Ａ１１ｌ１ ５、粒子径がＳ〜４０ｐ簿である、特許請求の範囲１１
   １項から１１ｇ４項のいずれか記載の液体クロ臂トゲラ
   フイー用充填剤 ６、粒子内の細孔容量が、粒子容量の５〜５０％を占め
   るものでちる、特許請求の範囲第１項から１１５項のい
   ずれか記載の液体クロマトグラフィー用充填剤