JPS5883264A - 診断用抗原の製法 - Google Patents
診断用抗原の製法Info
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- JPS5883264A JPS5883264A JP56181023A JP18102381A JPS5883264A JP S5883264 A JPS5883264 A JP S5883264A JP 56181023 A JP56181023 A JP 56181023A JP 18102381 A JP18102381 A JP 18102381A JP S5883264 A JPS5883264 A JP S5883264A
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- 102000036639 antigens Human genes 0.000 title claims abstract 3
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 title claims abstract 3
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Classifications
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/531—Production of immunochemical test materials
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- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
本発明は、家禽類特Ｋｌｌの産卵低下症候群（Ｒｇｇ
Ｄｒｏｐ ８ｙｎｄｒｏｍｅ −１９７６、以下ｒｇＤ
ｓ −７６Ｊと略称する）の血清学的診断の一つである
ゲル内沈降反応の抗原の製造方法に関する。
Ｄｒｏｐ ８ｙｎｄｒｏｍｅ −１９７６、以下ｒｇＤ
ｓ −７６Ｊと略称する）の血清学的診断の一つである
ゲル内沈降反応の抗原の製造方法に関する。
ｇＤｓ −７６はＥＤＳ −７６ウイルスの感染により
生ずる伝染病で、１９７６年ヨーロッパで初発して以来
、徐々に世界各国に広がりつつある。これに感染した鶏
は異常卵を伴った産卵低下を起こし、その経済的被害は
多大なものになっている。そのため、本疾病の診断が必
要となり、現在では血清診断としてＨＩ反応及びゲル内
沈降反応などが採用されている。とりわけ、ｌル内沈降
反応はその操作の簡便なことから、かなり広〈実施され
ている。しかしながら、そのゲル内沈降反応に使用する
抗原の調製は繁雑で、かなり高度の技術および設備を要
するという難点があった。
生ずる伝染病で、１９７６年ヨーロッパで初発して以来
、徐々に世界各国に広がりつつある。これに感染した鶏
は異常卵を伴った産卵低下を起こし、その経済的被害は
多大なものになっている。そのため、本疾病の診断が必
要となり、現在では血清診断としてＨＩ反応及びゲル内
沈降反応などが採用されている。とりわけ、ｌル内沈降
反応はその操作の簡便なことから、かなり広〈実施され
ている。しかしながら、そのゲル内沈降反応に使用する
抗原の調製は繁雑で、かなり高度の技術および設備を要
するという難点があった。
すなわち従来のｙル内沈降反応に使用する抗原の調製方
法はｒ Ａｖｉａｎ Ｐａｔｈｏｌ、 Ｊ第７巻第６２
９〜６３９頁（１９７８）およびＪ、 Ｂ、 ＭｃＦ＠
ｒｒａｎ氏編ｒ ５ｔｕｄｉｅｓ ｏｎ ｔｈｅムｎｔ
ｉｇ＠ｎｉｃ Ｒｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐｂｅｔｗｅｅ
ｎ ａｎ ｌ５ｏｌａｔｉｏｎ （１２７） ｆｒｏｍ
ｔｈｅ ＥｇｇＤｒｏｐ Ｓｙｎｄｒｏｍｅ １９７
６ ａｎｄ ａ Ｆｏｗｌ ＡｄｅｎｏｖｌｒｕａＪに
も示されているとおり次のようである。
法はｒ Ａｖｉａｎ Ｐａｔｈｏｌ、 Ｊ第７巻第６２
９〜６３９頁（１９７８）およびＪ、 Ｂ、 ＭｃＦ＠
ｒｒａｎ氏編ｒ ５ｔｕｄｉｅｓ ｏｎ ｔｈｅムｎｔ
ｉｇ＠ｎｉｃ Ｒｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐｂｅｔｗｅｅ
ｎ ａｎ ｌ５ｏｌａｔｉｏｎ （１２７） ｆｒｏｍ
ｔｈｅ ＥｇｇＤｒｏｐ Ｓｙｎｄｒｏｍｅ １９７
６ ａｎｄ ａ Ｆｏｗｌ ＡｄｅｎｏｖｌｒｕａＪに
も示されているとおり次のようである。
１） ８ＰＦ発育鶏卵の胎児肝細胞を採取して細胞培
養を行なう。
養を行なう。
２）培ａｍ胞［ｇＤＳ−７６ウイルスを接種してウィル
スを増殖し、その培養液を遠心分離し、セして上清に等
量の飽和硫安液を加えて４℃に一夜放置する。
スを増殖し、その培養液を遠心分離し、セして上清に等
量の飽和硫安液を加えて４℃に一夜放置する。
３）沈澱物を遠心分離して集め、そして原培養液の１４
００量の蒸溜水を加えて沈澱を溶解する。
００量の蒸溜水を加えて沈澱を溶解する。
４）それをリン酸緩衝食塩液で透析する。
５）ａ２％の割合にホルマリンを加えてウィルスを不活
化し、そして力価を４単位Ｋｒ１ｉｌ整して抗原とする
。
化し、そして力価を４単位Ｋｒ１ｉｌ整して抗原とする
。
本発明者らは従来法における難点を解決すべく研究を行
った結果、ゲル内沈降反応に使用する抗原を従来法より
簡単で且つ高度の技術および設備を要せずＫｌｌ！る方
法を見い出した。本発明によるＥＤＦ３−７６診断用抗
原の製造方法を以下に詳細に説明する。
った結果、ゲル内沈降反応に使用する抗原を従来法より
簡単で且つ高度の技術および設備を要せずＫｌｌ！る方
法を見い出した。本発明によるＥＤＦ３−７６診断用抗
原の製造方法を以下に詳細に説明する。
ｇＤｓ抗体フリーのアヒル発育卵１２〜１６日令ＫＥＤ
３−７６ウイルスを接種し、５〜７日関騨卵後発育卵の
漿尿屓を採取し、希釈液を加えプールして漿尿膜細胞を
破壊しそして遠心分離し、て上清ヲ採る。ウィルス接種
部位としては漿尿腔、漿尿膜卵黄嚢内などがあるが、漿
尿腔接種がもつとも好ましい。また、靜卵後、−夜冷蔵
本Ｋ・保存してから晴尿属を採取すると採取が容易であ
る。また、希釈液にはリン酸緩衝液、生理食塩水、蒸溜
水、水などを使用する。また、漿尿膜細胞の破壊にはホ
モジナイズ、凍結融解、超音波処理などが適蟲である。
３−７６ウイルスを接種し、５〜７日関騨卵後発育卵の
漿尿屓を採取し、希釈液を加えプールして漿尿膜細胞を
破壊しそして遠心分離し、て上清ヲ採る。ウィルス接種
部位としては漿尿腔、漿尿膜卵黄嚢内などがあるが、漿
尿腔接種がもつとも好ましい。また、靜卵後、−夜冷蔵
本Ｋ・保存してから晴尿属を採取すると採取が容易であ
る。また、希釈液にはリン酸緩衝液、生理食塩水、蒸溜
水、水などを使用する。また、漿尿膜細胞の破壊にはホ
モジナイズ、凍結融解、超音波処理などが適蟲である。
上記の上溝を抗原として使用してもよいが、［Ｌ２％の
割合にホルマリンを加えて不活化して使用すれば一層安
全に使用できる＠まだ、使用前に抗原力価を最適一度Ｋ
ａ１４整すれば、広範囲の抗体価の血清または卵黄につ
いて診断できる。ここで云う最適濃度とは抗原と抗血清
とをそれぞれＰＢ８で倍々希釈し、それぞれの希釈した
抗原とそれぞれの希釈した抗血清とをすべての組み合わ
せでｙル内沈降反応を行なって希釈した抗血清ともつと
もよく反応する抗原の濃度である。
割合にホルマリンを加えて不活化して使用すれば一層安
全に使用できる＠まだ、使用前に抗原力価を最適一度Ｋ
ａ１４整すれば、広範囲の抗体価の血清または卵黄につ
いて診断できる。ここで云う最適濃度とは抗原と抗血清
とをそれぞれＰＢ８で倍々希釈し、それぞれの希釈した
抗原とそれぞれの希釈した抗血清とをすべての組み合わ
せでｙル内沈降反応を行なって希釈した抗血清ともつと
もよく反応する抗原の濃度である。
本発明の方法で抗原を調製すれば、従来の方法で必要な
組織培養の技術および設備が必要なく、さらに抗原のｖ
４製に必要な手数が省け、そして特別な無菌操作も必要
でないために、ウィルス取扱いの初心者でも簡単に抗原
を調製することが可能である。ｔた、本発明の方法で調
製した抗原を使用してゲル自沈゛降反応を行なった結果
は、従来方法で調製した抗原を使用した結果と実質的に
一致した０本発明方法により得られた診断用抗原を使用
してのゲル内沈降反応の操作は以下のとおりである。
組織培養の技術および設備が必要なく、さらに抗原のｖ
４製に必要な手数が省け、そして特別な無菌操作も必要
でないために、ウィルス取扱いの初心者でも簡単に抗原
を調製することが可能である。ｔた、本発明の方法で調
製した抗原を使用してゲル自沈゛降反応を行なった結果
は、従来方法で調製した抗原を使用した結果と実質的に
一致した０本発明方法により得られた診断用抗原を使用
してのゲル内沈降反応の操作は以下のとおりである。
１）スライドグラスに１〜ｔ２％の寒天溶液オたはアガ
ロース溶液（（１１１６ＮａＮ１含有ＰＢＳでＡｍ）を
寒天の厚さ約１１１１になるように注ぐ。
ロース溶液（（１１１６ＮａＮ１含有ＰＢＳでＡｍ）を
寒天の厚さ約１１１１になるように注ぐ。
２） ’ＩＩＩ大が固ったらパンチャーでバンチし、そ
してパンチした部分の寒天を取り除いて孔を開ける。孔
と孔との距離は約３〜４關とする。
してパンチした部分の寒天を取り除いて孔を開ける。孔
と孔との距離は約３〜４關とする。
６）抗原を一つの孔に入れ、そして被検血清または被検
卵黄をもう一つの孔に入れる。
卵黄をもう一つの孔に入れる。
４）湿潤箱に入れて室温で静置し、経時的にスライドグ
ラスの斜め下方より光源をあてて沈降線を観察する。
ラスの斜め下方より光源をあてて沈降線を観察する。
一層なゲル内沈降反応の術式は「改訂５版細菌学実習提
要」（医科学研究所学友全編）第２５１−２５５頁の記
載を参照されたい。
要」（医科学研究所学友全編）第２５１−２５５頁の記
載を参照されたい。
実施例
ＥＤ８ウイ、Ａ／、（（ＪＡＰ−１株） １０８−ＯＴ
ＣＩＤ５Ｑ／ｍを０．１１の量で１４日令の８ＰＦアヒ
ル種卵１ｏ個の漿尿腔内に接種した。４日間３′１５℃
で靜卵後、１夜４℃の冷蔵庫に移して胎児を殺し、割卵
して漿尿膜を採取した。１０個分の漿尿膜をプールし、
等量のＰＨ１を加え、冷却しながら約３分間ホモジナイ
ズした。その乳剤について凍結融解を３回繰り返して行
ない、そして約５０００ ｒｐｍにおいて１０分関連心
分離してその上清をとった〔試料（１）〕。その上清に
ホルマリン原液を０．２−の割合で加えてウィルスを不
活化した〔試料（２）〕。賦科（１）および（２）をゲ
ル内沈降反応のための抗原とした。試料（りおよび（２
）と従来の方法で製造したゲル内沈降抗原をそれぞれ抗
血清または希釈した抗血清とゲル内沈降反応を行なった
。
ＣＩＤ５Ｑ／ｍを０．１１の量で１４日令の８ＰＦアヒ
ル種卵１ｏ個の漿尿腔内に接種した。４日間３′１５℃
で靜卵後、１夜４℃の冷蔵庫に移して胎児を殺し、割卵
して漿尿膜を採取した。１０個分の漿尿膜をプールし、
等量のＰＨ１を加え、冷却しながら約３分間ホモジナイ
ズした。その乳剤について凍結融解を３回繰り返して行
ない、そして約５０００ ｒｐｍにおいて１０分関連心
分離してその上清をとった〔試料（１）〕。その上清に
ホルマリン原液を０．２−の割合で加えてウィルスを不
活化した〔試料（２）〕。賦科（１）および（２）をゲ
ル内沈降反応のための抗原とした。試料（りおよび（２
）と従来の方法で製造したゲル内沈降抗原をそれぞれ抗
血清または希釈した抗血清とゲル内沈降反応を行なった
。
結果は下表に掲げるとおりであり、本発明方法による抗
原は従来法のそれに充分匹敵した。
原は従来法のそれに充分匹敵した。
Claims (1)
- 産卵低下症候群抗体フリーのアヒル発育卵に産卵低下症
候群ウィルスを接種し、靜卵後発育卵の漿尿膜を採取し
、セして秦尿属細胞を破壊し且つ遠心分離して上清を得
ることを特徴とする、産卵低下症候群の血清抗体又は卵
黄中抗体診断用ゲル内沈降抗原の調製方法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP56181023A JPS5883264A (ja) | 1981-11-13 | 1981-11-13 | 診断用抗原の製法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP56181023A JPS5883264A (ja) | 1981-11-13 | 1981-11-13 | 診断用抗原の製法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS5883264A true JPS5883264A (ja) | 1983-05-19 |
| JPH0132949B2 JPH0132949B2 (ja) | 1989-07-11 |
Family
ID=16093405
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP56181023A Granted JPS5883264A (ja) | 1981-11-13 | 1981-11-13 | 診断用抗原の製法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS5883264A (ja) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN102716476A (zh) * | 2012-05-31 | 2012-10-10 | 郑州后羿制药有限公司 | 一种细胞灭活疫苗和卵黄抗体注射液及其制备方法 |
Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS5631645A (en) * | 1979-08-23 | 1981-03-31 | Fujirebio Inc | Sensitized latex for mumps virus infection diagnosis |
-
1981
- 1981-11-13 JP JP56181023A patent/JPS5883264A/ja active Granted
Patent Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS5631645A (en) * | 1979-08-23 | 1981-03-31 | Fujirebio Inc | Sensitized latex for mumps virus infection diagnosis |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN102716476A (zh) * | 2012-05-31 | 2012-10-10 | 郑州后羿制药有限公司 | 一种细胞灭活疫苗和卵黄抗体注射液及其制备方法 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPH0132949B2 (ja) | 1989-07-11 |
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