JPS5892642A - 新規なペプチドおよびそれらの製造法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 胸腺依存性のり冫Ａ球（Ｔ細胞）を分化（［成熟１）せ
しめる際の手段である数種のイプチド（たとえばチモシ
ンーα１およびチモボイエチン量）が胸腺抽出物から単
離さ扛た。チモボイエチンｌの部分配列すなわち▲ｒｇ
−Ｌｙｅ−▲−ｐ−Ｍａｌ−Ｔｙｒもまた相当する試験
系たとえばロゼット試験においてチモボイエチンのそｎ
と同様の作用を示す（　［８ａｉｓｎａｅＪ第２　０　
４巻第１３０９　〜１３１０貞（１９７９年）〕。

上配のロゼット試験およびＰＨ▲刺激試験はよシ小さい
ペプチドのり冫パ球に及ほす作用を研究するのＫ適して
いる＠ ロゼット試験においてはヒトの−帝崩液からのり冫パ球
が成熟し次のちに冷却条件下でヒツジの赤血球を用いて
ロゼット形成がなされる。

この試験ＬＴ細胞Ｋ％異的である．すなわちそｆＬＫよ
ＤＲ−−ＴＩＩａｌｌ）Ｒ　−Ｔ細胞ヘノ移行ヲ観察す
ることが可能である。調帯血液は未成熟のすなわち完全
Ｋは分化していないり冫パ球を比較的多数含有している
ので，ロゼットを形成するＴ細胞の基準値ＣＩＩ準値）
は成人末梢血液のりンノ々球の七ｎよクも低い． 自己免疫疾患またはｍ瘍にかかつている患者の血液Ｋつ
いて行わＡ７’ｔ研究Ｋ基づけば、低いロゼット形成数
は低い免疫状態と相互κ関係づけることができる．その
試験ｋおいては添加物を含まない栄養培地中でか、また
は試験されるべき物質が添加されている栄養培地中で単
κ前培養されたリンパ球一赤血球系のロゼット形成数が
計数さｎ且ク比較される． ．・１ この試験におい？ては研究されるぺきぱプチドの濃度は
約１０１９／ｄ〜１μｔ／ｗｔ、５μｆ／ｔ．１Ｑμｔ
／一〜゛２０μｔ／ｄの間で変えらｎる。評価ｋは少な
くとも１傭のリンパ球および５個の付着赤血球からなる
ロゼットだけが含ｔｎる．ＰＨ▲刺歇試験（ＰＨＡ−フ
イテ▲凝集素）ｔたはり７ノ゛セ球変形試験Ｋおいては
，表瞥抗原の研究によるのではなく、植物レクチンＰＩ
ＩＩＡを使用する刺激能機能試験Ｋよシ、成熟したすな
わち刺激可能なり冫ノ｛球の数に関して結鍮が導かｎる
。リンパ球（Ｔ細胞）はＩＩＢ劇性またはウイルス性の
抗原Ｋよシ引き起こされるのと同様の方法でレクチンに
よシ刺激さｎて芽細胞の変形を引き起こす。このことは
直接的にか、またはリンホカインの分泌による増殖を招
来する。その場合に特定時間内Ｋ放射性チミジンを混入
することは刺激された細胞を計数する手段となる。

成熟したかまたは免疫学的に有効なＴ細胞だけが刺激さ
れる●従ってリンパ球の成熟Ｋ及゛ぼすある物質の作用
はこの試験を用いて追跡することができる。しかしなが
ら一鳩高濃度においてはり冫パ球の他繁殖もまた刺激さ
ｒｔ％その作用はもはや観察することができないので刺
激は最適以下でなければならない。研究さｎるべきイプ
チドは種々の濃度で培地圧加えらｎた。それらは試験の
間中ずつと（７２時間まで）存在する● これらの研究Ｋおいては血清またはリンパ球プロテアー
ゼにより引き起こさｎるかもしｎないイプチドの分解は
無視さｎる。

今や、特に特定のＰＨ▲試験においてその作用が既知の
堅プチドである▲ｒｇ　−Ｌｙｓ　−Ａｓｐ　−Ｖａｎ
　−Ｔｙｒのそれよ９も優ｎているベプテドが見い出さ
れ友。これらの新規なペプチドは七ｎらのおのおのが有
する一般的特性によ９つぎのようＫ４’ｔ徴づけること
ができる０ 塩基性一塩基性一芳香族一芳香族一任意従って本発明は
一般式 Ｂｌ−Ｂ２−ＡＩ−Ａ２−Ｘ （ただし式中％Ｂ１は塩基性アさノ酸好ｔＬ＜ｔｉアル
ギニンまたはリジンを表わし、それぞれの場合にＬ−ま
たはＤ一配置で存在し、適当な場合にはア建ノ基がアシ
ル化されていてもよく、Ｂ２は塩基性ア建ノ酸好壇しく
はアルギエノまたはリジンを表わし、Ａ１はそれぞれの
場合にＬ−またはＤ一配置を有する芳香族ア冫ノ酸好ま
しくハフエニルアラエン、チロシン★たはトリプトファ
ンを表わし％Ａ２は芳香族ア建ノ酸好ましくはフエニル
アラニン，チ賓シンまたはトリプト７アンを表わし、そ
してＸは所望のアξノ酸好ましくはプロリン、グリシン
またはアルギニンを表わし，その場合にカルボキシル基
は好ましくは１〜６個の炭素原子を有する脂肪族アルコ
ールでエーテル化されていてもよい）のベプチドに関す
る。

Ｂ１のα−アギノ基における置換基（保膜基）および部
分Ｘは本発明Ｋよるベプチドの作用Ｋ対しては臨界的で
はない．しかしながらそれらは安定性およびパイオアベ
イラビリテイ−の丸めに重要であり、従って定量的な面
で重要である● この点においてウレタン型の保一基は特Ｋ有利である．
なぜならばそれらはアシラーゼおよびアミノベプチダー
ゼにより引き起こされるＮ−末湖の分解に対してベプチ
ドを保一するからである．イプチド化学において一般的
であるクレタン型保一基たとえばペンジルオキシカルポ
ニルまたは第３級プトキシカルボニルが特に適当である
●しかしながら単純なアルキルカルボニル基もまたこの
ために役立つ。アシラーゼＫ対してではなくアｉノＲプ
チダーゼに対して明らかにイブ．テドを保護することが
できるアセチルのような一般的なアシル基はあ１シ有利
ではない． Ｘｄ側鎖基Ｋおいて置換されているａ−アミノ酸を含め
て任意の所望のａ−アミノ酸を．表わすことができる．
たとえばＸとしてのグリシン、アルギ二ンまたはプロリ
ンとの間には定量的な違いが存在するだけである．％Ｋ
有効であるζとがわかっている堅プチドはＸが塩基性ア
さノ酸たとえばアルギニンを表わす場・汗のペプチドで
ある．またそのカルポキシル碁を脂肪族アル；−ルたと
えばメタノール、エタノールまたはさらＫ高級のアルコ
ールたとえばｎ−ヘキサノールでエステル化するとベプ
チドの作用およびバイオγｋイ２ビリテイーの象めκ有
利κなる，また本発明は上記のべプテドの製造法に関す
る−その方法は式 Ｂ，　−Ｂ２　−Ａｌ　一Ａ２　−Ｘ ｔ−有するア冫ノ酸配列をベプチド化学の方法によ〕合
成することから成る● 本発明による化合物の合成はたとえばＨｏｕｂ＠ｎ−Ｗ
ｅｙ１氏着「Ｍ＠ｔｈｏｄｓｎ　ａ＠ｒ　Ｏｒｇａｎｉ
ｓｃＭｎ　Ｏｈ＠ｍｉｓ（有機化学の方法）」第１５巻
に詳細に記載さ扛ているようなベプチド化学で既知の方
法による．以下の真に引用されている例扛それ自体知ら
れている合成法Ｋついての説明である。

本発明Ｋよる化合物は免疫欠乏症，ウイルスおよび真薗
感染症、そしてまた慢性の細一感染症および自己免疫疾
患を治療するために、そして細胞膜の特性を免疫学的ｋ
変史せしめられた細胞（たとえば膣瘍細胞）により引き
起むされた疾患を治療するために使用することができる
．この点に関して本発明はｔたＴ−り冫／七球の成熟に
影響を及ぼすために全く一般的に上記のぱプチドを使用
すること、および活性化−８−轡としてそれらのベプチ
ドを含有する県剤Ｋ関す４．本発明κよるイプテドの投
与社静脈円Ｋか，皮下的Ｋか、または鼻円経路にょシ行
うことができる●普通の体重を有する成人に対しては投
与量は非経口的Ｋ投与さｎる場合１回の投与あたりａ．
ｔ〜５０ｓｆ好”ｌＬ＜ｔｆ１．５〜７．５ａｆであシ
、鼻内Ｋ投与さｎる場合Ｋは１〜５００μｆ好ましくは
１５〜７５μ？である。現在まで毒性は認められなかっ
たので重症の場合Ｋは投与１ｋを増大することもできる
。また投与量を減ずることも可能である． 本発明による化合物は適当な薬学的製剤として鼻円にか
または非経口的に投与することかで龜る榔鼻内への投薬
形態を製造するためには、活性化合物をこのために一般
的である添加物九とえば安定剤１次は不活性希釈剤とａ
合し、そ？ して通常の方法Ｋより適当な投与形態たとえば水性、ア
ルコール性ま″たは油性の懸濁物または水性、アルコー
ル性オたは油性の溶液に変換する。適当な油状の賦形剤
または溶媒の例は植物油または勤物油たとえばヒマワリ
油または魚の肝油である。

皮下的Ｋかまたは静脈内Ｋ投与するため＆ｌｊ活性化合
物またはその生理学的に許容しうる塩を所望Ｋよりこの
ために一般的である物質たとえば可溶化剤、乳化剤また
は他の補助剤と一緒に溶液、懸濁物または乳濁液Ｋ変換
する。新規な活性化合物および対応する生理学的に許容
しうる塙に対して適当な溶媒の例は水、生理学的塩化ナ
トリウム溶液またはアルコールたとえばエタノール、プ
ロパンジオールまたはグリセロールで６９，さらにまた
糖溶液たとえばグルコースまたはマン二｛−ル浴液また
は上記の楢々の溶媒の混合物も例としてあげらｎ　；ｂ
　ａ上配の化合物の活性はつぎの渠理学的データによ夛
証明される．以下の化合物がＰＨ▲試験において研究さ
ｎた． （▲）　　Ｌｙｅ−ＡｒｇおよびＴｙｒ　−Ｔｙｒ　−
Ｇｔｙ　−ＯＩＣｔ（ＢＩ　　Ｌｙｅ−Ｌｙｓ−Ｔｙｒ
−Ｐｈｉ−Ａｒｇ−ＯＨ（Ｄ）　　Ｄ−Ｌｙｓ−▲ｒｇ
−Ｄ−Ｐｈｅ−Ｔｒｐ−Ｐｒｏ　−ＯＨ（ＩＢ）　　▲
ｒｇ　−Ｌｙｅ　−Ｔｙｒ　−Ｐｈｅ　−ＧＬｎ　−Ｏ
Ｈ化合物（■▲ｒｇ−Ｌｙｅ−Ａｍｐ−Ｖａｔ−Ｔｙｒ
−ＯＨは既知の比較物質として使用された。ＰＨ▲刺激
試験の結果は次のとお９である． 化合物０は本発明の範囲κ適合しないので別Ｋ扱わｎる
● 本発明について、％Ｋ本発明κよるｋプチドの合成につ
いて以下に実施例をあげて説明する．工ＵＰＡＯ　Ｋよ
り使用される下記の略飴が一散的κ便用される． Ｂｏａ　　　第３級プトキシカルボニルＢｕ”　　　＠
３級ブテル ＤＯＯ　　　ジシクロへキシルカルボジイミドｍｔ　　
　　エテル ！！ＯＢｔ　　　１−ヒドロキシベンゾトリアゾールＨ
ＯＯｂｔ　　５−ヒドｐキシ−４−オキソー３，４ージ
ヒＶ關−１．２．５−ぱ冫ゾトリアジンＭｂｈ　　　４
，４’−ジメトキシベンズヒＶリルＭｅ　　　　メチル ２　　　ベンジルオキシカルポニル 奥施例Ｉ　　Ｈ−Ｌｙｅ−Ａｒｇ−Ｔｙｒ−Ｔｙｒ−Ｇ
ｊｙ−ＯＥｔジアセテート ａ）　　Ｚ−Ｔｙｒ（Ｂｕ　）−Ｇｊｙ−０１１ｔＮ一
エチルモルホリン６．４ｍ（５０１７モル）およびＤＣ
Ｃ　１　１３３Ｎ　（　５　５冫リモル）を６℃で攪拌
しなからジメテルホル▲アζド７５一中Ｚ−Ｔｙｒ（Ｂ
ｕ　）一〇Ｈ　１　８．５　５１　（　５　Ｑ　ｔり峰
ル）、Ｈ−Ｇｊｙ−Ｏｇｔ−ＨＣｌ６．９　８　＆　（
　５　０ξリモル）およびＨＯＢｔ６．７５Ｎ（５０ミ
リモル）の溶液に加える。

この混合物をＯ℃で２時間攪拌し、そして室温で一夜放
置する．沈殿を炉別し，そしてＰ液を高度真空下で濃縮
する。残留物を酢酸エチルおよび水κ分配する。酢酸エ
チル相を炭酸水素ナトリウム溶液、硫酸水嵩カリウム／
硫酸カリウム緩衝液および水とともに振盪することによ
シ抽出し、硫酸ナトリウム上で乾燥し、そして濃縮する
●残留物をジイソプロビルエーテルに溶解する。不浴性
物實を沖別し、そして戸液に石油エーテルを加える。そ
の混會物を水浴中で数時間冷却し、そして沈殿ｔＰ別す
る。収童２α６３ｔ（８９％）、ｍ−ｐ−ｉ　ｏ　ａ℃
、（ａ），　−−１ｈａ°（Ｃ−１、メタノール）。

ｂ）　　Ｈ−Ｔｙｒ（Ｂｕ　）４ｊｙ−ＯＫＩＨＯｔＺ
−Ｔｙｒ（Ｂｕｔ）−Ｇｔｙ−ＯＫｔ　１　９．　７　
８ｔＣ４　Ｓ　ミリモル）をメタノール２００−に溶解
する。この浴液Ｋパラジウムー炭末触媒を加え一七して
情拌しながら、そしてもはやメタノール性塩酸を消費し
なくなるまで大体２Ｍのメタノール性塩瞑を加えながら
ｐＨ４．５（自動画定Ｉ１＃）でその浴液に水Ｘｔ−通
じる。つぎｋ触媒を戸別し、セしてＦ’ｌｌ［を濃縮す
る．残留物をエーテルとともに攪拌し、そして吸引一過
する。収量１４．８７ｆ（９１７％）、ル）オヨびＤＣ
Ｏ　Ｂ．６５ｆ＜　４　２　ｔ　Ｑ　七ｋ　）ヲ９／チ
ルホルムア建ド１ＱＱｍ中Ｈ−Ｔｙｒ（Ｂｕ　）−Ｇｊ
ｙ−ＯＦｉｔ−ＨＯＡ１４．５５ｒ　（　４　０ミリモ
ル）、Ｚ−Ｔｙｒ（Ｂｕ　）−ＯＨ１４．８４ｆ　（　
４　０ミリ？モル）およびＨＯＢｔ　５．４Ｆ（４０ミ
リモル）の溶液に０℃で加える。この混合物を実論例１
ａと同様Ｋ後処埋する。残留物を石油エーテルで摩砕す
る。収量２６．５ｆ＠この物質をメチレンクロリド／ア
七トン（９：１）の溶液を用い、てシリカゲル（１５０
．ｒ）のクロマトグラ７イーＫ付すことｋよ９精製する
・所望の分画を濃縮し・そして残留物門エーテルで摩砕
する●収量１９．７４ｆ（７３％）、ｍ．ｐ．１　１　
Ｓ゜、ミリキル）をメタノール２００−に解解し、−そ
して実施例１ｂと向“様にして接触的水素添加Ｋ付する
．残留物をエーテル２５０′一および石油エーテル２５
０ｄ（７）混合物で犀砕し、そしそ吸Ｔｙｒ（Ｂ−）−
Ｇｔｙ−ＯＩＣｔ，−ＨＯｔ５．７８　ｔ　（　１　０
ミリモル）およびＨＯＢｔ　１．５５ｆ（１０ミリモル
）の浴液Ｋ加える．この混合物を呈温で４時間攪拌し％
雇漉で一夜放置し、そして生成するゼラチン様の物質を
水２５０−とともＫ攪拌する。沈殿を炉別し、順次に硫
酸水素カリウム／硫酸カリ５ウム緩衝液、炭酸水素ナ｝
　ＩＪクム溶液および水とともｋ攪拌し、そして吸引一
過する。収量１α４７ｔ（９５％）。ｍ−＄１．１６３
　〜１６５°％　（’ＩＤ　−　　１　６．　１”（　
ｃ―１％ジメチルホルムアｉド）。

？（９（り％ル）　ｔ／／／−ルｓ　Ｏ　（ｌｙｄＫ懸
濁し１そして実施例１ｂと同様にして接触的水素添加Ｋ
付する．残留物をエーテルで摩砕する●アミド４０ｄ中
Ｈ−Ａｒｇ−Ｔｙｒ（Ｂｕｔ）　−Ｔｙｒ（Ｂｕ”）−
Ｇｔｙ−０１！：ｔ−２ＨＯＡ　５．９　８　ｔ　（８
ミリ％　ル）　おｊびＨＯＢｔ１．０８ｆ（８ｔリモル
）の溶液Ｋ加える。この混合物を室温で６時間攪拌し、
そして室温で一夜放置する。この混合物を実施例１１と
同様に後処境するが、ただし酸とともに振盪することＫ
よる抽出は行わない。残留物をエーテルで摩砕し，そし
てメチレンクロリド／メタノール（９：１）を用いてシ
リカゲル（１００Ｆ）のクロマトグラフィーκ付すとと
Ｋよ９さらＫｆｌｌ製する．適当な分画を濃縮し、そし
て残留物をエーテルで摩砕す４ｓ収童５．８　８　ｔ　
（　７　２％　）　ａ　ｍ．ｐ．９　Ｌ〜９　９＠．３
０ｔ（５ミリモル）を９０％トリフルオロ酢ｇｌｌｌ５
０ａｄＫ＠解する．この混合物を富温で２時間放置し、
そして濃縮する●残留物を最初ｋエーテルで摩砕し，そ
して吸引一過する．っぎｋそれを水で摩砕し、そして吸
引Ｆ遇する．トリ７ルオロアセテート）を９０％酢［＋
６　０ｍｇＫ溶解し％／々ラジウム一炭末触媒を加えた
のちＫその溶液κ水素を通じるζとκよシ接触的水素添
加を行う．水素添加が完了した時点で触媒ｔＦ別し、そ
してＰ液を濃縮する．残留物を水を用いて弱塩基性イオ
ン交換体（アセテート形）のクロマトグラフィーκ付す
る．溶出液を凍結乾燥する．収量＆３６５Ｆ．９　０％
メタノールを用いてその浴出物８　０　０ｍ１９１’十
字結合したヒドロキシプロピル化デキスト２ンゲルのク
ロマトグラフイーに付すことによ夛精製する。収量アミ
ノ鐵分析（４１１塩酸中１２０°で２４時間加水分解す
る）　Ｇｊｙ　１．　Ｏ　％テｙｒ　１．　７、Ｌｙｓ
　１．　Ｏおよび▲ｒｇａ９。

実権例２　　Ｚ−Ｌｙｅ−Ｌｙｓ−Ｔｙｒ−Ｐｈｉ−▲
ｒｇ−ＯＲジアセテＮ一エチルモルホリン１３−およヒ
ＤＣ０２２ｆをジメチルホルムアミド２０〇一中Ｚ−Ｔ
ｙｒ（Ｂｕ与偲４α７２（α１ミリモル）　，　Ｈ−Ｐ
ｈ●−ＯＭ●塩酸塩２　１．　６　ＦおよびＨＯＢｔ　
１五５ｔ（（Ｌ１電リモル）の溶液ＫＯ℃で加える．こ
の混合物を実施例１＆の場合と同様Ｋ後処理する．残留
物を石油エーテルで摩砕し、そして吸引枦過する。収量
５α３ｔ（９４％）、ｍ．ｐ．１０３〜１０４℃、（ｆ
ｆ）．Ｄｍ−ＩＪ”（ｃ−１、メタノール）。

ｂ）　　Ｈ−Ｔｙｒ（Ｂｕ　）−Ｐｈｅ−ＯＭｅ●ＨＣ
ｔＺ−Ｔｙｒ（Ｂｕ　）−ｒｈｏ−ＯＭｅ　４９．５　
ｔをメタノール８００ａｄＫ！解し，そして実施例１ｂ
と同様κして接触的水嵩添加に付する。残留物は結晶化
することができない．収量４３ｔ１油状物。

ａ）　　Ｚ−Ｌｙｅ（Ｂｏａ）−Ｔｙｒ（Ｂｕ　）−Ｐ
ｈｅ−ＯＭｅｙ一エチルモルホリン６．４　３ｍおよび
２一Ｌｙｓ（Ｂｏｏ）−０ＴＯｐ　２　７．　６　７　
ｆをジメテルホルムアミド１５〇一中Ｈ−Ｔｙｒ（Ｂｕ
　）−Ｐｈｅ−ｏＭｓ−ＨＯＡ　２　１．５　ｆおよび
ＨＯＢｔ　６．６　７　ｔの溶液Ｋ加える．この混合物
を室温で５時匍攪葎しそして濃縮する・残留物を実施例
１ａと同様にして後処理する。この物質を酢酸エチル／
石油エーテルから結晶化する．収量２　９．　１　ｆ　
（　７　７％）、ｍ．ｐｍ９　５〜９４＠、（ロ）。

＝　　１　９．　２＠（０−１％メタノール）●ｄ）　
　Ｈ−Ｌｙｅ（Ｂｏａ）−Ｔｙｒ（Ｂｕ　）−Ｐｈｅ−
ＯＭｅ−ＨＯｔＺ−Ｌｙｅ（Ｂｏａ）一テｙｒ（Ｂｕ　
）−Ｐｈ●−ｏＭｅ　２　８　ｔをメタノール３００ｊ
ＩｌｇＫｆｎ解し、実施９１Ｊ１ｂと同様にして接触的
水累添加Ｋ付する●残留物をエーテルから結晶化する●
収量２２．４ｆ（９１．８％）Ｉｍｅｐｅ１４５　〜１
４７＠電聾’＝＋　１　ａ　２＠（　Ｃ＝１、／　夕／
　−　＃）１１ｅ）　　Ｚ−Ｌｙｓ（Ｂｏａ）−Ｌｙｓ
（Ｂｏａ）−Ｔｙｒ（Ｂｕ　　）−Ｐｈｅ−ＯＭｅＮ一
エチルスルホリン４．５−および２−冫ｓ（Ｂｏｏ）−
ＯＴｃｐ　１　ａ４　８　ｔをジメチルホルムアミド１
３ロー中Ｈ−Ｌｙｅ（Ｂｏａ）−Ｔｙｒ（Ｂｕ　）−Ｐ
ｈｅ−ＯＭｅ−ＨＣｔ２　１．　９ｆおよびＨＯＢｔ　
４．４　６　ｆの溶液Ｋ加える。この混合物を室温で５
時間攪拌する。つぎに水４０〇一および飽和脚酸水素ナ
トリウム溶液５５１１１を用いてそのぱプチドを沈殿さ
せる。沈殿をＰ別する。そｔＬｔ−酢酸エチル／石油エ
ーテルから結晶化する一収ｔ５α４９（９５％）、ｍ−
ｉ）．１　５　９〜１６０●、＠Ｊ，−−１７．５°（
Ｃ−１、メタノール）．ｆ）　　Ｚ−Ｌｙｅ（Ｂｏｃ）
｛４７ｓ（Ｂｏｏ）−Ｔ）ｒｒ（Ｂｕ　）−Ｐｈｅ−Ｏ
ＨＺ−Ｌｙｓ（Ｂｏ’ｃ）−Ｌｙｅ（Ｂｏａ）−Ｔｙｒ
（Ｂｕｔ）−Ｐｈｅ−Ｏｎｅ　２　０？（約２０ミリモ
ルつをジオキサン１００−にほぼ完全に溶解する．この
溶液に１Ｍ水識化ナトリウム２０−を加え、そしてその
混合物を室温で１時間攪拌する。つぎκ不溶性物質ｔ−
Ｆ別し、そして炉液κ氷水５００−および１Ｎ塩酸２０
ｍを加える．沈殿を戸別し，そして乾燥する．収量１１
１５ｆ．メチレンクロリド／アセトン（８：２）中での
薄禰クロマトグラフイーＫよシけん化拡不完全Ｋしか起
らなかったことが示さｎた．その物質はまだかなり多量
の出発物質を含有していろ．純粋なけん化生成物約３ｆ
社酢酸エチルからの分別結晶化κよりそーの混合２ｓ 物から単一さ詐る。ｍ−ｐ−　１　５　６　〜１　５　
８＠％　ＩＦ）Ｄ一−１＆１°（Ｃ−１％メタノール）
． ｇ）　　Ｚ−Ｉｙｓ（Ｂｏａ）−Ｌｙｅ（Ｂｏａ）−Ｔ
ｙｒ（Ｂｕｔ）−Ｐｈｅ−▲ｒｇ−ＯＢｕＮ一エチルモ
ルホリン１２６ＷＩｇオヨヒＤＣ０４４０哩をジメチル
アセトアミド５一中２一冫ｓ（Ｂｏｏ）−Ｌｙｓ（Ｂｏ
ａ）一〒Ｆｒ（Ｂｕｔ）−Ｐｈｅ−ＯＨ　１．９　５　
ｆ　（　２ミリモル）、Ｈ−▲ｒｇ−ＯＢｕｔ●ＨＯＡ
　６　０　６　Ｉｆ　（　２　ｉリモル）およびｉｌｏ
ｏｔ＋ｔ　Ｓ　２　６噌（２ミリモル）の溶液κ０℃で
加える。この混合物を最初に０℃で２時間攪拌し，そし
て室温で一夜放置する．つぎの日Ｋ沈殿を一過し、そし
てＰ液を濃縮する。収量２．ｓ　ｔｏ酢酸エチルから２
回再結晶することＫよ９その物質を精製する．収Ｉｋ１
．７９＠ｍ．９．１３４〜１３７°％（ｌ４Ｄ帥−２＆
４°（０−１％　メタノール》●ｈ）　　Ｚ−Ｌｙｅ−
Ｌｙｓ７Ｔｙｒ−Ｐｈｅ−Ａｒｇ−ＯＨジアセテートＺ
−Ｌｙｅ（Ｂｏａ）−Ｌｙｅ（Ｂｏａ）−Ｔｙ？（Ｂｕ
　）一Ｐｈｅ−▲ｒｇ−ＯＢｕ”　１．４２を９０％ト
リ７ルオロ酢ｉ！Ｉｌｌ１５ｄＫ浴解する．この溶液を
室温で１時間放置し、そして濃縮する．残留物をエーテ
ルで摩砕し、そして吸引一過する．つぎに残留物を水Ｋ
浴解しｔそして弱塩基性イオン交換体（アセテート形）
のクロマトグラフイーＫ付する．′＃１出液を濃縮し、
そして９０％メタノールを用いて交叉結会したヒドロキ
シプロビル化デキスト２冫ゲルのクロマトグラフイーに
付する．収量９２０＃、＠）Ｄ−２９．７°（ａｓ−１
，メタノール）． 実織例５　　Ｈ−Ｌｙｅ−Ｌｙｅ−Ｔｙｒ−Ｐｈｅ−▲
ｒｇ−ＯＨジアセテート Ｚ−Ｌｙｓ−Ｌｙｅ−Ｔｙｒ−Ｐｈ＊−▲ｒｇジアセテ
ートｓｏｏダを９０％酢１１２０ｄＫ溶解し、そして実
施例１ｈと同様κして接触的水素添加ｋ付する．その残
留物を９０％メタノールを用いて交叉結合したヒドロキ
シプロビル化デキストランゲルのクロマトグツ７イーＫ
付する。上記のべゾチド管含有する溶出液を濃縮し、残
留物を水Ｉ／ｃ＃Ｉ解しｔそして凍結乾燥する●収量２
　４　４　Ｊ’ｌ　＠アミノ酸分析Ｃ６Ｎ塩酸中１２０
℃７ｃ２４時間加水分解）　：　Ｔｙｒα９５、Ｐｈ＊
　１．　０％　Ｌ７＃　２．０　６および▲ｒｇα９。

実織例４　　Ｚ−Ｄ−Ｌｙｅ−Ａｒｇ−Ｄ−Ｐｈｅ−Ｔ
ｒｐ−Ｐｒｏ−ＯＨａ）　　Ｚ−Ｔｒｐ−Ｐｒｏ−ＯＢ
ｕｔＤａａ　１Ｑ．９２ｆ　（　５　５ミリモル）をジ
メチルホルムアミド７５一中Ｚ−Ｔｒｐ−ＯＨ　１　６
．９　ｆ　（　５　０　ミリモル）　ｓ　Ｈ−Ｐｒｏ−
ＯＢｕ”　＆５　５　ｆ　（５　０ミリモル）およびＨ
ｏＢｔ　４７５２（５０ミリモル）ノ溶液ニｏ℃でカリ
える．この混曾物ｔ−ｏｃで２時間攪拌し，そして室温
で一夜放置する。沈殿を戸別し，そしてＰ液を嬢縮する
。残留物を実施例１ａと同様ｋして後処理する。残留物
をエーテルで摩砕する●収量１９．４９ｆ（７９％）、
ｍ−１）−１７３°、ＣＩ１３″：）′−−５４．２°
（ｃ−１、ジメチルホルムアミド）。

ｂ）　　Ｈ−Ｔｒｐ−Ｐｒｏ−ＯＢｕ”−Ｈ（Ｉｔメタ
ノール２００一中Ｚ−Ｔｒｐ−Ｐｒｏ−ＯＢｕｔｌ＆６
４ｔ（４０ミリモル）を実施例１ｂと同様Ｋして接触的
水木添加Ｋ付する。残留物をエーテルで摩砕する．収量
ｊ４．５７ｔｈ　ｍ．ｐ．１９０〜１９５°、（ロ）Ｄ
５−　　２　２．４＠（　ｃ−　１１、メタノール）．
ｃ）　　Ｚ−Ｄ−Ｐｈｓ−Ｔｒｐ−Ｐｒｏ−ＯＢｕ”Ｎ
一エチルモルホリン１．２８ｄＣ１０ζリモル）および
ＤＯＯ　２．２６ＰＣ　１　１ミリモル）をジメチルホ
ルムアミド２５ａｄ中Ｈ−Ｔｒｐ−Ｐｒｏ　−ＯＢｕ”
　・ＨＯＡ１４．６２（　　１　Ｑ　ミ・り（ル）、Ｚ
−Ｄ−Ｐｈｓ−ＯＨ．２．９９ｔ（１０ミリモル）およ
びＨＯＢｔ　１．３５ｆ（１０ミリモル）の溶液ｋＯ℃
で加える●この混合物を０℃で２時間攪拌し、そして室
温で一夜放置する。

沈殿を枦過しｔそしてＰ液を湊縮する．残留物を実施例
１ａと同様にして後処理する．残留物をエーテルから結
晶化する●収量五９１ｔＣ　６　１％）゜、ｍ．ｐｓ１
　８　６”％＠ｌＤ−−５　′！Ａ．６”（　ａｗｌ、
メタノール）． 石油エーテルを加えることによシ母液からさらκペゾチ
ドを沈殿させることができる。収量α＠５　ｔ％ｍ−ｐ
−１８３”ｏ （１）　　ＩＩ−Ｄ−Ｐｈ●−Ｔｒｐ−Ｐｒｏ−ＯＢｕ
”ｌＩＨＣＬメタノール１００ｄ中のＺ−Ｄ−Ｐｈｓ−
Ｔｒｐ−Ｐｒｏ−ＯＢｕｆ已７ｆを実織例１’ｋと同様
Ｋして接触的水素添加ｋ付する．残留物をエーテルで摩
砕する．収量　２．６　　７　　ｆ，　　　ｍ．ｐ．１
５５　〜１　６５＠％　（一一），−　−７ａ８°（　
ａ’鞠１、メタノール）。

ｅ）　　Ｚ−Ａｒｇ（Ｚ２）一Ｄ−Ｐｈｅ−Ｔｒｐ−Ｐ
ｒｏ−ＯＢｕＮ一エチルモルホリン０．　５　８　ｄ　
（　４．　５ミＩｊモル）および］−Ａｒｇ（ｚ２）−
ＯＴｃｐ　五５ｔ　（　４．　６ミリモル）をジメチル
ホルムアミ・ド２０ｓｇ中Ｈ−Ｄ−Ｐｈ●−Ｔｒｐ−Ｐ
ｒｏ−ＯＢｕ−ＨＯｔ２．４　３　ｆ　（　４．５ミリ
モル）およびｉＩＯＢｔ’（Ｌ６１ｆ（４。５ミリモル
）の溶液ＫＯ℃で加える．この混合物′ｔ室温で６時間
攪拌しそして室温で一夜放置する．その混合物を澁縮し
そして実施例１ａと同様にして後処理する．残留物をエ
ーテルで摩砕する。収量４．０１？．９４％アルコール
２５ｍから再結晶すると４５　８　ｔ　（７５２５ ％）が得らｎる●ｍ．ｐ・１４２〜１４５°、（ロ），
−”−１９．２”（　ｃ　＝　１　％メタノール）● ｆ）　　Ｈ−▲ｒｇ−Ｄ−Ｐｈｅ−Ｔｒｐ−Ｐｒｏ−Ｏ
Ｂｕｔ・２ＨＯＬ２−▲ｒｇ（Ｚ２）−Ｄ−ＰＭ−Ｔｒ
ｐ−Ｐｒｏ−ＯＢｕｔ５ｔ１ｉ−メタノール１００−に
懸濁し、そして実施例１ｂと同様Ｋして接触的水素添加
Ｋ付する．残留物をエーテルで摩砕する．収ｔ２．０　
１　？　（９７％Ｌｍ−ｐ．１９０〜２００●尚もー−
２７．０°（ｃ−１、メタノール）。

ｇ）　　Ｚ−Ｄ−Ｌｙｓ（Ｂｏａ）一▲ｒｇ　−Ｄ　−
Ｐｈｅ　−Ｔｒｐ　−Ｐｒｏ　−ＯＢｕｔＮ一エテルモ
ルホリン（Ｌ２６ＩＩｄ（２ミリモル）およびＺ−Ｄ−
Ｌｙｅ（Ｂｏｏ）−０Ｔｃｐ　１．２　３　ｔ　（　１
．　２ミリモル）をジメチルホルムアミド１０ｄ中Ｈ−
▲ｒｇ−Ｄ−Ｐｈｓ−Ｔｒｐ−Ｐｒｏ−ＯＢｕｔ・２Ｈ
ＣＡ　１．　４　７　ｆ　（　２　ｔリモル）およびＨ
ＯＢｔα２７ｔＣ２ミリモル）の溶液に０℃で加える●
この混合物を室温で４時間攪拌し、濃縮し、そして残留
物を酢鈑エチルおよび飽和炭酸水素ナトリウム浴液Ｋ分
配する。酢酸エチル相を水とともに振盪することによ夛
抽出し一硫酸ナ｝　ＩＪウム上で乾燥し、そして濃縮す
る●残留物をエーテルで摩砕し、そして吸引Ｆ遇すｔを
９０％トリフルオロ酢醸１４．５ｄおよびエテルメルカ
プタン１．５−に溶解する．この溶液を室温で１時間放
置し、そして濃縮する。残留物を水Ｋ溶解し、そして弱
塩基性イオン交換体（アセテート形）のクロマトグラフ
イーＫ付する。溶出液を凍結乾燥する．収量８８３吋．
９０％メタノールを用いて交叉結合したヒドロキシプロ
ビル化デキストランゲルのクロマトグラフイーに付すと
とＫよりそのベプチドを精製する。

収量５７０ｑ％＠，　−−２　４．６°（ｃ−１ｂメタ
ノール）． 実施例５　　Ｈ−Ｄ−Ｌｙｅ−▲ｒｇ−Ｄ−Ｐｈｅ−Ｔ
ｒｐ−Ｐｒｏ−ＯＨ　｝リアセテート ３８０ｍｇを９０％酢酸２０ｄＫ溶解し，そして実施例
１ｈと同様にして接触的水素添加Ｋ付する●残留物を９
０％メタノールを用いて交叉結酋したヒドロキシプロピ
ル化デキストランゲタのクロマトグラフイーに付する。

収量１４０■、２３ （ａｌｐ−２瓜８°（Ｃ−１、メタノール）。

ア電ノ酸分析（６Ｎ塩酸中１２０°で２４時間加水分解
）　：　Ｐｒｏα９５、Ｐｈｅ　１．　０　％　”７ｓ
ｉ　１．　０　３および▲ｒｇα９３ｓ’ｒｒｐは加水
分解の過程で分解されるが，ＵＶスペクトルによシ検出
することはできなかった． 酢１！１６００＋＋ｄｌｃ浴解し、そして実施例１ｈと
同様Ｋして接触的水素添加Ｋ付する。残留物をエ−テル
で摩砕する。収量２４．２ｆ（８８％）ａｍ−ｐ−アミ
ド２〇一中Ｈ−Ｔｙｒ（Ｂｕ　）−Ｐｈｅ−Ｇｊｎ（Ｍ
ｂｈ）−０Ｈ７−ｋｆ−｝ａ６ＦおよびＨＯＢｔ　（１
９　５　ｆの浴液κ加える．この混合物を室温で４時間
攪拌し、セして嵐温で一夜放置する．つぎの日にその混
酋轡を水１００−および飽和炭酸水木ナトリウム浴液７
−とともに攪拌する．沈殿を戸別し、そして乾燥する。

収量＆０９ｆ（９５％）、ｍ．ｐ．１７７ｔを９０％酢
酸３５０ｄｌＩＣ溶解し、そして実―例１ｈと同様にし
て接触的水素添加Ｋ付する●残留物をエーテルで摩砕し
，そして吸引一過する●収量４．８１Ｆ（７４％）　＠
　ｍ−ｐ−　１　３　６〜Ｉ　Ｓ　８＠、１．９ｔｏ溶
液をジメチルホルムアミド１０ｓｇ中１１−Ｌｙｓ（Ｂ
ｏｏ）一Ｔｙｒ（Ｂｕｔ）−Ｐｈｓ−Ｇｔｎ（Ｍｂｈ）
アセテート２．５７ｔＣ２．５ミリモル）およびＨＯＢ
ｔα５４１の溶液に加える●この混合物を室温で５時間
攪拌し、そして一夜放置する。つぎＫその混合物ｔ水５
０−および飽和炭酸水素ナ｝　ＩＪウ▲浴液＆５ｍとと
もＫ攪拌する。沈殿を戸別し、充分に洗浄し，そして乾
燥する．収量５１７５ｔｃ　９　８％）　ｓ　ｍ−Ｐ＊
１３２〜１４０＠、＠，ｌＤｓ−　　１，−９°（０−
１％酢ＯＨ３ｆ（　２　ｔ　ｌＪ％ル）ｉ９　０％トリ
フルオロ酢酸２０ａｄＫ溶解する．この混曾物を室温で
１時間放置し，濃縮し、そして残留物をエーテルで岸砕
する。収ｉ１２．１１ｆ（９２％）、ｍ．ｐ．７　０〜
７　８＠酢酸に浴鱗し、そして実施例１ｈと同様Ｋして
接触的水素添加Ｋ付す。残留物ｔ−９０％メタノールを
用いて交叉結合したヒドロキシプロピル化デキストラン
ゲルのクロマトグラフィーに付２１ する．収量４　７　ｓ　ｍｙ　ｓ　（ａ）Ｄ−７　４°
（ｃ−１、水），アミノ酸分析（６Ｎ塩緻中１２０°で
２４時間加水分解）　：　Ｇｔｎ　１．　０、Ｔｙｒα
９１、Ｐｈｅα９９、Ｌｙｓ　１．　０　５および▲−
ｇα９４。

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １）式 ％式％ （ただし式中、Ｂｌは塩基性アミノ酸を表わしＢ２ｔｉ
   塩基性ア建）酸を表わし、ム１は芳香族アずノ酸を表わ
   し、ム２は芳香族アミノ酸を表わし、そしてＸはそのカ
   ルボキシル基がエステ゛ル化されていてもよいアミノ酸
   を表わす）のはプチド。 ２）アミノｅｌｌＢ１がアルギニンまたはリジン（そｎ
   −ｔＪ−ｎの場合にＤ−またはＬ−配置を有する；でめ
   り、アミノ＃ＲＢ　２がアルギニンまたはリジンでアシ
   、アｔ）酸ム１がフェニルアラニン、チロシンまたはト
   リプトファン（それぞれの場合ＫＤ−またはＬ−配置ｔ
   Ｖする）であシ、そしてアミノ酸ム２がフェニルアラニ
   ン、チロシンまたはトリプトファンである％特許請求の
   範囲１１４１項記載のペプチド・ ５）　　Ｘがそのカルボキシル基が所望により１〜６個
   の炭素原子を有する脂肪族アルコールでエステル化さ牡
   ているグルタミン、グリシン。 プ０１Ｊンまたはアルギニンである、特許請求の範囲ｓ
   ｌ！１または２項記載のはプチド。 ４）式 ％式％ のアミノ敵配列がペプチド合成の方法にょル組立てられ
   る、特許請求の範囲第１〜５項記載のペプチドの製−進
   法＠ ５）　　？−リン／Ｒ球の成熟に影響を及ぼすための特
   許請求の範囲第１〜５項記載のペプチドの便用・