JPS59130200A - 鮮度判定方法及び装置 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 本発明は魚介類及び鳥獣肉類の鮮度判定方法並びに斯る
方法に使用される測定用キット及び該方法を実施するた
めの鮮度判定装置に関するものである。

近年、魚介類及び鳥獣肉類の長距離輸送並びに冷凍保蔵
を行なう際の品質管理の一手段として斯る肉類の鮮度値
の測定が有効であり、そのために種々の鮮度判定方法及
び装置が提案されている。

その一つは魚介類及び鳥獣肉類のｐＨを求めて行なうｐ
Ｈ法、又は官能的な方法に基づくものであった。これら
の方法は初期腐敗以後の肉類の変化に起因するものであ
って、従ってこのような方法では鮮魚等の真の鮮度、所
謂「生きの良さ」を判定することはできなかった。

本発明者等は上記従来の方法を改良し鮮魚等の鮮度、即
ち「生きの良さ」を判定するために、魚介類及び鳥獣肉
類の鮮度が動物の運動エネルギの供給源であるアデノシ
ン６りん酸（ＡＴＰ）の減少と共に低下するという一般
的認識に着目しＡＴＰの変化を分析し鮮度を判定する装
置を提案した（特公昭５３−４７０３９号を参照せよ）
。この装置は次のような原理に基づくものである。

魚介類及び鳥獣肉類のＡＴＰの分解は一定の法則性があ
って、ＡＴＰ（アデノシン３りん酸）→ＡＤＰ　（アデ
ノシン２りん酸）→ＡＭＰ　（アデノシン１りん酸）→
ＩＭＰ（イノシン酸）→ＨＸＲ（イノシン）−ＨＸ（ヒ
ボキサンチン）の＋＋ｍ序で分解することが知られてい
る。従って、魚介類及び鳥獣肉類の鮮度はＡＴＰの変化
を分析すれば測定することができる。即ち、ＨＸＲ（イ
ノシン）やＨｘ（ヒボキサンチン）が多いものほど生き
が悪く、少ないものほど生きが良いことになる。従って
前記装置においては、鮮度の指標としてＡＴＰ関連化合
物（ＡＴＰ、ＡＤＰＸＡＭＰ、ＩＭＰ、ＨＸＲ及びＨ，
）の全量に対するＨＸＲ（イノシン）及びＨｘ（ヒボキ
サンチン）の量を百分率で表示したに値を採用し、鮮度
の判定は次表に従って行なった、。

Ｋ　値　　　　　　品質区分 ０〜１０％　　　　活魚、洗い １０〜２０　％　　　　　　　刺　　身２０〜３５％　
　　　一般鮮魚 ■ぐ　値　　　　　　品質区分 ３５〜６０％　　　　加工原料 ６０％以上　　　　　かまぼこ原料 しかしながら、前記装置はに値を測定するに当り、アニ
オン交換樹脂を入れたイオン交換器を使用することが必
須とされた。本発明者等は本装置を利用して種々の測定
を試みた結果、試料を測定する毎にイオン交換器内のア
ニオン交換樹脂を交換する必要があり、測ゝ定に要する
時間及び価格が大であるばかりでなく、取扱いには細心
の注意を払う必要があり、作業能率が悪く操作性の点で
問題があった。

又、Ｋ値測定法の一つとしてＨＸＲ（イノシン）及びＨ
ｘ（ヒボキサンチン）が特定の酵素、例えばヌクレオシ
ドホスホリラーゼ（Ｎｕｃｌｅｏｓｌｄｅｐｈｏｓｐｈ
ｏｒｙｌａｓｅ　）とキサンチン酸化酵素（Ｘａｎｔｈ
ｉｎｅ　　ｏｘｉｄａｓｅ　）を用いると尿酸にまで分
解するという酵素反応に着目し、斯る酵素反応を利用し
て尿酸の生成量を測定し、Ｋ値を算出する方法が発表さ
れている。この方法は、イオン交換器等の使用を必要と
せず、単に試料中に１１チ素を添加するだけでよいため
に、イオン交換器の使用を必須とした前記装置ハの不利
益を大ぎく改良するものであった。しかしながら、３６
表されたこの方法では＃紫反ルＣ；によって生成する尿
酸のｉｌにを分光光度ｄ１゛をノ１４い２９３　ｎｍの
吸光度から求めているために、Ｋ値を求めるには２５０
　ｎｍ及び２９３　ｎｍの２波長によるｍす定を必要と
し、ｆｌｌｌｌ定イ・ト菜が繁雑であり又作業能率を低
下せしめる要因となった。

更に、本方法を’Ｊ＜　Ｉｆｆする装置りは１Ｍ雑で且
つ＋Ｍ５価なものとなった。

本発明は前記方法と同じく酵素反Ｉ′Ｉｔ）を利用した
鮮度判定方法に関するものである。本発明者ｅ′戸は種
々の研究及び実験を行なった結果、ｒ’ｉｉ（Ｆ＋浴溶
液希釈試液及び酵素試液で希釈すると単一波長にて吸光
度を測定しＫ　値を求めることかできることを見出した
。更に本発明者等は酵素試液で試料溶液□　　を希釈し
た酵素浴液にカタラーゼ（ｃａｔａｌａｓｅ）及び発色
剤を添加するとＡＴＰ関連化合物の縫に比例した色素の
発色がみられ、従ってこの色を分光光度計又は比色ａ（
−にてｆｌｉｐ定することによりに値を求め得ることを
見出した。又、史にＡ　Ｔ　Ｐ　１８％連化合物は酵素
試液により尿酸にまで分解するが、この尿酸を又は尿酸
と同時に生成するＨ２Ｏ，を酵素センサで直播測定し、
Ｋ　（＋）ｉを求め得ることが分った。本発明はり「る
眉［親な知見に基いて達成されたものである。

従って、木つコ明の目的は、従来の魚介類及び烏獣肉類
鮮度刊定装置２τ及び方法が有したｄ４欠点を改良した
鮮度判定方法を４；４供することである。

本発明の目的は、ｔ：テ素反応を利用して■く値を容易
（ご、迅速に且つ正（ｉｆｉ’、に求めることができ、
従って魚介類及び鳥獣肉類の取扱現場或は市場等にてこ
れらの鮮度を直ぢに判定することができる鮮度判定方法
を提供することである。

木’ｉ６明の他の目的は、梅漬が簡明で、ゼ→作性がよ
く且つ小型の装置にて実ＩＡｉすることのできる魚介類
及び鳥獣肉類等の鮮度判定方法を提供することである。

本発明の更に他の目的は一ヒ記新規な且つ有効な鮮度判
定方法をより迅速に、簡便に且つ正確に行なうことので
きる測定用キット及び鮮度１“１１定装置を提供するこ
とである。

次に、本発明に係る鮮度判定方法について詳しく説明す
る。

本発明に係る鮮（９）判定方法は、 ■　魚介類及び鳥獣肉類からに値個定の試着となるＡＴ
Ｐ関連化合物を抽出する抽出工程、■　抽出液中のＡＴ
Ｐ閂連化合物を分析してに値を測定するために抽出液を
中和剤で中和して分析に適した状態の試ｒ（溶液を１１
．９製する中和工程■　試料溶液にｉｉ￥素を加え酵素
反ｆａｔ、を起す１［にジシ反応工程、及び ■　Ｋ値を求めるｔｄｌＪ定工程 から成る。以下、各工程に分けて更に詳しく説明する。

抽出工程及び中和工程 鮮度を判定すべき魚介類又は鳥獣肉類から採取した肉片
にタンパク質変性剤を加え試料容器内にて粉砕される。

タンパク質変性剤としては過塩素Ｈ（Ｐ　ＣＡ　）　、
）　＋）　り四ル酢酸及び１エタノール等が用いられる
が、５％のｐ　ＣＡ　溶液が好適であり、肉片０．５〜
１ｑに対し約ｓｍ！、使用される。

前記試料容器から、ガラスウール及び脱脂線等の任；け
の１材を使用した濾過器を介してに値測定の試ｒ１とな
る抽出液を採取する。次で、該抽出液は抽出液中のＡＴ
Ｐ門連化合物を分析するに適した状態にするべく中和剤
が添加される。中和剤としては水酸化カリウム、りん酸
カリウム、酢酸カリウム、炭酸カリウム等が、ある。タ
ンパク質中性剤として過塩”ＡＣ’ｆｉ　（Ｐ　ＣＡ　
）を使用した場合には、通常その中和剤としては水酸化
カリウム（ＫＯＨ）が使用される。このように水酸化カ
リウムを用いて中和する場合にはｐＨメータ又はｐＨ試
験紙等を用いて中和の終点を？、Ｖ　Ｄすることが必要
である。

本発明者等は、中和剤として二つの試薬を組合せて緩衝
作用を持たせることにより過塩素酸（ＰＣＡ）に対し一
定の割合の中和剤を添加するのみで正確に中和できるこ
とを見出した。斯る方法によって中和工程は著しく簡単
となった。

タンパク質変性剤として過塩素酸（ＰＣＡ）を使用した
場合には中和剤としては例えば次のような試薬の組合せ
が考えられる。

■　酢酸カリウムと水酸１ヒカリウム ■　炭酸カリウムと水酸化カリウム ■　りん酸２カリウムと水酸化カリウムこれら三つの試
薬の組合せの中いずれの中和剤を使用するかはＡＴＰ関
連化合物の分析方法により適宜選択される。又、上記■
の試」トの組合せは、Ｉ　Ｍｐ　（イノシン酸）等のヌ
クレオチドのりん酸基を分解するｊＴｌ’ｉ　ｇ、例え
ばヌクレオチダーゼ、ホスファターゼ等を利用する場合
には用いることができない。

酵素反応工程及び測定工程 ＡＴＰ関連化合物の中のＡＴＰ（アデノシン３りん酸）
、ＡＤＰ　（アデノシン２りん酸）、ＡＭＰ（アデノシ
ン１りん酸）及びＩＭＰ（イノシン酸）の合計を（Ａ）
とし、ＨＸＲ（イノシン）及びＨｘ（ヒボキサンチン）
の合計を（Ｂ）　　とするとに値は次のように表わされ
る。

本発明に係る方法においてはＡ及びＢの量を酵素反応を
利用して測定するものであるが、次の２一つの酵素反応
系を用いることができる。

ｅ、紫反応糸（１）：イノシン（ＨＸ　Ｒ）　　及びヒ
ボキサンチン（Ｈｘ　）が酵素によって尿酸にまで分解
される反応を利用してに値を測定する方法。

前記式（１）において分母に相当するＡＴＰ関連化合物
の全ｔ（Ａ＋Ｂ）は、中和工程により中和して分析に適
した状態に調製された試料溶液を希釈試液、例えば０．
１　Ｍ　ＩＪン酸緩衝液ｐＨ７，５にて２０倍に希釈し
た後、分光光度計を用い２５０　ｎｍの吸光度を測定し
て求められる。この１ｔｉｌｌ定値を（Ａ＋Ｂ）２ｓｏ
　として表わす。

一方、前記式（１）の分子に相当するＡ　Ｔ　Ｐ　ＩＦ
ｄ連化合物の中の（Ｂ）の・辰、即ちイノシン（ＨＸＲ
）とヒボキサンチン（Ｈｘ）の計は次のように求められ
る。

従来、イノシン（ＨＸ　Ｒ）は酵素、例えばヌクレオシ
ドホスホリラーゼ（Ｎｕｃｌｅｏｓｉｄｅ　ｐｈｏｓｐ
ｈｏｒｙ−１ａｓｅ　）　　によってヒボキサンチン（
Ｈｘ　）に、又ヒボキサンチン（ＨＸ）は酵素、例えば
キサンチン酸化酸−素（Ｘａｎｔｈｉｎｅ　ｏｘｉｄａ
ｓｅ　）　　によつで尿酸に分解されることが分ってい
る。本方法においては、０、１　Ｍりん酸緩衝液、ｐＨ
７，５の１　ｍｌにヌクレオシドホスホリラーゼ（０，
０１ユニット以上）及びキサンチン１浚化酵素（ｏ、　
ｏ　ｏ　５ユニット以上）を溶解して酵素試液をＲ１’
Ｊ製する。該酵゛素試液を用いて、ｎｌＪｌ補記及び中
和工程にて用意された試料溶液を２０倍に希釈し、３７
°Ｃ又は室幅１で一定時間、例えば５〜１０分間反応さ
せる。次で、該反応液の吸光＝を２５０ｎｍの光を用い
て測定し、ｋ　ｆｉｊｌ定値を（Ａ）２！ｔｏとして表
わすと、（Ｂ）の量は２５０ｎｍによる吸光度の減少量
、つまりＣＡ＋Ｊ３）ｚａｏ−（Ａ　）２５０　＝　Ｃ
Ｂ　）２５ｏに比例した値として求めることができる。

従って、Ｋ　イ１ｆｆは次式で与えられる。

ここで、２５０ｎｍの光を使用した場合αは大略１．８
　（２５４ｎｍの光を使用した場合αは大略１，７）と
なるので、式（２）は次のように省き換えるごとができ
る。

上記説明から、本方法に従うとに値は、試料溶液を希釈
試液及び酵素試液で希釈した後各々単一の波長にて吸光
度を測定することによって直ちに求め得ることが理解さ
れるであろう。

って尿酸にまで分解される反応を利用してに値を測定す
る方法。

前記式（１）の分母に４目当するＡＴＰ閃連化合物、ｒ
ａＪちＡＴＰ、ＡＤＰ、ＡＭＰ、ＩΔ・ＩＰ・、ＨｘＲ
及びｒ（ｘの全）＋ｉ：　（Ａ　十Ｂ　）の測定値は次
のようにして求められる。本方法においてはＩＭＦをＨ
ｘＲに分解する酵素、例えはホスファターゼ（ｐｈｏｓ
ｐｈａｔａｓｅ　）、ＨＸＲをＨｘに分解する酵孝、例
えはヌクレオシダーゼ（Ｎｕｃｌｅｏｓｉｄａｓｅ　）
、及びＨｘを尿酸に分解する酵素、例えばキサンチン酸
化酵素を使用する。

更に、ＡＴど、ＡＤＰ及びＡＭＰをＩＭＦに変換するた
めに他の酵素が必要であるが、これらＡＴＰ、ＡＤＰ及
びＡＭＰの合計は少ないので前記三つの酵素を使用する
ことで十分である。

前記酵素の中ホスファターゼはりん酸溶液中では作用せ
ず、一方ヌクレオシドホスホリラーゼはりんｉ・＋々溶
液中でないと作用しないので、００５Ｍ炭１’７．４０
往１液ｐＨ９，０，１ｍ７！にホスファターゼ（００１
ユニ・ント以−ヒ）を溶ｆｑ了した林１．１の自チ素試
液と、０．２　Ｍりん肖、＞　ｐ　ａ　ｓ、、ｐＨ７５
，１ｍｌにヌクレオシドホスポリラーゼ（００１ユニッ
ト以上）及びキサンチン酸化酵素（ｏ、　ｏ　ｏ　５ユ
ニット以上）を溶解した第２の酵素試゛液とをｊ？′！
ｌ製する。

特に、魚肉の餌度判定にあっては魚肉中のＡＴＰ（アデ
ノシン６りん酸）は、魚が捕獲されそして貯蔵されるま
でに殆んどＩＭＰ（イノシン酸）又はＡＭＰ（アデノシ
ン１りん酸）にまで分解される。この時、上４で１３の
ようにムＡ１の酵素試液であるホスファターゼを作用さ
せると、ＩＭＦはＨＸＲ（イノシン）に、又ＡＭＰ　Ｇ
−］：　Ａｄ　−Ｒ（アデノシン）に分Ｗ（される。従
って、該アデノシンをイノシンに分解する酸ツー、１（
１１ちアゾ／シンデアミナーゼ（００１ユニット以上）
を上記第１の酵素試液に更に添加するのが好適である。

斯るアデノシンデアミナーゼを更に添加する方法は／Ｉ
’ｉにイカの魚１度判定の場合に有効である。

先ず、試料溶液は第１の酵素試液で１０倍に希釈し、３
７°Ｃ又は室温で一定ｔｔ４ｒ間、例えば５〜１０分間
反応させた後、更に第２の酵素試液で２イ８希釈し、再
度６７℃又は室温で一定時間、例えば５〜１０分間反応
させる。次で、該反応液の２９５ｎｍの吸光度を４１１
１定し、測定値を（Ａ＋Ｂ）ｖとして表わす。

上記方法においてはＨｘＲをＨＸ　　に’ｄ１す’ｌ’
する酵ヌくとじてヌクレオシドホスポリラーゼを使用し
たが、ヌクレオシドホスポリラーゼの代わりにヌクレオ
シダーゼ（Ｎｕｃｌｅｏｓｉｄａｓｅ　）　　を使用す
ることも可能である。訪ヌクレオシダーゼはヌクレオシ
ドホスポリラーゼのようにりん酸溶液を必要とはしない
ので、酵素試液は一７４曹膿すればよく上記方法に比較
するとより簡便である。該ｎｆ駆試）１には００５Ｍ炭
酸緩衝液ｐ■■８０．１　ｍｌにホスファターゼ（０，
０１ユニット以上）、ヌクレオシグーゼ（００１ユニッ
ト以上）及びキサンチン［１ン化酵素（００１ユニット
以上）を溶解して１ｉＪＩｉ　をＪビれる。

試料溶液は該酵素試液で２０倍で希釈し、３７℃又は室
温で一定Ｉ１．！１′間、例えば５〜１０分間反応させ
た後、２９３ｎｍの吸光度を測定し、ｆ１１定価（Ａ＋
Ｂ）ｖ　　を求めることができる。

一方、式（１）の分子にあたる（Ｂ）　　の量Ｓは前記
（Ｉ）の方法と同様にして１ｆｆ４製されたヌクレオシ
ドホスポリラーゼ及びキザンチン阪化酵素を含む１）ア
素試液で２０倍に希釈し、６７℃又は室温で一時間反応
させることによって求められ、この測定値を〔Ｂ）ｖと
して表わす。　　　　− 上記方法によって測定された分母部分及び分子部分（Ａ
＋Ｂ）ｖ及びＣＢ）Ｖからに値は次式によって求めるこ
とができる。１８Ｊち、本方法ではＡＴＰＶ’ｊ連化合
物すべてを尿酸にまで分解する糸を用いているので、前
記式（１）の（Ａ十Ｂ）及び（Ｂ）のト！４は生成する
尿酸の預；　（Ａ　＋　Ｂ　）　ｙ及び［Ｂ］７の閾に
各々比例する。従って、 である。

上記方法はＡＴＰＩＩ連化合物が酵素により尿酸にまで
分解する反応を利用し、２９３ｎｍの吸光度を測定する
ことにより、Ｋ値を求めたが、上記酵素反応系にては尿
酸と共に過酸化水素（■■ｔｏｚ）が生成され、このＨ
６０，を発色法により測定することも可能である。この
拳法においては上記の各酵素試液にカタラーゼ（ｃａｔ
ａｌａｓｅ　）　　及び発色剤（例えば４−アミノアン
チピリンと、フェノール、ジメチルアニリン又はジエチ
ルメタトルイジンとを組合せたもの）を加え同時に反応
させるとＡＴＰ関連化合物の量に比例した色素の発色が
みられる。

従って、この色を分光光度計又は比色計で測定し、Ｋ値
を求めることができる。

更に又、酵素反応系にて生成される尿酸又はイ０２はそ
れぞれウリカーゼ又はカタラーゼを使用した酵素センサ
にて測定することも可能であろう。

以上説明した酵素反応系（田）によるに値測定法は前冗
酵崇反応系（Ｉ）の方法に比較し使用する酵求が多く反
応系は幾分複雑となるが、発色法を利用することにより
紫外部の吸光度をンｉ！ｌ！定する心安をなくし、より
安価な測定器を利用することができるという利点を有す
る。又、特にイカ等にあってはＡ　Ｔ　Ｐ　Ｂ’：Ｉ連
化合物以外に紫外部吸収化合物（ホマリン）を有し、紫
外部吸光度測定を行なった場合には鮮度判定に誤差を生
じることとなる。発色法はこのような紫外部吸光度測定
がもつ欠点を解決することができる。

次に、本発明に係る鮮度判定方法の実施例を前記酵素反
応系（Ｉ）を使用した場合についてより詳しく説明する
。

本発明は測定に必要３な試液類を「測定用キット」とし
てイ是供することによって現場での測定を簡便に且つ正
確に行なうことができるという利点を有する。測定用キ
ットは、 （１）緩衝液 （２）酵素液 （３）標準品 から成る。

緩衝液は０．１Ｍりん酸緩衝液、ｐＨ７５の１５０＋＋
＋７！容器を２本用意して構成され、酵素液はヌクレオ
シドホスホリラーゼ（６ユニツト以上）及びキサンチン
酸化酵素（１−５ユニット以上）を含んだ３．２　Ｍ硫
酸アンモニウム溶液０−４ｍ１ｌから成る。又、該に値
測定用キットに用いるヌクレオシドホスホリラーゼ及び
キサンチン酸化酵素が正常に作用していることを確認す
るための標］ｖＬ品は０、５　ｔｔ　ｍｏｌｅのＩＭＰ
（イノシン酸）及びＩ（ｘＲ（イノシン）、即ちに値が
５０を示す々９′ＩＰ溶液である。

ρ１度判定作業に先立って、前記測定用キットを使用し
て酵素試液が調製される。つまり、緩倹液の中の１本に
酵ｆ液を全（Ａ溶かし酵素試液を作る。

他の１本の緩衝液は希釈試液として使用される。

又、標準品入りの容器には蒸留水１ｍｌを加えて標準液
を作る。

辿常、鮮度判定すべき検体の試料溶液は検体の肉片０５
〜１ｇに対し５％ｐｅＡｓ液５厩を加えて粉砕し、中和
剤として４Ｍのりん酸２カリウムと４Ｍの水酸化カリウ
ムを１，２Ｍ添加して作製される。

上記の！ｔＵ　＜にｉ！ｉ＋ｌ製された、試料溶液−１
標Ｙ１（液、希釈試液及び酵素試液を使用し、前記本発
明の方法に径ってに値の測定を行なうことができる。表
１は本発明の方法に従ったに値測定時の一つの操作法を
まとめたものである。

上記測定にあたり、測定の正確さ及び信頼性を確保する
ために、標準液のに値、即ぢ が４５〜５５の範囲内にあることを確認する必要がある
。又、測定値［Ａ十Ｂ’）ｔｗｏ　　の大部分はＡＴＦ
’閃連化合物の吸収によるものであるが、ＡＴＰ門連化
舒物以外の化合物の吸収も数％含まれていることが分っ
た。更にこの値は（Ａ＋Ｂ）２５゜の数値が低いほどそ
のす１１合が高いことが分った。７１ｂ常（Ａ　＋　Ｂ
　）　２５　ｏ　　はＮ片ｏ、　ｓ　−ｉ、　ｏ　ｙか
ら抽出ｔ、　タ試料溶液にあっては０．５〜１０を示す
ものであり、従ってもし［Ａ＋Ｂ］ｔ＊ｏが０６以下で
ある場合には試料２再調製してＡ（１１定し１白すこと
が撃ましい。

次に、上記鮮度判定方法を極めて好適に実施し得る鮮度
判定装置について説明する。

第１図には鮮度判定装置の一実施態様が概略図示されて
いる。鮮度判定装置は鮮度判定すべき魚介類及び鳥獣肉
類から試料溶液を調製するための試料容器５を具備する
。該試料容？７ｒ５は攪拌様（図示せず）を有する。試
料′容器５には魚介類及び鳥獣肉類から採取した内水と
、タンパク質変性剤とが装入され、招拌機にて粉砕され
る。タンパク１Ｆ４．変性剤としては前述のように過塩
素酸が好適である。次で、試料容器５には次で中和剤、
例えばりん酸２カリウム及び水酸化カリウムが加えられ
る。適当な時１１１静置して変性蛋白質及び過塩素酸塩
を沈殿させ、上澄液が試料溶液として使用される。試料
溶液は試料容器５からポンプ（図示せず）などにより導
特１０を介して取出される。

上記の如くに調製されそして取出された試料溶液は変性
蛋白質等の固形分を含有しているため、治１管１０に１
−１過器６を設は斯る固形分を除去せしめる。カｊ過器
６は、例えはガラスウール、脱脂綿等を充′Ｊ、）ｆｉ
　シた通常の濾過器とすることができる。

本鮮度判定装Ｕ）゛は、更に上記試料溶液の一部に酵素
反応を起させるための酵素反応器７と、試料溶液の吸光
度を測定する＊１Δ」り器８と、計測器８からの信号に
基づきに値を計算し、出力する計算機９とを具備する。

計測器８は一部の分光光度計８ａ　１７．び８１）から
成り、分光光度計８ａけ酵素反応器７に導管１１にて接
続され更に濾過器６へと連結されるが、使方の分光光度
計８ｂは１自接導管１２にてηｊ過３１÷６へと接続さ
れる。従って、試料溶液はｐ過器を妬過した後分岐され
、一方は導層１１によって酵；：（反応器７を介して分
光光度計８３に導入さ、才］、他力は専管１２によって
ｉ７′ｉ−、Ｈｌ妾分光光度計８ｂに導入される。

酵”素反応器７はカラムに不溶化したヌクレメシドホス
ホリラーゼ及びキサンチン酸化（”ｉ’ｆ岩が充填され
て÷Ａ′成される。貼る不溶化酵素は一般に（１）担体
結合法、（２）架ゼユ法、及び（′ｉ）包括法等が用い
られるが、水溶性の相体に酵孝を共有結合させる方法が
安定しンと不溶化配り（舌を提供し得るという点で好ま
しい。このとき水溶性の担体としてはｍ−アミノベンジ
ルオキシメチル・セルロース（Ａ　Ｂ　Ｔ、Ｉ　Ｃ＞、
ブロモアセデルセルロース（ＢＡＣ）等が現在市販され
ており、入手可能である。

分光光度計８３（’　８　ｂ　）は試料溶液が流イ１チ
する試料セル１３（１４）と、光’？Ｉ￥検出器１５（
１６）と、例えば２５４　ｎｍの波長を有する共通光源
１７とから成る。従って、分光光度計８ｂの光電検出器
１６には試料溶液のＡＴＰ関連化合物の全ｆｆ１ｔ、　
（Ａ　＋　Ｂ　）に相当する吸光度が検出され、又分光
光度計８ａの光電検出器１５にはＨｘＲ及びＨｘが尿酸
に分解した彼のＡＴＰ閃連化合物の（Ａ）に相当する吸
光度が検出される。斯る光電検出器１５及び１６の電気
信号は計算機兼ＡＤ変換器９によりδ１°算されに値が
求められそしてプリントアウト又はブラウン管４ＪＦに
表示される。

【図面の簡単な説明】

第１図は本発明に係る鮮度判定装置の一実施態様の概略
図である。 ５：試料容器 ６：ろ過器 ７：酵素反応器 ８：計測部 ８ａ、８ｂ：分光光度計 ９：計算機兼ＡＤ変換器

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １）魚介類又は鳥獣肉類の肉片にタンパク質変性剤を加
   えて粉砕し、ＡＴＰ関連化合物を含有した抽出液を採取
   する抽出工程とｔ前記抽出液に中和剤を添加し試料溶液
   を調製する中和工程と；前記試料溶液の所定量に一定量
   の希釈試液を加えた後所定波長の光線にてＡＴＰ関連化
   合物全量の吸光度を測定し、測定値ＣＡ　十Ｂ　）を求
   める工程と；前記試料溶液の所定量に、ＡＴＰ関連化合
   物のイノシン及びヒボキサンチンを尿酸に分解する一定
   量の酵素試液を加えた後前記波長と同じ波長の光線にて
   吸光度を測定し、測定値（Ａ）を求める工程と；前記測
   定値（Ａ＋Ｂ）及び（Ａ）を用い、次式 （ここで、αは吸光度測定に使用される光線によって定
   まる定数である。） に基いてＫ値を求める工程とから成ることを特徴とする
   魚介類及び鳥獣閑煩の鮮度判定方法。 ２）タンパク質変″距剤は過塩紫酸、トリクロル酢１１
   夕又はエタノールである４’！ｒτ：１傭）Ｉ求の範囲
   第１項記載の方法。 ３）中イ■剤は木酢化カリウム、りん酸カリウム、酢酸
   カリウム又は炭酸カリウムである時ｉｔ’ｌ’請求の範
   囲第２項記載の方法。 ４）タンパク質変性剤は５％の過塩業ｒ毀浴液であり、
   中和？ｉｔｌはｉ’！’Ｆ　ｒイやカリウムと水酬２化
   カリウムの組合せ、炭酸カリウムと水ｌ′台化カリウム
   の、１：１１自せ又はりん酸２カリウムと木酢化カリウ
   ムの組合せであるｑ′ケ許請求の１ｊ６ｊ囲第２狛記屯
   乏の方法。 ５）希釈試液はｐＬＩ７．５の０．１　Ｍりん酸緩術液
   であって試峯１溶液の２０倍の容量を有しており、又酵
   素試液ｉ−１：　ｐ　ｉ４．７．５の０．１　Ｍりん［
   υ緩イうｖｇ　ｉ　ｍｅにヌクレオシドホスホリラーゼ
   （ｏ、　ｏ　１ユニット以上）及びキサンチン酸化酵素
   （ｏ、　ｏ　ｏ　ｓユニツト以上）を溶解したものであ
   って試料溶液の２０倍の容量を有している特許請求の範
   囲第１項記載の方法。 ６）光線の波長は２５０　ｎｍであり０、αは１．８で
   ある特許請求の範囲第５項記載の方法。 ７）光線の波長は２５４　ｎｍであり、α＝１．７であ
   る特許請求の範囲第５項記載の方法。 ８）魚介類又は鳥獣肉類の肉片にタンパク質変性剤を加
   えて粉砕し、ＡＴＰＮ連化合物を含有した抽出液を採取
   する抽出工程と；前記抽出液に中和剤を添加し試料溶液
   をＷ、１製する中和工程とＩ　１ｕｌｌ記試料溶液の所
   定量に、ＡＴＰ関連化合物を全て尿酸に分解する一定量
   の第一の酵素試液を加えた後盾定波長の光線にて吸光度
   を測定し、測定値（Ａ＋Ｂ）ｖを求める工程と１前６−
   １試刺溶液の所定量に、ＡＴＰ関連化合物中のイノシン
   及びヒボキサンチンを尿酸に分解する一定量の第二の酵
   素試液を加えた後前記波長と同じ波長の光線にて吸光度
   を測定し、測定値（Ｂ　）、ｖを求める工程と１前記測
   定値（Ａ　十Ｂ　）　ｖ及びｉｌ：Ｂ）ｖを用い、次（
   Ａ＋Ｂ）ｖ に基いてに値を求める工程とから成ることを特徴とする
   魚介類及び鳥獣肉類の鮮度判定方法。 ９）タンパク質変性剤は過塩素酸、トリクロル酢酸又は
   エタノールである特許請求の範囲第８項記載の方法。 １０）中和剤は水′酸化カリウム、りん酸カリウム、酢
   酸カリウム又は炭酸カリウムである特許請求の範囲第９
   項記載の方法。 １１）タンパク質変性剤は５％の過塩素酸溶液であり、
   中和剤は酢ｒツタカリウムと水酸化カリウムの組合せ、
   炭酸カリウムと水酸化カリウムの組合せ又はりん酸２カ
   リウムと水酸化カリウムの組合せである特許請求の範囲
   第１項記戒の方法。 １２）第一の酵素試液は、ｐ　、Ｈ９０の０．０５　Ｍ
   炭酸緩衝液１ｍｌ！にホスファターゼ（ｏ、　ｏ　１ユ
   ニット以上）を溶解した第１の酵素試液と、ｐ　Ｈ７，
   ５の０、２　Ｍりん酸緩衝液１　ｍｌにヌクレオシドホ
   スホリラーゼ（０，０１ユニット以上）及びキサンチン
   酸化酵素（ｏ、　ｏ　ｏ　ｓユニット以上）を溶解した
   第２の酵素試液とから成り１試料溶液は第１の酵素試液
   で１０倍に希釈して酵素反応させ、次で第２の酵素試液
   で更に２倍に希釈して再度酵素反応させた後吸光度を測
   定し、測定値（Ａ　＋　Ｂ　）　ｖが求められるように
   した特許ｆｌｙ求の範囲第８項記載の方法。 １３）第一の酵素試液は更にアデノシンデアミナーゼ（
   ０，０１ユニット以上）を含有して成る特許請求の範囲
   第１２項記載の方法。 １４）第一の酵素試液はｐＨ８，０の００５Ｍ炭酸緩衝
   液１ｖｔｌにホスファターゼ（ｏ、　ｏ　１ユニット以
   上）、ヌクレオシダーゼ（ｏ、　ｏ　１ユニット以上）
   及びキサンチン酸化酵素（ｏ、　ｏ　１ユニット以上）
   を溶解したものであって試料溶液の２０倍の容量を有し
   ている特許請求の範囲第８項記載の方法０１５）第二の
   酵素試液はｐ　Ｉ（７，５の０．１　Ｍりん酸緩衝液１
   ｄにヌクレオシドホスホリラーゼ（ａ、　Ｏ１ユニット
   以上）及びキサンチン酸化酵素（ｏ、ｏｏｓユニット以
   上）を溶解したものであって試料溶液の２０倍の容量を
   有している特許請求の範囲第１２項、第１３項又は第１
   ４項記載の方法。 １６）第−及び第二酵素試液には更にカタラーゼ及び発
   色剤が添加されて成る特許請求の範囲第８項記載の方法
   。 １７）発色剤は４−アミノアンチピリンと、フェノール
   、ジメチルアニリン又はジエチルメタトルイジンとを組
   合せたものである特許請求の範囲第１６項記載の方法。 １８）魚介類又は鳥獣肉類の肉片から調製された試料溶
   液に希釈試液及び酵素試液を加えた後吸光度を測定し、
   Ｋ値を求めることによって魚介類及び鳥獣肉類の鮮度を
   判定する方法に使用する前記希釈試液及び酵素試液を提
   供するための測定用キットであって、１１）　ｐ　Ｈ７
   ５の０．１　Ｍりん酸緩衝液１５０ｍ１入り緩衝液容器
   ２本、（２）ヌクレオシドホスホリラーゼ（３ユニット
   以上）及びキサンチン酸化酵素（１５ユニット以上）を
   含んだ３．２　Ｍ硫酸アンモニウム浴液０．４　ｍｌ入
   り酵素液容器１本、並びに（３）　０．５μＭのイノシ
   ン酸及びイノシン入り標準品１本から成り、前記１本の
   緩衝液容器に前記酵素液容器内の酵素を溶解して酵素試
   液を調製し、他の緩衝液容器内の緩衝液はそのまま希釈
   試液として使用するようにした前記測定用キット。 １９）魚介類及び鳥獣肉類の肉片から試料溶液を調製す
   るための試料容器と、試料容器からの試料溶液を精製す
   るためのコ呵過器と、濾過器を通った試料溶液を二分し
   て導く専管と、前記導管の一方に挿入された、不溶化さ
   れたヌクレオシドホスホリラーゼ及びキサンチン酸化酵
   素を有した酵素反応器と、前記酵素反応器に接続された
   第１の分光光度計と、前記導管の他方に直接接続された
   第２の分光光度計と、前記第１及び第２の分光光度計か
   らの測定値信号を計算しに値を求めそして出力する計算
   機兼ＡＤ要換器とを具備することを特徴とする鮮度判定
   装置。