JPS59159797A - 溶血性連鎖状球菌の選択増菌培地 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 本発明は溶血性ｌｉｌ！鎖状閑の選択的種菌用の培地お
よびその製造法に関するものである。

連鎖状球菌感染症には王としてβ溶血性連鎖状球菌（溶
連菌）に起因する狸紅熱、扁桃炎、咽頭炎、中耳炎、１
ｌｉｆｆｌａ疹、丹毒、敗血症、亜急性心内膜炎などが
知られており、鼎連困は筐た二次的には腎炎、リウマチ
熱、リウマチ性心臓病などの原因になっている。さらに
、近年尿路感染症、新生児の腸炎、髄膜炎、特発性呼吸
困難症などの起因菌（王としてβ群溶連菌）としても重
視されて米でいる。

これら感染症の診断にあたっては、患者病巣からの菌の
分離同定が必要とされる。この際、患者病巣から採取し
ん咽頭スワブ、尿その他の検体には、溶連菌の他にブド
ウ状球菌、インフルエンず菌、ナイゼリア等が共存して
おり、血液寒天を用いる直接法のみでは、溶連菌を適確
に分離培養するのは困難なことが多い。

即ち、直接法のみによる方法では、共存するブドウ状０
：菌等の夾雑菌によって、溶連菌の分離ができにくり、
また溶連菌そのものの存在が他の菌により隠蔽されたり
、集落形成を阻止されたりする。このような場合、血液
寒天による直接法の結果のみにもとづいて、溶連菌陰性
として判定することは誤った診断を招くことになり、医
療への寄与が妨げられる。

このような観点から、本発明は混合フローラから分取し
た検体から、共イｒ１−るブドウ状球菌、ナイセ゛リア
等の増殖を抑制しつつ、溶連菌を選択的に種菌し、分離
と検索を効果的に実施しうる溶連菌の選択種菌培地を提
供することを目的としたものである。又、従来の溶連菌
の種菌培地では、多くの場合血液又は血球を用いている
が、培地調製操作上あるいは培地の安定性の面で制約を
うける。

本培地では血液又は血球を用いずに種菌を行うことので
きる安定な培地を提供する。

これまでの種菌培地はいづれも、栄養成分としてブドウ
糖加肉水ブイヨン、ハートインフュージョンブイヨン、
酵母エキス、トリプトース等の成分を王とし、あるいは
これに血液を加えたものを用いて、溶連菌の種菌効果を
期待し、他方においてブドウ状球菌、緑連菌等の増殖を
抑制するために望化ソーダ、クリスタルバイオレット、
カンンアー等の抑制成分を加えたものである。しかし、
これらの培地では種菌成分と抑制成分との調節が不充分
なため、あるいは血液等を用いているために次のような
欠陥が見られる。■溶連菌はよく生＊するが、ブドウ状
球菌等の生育抑制が不充分である。■ブドウ状球菌等は
抑制されるが、溶連菌の生育も抑制されて充分な生育が
見られない。■血液を用いることが必須であり、長期間
の使用にたえない。従って、いずれも充分に目的を達し
ていない。

本発明は前記のような栄養成分を含む培地組成に増殖抑
制成分としてクリスタルバイオレットならびに窒化ソー
ダを加え、さらに血液にかえて活性炭を加えたものを基
本にして、一方では溶連菌に対して増殖促進効果を示し
、他方ではブドウ状球菌抑制効果を微妙に調節できるよ
うな成分を広く恢紫し、実験を重ねた結果、大豆をはじ
めとする豆類の脂質成分であるか、あるいはオレフィン
酸をはじめとする脂肪酸を構成成分として含む界面活性
剤である有効成分を見出すことにより完成されたもので
ある。

本発明の培地は、培地の基本組成に上記の有効成分のい
づれか及び又は両者を添加して組み合わせることによっ
て調製されるが、本発明の培地を用いることにより、ブ
ドウ状球菌、インフルエンサ゛′菌、ナイゼリア等の混
合フローラを含む検体について増１培養を行う場合には
、ブドウ状球菌等の混在菌の生育を抑制して、溶連菌を
選択的に種菌せしめることが可能であり、容易に、且つ
適確に触連菌の分離と検索を実施することができる。

尚、本発明に用いられる、増殖ならびに阻害を調節する
有効成分は次のようなものである。

即ち、第一には大豆、小豆、ナタ豆等の豆類のアセトン
抽出物中のエーテル可溶性区分として得られる脂質成分
。第二にはポリオキシエテレンソルビクン脂肪酸エステ
ル、ンルビタン脂肪敵エステル、ダリセロール脂肪酸エ
ステル、ポリオキシエチレングリコール脂肪酸エステル
、ポリオキシ脂肪酸等の界面活性剤（例えばツイーン８
０．ツイーン８１、ツイーン８５、スパン８０．スパン
８５　（商品名）、ダリセロールオレエート（モノオレ
フィン）等）である。又、上記の脂質成分と界面活性剤
とを混合して用いることも可能である。

なお、不培地組成を凍結乾燥法あるいは噴霧乾燥法等に
よって乾燥して粉末として保存し、再び所定量の蒸溜水
を加えて滅菌した後便用することも可能である。

次に実施例および実験例によって本発明の構成および効
果を詳細に説明する。

以下の実施例における効果の確昭は次の試験方法によっ
て行つり。

本発明の試験に用いた溶連菌菌株は、特記する以外は次
の４株である。

Ａ　１　：ストレプトコッカス　ビメデネス　（Ａ群Ｉ
ＩＴｊＩ６２：ストレプトコッカス　ピオゲネス　（Ｂ
群Ｉａｌ　　０９０Ａ３；ストレフ０トコツカス　ピオ
ゲネス　ｓｐ。

（臨床分離株、Ａ群） 扁４：ストレズトコッ力ス　ピオゲネス　ｓｐ。

（臨床分離株、Ｂ群） 又、ブドウ状球菌としては次の２株を用いた。

Ａ５；スタフィロコッカス　アウレウス　　（２０９ｐ
）Ａ　１　Ｑ　；スタフィロコッカス　アウレウス（Ｆ
ＤＡ２４３）上記の菌株は、あらかじめトッドヒユーウ
ィツト液体培地（水１００ｔｎｌ当り、牛心臓浸出液５
゜２、ペン０トン２ｆ、デキストロース０２２、食塩０
．２２、リン酸ソーダ０．０！Ｍ、炭酸ソーダ０．２２
の組成、ｐＨ７，８１を用い、６７℃、１８時間前培養
する。前培養後の菌液をハートインフュージョンブロス
（水１Ｕ〇−当り、牛心臓浸出物１２、ペプトン１２、
食塩０．５ｇ′）を用いて稀釈した後、本発明の種菌培
地に接種する。培養は６７℃、１８時間行い、種菌ある
いは抑制の効果を調べる。

増菌培養後の溶連菌の菌数はハートインフュージョン血
液寒天培地（上記ハートインフュージョンブロスに１０
％馬脱繊維血液及び寒天１．５％を加えたもの）を用い
て測定した。

ブドウ状球菌の抑制の程度はハートインフュージョン寒
天培地を用いて菌数を測定することによった。増菌培養
後の種菌あるいは抑制の程度は種菌率（増菌培養後の菌
数を接種菌数℃除′ｊ）をもって示した。

実施例１ 下記の培地組成を用い、界面活性剤のｒｉｉ類を変えて
本発明の溶連菌選択種菌培地を調製した。

成　　　分　　　　　　　　　配合量 ウシ心臓浸出物　　　　　　　　１ｆ ベグトン　　　　　　　　　１２ トリプトース　　　　　　　　　　　０．５９酵母エキ
ス　　　　　　　　　　０．５２食　　塩　　　　　　
　　　　　　　　　６．５２活性炭　　　　　０．１６
を 水　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　１１８
ｔｎｌクリスタルバイオレツト　　　　　０．０１１ｆ
窒化ソーダ　　　　　　　　　　Ｏ，’０１５　ｒ界面
活性剤　　　　　　　　　　（３，０４ｒｎＩ。

ｐＨ６，８ 第１表に示す界面活性剤を使用して上記培地組成を調製
後、１２１℃、１５分間高圧滅菌した。

上記の溶連菌選択種菌培地において、各種の界面活性剤
を試験した成績を第１表に示す。

第２表の如く、オレイン酸を含む界面活性剤が溶連菌に
対して著しい種菌効果を示すのに対し、ブドウ状球菌の
生育を抑制した。尚、パルミチン酸、ステアリン酸、ラ
ウリル酸を含む界面活性剤もこれに次ぐ種菌効果を示し
たＯ 実施例２ ゛界面活性剤Ｘ代えて豆類１７から抽出した脂質成分を
使用すること以外は実施例１の培地組、成を用いて溶連
菌選択種菌培地を調製した。

豆類の脂質成分は次のように調製した。

乾燥した豆（本実施例では大豆）を粉砕したもの１２に
アセトン４０ｍ１を加えて抽出を行ったＯ得られた抽出
液からアセトンを溜去し、油状物を濾過した後、エーテ
ルを加えて抽出を行った。得られた抽出液からエーテル
を溜去し目的の脂質成分を得た。

この大豆脂質成分を用いた溶連菌選択種菌培地における
成績を第２表に示す。

第２表 増菌培養時の接種菌数は１００　　（ブドウ状球菌Ａ５
は７００）前後である。

第２表に見られるように、供試した溶連菌の試験菌株は
いづれも１０４〜１０６と、いづれも著しい種菌を示し
たのに対し、ブドウ状球菌は生育が抑制された。ブドウ
状球菌については少量の菌数１０〜ｉｏ３　ｔでは菌数
は減少し、多量の菌数（培地１−当ｖ１０７個）を接種
しても、閑の増加は見られなかった。

実施例６ 上記の培地に界面活性剤としてツイーン８ｏを用い、凍
結乾燥を行って、乾燥粉末培地を調製した後、水を加え
て滅菌を行って試験した場合の成績を第６表に示した。

増菌培養時の接種菌数は１００前後である。

第６表の如く、培地組成を凍結乾燥した後、水を加えて
液体培地として複元して、滅菌した場合、対照の未乾燥
の培地と同様に溶連菌の種菌効果とブドウ状球菌の抑制
効果を示した。

実施例４ 溶連菌のタイプカルチャー９種ならびに臨床分啼株ろＨ
ｊＪｉ、合計４０８８について、本発明のツイーン８０
を使用した培地による種菌効果をしらべた結果を第４表
に示す。

第４表に見られるように、試験に用いたＡ群、Ｂ群、０
群に縞する各菌種はいづれもが、１８４乃至１［１１６
の種菌率を示した。従って、本発明の培地は溶連菌に対
して、広く種菌効果を示まことが確認された。尚、本試
験に用いた培地は熱論、ブドウ状球菌の増殖は充分に抑
制することを確認した。

実験５１」１ 本発明によるツイーン８０を使用した培地とバイク溶連
菌ならびにブドウ状球菌に対する効果を比較した。

第５表のようにパイク溶連菌培地では、ブドウ状球菌は
抑制しているが、°供試溶連菌の１種類のみに種菌が見
られるが、他の溶連菌に対する種菌効果が認められない
。これに対し７、本発明による培地ではブドウ状球菌を
抑制しつつ、且つすべての溶連菌に対して、顕著な種菌
効果を示した。

カシトン　　　　　　　　１０　　　２酵母エキス　　
　　　　１０　　　ｖ デキストロース　　　　　０．２２ 窒化ソーダ　　　　　　　０．０６５　ｒクリスタルバ
イオレット　　　００υ２２滅菌　（１２１℃、１５分
）後、５チの血液を加えも実験例２ 本発明によるツイーン８ｕを使用した培地と市販の、溶
連菌の種菌・選択・輸送用培地（ＥＵＢ培地）との溶連
菌ならびにブドウ状球菌に対する効果を比較した。

第６表 第６表で明らかなように本発明の培地では顕著に俗連伽
の増殖を支持する一方、ブドウ状球菌に対しても、極め
て効果的に、しかも谷接梗菌濃度共に抑制が見られるの
に対し、ＥＵＢ培地においては溶連１）１に対しての種
菌効果は認められるか、ブドウ状球菌に対しては各接種
菌線反共に種菌が見られ、殆ど抑制が認められなかった
。

ＥＵＢ培地組成　（ＩＬ１００ｍｌ当り）ウシ心臓浸出
物　　　　５１ＪＩ：ｌ　　　　ｇペズトン　　　　　
　　　１０　　２ トリグトース　　　　　　　　　５　　　　タビール酵
母抽出４勿　　　　　４ｆ 塩化ナトリウム　　　　　３２．５　　　Ｆ活性炭　　
　　２ｔ サポニン　　　　　　　　　１２ ウレアーゼ　　　　　　　　　１２ 窒化ソーダ　　　　　　　　０，１ｔ ＤＬ−カンファー　　　　　　０．５２クリスタルバイ
オレツト　　　０．００１ｙｐＨ６，８ （外４名）

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １）（イ）豆類の脂質成分、及び／又は仲）脂肪酸を構
   成要素として言む界面活性剤、を必須成分とすることを
   特徴とする溶血性連鎖状球菌の選択的種菌用の培地。 ２）（イ）豆類の脂質成分、及び／又は（ロ）脂肪酸を
   構成要素として含む界面活性剤、を培地成分と配合する
   ことを特徴とする溶血性連鎖状球菌の選択的種菌用の培
   地の製造法。