JPS59204129A - 免疫増強剤 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 この発明はバガスなどキシロース成分に富む固体培地に
て培養された椎茸等の菌糸体培養物中に含有されている
キシロースを主成分とする糖蛋白および含窒素低分子物
質からなる免疫増強剤に関するものである。

細菌、ウィルス、真菌による感染症および発癌と生体の
免疫との関係は学問的にも明らかである。

そして、免疫能の低下が多（の感染症に結び付き、発癌
を誘発し、担癌状態では更に免疫能の低下が進み、また
生体の防御機構は複雑で、体液中に存在する多くの細胞
および物質が連鎖的に関与している。

ところで、免疫機構は体液性免疫と細胞性免疫があり、
前者は免疫グロブリンによる抗原沈降や食細胞によるク
リアランス等が主な作用で、全身感染症から生体を防御
し、後者はＴ−ｃｅｌｌから産生される種々のリンフ才
力インによるマクロファージの活性化が主な作用で、細
胞寄生性の抗原の排除に関与している。

然して、加齢や薬物投与、過労等により上記の免疫機構
が低下して多くの感染症に対する抵抗力が弱まり発癌を
誘発されるのであるが、体液性免疫、細胞性免疫の何れ
か一方または両方の低下を防ぐことにｊ；り感染症の予
防および治療が可能となることは学問的にも明らかであ
る。一般的には弱毒の抗体を与えるワクチンが開発され
ているが、ワクチンが存在しない抗原または普通は低毒
と考えられている微生物による感染症等があり、総体的
な免疫力の増強が望ましい場合が必要であるが、従来強
い副作用を有していたり、逆にアナフィラキシ−を誘発
したりする物質が多く、一長一短があったが、本物質は
副作用を有さず体液性免疫および細胞性免疫の両方の免
疫能を増強することに特徴がある。そのため、ウィルス
についてもＨｅｐａｔｉｔｉｓ　　ｖｉｒｕｓ　、　　
Ｉｎｆｌｕｅｎｚａ　　ｖｉｒｕｓ　、　Ｈｅｒｐｅｓ
ｖｉｒｕｓとその有効スペクトラムは広い。

本発明に係る免疫増強剤は癌、各種ウィルス病。

あるいは免疫不全の疾患（アレルギー性疾患）等に対し
て免疫増強効果が認められた。また、本発明に係る免疫
増強剤がいがなる作用機作により免疫能を増強している
かは学問的には未解決であるが、該増強剤中のキシロー
スを主成分とする糖蛋白および含窒素低分子物質が抗体
産生細胞を増加しているか、あるいは抗体産生能力を高
めているからに他ならないと推察される。また、一般的
に病原性が低いと言われている真菌の感染症は悪性腫瘍
、膠原病等の消耗性基礎疾患による免疫状態の低下が大
きな原因とされているが、その代表的な真菌であるｃａ
ｎｄｉｄａ　　ａｌｂｉｃａｎｓにも有効であり、悪性
腫瘍の誘発も真菌の感染症と類似する面もあるので、本
物質の用途は非常に広い。

この発明はキシロース成分に富む固体培地にて培養され
た、菌糸体培養物中に含有されているキシロースを主成
分とする糖、蛋白および含窒素低分子物質を有効成分と
するもので、安全性が高く、かつ幅広い感染症防御に作
用する免疫増強剤を提供することを目的とするものであ
る。

以下本発明の詳細な説明する。

本発明者らは先にバカス等繊維質成分を主材とし、これ
に米糠等を加えてなる固体培地にて椎茸など担子菌類に
属する菌糸体を培養し、この菌糸体培養物から抗癌物質
を抽出する抽出方法について発明を完成しているが（特
開昭５７−２０６６１８号）、本発明は上記発明を発展
させ、その抽出液の有効利用を更に研究した結果得られ
たものである。

すなわち、上記抽出液を分析した結果、該抽出液中には
キシロースを主成分とする糖蛋白および含窒素低分子物
質が多量に喬有されており、かつ培地成分を分析した結
果、例えばバカス（砂糖きびのしぼりかす）、米糠等に
はキシロースが多量に含まれており、よって、本発明者
らはこのキシロース成分を主成分とする糖、蛋白および
含窒素低分子物質が免疫増強作用を機作しているものと
認定した。

本発明は上記のごとき理由からキシロース成分に富む培
地を採択しなければならないが、これには例えばバガス
、むぎわら、いねわら、とうもろこしの茎葉、杉などの
単子葉植物が挙げられ、また、培地栄養源として米糠が
挙げられる。

また、本発明において使用される担子菌類としては、椎
茸、平葺イ榎茸、なめこ、しめじ等が挙げられるが、椎
茸菌糸体培養物から抽出するのが最も活性が優れていた
。

本発明に係る免疫増強剤はこれを、ガスクロマトグラフ
ィーにより分析した結果、キシロースを主成分とする糖
蛋白および含窒素低分子物質の含有されていることが判
明した。

以下実施例を説明する。

粉砕したバガス９０％、米糠５％、フスマ等の栄養源５
％を配合した固体培地を常法により殺菌し、これに椎茸
の固体種菌を接種する。接種の完了したる培地は室温１
８℃〜２０℃、湿度６０％に空調した培養室内に移して
菌糸体の培養を行なう。

上記培養の完了したる培地は栽培室に移して放置する。

すると培地表面から椎茸子実体の発生が始まるが、この
時点において培地を栽培室から取り出し、これを粉砕機
により栂指大に粉砕する。

この粉砕した培地（菌糸体と培地との混合した状態のも
ので、以下これを菌糸体培養物という）はこれをタンク
中に充填するとともに、菌糸体培養物６００９に対し、
ＰＨ３〜ＰＨ８に調整した５にの清水を加え、一定の時
間を保ちつつ段階的に変化させて混合、撹拌を行なう。

すなわち温度は４０℃〜６０℃に各ＰＨに合わせて変化
させるが、これは菌糸体培養物中に存在するセルラーゼ
、キチナーゼ、グルコシダーゼ、プロテアーゼなどの酵
素の活性条件に合わせ、エンチメーションを促すためで
ある。最終的には酵素の失活を兼ねて温度を６０℃に上
昇させて混合、撹拌を行なうが、この撹拌によって菌糸
体成分、菌糸体の代謝産物ａ′３よび培地成分中の木質
分解物が水に溶脱される。

かくして得られた懸濁液は、これをネル布地の濾過袋に
充填し、これを加圧、濾過してその濾液をメンブランフ
ィルタで濾過、滅菌し、抽出液を得る。

次に前記の如くして得られた抽出液を凍結乾燥せしめて
粉末体（以下ＬＥＭと称する）とする。

実施例 （１）実施者　　富山医科薬科大学薬学部生物学教室（
日本薬学会第１０３年会発表） ＜２）ＬＥＭのアルコール沈澱部分を５ｅｐｌ＋ａｒｏ
ｓｅ６Ｂで分画し、２つのピークを得て、 ｖｏｉｄ側よりＬＡＰｌ、ＬＡＰ２とした。

（３）マクロファージ　　モルモットより誘導した腹腔
滲出細胞のマクロファージ （４）ラット腹水肝癌（Ａ８４．１４）の蛋白質（５）
実験方法　　ドンリュウラットにＡｌ−１４１４を移植
する前日よりＬＡＰｌ、ＬＡ Ｐ２を腹腔内投与し、ＡＨ４１４移植 後２〜８日まで１日毎にｌｌｉ！臓を摘出し細胞化する
。ガラス毛細管にモルモッ トマクロファージ、牌臓細胞、抗原蛋 白溶液を重層し、シャーレで・４８時間培養した後に遊
走細胞が作る面積を測 定する。

（６）ＬＡＰ１投与群は投与後４日〜６０の間ぐマクロ
フッ・−ジ遊走の活性が認められたが、ＬＡ１〕２では
活性化は明らかではなかった。なお参考図の図面代用写
真中、左側がＬΔＰ１投与群を、右側がＬＡＰ２投与群
を示す。

ＬＡＰｌはΔｒａｂｉｎｏｓｅ、　Ｇ　１ｕｃｏｓｅ、
　Ｑａｌａｃｔｏｓｅ。

Ｍ　ａｎｎｏｓｅｌＺ　ｙｌｏｓｅより構成される多糖
と産生アミノ酸を主とするペプタイドよりなる５０〜８
０万分子量のベプヂドグルカンであることが判明した。

実施例 〈１）実施者　大阪市立大学医学部第２生化学教室 （２）細胞性免疫において、抗体産生細胞は非特異的リ
ンパ球活性化物質によるｉｎ　　ｖｉｔｒｏにお（ブる
リンパ球の幼若化と同じ経過をたどって増殖を行なう。

リンパ球をＰＷＭの存在下で培養す ると、Ｂ　１ａｓｖｃｅｌｌとなりＤＮＡ合成が更新す
る。そこでＤＮＡ前駆物質とし て、Ｈ３−ｔｈｙｍｉｃｌｉｎｅを加えて培養し細胞内
に取込まれたＨ３−　ｔｈｙｍｉｄｉｎｅを測定づ゛る
ことによりリンパ球の活性化の程度を知る。

（３）リンパ球　ヒト末梢血のリンパ球（４）実験方法
　リンパ球懸濁液にＰＷＭおよびＬＥＭを加えて９６時
間培養し、次に ３１−（−ｔｈｙｍｉｄｔｎｅを加え、２４時間培養し
た後細胞を溶解し、３　Ｈ−ｔｈｙｍｉｄｉｎｅの取り
込みをシンデレージョンカウンタで計測した。

（５）結果　ＬＥＭはＰＷＭによるＤＮＡ合成をＬＥＭ
Ｉ度１００〜３００μｇ／ｍＩＡの範囲で促進した。ま
たＬＥＭのみで も、ＤＮＡ合成促進作用を有しでＪ３す、ＬＥＭはＬ　
ｙｍｐｈｏｃｙｔｅ　ｂｌａｓｔｏｇｅｎｉｃ　ｆａｃ
ｔｏｒであることが確認された。

実施例 （１）実施者　大阪市立大学医学部第２生化学教室 く２）抗体産生に関する実験 （３）実験方法　ＴＮＰ−３ＲＢＣで免疫化したマクロ
ファージにＬＥＭを添加して２ ４時間培養し、その培養上澄みを取り、ＰＷＭと共にヒ
ト末梢血細胞を添加し て抗ＴＮＰ−３ＲＢＣの産生をｐ　ｌａｇｕｅ法により
確認した。

ＬＥＭはＰ’ＷＭによるＴＮＰ−８ＲＢＣに対する抗体
産生を促進し、その最適′ａ度は２００μｑ／ｍ　Ｊｌ
であった。またしＥＭそのものにもわずかながら抗体産
生活性が認められた。

実施例 （１）ヒト末梢血をＣ０ｎＣａ１ｌａＶａ　ｌ　１ｌｌ
ＡおよびＬＥＭで刺激培養し、生合成される１ｎｔｅｒ
　　Ｉｅｎｋｉｎ−１の生成量を定量 Ｃ０ＤＡにＬＥＭ５０μｇ／ｍ　１４以上添加すること
によりＩＬ−１の生成が大幅に増加した。

次にＬＥＭを５ｅｐｈａｄｅｘＧ−７５テ分画シ、紫外
部吸収を示す３つの画分（ｖｏｉｄよりＦｌ、、Ｆ２゜
［：３）を得Ｉζ。（第２図参照。） 次に上記Ｆ１．Ｆ２．Ｆ３各の画分のＩｎｔｅｒｌｅｎ
ｋｉｎ　−１ａｓｓａｙを行なった。

Ｖｏｔａｌに近いＦ３　Ｎ１９子ｆｆ１１０．０００ｇ
。

下の含窒素化合物）に近い活性が認められノζ。

実施例 （１）実施者　明治薬科人学微生物学教至（２）免疫抑
制状態における真菌の感染症に対するＬＥＭの効果を確
認した。

（３）動物実Ｍ　　マウスｆｃＲＫ（）６〜７週齢 （４）攻撃筒　ｃａｎｄｉｄａ　　ａｌｂｉｃａｎｓ　
（Ｊ−１０１２１０”　　／ｍｏｌｔｓ（３ （５）免疫抑制剤　ｃＯｒｔｉＳＯｎｅ（６）ＬＥＭ投
与投与法び経路　３００μ（７／ｍ。

ｕｓｅ腹腔内投与 （７）実験群Ｍ４成 （８）Ｍ果　Ｑ、　ａｌｂｉｃａｎｓ接種後２５日の生
存率Ｇ−１２５％　　Ｇ−ＩＩ８３％　　Ｇ−Ｉ１１１
００％　　Ｇ−ＩＶ５０％ 以上よりしＥＭは免疫抑制状態におけるマウスの感染防
御において有効性が認められ、その投与方法は長期間投
与の必要はなく、菌の感染を受りてから投与しても充分
効果を発揮することが判明し　Ｉこ　。

【図面の簡単な説明】

第１りはセファデックスＧ７５により本願発明に係る物
質を展開した状態を示すか画展開図である。 手続補正書 １．事件の表示 特願昭５８５８−７９ｌ４ ５、発明の名称 免疫増強剤 ３、補正をする者 事件との関係　　特許出願人 住　所　　千葉県野田市清水１２１番地名　称　　　野
田食菌工業株式会社 代表名飯塚千代吉 ４、代理人〒１０１ 住　所　　東京都千代田区内神田１丁目１５番１６号６
、補正の対象 明細書全文及び図面　　２゜ 明　　　　　細　　　　　書 １、発明の名称 免疫増強剤 ２、特許請求の範囲 （１）キシロース成分に富む固体培地にて培養された椎
茸等担子菌類に属する菌糸体培養物中のキシロースを主
成分とする糖、蛋白および含窒素低分子物質からなる免
疫増強剤。 （２）前記固体培地はバガスと米糠からなる特許請求の
範囲第１項記載の免疫増強剤。 （３）前記担子菌は椎茸であることを特徴とする特許請
求の範囲第１項記載の免疫増強剤。 ３、発明の詳細な説明 この発明はバガスなとキシロース成分に富む固体培地に
て培養された椎茸等の菌糸体培養物中に含有されている
キシロースを主成分とする糖、蛋白および含窒素低分子
物質からなる免疫増強剤に関するものである。 Ｉｌｌ菌、ウィルス、真菌による感染症および発癌と生
体の免疫との関係は学問的にも明らかである。 そして、免疫能の低下が多くの感染症に結び付き、発癌
を誘発し、担癌状態では更に免疫能の低下が進み、また
生体の防御機構は複雑で、体液中に存在する多くの細胞
および物質が連鎖的に関与している。 ところで、免疫機構は体液性免疫と細胞性免疫があり、
前者は免疫グロブリンによる抗原沈降や食細胞によるク
リアランス等が主な作用で、全身感染症から生体を防御
し、後者は１−−ｃｅｌｌから産生される種々のリンフ
才力インによるマクロファージの活性化が主な作用で、
細胞寄生性の抗原の排除に関与している。 然して、加齢や薬物投与、過労等により上記の免疫機構
が低下して多くの感染症に対する抵抗力が弱まり発癌を
誘発されるのであるが、体液性免疫、細胞性免疫の何れ
か一方または両方の低下を防ぐことにより感染症の予防
および治療が可能となることは学問的にも明らかである
。一般的には弱毒の抗体を与えるワクチンが開発されて
いるが、ワクチンが存在しない抗原または普通は低毒と
考えられている微生物による感染症等があり、総体的な
免疫力の増強が望ましい場合が必要であるが、従来強い
副作用を有していたり、逆にアナフィラキシ−を誘発し
たりする物質が多く、一長一短があったが、本物質は副
作用を有さず体液性免疫Ｊ３よび細胞性免疫の両方の免
疫能を増強することに特徴がある。そのため、ウィルス
についてもＨｅｐａｔｉｔｉｓ　　ｖｉｒｕｓ　１１　
ｎｆｌｕｅｎｚａ　　ｖｉｒｕｓ　、　Ｈｃｒｐｅｓｖ
ｉｒｕｓとその有効スペクトラムは広い。 本発明に係る免疫増強剤は癌、各種ウィルス病。 あるいは免疫不全の疾患（アレルギー性疾患）等に対し
て免疫増強効果が認められた。また、本発明に係る免疫
増強剤がいかなる作用機作により免疫能を増強している
かは学問的には未解決であるが、該増強剤中のキシロー
スを主成分とする糖、蛋白および含窒素低分子物質が抗
体産生細胞を増加しているか、あるいは抗体産生能力を
高めているからに他ならないと推察される。ま１〔、一
般的に病原性が低いと言われている真菌の感染症は悪性
腫瘍、膠原病等の消耗性基礎疾患による免疫状態の低下
が大きな原因とされているが、その代表的な真菌である
ｃａｎｄｉｄａ　　ａｌｂｉｃａｎｓにも有効であり、
悪性腫瘍の誘発も真菌の感染症と類似する面もあるので
、本物質の用途は非常に広い。 この発明はキシロース成分に富む固体培地にて培養され
た、菌糸体培養物中に含有されているキシロースを主成
分とする糖、蛋白および含窒素低分子物質を有効成分と
するもので、安全性が高く、かつ幅広い感染症防御に作
用する免疫増強剤を提供することを目的とするものであ
る。 以下本発明の詳細な説明する。 本発明者らは先にバカス等繊維質成分を主材とし、これ
に米糠等を加えてなる固体−培地にて椎茸など担子菌類
に属する菌糸体を培養し、この菌糸体培養物から抗癌物
質を抽出する抽出方法について発明を完成しているが（
特開昭５７−２０６６１８号）、本発明は上記発明を発
展させ、その抽出液の有効利用を更に研究した結果得ら
れたものである。 すなわち、上記抽出液を分析した結果、該抽出液中には
キシロースを主成分とする糖、蛋白および含窒素低分子
物質が多量に含有されており、かつ培地成分を分析した
結果、例えばバカス（砂糖きびのしぼりかす）、米糠等
にはキシロースが多聞に含まれており、よって、本発明
者らはこのキシロース成分を主成分とする糖、蛋白およ
び含窒素低分子物質が免疫増強作用を機作しているもの
と認定した。 本発明は上記のごとぎ理由からキシロース成分に富む培
地を採択しなければならないが、これには例えばバガス
、むぎわら、いねわら、とうもろこしの茎葉、杉などの
単子葉植物が挙げられ、また、培地栄養源として米糠が
挙げられる。 また、本発明において使用される担子菌類としては、椎
茸、平葺、榎茸、なめこ、しめじ等が挙げられるが、椎
茸菌糸体培養物から抽出するのが最も活性が優れていた
。 本発明に係る免疫増強剤はこれを、ガスクロマトグラフ
ィーにより分析した結果、キシロースを主成分とする糖
、蛋白および含窒素低分子物質の含有されていることが
判明した。 以下実施例を説明する。 粉砕したバガス９０％、米糠５％、フスマ等の栄養源５
％を配合した固体培地を常法により殺菌し、これに椎茸
の固体種菌を接種する。接種の完了したる培地は室温１
８℃〜２Ｃ１、湿度６０％に空調した培養室内に移して
菌糸体の培養を行なう。 上記培養の完了したる培地は栽培室に移して放置する。 すると培地表面から椎茸子実体の発生が始まるが、この
時点において培地を栽培室から取り出し、これを粉砕機
により栂指大に粉砕する。 この粉砕した培地（菌糸体と培地との混合した状態のも
ので、以下これを菌糸体培養物という）はこれをタンク
中に充ｔｉするとともに、菌糸体培養物６００ｇに対し
、Ｐ　Ｈ３〜ＰＨ８に調整した５℃の清水を加え、一定
の時間を保ちつつ段階的に変化させて混合、撹拌を行な
う。すなわち温度は４０℃〜６０℃に各ＰＨに合わせて
変化させるが、これは菌糸体培養物中に存在するセルラ
ーゼ、ギチナーゼ、グルコシダーゼ、プロテアーゼなど
の酵素の活性条件に合わせ、エンチメーションを促すた
めである。最終的には酵素の失活を兼ねて温度を６０℃
に上昇させて混合、撹拌を行なうが、この撹拌によって
菌糸体成分、菌糸体の代謝産物および培地成分中の木質
分解物が水に溶脱される。 かくして得られた懸濁液は、これをネル布地の濾過袋に
充填し、これを加圧、濾過してその濾液をメンブランフ
ィルタで濾過、滅菌し、抽出液を得る。 次に前記の如くして得られた抽出液を凍結乾燥せしめて
粉末体（以下ＬＥＭと称する）とする。 実施例 （１）実施者　　富山医科薬科大学薬学部生物学教室（
日本薬学会第１０３年会発表） （２）ＬＥＭのアルコール沈澱部分を５ｅｐｈａｒｏｓ
ｅ６Ｂで分画し、２つのピークを得て、 ｖｏｉｄ側よりＬＡＰｌ、ＬＡＰ２とした。 （３）マクロファージ　　モルモットより誘導した腹腔
滲出細胞のマクロファージ （４）ラット腹水肝癌（ＡＨ４１４）の蛋白質（５）実
験方法　　ドンリュウラットにＡ　ｌ−１４１４を移植
する前日よりＬＡＰｌ、ＬＡ Ｐ２を腹腔的投与し、Ａｌ−１４１４移植１多２・−８
日まで１日毎に牌臓を摘出し細胞化する。ガラス毛細管
にモルモッ トマクロファージ、牌臓細胞、抗原蛋 白溶液を重層し、シャーレで４８時間 培養した後に遊走細胞が作る面積を測 定する。 （６）ＬＡＰ１投与群は投与後４日〜６日の間でマクロ
ファージ遊走の活性が認められたが、ＬＡＰ２では活性
化は明らかではなかった。なお参考図の図面代用写真中
、左側がＬＡＰ１投与群を、右側がＬＡＰ２投与群を示
す。 Ｌ　Ａ　Ｐ　１はＡ　ｒａｂｉｎｏｓｅ、　Ｑ　１ｕｃ
ｏｓｅ、　Ｑａｌａｃｔｏｓｅ。 Ｍａｎｎｏｓｅ、　ｘｙｌｏｓｅより構成される多糖と
産生アミノ酸を主とするベプタイドよりなる５０〜８０
万分子量のペプチドグルカンであることが判明した。 実施例 （１）実施者　大阪市立大学医学部第２生化学教室 （２）細胞性免疫において、抗体産生細胞は非特異的リ
ンパ球活性化物質によるｉｎ　　ｖｉｔｒｏにおけるリ
ンパ球の幼若化と同じ経過をたどって増殖を行なう。 リンパ球をＰＷＭの存在下、で培養す ると、ＢｌａｓＶｃｅｌｌとなりＤＮＡ合成が更新する
。そこでＤＮＡ前駆物質どし て、Ｈ３−ｔｈｙｍｉｄｉｎｅを加えて培養し細胞内に
取込まれたＨ　３−ｔｈｙｎ＋１ｄｉｎｅを測定するこ
とによりリンパ球の活性 化の程度を知る。 （３）リンパ球　ヒト末梢血のリンパ球（４）実験方法
　リンパ球懸濁液にＰ　Ｗ　Ｍ　ｉＪ３よびＬＥＭを加
えて９６時間培養し、次に ３　Ｈ−ｔｈｙｍｉｄｉｎｅを加え、２４　時間培養し
た後細胞を溶解し、３　Ｈ−ｔｈｙｍｉｄｉｎｅの取り
込みをシンチレーションカウンタで計測した。 （５）結果　ＬＥＭはＰＷＭによるＤＮＡ合成をＬＥＭ
１１度１００〜３００μ９／ｍ乏の範囲で促進した。ま
たしＥＭのみで も、ＤＮＡ合成促進作用を有しており、ＬＥＭはＬ　ｙ
ｍｐｈｏｃｙｔｅ　ｂｌａｓｔｏｇｅｎｉｃ　ｆａｃｔ
ｏｒであることが確認された。 実施例 （１）実施者　大阪市立人学医学部第２生化学教室 （２）抗体産生に関する実験 （３）実験方法　ＴＮＰ−８ＲＢＣで免疫化したマクロ
ファージにＬＥＭを添加して２ ４時間培養し、その培養上澄みを取り、ＰＷＭと共にヒ
ト末梢血細胞を添加し て抗ＴＮＰ−８ＲＢＣの産生をｐ　ｌａｇｕＣ法により
確認した。 ＬＥＭはＰＷＭによるＴＮＰ−８ＲＢＣに対′？ｌ−る
抗体産生を促進し、その最適濃度は２００μＱ／Ｉｆで
あった。またＬＥＭそのものにもわずｆ’Ｘながら抗体
産生活性が認められた。 実施例 （１）Ｅ：ｌ−末梢血をｃｏｎｃａｎａｖａ　ｌ　ｉ　
ｎＡおよびＬＥＭテ刺激培養Ｌ／し生合成サレ８ｉｎｔ
ｅｒ　　１ｅｕｋｉｎ−１の生成量を定量 Ｃ０ｎＡにＬｌ：Ｍ３Ｃ１［］　／ｍ　１．以上添加す
ることによりＩＬ−１の生成が大幅に増加しＩＣ。 次にＬＥＭを５ｅｐｈａｄｅｘＧ　−７’　５で分画し
、紫外部吸収を示’？Ｉ’　３　”）の画分（ｖｏｉｄ
よりＦｌ、Ｆ２゜（：３）を得た。（第２図参照。） 次に上記Ｆ１．Ｆ２．Ｆ３各の画分のＩｎｔｅｒＬｅＬ
Ｉｋｉｌｌ　−（ａｓｓａｙを行なった。 Ｔｏｔａｌに近いＦ３（推定分子量１ｏ、０００以下の
含窒素化合物）に近い活性が認められた。 実施例 （１）実施者　明治薬科大学微生物学教室（２）免疫抑
制状態における真菌の感染症に対するしＥＭの効果を確
認した。 （３）動物実験　マウスｒｃＲＫ（）６〜７週齢 （４）攻撃菌　Ｃａｎｄｉｄａ　　ａｌｂｉｃａｎｓ　
（Ｊ　−１０１２１０５／ｍｏｕｓｅ （５）免疫抑制剤　Ｃｏｒｔｉｓｏｎｅ（６）ＬＥＭ投
与投与上び経路　３００μｇ／ｍ。 ｕｓｅ腹腔内投与 （７）実験群構成 （８）結果　Ｃ，ａｌｂｉｃａｎｓ接種後２５日の生存
率Ｇ−１２５％　Ｇ−［Ｉ８３％　Ｇ−Ｉ［［１００％
　Ｇ−ＩＶ５０％ 以上よりＬＥＭは免疫抑制状態におけるマウスの感染防
御において有効性が認められ、その投与方法は長期間投
与の必要はなく、菌の感染を受けてから投与しても充分
効果を発揮することが判明した。 実施例 （１）目的　ＬＥＭのｐｏｌｙｃｌｏｎａｌ　　ａｃｔ
ｉｖａｔｏｒ活性を調べる。 （２）実験者　大阪市立人学医学部生化学教室（３）実
験方法　正常ヒト末梢血から、リンパ球に富む単核細胞
をｌ”　１ｃｏｌ　ｌ　−Ｃｏｎｒａｙ重層遠心法によ
って分離し、１０％非動化ウシつ児血清を含むイーグル
ＭＥＭ液で２Ｘ　１０６ｃｅｌｌｓ　／ｍの細胞浮遊液
とした。 これに種々の濃度のＬＥＭを加えて、３７℃で７２時間
培養し、形成される抗ＴＰＮ−８ＲＢＣ抗体産生細胞数
をプラーク計測によって測定した。 （４）結果　Ｆｉｇ２に示′？ｌ−ように、１００〜２
００μ＋１／ｖＵのＬＥＭを添加することによって抗体
産生細胞数は、ＬＥＭ非添加対照群より有意に増加した
。このことはＬＥＭに弱いながらｐｏｌｙｃｌｏ、ｎａ
ｌ　　ａｃｔｉｖａｔｏｒ活性があることを示唆した。 実施例 （１）目的　ＰＷＭ刺激末梢血単核細胞の抗体産生に及
ばずＬＥＭの影響を調べる。 （２）実験者　大阪重置大学医学部生化学教室（３）実
験方法　正常ヒト末梢血から調整した単核細胞浮遊液（
２Ｘ　１０’　ｃｅｌｌｓ　／、ｇ、）にｐｏｋｅｗｅ
ｅｄ　　ｍｉｔｏｇｅｍ　　（ＰＷＭ）を５０μｇｚ”
ｎ＋ｕ添加し、それと同時に種々の濃度のＬＥＭを加え
て３７℃で７２時間培養し、抗ＴＮＰ−８ＲＢＣ抗体産
生細胞数をプラーク計測によって測定した。 （４）結果　ＬＥＭを加えない系における抗丁ＮＰ−８
ＲＢＣ抗体産生細胞数は、１０’個のｖｉａｂｌｅ　　
ｃｅｌｌ当ｔｃす６３２±１０９個となった。Ｌ［ＥＭ
を加えた系における抗ＴＮＰ−８ＲＢＣ抗体産生細胞数
を上記ＬＥＭを加えない系に対する％で表わすとＦ　ｉ
ｇ３に示すようになった。すなわち、抗体産生は有意に
促進され、特に２００μｇ／ｍのしＥＭを添加すると、
抗ＴＮＰ−８ＲＢＧ抗体産生細胞数はＬＥＭを加えない
系の約１．７倍となった。この結果から、ＬＥＭは抗体
産生に関与するリンパ球または単球の何れかに作用して
抗体産生を増幅すると考えられる。 実施例 （１）目的　ＥＬＭ処理マクロファージ培養上清のリン
パ球増殖に及ぼす影響を調べる。 （２）実験者　大阪重置大学医学部生化学教室（３）実
験方法　モルモットの腹腔浸出細胞のマクロファージに
、種々の濃度のＬＥＭを加えて６時間培養し、その培養
上清を分離した。 一方正常ヒト末梢血単核細胞浮遊液（ＩＸ１０６ｃｅｌ
ｌｓ　／　ｍｕ　）を調整し、その１７ＩＩｌに前述の
ｌ−２Ｍ処理マクロファージ培養上清０．１ｍｌを加え
、４８時間培養後、３Ｈ−サイミジンく比活性５Ｃｉ／
ｍｍｏｌ）を１ｕｃｉ／ｍ加えて更に２４時間１８養し
た。そして、３１」−サイミジンの酸不溶性分画への取
込みを指標としてリンパ球の増殖を測定した。 また、前述と同様にして種々の濃度のＬ　Ｅ　Ｍで処理
したマクロファージ培養上清を、ＰＷＭとともに正常ヒ
ト末梢血単核細胞浮遊液に加え、４８時間培養後、３Ｈ
−サイミジンを加えて２４時間培養し、リンパ球の増殖
を測定した。 （４）結果　ＰＷＭを加えない系においては、Ｆｉｏ４
に示すように、１００〜２００μｍ／１１ＩＩｌのＬｆ
ＥＭで処理したマクロファージ培養上清中に、と１〜単
核細胞の増殖（ＤＮＡ合成）を有意に促進する活性が認
められた。このことから、ｆ−ｉｇ２に示したＬＥＭの
ｐｏｌｙｃｌｏｎａｌ抗体産生に、一部マクロファージ
の活性化が関与する可能性が推測される。 また、ＰＷＭ刺激単核細胞の増殖については、Ｆ　１（
１５ニ示ツｃｔ−ｕ：、５０〜３ｏｏμｇ／憾のＬＥＭ
で処理したマクロファージ培養上清を加えた場合、リン
パ球の増殖はＬＥＭ非処理マクロファージ培養上清を加
えた場合より約１．５倍上病した。このことから、ＰＷ
Ｍ刺激単核細胞の抗体産生のり、　Ｅ　Ｍによる増幅が
マクロファージ活性化によることが推測される。 しかしながら、マクロファージ培養上清中には少量のＬ
ＥＭが含まれているので、ＬＥＭが直接リンパ球に作用
する可能性も全面的には否定できない。ただし、マクロ
ファージ培養上清は１憾の単核細胞浮遊液に０．１蛙し
か添加していないのでＬＥＭがリンパ球に直接作用した
としてｂｌその程度は低いものだと考えられる。 実施例 （１）目的　１２Ｍ処理マクロファージ培養上清の分画
と各分画のリンパ球増殖に及ぼす影響を調べる。 （２）実験者　大阪重置大学医学部生化学教室（３）実
験方法　ＬＥＭで処理したマクロファージの培養上清を
５ｅｐｈａｄｅｘ　Ｑカラム（５Ｘ１５’Ｏｃｍ）にか
けて分画し、２８０　ｎｍの吸充度から蛋白溶出曲線を
作成するとＦ　ｉｇ６に示すようになる。 この溶出パターンから溶出液を１１ｇ７のように分け、
それをカラムにかける前の容量に濃縮補正してから、各
々０．１憾をＣｏｎＡ　（２０μｏ　／ｍ）どともに単
核細胞浮遊液（２ｘ、１０６ｃｅｌｌｓ　／憾）１憾に
添加し、実験例８と同様にして３Ｈ−ザイミジンの酸不
溶性分画への取込みを指標としてリンパ球の増殖を測定
した。 （４）結果　１１ｇ７に示すように、ｌ−Ｅ　Ｍ処理マ
クロファージ培養上清添加群ではＣｏｎＡによるリンパ
球のＤＮＡ合成が顕著に上冒し、特に、第５分画を添加
した場合、約４倍となった。このことは、ＬＥＭ処理マ
クロファージ培養土清中にインターロイキン１が存在す
る可能性を示唆する。 実施例 （１）目的　活性化マクロファージによる分離肝細胞障
害に対するＬＥＭの影響を調べる。 （２）実験者　大阪重置大学医学部生化学教室（３）実
験方法　分離肝細胞浮遊液（１ｘ１０ｓｃｅｌｌｓ　／
ｖｎ　）に種々の濃度のＬＥＭを添加して６時間処理し
た。ＬＰＳで刺激したマクロファージの培養上清を分離
し、これを上記の分離肝細胞浮遊液に添加して、３Ｈ−
ロイシン酸の酸不溶性分画への取込みを指標として肝細
胞の蛋白合成量を測定した。 （４）結果　２００μｇ／誠のＬＥＭで前もって肝細胞
を処理した後、活性化マクロファージ培養上清を添加す
ると、肝細胞の蛋白合成は、ＬＥＭ非処理肝細胞に活性
化マクロファージ培養上清を添加したときより有意に高
くなっに０このことは、ＬＥＭに肝細胞を防御する作用
があることを示唆する。 ４、図面の簡単な説明 第１図はセファデックスＧ７５により本願発明に係る物
質を展開した状態を示す分画展開図、第２図はＬＥＭの
Ｐ　ｏｌｙｃｌｏｎａｌ　ａｃｔｉｖａｔｏｒの活性を
グラフを用いて示した図、第３図はＰＷＭ刺激末梢血単
核細胞の抗体産生に及ぼすＬＥＭの効果をグラフを用い
て示した図、第４図はＬ’ＥＭ処ｉマクロファージ培養
上清のリンパ球増殖に及ばず効果をグラフを用いて示し
た図、第５図は１２Ｍ処理マクロファージ培養上清のＰ
ＷＭ刺激単核細胞増殖に及ぼす効果をグラフを用いて示
した図、第６図はセファデックスＧ−７５カラムクロマ
トによるＬＥＭ処理マクロファージ上清の分画展開図、
第７図はＬＥＭ処理マクロファージ上清両分のＣｏｎ、
６１刺激単核細胞増殖に及ぼす効果をグラフを用いて示
した図、第８図は活性化マクロファージの培養上清によ
る肝細胞障害に対するＬＥＭの防御作用をグラフを用い
て示した図である。 特許出願人 野田食菌工業株式会社 第２図 Ｃ０ＮＣＥＮＴＲＡｒｌＱＮ 第３図 Ｃ０ＮＣＥＮＴＲＡ’ｒＬＯＮ 第４図 Ｃ０ＮＣＥＮＴＲＡ’ｒＬＯＮ 第５図 ＣＯＮＣＥＮｒＲＡＴｊＯＮ 第６図 ＴＵＢＥ　　　ＮＵＭＢＥＲ 第７図

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 （１〉キシロース成分に富む固体培地にて培養された椎
   茸等担子菌類に属−する菌糸体培養物中のキシロースを
   主成分とする糖蛋白および含窒素低分子物質からなる免
   疫増強剤。 （２）前記固体培地はバガスと米糠からなる特許請求の
   範囲第１項記載の免疫増強剤。 （３）前記担子菌は椎茸・であることを特徴とする特許
   請求の範囲第１項記載の免疫増強剤。