JPS59232101A - 巨孔性ビ−ズ重合体およびその製造方法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 生物活性物質、例えば酵素、抗体、抗原、ホルモンなど
をそれらの活性を保持しつつ重合体担体材料に共有結合
を介して結合しこれによって例えば酵素を安定化または
精製しあるいはそれらは水に対し不溶化することは知ら
れている。

このようにして固定化された生物活性物質可溶型のもの
に比べて相当々利点を有している。すなわち、反応完了
後の沈降による除去可能性が簡便となる一方、他方にお
いて生成物の安定性　６− および再使用可能性が増大する。

反応性基含有単量体、架橋単量体および親水性単量体を
共重合させて得られる膨潤性架橋ビーズ重合体が西独特
許出願公告第２，２３７，３１６号公報に担体物質とし
て記載されている。これに開示されている反応性基はハ
ロゲノアルキル、エポキシド、カルボニルクロライド、
カルカン酸無水物、カルがニルアジド、カルがン酸フェ
ニルエステルおよびヒドロキサム酸基である。

しかしながら、これらの担体材料は多くの難点がある。

すなわちそれらの一部に生物活性物質を固定するプロセ
スがかなり長いものとなり、それらの一部の活性は十分
なものでなく、そして更に無水物変種を用いた場合には
、電荷が導入されるなどである。

その後に生物活性物質の結合に使用できるオキシラン基
を親水性重合体中に導入することは西独特許出願公開第
２，１０２，５１４号明細書に知られている。記載され
ている親水性重合体はアクリルアミド基を含有するもの
を包含している。

しかしながらこれらの担体はビーズ形状および多孔質構
造の形態を欠いている。従って例えばそれらはカラムプ
ロセスに使用できない。

本発明の目的は、従来技術の欠点をもたず、また特にビ
ーズ状であって十分な多孔性を有するアクリルアミド（
メタクリルアミド）誘導体ペースの重合体材料を特に生
物活性物質のための担体材料として提供することである
。他の目的はこの目的に適した方法を開発することであ
る。

この目的を達成するために、本発明は式％式％（）） （式中Ｘは水素またはメチルであシ、Ｒは１〜１２個の
炭素原子を有する脂肪族炭化水素基であり、そしてＹは
ＯＨまたはＮＦ２を表わす）で表わされる単量体に由来
する単位と式（Ｉ）で表わされる単量体と共重合し得る
少なくとも１種の他の単量体に由来する単位から本質的
に成り、かつ本質的に球状の形および５〜２＋ＤＯＯｎ
ｍの平均孔直径を有しそして平均粒度が２０〜８００μ
ｍの範囲にある重合体粒子から成る重合体を提供する。

更に本発明は式 ％式％（） （式中Ｘ、ＲおよびＹは前述の意味を有する）で表わさ
れる化合物と、それと共重合し得る少なくとも１種の他
の単量体とを、重合条件下に　９− それら単量体および重合体を溶解しない液体分散剤中で
ラジカル開始剤および分散安定化剤の存在下に重合させ
ることより成りそ１７て前記分散安定化剤として蕪水マ
レイン酸と、アルキル基に６〜６０個の炭素原子を有す
るビニルアルキルエーテル、カルがン酸基に６〜６０個
の炭素原子を有するビニルエステルまたは８〜３０個の
炭素原子を有する比較的長鎖のα−オレフィンとの共重
合体を用いるととを含むこのタイプの重合体の製造方法
に関する。

本発明はまた、このようにして得られた重合体を、好ま
しくはスペーサと反応させた後に、担体結合生物活性物
質製造用担体材料として使用することに関する。

本発明による重合体は有利には式（Ｉ）で表わされる単
量体に由来する単位を全重合体に対して５〜９０モルチ
、好ましくは１０〜８０モルチ１０− そして特に１５〜６０重量％の量で含有する。

原則的には、前掲のものより多量または少量も可能であ
るが、概してそれには不利益が伴う。

前掲の範囲にある至適量は就中所望部位密度、生物活性
物質の分子量などに依存する。

前述のように、前述の式（Ｉ）における基Ｒは１〜１２
個の炭素原子を有する脂肪族炭化水素基を意味するが、
それは直鎖状、分枝鎖状または環状（環状脂肪族）であ
ることができる。基Ｒは好ましくは１〜６個の炭素原子
を有するアルキレン基である。乙の例としてはメチレン
、エチレン、プロピレン、イソプロピレン、ｎ−ブチレ
ン、１−ブチレン、ペンチレン、ヘキシレン、２−エチ
ルヘキシレン、シクロペンチレン、１　　　　シクロヘ
キシレン、メチレンシクロヘキシルなどが挙げられる。

前記式（Ｉ）における基Ｙは好ましくは○Ｈ基を表わし
、そしてこれは更に１級であるのが好ましい。従って式
（Ｉ）で表わされる適当な単量体はＮ−メチロールアク
リルアミド（メタクリルアミド）、Ｎ−（２−ヒドロキ
シエチル）アクリルアミド（メタクリルアミド）、Ｎ＝
（３−ヒドロキシプロピル）アクリルアミド（メタクリ
ルアミド）、Ｎ−（２−ヒドロキシプロピル）アクリル
アミド（メタクリルアミド）、Ｎ−（２−アミノエチル
）アクリルアミド（メタクリルアミド）、Ｎ−（３−ア
ミノプロピル）アクリルアミド（メタクリルアミド）、
Ｎ−（６−アミノ−ヘキシル）アクリルアミド（メタク
リルアミド）などである。これらのタイプの単量体の混
合物を用いることも可能である。

本発明による重合体における基Ｙの少なくとも一部、好
ましくは少なくとも０．５モルチそして特に１〜４０モ
ル係はいわゆるスペーサと反応せしめられる。一般にス
ペーサの量は本発明によるビーズ重合体において、単量
体単位総量に対して約０．１モル９６−２０ は１〜１０モルチを超えることはないであろう。

スペーサとは本発明によるビーズ重合体の（−ＣＯＮＨ
−　Ｒ−Ｙ）側鎖の基Ｙと反応すると共に次いで生物活
性物質と反応し得る反応性基、好ましくはエポキシ基を
導入する化合物であるとして理解されるべきである。す
なわち、基Ｙの少なくとも一部は、スペーサとの反応後
、基 Ｙ’　−　　Ｂ　　＋　　Ｚ　　　　　　　　　（［）
〔式中Ｙ′は０またはＮｕであり、Ｂは有機基（厳密力
量味でのスペーサ）、特にヘテロ原子、例えば０１ＮＨ
，Ｓなどで所望によシ中断されていてもよい１〜１２個
の炭素原子を有する炭化水素基であシ、そして２は生物
活性化合物と共１６− 有結合し得る官能基を表わす〕によシ置換されーＯＲ１
そしてＲ＝ｉ〜６個の炭素原子を有するアルキル基であ
る）、−ＣＨ（ＯＲ）２　（Ｒは前述のとおりである）
、−Ｎ２〕　　またはＮＧＯなどの基が含まれる。

Ｙ′は好ましくは酸素を意味し、Ｂは１〜６個の炭素原
子を有する脂肪族の特に分枝鎖状の炭化水素基、アリー
ル基、またはアルキルアリ−１４− −ｏ−（ｃｚｉ２）−（閣〉−ｘ　　　　　Ｘ：ＮＨ２
、Ｎ２コ　、ＮＣＯ本発明によれば、ビーズ重合体はま
た式（Ｉ）で） 表わされる単量体と共重合し得る単量体に由来する少な
くとも１種の付加的な単量体をも含有する。好ましくは
、これは相互に異なる２種の他の単量体という形をとる
。

これら単量体単位のうちの１種は親水性基を有する単量
体に由来するものとするのが好ましく、そしてこれけ担
体として用いられる重合体に十分な親水性と十分な水中
膨潤性を与える。

このことは生物活性物質との結合反応が通常水性系中で
行なわれまた親水性生物活性物質は担体材料まで拡散し
得なければならないことから。

重要である。これらの単量体は例えば西独特許出願公開
箱２，２３ス３１６号明細書に成分Ｃ）として列挙され
ている単量体を含む。本発明の範囲内において好ましい
ものはＮ−ビニルピロリドン、アクリルアミド（メタク
リルアミド）、各々アルキル基に２〜６個の炭素原子を
有するアルキルアルキレート（メタクリレート）、アル
キル基に２〜６個の炭素原子を有するヒドロキシアルキ
ルアクリレート（メタクリレ−））、Ｎ−ビニル−Ｎ−
アルキルアセタミド（０１〜Ｃ４アル＋ル）、酢Ｍビニ
ルまたはビニレンカーボネートである。後二者の単量体
は実際には適宜の加水分解が行なわれるまでは重合体に
対して親水特性を与えない。これら親水性単量体単位の
いくつかを共存させることも可能である。

重合体中の式（Ｉ）で表わされる単量体の親水性成分に
対する割合もまた結合すべき酵素のタイプに依存する。

酵素の分子量あるいは酵素を反応させるべき基質の分子
量が極めて高い場合には、親水性成分の方のモル比を高
めるのが遊離である。何故なら結合し得る近隣スペーサ
基が立体的理由から首尾よく反応できずまだ場合によっ
ては妨害さえする可能性があるからである。

更に親水性成分の量は本発明において存在させることが
好ましい架橋成分の量によっても左右１７− される。一般に後者の量が多い程、十分な親水性および
膨潤性を有する担体重合体を提供するのに必要な親水性
成分の量も多くなる。一般に本発明による重合体中の親
水性単量体単位（１種または複数種）の量はその重合体
に対し５〜７０モルチ、好ましくは２０〜５０モルチ、
そして特に３０〜５０モルチである。いずれの場合であ
っても１重合体が架橋剤（後述の記載参照）を用いない
でも水溶性である場合にはその重合体の親水性は十分で
ある。一般に１重合体が架橋後にそのもとの嵩容量、の
３０倍まで、好ましくは５〜１０倍膨潤すれば水中膨潤
性は十分である。

本発明による重合体は式（Ｉ）で表わされる単量体と共
重合し得る他の化合物として、従来技術において知られ
ているような架橋単量体を含有するのが好ましい。典型
的代表例としては就中１８− 次のものが挙げられる。グリコールのノビニルエーテル
、例工ばエチレンダリコ〜ルヅビニルエーテル、ブタン
ソオールソビニルエーテル、ヘキサンジオールソビニル
エーテル、１２個ｔでの炭素原子を含む直鎖状まだは分
枝鎖状アルキレン基を有するＮ、Ｎ’−アルキレンビス
アクリルアミド（メタクリルアミド）１例えばＮ、Ｎ’
−メチレンビスアクリルアミド、　Ｎ、Ｎ’−エチレン
ビスアクリルアミド、　Ｎ、Ｎ’−へキサメチレンビス
アクリルアミド、　Ｎ、Ｎ’−メチレンビスメタクリル
アミド、　Ｎ、Ｎ’−エチレンビスメタクリルアミド、
　Ｎ、Ｎ’−へキサメチレンビスメタクリルアミド、Ｎ
、Ｎ’−エチリデンビスアクリルアミド、ダリオキザー
ルビスアクリルアミド、１，２−ビ１　　　　スアクリ
ルアミドー１，２−ジヒドロキシエタン、ビスアクリル
アミド酢酸、エチレングリコールジメタクリレート、ブ
タンソオールジメタクリレー）、トリアリルシアヌレ−
）、ｉＪスアクリロイルパーヒドロトリアソン、ノビニ
ルベンゼン、ソビニルアソベー）、Ｎ、Ｎ’−ジビニル
エチレン尿素、　Ｎ、Ｎ’−ジビニルプロピレン尿素。

エチリデンビス−３−（Ｎ−ビニルピロリドン）。

Ｎ、Ｎ’−ジビニル−２，２′−ソイミダゾリルおよび
１．１′−ビス（３，３’ビニルベンズイミダシリン−
２−オン）　−１，４−ブタン、アクリル酸ビニル。

メタクリル酸アリルなど。これら架橋剤のうちのあるも
の、例えばＮ、Ｎ’−ジビニルエチレン尿素、Ｎ、Ｎ’
−ソビニルプロピレン尿素、エチリデンビス−３−（Ｎ
−ビニルピロリドン）、Ｎ、Ｎ’−ノビニル−２，２′
−ソイミダゾールおよヒ１，１′−ビス（３，３’−ビ
ニルベンズイミダシリン−２−オン）　−１，４−ブタ
ン、またはＮ、Ｎ’−メチレンビスアクリルアミドなど
は重合体の冠水性にも寄与し得る。

重合体中の架橋単量体単位の量、そして従って架橋密度
はその用途に依存する。攪拌容器内での酵素反応または
診断助剤を目的とする場合は低架橋密度が有利であシ得
る。他方、カラム充填に用いる場合にはビーズ重合体の
形状の高い安定性、また従って高架橋密度が前提となる
。

すなわち、使用タイプに応じて、架橋単量体単位の量は
重合体に対して６０モルチまでとすることができる。そ
れは１〜５０モルチ、そして特に５〜４０モルチとする
のが好ましい。これについて既述したとおり、架橋成分
の量は親水性成分の量とある関係を有する。架橋単量体
の量は通常、ビーズ重合体がテトラヒドロフラン中でそ
のもとの嵩容積の１４倍まで、そして好ましくは０〜８
倍膨潤するように選択されることになろう。

担体と生物活性物質との反応を担体の水性浴２１− 液中で行なう場合には水溶性担体が重要である。

適切な場合には、未架橋担体重合は既知の方法により続
く化学反応、例えばジイソシアネートと化学反応させる
ことによって架橋することもできる。この場合１重合体
は若干高割合の式（Ｉ）で表わされる単量体に由来する
単位を含有すべきである。

所望により存在することのできるその他の非親水性およ
び非架橋性の単量体単位としては例えば次のものに由来
するものが挙げられる。アルキル基に５〜１２個の炭素
原子を有するアクリル酸エステルおよびメタクリル酸エ
ステル。

アクリロニトリル（メタクリル酸アリル）、カルがン酸
基に４〜１８個の炭素原子を有するビニルエステル、例
えば酪酸ビニルおよびステアリン酸ビニル、および１０
〜１２個の炭素原子を有する分枝鎖状カルボン酸のビニ
ルエステル、２２− およびビニル芳香族、例えばスチレンまだはα−メチル
スチレンなど。これらの単量体単位は重合体中にその重
合体に対し４〜４０モル係。

好脣しくは８〜２０モルチの量で存在することができる
。

本発明によるビーズ重合体は主として、球状粒子から成
り、その乾燥非膨潤状態での平均粒度け２０〜８００μ
ｍ、好ましくは５０〜３００μｍであり、また粒度分布
は狭くするのが好ましい。重合体の個々の至適粒度は特
に特定の使用分野に依存する。例えば大気圧下に行なわ
れるカラムプロセスにおいては、前述の範囲内で高めら
れた圧力下のプロセスよりも相応に大きい粒度を選択す
ることが可能であろう。本発明にヨルビーズ重合体のビ
ーズは主として巨孔性ビーズとして形成される。このこ
とは本発明により得られる平均孔直径が５〜２，００．
Ｏｎｍ、好ましくは１０〜１，００Ｑｎｍの範囲にある
ことから明らかである。

孔直径（孔容量）の測定は、まず孔容量を毛細管圧力法
（水銀ボロシメトリー）により測定する方法により行な
われる〔これＫついてはｒ　Ｕｔｔｍａｎｓ　Ｉｌｉ；
ｎｃｙｃｔｏｐ’Ｎｄ１ｅ　ｄｅｒ　Ｔｅｃｈｎｉｓｃ
ｈｅｎＣｈｅｍｉｅ　Ｊ第５巻第７５１〜７５２頁（１
９８０’）参照〕。次いでこれより平均孔直径はこの引
用文献の第７５２頁左側棟上部に与えられた等式を用い
て計算することＫより得られる。更に孔サイズの測定は
走査電子顕微鏡法により行なうことも可能である。

本発明による重合体は生物活性物質用担体として特に適
している。しかしながら、それらは他の目的にも例えば
イオン交換体、クロマトグラフィープロセス用吸着剤な
どとしても用いることができる。

本発明によるこれらビーズ重合体の製造方法は、例えば
西独特許出願公開用２，２３７，３１６号明細書または
西独特許出願第２，５５６，７５９号明細書に記載され
ているようなビーズ重合について知られた通常の条件下
に行なわれるが、特別な分散安定化剤を用いるという技
術革新を伴っている。

これらは好ましくは無水マレイン酸と、ビニルアルキル
エーテル、好ましくはアルキル基に６〜６０個の炭素原
子、好ましくは１０〜２０個の炭素原子を有するビニル
ｎ−アルキルエーテル、まだはカルがン酸基に６〜５０
個の炭素原子５好ましくは１０〜２０個の炭素原子を有
するビニルエステル、または８〜６０個の炭素原子、好
ましくは１０〜２０個の炭素原子を有する比較的長鎖の
α−オレフィンとの交互共重合体である。これらのタイ
プのビニルアルキル２５− エーテル、ビニルエステルおよび比較的長鎖のα−オレ
フィンとしては例えば次のものが挙げラレる。ビニルオ
クチルエーテル、ビニルデシルエーテル、ビニルドデシ
ルエーテル、ビニルステアリルエーテル、ビニルミリシ
ルエーテル。

ビニルエチルヘキサノエート、ビニルインノナノエート
、ビニルパーサテート、ビニルラウレート、ビニルステ
アレート、および１０〜１２個の炭素原子を有する分枝
鎖状カルボン酸のビニルエステル、１−オクテン、１−
デセン、１−ドデセン、１−テトラデセン、１−オクタ
デセンおよび１−トリコセン。

これらの分散安定化剤は単量体の全量に対してＯｏＤ［
１１重量％程度の少量で有効である。通常。

（単量体の全量に対し）ｏ、ｏｏｓ〜１０重量％、好ま
しくは０．・０１〜５重量％の量を用いる。分散安定化
剤として用いられるこれら共重合体の２６一 還元比重（Ｒ３Ｖ）は一般に０．０１〜１．Ｏｄｉｌｇ
（２５℃においてｏ、６’ｚ強度のトルエン溶液として
測定）である。無水マレイン酸とビニルアルキルエーテ
ルまりはビニルエステルとの共重合体に対して好ましい
相当する範囲は０．０５〜１、０　ｄｔ、Ｑであり、ま
た無水マレイン酸と比較的長鎖のα−オレフィンとの共
重合体に対して好ましい相当する範囲は０．０１〜０．
１　ｄｔ／ｇである。無水マレイン酸とビニルアルキル
エーテルまたはビニルエステルまたは比較的長鎖のα−
オレフィンとの間のモル比は一般に１：４〜１：１．好
ましくは１：２〜１：１そして特に１：１である。

本発明に適したシソカル開始剤は単量体相に１　　　　
易溶でありそして液体分散剤にはなるべく低い溶解度を
有するものである。これらの例は、有機過酸化物例えば
ジベンゾイルペルオキシド、ジベンゾイルペルオキシド
、ビス（０−メチルベンゾイル）ベルオキシド５第３級
ブチルハイドロペルオキシド、クメンハイドロペルオキ
シド、ツインプロピルベルオキシソカーゴネート、シク
ロヘキサノンペルオキシド、まだは脂肪族アゾ化合物例
えばα、α′−アゾジイソブチロニトリル、アゾビスシ
アノ吉草酸、　　１．１’−アゾシクロヘキサン−１，
１′−ソカルボニトリルおよびアゾジカルゴナミドなど
である。水または水と水溶性物質との混合物を不活性剤
として用いる場合には、水溶性開始剤１例えばアンモニ
ウム。

ナトリウムおよびカリウムベルオキシソサルフェート、
シクロヘキシルカルボナトカリウムサルフェートペルオ
キシド、サクシノイルペルオキシドおよび第３級ブチル
ベルマレエートナトが用いられる。所望によシ適幽な酸
化還元系を用いてもよい。開始剤の量は通常、（単量体
の全量に対し’）Ｄ、０１〜５．好ましくは０．１〜２
重量％である。

本発明によるビーズ重合の実施に用いられる液体分散剤
は特に通常の条件下において液体であって約６０℃以上
、好ましくは８５〜３００℃の範囲の沸点を有し、そし
て望ましくない乳化重合を抑えるべく単量体５重合体お
よび好ましくは開始剤をも重合条件下に溶解しないかま
たはいずれにせよそれらの痕跡量しか溶解しないような
有機化合物である。６〜２０個５好ましくは１２〜１６
個の炭素原子を有する炭化水素特にパラフィンなどが特
に適している。各種化合物の混合物を分散剤として用い
ることも可能である。適当な炭化水素または炭化水素の
混合物の例はｎ−へキサン、ｎ−へブタン、ｎ−オクタ
ン、シクロヘキサン、イソオクタン、９０〜１７０℃の
沸点範囲を有する石油留分および２９− 低粘流動パラフイン（西独国薬局方第７版、ＤＡＢ７）
である。単量体相の分散剤相に対する比は広い範囲にわ
たって１例えば１：１〜１：５０、好ましくはＤ：５：
１〜１：１５（重量比）の範囲にわたって変化し得る。

可及的に高い孔度のビーズ重合体を得るには、好ましく
けある種の不活性液体成分（不活性剤）を重合系または
好ましくは単量体に添加する。

これら成分は５単量体が易溶性であるかまだは単量体が
混和し得るが、一方において分散剤に実際上不溶であり
従ってそれとは混和し得ない物質として理解されるべき
である。適宜の共重合体に対する挙動に応じて不活性剤
は膨潤および／または沈殿剤に分けることができる。親
水性マトリックスの場合には、極性不活性剤は一般に膨
潤の方に働くが、その例としてはツメチルホルムアミド
、ジメチルスルホキシド、ソオ３０− キサン、水などが挙げられ、一方非極性物質、例えばグ
リセロールトリアセテートなどけ共重合体に対する沈殿
剤であることがわかる。至適な不活性剤または不活性剤
混合物はいくつかの簡単な定常実験によって容易に決め
ることかできる。特に比較的低架橋度を有するビーズ重
合体を目的としている場合には、極性不活性剤および非
極性不活性の混合物を用いるとよい場合がある。不活性
剤は重合において沈殿はしないが、重合体によって被覆
されそして後処理の際に再び溶出される。これにより永
久孔が生じる。

孔サイズは不活性剤のタイプおよび量によって影響を受
は得るばかりでなく、架橋成分の量にも依存する。

不活性剤は単独であるいは混合物として用いす ることかできる。その例としては次のものが挙けられる
。メタノールおよびそのより高級な類縁体、エチレング
リコール、メチルグリコール、プロピルグリコール、ソ
エチレンダリコール。

トリエチレンダリコール、１，４−ブタンソオール、グ
リセロール、ポリエチレングリコール類、ポリピロリド
ン類、ジエチレングリコールジメチルエーテル、グリセ
ロールトリアセテート、エチレンカーボネート、ホルム
アミド、ツメチルホルムアミド、ツメチルスルホキシド
、ソオキサン、水など。

不活性剤の添加蛍は広い範囲にわたって変えることがで
きる。それは就中、担体の単量体組成物、特にその架橋
剤含量、所望の孔度（孔サイズ）および担体重合体の厳
密な使用目的に依存する。すなわち、架橋度が高い場合
には、特定の孔度（孔サイズ）を得るにはそれに応する
多量の不活性剤が望ましい。同様に、架橋度が同じ場合
には不活性剤の使用量が多い程孔度（孔サイズ）は大き
くなろう。明らかなことではあるが、これはある範囲内
で増加させ得るにすぎない。何故ならば、そうしないと
巨孔性ビーズの壁厚、そして従ってそれらの機械的安定
性が低くなり過ぎる。大抵の場合、単量体量の０．０２
〜５倍、好ましくは０．０４〜６倍に相当する不活性剤
量を用いれば満足すべき結果が得られよう。

式（Ｉ）で表わされる単量体およびその他の共重合体（
一種または複数種）の使用量は生成重合体が前述の単量
体単位量を有するような量である。このためには１式（
Ｉ）で表わされる単量体は一般に、単量体の全混合物に
対して５〜９０モル％、好ましくは１０〜８０モルチの
量で用いられる。他方、親水性単量体の量は、単量体の
全混合物に対して通常５〜７０モル％、好ましくは２０
〜５０モルチであり、そして架橋単量３６一 体を用いる場合には、その量は単量体の全量に対して６
０モルチまで、好ましくは１〜５０モルチである。

式（Ｉ）で表わされる単量体は、既知の方法により例え
ばアクリロイルクロライド（メタクリロイルクロライド
）を適宜の酸受容体の存在下に弐Ｈ２Ｎ　−Ｒ−Ｙで表
わされる化合物と反応させることによシ製造される。

本発明による方法は、攪拌装置を設けた反応容器中で通
常２０〜１５０℃、好ましくは６５〜１２５℃の温度で
行なうのが有利である。ビーズ重合体の粒度は既知の方
法により、攪拌速度および相比によって調節される。同
軸に位置しかつその軸がほとんど容器の基底部に達する
攪拌器を備えた平坦基底部を有する竪型円筒容器を用い
るのが特に有利である。反応容器は好ましくは真空密で
あり、また還流凝縮器、添加漏斗、ガロ４− ス導入管および温度測定装置を備えることかできる。容
器の加熱、冷却は一般に液体浴１例えば油浴または水浴
などにより行なわれる。

本発明による方法を、大気中の酸素を排除しつつ行なう
のが有利である。すなわち反応容器は開始前に不活性ガ
ス好ましくは窒素で７ラツシユされる。

重合反応完了後５未反応単量体は例えば減圧下、好まし
くは０．１〜１５トールの圧力下如蒸発させることによ
り反応容器から除かれる。残留単量体を除去後１分散剤
を例えば傾瀉、沖過または上澄液の吸引などにより、固
体重合体から分離する。次いで必要な場合には１重合体
を低沸点有機溶媒例えば炭化水素、低級アルコール−た
けアセトンなどで洗浄しそして最後に乾燥する。重合体
は通常２０〜１００℃、好ましくば４０〜８０℃の温度
で乾燥されるが減圧下に乾燥するのが望ましい。

本発明によるビーズ重合体を生物活性物質用担体材料と
して用いる場合には既述のように最初にスペーサと反応
させるのが好ましい。本発明に適したスペーサは、その
第２官能基が結合すべき生物活性物質とカップリングを
行なうホモ−およびヘテロ−二官能性化合物である〔西
独特許第２，４２１，７８９号および同２，５５２，５
１０号各明細書、ｒ　Ｕｔｔｍａｎｓ　Ｅｎｃｙｃｔｏ
ｐＭｄｉｅ　ｄｅｒ　Ｔｅｃｈ−ｎｉｓＣｈｅｎ　Ｃｈ
ｅｍｉｅ　Ｊ（第４版〕、第１０巻第５４０頁およびｒ
　Ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ　ｏｆ　Ｉｍｍｏ
ｂｉｔｉｚｅｄＢｉｏｃａｔａｔｙｓｔｓ　Ｊ　（１９
７９年版、第５３頁参照〕。

本発明においてスペーサとして用いるのが好ましい化合
物はエポキシド基を導入するものであり、例えばエビク
ロロヒドリンまたはその類縁体（α、β′−エポキシー
ω−ハロｒノアルカン）およびジエボキシド１例えばエ
チレングリコール、１，２−ソゲリシジルエーテルおよ
び１，４−ブタンソオールソグリシソルエーテルなどで
ある。

例えばエポキシド基含有スペーサとの反応はそれ自体既
知の方法により、過剰量のエポキシド化合物を用い５０
〜２００℃の温度で一般的に２〜６時間の間、好ましく
は塩基性触媒例えば第３級アミン、アルカリ類、ツメチ
ルホルムアミドなどの存在下に、そして所望により不活
性希釈剤、例えばジオキサンなどを用いて行なわれる。

エポキシ化重合体粒子は同様に既知の方法により吸引沖
過しそして重合体粒子をアタックしない低沸点有機溶媒
、例えばアセトンまたはソエチルエーテルで十分洗浄す
ることによって単離される。次いで不活性有機洗浄剤を
４０〜６０℃および減圧（２００ｍｍＨ，ｉｉ’）下に
５窒素を流しながら真空乾燥釜内で除去する。

３７− 驚くべきことに、このようにして得られるエポキシド基
含有重合体が西独特許出願公告第２、２３７．３１６号
明細書に記載の方法に従ってエポキシド基含有単量体を
直接重合させて得られる生成物よりも相当に高い活性を
有することがわかった。

「生物活性物質」の用語は、生体内または試験管内で活
性な既知の天然または合成物質、例えば酵素、活性化剤
、抑制剤、抗原、抗体、ビタミン、ホルモン、奏効体（
エフェクター）、抗生物質、たんばくなどであるとして
理解されるべきである。ここで後者の用語はある種の非
たんばく置換外１例えば金属イオン、ポリサッカライド
、ポルフィリン基、アデニンソヌクレオチド、リポ核酸
、燐脂質などを有するたんばくをも包含する。ポリペプ
チド断片１例えば酵素分子の活性部分なども生物活性物
質の用語に３８− 包含される。

前述の生物活性物質の中でも、本発明においては酵素が
好ましい。酵素の例としては、アデニルデアミナーゼ、
アルコールデヒドロゲナーゼ、アスパラギナーゼ、カル
ポキシペプチターゼ、キモトリプシン、ジホスホエステ
ラーゼ。

α−グルコシダーゼ、グルコースインメラーセζグルコ
ースオキシダーゼ、グルコース−６−ホスフニートデヒ
ドログナーゼ、ヘキソキナーゼ。

インベルターゼ、β−ラクタマーゼ、ラクターゼ、乳酸
デヒドロゲナーゼ、各種ラクチン。

ＮＡＤキナーゼ、ニューラミニダーゼ、パパイン、ペル
オキシダーゼ、（アルカリ性または酸性）ホスファター
ゼ％５′−ホスホソエステラーゼ。

ピルベートキナーゼ、リボヌクレアーゼおよびトリプシ
ンなどが挙げられる。

他の生物活性物質の例としては、ホルモン例えばインシ
ュリンおよび広汎にわたる各種各様の脳下垂体ホルモン
、ガンマ−グロブリン画分のたんばく例えばＧ、　Ｍ、
　Ａ、　ＤおよびＥ群の抗体。

他の血液因子例えば抗血友病因子、凝血因子、特異抗体
例えば肝炎、灰白髄炎、麻疹、流行性耳下腺炎、インフ
ルエンザ、またはウサギ抗原〔これらは精製のためある
いは適当な抗体反応を刺激するだめに用いられ、抗原は
（不溶化された後は）不溶型のまま残り、従って体内に
入り込み害することはできなくなる〕、および一般的体
内たんばく例えばヘモグ四ビンまたはアルブミンなどが
挙げられる。

生物活性物質の結合反応は例えば西独特許出願公開用２
，４０７，３４０号明細書または西独特許第２．２１５
，６８７号、同第２，４２１，７８９号および同第２．
５５２，５１０号各明細書などに記載されているような
、既知の方法により行なわれる。その反応は通常室温ま
だはこれよりも低い温度で行なわれる。後者は特に、結
合すべき生物活性物質が固有的に不安定な場合に適用さ
れる。すなわちこの場合温度は＋１０℃以下、好ましく
け０〜＋５℃である。

結合反応は、中性付近のｐＨ１例えばｐＨ５〜９で行な
うのが好ましい。何故なら大部分の生物活性物質はこの
範囲において極めて安定しているからである。一般に強
酸性または強アルカリ性条件を維持することも必要では
ない。何故ならば本発明による巨孔性ビーズ重合体は対
象となる物質の大部分と中性領域においてさえも迅速に
反応するからである。これによって生じる結合は長期貯
蔵に十分な安定性および高い使用時安定性を与える。

好ましくは結合すべき生物活性物質１重量部あたり、約
１０〜８ｏ重量部の担体重合体、特に４１− 少なくとも５０モル係の式（Ｉ）で表わされる単量体の
単位を含む担体重合体が用いられる。式（Ｉ）で表わさ
れる単量体の単位が重合体の５０モルチに達しない場合
にはより多量の担体重合体を用いるのが有利である。

本発明を次の実施例によって詳細九例説する。

ステアリルエーテルとの共重合体） アセトン２５　Ｏｍｔ中の無水マレイン酸９８＆（１モ
ル）およびビニルステアリルエーテル２９６１１（１モ
ル）をまず攪拌フラスコに導入し。

５ｍｔのソイソブロビルベルカーゴネート（フタレート
中４０チ強度溶液）を添加し、そしてその混合物を窒素
下に攪拌しなから６ｏ℃で５時間重合させた。

冷却後、沈殿生成物を吸引ν別しそして数回アセトンで
洗浄する。

４２− 共重合体中の２種類の単量体のモル比け１：１であった
。またＲ３Ｖ値は０．２２４　ｄ、ｔ／ｌｌであつｆＣ
（２５℃で０．６チ強度トルエン溶液として測定した）
。

実施例　１ （Ｎ−メチロールアクリルアミド、１丁−ビニルピロリ
ドンおよびＮ、Ｎ’−メチレンビスアクリルアミドの共
重合体） ８００ｍｔの低粘度流動パラフィンＤＡＢ　７　（分散
剤）、２．０ｇの無水マレイン酸と１−オクタデセンと
の共重合体（モル比１　：　１，２５℃において０．６
％強度トルエン溶液として測定されるＲ８Ｖ値０．０６
４ｄｔ／、９）、３３．３１７）Ｎ　−メチ０１　　　
−ルアクリルアミド、３６．７．９のＮ−ビニルピロリ
ドン、３０．９ＯＮ、Ｎ’−メチレンビスアクリルアミ
ド、２ｇのアゾジイソブチロニトリル、２１２ｍｔのツ
メチルホルムアミドおよび９０　ｍｌのポリエチレング
リコール（分子量約４００）を攪拌器、湛度割、窒素導
入管および還流凝縮器を設けだ丸底フラスコに捷ず導入
した。

次いでこの混合物を攪拌しながら徐々に加熱した。約６
５℃にて発熱重合反応が始まり、その際温度は約８０℃
に上昇した。この温度をサーモスタット付き油浴により
１時間維持し１次いで浴温な９０℃に４時間上げて重合
を完結させた。次に加熱浴を除去しそしてそのバッチを
攪拌し々から４０℃に冷却した。次に攪拌を止めたとこ
ろ、ビーズ状の重合体がしばらくして沈降した。次に主
要量の流動パラフィンをサイホンで除き、続いて残留物
を吸引濾過器を介して吸引した。次に生成重合体を攪拌
しながら石油エーテルで処理し、付着流動パラフィンを
除去した。次にそれをメタノール、次いでアセトンを用
いて十分攪拌しそして最後にアセトンを用いて沸点で抽
出し未反応単量体および分散剤を溶出した。最後にその
重合体を真空釜中５０℃で一夜乾燥しそしてスクリーン
にかけた。

架橋共重合体の収量は９５Ｍ＝理論の９５チ）であった
。

無水マレイン酸とドデセンとより製造した相当する分散
剤を用いた場合にも本質的に同じ生成物が得られる。

１５Ｆの５０〜１００μｍスクリーン画分を１００ｒｎ
ｌのエピクロロヒドリン中で１６時間膨潤させ、次いで
１１５℃に４時間加熱しそして２５℃に冷却後吸引濾過
しだ。次にその生成物を２回にわたりその都度アセトン
２００ｒｎｔと共に６０分間攪拌し、吸引濾過しそして
真空釜中４０℃で窒素下に一夜貯蔵した。

秤量したところ、３４０１／／ｌの嵩密度および４５− １４３のエポキシド当量を有するビーズ状生成物１４．
６．！ｉ’が得られていることが示された。

実施例　２ （Ｎ−メチロールアクリルアミド、Ｎ−ビニルピロリド
ンおよびＮ、Ｎ’−メチレンビスアクリルアミドの共重
合体） ９００ｍｔの流動パラフィン（ＤＡＢ７）、０．２ｇの
前述の無水マレイン酸とビニルステアリルエーテルとの
共重合体、４４．１１／のＮ−メチロールアクリルアミ
ド、４８．４１ｉ’のＮ−ビニルピロリドン、７５ｇの
Ｎ、Ｎ’−メチレンビスアクリルアミド、２ｇのアゾジ
イソブチロニトリル。

１２６ｍｔのジメチルホルムアミド、および４８ｍ１−
のポリエチレングリコール（分子ｉ　４００）を壕ず交
ヌ刃式攪拌器、還流凝縮器、温度計および窒素導入管を
有する円筒容器に導入した。窒素を通しかがら浴温を徐
々に６５℃に上げ、次４６− いで重合と後処理を実施例１と同様に行なった。

架橋生成物の収量はｓ９．１ｇ（＝理論の８９．１％）
であった。

無水マレイン酸とビニルドデシルエーテルとの相当する
共重合体を分散剤として用いると本質的に同一の生成物
が得られる。

エポキシド基含有生成物への転化は実施例１中に記載の
方法により行なった。そのビーズ状生成物は５６７　！
ｌ／ｌの嵩密度および３２０のエポキシド当量を有した
。

実施例　３ （Ｎ−メチロールアクリルアミド、Ｎ−ビニル−Ｎ−メ
チルアセタミドおよびＮ、Ｎ’−メチレンビスアクリル
アミドの共重合体） １　　　　　次の系を実施例１に記載の装置中、この実
施例１に示された条件下に重合に付した。

９　Ｄ　Ｏｍｌの流動パラフィン、０．２．９の実施例
２に用いた無水マレイン酸とビニルステアリルエーテル
との共重合体、４６．７ｇのＮ−メチロールアクリルア
ミド、４５．８．９ＯＮ−ビ＝　ルー　Ｎ　−メチルア
セトアミド、乙５ｇのＮ、Ｎ’−メチレンビスアクリル
アミド、２．０．９のアゾジイソブチロニトリル、１２
６ｍＡのツメチルホルムアミドおよび４８ｍ１−のポリ
エチレングリコール（分子量４００）。

後処理は実施例１に記載した方法と同様に行なった。

架橋共重合体の収量は９４ｇ（理論の９４チ）であった
。

エポキシド基含有生成物への転化は実施例１中に記載の
方法で行なった。ビーズ状生成物は２８７　ｇ／ｌの嵩
密度および１９３のエポキシド当量を有した。

実施例　４ （Ｎ−メチロールアクリルアミド、Ｎ−ビニルピロリド
ンおよＵＮ＋Ｎ’−シヒニルエチレン尿素の共重合体） 次の系を実施例１の条件下に実施例２の装置中で重合に
付した。

９０（Ｉｍｔの流動パラフィン、０．２ｇの実施例２に
用いた無水マレイン酸とビニルステアリルエーテルとの
共重合体、４０．！ＭのＮ−メチロールアクリルアミド
、４４．５ＦＮ−ビニルピロリドン、１５ＩのＮ、Ｎ’
−ノビニルエチレン尿素、２．０Ｉのアゾソイツブチロ
ニトリル、１２６ｍ１のツメチルホルムアミドおよび４
８ｍＡのポリエチングリコール（分子量４００）。

後処理は実施例１と同様にして処理した。架橋共重合体
の収量９６ｇ（理論の９６チ）。

エポキシド基含有生成物への転化は実施例１に記載の方
法により行なった。ビーズ状生成物４９− は４９３１１／ｌの嵩密度および２８４のエポキシド当
量を有した。

実施例　５ （Ｎ−メチロールアクリルアミド、Ｎ−ビニルピロリド
ンおよびグリオキザールビスアクリルアミドの共重合体
） 次の系を実施例２の装置中、実施例１の条件下に重合に
付した。

９０　［］ｙｎｔの流動パラフィン、０．２ｙの無水マ
レイン酸とビニルステアリルエーテルとの共重合体（実
施例２と同様）、４４．１．９のＮ−メチロールアクリ
ルアミド、４８．４．９のＮ−ビニルピロリドン、７．
５ｇのグリオキザールビスアクリルアミド、２．０．Ｆ
のアゾソイツブチロニトリル、１２６．９のツメチルホ
ルムアミドおよび４８ｍ１のポリエチレングリコール（
分子量４００）。

後処理は実施例１と同様に行なった。架橋共５０− 重合体の収量９４．９　（理論の９４係）。

エポキシド基含有生成物への転化は実施例１に記載され
た方法により行なった。生成物は３４０１／／ｌの嵩密
度および４４２のエポキシド当量を有した。

実施例　６ （Ｎ−メチロールアクリルアミド、Ｎ−ビニルピロリド
ンおよびＮ、１１．Ｎ“−トリスアクリロイルペルヒド
ロトリアジンの共重合体） 次の系を実施例２の装置および実施例１の条件を用いた
重合に付した。

９００ｍ１の流動パラフィン、０．２．９の無水マレイ
ン酸トビニルステアリルエーテルとの共重合体（実施例
２と同様）、４５．３９のＮ−メチｏ　−／ｌ／　７　
りＩ）ルアミド、４９．７１のＮ−ビニルピロリドン％
　５．ＯＩＩのＮ、Ｎ′、Ｎ“−トリスアクリロイルペ
ルヒドロトリアジン、２ｇのアゾジイソブチロニトリル
、１２６ｍｔのツメチルホルムアミドおよび４８ｍｔの
ポリエチレングリコール（分子量４００）。

後処理は実施例１に記載された方法と同様にして行なっ
た。架橋共重合体の収量７９ｇ（理論の７９係）。

エポキシド基含有生成物への転化は実施例１に記載され
た方法により行なった。ビーズ状生成物は２３３　ｇ／
ｌの嵩密度および３５７のエポキシド当量を有した。

実施例　７ （Ｎ−メチロールアクリルアミド、Ｎ−ビニルピロリド
ンおよびＮ、Ｎ’−メチレンビスアクリルアミドの共重
合体） 次の系を実施例２の装置および実施例１の条件を用いた
重合に付した。

９ＤＯｍｔの流動パラフィン、０．２．Ｆの無水マレイ
ン酸とビニルステアリルエーテルとの共重合体（実施例
２と同様）、４０．５．９のＮ−メチロールアクリルア
ミド、４４．５．！ｉ’のＮ−ビニルピロリドン、１５
ｇのＮ、Ｎ’−メチレンビスアクリルアミド、２ｇのア
ゾソイツブチロニトリル、１２６ｇのツメチルホルムア
ミド、および４５ｍＡのエチレングリコール。

後処理は実施例１に記載の方法と同様にして行なった。

架橋共重合体の収量９６Ｉ（理論の９６％）。

エポキシド基含有生成物への転化は実施例１に記載され
た方法によシ行なった。生成物は５３３１／ｌの嵩密度
および２１１のエポキシド当量を有した。

実施例　８ （Ｎ−メチロールアクリルアミド、Ｎ−ビニルピロリド
ンおよびＮ、Ｎ’−メチレンビスアクリ５３− ルアミドの共重合体） 次の系を実施例２の装置および実施例１の条件を用いた
重合に付した。

ｑｏｏｍｔの流動パラフィン、１ｇの無水マレイン酸と
１−オクタデセンとの共重合体（実施例１と同様）、４
０．５＃のＮ−メチロールアクリルアミド、４４．５．
ＦのＮ−ビニルピロリドン。

１５．９のメチレンビスアクリルアミド、２ｇのアゾソ
イツブチロニトリルおよび４５ｍｔのグリセロールトリ
アセテート。

重合時間は７０℃で１時間および８０℃で４時間とした
。

後処理は実施例−１にＮｅ載の方法と同様にして行なっ
た。架橋共重合体の収量９８ｇ（理論の９８チ）。

エポキシド基含有生成物への転化は実施例１に記載の方
法により行なった。ビーズ状生成物５４− Ｈ２４０ｇ／ｌの嵩密度および２１４のエポキシド当量
を有した。

実施例　９ （Ｎ−メチロールアクリルアミド、Ｎ−ビニルピロリド
ンおよびＮ、Ｎ’−メチレンビスアクリルアミドの共重
合体） 次の系を実施例２の装置および実施例１の条件を用いた
重合に付した。

９００ｍｔの流動パラフィン、０，２ｇの無水マレイン
酸とビニルステアリルエーテルとの共重合体（実施例２
と同様）、４４．１９のＮ−メチロールアクリルアミド
、４８．４．９のＮ−ビニルピロリドン、７．５．９の
Ｎ、Ｎ’−メチレンビスアクリルアミド、２．０．９の
アンモニウムペルオキシジサルフエート、３ｏｍｔの蒸
留水および１０６ｍ１−のジアセトンアルコール。

重合時間は８０℃で５時間とした。後処理は実施例１に
記載の方法と同様にして行なった。

架橋共重合体の収量７２ｇ（−理論の７２％）。

エポキシド基含有生成物への転化は実施例１に記載され
た方法により行なった。ビーズ状生成物は１８０　ｇ／
ｌの嵩密度および４６０のエポキシド当量を有した。

実施例　１０ （Ｎ−（２−ヒドロキシエチル）アクリルアミド、Ｎ−
ビニルピロリドンおよびＮ、Ｎ’−メチレンビスアクリ
ルアミドの共重合体） ８００ｒｎｔの低粘度流動パラフィンＤＡＢ　７　（分
散剤）、２．０．９の無水マレイン酸と１−オクタデセ
ンとの共重合体（モル比１：１．２５℃において０．６
チ強度トルエン溶液として測定したＲ３Ｖ値０．０６４
　ｄｔ力）、４３．３　＆のＮ−（２−ヒドロキシエチ
ル）アクリルアミド、４１．７１のＮ−ビニルピロリド
ン、１５ＩのＮ、Ｎ’−メチレンビスアクリルアミド、
２ｇのアゾジイソブチロニトリル、２１２ｍｔのシ２メ
チルホルムアミドおよび９０ｍ１のポリエチレングリコ
ール（分子量約４００）をまず、攪拌器、温度計、窒素
導入管および還流凝縮器を設けだ丸底フラスコに導入し
た。

次にこの混合物を攪拌しなから徐々に加熱した。約６５
℃で発熱重合反応が始まり、その際温度は約８０℃に上
昇した。この温度はサーモスタット付き油浴によ＃）１
時間維持し１次いで浴温な４時間９０℃に上げて重合を
完結させた。

次に加熱浴を取シ除きそしてそのバッチを攪拌しながら
４０℃まで冷却した。次いで攪拌を止めたところビーズ
状重合体がしばらくして沈降した。次に主要量の流動パ
ラフィンをサイホンで除去しそして残留物を次に吸引濾
過器を介して吸引した。次に生成重合体を石油エーテル
で５７− 処理して付着流動パラフィンを除去した。続いて、それ
をメタノール、次いでアセトンと共に十分攪拌しそして
最後にアセトンを用い沸点で抽出して未反応単量体およ
び分散剤を溶出した。

最後に重合体を真空釜中５０℃で一夜乾燥しそしてスク
リーンにかけた。

架橋共重合体の収量は９５．！ｉ’より大（すなわち理
論の９５俤より大）であった。

無水マレイン酸とドデセンとから製造された相当する分
散安定化剤を用いた場合にも本質的に同じ生成物が得ら
れる。

１５１１の５０〜１００μｍスクリーン画分を１００ｍ
１のエピクロロヒドリン中で１６時間膨潤させ。

次いで１１５℃で４時間加熱しそして２５℃に冷却後吸
引濾過しだ。それを次に２回にわたってその都度アセト
ン２００ｍｔと共に３０分攪拌し、吸引濾過しそして窒
素下に４０℃で真空乾５８− 燥釜中で一夜貯蔵した。

秤量したところ、４４０１１／ｌの嵩密度および１８２
のエポキシド当量を有するビーズ状生成物１４．３＃が
得られていることが示された。

実施例　１１ （Ｎ−（２−ヒドロキシエチル）アクリルアミド、Ｎ−
ビニルピロリドンおよびＮ、Ｎ’−エチレンビスアクリ
ルアミドの共重合体） ９００ｍｌの流動パラフィン（ＤＡＢ　７　）　、　０
．２Ｉの実施例１に記載された無水マレイン酸とビニル
ステアリルエーテルとの共重合体、４７．１１のＮ−（
２−ヒドロキシエチル）−アクリルアミド、４５．４．
９のＮ−ビニルピロリドン、７，５ＩのＮ、Ｎ’−エチ
レンビスアクリルアミド、２ｇのアゾジイソブチロニト
リル、１２６ｍｔのジメ（。

チルホルムアミドおよび４８ｍｔのポリエチレングリコ
ール（分子１４ｏｏ）をまず交叉刃型攪拌器、還流凝縮
器、温度計および窒素導入管を有する円筒容器に導入し
た。窒素を通じながら徐々に浴温を６５℃に上げ１次い
で重合および後処理を実施例１に記載の方法と同様にし
て行なった。

架橋生成物の収量は９２．３９（−理論の９２．３係）
であった。

エポキシド基含有生成物への転化は実施例１に記載され
た方法により行なった。ビーズ状生成物は３８５９／Ｌ
の嵩密度および３４０のエポキシド当量を有した。

実施例　１２ （Ｎ−（２−ヒドロキシエチル）アクリルアミド、Ｎ−
ビニルピロリドンおよびＮ、Ｎ’−へキサメチレンビス
アクリルアミドの共重合体）９００ｍｔの流動パラフィ
ン（ＤＡＢ　７）、　０．２ｇの実施例１に記載された
無水マレイン酸とビニルステアリルエーテルとの共重合
体、４５．６ｇのＮ−（２−ヒドロキシエチル）アクリ
ルアミド、４１．７ＮのＮ−ビニルピロリドン、１５ｇ
のへキサメチレンビスアクリルアミド、２ｇのアゾツイ
ンブチロニトリル、１２６ｍ１のツメチルホルムアミド
および４８ｍｔのポリエチレングリコール（分子量４［
１０）をまず交叉刃型攪拌器、還流凝縮器、温度計およ
び窒素導入管を有する円筒容器に導入した。窒素を通じ
なから浴温を徐々に６５℃に上げ１次いで重合および後
処理を実施例１に記載した如く行なった。

架橋生成物の収量はａＳ、、Ｓ＆（＝理論の８５．３チ
）であった。

エポキシド基含有生成物への転化は実施例１に記載され
た方法により行なった。ビーズ状の生成物は４２０１１
／ｌの嵩密度および２８０のエポキシド当量を有した。

６１一 実施例　１３ （Ｎ−（２−ヒドロキシエチル）アクリルアミド、Ｎ−
ビニルピロリドンおよびＭ、Ｎ’−ノビニルエチレン尿
素の共重合体） ９００　ｍｌの流動パラフィ７（ＤＡＢ７）、０．２Ｉ
の実施例１に記載された無水マレイン酸とビニルステア
リルエーテルとの共重合体、４３．３１のＮ−（２−ヒ
ドロキシエチル）−アクリルアミド、４１゜７ＩのＮ−
ビニルピロリドン、１５．ＯＩのＮ、Ｎ’−ノビニルエ
チレン尿素、２１／のアゾジイソブチロニトリル、１２
６ｍＡのジメチルホルムアミドおよび４８ｍｔのポリエ
チレングリコール（分子量４００）をまず交叉刃攪拌器
、還流凝縮器、温度計および窒素導入管を有する円筒容
器に導入した。窒素を通じなから浴温を徐々に６５℃に
上げ１次いで重合および後処理を実施例１に記載した如
く行なった。

６２− 架橋生成物の収量は８７．３ｇ（−理論の８７゜３チ）
であった。

エポキシド基含有生成物への転化は実施例１に記載され
た方法により行なった。ビーズ状生成物は３９５　Ｅｌ
／ｌの嵩密度および２８７のエポキシド当量を有した。

の反応 実施例　１４ 燐酸カリウム（緩衝液）中１モル濃度であシ（−して８
．０のｐＨを有するペニシリンアシラーゼ溶液（２５ｍ
９／ｍｔ、２４３　Ｕ／ｍｔ）　１，１．００μｔを実
施例１によシ製造した担体０．２１ｉに添加した。

７２時間結合させた後、それらビーズを１Ｍ食１　　　
塩水および緩衝溶液で十分洗浄した。濾過漏斗からの湿
った物質の収量は６７Ｂ＝Ｉ＋９であり、まだカリウム
ベニシリネートを基質として用い３７℃およびｐＨ７，
８において自動滴定器で測定した結果は２７０単位／ｌ
Ｉであった。

これは乾燥重量に基づき９１６単位／ｇであった。初期
活性および洗浄水中の活性を差引計算した後に残ってい
る結合収率（＝担体上の活性／利用可能な活性）は６９
チであった。η値は０．８２であった〔η＝活性実測値
／（利用可能な活性−洗浄水中の活性）〕。

実施例　１５ ベンズアミジン中１．６Ｘ１０　　モル濃度、および燐
酸カリウム（緩衝液）１モル濃度でありそして乙８のｐ
Ｈを有するトリプシン溶液（６，２５ｍ９／ｍｌ　、　
３４５　Ｕ／ｍｔ）　１．００　Ｄ　／ｌＬを実施例２
により製造された担体０．２ｇに添加した。７２時間結
合させた後、それらビーズを１Ｍ食塩水および緩衝溶液
で十分洗浄した。濾過漏斗からの湿った物質の収量は５
８９ｍ９であり、そしてＮ′−ベンゾイル−Ｌ−アルギ
ニンエチルエステル塩酸塩（ＢＡＥＥ）を基質として用
い３７℃およびｐＨ８，１において自動滴定器で測定し
た結果は４８５単位／ｙであった。これは乾燥重量基準
で１．４２９単位であった。初期活性および洗浄水中の
活性を差引計算した後に残る結合収率は６゜チであった
。η値は０．６１であった。

実施例　１６ 燐酸カリウム（緩衝液）中１モル濃度でありそしてｐＨ
８，０を有するウレアーゼ溶液（６０ｍｙ／ｍｌ、　　
４５．５　Ｕ／ｍｌ）　１，０００　ｆｉｔを実施例２
により製造した担体０．２ｇに添加した。７２時間結合
させた後、それらビーズを１Ｍ食塩水および緩衝溶液を
用いて十分洗浄した。濾過漏斗からの湿った物質の収量
は５６１■であり、そして尿素を基質として用い３０℃
およびｐＨ６，１において自動滴定器で測定した結果は
４７単ｖｇ６５− であった。これは乾燥重量基準で１３２単ｖＩ！であっ
た。初期活性と洗浄水中の活性を差引計算した後に残っ
た結合収率け８３％であった。

η値は０．８７であった。

実施例　１７ 燐酸カリウム（緩衝液）中１モル濃度でありソシてｐＨ
８，０を有するペニシリンアシラーゼ溶液（２５ｍ９／
ＭＬ、　２４３　Ｕ／ｍｔ）　１，０００μｔを実施例
２に従って製造された担体０．２ｇに添加した。７２時
間結合させた後、それらビーズを１Ｍ食塩水および緩衝
溶液で十分洗浄した。濾過漏斗からの湿った物質の収量
は５９７■であり、またカリウムベニシリネートを基質
として用い３７℃およびｐＨ７−８において自動滴定器
で測定した結果は３５６単位／ｙであった。これは乾燥
重量基準で１．０６３単位／ｇであった。結合収率ば８
８チであった。η値は０，９ｏであっ６６− た。

実施例　１８ 燐酸カリウム（緩衝液）中１モル濃度でありそしてｐＨ
８，０を有するペニシリンアシラーゼ溶液（２５ｍ９／
ｍＡ、　２８０　Ｕ／ｍＬ　）　９００μｔを実施例１
１に従って製造された担体０．２ｇに添加した。７２時
間結合後、それらビーズを１Ｍ食塩水および緩衝溶液で
十分洗浄した。濾過漏斗からの湿った物質からの湿った
物質の収量は６６！Ｉｎ’であり、またカリウムベニシ
リネートを基質として用い６７℃およびｐＨ７，８にお
いて自動滴定器で測定した結果は２５０単位／ｇであっ
た。

これは乾燥重量基準で８３１単位／Ｉであうた。初期活
性および洗浄水中の活性を差引計算り した後に残る結合収率（＝担体上の活性／利用可能な活
性）は６７チであった。η値は０．６８であつた。

実施例１９ ベンズアミジン中１．６　Ｘ　１０−２Ｍおよび燐酸カ
リウム（緩衝液）中１Ｍでありそして７．８のｐＨを有
するトリプシン溶液（６，２５ｍ９／ｍｔ、　　４４０
Ｕ／ｍｔ）　７００μｔを実施例１２に従って製造され
た担体０．２ｇに添加した。７２時間結合後、それらビ
ーズを１Ｍ食塩水および緩衝溶液で十分洗浄した。濾過
漏斗からの湿潤物質の収量は６５７ｒｖであシ、まだＮ
′−ベンゾイル−Ｌ−アルギニンエチルエステル塩酸ｍ
（ＢＡＥＥ）　を基質として用い３７℃およびｐＨ８，
１において自動滴定器で測定した結果は４６０単位／Ｉ
であった。これは乾燥重量基準で１，２００単位／Ｉで
あった。初期活性および洗浄水中の活性を差引計算した
後桟る結合収率は８０％であった。η値は０゜９であっ
た。

実施例　２０ 燐酸カリウム（緩衝液）中１Ｍでありそして８．０のｐ
Ｈを有するペニシリンアシラーゼ溶液（２５ｍ９／ｍｔ
、２９５　Ｕ／ｍｔ）　１，０００１ｔｔを実施例１３
に従って製造した担体０．２　Ｆに添加した。７２時間
結合後、それらビーズを１Ｍ食塩水および緩衝溶液で十
分洗浄した。ν過漏斗からの湿潤物質の収量は６６１Ｆ
ｎ９であり、まだカリウムベニシリネートを基質として
用い６７℃およびｐＨ７，８において自動滴定器で測定
した結果は５１０単位／Ｉであった。これは乾燥重量基
準で１．０２５単位／Ｉ／であった。結合収率は７０チ
であった。η値は０．９５であった。

特許出願人　　ヘキスト・アクチェンゲゼルシャフト６
９− 第１頁の続き 優先権主張　＠１９８４年２月６日■西ドイツ（ＤＥ）
＠Ｐ３４０４０２１．８

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １）式 ％式％（１） （式中Ｘは水素またはメチルであり、Ｒは１〜１２個の
   炭素原子を有する脂肪族炭化水素基であり、そしてＹは
   ＯＨまたはＮＨ２を表わす）で表わされる単量体に由来
   する単位と式（Ｉ）で表わされる単量体と共重合し得る
   少なくとも１種の他の単量体に由来する単位から本質的
   に成シ、かつ本質的に球状の形および５〜２１０００ｎ
   ｍの平均孔直径を有しそして平均粒度が２０〜８００μ
   ｍの範囲にある重合体粒子から成る重合体。 ２）１０〜１ｌ１０００ｎの平均孔直径を有する特許請
   求の範囲第１項に記載の重合体。 ５）式（Ｉ）におけるＲが１〜６個の炭素原子を有する
   脂肪族炭化水素基であシ、そしてＹが末端（第１級）Ｏ
   Ｈ基である特許請求の範囲第１項または第２項に記載の
   重合体。 ４）　　Ｒがメチレンである特許請求の範囲第６項に記
   載の重合体。 ５）架橋単量体単位の取シ込みによって架橋される特許
   請求の範囲第１項〜第４項のいずれかに記載の重合体。 ６）親水性基を有する単量体に由来する単位を含む特許
   請求の範囲第１項〜第５項のいずれかに記載の重合体。 ７）基Ｙのうちの少なくとも一部をスペーサと反応させ
   である特許請求の範囲第１項〜第６項のいずれかに記載
   の重合体。 ８）スペーサが全重合体に対して０．１〜２ｏモルチの
   量のエポキシド単位を導入する特許請求の範囲第７項に
   記載の重合体。 ９）式（Ｉ）で表わされる単量体に由来する単位１０〜
   ８０モル係、親水性基を有する単量体圧由来する単位２
   ０〜５０モル係、および架橋基を有する単量体に由来す
   る単位１〜５０モルチよシ本質的に成る特許請求の範囲
   第１項〜第８項のいずれかに記載の重合体。 １０）式 ％式％（） （式中Ｘ、ＲおよびＹは前述の意味を有する）で表わさ
   れる化合物と、それと共重合し得る少なくとも１種の他
   の重合体とを重合条件下ではそれら単量体および重合体
   を溶解しない液体分散剤中でラソカル開始剤および分散
   安定化剤の存在下に重合させることより成り、そして前
   記分散安定化剤として無水マレイン酸と、アルキル基に
   ６〜３０個の炭素原子を有スルビニルアルキルエーテル
   、カルボン酸基に６〜５０個の炭素原子を有するビニル
   エステルまたは８〜３０個の炭素原子を有する比較的長
   鎖のα−オレフィンとの共重合体を用いることを含む、
   特許請求の範囲第１項〜第９項のいずれかに記載の重合
   体の製造方丸１１）分散安定化剤を単量体混合物に対し
   て０゜００５〜１０重量％の量で用いる特許請求の範囲
   第１０項に記載の方法。 １２）分散安定化剤が交互共重合体である特許請求の範
   囲第１０項または第１１項に記載の方法。 １５）分散安定化剤として用いられる共重合体のＲ８Ｖ
   値が０．０１〜１．０ｄｌ／１（２５℃において０．６
   チ強度トルエン溶液として測定）である特許請求の範囲
   第１０項〜第１２項のいずれかに記載の方法。 １４）ビニルアルキルエーテルがビニルステアリルエー
   テルであり、そして比較的長鎖のα−オレフィンが１−
   オクタデセンである特許請求の範囲第１０項〜第１５項
   のいずれかに記載の方法。 １５）６〜２０個の炭素原子を有する炭化水素または低
   粘度流動パラフィンを液体分散剤として用いる特許請求
   の範囲第１０項〜第１４項、　のいずれかに記載の方法
   。 １６）ビーズ重合体の多孔度を高めるために重合系が単
   量体に易溶であるかまたはそれらと混合し得るものであ
   わ、そして分散剤には実質的に不溶である特許請求の範
   囲第１０項〜第　５− １５項に記載の方法。 １７）好ましくはスペーサと反応させた後の、担体結合
   生物活性物質の調製のだめの特許請求の範囲第１項〜第
   ９項のいずれかに記載の重合体の使用。 １８）生物活性物質が酵素でおる特許請求の範囲第１７
   項に記載の使用。