JPS5946487B2 - 免疫強化剤 - Google Patents

Description

【発明の詳細な説明】 本発明は黄色ブドウ球菌を破砕せしめて得た成分からな
る免疫強化剤に関する。

本発明において免疫強化剤と称するのは、細胞性免疫機
能が減弱している疾病、特に悪性腫瘍の治療ならびに予
防に用いられる薬剤であって、経口、貼布（外用）、点
鼻、特に注射によって用いられるが、ウィルス感染症、
細菌感染症の治療ならびに予防においても効果を有する
ものである。

従来より人癌宿主の一般的な免疫能を増強することによ
り二次的に癌に対する生体の免疫応答を促進させようと
いう方法が癌の免疫療法に応用されている。

これらの一つとしてＢＣＧがあり、抗腫瘍効果上はＢＣ
Ｇ生菌が優れているが、人への応用に際して感染の危険
がないわけではない。

そのほかにも抗腫瘍作用が認められる細菌に嫌気性コリ
ネバクテリウム、溶連菌がある。

現在、癌の療法としては外科療法、化学療法あるいは放
射線療法が主な療法であるが、癌患者は一般的に免疫能
がもともと減弱している上に化学療法あるいは放射線療
法はさらに免疫能を低下させるという欠点があり、本発
明の免疫強化剤は上記のような欠点を排除することを目
的としたものであるが、このような免疫強化剤としては
、本発明品のような細菌由来物質のほかに、かわらたけ
菌糸体より得た蛋白多糖体、シイタケより分離した多糖
体などがある。

免疫強化剤としての評価は、生体内あるいは試験管内試
験における免疫学的検定法とともに、病態動物における
治療あるいは予防効果を観察しなければならなＧｂ 本発明者らは、各種黄色ブドウ球菌を破砕せしめて得た
成分について検定を行い数種の知見を得たが、特にこれ
まで癌の免疫療法に試用されたことのない黄色ブドウ球
菌より得られる処理物が全く予期しない優れた抗腫瘍作
用を有することを見出し、さらに安全性の上では全く問
題がないこと、実用に際し本発明品の投与による効果発
現に関し好都合な条件がととのっていることを発見しｔ
も本発明はこの発見に基づくものである。

本発明の免疫強化剤は既述したように黄色ブドウ球菌を
破砕せしめて得た成分からなるものである。

なお、本発明品は黄色ブドウ球菌の菌株には関係なく、
各種の細菌処置法により破砕して得た成分もその効果お
よび毒性はほとんど変らず、得られた成分の精製、純化
など、いろいろの変更、修正をなし得るが、その調製法
を例示する。

例１ 平板寒天上で１６時間培養した黄色ブドウ球菌株を生石
浸出ブイヨン中に接種し、１７７１１中に約１０億個の
コロニーを形成するように３０℃において約１６時間培
養した。

その後、ブドウ球菌バクテリオファージを加え、３０℃
において約１６〜３６時間培養を続け、ブドウ球菌を完
全に溶解せしめた後、ろ過して固形分を除去し、ろ液を
本発明の免疫強化削屑１として得た。

例２ 上記例１によって増殖したブドウ球菌の生石浸出ブイヨ
ン中の菌体を遠心分離によって集菌し、ｐＨ７，２のト
リス燐酸バッファーに再浮遊し、遠心分離して菌体を洗
浄した。

この操作を３回繰り返し洗浄ブドウ球菌を得、これを１
ｍｌ中に約１０億個含むように同じ（ｐＨ７，２のトリ
ス燐酸バッファー中に浮遊させた液を超音波破砕器（出
力１５０Ｗ３０分温度４〜５℃）にかけ、このようにし
て得た菌体成分を含む溶液を５ｅｌａｓろ過器（穴径０
．８ミクロン）によってろ過し、ろ液の無菌性を確めた
後、本発明の免疫強化剤Ａ２を得た。

例３ 例２によって得た洗浄ブドウ球菌沈層に蒸留水を加え（
１罰中約１，０００万個）菌体を浸透圧ショックによっ
て破砕し島 １夜４〜６℃に放置したのち、５ｅｌａｓ
ろ過器（０，８ミクロン）によってろ過し、ろ液を凍結
乾燥して得た固形分を加えた蒸留水の’／１０量のトリ
ス塩酸バッファー（ｐＨ７，４）に溶解し、不溶分を遠
心分離（６℃９．００ Ｏｒ、 ｐ、ｍ、 １時間）し
て除き、このようにして得た清澄な液について無菌性を
確認したのち、本発明の免疫強化剤Ａ３を得島 上記のような黄色ブドウ球菌の破砕によって得られた本
発明の免疫強化剤はこれまでに癌の免疫療法に用いられ
たことはなかった。

本発明の黄色ブドウ球菌処理物を有効成分とする免疫強
化剤は、表１および表２、第１図に示すような優れた抗
腫瘍効果を有する。

また、本発明の免疫強化剤の安全性に関しては、動物実
験による毒性試碩では全く問題なく、人における安全性
はウィルス感染症によって行なわれた二重盲検比較試験
ならびに細菌感染症に使用した経験から安全であること
が認められている。

さらに前記した好条件、すなわち人間は日常広範囲に存
在する常在菌としてのブドウ球菌に絶えずさらされてお
り、大多数の人間が本菌により感作を受けているので、
癌の免疫現象の主体をなす細胞性免疫機構の誘導誘発系
の前段階、すなわち誘導段階がすでに備わっており、本
発明にかかわる免疫強化剤を投与することによる後段階
、すなわち誘発段階において、効果発現が達成される好
条件がととのっていると考えられる。

本発明者は、前記機構の人間における普遍性をマウスを
使用した動物実験によって再現し得た。

マウスを人間における普遍性と合致させるため、あらか
じめブドウ球菌１０８個を週１回皮下投与し、４回感作
し、人の生態に近い実験動物を作製した。

この状態判定には、足随浮腫反応を指標として確認し篩
このように処理されたマウスはブドウ球菌抗原に対して
足岨浮腫反応で陽性を示し、遅延型過敏症が成立するが
、数週間に陰性に転する。

上記の実験系における本発明品の抗腫瘍試験は、人の臨
床の場に適合した動物実験モデルとしてふされしい。

この実験系による本発明品の抗腫瘍作用が無処置マウス
に対する抗腫瘍作用に比べ明らかに優れていることを見
い出した。

以下、本発明品を使用し、その薬理作用および毒性につ
いての試験例を記述する。

ここに示した試験例の本発明品調製のために使用した黄
色ブドウ球菌は感染症患者由来の８１１株および８３３
株、例１の発明品に使用したバクテリオファージはＢ２
Ｓ３である。

試験例 １ 抗腫瘍作用 （１）無処置マウスにおけるザルコーマ１８０Ａに対す
る抗腫瘍作用 マウスの腹腔内にザルコーマ１８０Ａの腫瘍細胞ｌＸ１
０６個を移植し、翌日より本発明の免疫強化剤４１（以
下本発明品と称す）を７日間連続投与した。

マウスを１群６匹で５群用意し、各群に対し本発明品の
投与量を１．０ｍｌ／マウス、０、３１１１１／ マウ
ス、０．１−／マウス、０．０３７ｄ／マウスおよびコ
ントロール群には生理的食塩液、０、１ ｒｆＬｌ／マ
ウスとした。

各マウスはザルコーマ１８０Ａ移殖後８日目に殺し、腹
水量を測定し、さらに細胞比を求め、総細胞容積（ＴＰ
ＣＶ）を算出した。

コントロール群のＴＰＣＶを１００としたときの各群の
腫瘍成長率（へ）を求めた（表１）。

表１から明らかなように、投与量を増すに従い腫瘍成長
率は減少し、腫瘍成長率の５０％有効量は約０．２４
ｙｄ／マウスであることが推定される。

（２）黄色ブドウ球菌感作マウスにおけるザルコーマ１
８０Ａに対する抗腫瘍作用 １群６匹で４群用意し、各群マウスは前記の感作マウス
を使用した。

ザルコーマ１８０Ａの移植、本発明品の投与、コントロ
ール群の処理および半淀は（１）と同様に行った（ただ
し本発明品の投与ｉ０．０３ＴＬｌ／マウスに関する実
験は行なっていない）。

表２は前記の実験結果を示すが、表２で明らかなように
１．００ｍ１／マウス群においては腫瘍の増殖が全く認
められず、５０％有効量は約０．０８ｍ１／マウスとな
り（１）の結果と比べて極めて有効なことがわかる。

臨床の場に適した動物モデルを使用して得られた実験の
結果は、本発明品の実用上の有利性を示すものである。

（３）黄色ブドウ球菌感作マウスにおけるエールリッヒ
腹水癌に対する抗腫湯部作用 マウスを１群１０匹として２群用意し、１群は感作マウ
スを、他の１群は無処置マウスを使用した。

両群のマウスの腹腔内にｌＸｌ０’個のエールリッヒ腹
水癌を移植し、試験群（感作マウス群）に本発明品１．
０ ｍｌ／マウスを腫瘍細胞移植後３，６，８，１０．
１２日目方腹腔内に注射した。

腫瘍細胞を移植した後、３日、６日、９Ｂ、１２日、１
５日を経て前記２群の体重を測定し、本発明品の腫瘍増
殖抑制効果を判定しｔも判定の結果は第１図に示した通
りであり、本発明品の腫瘍増殖抑制効果のすぐれている
ことが明らかである。

試験例 ２ 免疫機能に及ぼす作用 （１）マクロファージ活性化作用 本発明品の細胞性免疫能を測定するのに、直接的方法す
なわち実験動物の腹腔マクロファージの量的変化を測定
する方法を甲いた。

前記測定法およびその結果を下記に説明する。

１群５匹として４群用意し、３群は前記感作マウス、他
の１群はコントロール群として正常マウスとした。

各群のマウスに本発明品０．１ｍｌ／マウスを腹腔内に
投与し、投与後４時間、２４時間、４８時間経過した後
、腹腔内の腹腔細胞数を数えた。

結果を表３に示す。

表３で明らかなように感作マウス群の腹腔細胞数は、コ
ントロール群のマウスに比べて極めて増加していた。

このことは本発明品が感作マウスのマクロファージ走化
能を持っており、ブドウ球菌に感作された人集団におい
ても同じように本発明品が有効に働くことを示す。

（２）インターフェロン誘発能 本発明品０．２１ｎｌをマウスの尾静脈に投与し、２４
時間後に採血し、その血清について、Ｌ％細胞・■Ｓｖ
の系によるブラック半減法でインターフェロンカ価を測
定した。

その結果を表４に示す。

この結果より明らかなように本発明品は高いインターフ
ェロン誘発能がみられ、本発明品の抗ウィルス作用と密
麹に関係しているものと考えられる。

有効量および投与量 （：）上記の動物実験の結果をまとめると、ザルコーマ
１８０Ａに対する本発明品の腹腔内投与における抗腫瘍
効果は投与量が０．０４ ｄ／マウスすなわち２．０
ｍＡ／に９以上で腫瘍の増殖が抑制され（第２図参照）
、実際臨床の場を反映している黄色ブドウ球菌による前
感作のみでも効果が見られ、さらに本発明品を投与すれ
ば著しい腫瘍の増殖抑制効果が見られる。

またこの投与量は極く微量であっても効果があり、コン
トロールマウスに比較して５０％の腫瘍増殖抑制を達す
るのに必要な本発明品の投与量は０．０８ｍ１／マウス
すなわち４．ＯｍＪ／に９であった（第２図参照）。

（ｉｉ） 人体への投与量は、皮下、皮内へ投与する
場合１日１回注射局所の反応が微弱な０．１ｍ７！の投
与から開始し、漸次増量して１〜２ｍｌを維持量とする
。

腫瘍内注入の場合１回１〜３ｍｌを毎日または数日こ１
回投与する。

毒 性 （１）急性毒性 本発明品につきマウスおよびラットにおける急性毒性試
験を行ったところ、表４にに示す結果が得らへ物理的に
投与し得る限界の最大容量においても動物は死亡せずＬ
Ｄ、ｏの数値の算出は不可能であった。

（ｉｉ） 亜急性毒性・・陽性毒性 亜急性毒性試験、慢性毒性試験をそれぞれラットを用い
本発明品を前者は３０日間、後者は１８２日間投与する
ことにより行なった。

生理食塩液を２０ｍＡ／ｋｇ皮下に投与したコントロー
ル群と、本発明品を低量、中量、高量毎日皮下に投与し
た各群１０匹の試験群とを比較すると、本発明品を高量
（２０，０ｍｌ／ｋｇ）投与した試験群においても本発
明品に起因すると思われる異常所見は証められなかった
。

外見上の特徴 白色〜淡黄色澄明な水性注射液

【図面の簡単な説明】

第１図はエールリッヒ腹水癌に対する本発明品の抗腫瘍
作用を示す線図、第２図はザルコーマ１８０Ａに対する
本発明品の効果を示す線図である０

Claims (1)

【特許請求の範囲】
1. １ 黄色ブドウ球菌を破砕せしめて得た成分からなるこ
   とを特徴とする免疫強化斉り