JPS5948092A - Ｌ−セリンの製造法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 本発明はＬ−セリンの製造法に関し、更に詳しくはサル
シナ属に嘱し、セリンハ会イドロキサメ−）、Ｄ−セリ
ン、Ｌ−セリン又はグリシンに耐性を有し、かつグリシ
ンよりＬ−セリンを生成する能力を有する微生物を用い
、酵素法によりＬ−セリンを製造する方法に関する。

その目的は安価なグリシンを原料として栄養上あるいは
医藁ヒ広い用途を有するＬ−セリンを１察的有利に１侍
するノミ法を提供することにある。

従来、微生＠を用いて発酵法又はＰＩＹ素法によりＬ−
セリンを製造する方法としては、アルスロバクタ−用（
特公昭５２−１２２７３１．シュードモナス１〆４（特
開昭５５’−２ｆｉ８７５）、コリネノぐクテリウムｆ
１゛べ（特開昭５５−２１８３！１５　）、Ｚカルシア
１４（特開昭５３−７２８１４）、廿ルシナ属（特開昭
５３−８１６９１）などの細菌や放線菌を用いる方法が
知られているが、こＪ’Ｌら公知方法では■・−セリン
生成薩が必ずしも満足しうるものではなかった。

本発明者ら（′ｉ、より効率のよいＬ−セリンの製造法
番こついて鋭意研究を重ねた結果、→Ｆルシナ属に属し
、セリンハイドロキサメート、Ｄ−セリフ。

める能力を有り、ていることを見い出し１本発明をすな
わち１本発明はサルシナ属に属し、セリンハ＋イドロキ
サメート、Ｄ−セリン、Ｌ−セリン又はグリシン番こ耐
性を有し、かつグリシンよりＬ−セリンを生成する能力
を有する微生物の培養液、該培養液から得られた生菌体
或いは該生菌体の処理物をグリシンを含む基質溶液と接
触させて反応液中（こＬ−セリンを生成蓄積せしめ、つ
いで生成したＬ−セリンを採取することからなるＬ−セ
リンの製造法である。

本発明方法では、サルシナ属に属し、セリン／％イドロ
キサメート、Ｄ−セリン、Ｌ−セリン又はグリシンに耐
性を有し、かつグリシンよりＬ−セリフを生成する能力
を有する微生物であればいかなる菌株をも用いうる。か
かる微生物はサルシナ照射、γ線照射、薬剤処理などの
公知の変異処理をほどこし″＃−０親株が生育できない
ような量のセリンハイドロキサメート、Ｄ−セリン、Ｌ
−セリン又はグリシンを含有する寒天培地上に生育でき
るような菌株を選択すればよい。このようにしてＪ（１
４得した菌株の好適な例としては、ハイドロキサメート
（こ耐性ｆｒ廿セルシナ了ルビｔｌ　４ｐ　Ｓ　−２２
３０（徴工研閃寄第　６６’／６　号）、Ｄ−セリンに
耐性なサルシナ・アルビダＯ８−１６ＱＯ（微工研閂寄
第６６′１５号）、Ｌ−セリン１こ耐性なサルシナ・ア
ルピダ０Ｓ−１７１Ｑ（微工研閑寄ｆｆ１６６？’１１
．グリシンに耐性な井ルシナパｒルビグａｓ−２４１７
（微工研菌寄第６６？ｑ号）など／１（、もげられる。

本発明に係わる微生物を培養するための培地としてＩｉ
、炭素源、窒素源、側戊物及び必要ぷこより他の栄欅物
を程よく含有する培地であれば合成培地、天然培地のい
ずれも使用できる。培地に使用ロールの如キ多価アルコ
ール、酢酸、７マール酸、クエン酸などの有機酸などが
使用され、その債は＋１１常培地中０．１−１０＜程度
が適当である〜窒素源としては９例えば塩化アンモニウ
ム、硫酸アンモニウム、りン酸アンモニウムなどの缶機
アンモニウム塩、尿素その他の窒素化合物、肉エキス、
酵母エキス、コーンメチ−プリカー。脱脂大豆粕または
その消化物などの天然窒素源などが使用され、その量は
通常、無機アンモニウム塩や窒素化合物については０．
５〜２＜程度が適当であり。

天然窒素源（こついて伐０．５〜５鴫程度が適当である
。無機物としては１例えばリン酸第−カリウム、リン酸
第二カリウム及びリン酸第三カリウムなどのリン酸塩が
０．１〜０．７鴨程度の蟻で使用され、更に硫酸マグネ
シウム、硫酸マンガン、硫酸第一鉄などが適宜使用され
ろ。また、使用微生物が生育のために他の栄養素を必要
とする場合には。

当然その要求を満足させる栄養素を培地に添加される場
合もある。尚、上記押収培地にグリシンを０゜１〜１幅
程度含有させれば゛菌体のＬ−セリン生成能を助長せし
めることができ、酵素反応に際して−Ｔａ好ましい効果
が期待できる。培養は振とう培養の如き好気的条件下２
５〜３７℃で実施するのプＩＣ奸　プｈ　　Ｌ、　　い
。

かくシ、て得られる培養液、該培養液から遠心分ｍ１（
等蓼こ１り分ｎ１トシた生菌体或いは該生菌体の処理物
（例えば固定化閂体）を酵素源とし、これにグリシンを
含有する基質溶液を接触させて酵素反応させることによ
り反応酸中に著ＲのＬ−セリンを（ 生成蓄積さ軽ることができる。基質ｒ８液中のグリシン
の０度は特に制限されないが、一般に２〜２０幅程度が
好ましい。

本発明の酵素反応はρ１６〜９程度１こおいて、温度２
０〜５０℃程度で振とうもしくはかく押下に実施するの
が好ましい。尚１反応系にピリドキサールリン酸を０，
０１〜］ｍＭ程度存在させておくことにより木酵素反応
をより効率よ〈実施することができる。

−に記酵素反応番こより反応中に蓄蝿のＬ−セリンが生
成蓄積する。生成ｌ、たＬ−セリンの単離精製は通常の
イオン交換樹脂法によって行うか、或いは反応液よりＬ
−セリンと未反応のグリシンの混合物を得、該混合物を
適当な溶媒（例えば、水〕成したし一セリン・ｍ−キシ
レン−４−スルホン酸塩を同相として単離し１次いで該
塩を脱酸することｌこよって行うことができる。

以下、参考例及び実施例を挙げて説明するカｆ。

実施例中生成したＬ−セリンの確認は錆層クロマトグラ
ム上のニンヒドリン発色法多こより行弁い。

又Ｌ−セリンの定量はロイコノストック・メセンテロイ
デスＰ−６０になるバイオアッセイ法番こより行なった
。

参考例　】 （サルシナ・アルヒダＯ３−２２１０の調製〕サルシナ
・γルビダＭＷ−３４の菌体を生耶食塚水にｌ　Ｑ７ｃ
ｅｌｌｓ／−の濃度になるように＠濁した。

この懸ｆｓ液にＮ−メチル−Ｎ′−二トローＮ−二トロ
ソクアニジンを最終濃度］Ｏ１倍／イになるように添加
し、３０℃で２０分分間上うした後、菌株を集菌し、該
菌株をよく洗浄してグルコース０．５％、酵母−ｃ−ｔ
−ス１．０％、肉エキス０．３％、ペフトン１、０　＜
　、　ＮａＣ１０，５＜からなる中間培地（ｐＨ７，０
１＋Ｃ−１：３０℃で２〜３時間振とぅ培養した。この
菌体を適当ｌこ稀釈して、５ｍＭ５度のセリンハイドロ
４−ｎ−メートを含むシュクロース０．３％、　　（Ｎ
Ｈ４）！Ｓ０４　Ｑ、　２％　、　Ｋ２ＨＰＯ４Ｑ、７
　％　、　ＫＨ，ｔＰＯ４０，３＜　、　１１ｇ８０４
０、　Ｏ３％、酵母エキス０．０５％、寒天１，５鳴か
らなる栄養培地（ｐＨ７，０）に俟布し、３０”Ｃで７
〜８日間培養した。生育したコロニーの中から釣菌する
ことｔこより、セ１ノンハイドロキサメートｌコ耐ｔ’
ＪＥすＬ　＝　セリン生産性の優れたサルシナ・アルヒ
ダＯ３−２２１０（微工研菌寄ｓ６′６？６号）を得た
。

参考例　２ （サルシナ・アルヒダＯ８−＋６（ＪＯ）サルシナ・ア
ルヒダＭｇ−３４を、５ｍＭｆＰｔ度のセリンハイドロ
キサメートを５９＝ｍＭ一度のＤ−セリンに代える以外
は紗考例１と同様に処理することにより、Ｄ−セリン６
ご耐性なＬ−セリン生産性の優ｎだサルシナ・アルヒダ
ｏｓ−１５００（微工研閑寄第６６９５号）を得１こ。

参考例　３ （サルシナ・アルヒダＯ８−１２１０の調製〕ＩＦルシ
ナ・アルヒダＭε−３４を、　５　ｍＱ１度のセリンハ
イドロキサメートを５００　ｍＪＱ度のＬ−セリンに代
える以外は参考例１と同様に処理すること番こより、Ｌ
−セリンに耐性なら一セリン生産性の浸れたチルシナ・
アルヒダｏｓ−】２】ｏｃ微工研菌寄＠ｂ６？チ号）を
得た。

会考例　４ （→Ｌルシナ・アルヒダＯ８−２４３７の調製）サルシ
ナ・アルヒダＭｇ−３４を、５ｍＭ濃度のセリンハイド
ロキサメートを］ＱＱｍｌＪ濃度のグリシンに代える以
外はお考例１と同様に処理することにより、グリシンレ
こ耐性なＬ−セリン生産性の優れたサルシナ・アルヒダ
Ｏ８−２４１７（ｌｉ工ｌｄ）菌寄＠　ｂ　６　？７　
号）　ｆ　４　ｆ：。

実施例　１ グルコース１　％、　（ＮＨＢ２ＳＯ４Ｑ、３％　、　
ｉ−ス）２鴨、グリシン０．４　％　、　ＫＨｔＰＯＪ
　Ｑ、ｌ’％　、　Ｋ２ＨＰＯ４Ｑ、ｌ＜　１Ｍｇ５Ｏ
４０，０１＜　カらナル組成の培地（ｐ）ｊ　７．０）
３ｍｌを試験管に入れ、滅菌した。該試験管喀こド記第
１表【こ示ず菌株を１白金耳植菌し。３０℃でサルシナ
・了ルビダＯ８−２４１７（微］二研閑寄第６６２７号
〕は４８時間、その他の菌株は２８時時間上う培養した
。この培養液を遠心分離し、菌体を集め、これを３　Ｘ
　１０’　Ｍ濃度のピリドキサールリン酸を含む５Ｗ／
Ｖ＜グリシン水溶液（Ｐ）＋　７．０）３ｄに懸濁し、
３０．Ｔ：で９　ｆｉ時間振とう反応を待命った。反応
液中に蓄積し１こ■・−セリンの情は下記第１表の肖り
である。

第　１　表 実施例２ 実施例１と同一組成の培地１００　ｍｌを５ＱＱｍ／容
坂ロフラスコ番こ入れてＩ６．菌し、サルシナ・アルビ
ダＯ８−２４１７（微工研閑寄第６６？７号）を−白金
耳植菌して３０℃で４１時間培養した。

この培養液９０−を遠心分離し、菌体を集め、３Ｘ１０
−ＳＭｉ度のピリドキサールリン酸を含む３〜５　Ｗ／
Ｖ　＜グリシン水溶液（ｐＨ７，０）　９０ｒｎ１．に
懸濁し、５００ｆｎ／容坂ロララスコで３０℃にて７２
時間振とう反応を打部った。反応液中に生成したＬ−セ
リンの晴はド記第２表に示す通りである。

第　　２　　表

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 （１）　　サルシナ属に属し、セリンハイドロキサメー
   ト。Ｄ−セリン、Ｌ−セリン又はグリシンに耐性を有し
   、かつグリシンよりＬ−セリンを生成する能力を有する
   微生物の培養液、該培養液から得られた生菌体或いは該
   菌体の処理物をグリシンを含む基質溶液と接触させて反
   応液中にＬ−セリンを生成ＭＭせしめ、ついで生成した
   Ｌ−セリンを採取することを特徴とするＬ−セリンの製
   造法９ｔ２１　　微生物がセリンハイドロキサメート、
   Ｄ−セリン、Ｌ−セリン又はグリシンに耐性を有し、か
   つグリシンよりＬ−セリンを生成する能力を有するサル
   シナ・アルビダである特許請求の範囲第１項記載の製造
   法。 （３）　　微生物がセリンハイドロキサメートに耐性を
   有し、かつグリシンよりＬ−セリンを生成する能力を有
   するサルシナ・アルビダである特許請求の範囲第１項記
   載の製造法。 （４）微生物力ｒＤ−セリンに耐性を有し、かつグリシ
   ンよりＬ−セリンを生成する能力を有するサルシナ・ア
   ルビダである特許請求の範囲第１項記載の製造法。 （５）　　微生物がＬ−セリン（こ耐性を有し、かつグ
   リシンよりＬ−セリンを生成する能力を有するサルシナ
   ・アルビダである特許請求の範囲第１項記載の製造法。 （６）　　微生物がグリシンに耐性を有し、かっグリシ
   ンよりＬ−セリンを生成する能力を有するサルシナ・ア
   ルビダである特許請求の範囲第１項記載の製造法。