JPS59501745A - 組織から微生物を除去する手段 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるため要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 組織から微生物を除去する手段 この発明は、粘膜、皮ふおよび傷組織のような組織から微生物を除去する手段（ ｍｅａｎｓ）に関するものである。

皮ふおよび粘膜上には、個有の非病原性および潜在病原性微生物相がある。この 固有相の存在はある種の有用な機能を有するものであって、病原性微生物のコロ ニー化を防ぐことがてきる。こうして病原性微生物を担持する者は、このような 者からの病原性微生物が組織の傷へ移ることかできるから、潜在性病原体担持者 である。

微生物の語は、スタフィロコッカス、ストレプトコツキーおよびニューモコッキ ーの色々な種のようなグラム陽性細菌、ミコバクテリア、例えばミコバクテリウ ム・レプレのようなグラム陽性桿菌、エンテロバクテリア七−の色々な種、例え ばエシェリヒア・コリ、タレブシーラ、プロテウヌ、エンテロバクチルもしくは ビブリオナセまたはシュードモナセのようなグラム陰性細菌並びにゴノコッキー のようなグラム陰性球菌を含むものとする。またこの語は、バタテロイデス、フ ッバクテリアのような嫌気性細菌、例えばペプトコッキーおよびペプトストレプ トコッキーのような嫌気性球菌、並びにヌピリレーおよびヌピロヘーテスをも含 むものとする。さらに、カンジダ、例えはカンジダ・アルビカンスのような真菌 、およびデルモト７アイテス、並びにエンドアメーバ・ヒストリチ力のような病 原性アメーバ、およびジアルディア・ランプリアおよびライシュマニアをも含む ものとする。

組織から微生物を除く方法は、組織および微生物の型にそれぞれしたかつて異な る。粘膜および皮ふ組織から病原性微生物を除くには、消毒剤または抗生物質か しはしば用いられる。この方法の欠点は、固有相とその機能も除かれることであ る。別の欠点は、消毒剤は細胞毒性であり、今日では多くの病原株が多数の抗生 物質に対する抵抗性を獲得していることである。傷組織からの病原性微生物の除 去は数種の方法によシ行なわれる。１つの方法は、消毒剤または抗生物質処理に よる微生物の直接攻撃であるが、これは効果的てなく、固有相に上記の欠点をも たらす。別の方法は、湿性塩類包帯による傷組織の機械的洗浄である。これの欠 点は、特に、組織の治癒が阻害され、またこのような包帯は極めて頻繁に交換す る必要があることである。

後者は、傷組織から病原性微生物を除くだめのさらに間接的な方法の一例に当る 。傷組織からの分泌物は微生物にとってすぐれた基質であり、その量の減少によ って微生物の増殖もまた減少する。この間、接法を用いる別の方法は１例えば粒 状の適当なポリマーであって、傷組織からの分泌物を吸収するポリマーによる傷 の処理である。このような分泌物吸収性ポリマーのあるものは、錯結合したよう 素を含み（いわゆるヨードホール）、これにより分泌物の吸収と消毒が同時に達 成される。

この発明は、固有相に著しい影響を与えずに組織から微生物を除去する手段に関 するものである。

原発性傷感染症および術後感染症の大きな原因は、スタフィロコッカス・アウレ ウスおよびいわゆるＡｌＣおよび０群のベータ型溶血連鎖球菌のようなある種の グラム陽性球菌である。病原性スタフィロコッカスは環境のあらゆる場所、また 病院のあらゆる場所に存在し、８０％の職員が病原体の担持者であり得る。黄色 ぶどう球菌（スタフィロコッカス・アウレウス）は、特に腋窩のようなある種の 皮ふ部位、骨盤（ｐｅｌｖｉｓ）４ 底部および手並ひに鼻内で集落を作る。乾燥した湿疹でさえもしばしは白色およ び黄色ぶどう球菌が存在する。あシふれた　扁桃腺炎の細菌であるストレプトコ ッカス・ピオゲネス（Ａ群ストレプトコッカス）は、極めて頻繁に看護人および 患者に存在する。病院内感染は、しはしは外因的（例えば職員から患者へ）また は内因的（皮ふまだは粘膜にこれら微生物を有する患者か自身の傷に感染させる ）に転移し、これが大きな問題になυつつある。この感染の頻度を減らすために 、注４意深い術前洗浄および感染した湿疹を別室て包帯すること等の古典的予防 策がとられて来た。

はとんどの感染において最初の段階は組織に対する微生物の結合である。微生物 は、上皮細胞の表面成分に直接、または上皮の傷中にさらされた血餅もしくは結 合組織中の細胞外分子に、特異的に結合する。

この発明は、組織から微生物を除くための全く新規な原理に基つくものであって 、その原理は、粘膜、皮ふおよび傷の組織蛋白に対する微生物の結合の阻害を基 礎とするものである。

病原性スタフィロコッカスは、その細胞表面に、多数の動物種における色々な免 疫グロブリンの補体結合部位（Ｆｏサイト）に特異的に結合する蛋白質（プロテ ィンＡ）を有する。この結合特異性は、免疫テヌトおよび固相に結合したプロテ ィンＡによる体外循環からの抗体除去に用いられる。

また、スタフィロコッカスか種々の動物種の正常血清により凝集することも知ら れている。この反応は、細菌の表面とフィブリン／フィブリノーゲンの特異的結 合によるものである。

スタフィロコッカスの表面に存在するものと同様なレセプターか他の微生物にも 存在することか見出された。例えは創傷感染および他の型の感染部から分離され たスタフィロコッカスおよびストレプトコッカスの株について研究を重ねた結果 、例えばフィブロネクチン結合能力か微生物の毒性に寄与していることが判明し た。例えばスタフィロコッカス・アウレウスおよびコアグラーセ陰性スタフィロ コッカスによる感染では、この結合能力は最初の組織集落化を可能にすることに より毒性に寄与する。

驚くへきことに、所望により担体に結合した蛋白質またはその７ラグメントもし くは残余部分（ｒｅｓｉｄｕｅ）か組織から微生物を除くだめの適当な手段であ ることが見出された。すなわち、この発明は、粘膜、皮ふおよび傷組織のような 組織からの微生物の除去手段において、微生物に結合し得る蛋白質まだはそのフ ラグメントもしくは残余部分の少なくとも１種、および所望により上記蛋白質ま だはそのフラグメントもしくは残余部分か結合している担体からなる手段に関す るものである。

この発明で使用する適当な蛋白質類は、フィブリノーゲン、フィブロネクチン、 免疫グロブリン、アルブミン、ハプトグロビン、ベーター２−ミクログロブリン 、コラーゲン、ラミニン、エンタクチンマタハコンドロイ・クチンである。さら に、これら蛋白質の７ラグメント類まだは残余部分類も適当である。これらの７ ラグノントまたは残余部分は、分子１ｓｘ１ｏ２〜１０５、好ましくは５×１０ ２〜５×１０４のペプチドであってよい。

この発明で用いる適当な担体は、アカロースまたはその誘導体、でんぷんまたは その誘導体、セルロースまたはその誘導体、デキストランまたはその誘導体、ま たはアルギネートのようなポリマー材料である。さらに、包帯またはタンポンの ような吸収用製品の一部をなす繊維材料も適当である。

蛋白質類またはそのフラグメント頭）もしくは岸余部分（類）は、それ自体公知 の方法であって１１例えばジビニルスルホン、エピクロルヒドリン、カルボジイ ミドによる、またはトランヌアミネーションもし・くは臭化シアン架橋による、 またはゼラチンに対するフィブロネクチンの結合、レクチンに対する糖蛋白の結 合もしくは抗体に対する抗原の結合のようなそれ自体公知の生物特異的相互作用 による、蛋白質中の炭水化物部分、第１級アミン基、スルフヒドリルもしくはカ ルボキシ基を介した共有結合により、担体に結合するととかてきる。

蛋白質類またはその７ラグメント類もしくは残余部分類は、担体に直接吸収させ ることもてきる。

さらに、この発明を下記実施例により説明する。

実施例１ ひとの腰部皮ふ領域を生理食塩水で洗浄した。次いで、スタフィロコッカス・ア ウレウスにューマン株）約１０７および１０９を数個の皮ふ領域に適用した。フ ィブロネクチンを結合したセファローヌ（商標）４Ｂのゲルを、２−３朋の厚さ の層としてニューマン株適８ 用領域に適用した。フィブロレクチンは、臭化シアン活性化′ゲ／ｌ／１ｍ／当 り１０Ｍｇのフィブロネクチンを室温で緩やかな攪拌下に２時間インキュベート することにより、臭化シアンで活性化したセファロース（商標）４Ｂゲルに結合 させた。反応混合物に１Ｍグリシン溶液を加えて反応を終了させた後、インキュ ベーションをさらに３０分間続けた。使用前にゲルを充分洗浄した。対照ゲルと して、純セファロース（商標）４Ｂを別のニューマン株適用皮ふ領域に同様に適 用した。全皮ふ領域をファン（冷風）で乾燥した。２０−３０分後、試験ゲルお よび対照ゲルを無菌メスで除いた。その後、新らしい両ゲルを適用して操作をく り返し、合計３回の処理を約２時間の期間に行なった。

操作完了後の培養によシ、ニューマン株がほとんど完全に除かれた（ただ１箇所 で細菌のコロニーが認められた）ことが示され、他方、対照ゲルを適用した皮ふ 領域の培養では菌数の僅かな減少が見られるにすきなかった。

実施例２ ニューマン株の代シにスタフィロコッカス・アウレウス（ｖ′８株）を用いて実 施例１を反復した。同様な型の対照ゲルを用いた。処理完了後の培養では、実施 例１のニューマン株よシもかなシ大きなり８株の増殖が認められた。

実施例３ フィブロネクチンの代シにフィブリノーゲンを用いて実施例１を反復した。セフ ァロース（商標）４Ｂゲルに対するフィブリノーゲンの結合は、実施例１のフィ ブロネクチンの場合と同様に行なった。対照ゲルとして純セファロース（商標） ４Ｂゲルを用いた。

操作完了後の培養により、■８株がほとんど完全に除かれた（ただ１個のコロニ ーか認められた）ことか示され、他方、対照ゲルを適用した皮ふ領域の培養では 菌数の僅かな減少が見られるにすきなかった。

これらの実施例から、ニューマン株がフィブロネクチンレセプターを有し、他方 ｖ８株はフィブロネクチンには極めて弱くしか結合しないがフィブリノーゲンレ セプターを有することかわかった。さらに、Ｆｎ　レセプターを有する株は特異 的に除かれることが明らかである。

実施例４−１９ スタフィロコッカス・アウレウスの５Ａ１１３株お０ ヨヒコワン（Ｃｏｗａｎ）　１株、並びにＡ群ヌトレプトコツカスＨ１５７５７ 株および１１２７０株を用いて実施例１を反復した。

使用蛋白質は、それぞれアルブミン、免疫グロブリンＧ１フイブリノーゲンおよ びフィブロネクチンであり、これらは実施例１のフィブロネクチンと同様にセフ ァローフ４Ｂゲルに結合させた。

実施例１の操作を笑施し、その後培養して、それぞれ種々の微生物および蛋白質 について後述する結果を得た。

フィブロネクチンを使用すると、スタフィロコッカス・アウレウス（ＳＡ１１３ 株）の培養は陰性（ただ１個の細菌コロニーか認められた）であり、他方、アル ブミン、免疫グロブリンＧおよびフィブリノーゲンをそれぞれ使用すると、この 株で陽性の培養結果が得られた。

免疫グロブリンＧ、フィブリノーゲンおよびフィブロネクチンをそれぞれ用いる と、スタフィロコッカス・アウレウス（コワン１株）の培養は陰性であり、他方 、アルブミンを用いるとこの株で陽性の培養結果か得られた。

アルブミンおよびフィブロネクチンをそれぞれ用いると、Ａ群ストレプトコッカ ス（Ｈ１５７５７株）の培養は陰性であり、他方免疫グロブリンＣおよびフィブ リノーゲンをそれぞれ用いると、この株で陽性の培養結果が得られた。

フィブリノーゲンを使用するとＡ群ヌトレプトコツカヌ（１１２７０株）の培養 は陰性であり、他方アルブミン、免疫グロブリンＧおよびフィブロネクチンを使 用すると、この株で陽性の培養結果が得られた。

すべての場合において、対照ゲルを適用した皮ふ領域の培養では陽性の培養結果 か得られた。

実施例２０ 抗生物質抵抗性スタフィロコッカス・アウレウスのコロニー化が認定された病院 職員を２組に分け、各組を同一数（それぞれ試験群と対照群）にした。２組の全 員からの試料は陽性培養結果を反復して示した。試験群を、フィブロネクチン溶 液に浸した綿棒で処理し、綿棒は鼻孔に挿入して２時間保持し、その後フィブロ ネクチン溶液に浸した新らしい綿棒と交換した。この操作を、処理が合計３回に なるまてくシ返した。対照群は、非浸漬綿棒を用いて同様に処理した。

操作完了後の対照群中の人から得た試料は陽性培養を示し、他方、試験群中の人 から得た試料は完全に陰性であった。

実施例２１ マウス（２０−３０１、ＣＢＡ系）の体毛をそり、１×１０の領域に国際基準で ２または３度の火傷を負わせた（エタノール炎、２分間）。この実施例では、ス タフィロコッカス・アウレウス（コワン１　株）　ヲ微生物として用いた。食塩 水（燐酸縁１ｔｉ）　１ｍｌ当り微生物１０のけんたく液を調製し、全マウスの 火傷領域にけんたく液０．５　ｍ／を塗布した。次いでマウスを試験群と対照群 に分けた。試験群のマウスはセファロース（商標）４Ｂゲルに結合したフィブロ ネクチンで処理し、他方、対照群のマウスは純セファロース（商標）４Ｂで処理 した。処理は、ゲルか約２−３ｆｉの厚みの融合層として火傷領域に適用される ように行なった。メスてこすって１つの層を除いた後新らしい層を適用し、処理 を合計３つの層が適用・除去されるまでくシ返した。次いで、火傷領域から試料 を°とり培養した。

試験群マウスの試料は１日後に陰性培養（すなわち１−３コロニー）を示した。

一対照群マウスの試料は３日後ても陽性培養（コロニー３個以上融合増殖まで） を示した。

実施例２２ 実施例２１で用いたのと同じ型のマウスを用いた。

スタフィロコッカス・アウレウスの代りに、スタフィロコッカス・カピテイスＬ Ｋ４９９を用いるほかは、実施例２１の操作をくり返した。

試験群マウスの試料は２日目で陽性培養であり、他方、対照群マウスの試料は４ 日目でもなお陽性培養であった。

実施例２３ 実施例２１て用いたのと同じ型のマウスを用いた。

スタフィロコッカス・アウレウスの代すに、スタフィロコッカス・ネモリテイク スを用いるほかは、実施例２１の操作をくり返しだ。

試験群並ひに対照群マウスの試料共に、３日目に陽性培養を示した。

実施例２４ 実施例２゛１と同じ操作および菌株を用い、マウスも同じ型であったが、試験群 のマウスはセファロース（商標）４Ｂゲルに結合したフィブリノーゲンで処理し た。

試験群マウスの試料は２日目で陽性培養であり、他方、対照群マウスの試料は４ 日目で陽性培養であった。

実施例２５ 実施例２２と同じ操作および菌株を用い、マウスも同じ型でめったか、試験群の マウスはセファロース（商標）４Ｂゲルに結合したフィブリノーゲンで処理した 。

試験群並びに対照群マウスの試料共に、４日後に陽性培養を示した。

実施例２６ 実施例２３と同じ操作および菌株を用い、マウスも同じ型であったか、試験群の マウスはセファロース（商標）４Ｂゲｌしに結合したフィブリノーゲンで処理し た。

試験群並ひに対照群マウスの試料共に、４日後に陽性培養を示した。

上記実施例から、種々の微生物か色々な蛋白質に結合することが明らかである。

微生物と蛋白質問に生じた各結合は、試験管内実験により確認した。これは、各 微生物を各蛋白質とインキュベートし、後者を放射性よう素でラベルしておくこ とにより実施した。インキュベーション完了後、各微生物に結合した放射能ラベ ル蛋白質の量を測定した。微生物が蛋白質処理で除かれた場合（培養陰性試料） 、試験管内実験では各微生物か放射能ラベル蛋白質に結合したことが証明、され 、他方、蛋白質処理で微生物が除かれなかった場合（培養陽性試料）、試験管内 実験ては対応する微生物と放射能ラベル蛋白質との結合は認められなかった。

また蛋白質は、傷または他の組織から微生物を除くために、手当用品またはタン ポンのような吸収用製品の一部をなす繊維材料に結合させることができる。蛋白 質を結合させた手当用品は傷の処置に適当である。

蛋白質を結合させたタンポンは二例えは手術における手術口からの吸収用に、ま たは月経用タンポンとして用いることかでき、いわゆるタンポン疾患の原因であ る微生物の除去に使用できる。

またこの発明の手段は、例えば肛門膿腫のような膿腫の開口で生成する傷の空洞 中の微生物を除去するために使用でき、この場合、空洞を充填して膿腫の閉塞を 防ぐために、上記手段を傷の空洞の形状をした手当用品に結合させるのか好まし い。このような手当材料は、例えは疎水性材料に含まれた繊維まだは顆粒形態の 吸収材料であってよい。さらに、蛋白質は局所感染における微生物除去用すすき 液の彫りであってよい。

国際調査報告

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １、粘膜、皮ふおよび傷組織のような組織から微生物を除去する手段において、 微生物に結合し得る蛋白質またはそのフラグメントＣ類）もしくは残余部分（類 ）の少なくとも口りおよび所望により上記蛋白質（類）またはそのフラグメント （類）もしくは残余部分□□□）が結合している担体からなることを特徴とする 手段。 ２、　蛋白質またはそのフラグメント（類）もしくは残余部分（類）が、フィブ リノーゲン、フィブロネクチン、免疫グロブリン、アルブミン、ハプトグロビン 、ベーター２−ミクログロブリン、コラーゲン、ラミニン、エンタフチンまたは コンドロネクチンであることを特徴とする特許請求の範囲第１項記載の手段。 ３、　蛋白質（類）の７ラグメント（類）もしくは残余部分（類）か、フィブリ ノーゲン、フィブロネクチン、免疫クロプリン、アルブミン、ハプトグロビン、 ベーター２−ミクロクロプリン、コラーゲン、ラミニン、エンタフチンまたはコ ンドロネクチンから誘導されたものであることを特徴とする特許請求の範囲第１ 項記載の手段。 ４　フラグメント（類）または残余部分（類）か分子１ｔ５Ｘ１０２〜１０５の ペプチドであることを特徴とする特許請求の範囲第３項記載の手段。 ５、担体が、アガローヌまたはその誘導体、てんぶんまたはその誘導体、セルロ ースまたはその誘導体、デキヌトランまたはその誘導体、まだはアルギネートの ようなポリマー材料であることを特徴とする特許請求の範囲第１−４項の何れか に記載の手段。 ６　担体か、手当用品またはタンポンのような吸収用製品の一部をなす繊維材料 から構成されていることを特徴とする特許請求の範囲第１−４項の何れかに記載 の手段。 ７、蛋白質（類）またはその７ラグメント（類）もしくは残余部分（類）が、ジ ビニルスルホン、エピクロルヒドリン、カルボジイミドにより、トランスアミネ ーションによシ、臭化シアン架橋を介し、または生物特異的相互作用により、担 体に連鎖／結合していることを特徴とする特許請求の範囲第１−６項の何れかに 記載の手段。 ８、蛋白質（類）まだはそのフラグメント（類）もしくは残余部分（類）か担体 に吸収されていることを特徴とする特許請求の範囲第１−６項の何れかに記載１ ９ チンまたはフンドロネクチンのような蛋白質類またはその７ラグメント類もしく は残余部分類の、粘膜、皮ふおよび傷組織のような組織からの微生物除去におけ る使用。 しくは残余部分（類）が担体に結合するがまたは吸収されていることを特徴とす る特許請求の範囲第９項記載の蛋白質類またはそのフラグメント（類）もしくは 残余部分（類）の使用。 Ｉ積１１ｇ５９−５０１７４５　（２）