JPS5966882A - 疎水性媒体中で微生物を培養する方法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】

本発明はミクロエマルジョンを用いた微生物の培養方法
に関し、より詳細には熱力学的に安定゛ζ、分１１シ媒
が疎水性媒体に、Ｌ、って構成され゛（・Ｇ″Ｉる、栄
養“物質水溶液のミクロエマルションの産生１ヤ分野−
・の応用、特に微生物の紳水１）１媒体６ごおりる培養
に関する。 種々の徹什、物、特Ｇごパクラーリｊ′や菌類の培養を
利用４−る工業的操作は現時点において特にす味のある
ことである。 種々０？食品」、業、薬剤の製造、４’ｉｉ　Ｑ等が、
がか・７〕ｔ’：■負（にもとついてなされ〜ζいる。 最４）多くの場合、１故４を物の培養を利Ｊ１ｊ倶る１
粟的繰作１５１　　つの１々階から構成されイ）。 第・段階Ｃは゛！′１該微Ｌト物の培養がｊら当ム°栄
ｔ。 媒体中ｉｒ、、ｆｉわれ、１分に多、ｐ　ｏ）、’ｉｔ
　ｌ’ｙ物が’、Ｌ、７”１第二段階’Ｃ４，１、ごの
番数の微生物が、ごの微生物の作用を豆すさせよう□と
している物５１′ｌと接触状態におかれる。 かかる見地からＪれば、容ｚ：４中に才ｉｂ）イ）操作
は特別：′な困□ゲ１Ｆさかなく、ｒ備的な培養、ずス
ぎわもｉ％Ｂ生物の増り１♂（が場合に応して別の容器
中゛（、または第２の原作がなされる容器と同一の容器
中で行われる。 これに対し“（、微生物の増殖が自然界で行われるとき
には、広大な面積の土地や水中で行われ、たとえば海洋
、海岸、流水または湖水面トの炭化水素油の微生物学的
分解による除去のように１１＆生物のｐ備的な増殖には
種々の困難がある。 事実、当該微生物の増殖を達成するには栄養物質、ずな
わらＣ，Ｎ、およびｌ）、ならびに微量元素の供給源を
与えて培養する必要かある。 炭素の水素化物、硝酸塩、また、はアンモ；−ア性の塩
、およびリン酸塩のような標準的な供給源が水溶液であ
る場合には、これら供給源は処理すべき広大な表面層に
は滞留することができず、対象とする微生物の強力な増
殖をはかるこ。 とができない。 これらの栄養物質は水中や地中に分散してしまい、水中
や地中の微生物によって利用されてし土・）。 かかる欠点を除くため６．二ｆＪＪ杓に′１′２ま゛（
６、−Ｈ；々の方法か採用され′（きた。。 これらのうりの一つは米１〕・目ろｎｉ第１　、　！１
５！Ｉ　、　１．２７゛・Ｊ明細−Ｆに開ボされ”（い
る、１、・）に、窒Ｊ３１’ｌ化合物および固体リン酸
塩をパ９ソ・イン゛Ｃ包んだ粒子とし、ごθ？形状−ζ
微生物に利用される。１、らにしたものである。 この力ｌノ、の変形の、米国特１ｔ’ｌ第：＋、＋＋ｓ
：＋、：＋：ｎ　′、：明細Ｎ！Ｌ　４こよれば、パラ
フィンの代りに脂肪酸を親油性被覆化合物とし−（用い
（いる。 しかしな力・ら、ご拍、らのカメ〕）４Ｊ：、ｉ！及ｌ
千物をｊＩＩりへ［物か７トめる杏差物に偵らに到達さ
・するムの（ごはない。 脂肪質の被覆物％ＩＪは外ｉ４ｉの窒素才；　、＋：　
０ニリンの非存在ｒ：　′ｃ　ｃｒ！、侵入、ずなわｌ
、昌１１す１°４−ることか１４．１ゲＩＩ’（ある。 　、　　　　　　　　　。 また、バクテリアまたＢＪ、’　ｌ＊Ｉ　（、Ｖｉの作
用自体かおそく、数週間または数ケ月を要する。 他の提案され席二解決策口、フランス特５′１公開第２
．１７２．７９（ｉ号明細書（ご記載のように窒素およ
びリンの供給源として非水溶性で炭化水素に、用溶性の
化合物、とくにリンーアミノーリビ１：・を用いる方法
である。 しかしながら、油に１可溶性の窒素化・合物は、窒素含
有量が通電極め“Ｃ低く、かかる環境ｌζでは海水中の
石油系炭化水素の生物学的分解に２〜３ケ月を要する。 フランス特許公開第２．２３＋１，４０１　号明細鶴に
はアミド、有機アンモニウム塩およびリンーアミノーリ
ビドの石油系溶媒溶液を用い、この溶？＆を氷中に乳濁
さ・けることが示されている。 得られた乳濁液は水面−１−の油を生物学的に分解する
ために、水面に浮遊する炭化水素油トに噴霧される。 しかしこの方法は乳濁水を多量に必要とし、かつ数週間
後に結果が得られるにすぎない。 本発明は水に可ン容性の栄養物を疎水性自機則に供給す
るための、新規な疎水性媒体中゛ζ微生物を培養する方
法を提供するものである。 炭イ１．水素でもあり、−＞、るごの自機１釘が水τｌ
＋目、二ｌ乞」兇し７〕こり、：１：、た帽、１山而Ｊ
、るいＣ１１稈１迅祠才１からにシる支持イ木」−にう
ｊ散じた。りすると、１．木イむ明に、ｊ：　−’）゛
（供給された栄表物質４．１」：生し−く囮・水１ｒｉ
ｌｌ＋６．二ととまり、もしも微生物か在７１すれ！４
１ｉ’＆　Ｉｆ物をｊ匠Ｃ速に１（９り１＾ｕしめる。 本発明による伸水性媒体中Ｃ微生物を１１〜〜・（る方
法は、水が油中に分１μし、たタイプのミクＩｌ：ｌＬ
−：（’ルションを形（戊°」るごとにＪ）す１、二、
の上−Ｉルソーｆンの内口叫１ｊは栄養物質の水溶液’
ＣＪ、＋す、この１マルソヨンの外部相は水と５１１混
和性の液（木−Ｑ　Ｊｉす１、−のミクし＋、コー、マ
ルノヨンを／）ｊ、Ｉｆ庁されｒワ＼き疎水層Ｇこ添加
するごとにある。　　、。 ・二のミクリコニマルンヨンは、４）シモタＱ、、ｐｌ
されるべき媒体が微Ｌ１ユ物を含フ１：ないか、１１：
八は１つ］ノ、１１１“１に／Ｉｔ物を含フトないとき
心、１、適当ノ、Ｃ？：：＜　／　ｌ物の（桟給δ５す
ｌを含むことができる。 ”Ｉ　ｋ分！ｌ！ｒｂコＡ：；　イーｃ知うレ−（イＺ
＋　ｊ、’Ｊ　ｌｌミ））１コエマルジヨンはこの工〜
！ルソ、、Ｉンの形成Ｃ，二惧された少なくとも一つの
界面／＋’ｉ　’ｌ！ｌ剤および袖１１Ｊ１刑を含むこ
とが理解されるべきである。 従って従来技術のように、栄養物質は固体状態で、水と
混和しうる溶媒中の溶液で、または水性のミラ１：Ｉエ
マルシヨンで利用されるの゛（はな（、生物学的に分解
されるべき疎水性層と混和しうる液体中に微粒子状で分
散した水溶液の形状、ずなわら、微粒子で分散した、い
わゆる１　逆転水滴の形状で利用される。 ′　　この水滴の直径は８０〜に００Δの範囲であり、
特に１００〜２００Δである。 この予期せざる形状によって、　ｔｆｆｉ来の方法では
数週間または数ケ月を要した生物学約分Ｉ’ｌＮが数１
」間で達成される。 本発明による□ミクロエマルジョンにおける窒素源とし
ては、水溶性でかつ微生物によっ□て同化されうる種々
の化合物が用いられる。 これら化合物は、たとえば硝酸、硫酸、および／または
リン酸のアンモニウム塩、尿素、タンパク質、ペプトン
などである。 尿素は窒素の最も豊富な供□給源であり、かつ水に極め
□゛ζｊｉＪ熔↑１１なので特Ｇご好３Ｅ　Ｌ／　＜’
　−１ｉ’ｌｌ　ａ度の水溶液を１するごとができる。 たとえば、ｌ（）〜６（）車量％の原車を含む水溶液を
用もくることができ、ずなわら水１００部あた炉１１′
〜１５′０部の尿・素か含まれる。 リンも泪ｋｊｍ富の場合のよ・うに、Ｊなわｊ、、アル
カリ金属またはアンモニウノ・リン酸Ｊ４ｉＪ・ノごｔ
＃！Ｊｌ！リン酸塩の水溶液として供給さ・れる。 本発明の実施例によれは、リンは界面活性剤、たとえば
ｉｌ’！、級アルキルリン酸塩またｔ２１し、／千ンの
ような形状てｊ、ｙえられる。　　　　　　　□したか
っＣ、リンの供給源才９よびミグ１１ニー／ルソヨンの
界面活性剤が同一・分子でＪＪる。 微仕物の培養を含む′種々の１Ｌ的炭作においては、ハ
タテリアの／Ｉ：、青に７醍もＩｆましいイＩＩＩ＋４
ご

【団を調整するごとが必要である。 一＄１ツζこ、この１１１１は中性のｉｌｉ’　（弁Ｃ
Ｊ、ろべき（あり、もしも媒体が酸性化されるへきとき
６ご＆、Ｉ、リンの′供給源としてリン酸を、また乙、
１もしも媒体が塩基によって中和されるべきときには窒
素源とし゛ζアンモニアを添加することが可能である。 下記するように、微生物による炭化水素のバクテリア分
解の場合Ｇこけ、リンの必要用は窒素のそれよりもいう
じるしく少ない。 重量で表現すれば、Ｐ　／　Ｎ比は０．０２〜０．２の
範囲であり、好ましくは０．０５〜０．１５の範囲であ
る。 微生物生育の見地からすれば、もっとも灯ましい１〕／
Ｎ比は０．０５にできる・たり近い値である。　　ミク
ロエマルジョンの外部用を形成する水と非混和性、好ま
しくは油混和性の液体、または分解されるべき疎水層が
炭素源として微生物により利用されるときには、ミクロ
エマルシロン中に他の同化されうる炭素化合物を加える
必要はもはやない。もしもミグ１−１エマルジヨンの外
部用および分解されるべき肋が微生物によって分解され
にくいときには、少なくとも初期には栄養溶液中に容易
に利用しうる炭素源、たとえば炭素の可溶性水素化物を
含むことが有効であり、これにより微Ｌ１Ｆ物の急激な
増グ１？１の開始が＋ｉＪ能になる。 総′（の培養Ｇこおりるよ・：）　１．：、、　ｉ歌ｈ
１几素、と〈：にＦ（Ｎ、脚、Ｋ　などの塩か必′便で
あり、極く小量か栄た物／８液中に従来のコークに添加
されイー。 本発明によるくりＬ７　、’Ｌ：マルソ！１ンをｆＪ／
るためには、界面活性を達成しうる界面活性剤が、ａ・
要′ζ〆ｔ）す、当業者乙ちるならば、該当−・Ｊろ微
ノ１物にり・１し７て非ＡＪ性の種々の界面病１１１刑
の中かＣ〉適当な化合物を選＋１くすることができろ。 たとえは、脂肪族−フル１−ルの何１酸１ふ仁スルポコ
ハク酸塩、オギシェヂし・ン系ソ月ルタン上スーアル、
オキシコニチレン系の゛Ｊ゛ルｌ−）し、酸ｉ４：たは
浦、ザ゛ンカ＋１−スコニスう一ル、Ｔ＼／ＩＳ、α−
アー［アミノ酸、タウリン、４Ｊル、２ソン、・ボリグ
リニ！−ル高級アルキルリ：ｚｆ’ｉ’！塩４５゛とが
用いられる。 このリストは限定的ではなく、他の界面店ｉＩｔ剤、特
に炭化水素に対し゛（分１１＜！荊としての（’ｌ　’
７’ｔを有するものを利用することができる。好ましく
は、使用される乳化剤の親水性−親油性のバランスは１
０〜１７であり、かつ最も好ましくは１１−１５である
。 当該操作が屋外で行われる場合には、環境汚染を防止す
るために界面活性剤が生物分解性でなりればならない。 界面活性剤と同様に、ミクロエマルシロンの形成に必要
な界面活性助剤についても広範な選択が可能である。 かかる助剤は当該分野において良く知られており、こご
Ｇこリストアツブすることを必要としない。非限定的な
方法において、カルバメ−１−、アミドまたはアミン塩
のような窒素化合物の使用が可能であることに注目され
るべきである。 ミクロエマルジョンの粘度はアルコール、特に０６〜Ｃ
Ｉ２アルコール、エーテル、またはポリオール、とくに
グリコールのエステルの添加によって著しく減少させる
ことができる。 このことは細かい操作を著しく容易にする。 ミクロエマルジョンの外部用が生物分解されるべき疎水
性液体と混和可能でなければならないときには、この液
体の１］１γｆ、６ご応し゛（選択することが必要であ
る。 最も重要な実際の場合Ｇ、二Ｈい′（、分１’ｉｉ°り
・１象のｌｌｋ体が石油系炭化水素によ２．ご構成され
″（いるときには、油混和性の外部用Ｇ１またとえば脂
肪族、またはり−フテン系炭化水素、十たは、いわゆる
錫、物油、すなわらかかる炭化水３ミの混合物にＪ。 ゲ（構成される。このタイプの外＜Ｈｐ相はハクう一リ
アによゲ（侵されにくく、１分な通用性に、７　　′し
い。 従って、８＋Ｉｉ物性または動物１’１曲の使用が灯土
しく、ごれら浦は微生物により利用”１　ｔ＋ｍ　’Ｃ
ｉす・ｒ」のて炭、−十一源としても用いられる。これ
ら浦、好ましくはごれらの相当する脂肪１′（（は疎水
性ＬＰ！特に原油の分解に必要な敞ｌト物の急速な増列
１をｉｉＪ能に一４イＪ。 ミクロエマルシロンの外部用Ｃある／ｌＩＩ混和１１１
液体と、分肢されるべき水ン容ｔｌｋの屯ｈｌ比は通當
では０．２以上であるべきである。ごの比±は選択され
その結果、水ｍ　？ｅｉ、が内部相を形成４る。 界面活性剤および界面７ｉ５性ｌｊｂ　％Ｉのｊ巽択ば
油ｌＪＭ和性液体の性質によって、および水ｌ杏液年溶
解した塩の外債に依存してなされる。ごの選１）りの基
礎はそれ自体知られている微生物の組織化のＪｉｌｔ念
である。 本発明の方法は多数９微生物、特に炭化水素を分解しう
る微生物に適用ｒＩＩ能である。−４：なわら本発明は
ブシュ−。トモナス（１’ｓｅ＋＋＋］ｏｍｏｎｉｓ、
　）７シネＪ−ハクタ（八ｃｉｎｅｔｏｂａｃＬｅｒ　
）　、フラホハクテリウム（Ｆｌａｖｏｂａｃｔｅｒｉ
ｕｍ）　、アルド［１ハクタ（八ｒＬｒｏｔ＋ａｃｔｅ
ｒ　）　２．またはフリネノ＼クテリウム（（：ｏｒｙ
ｎｅｂａｃｔｅｒｆｍ　）なとのようなバクテリアの利
用番、二適用できる。微生物は、また菌類であっ”ζも
良い。　　　　　　　　　　　　。 本発明は屋外で１．１・ねれる生物学的分解の種々の操
作にとっ−Ｃ＃！Ａめて興味があるが、またｊ、’、　
４’−中に物質の疎水性層が用いられ、る限り、容器中
の種々の製造１桑作に用いることができる。　　。 たとえば、バクテリアおよ、び／または菌類による炭化
水率の生物学的；１解による炭化水素かＣ・のタンパク
タイの製（ｈ、に右利に用い（：〕れン・、。 〜４−べての場合におい“ζ５峠水性Ｉｒｉ内・〜９）
水ｌ容性栄産物の著し、いう１敗か本発明４．：　、１
１．、、　’（達成され、微１１、物の＋９゛（迅速な
増＋１７ｊが２１．さｉｔ、る。 この結果１．これらのｔシ）作粁おりｃ　１．Ｊ、、１
１．ｌ］が渠７くりＡｊ縮される。。 屋外の水域また。は地域への適用の中Ｃ最イ戸（（要〕
、白）のは！Ｊ！故に、Ｌっでう）１１にされた。炭化
７に、÷・のノ］！物パｊ！−的分解（ある。 １記し、た理由←７Ｌつ−Ｃ１水；￥；　’ｌ’に、の
栄炸物Ｗｌｉが水４．ｍ同伴されるかわりに、処理さ扛
）、：　ＩＳ’ｔ　ｌｌＧ：昌゛ｌ／ヲ１°イ）ことは
′ＩＳ実であり、本発明（，１〆ｈＩ洋ｆら染の１ｊ１
１徐に人きび価（＋Ｔｈを右する。 ｉｌ、：た同様な趣旨により浅瀬、貯水４．ＩＩ／、池
面、容器なと金、ごれらを汚染′４る炭化水、４’、　
１１石：口１ｊから７１′１／７＋化１ル、１、−）な
ＩＭ作ｋ　３８　Ｊｌｌ　”ＣＱ　ロ。 他の用途牛しＣは、栄養物の農゛盾／　１．、　＋７？
、物・＼の分布をふくむ。 ｆｋ　ｉｔ−物は通常では処理、されイ）べき、、媒体
中に存・存する。しかしながら、初期の微生物置件数が
極めて低いと判１４Ｊｉされるか、または媒体が適当な
バクテリアを含まないときには、時として微生物の接種
が必要である。 本発明の実施例においては、窒素性栄養物として尿素が
用いられる。この尿素は、界面活性助剤の役目をはたず
ごとも見出されており従って他の界面活性助剤を添加す
ることはもはや必要がない。 一方、リン酸のアルキルエステルによって、リンが有利
に与えられるが、ごの化合物は界面活性剤の作用も与え
るので、栄養物質溶液の組成は他の添加物を用いず、尿
素および、リン酸エステルを用いるこ・とができる事実
によって単純化される。ミクロエマルジョンの粘度を低
下しうる液体の添加も推賞できる。 かかる添加物の種々の例は、すでに述べたとおりである
。本発明の他の実施例においては、エチレングリ：Ｉ−
ルのブチルエーテルが優れた結果を与える。 ミクをコエマルジリンの外部相として特に好適な浦混和
性液体は、本発明ムこ、１ミればラウリン酸、ミリスチ
ン酸、パルミチン酸、アラキン酸、オし・イン酸１、ス
テアリン酸、カブ１．１ンｆａおよりζ々プリル酸なと
のような脂、肪１．ψの−・種また番Ｊ、複数挿の」ｆ
ニスチル番ごまって構内されりン。 かかる酸のクリセリ１は植物Ｊりよひ動物油（あり、極
めて容易に人手可能）、（Ｊ業／：１′、産物Ｃ，ｉｊ
Ｌる。ｆｊｅっ（、アラキン酸、、鯨〆山、菜イ１トｌ
山、ｌ１１μ、珀。 仁浦、とうもろごし浦、オリーフ油５，１７１１町およ
びＩ・−ル浦スｆとが用いられる。　　　　。 脂肪酸自体は１Ｉｌｘ体を周辺温度に保持４イ）ために
適ｊｌ′Ｉｌ、混合物とし゛ζ要求、され右、二とか易
＆：　＆（適である。、従って、・たとえ、はカシ１！
ン酸、ニリンツル酸、カプリル酸、う、ウリル川、パル
ミーＪ−ン酸、オレイン酸、リノール酸Ｊ−たはスう一
アリン酸）、５とのような（′、６〜（二、８１１旧Ｉ
ＪＩ（’＋’Ｊを含むｌ１ｔｊ　Ｉ！／ｉ酸ジ］が特に
有用であ・る。　　　　　　　。 常温で・は、液体で・ない脂肪酸には、炭化、水ＪＭ、
たきえはイｊ・油、カス油を約５％〜５　（１９’ｏの
Ｎｉ！１合′（添加するごとが々ｆ通である。脂肪屏；
γルーｔ−ルすなわらＣｎ　　〜Ｃ２＋のアル：ｌ−ル
も同ｓ　ａこ（ｌｉｊｆｉである。 水溶液が尿素および、たとえばヘキス）（Ｈｏｅｃｈｓ
Ｌ）社からホスタファ−１・’（Ｉｌｏｓ’Ｌａｐｂａ
ｌ）の商品名で市販されたリン酸ラウリルおよび／また
はリン酸オレイルを含む場合には、全ミクロエマルジョ
ン中の好ましい窒素含有量は約４〜ｌ０ｆｆｉｉｉ（％
′Ｃあり、または最も灯ましくは５〜）３重量％である
。浦混和性液体中の窒素市に比は一般には０．１〜０．
４−乙好まし：　＜　ｃ：ｔ（＋、　１５〜０．３５で
ある。 一般的な方法では、本発明におりる４ｆましいミクロエ
マルジョンは１０〜３０重量％の水、４〜ｌＯ重量％の
窒素系化合物の形としての同化性窒素、５〜３５市望％
のＣｕｒ　−Ｃａｎリン酸アルキルまたはエトキシ化さ
れたフェノールチルキルホスフェ−Ｉ・、０〜２０ｆｆ
ｉｌｆｔ％のアルキレングリコールのアルキルエーテル
、および２０〜５０重量％の脂肪族エステル、酸および
／またはアルコールを含む− 窒素系化合物はイ１浦また番、１ぞの誘導体のよう４゛
液体蔑化水累を、たとえは５〜７ｏ、ｉｍ％で含むごと
がてきる。 、４−、発明の女形によｉいてｂａｔ、ｉＭ’に’ｌ物
の極め゛ζ急激な作用か得られる改Ｊ【をふくむ。 ご０）ごとは、このｉ旧白のノこめも二Ｊ’＋ｉめど多
用の１故生物を用いるごとによって極め“ζｐ、Ｌ時間
で炭化水素の生物学的分解をｉｉＪ能にずイ、。Ｒ＆’
ｒ白の栄養物は尿素であるか、通電でり、ｌ海水中に存
在して炭化水素を生物学的に分解できるー・部の微生物
が増殖−ロす、従ってＬＩ的とする／−μ物′Ｙ゛的分
解に寄・りし２ム′いごとが見出され人：。　本発明の
残影１１５、ればごの不活性（ｉｎａｃ、ｔｉｖｅ）　
０）　’Ｊ’、　＊　Ｃ残ろ一部の１故生物は、もしも
窒素系栄養物９′（が第１の栄養物質とは実質的にｊ／
Ｊなぶ化学的組成の−）←ｌミたＧ、１それ以１・の窒
素光物テ′ｊをイ）１用する、二とによっ°Ｃ増夕１ヘ
ーヒしめら才（２、炭化水素Ｏ−シ１−物パｊ！的分１
’＋％ｉに寄与−１しめられる。 第１の栄養物質が尿素であ匂　Ｆ（ｉ、　２のご）２４
物ｒｉが−・種またはそれ以１−の゛ｊ′＼ノＱ９で構
成されるときに、とりわけ好ましい結果が得られる。 ずなわぢ、炭化水素系物質の微生物学的分解を目的とす
る本発明によるミクロエマルションは、好ましくは化学
的観点から実質的に異なる少なくとも２種類の窒素系化
合物の水溶液を含む。 すなわら、たとえば、もしも第１の栄養物質が硫酸アン
モニウム、リン酸アンモニウムまたは硝酸アンモニウム
のような塩であれば、第２の栄養物質がアミン、アミド
、タンパク質、アミノ酸、または他の非アンモニア系化
合物によって構成される。栄養物質溶液が尿素を含むと
きには、第２の窒素系化合物は、たとえば硫酸アンモニ
ウム、リン酸アンモニウノ１、または硝酸アンモニウム
、またはアミノリビ「であり、特にアミノ酸である。 ２種類の窒素系化合物の相対比率は、本発明の方法が適
用される媒体の微生物学的特性に応じて著るしく変化す
る。尿素の効果的な比率は窒素で表すと、全窒素の５０
〜９９％であり、アミノ酸の窒素し１５０〜１％である
。 ある種の水性媒体において＆Ｊ、ずくれノ、−結果をＩ
Ｖるためには、第２の窒素系化合物番；１約１〜１０％
の窒素で十分である。 本発明によっても利に用いられる”ノ゛ミノ酸は自然界
に発見された総てのアミノ酸および合成アミノ酸から選
りｅされる。非限定的例とし゛Ｃ示水上Ｊ、グリシン、
アラニン、セリン、システィン、バリン、クルタミン、
Ｌ＋−（ツユ／、す＝ノン、アルキニン、プロリン、ナ
し１シン、、アスパラキン酸およびクルタミン酸なとか
用いられる。 経済的理由から、一連の数種の“−アミノ酸を通席含む
天然産物から（ｑられる物１（を利用するのが有利であ
る′。これは、たとえ６；ｌ砂１′１ハ大根から得られ
る・フィン、種々の植物のバルブ化に、１．ってｉＹｌ
られた抽出物、特に玉蜀黍抽出物、酵母抽出物、タンパ
ク質の加水分解物、酪農副産物なとてああ。　　　　　
　　　　　　□ 本発明によれば、もしも窒素系化合物質中独で良好な結
果を与えるな、らば、そし°（ｊ／ｉｉなる化学的性質
をイｊする他の窒素系物質を中独で用いたときにも同様
な結果が青、られるならは、７ニつの物質が併用されて
同・化性窒素の全濃度が同一・であれば、炭化水素の微
化物による体分解かより良好であるというで期せざる。 結論を１１える。 従っ″Ｃ２本発明によるミクロ１マルシｑンは、たとえ
ば海水面に分布された原油の８０％以」−の４１：、分
解を、栄養物質溶液か尿素または“ｉ′ミノ産を含むと
きは７［１間で可能にする。 しかしながら、もしも尿素およびアミノ酸か溶液中に共
存し、その全窒素濃度が尿素またはアミノ酸を単独で含
む場合と同一であれば、同一の結果が６日間で得られる
。 本発明を、ド記するような一連の非限定的実施例にもと
づ、き説明する。 実施例１〜１１ これらそれぞれの試験のために、尿素の５０重量％水溶
液の或容積をヘキス）、１　（ｌｌｏｃｃｈｓｔ　）社
からボスタフアート（ｆｉｏｓｔａ、ｐｌ＋ａｔ　）の
商品名ｃ　ｒｌｉ　ｌｌｋ　サｈティＪｌ　に１２〜（
１＋８ＩＩＩ　ＩＩＪｉｈ”）７．ル、′ｌ−ルのリン
酸エステ、ル混合１すによ、り構成さセ、た！ｌ’ｌ！
　＋（＋ｉ活性剤の或屓の存在ドに、ｘＬ−イン酸の或
ｈ４と混合し７た。 あする試験においＣは、工４ニジ・ングリーＪ−月で、
のソチルエーテルを粘度（Ｌ（”Ｉ−のために添加しま
た。１得られたミクＬ１エマル、ンシーＪンの組成、こ
の上マルションの安定範囲、Ａ訊ｔ、ひ、これらのｌ’
１’ｉ　ｌじ−をしめ４゛。実施例イ、５．（ｉ、　　
署（、Ｉ　ＯＡ：Ａ、ひ」１力・ら、０”Ｃから４０　
’ＣＣＴ４の範囲番、二秒いて優れた安定性が７Ｂ（ら
れる、ｌ、Ｊ：が明らかζある。 Ｊ″Ｉ１１度に９いては、：Ｉ：チレンクリー１−ルの
ゾチ月べ１−一一γルの添加なしで極めて枯１すかｌ！
’ｆｌい（実施例１および２）ことか見出された。ごわ
５に′１．１しζ、ごのエーテルの添加に、１、っ（＋
・す（めで許容しうる（１１１に低］・する（実施例１
３〜＋１．、）。 （以下余白） 実施例１２〜１６ ３３％のリン酸ラウリルを用いてミクロエマルジぢンを
製造した。油混和性液体はオＬ・イン酸であり、尿素お
よびリン酸塩の水溶液の２倍量に等しい量であった。水
相におＬｊる尿素の％を変化させた。下記の温度はミク
ロエマルションがなお安定である最高温度を示す。 ２２．２　　　　　　　　３６ ２５　　　　　　　３２ ３３　　　　　　　３８ ５０　　　　　　　３５ ５６　　　　　　ミクロエマルジョン形成せず。 この結果は実際に実効可能で約３〔；℃まで安定なミク
ロエマルションが５０％までの範囲の尿素濃度において
得られ、これ以りの尿素濃度では得られないことを示す
ものである。 １８か例１７〜Ｊ９ 尿素の５０％溶液を用い□、玉子レンクリ゛１−ル０ン
七ノコ−ナル□コニーチルの３０％ヲ含もリン酸オレイ
ルを添加して種にの比率のＡし・イン酸を含も一２４市
のミクロエマルションを製Ｊ盾し）こ。 これらエマルションの安定範囲ＤＪ上記のとおり゛（あ
る。 ０．５　　　　　　２５．３　　　０　〜６５０．６２
５　　　　　２４２　　　０　〜５９０．７５　　　　
　　　　２６．７　　　　０（ゲル）〜６，１この結果
から約０．６５の水溶液／オ（／イ／酸ＩＬ率以１−お
よび３０％の固定されＪ、ニア、１の上ナレングリー！
−ルモノエヂルエーう−ルではミル１１エマルジジンは
ケル化の傾向かあるので使用が困ｔ′１１“ζある。こ
れに対して、この比率ｔ）Ｆｔ？は優れた安定性が６１
「１γされる。 実施例２０ 石油系炭化水素の生分解。 １２０°Ｃで２時間、殺菌した３０βの海水を５０７！
の発酵器に導入した。ごのｌ汚水の水面に７５％の飽和
炭化水素と２５％のジ１香族を含む３４°Ａ１）１の原
油の３０ｍ１を分１１にシた。石油ｒ−の厚みは０．５
闘であった。 この石油層に前述した実施例Ｑル一つのミグ１：Ｉエマ
ルジヨンの６ｍｌを噴霧した。 この媒体に海水から導かれた微生物諒を接種した。　　
　これら微生物源はグロ二１−ス水溶液で２４時間培養
して得られたものであり、主としてプシ：Ｌ−トモナス
（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ　）を含む。 この接種の後に、石油試料中の微生物を分析した。ｍｌ
あたり２．５　Ｘ　１０”〜４　ＸＩ　ｏ’ａｖ徹生物
が見出された。１分あたり４００回転する攪拌機で発酵
器の内容物を攪拌し、１時間あたり１２０βの殺菌した
空気を吹酋込みながら好気性培養を行なった。この空気
吹き込め番、１〆＆ｊご自然に起るφに実質的に相当す
る。４０時間後、史にう目バを行なった。結果を下記表
６．二、１ン４゜７１１後、イ１浦の生分解率を残留す
る炭化水素を四基化炭素で抽出し、赤外スペクトル測定
により２Ｉξめた。 前記実施例１，２，３．１　（ｌお、１、び［Ｉｏ）ミ
ク１゛にＩ−マルソ９ンに゛、ノい゛（ｉすられ人：　
Ｉｆ＋’ｉ↓［１を１．１己第２表にボす。 第　　２　　表 実施例２１ 実施例２０に記した操作法に従つ′ζ、実味４行なった
。しかし、殺菌しない海水を発酵型中に入れ、バクテリ
アの追加接種を行なわなかった。　結果を上記に示す。 実施例２２ 実施例２０の操作法に従って実験を行なった。 しかしながら、海水のかわりに海水中の種々の鉱物成分
、すなわち３０ｐｐｍの微Ｍ元素、特に鉄、マグネシウ
ムおよびカリウムを添加した天然水を用いた。実施例ｚ
ａ６ｍ＋のエマルジｑンを噴在し’（Ｓ養−たバクテリ
アを接種した。 ７１１１＆に残留！ｌ−る炭化水墨を四Ｊｊａ化ｉ−素
ζ抽出し、赤外スベクＩ・ルの測定によっ４４１曲のノ
ド分解率を４１ｊ１定した。生分解率り、Ｌ　！３’　
（１％Ｃあった。 実施例２３〜２４ 海岸において、深さ２ｍ、それぞれか３　ｍ　Ｘ３　ｍ
の水平面を自する四１〕の部屋に１ｙ分された容器中で
アフヒート原油の４゛う）解を行なった。 各部屋は分ａ１１またし」相合に連結するごとかζき、
かり４・・、−Ｃ？ｌｉｊ水を収容′４るごとかＣきイ
Ｉっハイドし１上セクタボンソ°に、！、ｆζ十２のゆ
イ、父）かソ、；攪１′１゛と、容器中の空気の史？ｊ
１をＩ−Ｉなっｉ、二。 各部屋に１５．６ｍ３の海水と１−１記石浦の４／！と
を導入し７、水面トに０．４５ｍｍ厚さの）τうを形成
し７た。 部屋の−・つを二１ントロールに用いた。 ずなわら、この部屋の市水ｊ−９よひ石ｉ＋Ｉ＋、、、
４；Ｉ他の部屋と同様に攪拌したが、（Ｉ「Ｉの添加も
しなかった。試験の末期に本発明による添加物Ｇこよつ
−ζもたらされ）、二生分解の評価を考１ｆｉ　ｒ、こ
入れイ〕ため□に、自然の微生物源によるイコ油の１０
失をＷｔ’ｌ　１１　Ｌ。 六二。他のニ、りの口１脣ポそれぞれにつシ１−（，１
ζδ己■χ量％組成の栄養物ｉ＋８液のミクｔコ ０．４　ｅを導入した。 尿　　　　　　　素　　・　　１割　　　　　　　・清
　　　浄　　　水　　・・−・　２０，８ブチルグリコ
ール　　・・　　ｌ　Ｏ，８リン酸ラウリル　・・・−
２１，Ｉ オレイン酸　・・・３０．３ 試験開始時の、タンク中の海水中の）＼クラー１ノア数
はｍｌあたり１０２であった。７１−口りに各皐Ｉツか
ら消滅した石油量を測定した。−１−°記第３表＆Ｊ、
二つの異なる温度におりる初期石油量のンＣｊ失弄１を
示すものである。 第　　３　　表 上記第１３表から明らかな、１、うつＧこ、比軸的低温
の１２℃においても本発明の処理にｊ−：ｉ　”Ｃ’？
ｔｌｆ＆に（（すられシこ生分解は顕＃：ｉ”’Ｌ　ｒ
シ）る。徹ノ１，１シｊ１１へ養凋を利用しない７来め
ほとんどオー、“（の方法に対し°ζ、」二記結果Ｇ９
１海水中に存イ）→ろ敞ノ４セりだりを利用し゛（得ら
れたもの−ＣＣｂる。 実施例２５ ３０ｍ１の海水を！５０ｍ１の発酵型中に導入し、た。 醍 この海水の水面に７５％の飽和炭化水素および２５％の
名香族を含む３４°ＡＩＩ＋　１原油の３０ｍ１を分肢
さ・Ｕた。　このよ・うにして形成さ・ｌた（１．５ｍ
ｍの厚めを有する石油屓に下記のようなｉｍ計組成を自
する６ｍｌのミクロエマルジョンを噴背した。 尿　　　　　　　　素　　　・−１７，３（％）水　　
　　　　　・　　　　２１５ リン酸ラウリル　・・・　２３７ オ　　し　　イ　　ン　　酸　　　・・　　　　　２６
７０００ （窒素　・８０７係） 石油中のバクテリアの分１１ｉ結果では、ｍｌあたり１
．０２０）ハクラーリアか存１１シ２人二。１分あたり
４００　回６１　’４’　ルＩｆ　ｌ’ｌ’器テ発酵器
ノ内容物ヲ１Ｍｊ　Ｉ’ｌ’　Ｌ、　、。 １時間あ□たり＋２０１！の殺菌空′）（を吹き込めな
から好気１！ト培痒を行なづた。ごの空気吹き込・ｂ←
；ｌ：　？ｈ７　Ｃ自然Ｃご起ろ量Ｃ１二実質的Ｇ、二
相当すＺ＋　６４　８　Ｉ＋、冒４ｉｌ後に２　新ら）
、：４１分ＩＪ１をｊノｚ４゛、ム。 この結果、ｍｌ〆わたり２　、５”’　Ｘ　Ｉ　（１”
のハクう−リアの１ｉ在か小された。７．１．Ｉ　ｉ＆
、’−残１・／ＩがＵし水一本を四塩化炭素−（抽出し
　赤り［）、ペッツＩルの測定４．１．１　　・てイ１
油の７４：分解・１．二をもとめた。 、二の分１’ｉｉＩ率は）（：３％ζｉＦ＋−Ｊた。 実施例２に 実施例２５と同一・０）１榮作をｆｒなった。ノ５へし
λクロエマルソヨン中のｂ）：　Ｊ−の　・÷’ｉｌｉ
　ヲ’ｊ’　ｉ　／　ｉｌ’Ｊの１〕１７−バリンて；
６換しまた。・、り＋：＋−＋：フル、ノー１７の市用
組成心１１Ｆ記のとＡ環９で７６？）。 尿　　　　　　　　　素　　　　−１６８（チ）ＤＬ　
　−バ　リ　　ン　　　　・・　　　　　　２．０水 リン酸ラウリル、・・　２３．７ オ　　し　　イ　　ン　　酸　　　　　・・　　　２６
．２０００ （尿素およびバリンの全窒素　・　８．０７φ　）ハタ
テリア分析の結果、開始時の、ｓｌタテＩＪ　７数は１
０２であり、４８時間後は１０９゛ごあった。 石油の生分解率は、６日後で約８４％゛ごあった。 実施例２５との比較から、アミノ酸の添）ｎ＋　ｃこよ
って尿素単独の場合の４８時間後０）ノ＜クチ１ノア数
２．５　Ｘ　１０８の代りに１０ｂノくクチ１川ｒ数力
’ｌられることか明らかである。ノ１゛分１’＋’ｔ″
４’ｉ　＆、ｌ：　’ノこ施例５０）８３％と同一程度
（８４％）であったが、実施（列２５よりはより速い６
１１てｔＬＩられ、　・力、尿素中独の実施例２５では
７１１間を必要とし）、二。 実施例２７ 実施例２５および２６の操作６．ニしたかい、かつ尿素
の一部を一連のアミノ酸、ｌ−としてア・ノニン、アル
キニン、クルタミン酸およびし〕イノンを含む玉蜀黍抽
出水溶液にかえた；りＩ″ｌ　：ｌ：　−フルソコンを
用いノこ。より小Ｍ含；Ｆ′れる（１１！のＪ′・、）
酸はブＩＪリン、イソ１】・イ、ノ゛／　スＬノオー　
ン、バリン、ソ上ニルアラニン、メナオー″−ンおよび
ひソスチンζある。ごの抽出物中の１≧窒素β；４′ｉ
量は１邪ちちった□。ミクｌ′ノ上マル□シ些！シＩＬ
　Ｆ　ｊｔＬ！重Ｂ１組成を自する。 （ｔノド余白） 尿　　　　　　　　素　　　　　　１２／１　（支））
とうもろこし抽出物　　　・　　１８．７リン酸ラウリ
ル　　・　２９．１ オ　　し　　・ｒ　　ン　　酸　　　　　　　　　２０
６水層の水は、」！、蜀黍抽出物の水であった。水相の
全窒素含ｆｆ量は６％であった。開始時のバクテリア数
は１０２−ごあり、４８時間後には４×１０ＩＩとなり
、６　＋ｇ＋　ｆ＆に石油の生付ＩＩ−′イシは）３８
％に達した。これらの結果と実施例２５の比較から尿素
・＼のアミノ酸添加の望ましいことか明らかである。 実施例２８〜３７ 実施例２７に類憚するごの−・連の試験では、リン酸ラ
ウリルをリン酸オレイルに代え、か・リオレイン酸をト
記き表に示すような種々の液体に代えて、（３１１後の
石油の生分解・ｔを測″）ビした。 ２８　　　アラキン油　　　　８８ ２９　　　　菜　　種　　ａｌ＋　　　　　　　　　８
２１３＋ｌ　　１−−ル油　　　８６ ；日　　　　ヤシ油脂肪酸とワセリン油巨）係の混合物
　　　　　　　８５ １２　　　１０％の原油を添加して 液化したラウリン酸　　　　　８４ ：つ、う　　　カフ゛［ｊン酸７チル　　　　　　８５
；う／１　　　ラウリン酸エチル　　　　　　８７　　
；３５　　　オレイン酸メチル　　　　　　８（）：う
６　　　　スデアリン酸アミル　　　　　　　８８：３
７　　　　団チのゴマ油を添加したガス油８：３リン酸
オし・イルの代りＱこ、ホスタソ“ノ“−１（１１ｏｓ
ＬａｐＨａＬ　）　Ｋ　ｌ　３４　（Ｉ　Ｎの商（；１
１名“（：　Ｉｌ＋　！！ｌＶｔ”　ｉｆている、０１
□〜０１４アルギルモ八ソ、および　　・トリ　（アル
キルテトラグリ、゛１−ルエーテル）−〇−ボスフ１−
トの混合物を用いて灯１１以した結果が（）Ｉられた。 代理人　弁理士　　小　川　信　− 弁理士　　野　（１腎　照 弁理士　　斎　Ｆ　和　彦 窮１頁の続き 優先権主張　■１９８１年９月１日０■フランス（ＰＲ
）■８１１６６２６ （［株］発　明　者　ベルナール・１〜ラミ工フランス
共和国６４１４０ビレール ・リュ・バロン・スギエ・レジ ダンス・アンサベール嚇スユド ・ベーテー・デ（番地なし）

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １、疎水性媒体中で微生物を培養する方法において、水
   とは非混和性である“が前記疎水性媒体とは混和性の液
   体中に栄養物質の水溶液をミクロエマルジョンとなし、
   この形成されたミツ１１１エマルジヨンを、培養すべき
   微生物源を含む媒体中に導入することを特徴とする水溶
   液中の栄養物質を用いて疎水性媒体中で微生物を培養す
   る方法。 ２、栄養物質の水溶液が窒素の水溶性化合物およびリン
   の水溶性化合物を含み、水とは非混和性の液体が前記微
   生物によって同化しうる炭素の化合物から選択された油
   混和性液体である特許請求の範囲第１項記載の疎水性媒
   体中で微生物を培養する方法 ３、　ミクロエマルジョンの内部相を形成する水溶液が
   前記微生物によって同化可能の二つの化学的に異なる種
   類の窒素化合物を含む特許請求の範囲第１項または第２
   項記載の疎水性媒体中で微生物を培養する方法。 ４、ミクロエマルジョンの内部相を形成する水溶液が尿
   素とリン酸アルキルまたはリン酸アルケニルを含み、一
   方、外部用が脂肪酸エステル、ｊ脂肪酸および／またし
   」アルニＩ−ハ・の−■市才人二は二種以１ｔ４こよっ
   ′Ｃ構成されてい？、特許Ａ）ｉ求の範囲第１項ないし
   第１３１ｎのいづれかに記載の１ｌｊｌ・／ｌ（性媒体
   中て微生物を培養する方法。 ５　ミクロエマルジョンの内部相を形成する水ｌ容ｔ１
   νか１１〜１５０重量部の尿素と１　（１Ｆｌ市ｈ１部
   の水を含む特許請求の範囲第１１７４ないし第４頃のい
   づれかに記載の疎水性媒体中Ｃイ１“３を生物を培養す
   る方法。 ６、尿素の水／８液が一種または一種以ｌ−のアミノ酸
   を含む特許請求の範囲第４Ｉイ１ま゛たは第５１．ｒｉ
   記載の疎水性媒体中で徹４−物を培養する方法。 ７、　アミノ酸の比率が９９〜９０重量部の尿素あたり
   １〜１０重量部である特許請求の範囲第６項記載の疎水
   性媒体中で微生物を培養する方法。 ８、疎水性媒体が水面または地面をおおう彬化水素によ
   って構成され、培養された微生物が該炭化水素を生分解
   しうる特許請求の範囲第１項ないし第７頃のいづれかに
   記載の疎水性媒体中で　□微生物を培養Ｊる方法。 ９、　ミクロエマルジョンか１０〜３０重Ｍ％の水、窒
   素化合物の形状の４〜１０重量％の同化性の窒素、５〜
   ３５重量％のリン酸Ｃａｎ　−Ｃｕ＋アルキルまたはア
   ルケニルまたは工Ｉ・キシ化されたフェノールアルキル
   ボスフェート、０〜２０重量％のアルキレングリこ１−
   ルアルキルエーデル、および２０〜５０重量％の脂肪酸
   エステル、脂肪酸および／または脂肪族アルコールを含
   む特許請求の範囲第１項ないし第８項のいづれかに記載
   の疎水性媒体中で微生物を培養する方法。