JPS596899A - 非干渉的トランスアミナ−ゼ測定法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 本発明は、トランスアミナーゼ例えばグルメぐン酸オキ
サル酢酸トランスアミナーゼ（ＧＯ’Ｉ’　）およびグ
ルタミン酸ピルビン酸トランスアミナーゼ（ＧＰＴ　）
に対する、ピリドキサルー５′−リン酸（ＰＬＰ　）で
活性化された測定の分野に関する。

トランスアミン化とはアミノ基が一つの分子から別の分
子へ中間にアンモニアを生成せずに転移することである
。トランスアミン化の触媒となる酵素はアミノ基転移酵
素、またはさらに普通には、トランスアミナーゼと呼ば
れる。現在までに血清中に報告された２種の基質特異性
トランスアミナーゼはグルタ建ン酸オキサル酢酸トラン
スアミナ（５） 一ゼ（ＧＯＴ　）およびグルタミン酸ピルビン酸トラン
スアミナーゼ（ＧＰＴ　）である。前記のトランスアミ
ナーゼは次の反応の触媒作用を行なう；（ａ）　　ＧＯ
Ｔ アスパライン酸＋　α−ケトグルタル酸２ｇしオキサル
酢酸＋グルタミン酸　　＋１１（（９）　　ＧＰＴ アラ二ノ＋α−ケトグルタル酸　＝♀トｙ亡ピルビン酸
＋グルタミン酸（２１ ＧＯＴおよびＧＰ’ｌ’の血清測定の最も重要な用途は
心筋梗塞症および肝胆汁性疾患の場合である。

ＧＯ’Ｉ’およびＧＰＴ測定のために臨床研究室で通常
使用される方法の中には、３４０ナノメー）　ｙｖ　（
ｎｍ）でモニターされる、動的な、　ＮＡＤＨと共役し
た（　ＮＡＤＩ（は還元されたニコチンアデニンジヌク
レオチドである）反応がある。これらの共役した反応に
はリンゴ酸脱水素酵素（ＭＤＨ）および乳酸脱水素酵素
（ＬＤＨ）がそれぞれ使用され、反応は次の通りである
： （ａｌ　　ＧＯＴ （６） ＮＡＤＨＮＡＤ （）ＯＴに対する方法はＬａ　Ｄｕｅらによって、５ｃ
ｉｅｎｃｅ　、　　１２０　＊　４９７　（１９５４）
の１人の、□、、ユ□、−−■■Ｈ−−−謝り−１−か
□□急性経壁心筋梗塞症における血清オキサル酢酸トラ
ンスアミナーゼ活性Ｊに紹介された。（）ＰＴに対する
方法はＨｅｎ１ｅｙらによって、　Ｊ、　Ｌａｂ、　Ｃ
１１ｎ。

Ｍｅａ、＊　４／、　　７８５　（１９５５）の１°血
漿中のグルタミン酸オキサル酢酸およびグルタンン酸ピ
ルビン酸トランスアミナーゼの新定量法」に記述された
。別の方法として、反応（１）まにハ（２）によるグル
タミン酸をグルタミン酸脱水素酵素の存在においてＮＡ
Ｄと反応させてＮＡＤＨを生成させ、これを（７） 測定することができる。植種の改変および改良が加えら
れて、これらは依然として血清トランスアミナーゼ測定
のための好ましい方法となっている。

例えば米国特許４，２４１．１７９号を参照され度い、
これら画法における反応は植種の技法によって追跡する
ことができる。例えばＨｅｎｒｙら編、Ｃ！１ｉｎｉｃ
ａｌ　Ｃｈｅｍｌｓｔｒｙ　Ｐｒ１ｎｃｉｐｌｅｓ　ａ
ｎｄ　Ｔｅｃｈｎｉｃｓ（臨床化学の原理と技術）、第
２版、Ｈａｒｐｅｒ　＆Ｒｏｗ　Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ
発行、８７３−８９２頁（１９７４）参照。ＮＡＤ（Ｈ
）は直接に、またはレドックス指示系の転化後に、測定
することができる。

別法として、Ｄθｎａｋθらの米国特許第４，２７１．
２６５号には、前記反応１１＋または（２１のようにし
て生成したα−ケトグルタル酸をγ−アミノ酪酸トラン
スア建ナーゼの存在においてγ−アミノ酪酸と反応させ
コハク酸中アルデヒドを生ずることが開示されている。

ニコチンアデニンジヌクレオチドリン酸（ＮＡＤＰ　）
はコハク酸中アルデヒド脱水素酵素の存在においてコハ
ク酸中アルデヒドによって還元されてＮＡＤＰＨ（ＮＡ
ＤＰＨは還元されたニコチンア（８） デニンゾ□ヌクレオチドリン酸である）を生じ、後者は
直接に、またはテトラゾリウム塩および電子キャリアー
例えばジアホラーゼ、フェナントロリンメトスルフアー
トまたはフェナジンメトスルフアートによってホルマザ
ン染料に転化した後測定される。

すべてのトランスアミナーゼは共通の反応機構を有しま
た同じ補酵素すなわち補欠分子族を有するよ５に思われ
る。この補酵素はピリドキサルー５′−リン酸（ＰＬＰ
　）である： トランスアミノ化においてＰＬＰは転移すべきα−アミ
ノ基に対する伝達体として作用する。ＰＬＰ−アポ酵素
錯体のアルデヒド基は供与体アミノ酸例えばアスパライ
ン酸またはアラニンからアミノ（９） 基を受取ってシッフ塩基を生ずる。アルデヒド票とアミ
ノ型との間で振動することにより、ＰＬＰはアミノ基を
アミノ酸からケト酸へ転移する。血清トランスアミナー
ゼは完全に触媒活性を発揮するためＫはＰＬＰを必要と
し、か＼るトランスアミナーゼの一部は血清中にアポ酵
素の形で存在する°。

か＼るトランスアミナーゼの測定用の組成物にＰＬＰを
添加すると、活性化が一層完全となり、従ってより大き
な感度が得られる。このことはＨａｍｆｅｌｔの、「血
液中のアミノ転移酵素測定に対するぎりドキサルリン酸
の影１’Ｊ　　（５ｃａｎｄ、　Ｊ。

Ｃ１１ｎ、　Ｌａｂ、　Ｉｎｖｅｓｔ、　１８　（８ｕ
ｐｐ１．９９　）　、　　１８１（１９６６））に示唆
された。トランスアミナーゼ測定試薬に対するＰＬＰの
添加は、３４０ナノメートル範囲において「正の偏差４
１すなわち不当に高い示度を生ずることが認められた。

高濃度の陰イオンの添加によりこの偏差が無くなること
が示唆されている（　５ａｎａｅｒｓｏｎ　Ｊ、、　　
Ｃ！ｌｉｎ、　Ｃｈｅｍ、　２７゜１０３５、　Ａｂａ
、０５４（１９８１））。

流路内透析器を使用する連続流式分析器におい（１０） ては、時に非結合のＰＬＰがタンパク含有試料、例えば
血清試料の定量的測定結果に影響をおよぼすことがある
。ＰＬＰは一部、血清タンパク例えばアルブミンによっ
て捕捉されるため、　ＰＬＰ活性化試薬はか＼る分析器
には使用されなかった。その結果、透析膜を通過する非
結合ＰＬＰの着は不定であった。

本発明によれば、ある種のアミノ官能化されたポリマー
の存在により、分析すべき液体の吸光度指示値に対する
ピリドキサルー５′−リン酸（ＰＬＰ）の干渉効果が除
かれることが認められた。アミノ官能化されたポリマー
のアミノ基はタンパクに結合していないＰＬＰに非可逆
的に結合し、それが透析膜を通過するのを防止する。さ
らに、アミン官能化されたポリマーはトランスアミナー
ゼの活性を阻害もせず、またトランスアミナーゼに結合
したＰＬＰを除くこともない。

本発明によれば、トランスアミナーゼに対する基質、そ
のトランスアミナーゼと基質との反応生成物に応答性で
検出可能な応答を与える試薬、ピリドキサルー５′−リ
ン酸、およびアミノ官能化されたポリマーを含有して成
る、液体中のトランスアミナーゼ測定用の組成物が提供
される。好ましい態様においては、反応生成物に応答性
の試薬は、反応生成物がその基質である酵素、およびそ
の酵素に対するレドックスコファクターである。

さらに本発明によれば、測定すべき液体を、トランスア
ミナーゼに対する基質、トランスアミナーゼと基質との
反応生成物に対して応答性の試薬、ピリドキサルー５′
−リン酸、およびアミノ官能化されたポリマーを含有し
て成る組成物と接触させ、該液体からアミン官能化され
たポリマーに結合したピリドキサルー５′−リン酸を分
離したのち、該液体中の検出可能は応答を測定すること
から成る、液体中のトランスアミナーゼの測定方法が提
供される。

以下の説明においては明確化のため特定の用語を使用し
ているが、これは例示のために選んだ特定の態様のみに
ついてのものであり本発明の範囲を制限しようとするも
のではない。

本発明の組成物はトランスアミナーゼの特に血清中での
測定への使用を目的とするものである。

前記した通り、臨床的に最も興味のあるトランスアミナ
ーゼはグルメンン酸オキサル酢酸トランスアミナーゼ（
ＧＯＴ　）およびグルタンン酸ピルビン酸トランスアミ
ナーゼ（ＧＰＴ　）である。ピリドキサルー５′−リン
酸で活性化された試薬の使用に伴なう干渉の影響は本発
明によって避けることができる。ＧＯＴ測定用の組成物
の一例は、アスパライン酸とα−ケトグルタル酸とを含
有して成る基質、前記基質とＧＯＴとの反応生成物に対
し特異性である酵素（この酵素にはりンイ酸脱水素酵素
およびＮＡＤが含まれる）、ＰＬＰおよびアミノ官能化
されたポリマーを含有して成る試薬である。ＧＰ’Ｉ’
測定用の同様の測定においては、基質はアラニンおよび
α−ケトグルタル酸を含有して成り、基質と（）ＰＴと
の反応生成物に対して特異性の酵素は乳酸脱水素酵素お
よびＮＡＤである。リンデ酸脱水票酵素または乳酸脱水
素酵素のそれぞれの代りにグルタミン酸脱水素酵素を使
用することができる。

（１３） その他の酵素経路にも血清トランスアミナーゼ測定に使
用し得るものが知られている。例えばＧＯＴ測定用の組
成物は、グルタミン酸およびオキサル酢酸とを含有して
成る基質、γ−アミノ酪酸、γ−アミノ酪酸トランスア
ミナーゼ、コハクｅ半アルデヒド脱水累酵素およびＮＡ
ＤＰを含有して成る試薬を、ＰＬＰおよびアミノ官能化
ポリマーと共に含有することができる。ＧＰＴ測定用の
対応する組成物は、グルタミン酸およびピルビン酸を含
有して成る基質と、ｒ−アミノ酪酸、ｒ−アミノ酪酸ト
ランスアミナーゼ、コハク酸中アルデヒド脱水素酵素お
よびＮＡＤＰを含有する試薬とを含有する。

当該技術において周知の通り、前記の組成物は何れも適
当なレドックス指示薬の導入により視覚的に検出可能と
することができる。このような指示薬の例としては０−
シアニジシン、０−）ルイゾン、３．３’、５．５’−
テトラアルキルベンゾジン、例えＦｆ３　、３’、　５
　、５’−テトラメチルベンゾシンおよび共役指示系系
が挙げられる。この兵役（１４） 指示薬系は通常ヒドラゾンおよびカゾラー例えばトリメ
チルアニリン、８−アンノー１−ナフトール−５，７−
ジスルホンｌＩｔたはクロモ）四−ゾ酸を含有して成る
。

本発明によれば、前記のＰＬＰ活性化組成物にはアミン
官能化されたポリマーが加えられている。

使用に適したアミノ官能化ポリマーの例としては次式で
表わされるものがある： （本式においてＲ１は水素原子、アルキル基壇たはアリ
ール基であり、ＲｇおよびＲ３は互いＩＩｃ独立して水
素原子、ヒドロキシル基、アルキル基またはアリール基
であ郵、ｎはポリマーの繰返し単位の数である）。Ｒ１
，ＲＱおよびＲ５かそれぞれ水素原子であるポリマーが
好ましい。別の例においては、Ｒ１はメチル基、エチル
基またはベンジル基であり、Ｒ２およびＲ３は水素原子
である。さらに他の例では、′Ｒ１およびＲ３は共にエ
チル基でありＲ１は水素原子である。別の有用なポリマ
ーはＲ２またはＲ３の一つがヒドロキシル基であり、Ｒ
□およびＲ２とＲ３とのうちの他の一つが水素原子であ
るものである。さらに別の例においてはＲ２およびＲ８
はそれぞれメチル基である。前記の式の範囲に属するそ
の他の例も本発明の範囲内にあるものとして考慮される
。同様にｎが少くとも約１００であるものが好ましい。

ｎが約１，０００，０００以上もの高い値の高分子も考
えられる。特に好ましいのはポリビニルアミンである。

本組成物が溶液状で使用されるときは、アミノ官能化ポ
リマーは約１０ミクロモルないし約４０ミクロモルの濃
度で存在することが好ましい。ピリドキサルー５′−リ
ン酸の濃度は約０．０５ないし約０．２ミリモルである
。トランスアミナーゼ基質、トランスアミナーゼとその
基質との間の反応に応答性の試薬、およびその他の試薬
ならびに成分は従来の技術による分析において適当であ
るとされている濃度で存在する。

Ｖリドキサルー５１−リン酸はベーリンｒル　Ｖ／ハイ
ム　ケミカルｘ　（Ｂｏｅｈｒｉｎｇｅｒ　Ｍａｎｎｂ
ｅｉ、ｍＯｈｅｍｉｃａｌａ　、工ｎｄｉａｎａｐｏｌ
ｉａ　、ＩＮ）から入手した。

リン♂酸脱水素ｍ単／　ＮＡＤＨおよびＧＯＴ　／　ｒ
ｙｒ希［１１ハテクエブン　インスツルメント社（Ｔｅ
ｏｈｎｉｏｏｎ　Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ　０ｏｒｐｏ
ｒａｔｉｏｎ。

Ｔａｒｒｙｔｏｗｎ、　ＮＹ　）から入手した。ペヅス
ペルス（Ｐｅｇｏａｐｅｒｓｉ＠）ｔｆ一連の脂肪酸１
１ｅＩＪり９リコールエステルの商標で、グリ−ケミカ
ルス社（Ｇ’ｌｙｃ。

○ＭｍｉＯＩＬ１１１　、■ｎｏ、、　Ｇｒｅｅｎｗｉ
ｏｈ、　ＯＴ　）から入手した。

実施例において使用した酵素調製物の活性は乾燥重量ミ
リグラム尚りの活性単位数によって測定する。生化学国
際連４Ｆ＃素委員会（Ｔｈｅ　ｕｏｍｕ＋１ａｓｉｏｎ
ｏｎ　Ｅｎｚｙｍｅｓ　ｏｆ　Ｔｈｅ　Ｉｎｔｅｒｎａ
ｔｉｏｎａｌ　ｔｌｎｉｏｎ　ｏｆＢｉＯＯｈ６ｍｔ８
ｔｒ７　）は酵ｌＡｍ性の国際単位（工Ｕ）を、−およ
び温度管理の特定の両件下にお％−１て１分間に利用さ
れた基質１ミクｐモル（μｍｏｌ　）と定義している。

例　　１ （１７） 本例に報告する実験においては、本発明によるポリビニ
ルアミンを含有するＧＯＴ測定測定用粗系組成物ポリビ
ニルアミンを含まぬこと以外はこれと同一の試薬組成物
および一般に認められた標準的方法と比較した。

本発明によるＡ法には次の処方の試薬組成物を使用した
： 試薬１（ｉ留水１リットル幽り）： 成分　　　　量 必要に応じて水酸化ナトリウム（ＭａＯＨ）により＄７
．８とする。

トリス　　　　　　　　　　　　　　２．９９　ｇα−
ケトグルタル酸二ナトリウム塩　　　　４．２ｇ（１８
） 必要に応じて塩酸（ＨＯＩ）により−８，７とする。

豚（Ｄ　ＩＪ　ン１ｌｌｌ脱水素酵Ｘ　（ＭＤＨ）　　
　１．４６７　ｘｙＮＡＤＨ、ニナトリウム塩　　　　
０．１６６１１牛血清７にシンｙ　（ＢＡＡ）　　　　
０．４９９トリス　　　　　　　　　　　　　ｉ６．ｏ
　ＩＩ必要に応じてＨＯｌでｐＨ８，０とする。　　・
比較のため、ｇ楽Ｈにポリビニルア賓ンが含まれない以
外は同一の試＃４ｔこ＼でＢ法と呼ぶ分析法に使用した
。さらに、こ＼で０法と呼ぶ、例えば０１ｉｎｉｏａｌ
　Ｏｈ８ｍｉａｔ１”７＋　２３＋　８８７−８９９（
１９７７）および２４，７２０−７２１に推奨されてい
る標準的方法と３７℃で比較した。

Ａ法およびＢ法は第１図に示す型の連続流型分析器を使
用して行なった。図に示す通り、空気、逐次試料（試料
内の空気セグメントによって分離されている）および試
薬Ｉを制動ポンゾ１２のポンプ管８ａ＊８ｂおよび８ｃ
をそれぞれ通じて分析器に導入する。ポンプ管８ａｓ８
ｂおよび８Ｃの出口は導管１０に連結されており、試料
内空気泡によって区分された述次試料なこ−で試薬■と
反応させる。各逐次試料は全く同様に処理されるので、
単一の試料について処理の説明を行なう。

反応した試料は導管１０から定温器１４′ｆ？Ｉ：通過
し、こ＼で３７℃で約２．６分間定温処理する。定温器
１４の出口は第二の定温器１６の入口に連結されている
。またポンプ管８ｄの出口も定温器１６の入口に連結さ
れ試薬■を導入する。試薬■と反応した試料は定温器１
６を通り３７℃で６．０分間定温処理される。十分に反
応した試料は定温器１６から透析器１８の供与室１８ａ
に入る。透析器１８には受容室１８１）があり、これは
アミノ官能化ポリマーに結合したＰＬＰが室１８ｂに通
過してゆ（すな防止するため、低分子量化合物に対して
選択的に透過性の膜２０によって室１８ａと分離されて
いる。試薬■をポンプ管８ｅを通じて導入し、ポンプ管
８ｆを通じて連続的に導入される空気流と合流させる。

ポンプ管８θと８ｆの出口は導管１１に連結されている
。従って空気で区分された試薬■の流は、分析すべき透
析物を受入れるため、受容流として導管１１から室１８
ｂを通過する。室１Ｂ＆から出た流は図示する通り排水
に流す。室１８ｂから出た流は分光光度計２２に通し、
こ＼で３４０ナノメートルにおいて吸光度を測定する。

反応後の試料流を分光光度計２２に通す前に、試料間の
空気泡および室１８ｂから出た。

連続流中の試料内空気泡の一部は常法で脱泡器２１によ
り脱泡する。

Ｃ法は０ｂａｒｌｉｎ　、　ＯＨの（）ｉｌｆｏｒｄか
ら入手したヤルフオード（Ｇ１１ｆｏｒｄ　）　２６０
分析器によって実施した。

無作意的に選んだ２０個の一連のヒト血清試料を前記３
種の方法で分析し、結果をＧＯで活性として国際単位／
リットル（ＩＵ／Ｌ）で表示して第１表に示した。

（２１） 第　　１　　表 １　　５７　　４８　　３り ２　　２８　　４０　　３５ ３　　２６　　４０　　２８ ４　　４３　　５６　　４５ ５　　３３　　４５　　３３ ６　　２６　　３７　　２６ ７　　２３　　３５　　２６ ８　　２３　　３５　　２５ ９　　５０　　６０　　４７ １０　　４１　　５１　　４０ １１　　９１　　１０４　　８９ １２　　７９　　８９　　６７ １３　　１３７　１５１　　１４６ １４　　９６　１０５　　１００ １５　　１０１　１１５　　９８ １ｔ５　　３７　　４５　　５５ １７　　９３　１０１　　１１０ １８　　９１　　９９　　１０８ １９　　７１　　８１　　６９ ２０　　１８４　１８５　　２０１ （２２） これらのデータから認められる通り、本発明によるＡ法
はＣ法との一致がＢ法よりも良好である。

例　　２ 本実施例の実験においては、所定量のピリドキサルー５
′−リン酸による干渉を除（のに必要なポリビニルアミ
ン（ＰＶＡ　）の量を決定するために、植種の址のＰＶ
Ａについて試験した。

この定量的試験においては以下の処方の本発明組成物を
比較しにニ トリス（ヒドロキシメチル）アミノメタン（トリス）　
　　　　　　　　　　　　　　　　　　９，５９トリス
ＨＣ！１　　　　　　　　　　　　　　　　５．５１１
ｆ　ＩＪ　トａｔ’ｔｋ−５’　−１７ンｐ　（ＰＬＰ
）　　　　　　６２　　ＩＱＬ−アスパラザン酸、ナト
リウム塩　　　　　５４．５　ｇ必要に応じＮａＯＨま
たはＨＯＩによりｐｉ−１８，０とする。

（２６） 成分　　　　　量 α−ケトグルタル酸、ニナトリウム塩　　　１４．５　
、！ｉ＋トリス　　　　　　　　　　　　　　　　　８
．０ｇ必要に応じＨＣＩによりｐＨ８，７とする。

ＰＶＡ（１０俤 ｗ／ｖ　Ｒ２０）　　０　．０５ｍ１　、ｌＱＱコ、２
５０ｒＩＬ１．圓ｍｌ　、７’ｆＪｍｌ　１．Ｑ（）ｘ
／　’ｊ、；”ｍ１Ｈ２０２，５ｍ１２．４５Ｍ２．４
０ｍ１２．２５ｒｎ１２．０ｍ１１．７５ｒｎ１１．釦
ｍ１１．２５ｍ１前記各溶液を、Ｒ４と名づけた試料調
製物からとった、混注ヒト血清１０−とベデスペルス（
登録商標）１．５ｍＪとを含有するヒト血清のアリコー
トの試験に使用した。

測定は前記各溶液の下記容積な６７℃で４分間定温処理
して行なった。

各溶液の吸光度をギルフォード２６０分光光度計により
４１０ナノメートルで測定し、ポリビニルアミンによる
ピリドキサルー５′−リン酸の非可逆的結合量を定量し
た。

得られた結果ｙａ−第２図に図示した。図から少くとも
１俤（ｗ／ｖ　）のＰｖＡを含む溶液、例えばＲ，処方
Ｆ、（）およびＨＹ使用した溶液においては、ＰＬＰの
吸収による４１０ナノメートルの吸収はすべて無くなっ
ていることか認められる。、なお認められる少量の残存
吸収は被検液中の存在するα−ケトグルタル酸によるも
のである。

本発明は特定の例について説明したが、本発明の範囲を
逸脱することな（細部に無数の変更を加えることができ
る。

【図面の簡単な説明】

第１図は実施例１に述べた実験に使用する連続流屋分析
器の工程を模式的に示す系統図である。 第２図は実施例２によって得たデータを線図的に示す説
明図である。 （２５）　　　代理人　中島宣彦

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 ｆｉ＋　　測定すべき液体ヲ、トランスアミナーゼに対
   する基質、トランスアミナーぜと基質との反応生成物に
   対して応答性の試薬、ピリドキサルー５′−リン酸およ
   びアミノ官能化され定ポリマーを含有して成る組成物と
   接触させ、該液体からアミノ官能化されたポリマーに結
   合したビＩＪ　Ｉ’キサルー５′＋　ＩＪン酸酸分分離
   たのち、該液体中の検出可能な応答を測定することから
   成る、液体中のトランスアミナーゼの測定方法。 （２）（ａ）トランスアミナーゼに対する基質、（ｂ）
   　　該トランスアミナーゼと該基質との反応生成物に応
   答性で、検出可能な応答χ与える試薬、（Ｃ１ピリドキ
   サルー５７−リン酸、および（ｄ）　　アミノ官能化さ
   れにポリマー（１） を含有して成るトランスアミナーゼ測定用組成物。 １３＋　　（ｂ）の試薬が、反応生成物がその基質であ
   る酵素およびその酵素に対するレドックスコファクター
   を含有して成る、前項（２）に記載の組成物。 （４）トランスアミナーゼがグルタミン酸オキサル酢酸
   トランスアミナーゼであり、基質がアスパライン酸およ
   びα−ケトグルタル酸を含有して成り、反応生成物に対
   して特異的である酵素がリンデ酸脱水素酵素を含有して
   成り、レドックス補酵素がニコチンアデニンジヌクレオ
   チドである、前項（出に記載の組成物。 （５）　トランスアミナーゼがグルタミン酸ピルビン酸
   トランスアミナーゼであり、基質がアラニンおよびα−
   ケトグルタル酸を含有して成り、反応生成物に対して特
   異的である酵素が乳酸脱水素酵素を含有して成り、レド
   ックス補酵素がニコチンアデニンジヌクレオチＰである
   、前項（３１に記載の組成物。 （６）反応生成物に対して特異的である酵素がグルタミ
   ン酸脱水素酵素を含有して成る、前項（３１に記（２） 載の組成物。 （７）トランスアミナーゼがグルタミン酸オキサル酢酸
   トランスアイナーゼであり、基質がグルタミン酸および
   オキサル酢酸を含有して成り、反応生成物に対して応答
   性の試薬がγ−アミノ酪酸、ｒ−アミノ酪酸トランスア
   ミナーゼ、コハク酸中アルデヒド脱水素酵′Ｉｇおよび
   ニコチンアデニンジヌクレオチドリン酸を含有して成る
   。前項（２１に記載の組成物。 ｉｓｌト：＞ｙスアミナーゼがグルタミン酸ピルビン酸
   トランスアミナーゼであり、基質がグルタミン酸および
   ピルビン酸を含有して成り、反応生成物に対して応答性
   の試薬がγ−アミノ酪酸、γ−アミノ酪酸トランスアミ
   ナーゼ、コハク酸中アルデヒド脱水素酵素およびニコチ
   ンアデニンジヌクレオチドリン酸を含有して成る、前項
   （２１に記載の組成物。 （９）　　さらにレドックス指示薬を含有して成る、前
   項１２＋　−（８１のいずれかに記載の組成物。 ａｌ　アミノ官能化されたポリマーが式（６） （本式においてＲｏは水素原子、アルキル基またはアリ
   ール基であり、Ｒ２およびＲ３は互いに独立して水素原
   子、ヒドロキシル基、アルキル基またはアリール基であ
   り、ｎｏはポリ′マーの繰返し単位の数である） で表わされる、前項１２＋　−１８１のいずれかに記載
   の組成物。 （ｌｉｔ　　Ｒ工、Ｒ８およびＲ５がそれぞれ水素原子
   である前項（ＩＩに記載の組成物。 （Ｊ’ＺＪ　　Ｒよ、Ｒ２およびＲ３がそれぞれ水素原
   子であり、ｎが少くとも約１００である前項＋１１に記
   載の組成物。 （１３１Ｒ１がメチル基、エチル基またはベンジル基で
   あり、Ｒ２とＲ３とが水素原子である前項（ＩＩに記載
   の組成物。 （４） Ｑ４）　　Ｒ１とＲ３とが共にエチル基であり、Ｒ１４
   が水素原子である前項四に記載の組成物。 ０１Ｒ２とＲ３とのうちの一つがヒドロキシル基であり
   、Ｒ１およびＲ２とＲ５との残りの一つが水素原子であ
   る前項Ｇ（Ｉに記載の組成物ＯＱＩ　　Ｒ工が水素原子
   であり、Ｒ１１とＲ３とが共にメチル基である前項（Ｉ
   ＩＫ記載の組成物。