JPS60102160A - トリプシン阻害を克服する方法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】

産業上の利用分野 本発明は、通常、大豆または大豆ミール（穀粉）から得
られる食品補充物質に関するものである。 その様な食品が商業的に成功を収め得るか否か、即ち該
食品を商品として利用し得るか否か、を決定するに際し
て、その食品の栄養面での質、並ひに製造コストは重要
なファクターである。更に詳しく言えば、本発明は、大
豆製品固有のタンパク質に起因するトリプシン阻害作用
を克服することにより、該食品の質、並びに製造におけ
る経済効率を改良する方法を提供するものである。 従来技術 トリプシンは重要な消化酵素であり、特に、ペプシンや
キモトリプシンの如き補助的な酵素類を比較的少量しか
有していないか、あるいは全く有していない様なある種
の生物にとっては重要である。経済的な観点に立てば、
その様な種類の生物の内で特に重要なのは、鶏、豚およ
び仔牛（生類は、かなり若い間は完全に成熟した消化系
を持たない）である。特にこれらの動物では、ＩＩＩＩ
らかの面で酵素トリプシンの機能が損なわれると、数多
くの有害な結果が現れる。まず第１に、動物が摂取した
飼料はすべて、それを消化する能力が直接的に損傷され
ることにより、栄ｊ足価の低１・を末すことになる。第
２に、トリプシン以外の他の消化酵素を有している動物
においても、トリブシノは通常その様な酵素類のあるも
のを賦活化し、それらを消化過程に関与させるように作
用しでいるので、トリプシンの欠除は、これらの酵素類
の欠損をも伴なう結果となる。最後に、適当ｆ、ｃ　ｉ
ｌｉのトリプシンが欠乏していることを感知すると、Ｉ
旧状ｉ；１自身が容易に分泌し得る量よりも多くのトリ
プシンを分泌する様に仕向けられるので膵臓肥大と称さ
れる「オーバーワーク」の状態になり、軽くとも病気に
なり、最悪の場合には死にすることとｊｓる。 大豆トリプシン阻害物質（ＳＴｌ）の適切な破壊処置が
施されていない大豆製品が、摂取した飼料中に大量に含
まれている場合には、トリプシン阻害は克服し難い問題
となる。このＳ　ＴＩは、それを含む飼料を摂取した動
物の内因性トリプシンと結合して該酵素が正常に機能す
ることを阻止するように作用する。故に、大豆を主成分
とする動物飼料には、今日では、このタンパク質を不活
性化するために、「調理」処理がなされている。従来の
大豆加工工程は、湿式法で大豆のさやを除くものである
が、この場合、くずの重量を減少させると共に、次の工
程に支障を来たすことを避けるために、水の含有量は制
限されている。このさやむき大豆をヘキサンで抽出して
］１業用の大豆油を得る。ヘキサン抽出の後、この大豆
マルチ（

【間１ｃｂ）を加熱して大豆トリプシン阻害物
質を不活化する。 この不活化工程はかなり高くつき、しかも不完全な結果
しか得られない。予測される様に、この熱処理法に基く
ＳＴＩ含有１１１の減少は、ゼロに向けて漸近線的に近
う（ｈ−ブを描き、指数関数的に減衰する。従って、課
題となっている特定の製品を得るのに好適な時間の経過
後もなお加熱することは、たとえそのことによってさら
に幾分かのＳ、”ｒｌが不活化されるｌこしても、不経
済であるはかりか、逆効果にな、る。この、処理され〕
こ入１、ノミールを様々な形で動物用飼料に利用する。 しかし、この製品は、Ｓ　’］−１を減少されてはいる
が、残（ｊ量のＳ　Ｔ　１を含有している。 この製品の最も一般的な用途は、家畜の飼料に用いられ
る他の炭水化物源に対する飼料用添加物としての用途で
あり、その様を家系のう１′）最も重要なものは、豚、
鶏、および産れたての仔牛である。しかるに、仔牛ｌこ
与える場合においｊＺ　ｉ：Ｉ、この製品は、摂取させ
る前に液体に財、洞し、ミルクの代りに用いる方法がよ
り一般的である。この製品は、飼育者が液状に調製し得
るイエｔ、１固形物ｔ′↓、あるいは摂取させる前に希
釈するための０絹ｌｒν、のいずれかの形である。消費
者の数は少ｌ、＜いが、この大豆製品はヒトの幼児、特
に乳製品に耐容性のない幼児に対する食品補充物質とし
ても用いることもできる。 トリプシン阻害物質の問題もまた、純粋な研究課題とし
て研究されてきた。ｓ　’ｒ　ｔは、ウシトリプシンに
対し、該トリプシンの反応性１１１１位に特異的に結合
するよう作用し、他方、Ｓ　ｌ’　ｌ自体も、その領域
で、この阻害されたトリプシンの作用によって加水分解
されることがわかっている（Ｌａｓｃｏｗｓｋｉ　ａｎ
ｄ　５ｅａｌｏｃｋ、　Ｅｎｚｙｍｃｓ　、第：（版、
３７５（１９７１）　ＨＦ　１ｎｋｅｎｓｔａｄｔ　ら
、ｌ’ｒｏｃｃｓｓ　ｉｎｇｓ　ｏｆ　ｔｌｌｅＩｎｔ
ｅｒｎａｔｉｏｎａｌ　Ｃｏｎｆｅｒｅｎｃｅ　ｏｆ　
Ｐｒｏｃａｉｎ；ｔｓｃ　Ｉｎｈｉｂｉ　−ｔｏｒｓ　
ＩＩ、３８９（１９７４））。この阻害機構はかなりよ
く理解されている（　ＭａＬＬｉｓおよびＬａｓｋｏｗ
ｓｋｉ　。 Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ　１２：２２３９（１９７３
）　；　Ｉ’ｌｌ山ｎａｎ１１ら１．１ｏｕｒｎａｌ　
ｏｆ　Ｍｏ１ｅｃｕｌａｒ　Ｂｉｏｌｏｇｙ　、　７７
　：４１７　（１９７３）　層Ｈｕｂｅｒ　ら、Ｊｏｕ
ｒｎａｌ　ｏｆ　Ｍｏ１ｅｃｕｌａｒ　Ｂｉｏｌｏｇｙ
。 ８９ニア３（１９７４）およびＳｗｅｅｔら、Ｂ　ｉ　
ｏｃｂｅ＋ｎ　ｉ　ｓ　ｔ　ｒ　ｙ１３：４２１２（１
９７３））。この阻害物質とトリプシンの間には、かな
り強固なコンプレックスが形成されるようである。 触媒量のトリプシンとＳ　Ｔ　Ｉとをインキュベーショ
ンすると、反応性部位である一つのペプチド結合が特異
的に加水分解される。この加水分解（，１、そのままの
（反応性部位のペプチド結合が元のままの）阻害物質と
、修飾された（反応１／１．　ｉｉＢ位のペプチド結合
が加水分解を受けた）阻害物ノー′（との間に平衝状態
をもたらす。これら天然形（無傷の９または修ｆｌｉｌ
ｉ形のＳ　ｒＩはいずれもＩ・リプシンの阻害物質なの
で、この様な加水分解自体かＳ゛１１を不活化させるこ
とはない。しかしｆ、ｆから、修ｆｉｉｌｉ形の阻害物
質が形成されると、それかりまに〕Ｊル、１′、キシペ
プチダーゼＢと反応して不活化される。この酵素は修飾
形Ｓ　Ｔ　ｌから１つのアミノ酸（アルキニン１６３）
を除去する。この反応による生成物（脱−Ａｒｇ　Ｓ−
１’　Ｉ　）は、もはやトリジン７１（＋１害１１Ｌ力
を有していない。ところで、１−リブノンｉＪ、　Ｓ　
’ｌ’　ｌを天然形から修飾形に転換させる触媒とｆ、
ｇす？１するか、その転換速度があまりにも遅い（中性
（）１【で数１−１間）ので、トリプシンをＳ’ｒＩの
不活化に自効に利用することはできない。 最近、精製（純化）　Ｓ　Ｔ　１を用いて、ヒトデ（Ｄ
ｅｒｍａｓｔｅｒｉａｓ　ｉｍｂｒｉｃａｔａ　）が、
極め−（ｊＩＬい速度（中性ｐＨにおいて数分間（Ｊｉ
ｓｔｃｌｌ　ａｎｄ　Ｌａｓｋｏｗｓｋｉ。 Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ　１９：１２４　、１９８０
）　）で、天然形ＳＴｌを修飾形ＳＴＩに転換し得るト
リプシン酵素（ＤＩＴｌ）を持っているということが報
告された。 従って、この酵素と、修飾形ＳＴＩを不活性化するもう
１つの補助的なタンパク質分解酵素、例えはカルボキシ
ペプチダーゼＢとを併用して用いることにより、Ｓ　Ｔ
Ｉ活性を永久的に破壊することができる。 発明の構成および目的 即ち、本発明は、ＤＩＴ、を提供することにより、大豆
を食物として分利用する際の、大豆トリプシン阻害物質
（ＳＴｉ）＋こよるその減損の問題を解決するものであ
る。 発明の要約 本発明は、大豆が主成分である食料に含まれている大豆
トリプシン阻害物質（Ｓ　’ｒｌ　）によるトリプシン
阻害作用を克服する方法を提供するものである。本発明
の方法は、該食料を、その製造工程中に、あるいは該工
程に引き続いて、有効量のヒトデ−トリプシン−１（旧
Ｔ□）および有効：１１の補助的なタンパク質分解酵素
で処理する方法である。 また本発明は、１）　Ｉ　”Ｉ”□および、所望に、１
；り添加される補助的なタンパク処分、解酵素を含有す
るノｉ、’ｕ当な組成物を、それが消化管を通過する間
にＳ゛口と消化された食物とが反応するように、該１）
　ｌ　Ｔ。 を胃内での消化から防御すると共に小＋＋ＸＳ目＜＋Ｓ
で放出する様なカプセル剤に調製し、対象動物に１ｊえ
る方法に関するものである（常貼カルボキンペプチダー
ゼＢを消化酵素として利用している適当な動物の場合に
は、Ｉ）ＩＴ□を単独投与しでもよい。 本発明は、この目的１ことって適当である方θ、並ひに
組成物を提供することを目指すものである１、）ＤＩＴ
、を使用する方法（必要ならば、Ｊ　ｔｒｉｌ＋の修飾
形Ｓ　Ｔ　ｌと、トリプシンと結合しＣコンプレックス
を形成しているＳＴｌとのｉｌＺ衝状態の中から遊離の
修飾形Ｓ　Ｔ　Ｉを除去するのに適したタンパク質分解
酵素と一緒に使用する）は、Ｓ　ｌ’　Ｉの不活化に熱
を用いる方法よりも経済的であり、より効果的である。 更にこの方法は、熱処理した大豆製品に認められるビタ
ミンや不安定な栄養成分の減少の如き副作用（不利益な
反応）を伴なわないという点でも、好都合である。 従って、本発明の１つの１４的は、大豆を主成分とする
食料におけるＳ　Ｔ　ｌ　１ｆｌＪ害を除去するための
、簡便、有効、かつ経済的な方法を提供することにある
。 また、本発明の他の１−１的は、対象動物に直接与えら
れる食物に、本発明の阻害物質不活化法を適用すること
により、該動物を、摂取した大豆トリプシン阻害物質か
ら保護することにもある。 詳しい記述 Ａ、定義 本明細書において、「人ｉ、７．トリプシン阻害物質（
ＳＴＩ）Ｊとは、トリプシンの活性部位に結合してその
タンパク質分解作用を駆出することか知られている、大
豆内に見出されるペプチドを指す。 ［切断（Ｃ１ｉｐｐｅｄ　）　Ｓ’ｒｌ　Ｊについては
以下に定義する。 ［ヒトデ−トリプシン−１Ｊ　（１，）Ｈ′】）は、Ｓ
Ｔｌのトリプシン阻害部位を加水分解し、この加水分解
されたＳ　Ｔ　１を迅速に放出することのてきるトリプ
シン製剤を指す。更に詳しく１１えは、その阻害部位は
、チロシン、アルギニンお、にび・ｒソロイシンの３個
のアミノ酸配列（大々、ｓ１°１鎖のアミノ酸番号６２
．６３および６４１こ相当する）で構成されている。Ｉ
）　ｌ−１−１はこのアルキニ：／　ｉ！Ｂ分とインロ
イシン部分との間にタンパクう）解的に作用し、この位
置で５１゛１を切り開き、１１ＪＪ　１．ｌ］ｒ　Ｓ’
ｒ　Ｉ　Ｊ　マタｉ；を修飾形Ｓ　Ｔ１　”：；：与エ
ル、　コ（／、）　ｌ；ＩＪＨｉｉ　ＳＴｌはトリプシ
ンに結合したままで残り、結ｆ１シない状態のものと平
衡関係にある。 本明細書で「ヒトデ−トリプシン−１１またＩｔｒｌ）
ＩＴ、」という語句は、伝統的ｌｓ供給諒である、いわ
ゆるヒトデ（１）ｅｒｍａｓｔｅｒｉａｓ　ｉ１１山ｒ
ｉｃａｔａ　）　かう得たトリプシンを指すが、この’
ｌ’；ｉ定の供給源に限定されるものではない。むしろ
、ヒトデの他の神類のものや、上記の望ましい性質を持
った酵素を与える様なあらゆる供給源−等の拝ｃ′：Ｃ
の４、のノ１）Ｃ。 得られるトリプシンを指すものとする。 ｒ　ＤＩＴｘ　ＳＴＩ　コンプレックス」ハ、ｓ　′ｒ
　ｔが「切断」されているか否かに関係なく、Ｄ　Ｉ　
ＴｒとＳ　Ｔ　１とが連合した状態にあるものを指す。 ［補助的なタンパク質分解酵素］とは、Ｉ）　Ｉ　Ｔ１
によって切断されたＳ　Ｔｌを史に加水分解する能力を
持ち、そのことにより、非結合型の切断Ｓ　Ｔ　１を除
去し、結合型および非結合型の切断３１川の平衡関係を
移動させる様な酵素を指す。カルボキシペプチダーゼ１
３は、その様な補助的なタンパク質分解酵素の１つであ
る。これは市販品から人罫可能であって、切断Ｓ　Ｔ　
Ｉに残存するアルギニンとインロイシンの間の結合を特
異的に切り開く。 この結合を特異的に切り開くように作用するそれ以外の
タンパク質分解酵素（プロテアーゼ）、およびＳＴＩの
他の適当な位置のポリペプチド結合を開裂させる様なプ
ロテアーゼも、本発明の工程に有効に用いることができ
るであろう。 「大豆を主成分とする食料」は、ヒトまたは動物による
消費を目的とするものであって、成分の中に実質的な量
の大豆ミールまたはその他の入（）。 から導かれた物質を含有している食料を指す。それらの
うち、日常的にみられるものは、家畜用飼料、大豆油を
抽出した（またはまだ抽出しＣいない）大豆ミールを単
に粉砕またはＩｊＪり刻んで調製された食品補充物質、
仔牛のミルク浦充物質Ｊ−シて用いられる乳濁液、ミル
ク中のタンパク質（（対するアレルギーを有する幼児の
ためのベビーフード製品であり、その他の日常的には１
１に触れることのない多くの製品も含まれる。 １大豆ミール」とは、大豆油を抽出された、または抽出
されていない大豆原料であり、充分ｇｒ−４１゜械的に
処理されているが、さもなくは含イ１する大豆トリプシ
ン阻害物質を化学的な、あるいは（ｌｉ’＋曙：学的な
試薬で、処理した大豆原料を指す。人１、ノミールの「
乾燥重量」とは、それ自身に１１１来すどｌ　ｌ！ｎ！
潤物質は１含む１が、乳化または製造過程での溶媒を除
いたミール単独のＴｌＸｍ１を指す。 Ｂ、酵素の調製 ＤＩＴ１酵素は、それを含有していることが分つている
供給源、最も一般的にはヒトデ（１）ｅｒｔｎａｓ　−
Ｌｃｒｉａｓ　ｉｍｂｒｉｃａｔａ　）から、Ｅｓｔｅ
ｌｌおよびＬａｓｋｏｗ−ｓｋｉ　（前述）の方法に従
って既に単離されているか、または単離することができ
る。しかしながら、本発明の方法および組成物には、組
換えＩ）　Ｎ　Ａ技術をも含めたあらゆる調製方法で導
かれた該酵素の使用を包含するものとする。本明細書中
においては、この酵素は、適当な条件下で大豆トリプシ
ン阻害物質を開裂さぜ、放出さぜる能力に基いて定義さ
れている。この性質を有する全ての酵素は、その供給源
に係りな（本発明方法に含まれるものとする。 カルボキシペプチダーゼＩｓは、例えばＳｉｇｍａＩｎ
ｃ、等、多くの供給者から商業的に人手し得る。 この酵素はどの様にして調製されてぃ−Ｃも、本発明に
適する。」１記の如く、Ｓ　’ｌ’　Ｉのアミノ酸結合
を切り開く様に触媒的に作用することによって、それを
Ｉ）　Ｉ　Ｔｌ−Ｓ　Ｔ　Ｉ　コンプレックスがら、再
びソノコンプレックスを形成することができない様な形
で放出せしめるものであれば、その他の適当な、補助的
なタンパク質分解酵素も本発明の方法および組成物に適
用することができる。 本発明におりる大豆を主成分とする食料の処理方法は、
大豆トリプシン阻害物質を、インヒト［」の反応混合物
中で、ＤＩＴおよび補助的１．（タンパク質分解酵素と
直接、接触させることである。１）１、Ｔｌ　および補
助的なタンパク質分解酵素か機能するためには、大豆に
含まれているＳ　’Ｉ’　Ｉをこれらの酵素と直接、化
学的に接触させねｉ；Ｉ：　ｆ、；らず、しかも反応に
適した媒体を与えるために、最少１１１の水か存在して
いｆ、ｆければならない。乾燥大豆を用いる場合には、
豆を破砕してＳ　ｌ’　Ｉを露出させ、所望により更に
機械的な処置を施した後、酵素と、処理しようとする基
質とを有効に接触させるよう充分な水または他の水性・
媒質を加える必要かある。 このような成果をあげるためには、人σの乾だｖす中量
に対し、最少限度、約１０％の水が必要であると思われ
る（前に述べた様に、大豆または人＜／：　ミールの「
乾燥重量」とは、なんら加湿またＣＪ溶媒添加のなされ
ていない大豆の重量を指す。しかしながら、正常な状態
で大豆中に存在している水は含むものとする。）。 大豆の処理法としてよ＜ｊｊなわれている様に、豆のさ
やを除いた後、大豆油を得るためにヘキサンで抽出し、
大豆ミールを調製する。この工程は、抽出操作にインプ
ロパ／−ルを用いる方法に改良することができ、この様
にして、より極性の高い媒質を用いることによって、そ
うでない場合に比べて添加する水の要求用、を少なくす
ることかできる。かくして本発明においては、従来の抽
出法に代えてイソプロパツールを用いることにより、添
加する水の量を減することができる。 本発明を適用する場合には、対象動物への供給に際して
大豆ミールを懸澗液として用いることが多い。この場合
、その製剤には酵素活性の媒体として充分な量の水が含
まれていることになる。 上記の様に、本発明方法の実施に際しては、大豆トリプ
シン阻害物質が、既述した酵素類にさらされ、有効に作
用を受けるよう、充分な量の水を含む大豆、ミール製剤
を用いる。この製剤にタンパク分解的に有効な量のＤＩ
Ｔ□（大豆ミールの１乾燥重量Ｊｉｏ（ｌ当りＤ　Ｉ　
Ｔ□は１〜１００ノダの範囲内である）を加える。大豆
ミール１００　ｇにつき、Ｉ月′Ｆ□か約５〜２０　Ｊ
ｌｆｌの４（ｏ囲であることが好ましい。補助的なタン
パク質分解酵素としてカルボキシペプチダーゼＢを用い
る場合にＩｔ、そのタンパク質分解的な有効量は、大豆
ミール１．００　！／に基いてＩ）　Ｖｒｌの場合に示
したものと同・１１りの；１・ｌＬ範囲内ある。カルボ
キシペプチダーゼ１３の場合の好ましい使用量の範囲は
それよりゃや＋：：：ｒ　＜−人１、ノ゛ミール１００
ｇ当り約ｌ　Ｑ　Ｍ９から約！５０　ｍＶＱ　アル。 その他の補助的なタンパク性分ｊＱゲ酵素も使用１ｙ　
（’−＋るか、勿論、その有効かつ好適なｒｉｉは、選
択した酵素の特異的な活性に従って変動する。次いでこ
の混合物を約１５分〜１２時間（好ましくは：３〜４時
間程度）、約１０℃〜４０’Ｃの温度（好ましくは２５
℃程度）でインキュベーションする。Ｉ）１１を約６〜
１０の間に保つ必要があり、８．２に接近した値である
ことが好ましい。補助酵素としでカルボキシペプチダー
ゼＢ以外のものが選択された時には、このｐＨ域からや
や変動した値が好ましいかもしれない。ｐＨは、適当な
緩衝剤、例えは好適な例としてトリス（Ｔｒｉｓ　）を
加えることによって調節することができる。 この様にして処理された製品は、添加したＩ）　Ｉ丁□
および補助的な酵素が該製品になんら有害な作用を付与
することがないばかりか、それを摂取する動物に健康障
害をもたらすこともないので、飼料の中に普通に用いる
ことができる。 １〕１本発明のインビボによる方法 また本発明は、既述した反応システムをインビボで行な
って、Ｓ　Ｔ　Ｉが対象動物の消化営を通過する際にそ
れを不活化せしめる方法並ひにこの方法に用いるのに適
した組成物に関するものである。 適当な対象動物にはヒト、通常補充食品として大豆製品
が与えられるヒトの幼児も含まれる。勿論、この物が成
人にとっては不適当であるとする理由は何もない。もつ
とも、成人が重要な食料１１１４ｊとして、処置されて
いない大豆に依存していない場合は、充分な別の消化法
を利用することか−Ｃきる訳であるが。現在のところ、
食物ｊｌｌｌｊ　１人１、人に依存している家畜に適用
することに本発明の入きな経済的意義がある。既に指摘
した様ｌこ、特に、土な消化酵素としてトリプシンに依
存しＣいるタイプの家畜類、例えば、豚、鶏、およＯ・
仔牛等がＪ内当な対象である。勿論、本発明か、あらゆ
る同前用の、または野性の鳥類に与えるｍｌの強化θミ
とは無関係である、とする理論的ｔ、１根拠は何もない
のである。 本発明のこの様な実施態様では、１月′＋１・伎晶また
はそれを含有する組成物は、対象動物に直接与えられる
。その動物が、自身の消化管内で補助的なタンパク質分
解酵素を利用できるものであれは（多くの動物がそうで
あるが）、この酵素を製品中に含有させる必要はない。 例えは、ヒトの幼児、並びに牛の赤ん坊は、ＤＩＴ□製
品を単独投−Ｉｊシた場合に、該製品を有効ならしめる
に充分１．４’、　１１−ｉ、のカルボキシペプチダー
ゼ１３を消化管内に持１、）でいる。 対象動物がこの様な機能を持たない場合には、捕助酵素
、好ましくはカルボキシペプチダーゼＢ１を組成物中に
加えねばならない。 明らかにＤＩＴよ、および所望により補助的なタンパク
質分解酵素を含有する製剤、または組成物は、活性成分
が胃内を通り過きて、その実質的な量が小腸内に入る様
な形に調製されていなければならない。勿論、その部位
は、膵臓から分泌されたトリプシンが消化管内に入る位
置である。従って」１記の酵素は、酸に鈍感であり、塩
基に弱い、適当な被膜で包むか、または、該製剤が小腸
に入ったときに有効な量が残存している様、徐々に溶解
する形に製剤化する必要がある。 その様な投与剤形の調製方法は公知であるか、あるいは
製薬業に携わる技術者にとっては容易にわかることであ
る。：参１１〈１例、ＲｃｍｌｎｇＬｏｕ’　ｓ１’ｂ
ａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ　Ｓｃｉｅｎｃｅｓ１Ｍａｃ
ｋ出版社、１ｉａｓＬｏｎ。 Ｐｅｎｎ５ｙｌｖａｎｉａ、１５版、１９７５゜いずれ
にしても、投与される組成物または製剤は、本明細書中
に述べた目的を達成するのに有効な１社の活性な化合物
（群）を適当な製薬用賦形剤と共に含イｊしている。 経口投与用に通常用いられる賦形、１（１１１こは、例
えば、医薬品用のマンニット、ラクトース、ステアリン
酸マグネシウム、サッカリンナトリウム、クルク、セル
ロース、炭酸マグネジウド等が含Ｊ：れる。この場合、
その様な組成物は、錠剤、九剤、更に好ましくはカプセ
ル剤の如く、前述した、胃内で比較的影響を受けずに通
り過きてしようことができる様な剤形である。その様を
組成物は、活性成分（または、補助酵素を加えている場
りには、活性成分類）を、約５〜９５％、！Ｉ丁ましく
は２５〜７０％含有することができる。 好ましくないことは明らかであるか、ｔｌｉ殊な場合に
はこの組成物を非経口投与することもてきる。 この場合、活性成分は、大豆ミールか消化管を通過する
際、小腸内に存在していることが必要−（丁ある。 投与時期に関して言えば、この組成物は、１１（Ｉ述の
効果を奏し得るようｔと投与すべきである。最も実用的
な投与法は、大豆ミールを含有する飼料を摂取する前、
約４時間以内に、動物にこの組成物を服用させる方法で
ある。勿論、この時期は組成物の剤形、および対象動物
の消化管内の状況の厳しさ、に従って変動する。しかし
ながら、多くの場合を見積って、食１１の４時間前、と
いう時は理屈に合っているように思われる。 本発明組成物の投与１＋ｔ　Ｇｉ、勿論、摂取する大豆
ミール中に含まれている５’を川のｌｊｉ’、、並びに
組成物中の活性成分の比率（％）に基いて決定される。 活性成分ＤＩ’ｒ工の量を是にすれば、摂取した大ｊ、
−Ｌミールの乾燥重量１ｇに対して１圧翳のｌｊｌは１
０−５〜１Ｏ−２Ｅｌの範囲内であることが好適である
（たたし、供給される飼料の１１″Ｌは、実際に摂取さ
れる飼料の量に等しくなる様に計画されていると仮定し
た。経験のある家畜飼育者は、この様な見積りをかなり
正確に行なうことができる。ヒトの場合には、そうはい
かないかもしれないか、食欲の減少などに応じて適宜調
整することができる。）。 好ましい投与量は、与えられた大豆ミール１００ｇに対
し、Ｄ　Ｉ　Ｔｉ約５　ｍｇ〜１００１ノｒｇの範囲内
である。 ひに用いた補助酵素の種類にかかつている。用いられる
補助酵素がカルボキシペプチダーゼ１〜であって、それ
を外部から与える場合には、その必要かつ好適な量は、
Ｄ　Ｉ　１”１に関して安来されるＩＩ；とほぼ同様で
ある。 Ｅ、実施例 以下に示す実施例は本発明を例示するものであって、本
発明を限定するものではない、。 実施例１　大豆ミール中のＳ’ＦＩの不活化大豆ミール
の！ケ澗液を次の様にして調製する：乾燥大豆約５ｇを
Ｗａｒｉｎｇブレンダー内で５分間高速処理して乾燥ミ
ールを得る。各試料を？１するために、この乾燥ミール
２５　ｙｒｇを反応混合物中に懸濁する。この反応混合
物の全量は２２５μｅであり、２５μダのＩ）ＩＴ”１
とカルボキシペプチダーゼｌ５８０μｇを含有し、０．
０５Ｍ＋−リスによりｐＨ８，２に調節されている。こ
の反応混合物を２５℃でインキュベートした。０．４、
および１７．５１１！１１’ｆ−ｆＪ簡に２０μｅの試
料をとり、Ｄ　Ｉ　Ｔ０活性を破壊するために１．５Ｍ
塩酸で２５分間処理し、１泪を中性に調節して希釈し、
最終容量を２＋ＩＩｅとした後、以下に示す如＜　Ｓ　
Ｔ　Ｉを分析した： ３．６、および９ｍｌの試料をとり、その各々を、０．
０５Ｍトリス（ｐｔｌ　８．２　）、Ｑ、　０２　Ｍ　
ＣａＣ，５２、トリプシン８３３ピコモルを含有するト
リプシン溶液１０μｌ、およびトリプシン基質であるＢ
ＡＰＡを１ｍｅ中に４３．５　ｍｌ’ｊの割合で含有す
るＩ）ＭＳＯ溶液１０μｇ、を含む反応混合物１　ｍｌ
に加えた。トリプシン阻害活性は、Ｅｒｌａｎｇｅｒら
、Ａ　ｒｃｈ　、　Ｉｓ　ｉ　ｏｃｈｃｍ　、Ｂ　１ｏ
ｐｈｙｓ。 ９５：２７１（１９６１）の方法に従い、４１０　ｎｍ
におけるトリプシン活性を監硯することによって調べた
。４時間のインキュベーションで８５％のＳＴｌ活性が
除去されており、１７．５時間のインキュベーションで
は当初存在していた阻害活性の９３％が消失しているこ
とがわかった。残る７％のトリプシン阻害は、実施例２
（上記）のゲルアッセイ法の結果に示されている様に、
残存Ｓ　Ｔｌ活性によるよりも、むしろ他のタンパク質
による競合的な阻害作用に起因すると思われる。大豆２
５　ｍｇの代りに純化５Ｔ１１，５μダを用いた対照試
料を同時に処理したところ、４時間後に阻害活性の破壊
率１００幅を示した。 上記のＳＴ１分析実験におけるトリプシン活性は、以下
に述べる様に、アッセイ中のトリプシンによるものであ
って、前の塩酸処理で不活化されずに残存しているＤＩ
Ｔｌによるものでないことかわかった。即ち、処理され
た大豆ミールのＪ、ｌ　Ｋｌみ中の残存１）ＩＴ□活性
を測定したところ、この塩酸処理によって９８，５％か
ら９９．５％の間の活性が破壊されていること、更に、
この残存活性は、アッセイでのトリプシン活性の最高１
％を占めるにすきないことがわかった。その上、添加し
た１）１′ｒ工の不活化に用いたその条件下で大豆ミー
ル（ＤＩＴｌで処理していないもの）を塩酸処理したと
ころ、この処理はＳＴｌの含有量にはなんら影ｐ１１し
ない、ということもわかった。 実施例２　補助酵素によって切り開かれた形の、および
切り開かれていない形の切断Ｓ　Ｔｌの分布状態 実施例１と同様にして粉砕した大豆ミール２５ｔｕｇを
含有する標品を調製し、カルボキシペプチダーゼＢＩＯ
μｇと０．５　Ｍ　＋−リス（１）ＩＩ　Ｂ、２　）を
含む総容量２６０μ召の混合物中で、２５℃、においで
インキュベートした。同じ２つの火報試料（一方はＤＩ
Ｔｌを１．２５μｇ含有し、他方はその倍はを含有して
いる）について操作した。定期的に試料を採取し、ＳＴ
ｌの状態を調べるために、Ｌｕｔｈｙらの方法（Ｊ、Ｂ
ｉｏｌ、　Ｃｂｅｍ、、２４８：１７６０（１９７３）
）に従い、ゲル電気泳動法による分析に付した。この方
法は電荷に基いて分離する方法なので、天然のＳ’ｒｌ
（Ｉ）、切断すした５１１（１）、オヨヒリＪ断されか
つ補助酵素で切り開かれたＳ　Ｔ　Ｉ　（ｌ　Ｇ）の存
在を調査することができる。この実験の結果を表１に示
す。表１に示した結果から明らかな様に、まず切断され
たｓ　’ｒ　ｉ　（１’）は、次第に１７Ｃ形に移行す
る。 表１ 実施例３　不活化におけるカルボキシペプチダーゼＢ活
性の効果 実施例１で述べた方法と同様の工程において、Ｅ　ｒ　
ｌ　ａｎｇｅ　ｒの方法に従ってトリプシン活性を分析
することにより、４時間後のＳ　Ｔ　Ｉ活性の減少ＩＪ
ｉを反応混合物中に存在するカルボキシペプチダーゼＢ
の機能を示すものとして分析した。更に、ゲル電気泳動
法でＳＴＩ、Ｉ”、およびｌ’ｃ　Ｊｅｔ：をも分析し
た。各試料は、０．０５Ｍトリス（ｐＨ８，２）中に粉
砕大豆２５ダとＤＩＴ□３，１３μｇを含有させ、２６
０８ｇに調節されている。インキュベーションは２５℃
で行なった。結果を表２に示す。 表２ 上記の結果が示すように、阻害除去作用を発揮するには
、カルボキシペプチダーゼ１３、あるいはその他の補助
的なタンパク質分解酵素が存在しなければならない。Ｓ
’ｒＩ−１）ＩＴ、コンプレックスが解離するにはカル
ボキシペプチダーゼＢがタイミングよく必要であり、Ｉ
）　Ｉ　Ｔ、単独使用は５−１１の除去に有効でない。 特許出願人　ジエネンテク、インコーポレイテッド代理
人　弁理士肖山葆（Ｉ勤）１名）

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １、大豆を主成分とする食品中に含まれる大豆トリプシ
   ン阻害物質によるトリプシン阻害を克服する方法であっ
   て、該食品に使用される大豆ミールを、タンパク質分解
   酵素として有効な量のヒトデ−トリプシン１およびタン
   パク質分解酵素として有効な量の補助的なタンパク質分
   解酵素で処理する方法。 ２、補助的なタンパク質分解酵素がカルボキシペプチダ
   ーゼＢである第１項に記載の方法。 ３、大豆を主成分とする食品が大豆ミール）ｖ副液であ
   る第１項に記載の方法。 ４、大豆を主成分とする食品が家畜用銅＄１として加工
   された大豆ミール製剤である第１項に記載の方法。 ５、大豆ミールに少なくとも１０％の水が添加されてい
   る第１項に記載の方法。 ６、乾燥重量で表わした１）「ｒ□の大豆ミールに対す
   る割合か１０−５〜１０−３の範囲内にある第１項に記
   載の方法。 ７、乾燥重量で表わしたカルボキシペプチダーゼＢの大
   豆ミールに対する割合が１０−５〜１０”の範囲内にあ
   る第２項に記載の方法。 ８、乾燥重量で表わしたカルボキンパブ−ュータ−（！
   Ｂの大豆ミールに対する割合か１０−５〜ｌ　Ｏ−；３
   の（１・１！囲内である第６項に記載の方法。 ９、動物の体内での大豆トリプシン阻害物゛ζ′１によ
   るトリプシン阻害を克服する方法“Ｃあって、該動物に
   、タンパク質分解酵素としてイＪ効ｆ、、　ｊｉ：の旧
   ′Ｉ゛１、またはタンパク質分解酵素として有効な：ｌ
   ）のＩ）　Ｆｌｉを含有する組成物を、胃内の消化条件
   に１ノ“しし得る投与剤形にして経口投与することから
   なる方法３．１０、該組成物が、タンパク質分解酵素と
   して有効な量の補助的なタンパク質分解酵素をも含有し
   ている第９項に記載の方法。 １１、補助的なタンパク質分解酵素がカルボキンペプチ
   ダーゼＢである第１０項に記載の方υ嘉１２、　ＤＩＴ
   工またはＤ　Ｉ　’ｌ−１含有組成物を、該動物が大豆
   ミールを含有する飼料を摂取する削、約４時間以内に投
   与することからなる第９項に記載の方法。 １３、Ｉ）ＩＴ□またはＩ）　ｌ　’ｌ’、含有組成物
   を、該動物が大豆ミールを含有する飼料を摂取する前、
   約４時間以内に投与することからなる第１０項に記載の
   方法。 １４、　ＤＩＴ□またはＤ　Ｉ　’ｒ□含有組成物を、
   該動物が大豆ミールを含有する飼料を摂取する前、約４
   時間以内に投与することからなる第１１項に記載の方法
   。 １５．１月゛ｒ□の投与量が、摂取した人ｑミール含有
   飼料に対し、乾燥重量比で約１０−５〜ＪＯ−２である
   第１２項に記載の方法。 １６、１）ＩＴ、の投与量が、摂取した大豆ミール含有
   飼料に対し、乾燥重量比で約１０−５〜ｌ０−２である
   第１２項に記載の方法。 １７、　ＤＩＴ□の投与量が、摂取した大豆ミール含有
   飼料に対し、乾燥重量比で約１０−５〜１０−２である
   第１４項に記載の方法。 １８、カルボキシペプチダーゼ１λの投与；、；が、摂
   取した大豆ミール含有飼料に対し、１：１ｚ燥中１１１
   比で約１０−５〜１０−２である第１４項に記載の方法
   。 １９、カルボキシペプチダーゼ１１の投、ｊｊ、　ｂｉ
   か、摂取した大豆ミール含有飼料に対し、乾燥中１．Ｉ
   比で約１０−５〜１０−２である第１７項に記載の方法
   。 ２０、動物の消化管内で、ＳＴ１を不活化する能力を付
   与することのできる組成物であり、タンパク質分解酵素
   として有効な量の旧゛１゛１を、薬学的に許容し得る賦
   形剤との混合物の形で含有する組成物。 ２１、タンパク質分解酵素として有効な１１；の補助的
   なタンパク質分解酵素をも含有する第２０」ｆＩｌこ記
   載の組成物。 ２２、補助的なタンパク質分解酵素がノＪルボキシペプ
   チダーゼＢである第２１項に記載の組成物。 ２３、組成物中（７）　ＤＩＴ、　ノｉカｆｉｊ、Ｉａ
   比テ約５〜９５％である第２０項に記載の組成物。 ２４、　ｌｔＲ成物中のＤＩＴ、とカルボキシペプチダ
   ーゼＩｓとの和が、重量比で約５〜９５％である第２２
   項に記載の組成物。