JPS60121000A - 二酸化炭素の赤外線分析による微生物の同定法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 ＋発明は一般に微生物の同定に関するものである。さら
に詳しくは、複数の基質における増殖で牛する未知微生
物の二酸化炭素発生特性を同じ複数の基質における増殖
で住する既知微生’ｍの特性３！比・１・文することに
より未知の微生物を同定することに関する。

生物同定の一般的方法の中には通常検査技術が含まれる
。一般に、この方法は検体を適当な増殖培地に接種し、
固形寒天培地に微生物を塗准しうるような濃度になるま
でこの検体中に存在する微生（吻を生育させることから
なる。次いて微生・吻を比較的純粋な濃厚な検体として
回収する。次いで微生物を顕微鏡下の観察により集落的
形態とダラム反応にしたがって同定する。培養技術は時
間がかかり全く完全な方法とは言えないことがしばしば
ある。微生物同定のためによ９〜層迅速で完全な方法が
必要とされる。

未知９庄物の同定のために複数の基質から生ずる標準微
生物の特性を描きこｎを使用することは知られている。

臨床検体から細菌を同定する商業的万代Ｑ主、Ｂｅｃｔ
ｏｎ、　Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ　ａｎｄ　Ｃｏｒｎｐａｎ
ｙのＢＢ　Ｌ　Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ　Ｓｙｓｔｅ
ｍ部から商品名５ＣＥＰＴＯＲとして手に入れることが
できる。この方式を用いるには、パネルの分離さ扛たく
ぼみにある複数の増殖基質のそれぞれに未知の検体全接
種する。代謝活動たとえば炭水化物の１亥化また九・１
アミノ酸の脱アミン化もしくは脱カルボキシル化が行な
われると、微生物が基質を利用している当該くほろ、に
おいて色が便化するという結果になる。未知微生物の代
謝活動の特性を様々な既知微４１：、物の特性と比１咬
することにより同定を行なう。

Ｑ　＋４でラベルした基質の代謝を利用して放射性ラベ
ル付き二酸化炭素ヲ竜出するという別の微生物同定方式
が、５ｃｈｒｏｔの米国特許第３，９４６゜４９６号お
よび同第４，０５７，４７　Ｑ号ζこ記載されている。

この５ｃｈｒｏｔ法においては生じた１４ＣＯ２を集め
、核計測手段（ｎｕｃｌｅａｒ　ｃｏｕｎｔｉｎｇ　ｍ
ｅａ−ｎｓ）で分析して放射性呼吸測定グラフを構成す
る。

、”Ｅｃｌｌｒｏｔの特許に記載されたこの方法は高価
な放射性ラベル付き基質と核計測装置を必要とする。

さらに、検出を発展させデータを評価するに十分な時間
各基質から発生する＋４ＣＱを計測する必要がある。

市販の食品における微生物汚染を測定する手段としてヘ
ットスペースガスにおけるＣ　Ｑ２の赤外線Ｆｉ　ｌｌ
−１がＣ、Ｉ−Ｊ　、　Ｔｈｒｅ　ｌｋｅ　ｌｄ　ｌこ
、１ニジ記載さレテイル（Ｊ、ｏｆ　Ｆｏｏｄ　５ｃｉ
ｅｎｃｅ、４７．１２２５（１９８２））。しかしなが
らこの方法は検出について扱っているだけで同定に関す
るものでは々（）。

すなわち、微生物同定のための迅速な手段を提供するの
が本発明の最も重要な目的である。本発明の別の目的は
、放射性ラベル付き基質に依存することのない迅速な微
生物同定のだめの手段を提供することである。さらに本
発明の別の目的は、反応結果を分類するだめの化学標識
剤または他の添加された指示薬剤に依存することのない
微生物同定方式を提供するものである。さらに本発明の
別の目的は、反応結果を肉眼で判断する除イ１在する不
一致を除くように、自動検出手段を細しやすい方法を提
供するものである。

本発明は検体たとえば血液、尿、を髄液、水等における
微生物の同定のだめの装置および方法を提供するもので
ある。本発明は複数の基質に未知微生物の検体を接種す
ることからなる。基質は様々に異なった炭素源たとえば
炭水化物およびアミノ酸ならびに微生物生長に必要な他
の成分を含む。

各々の基質は特定の微生物により代謝されうる。

接種された基質は、いくつかの炭素源を代謝分解して二
酸化炭素を産生しうるに十分なように予め決められた時
間培養される。微生物によるも炭素源の二酸化炭素への
代謝発生は、検体中に存在するいずれかの微生物の代謝
により生ずるガスを赤外線分析することにより測定され
る。二酸化炭素の検出は、炭素源代謝の陽性指標とみな
される。

同様に、赤外線分析により検出しうる量の二酸化炭素全
未知微生物が産出し得ないことは、特定炭素源の代謝の
陰性指標とみなされる。未知有機体の炭酸ガス発生特性
は、複数の炭素源を使用して得られる陽性および陰性代
謝結果を調べることにより得られる。このようにして得
られた特性を公知微生物から借られる特性と比較する。

１つの既知微生物の特性と未知微生物の特性との相応関
係にエリ未知向生物を同定する。

杢ツ耐す」の方法に、Ｊ：υ既知微生物について描かれ
た特性は同じ有機体について他の方法で描かれた特性と
は異なることがある。他の方法は、色の変化により陽性
反応を表示するために検体中に存在する酸−塩基指示薬
をオリ用する。これらの方法にお〜・では、発酵反応は
酸が生成しそれに続いて７）Ｈ値が下が９陽性を示すこ
とにより検知され、一方脱カルボキシル化反応はｐＨ値
が上昇することにより検知される。二酸化炭素はこｎら
のまたは同様の代謝反応の結果として生じうることもあ
るしまたけ生じないこともある。

本発明方法は、複数の異なったそして分離した炭素源用
の容器、名答器に未知微生物の検体を接種するだめの手
段、接種さ乍−だ容器を正常な代謝過程発生を促す状況
下に置く手段、および炭素源の代謝の結果として生成す
る二酸化炭素ガスを分析して谷特定増殖培地で代謝が生
ずるかどうかを測定するだめの赤外線手段とを備えた装
置において行なわれる。

第１図は本発明の原理を示す装置ケ衣わす。

第２図は二酸化炭素の赤外吸収スペクトルおよび２３０
０〜２４００ｃｍ−’間の吸収帯を宍わす。

第３図、第４図および第５図は、各々ポリメチルペンテ
ン、硼珪酸ガラスおよびソーダ石灰ガラス容器について
の興味ある区域における二酸化炭素の赤外吸収スペクト
ルを表わす。

第６図および第７図は、様々なレベルの二酸化炭素を含
むポリメチルペノテンプラスチックおよび硼珪酸ガラス
容器の赤外線走査を表わす。

第８図および第９図は様々な増殖培地における微生物の
代謝による二酸化炭素の産生を示す。

第１０図および第１１図は、様々な炭素源の微生物代謝
による陽性および陰性の二酸化炭素産生ケ示す。

本発明の実施に適する装置は第１図において数字１１に
より示さする。本発明の装置１１に２いて、増殖培地に
おける微生物の代謝により産生するＣＯ２の有無は、赤
外線ビームを容器の側壁に通過させ容器内にて代謝によ
シ産出するガスの赤外吸収を検出することにより調べら
れる。容器はバイ゛アルまたは他のいかなる単管状もし
くは多管状容器でもよい。

分析されるべき検体、たとえば冊数、床等の患者の検体
または様々な発生源（水、土壌、食物、患者の検体等）
から培地で生長を−だ有機体を、微生物の代謝において
ＣＯ２−ｑ産生ずるのに適する増殖培地と一緒に滅菌容
器１３に入れる。その後この検体を容器中で培養する。

適当な間隔ごとに、容器を赤外線発生装置１５と赤外線
検知器１７とを備えた赤外線６１１１足装置に移動させ
る。容器のヘッドスペース（上部望間）における赤外吸
収を検知し、光信号２１とコンピュータプリントアウト
２３との同時表示を備えたメータ１９に表示する。

容器１３は誘導路２５に配置される。この誘導路は線状
、環状または曲折した形状のものでよく、赤外線発生装
置と赤外線検知器との間に容器１３を容易に位置せしめ
るだめのものである。第２の培養容器１３Ａは、赤外線
発生装置１５と赤外線検知器１７による検査を待つ位置
にて仮想輪郭腺で示′されている。モータ２７は訪得路
２５を作動させるために設けられている。シーケンス１
ｉｉｌｌ　伺ｌ器２９は、モータ２７、赤外線発生装置
１５″お上γノ・メータ表示器１９が正しく連続的に作
動するために使用される。赤外線発生装置が作動する間
、円筒状容器を回転させて不均一な側壁厚さを補正する
ため砂手段を設けることが望寸しいことがしばしはある
。唸たさらに、赤外線ビームの中心に容器を合わせるだ
めの手段を設けることが望ましいことがある。

培養容器１３および１３Ａはガラス製またはプラスチツ
タ製容器たとえばバイアルでよく、ゴム表隔壁を備え、
アルミ製タロージャー（蓋）によりソールされているが
、または分離はしているが隣接する成形プラスチツタカ
ートリッジの連続くほみ捷たは線形状の盆でもよい。所
望するならば、必要なガス分析の性能ケ満足する他の材
質および立体形状が使用可能である。容器は約１　ｒｒ
ｔ〜約２００　ｔｎｅ、好筐しくは約３０ｔｎｅ〜約１
５０ｍ１の全容号を有するが、全容量のうち培養基およ
び供試検体により好ましくは２〜１００１ｎｅが占めら
れている。血液もしくは尿または他の検体の容量はたと
えば０．１〜１０フｎｅである。

容器は、増殖培地の代謝からのガス状生成物を検出する
のに適するバント幅に、少なくとも１％の透過率をもた
らす°′ウィンドウ″′を有していなければならない。

二酸化炭素は第２図に示すように２３４９ｃｍ’に水蒸
気の干渉を受けない強い赤外吸収バンドを有する。この
吸収ハンドを用いる場合には容器の必要な透明ウィンド
ウは、約２３００　ｃｍ−’〜約２４００ＣＩｎ’の波
数ヲ吉む。二酸化炭素はまた６　７０　ｃｍ−’に低周
波吸収バンドヲ有し、これは本発明の実施において使用
されうる。

本発明の実施ζこおいである型のガラス各藩とある型の
プラスチック容器が有用であることが見出された。特に
、硼珪酸ガラス容器およびソーダ石灰ガラス容器が有用
であることかわかった。壕だ、ポリメチルペンテンプラ
スチックが二酸化炭素の吸収波長に透明な″ウィンドウ
″ケ有することも調べられた。他のガラスまたはプラス
チツタ材料もまた使用可能である。

赤外分光学の技術の専間尿は、４００ｃｍ’〜４０００
　ｃｒｎ−’の通常の赤外吸収軸回に２いて、ガラス−
またはプラスチックのいずれも赤外分光学用の検体含有
セルとして使用されるとは思わないことは理解されるべ
きである。ガラスは可視光を透過するけれども、二酸化
炭素分析に用いるよりほんのわずかに長い赤外線波長は
通さなくなる。プラスチックは有機材料であるが、通常
の範囲を通じて赤外吸収バントを有する。ポリメチルペ
ンテンが２３４９　ｃｍ−’と６００の〜１付近にこれ
ら吸収周波数のいずれにおいても二酸化炭素の分析がで
きるのに十分な透過率を有する透明な゛ウィンドウ″ヲ
示すことは鴬くべぎことである。

下記のいかなる理論によっても束縛されることを望むも
のではないが、二酸化炭素は有機分子の共有三重結合に
相肖する波長域で赤外線エネルギーを吸収するものと思
われる。三重結合は通常高分子材料では見られない。ポ
リメチルペンテンは共有二重結合を有する好ましい高分
子材料である。

本発明方法において容器として使用するために、筒分子
伺料は、通常のオートクレーブまたはガスもしくは放射
線滅菌法によるｅ、閑に劇えうるものでなければならな
い。ポリメチルペンテンは滅菌を行なうに適する温度に
耐えつると（・う点で適当である。

微生物を接種する増殖培地は、単一の炭素源と、塩、緩
衝成分、生長因子等を含む基礎培地とからなる。これに
代わり、培地の緩衝能力およびイオン強度が重要でない
場合および生長因子の増強が必要でない場合には、こ汀
らの成分１棟以上を培地から除いてもよい。本発明の”
ｒＶＭｖに際して使用可能な適当な基礎培地の例はＣｃ
ｔｒｂｏｎ　Ａｓ５１ｍ１ｌ−ａｔ　ｉｏｎ　Ｍｅｄｉ
ｕｍ　（以下ＣＡ　Ｍと略称する）、５ＣＥＰＴＯＲグ
ラム陰性ＭＩＣ−ＩＤ脱水培地（以下ＤＣＭと略称する
）、Ｅ、Ｃｏ１１基礎培地１、およびＬｅｄｂｅｔｔｅ
ｒ培地である。このような標準培地は次の文献に記載さ
れている：　Ｍａｎｕａｌ　ｏｆＣｌｉｎｉｃａｌ　Ｍ
ｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ　（第３版〕、Ａｒｎｅｒ−ｉ
ｃａｎ　５ｏｃｉｅｔ　ｖ　ｆｏｒ　Ｍｉｃｒｏｂｉｏ
ｌｏｇｙ　（１９８０年、Ｅ、Ｈ，Ｌｅｎｎｅｔｔ、ｅ
、　Ｅ、Ｈ，Ｓｐａｕｌｄｉｎｇ、　Ｊ、Ｐ。

Ｔｒｕａｎｔ著）　；　Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔｓ　ｉｎ
　Ｍｏ１ｅｃｕｌａｒＧｅｎｅｔｉｃｓ　（１９６８年
および１９７２年、Ｒ，Ｃ：Ｃ１ｏγｏｅｓおよびＷ、
　Ｈａｖｅｓ　”Ｉ、ＢＬａｃｋｎｅｌｌ　５ｃｉ−ｅ
ｎｔｉｆｉｃ　Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎｓ）　：　Ｐ、
Ｅ、Ｇｏｌ、ｄｇｎｂａｕｍおよびＧ、Ａ、ｌ１ａ１１
．　Ｊ、　Ｂａｃｔｅｒｉａｌ、　１４０、ｐ。

４５９ｏ基礎培地を調製し心安な炭素源を加えてから容
器へ施こしてもよいし、あるいは炭素源が液状、ゲル状
、凍結状、溶離板状捷たは他の脱水形状で容器またはカ
ートリッジのくぼみに存在さ一眠基礎培地全これに加え
るようにしてもよい。

使用されうる炭素源の中には次のようなものがある：炭
水化物たとえばグルコース、ラタトース、アラビノース
、ラフィノース、ンユークロース、ラムノース、トレ・
・ロース、等、炭水化物訪導体たとえばサリシン；酸性
糖仙：原木；ポリオールたとえばグリセロール、マニト
ール、イノシトーノペ　ノルビトーノペズルントー／ペ
アトニ）−／べ等、タレブス回路の中間体酸たとえばク
エン酸；アミノ酸たとえばアルギニン、クリシン、アラ
ニン、リジン、オルニチン、チロシン、スレオニン、ヒ
スチジン、ロイン／、等：低分子量ペプチド：ゾリンお
よびピリミジン塩基、および脱カルボキシル化を受けて
二酸化炭素を生じうる低分子量化合物たとえば脂肪酸。

炭素源は十分な鼠存在して代謝においてただちに検知し
つる鼠の二酸化炭素をもたらすものでなけれはいけない
。増夕１０培地に炭素源が重量に基づいて約２％〜約１
０％隨何されているのが好ましい。

容器中の炭素源含有増殖培地に微生物を含む検体少量を
接種する。接種は手作業により゛よたは自動的手段によ
シ行なわれ、複数の容器または１個の共通容器に複数の
小部屋全形成する。

接種工程後、微生物および炭素源に応じて約り０℃〜約
４５℃の温度で約１時間〜約２４時間微生物を培養する
が好ましくは約２時間〜約と３時間である。２０℃以下
の温度で最適生長する微生物もあるが、４５℃以」二で
最適生長ケ示す欧生物もいる。与えられた条件において
最も適する培養の温度および期間はいかなるものでも使
用さ君うる。振とうさせなくても満足すべき生長が得ら
れるものの、活発な伽とり、撹拌等で代謝全行ない培地
からＣＯ２を適正に発生するのを確保するのが好４しい
。好昔しい実施態様の１つは、撹拌まだは回転振とうに
、ｌ：り振動全行ないこれにより液状培地にうす巻きを
作ることである。

ＣＯ２存在の測定は培地から発生するガスの赤外線分析
により行なわれる。約２３６０ｃｒｎ−’での赤外線吸
収がこの分析で使われる。ＣＯ２によるこの吸収は第２
図に示すＣＯ２の赤外吸収スペクトルで７バされる。

本発明の実施に際し、赤外吸収は接種後ただちにおよび
その後から培養期間の終わりまで定期的に測定される。

約２３６０’ａｍ　’の総吸収量を測定する。次いで、
容器による吸収の補正を、２４００ｃｍ−１でガラス容
器の吸収を測定し２２５０ｃｍ−’で；ｌ’：　ｌ）ノ
チルペンテン容器の吸収を測定することに」ニリ行なう
。測定された総吸収量から容器の参考吸収量を引くと発
生したＣＯ２による正しい吸収量が肖られる。

炭素源の第１用または非オリ用（ヘッドスペースのカス
におけるＺ酸化炭素の存在または不存在により次シピ）
の特ｆトは、検体における未知微生物の炭酸ガス発生特
性を描くのに用いられる。既知微生物の一連の特性を同
様に作成する。未知微生物の特性を既知微生物の特性と
比較することにより未知のものを同定することができる
。この比較は、最初に未知と既知微生物の特性を標準的
な公知分類たとえばダラム染色すなわちクラム陽性捷た
はグラム陰性にしたがってグループへ分けることにより
容易になることは明らかである。

以下の実施例により本発明の様々な特徴をさらに説明す
るが、これζこより本発明の範囲全限定するものではな
く、本発明の範囲は本明細書の特許請求の範囲で定義さ
れたものである。特に、例示した実施例での興味ある代
謝産生物は二酸化炭素であるが、他の代謝生成ガスにつ
いて赤外吸収バントが存在し、各藩拐料がガス状生成物
の吸収波数で少々くとも±１０ｃｍ’の赤外線透過軸回
を有し興味ろる波長範囲で少なくとも約１％の透過率を
有する場合には他の代謝生成ガスを検出してもよい。

実施例１゜ 第３図ないし第５図に３種類の異なった材料全通過する
赤外線透過率の相対債を示す。第３図において、側壁厚
さ約帆０７６Ｃｒｎ（０，０３インチ）で外径４．７８
ｃｍ、　（１，８８インチ）の１２５ｍ１！ポリメチル
ペンテン容器に赤外線走査を行なう。ＣＯ２吸収区域を
第３図に示す。図示されたように、ＣＯ２吸収区域は透
過率約２％から約７％へと変化する。これはＣＯ２走査
を行なうに十分である。第４図において、側壁厚０．１
３５ｃｍ＜　０．０５３インチ）で外径３．３’　８ｃ
ｍ　（１，３３インチ）の硼珪酸ガラス製バイアル管に
興味ある波数で走査を行なう。

ＣＯ２吸収区域を少し越えた赤外線波数範囲における硼
珪酸々ラスの透過率は０であることがわかる。

ＣＯ２吸収区域における透過率（％）は約７％から約１
４％へと変化している。第５図において、外径約４．３
２６ｍ　（１，フインチ）のソーダ石灰ガラスノ５０７
１＋ｅビンに赤外線を走査する。ここでもＣＯ２吸収区
域よりやや大きい赤外線波数の透過率（％〕は（］て・
らる。ＣＯ２吸収区域（・こおける透過率（％）は約３
ないし約９％の範囲である。本実施例および他の実施例
での全ての赤外線走査はニコレット（Ｎｉｃｏｌｅｔ　
）　５−　ＭＸ　ＦＴ−Ｊ　Ｒ分光光度計で行なわれた
。第３図ないし第５図の走査は室内空気に開口したバイ
アルで行なわれ、さらに６０回走査を行なった平均の結
果である。この走査は、同様に６０回行なわれた室内辛
気の走査に対して比較される。各々の場合、二酸化炭素
吸収の点で興味ある区域は約２４００ないし２２００ｃ
ｍ−の範囲である。

実施例２゜ 第６図および第７図において、ポリメチルペンテン製ボ
トルと硼珪酸ガラス製管状バイアルのそれぞれのヘット
スペースに様々なレベルの二酸化炭素ガスが用意されて
いる。各容器の対照走査は、最初に室内空気に開口した
ボトルを用いてニコレット分光光度計で６０回読み取る
ことにより行なわれる。次いで約２．５％、５．０％お
よび１０．０％二酸化炭素を含むガスをバイアル（・こ
吹込んでからただちに密閉する。その後、ボトルとバイ
アルを各々吹込みの後でニコレット分光光度計で６０回
の走査を再び読む。第６図および第７図に結果を示す。

図中、縦軸は赤外線吸光度（１００倍値）を示す。２４
００ＣＴＬ’と２３００ｃｍ−’の間の区域における赤
外吸収の増加とバイアル内の二酸化炭素濃度の増加との
間には明らかな相関関係が見られる。

実施例ａ 微生物生長と関連する赤外吸収の増加を第８図に示す。

２個のポリメチルペンテン製ボトルに入ったトリプシン
消化大豆プロスｔＴｓＢ）３０７をオートリのボトルに
は接種せず対照物として用いる。ホトルな第８図に示す
間隔でそれぞれ６０回走査する。第８図に示すデータは
、接種ボトルの走査から未接種ボトルの走査を引いた値
を表わす。読み取りの間ボトルを３７℃にて培養する。

二酸化炭素吸収区域において微生物生長と赤外吸収との
間には明らかな相関関係が見ら扛る。

第９図に滅歯培地を含むソーダ石灰ガラス製バイアルの
走査とクロストリジウム・バーフリンジｘ　ノス（Ｃ１
ｏｓ　ｔｒｉｄｉｕｍ　ｐｅｒｆｒｉｎｇｅｎｓ　）を
Ｊｌ！した滅菌培地の走査とを示す。両方の赤外線走査
は室内空気に開口したソーダ石灰ガラス製バイアルの走
査と対照される。全走査をニコレット分光尤実施例４゜ ＣＡＡ（または１）ＣＭのいずれか３０ｍｅと選択され
た炭素源とを含むソーダ石灰ガラス製バイアルに、通常
の食塩水に大腸−約Ｉ　Ｑ　’　ｆ−ａｔ胞／　ｍｌを
含む懸濁液５ｍｌを接種する。０時間目の赤外吸収を測
定する。３７℃で培養を行ない、５時間後Ｏこ赤外吸収
を測定する。この実験結果を第１０図および第１１図に
示す。二酸化炭素が発生し、グルコース、ラタトース、
マニトール督よびリジンの微生物による代謝の結果とし
て生ずるガス中に検出された。生物はシュークロース′
またはイノシト一ルを代謝しなかった。

本発明方法および装置は細菌の検出に関して記載されて
いるが、細胞状有機体、組織培養細胞、酵ＩＪ、酵素反
応等、広く生物学的活性を検知するのに１史用される。

またこの技術は、有機体の生長ζこおける薬剤の効果に
対応して有機体による二酸化炭素の産生が増加または減
少するという点で、抗政生物剤に対する微生物の感受性
の評価に適用できる。ここに記載した本発明の変法は当
業者にとって明らかであろう。したがって本発明は特許
請求の範囲のみに限定されるものではない。

【図面の簡単な説明】

第１図は本発明の原理を示す装置を衣わす。 第２図は二酸化炭素の赤外吸収スペクトルおよび２３０
０〜２４００ｃＩｎ−’間の吸収帯を衣わす。 第３図、第４図および第５図は、谷々ポリメチルペンテ
ン、硼珪酸ガラスおよびソーダ石灰ガラス容器について
の興味ある区域における二酸化炭素の赤外吸収スペクト
ルを衣わす。 第６図および第７図は、様々なレベルの二酸化炭素を含
むポリメチルペンテンプラスナノタおよび硼珪酸ガラス
容器の赤外線走査を衣わす。 第８図および第９図は様々な増殖培地における微生物の
代謝による二酸化炭素の産生を示す。 第１０図および第１１図は、様々な炭素源の微生物代謝
による陽性および陰性の二酸化炭素産生を示す（すべて
のスペクトルについて、横軸は２２００〜２５００　ｃ
ｍ−＋　の波数を表わし、縦軸は０８〜４０の吸光度単
位を表わす）。 ％　許出ＮＪｉ人　ベクトン・ティツキンソン・アン１
乙カンノぐニー （外５名） ＦＩＧ、２　Ｊ　＠Ｘ、　（ＣＭ−１）ＦＩＧ、３ 浪奴　（ＣＭ−１） ＦＩＧ、４ ＦＩＧ、５ 浪牧（ＣＭ−１） ＦＩＧ、６ 汲　収（ＣＭ−１） ＦＩＧ、７ ＦＩＧ、８ Ａ　満４１描把吋野句 Ｂ　クロ入トリレウム　）？−フリ／シ゛ニスｌＩ舎：
Ａ面琲肥−ＦＩＧつ ＦＩＧ、１０ Ｆｌｆｉ　、１１

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 （１）検体および増殖培地を入れるのに適する複数個の
   容器であって、前記増殖培地が代謝により二酸化炭素を
   生じうる炭素ｉを含み、該炭素源がも容器で異なるもの
   であり。 前記増殖培地および検体を、培養の間にガスが生じるよ
   うに正常な代謝過程の発生を促す状況下で接種する手段
   。 前記発生したガスを通過する赤外線ビーム発生手段およ
   び赤外吸収により前記容器の各々から前記発生したガス
   における二酸化炭素の存在を検出し、検体に含１れる微
   生物の二酸化炭素発生特性をめる赤外線検出手段、およ
   び 前記検体中の微生物の二酸化炭素発生特性と比較に使用
   する既知複数微生物の複数の二酸化炭素発生特注（この
   既知特性は前記既知微生物による前記炭素源の利用また
   は非利用を示すものであり、前記赤外線発生手段および
   ＋ｊ’＋Ｊ記赤外線検出手段により検出される二酸化炭
   素の生成凍たは生成不能により決定される）； とからなる検体中の微生物の同定装置。 （２）容器が約２３００ｃｍ’〜約２４００ｃｍ’の波
   数範囲で少なくとも約１％の赤外線透過率ケ有する特許
   請求の範囲第１項記載の装置。 （３）容器材料が硼珪酸ガラス、ソーダ石灰ガラスまた
   はポリメチルペンテンからなる群から選択される特許請
   求の範囲第１項記載の装置。 （４〕　容器が硼珪酸カラスである％肝１１ｈ車の範囲
   第３項記載の装置。　・ （５〕　容器がソーダ石灰ガラスである特許請求の範囲
   第３項記載の装置。 （６）容器がポリメチルペンテ／である％訂請求ノ範囲
   第３項記載の装置。 （７）炭素源が炭水化物、炭水化物ｄ８導体、ポリオー
   ル、原木、タエン酸、脂肪間！、アミノ酸、低分子量ペ
   プチドまたはプリンもしくはピリミジン塩基からなる群
   から選択される特許請求の範囲第１項記載の装置。 （８）炭素源が炭水化′吻である特許請求の範囲第７１
   Ａ記載の装置。 （９）炭水化物がグルコース、ラタトース、アラビノー
   ス、ラフィノース、シュークロース、ラムノース“また
   はトレノ・ロースからなる群から選択される特、ｌｆＦ
   請求の範囲第８項記載の装置。 （１０）　炭素源がアミノ酸である特許請求の範囲第７
   項記載の装置。 （１１）　アミノ酸がアルキニン、オルニチン、リジン
   、クリンン、アラニン、チロシン、スレオニン、ヒスチ
   アンまたはロイシンからなる群から選択される特許請求
   の範囲第１０項記載の装置。 （１２１炭水化物議導体がサリシンであυ、ポリオール
   がグリセローノペマニトール、イノシトール、ソルビト
   ール、ズルシトールまたはアドニトールからなる群から
   選択される特許請求の範囲第７項記載の装置ｔ。 （Ｉ３）赤外線ビームの中心に丙現性良く容器を一致さ
   せて配列する手段をさらに備えた特許請求の範囲第１項
   記載の装置。 ｌ谷容器について行われる赤外線１１１１１定の全てに
   ついて容器を再現性良く回転配置しつる手段をさらに備
   えた特許請求の範囲第１項記載の装置。 （１５）　１）個々の容器が微生物に対する異なった増
   殖培地を有し、各増殖培地が代謝を受けて二酸化炭素を
   産生しうる炭素源であって前記容器の他の全ての炭素源
   と異なるものを含有する複数の容器を用意し、 ２）次の工程。 ａ）　＠ｊＪ記主ψ数の容器ｔに既知ＩＬ父生物の、険
   １トをＩＹ種し、 ｂ）前記増殖培地の代訓分解ケ起こしてその結果増殖培
   地の少なくとも幾つかから二酸化炭素が発生するに十分
   な時間トリ記容器を１音養し、 Ｃ）各増殖培地から発生する気体雰囲気に赤外線ビーム
   を通過させて該気体雰囲気の赤外吸収を検１１１するこ
   とによ’）　ｌｎＪ記気体雰囲気の赤外吸収を測定し、
   これにより前記気体雰囲気中の二酸化炭素の存在捷たは
   不存在を検出し、 ｄ〕　二酸化炭素の存在捷たは不存在が前記赤外吸収に
   より検出された増殖培地の数および種類ζこ恭ついて前
   記既知微生物に対する標準二酸化炭素発生特性を用意す
   る、 により個別の既知微生物についての標準二酸化炭素発生
   特性を作成し。 ３）複数の既知微生物について一連の標準二酸化炭素発
   生特性を用意し、 ４）未知の微生物を含む検体について工８（ａ）から（
   ｄ）を１繰り返して未知の二酸化炭素発生特性を用意ｔ
   〜、 ５）前記未知の微生物を同定するために未知の二酸化炭
   素発生特性を標準二酸化炭素発生特性と比較する ことからなる検体中の微生物の同定方法。 （拓）赤外吸収をガラス容器において２３６０　ｃｍ−
   ’と２４００　ＣＴｎ−’で測足し、２４００　ａｍ−
   ’における前記吸収量を２３６０σ−１における前記吸
   収量から引（・て、これにより二酸化炭素による２３６
   ０ｃ７ｎ−’の吸収量の正しい測定値を提供する特許請
   求の範囲第１５項記載の方法。 （１７）　赤外吸収をポリメチルペンテン容器において
   ２３６０ｃｍ−’と２２５０ｃｍ−’で測定し、２２５
   ０ｃｒｒＬ’における前記吸収量を２３６０ｃｍ’　に
   おける前記吸収量から引いて、これに、Ｊ：ジ二酸化炭
   素による２３６０ｃ、ｉ、’の吸収量の正しい測定値を
   提供する特許請求の範囲第１５項記載の方法。 （］８）赤外線吸光反全６７０Ｇ−１で測定する特許請
   求の範囲δｌ＜１．５項記載の方法。 （至）培養を約１時間〜約２４時間行なう％許請求の範
   囲第１５項記載の方法。 Ｑ■培養を約２時間〜約８時間行なう特許請求の範囲第
   １９項記載の方法。 （２１）炭素源が、炭水化物、尿素、ポリオール、クエ
   ン酸寸たはアミノ酸からなる群から選択される特ｉＦｌ
   ：請求の範囲第１５項記載の方法。 （２２）炭素源が、グルコース、ラタトース、シューク
   ロース、ｌ−レバロース、アラビノース、ラフィノース
   またはラムノースからなる群から選択される炭水化物で
   ある特許請求の範囲第２１項記載の方法。 ＜２３）　炭素ｍが、クリセロール、マニトール、イノ
   ノト−ル、ソルビトール、ズルシトールまたはアト二ｌ
   ・〜ルからなる群から選択されるポリオールである特許
   請求の範囲第２１項記載の方法。 （２４）炭素源が、アルギニン、グリシン、アラニン、
   リシン、オルニチン、チロシン、スレオニン、ヒスチジ
   ／またはロイシンからなる群から選択される〜アミノ酸
   である特ｊｆｆ請求の範囲第２１項記載の万を去。