JPS60138467A - 補体成分活性の測定法 - Google Patents
補体成分活性の測定法Info
- Publication number
- JPS60138467A JPS60138467A JP58244545A JP24454583A JPS60138467A JP S60138467 A JPS60138467 A JP S60138467A JP 58244545 A JP58244545 A JP 58244545A JP 24454583 A JP24454583 A JP 24454583A JP S60138467 A JPS60138467 A JP S60138467A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- activity
- complement component
- complement
- serum
- specific
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
Classifications
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/543—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor with an insoluble carrier for immobilising immunochemicals
- G01N33/554—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor with an insoluble carrier for immobilising immunochemicals the carrier being a biological cell or cell fragment, e.g. bacteria, yeast cells
- G01N33/555—Red blood cell
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Immunology (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Hematology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Mycology (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Pathology (AREA)
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
本発明はヒト新鮮血清より特定の補体成分のみを除去し
た補体成分欠損血清を用いた補体成分活性の測定法に関
する。
た補体成分欠損血清を用いた補体成分活性の測定法に関
する。
補体系はヒト又は動物の新鮮血清中に含まれる２０種類
近い蛋白質より構成されており、生体の感染防御、免疫
反応、炎症などにあずかる重要な反応系である。生体に
細菌やウィルスなどの抗原が侵入すると、それに対応す
る特異的な抗体が産生され、抗原と紅合して抗原抗体複
合体かできる。この複合体は補体系を次々に活性化して
補体成分の攻撃を受けるか、あるいは抗原抗体補体複合
体がマクロファージなどの食細胞に喰食されることによ
って異物の排除が行なわれる。このように補体系の活性
化は生体防御にとって欠くことのできない反応であるが
、一方、もしこの活性化がうまくコントロールされずに
過度に反応が進めば、生体自身に障害的に作用し、アレ
ルギーや過敏症反応が引き起こされる。従って、ヒト血
清中の補体のレベルは、生体防御能やアレルギー反応の
指標となることが明らかとなり、補体のレベルすなわち
補体価（ＣＩ（ｌｌＯ）の測定は臨床上有用な検査とし
て広く普及している。しかしながら、補体価の測定は補
体系の全体の活性を知るＫすぎず、さら忙詳細な臨床診
断には、補体の各成分を測定することが必要とされる。
近い蛋白質より構成されており、生体の感染防御、免疫
反応、炎症などにあずかる重要な反応系である。生体に
細菌やウィルスなどの抗原が侵入すると、それに対応す
る特異的な抗体が産生され、抗原と紅合して抗原抗体複
合体かできる。この複合体は補体系を次々に活性化して
補体成分の攻撃を受けるか、あるいは抗原抗体補体複合
体がマクロファージなどの食細胞に喰食されることによ
って異物の排除が行なわれる。このように補体系の活性
化は生体防御にとって欠くことのできない反応であるが
、一方、もしこの活性化がうまくコントロールされずに
過度に反応が進めば、生体自身に障害的に作用し、アレ
ルギーや過敏症反応が引き起こされる。従って、ヒト血
清中の補体のレベルは、生体防御能やアレルギー反応の
指標となることが明らかとなり、補体のレベルすなわち
補体価（ＣＩ（ｌｌＯ）の測定は臨床上有用な検査とし
て広く普及している。しかしながら、補体価の測定は補
体系の全体の活性を知るＫすぎず、さら忙詳細な臨床診
断には、補体の各成分を測定することが必要とされる。
補体系の詳細な測定が診断に有用であると考えられる疾
患は、血清の補体価が正常値に比較して低値を示すもの
であり、これらの疾患には、先天性補体欠損症を始め各
種の免疫複合体病などが含まれる。例えば、急性糸球体
腎炎では補体価の低下とともにＣ３，Ｃ５の活性の著る
しい低下がほぼ金側に認められ、膜性増殖性糸球体腎炎
では低補体価とＣ３の低下が特徴的である。また、免疫
複合体病の代表的な疾患である全身性エリテマトニデス
では、活動期に補体価の低下は著明であり、補体成分の
プロフィールではＣ４，’Ｃ３の低下が著しい。このよ
うに補体各成分の活性を測定することにより、そのプロ
フィールから疾患の診断や予後の判定が可能な場合があ
る。
患は、血清の補体価が正常値に比較して低値を示すもの
であり、これらの疾患には、先天性補体欠損症を始め各
種の免疫複合体病などが含まれる。例えば、急性糸球体
腎炎では補体価の低下とともにＣ３，Ｃ５の活性の著る
しい低下がほぼ金側に認められ、膜性増殖性糸球体腎炎
では低補体価とＣ３の低下が特徴的である。また、免疫
複合体病の代表的な疾患である全身性エリテマトニデス
では、活動期に補体価の低下は著明であり、補体成分の
プロフィールではＣ４，’Ｃ３の低下が著しい。このよ
うに補体各成分の活性を測定することにより、そのプロ
フィールから疾患の診断や予後の判定が可能な場合があ
る。
補体各成分の活性測定には、免疫溶血反応の中間反応体
（インターメディエイトセル）と精製補体成分が必要と
され、かつ煩雑な操作のために、一部の施設で実施され
ているにすぎない。
（インターメディエイトセル）と精製補体成分が必要と
され、かつ煩雑な操作のために、一部の施設で実施され
ているにすぎない。
本発明者らは、従来技術の欠点を解消すべく鋭意研究し
た結果、ヒト新鮮血清より測定したい成分のみを特異的
に除去した血清を用いて、簡便に補体成分の活性を測定
する方法を見出し、本発明に到達した。
た結果、ヒト新鮮血清より測定したい成分のみを特異的
に除去した血清を用いて、簡便に補体成分の活性を測定
する方法を見出し、本発明に到達した。
即ち、本発明は、ヒト新鮮血清より特定の補体成分のみ
を除去して得られる特定の補体成分欠損血清と感作赤血
球を用いて、検体中に存在する特定の補体成分の活性を
測定することを特徴とする、補体成分活性の測定法であ
る。
を除去して得られる特定の補体成分欠損血清と感作赤血
球を用いて、検体中に存在する特定の補体成分の活性を
測定することを特徴とする、補体成分活性の測定法であ
る。
本発明は、ヒト新鮮血清より測定したい補体成分のみを
、例えば、アフィニティクロマトグラフイにより特異的
に除去し、かつ他の補体成分は充分釦活性を保持してい
るが如き特定の補体成分欠損血清を作製し、これと感作
赤血球、例えば感作羊赤血球とを一定時間反応させる免
疫溶血反応により、一段階でその溶血度合から検体中に
存在する特定の補体成分の活性を測定するものであって
、従来法に比較して簡便かつ安価な方法である。
、例えば、アフィニティクロマトグラフイにより特異的
に除去し、かつ他の補体成分は充分釦活性を保持してい
るが如き特定の補体成分欠損血清を作製し、これと感作
赤血球、例えば感作羊赤血球とを一定時間反応させる免
疫溶血反応により、一段階でその溶血度合から検体中に
存在する特定の補体成分の活性を測定するものであって
、従来法に比較して簡便かつ安価な方法である。
以下、実施例を挙げてさらに具体的に説明する。
実施例１
（１）〔ヒト補体第１成分除去血清ＣＩＤの作製〕４Ｗ
Ｌｌの新鮮血清に塩化カルシウム（ＣａＣ１ｔ）及びト
リエチレンテトラミン六酢酸（ＴＴＨＡ ）を５ ｍＭ
になるように加えた後、これを、５ｍＭ ＣａＣ４，
５ｍＭ’ ＴＴＨＡ及び１ ｍＭ ジインプロピルフル
オロホスフェート（ＤＦＰ）を含ｔｒ２．５ｍＭベロナ
ール緩衝液（ｐＨ５，２）で平衡化したＩｇＧ固定化セ
ファロース（１，６Ｘ７ｃＩｒＬ）にアプライした。操
作は４℃で行い、流速は１５ ｍｌ／ ｈｌとした。平
衡化緩衝液で洗った後、未吸着画分を集めて直ちに元の
用量まで濃縮し、−８０°Ｃで凍結保存した。この様に
して得られたＣＩＤの補体成分のプロフィールを正常ヒ
トブール血清（ＮＨ８）と比較検討し、その結果を第１
表に示した。ＣＩＤではトータルの補体価はＯでＣ１の
活性も認められなかったが、他の成分（Ｃ４，Ｃ２，Ｃ
３゜Ｃ５，）は原血清の７０〜８’Ｏ％の活性を保持し
ていた。ＣＩＤＶｃ梢製したヒトＣ１（Ｃｉｈｕ）を過
剰に添加したものでは、第１表に示した如く補体価がＮ
Ｈ８の７５チに回復した。
Ｌｌの新鮮血清に塩化カルシウム（ＣａＣ１ｔ）及びト
リエチレンテトラミン六酢酸（ＴＴＨＡ ）を５ ｍＭ
になるように加えた後、これを、５ｍＭ ＣａＣ４，
５ｍＭ’ ＴＴＨＡ及び１ ｍＭ ジインプロピルフル
オロホスフェート（ＤＦＰ）を含ｔｒ２．５ｍＭベロナ
ール緩衝液（ｐＨ５，２）で平衡化したＩｇＧ固定化セ
ファロース（１，６Ｘ７ｃＩｒＬ）にアプライした。操
作は４℃で行い、流速は１５ ｍｌ／ ｈｌとした。平
衡化緩衝液で洗った後、未吸着画分を集めて直ちに元の
用量まで濃縮し、−８０°Ｃで凍結保存した。この様に
して得られたＣＩＤの補体成分のプロフィールを正常ヒ
トブール血清（ＮＨ８）と比較検討し、その結果を第１
表に示した。ＣＩＤではトータルの補体価はＯでＣ１の
活性も認められなかったが、他の成分（Ｃ４，Ｃ２，Ｃ
３゜Ｃ５，）は原血清の７０〜８’Ｏ％の活性を保持し
ていた。ＣＩＤＶｃ梢製したヒトＣ１（Ｃｉｈｕ）を過
剰に添加したものでは、第１表に示した如く補体価がＮ
Ｈ８の７５チに回復した。
（２）（ＣｚＤを用いたＣ１活性測定法〕２ ｓ ｏ
ｐｉ ＣｓＤ、２５０ ｐｉの連続希釈したＮＨ８ある
いは精製Ｃ１，２５０μｌの感作羊赤血球（１，５Ｘ
１０”／ｄ ）及び３１のゼラチンベロナール緩衝液（
ＧＶＢ）を混合して３７℃で１時間反応させた後、遠沈
して血球を除去し、上清のＯＤ ４１３ ｎｍを測定し
た。溶血率ｙから血球当りの平均ヒツト数Ｚ ＝ −１
ｎ（１−ｙ）を計算し、これを縦軸に、希釈率の逆数を
横軸にプロットした（第１図）。ＮＨ８使用又は精製Ｃ
１添加のいずれの場合も用量依存性の直線となり、ＣＩ
Ｄを用いてｃｌの活性を定量することが可能であること
がわかる。
ｐｉ ＣｓＤ、２５０ ｐｉの連続希釈したＮＨ８ある
いは精製Ｃ１，２５０μｌの感作羊赤血球（１，５Ｘ
１０”／ｄ ）及び３１のゼラチンベロナール緩衝液（
ＧＶＢ）を混合して３７℃で１時間反応させた後、遠沈
して血球を除去し、上清のＯＤ ４１３ ｎｍを測定し
た。溶血率ｙから血球当りの平均ヒツト数Ｚ ＝ −１
ｎ（１−ｙ）を計算し、これを縦軸に、希釈率の逆数を
横軸にプロットした（第１図）。ＮＨ８使用又は精製Ｃ
１添加のいずれの場合も用量依存性の直線となり、ＣＩ
Ｄを用いてｃｌの活性を定量することが可能であること
がわかる。
実施例２
（ＣＩＤを用いたＣ１測定法と従来法との相関〕ＣＩＤ
を用いて測定したＣ１の活性値と、従来の中間反応体を
用いて定量した値との相関を検討した。患者血清３０検
体を両者の方法で測定した結果、第２図に示す如く、測
定感度は従来法の約１／ １０となるがｒ ＝ ０．９
２でよく相関することがわかった。
を用いて測定したＣ１の活性値と、従来の中間反応体を
用いて定量した値との相関を検討した。患者血清３０検
体を両者の方法で測定した結果、第２図に示す如く、測
定感度は従来法の約１／ １０となるがｒ ＝ ０．９
２でよく相関することがわかった。
実施例３
［Ｃ５Ｄの作製と０５活性測定法〕
新鮮ヒト血清に２ｏｍＭエチレンジアミンテトラ酢酸二
ナトリウム塩（ＥＤＴＡ）を加えて、これを２０ｍＭＥ
ＤＴＡを含んだリン酸緩衝液（ＰＢ８ ）で平衡化した
抗Ｃ５固定化セファロースに通した。素通り画分はＣ１
ｑ及びＣ５が特異的に除去された血清が得られ、これｌ
ｃＮ製ＣＩｑを補充してＣ５Ｄができた。このように作
製したＣ５Ｄと希釈したＮＨ８又はｍ１ｃ５．感作赤血
球の３者を混合して一定時間反応させ、その溶血度合か
らＣ５の定量を行なった。第３図に示す如く、ＮＨ８又
は精ＲＣ５の定量において用量依然性の直線が抽け、Ｃ
５の活性測定が可能なことが示された。事実、このＣＯ
Ｄを用いて種々の患者の血清の０５を測定し、従来め中
間反応体忙よる値と比較したところ、非常忙よく相関す
ることがわかった。
ナトリウム塩（ＥＤＴＡ）を加えて、これを２０ｍＭＥ
ＤＴＡを含んだリン酸緩衝液（ＰＢ８ ）で平衡化した
抗Ｃ５固定化セファロースに通した。素通り画分はＣ１
ｑ及びＣ５が特異的に除去された血清が得られ、これｌ
ｃＮ製ＣＩｑを補充してＣ５Ｄができた。このように作
製したＣ５Ｄと希釈したＮＨ８又はｍ１ｃ５．感作赤血
球の３者を混合して一定時間反応させ、その溶血度合か
らＣ５の定量を行なった。第３図に示す如く、ＮＨ８又
は精ＲＣ５の定量において用量依然性の直線が抽け、Ｃ
５の活性測定が可能なことが示された。事実、このＣＯ
Ｄを用いて種々の患者の血清の０５を測定し、従来め中
間反応体忙よる値と比較したところ、非常忙よく相関す
ることがわかった。
第１図は、本発明の補体成分欠損血清（ＣＩＤ）を用い
た場合の、平均ヒツト数と希釈部（逆数）との関係を示
す。 第２図は、本発明の測定法と従来法との相関を示す。 第３図は、本発明の補体成分欠損面ｆ＃（ＣｓＤ）を用
いた場合の、平均ヒツト数と布釈率（逆数）との関係を
示す。 以 上 第１図 第２図 ＣＩＤ ＞Ｌ ｃＨｓｏ／ｍｔ
た場合の、平均ヒツト数と希釈部（逆数）との関係を示
す。 第２図は、本発明の測定法と従来法との相関を示す。 第３図は、本発明の補体成分欠損面ｆ＃（ＣｓＤ）を用
いた場合の、平均ヒツト数と布釈率（逆数）との関係を
示す。 以 上 第１図 第２図 ＣＩＤ ＞Ｌ ｃＨｓｏ／ｍｔ
Claims (1)
- １、 ヒト新鮮血清より特定の補体成分のみを除去して
得られる特定の補体成分欠損血清と感作赤血球を用いて
、検体中に存在する特定の補体成分の活性を測定するこ
とを特徴とする補体成分活性の６１１１定法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP58244545A JPS60138467A (ja) | 1983-12-27 | 1983-12-27 | 補体成分活性の測定法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP58244545A JPS60138467A (ja) | 1983-12-27 | 1983-12-27 | 補体成分活性の測定法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS60138467A true JPS60138467A (ja) | 1985-07-23 |
| JPH0240188B2 JPH0240188B2 (ja) | 1990-09-10 |
Family
ID=17120288
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP58244545A Granted JPS60138467A (ja) | 1983-12-27 | 1983-12-27 | 補体成分活性の測定法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS60138467A (ja) |
-
1983
- 1983-12-27 JP JP58244545A patent/JPS60138467A/ja active Granted
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPH0240188B2 (ja) | 1990-09-10 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| EP0281251A2 (en) | A method for preparing a fecal sample composition for immunoassay testing | |
| JP4234207B2 (ja) | アレルギー性気管支肺アスペルギルス症の診断方法 | |
| EP0070278B1 (en) | A method of diagnosis | |
| EP0840126B1 (en) | Marker and immunological reagent for dialysis-related amyloidosis, diabetes mellitus and diabetes mellitus complications | |
| AU770114B2 (en) | Urinary trypsin inhibitor to diagnose AIDS | |
| JP4274693B2 (ja) | クローン病の検査方法及び検査用キット | |
| JPS60138467A (ja) | 補体成分活性の測定法 | |
| Turk et al. | Products of advanced glycation in patients with type 2 diabetes and vascular disease | |
| JP4377207B2 (ja) | 血液凝固時間測定方法および血液凝固時間測定用試薬 | |
| JP2945075B2 (ja) | リウマチ患者のＩｇＧ上のガラクトース欠損を測定する方法 | |
| Poller et al. | An assessment of an amidolytic assay for factor VII in the laboratory control of oral anticoagulants | |
| JP2508915B2 (ja) | 抗ＳＳＡ／ＲｏおよびＳＳＢ／Ｌａ抗体測定用抗原、その製造法ならびに抗ＳＳＡ／ＲｏおよびＳＳＢ／Ｌａ抗体の測定法 | |
| CA1195612A (en) | Reagent for determination of human urine kallikrein | |
| McLeod et al. | 'Hypocryoglobulins': Enhanced Cryoprecipitation From Hypotonic Serum in Patients With Vasculitis | |
| SU1783444A1 (ru) | Способ диагностики туберкулезного увеита | |
| SU1561043A1 (ru) | Способ диагностики сифилиса | |
| US4139606A (en) | Preparation of antigen and test for heterophil antibody | |
| JP2902095B2 (ja) | ヒトヘモグロビンを含有する被検液の保存方法及びそれに用いる便溶解用緩衝液 | |
| JPH05281227A (ja) | ヒトヘモグロビンの検出方法 | |
| SU768399A1 (ru) | Способ определени чувствительности организма к антигену | |
| RU2176794C2 (ru) | Способ иммунодиагностики инфекций | |
| JPS60224066A (ja) | 抗ヒトラクトフエリン抗体感作ラテツクス及びそれを用いたヒトラクトフエリンの検出方法 | |
| SU1627988A1 (ru) | Способ диагностики патологии сердечно-сосудистой системы или хронической почечной недостаточности | |
| JPH116832A (ja) | 川崎病の検査方法および検査薬 | |
| JP2762058B2 (ja) | カルボニル化合物− タンパク質複合体の定量法 |