JPS6016590A - 免疫抑制因子を生産する突然変異体ヒトｔ細胞系統およびこのような突然変異体を得る方法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 本発明は、一般に、新規な突然変異体細胞系統類および
それらを生産する方法に関し、さらに詳しくは品い力価
のサプレッサー囚＋治二分部・する突然変異体ヒトＴ細
胞およびそのサブクａ−ン（５ｕｂｃｌｏｎｅ　）類に
１万する。

活性化されたリンＡ株細胞は免疫応答の調節に参加する
Ｊｔｌｉ々のｏｆｍ性因子（いわゆる「リンフ才力イン
１」）を作り出すことはよく確仏されているｌ　Ａｔｔ
ｍａｎ　ｅ　ｔ　ａｌ　、　による考誤ｆｌ＋：］。報
告された因子の１０フイルに遊走阻旧因子（２，３）、
リンノ性毒素（４，５）、転移因子（６，７）およびイ
ンターフェロン（１０，１１）を包含した。

的な数の確立された研究にもがかわらず、これらの分子
の磯ｆｉｉ：　−４’ｔも青の関係はなおよく理Ｙｔ’
６芒れ１いない。

リンフ才力イン類の研究におけるｉｌ＋歩は、２つの主
要な制御沢により強く妨害されてきた。第１に、従来の
リンフォカインＪ、ＬＩ全ｑ１．Ｍ　ｍするために使用
される細胞集団の異質性のため、ｊ９ｒ矩の生吻学的活
性を明イ１１６な分子へ割り当てることはきわめて内錐
である。第２に、従来の調・望′Ｉ？／Ｊ中の所定のリ
ンフ才力インの量は通常少な過さるので、化１グ学的に
活性な分子を精確に牛化学的に分析することはできない
。その上、リン・ぐ球ｖ、［培養物中で４１限のｉｒ１
］常短い寿命をもつため、特性づけの＜ｉノ＋究のため
に反復して均質なリンフ才力イン調製物を得ることは不
ｉ」能である。リンフォ力イン用の（ＩＦ究に関するこ
れらの木蝋のため、この分野の１υ１死者らｔ／′ｉｉ
’（Ｉｔ胞系統およびハイプリドーマ（ｈｙｂｒｉｄｏ
ｍα）類を用いて研究するようになった。

均質なかつ明確なリンフ才力イン類を分泌する安定なＴ
に１１胞系統の確立は、可溶トｌミ仲介体（ｍｅ−ｄｉ
ａｌｏｒ　）類の機能について大量の情報を発生させた
［Ｍｏ１ｌｅｒによる考察（１２）］。しかしながら、
これらのクローン（ｃｌｏｎｅ　）　ａｘ＋を維持する
Ｔ細胞生長因子（ＴＣＧＦ）についての連続的研究に、
特定のリンフ才力イン類の大量の生産を妨害した。最近
、Ｔ−Ｔ、・イブリドーマ類が構成されて（１３−１７
）リンフオカイン分泌Ｔ細胞を不滅化略せた。ノ・イブ
リドーマ類にＴＣＧＦ独立性であるので、この分野のあ
る研究者らは、生化学的特性づけのだめの大知のリンフ
才力イン類の調製に、それらのハイプリドーマ類がクロ
ーニングされたＴ細胞系統よりもすぐれた源として役立
つであろうと考えた。

ヒトリンパ睡細胞系統も、リン・９球により放出された
細胞免疫の仲介体に類似するある数の因子を生産する。

Ｇ１１ｌｉｓ、ぢ　ム；、（１８Ｊは、ヒトＴ細胞系統
Ｊｕｒｋａｔがミトケ９ンで刺激したとき大量のヒトイ
ンタールーキン（１ｎｔｅｒ−１ｅｕｋｉｎ）２　（Ｉ
Ｌ　２　）ｆ生産することを示した。Ｆａｒｒａｒ、ｅ
ｔ　ａｌ　、、（１９）ｔｊ：、胸腺ｇＥＬ４が突然変
異原ノオルーーールミリステートアセテート（ｐｌＬｏ
ｒｂｏｌ　ｍｙｒｉｓｔａｔｅ　ａｃｅ−６αｔｅ）に
より刺激されたときマウスＩＬ２ｆｚ高いａ度で分泌す
ることを示した。これらの２種の細胞系統は、機能−構
造関係について計しい生化学的分析を行えるような豊富
な昂のそれぞれの因子を生産する。

Ｖｅｓｏｔｅ、　ｅｔ　ａｔ、、　（２０）Ｉｔｓ　、
ミ　ト　グン刺激リンノ９球のＤＮＡ合成゛を阻害する
特性づけられないサプレッサー因子を低いレベルで分泌
するリンパ様系統の従来の報告を記載したが、リンパ球
の生長の刺激にうして、ＤＮＡの合成の刺激）もリン・
母線細胞系統の上澄みにより起こされることができるこ
とを認めた。Ｖｅｓｏｌｅ　の参考交歓自体において、
と）　ＩＪンパ様細１包系統Ｃ’　ＣＩｒｐ−ｃｇｕ（
’ＣＥＭ″）がリンパぞ球内のＤＮＡ合成を増加する物
礪を分泌することをこの著者らは示している。これらの
著者ハ、寸た、ミトゲンたとえばＰ　ＨＡで刺激された
ホ核細胞内のミトヶ゛ンの応答を弱く阻害する特性っけ
されない物・寅をＯＥＭが分泌することを開小１〜てい
る。この参考文献中の第１図から、約６倍の希釈（すな
わち、約１０−０°８　）でミトゲンの応答の５０％の
阻害が達成されることが理解できる。この阻害物質は、
アルブミンのピークヲモつセファデックス（５ｅｐｈａ
ｄｅｘ　）Ｇ−１０６カラムでｖｓｙされると述べられ
ており、こうして約７０．　ｆｌ　００ダルトンの分子
量を有する。

Ｖｅｓｏｔｅ　中に引用されている文献σノつらＩＶ＋
（Ｙｏｓｈｉｄａ、ｅｔ　ａＬ、、Ｊ、Ｉｒｎｍｕｎｏ
ｌ、。

１１７．５１Ｂ　（１９７６）Ｊに捷たＣ　Ｅ　ＡＩ　
（他の細胞系統の中でも）を用いて培地中にリンフ才力
インを放出する能力を倹宜する＋ｔｌ）究を開示してい
るが、Ｔ細１包丈プＶツサー因子を捜すことあるいはこ
れが発見されたという開示されていない。

種々の細胞系統（ＣＥＦｆ含む）の１−々σ）池の突然
ｆ異体により生産されたが、それらのいすオＬも高い力
価のサプレッサー因子を分餌・する細胞系統を得ること
ができるであろうことを示唆していない。これに関する
文献は、次の辿りである：Ｆｏｕｎｇ、　ｅｔ　ａｔ、
、　ｐＮＡｓ　（０，Ｓ、　Ａ薯ゝ７９ニア４８４−７
４８８（／Ｊｅｃｅｍｂｇｒ　１９８２）、Ｌａｋｏｗ
、ｅｔ　ａｌ、、Ｊ、Ｉｍｍｕｎｏｌ、。

１３０．１６９−１’１２（Ｊａｎ、ｕａｒｙ　１９８
３１、およびＤｅＦｒｅｉｔａｓ、ａｔ　ａｔ、（１６
）、ヒトＴ細胞系統Ｊｕｒｋａｔ　ｆ用いる研究を報告
している。

さらに、いく人かの著者らはＴ細胞系統ＣＥＭの突然変
異体を用いる研究を報告している。

０ｋａｄａ、ｅｔ　ａｌ、、ＰＮＡＳ　（（７，Ｓ、−
Ａ、）７８　ニア７１７−７７２１　（Ｄｅｃｔｔｍｂ
ｔｔｒ　１９８１１ｔＣＥＡｈの８−丁ザグ了二ン抵抗
性突然変異棒ヲ用いる研究を報告しているが、Ｉｒｉｇ
ｏｙｅｎ。

ｅｔ　ａｔ、、（１７１は細胞系統ＣＥＭからの６−チ
オグアニン抵抗性突然変異体のｍｔ＝立を報告している
。

Ｉｒｉｇｏｙｔｔｎ、ｅｂ　ａｌ、　ｆ、ＣＥＡｉ細吃
系統の６−チオグアニン（６Ｔ）抵抗性突然変異体を調
製し、次いでこの突然変異体をレシチン刺激ヒト−Ｔ細
胞と融合してヒト−ヒトＴ細胞ハイプリドーマを生ηｒ
すること全記載している。親ＣＥ　Ａｉ細胞系統の源に
ついては述べられていない。この突然変異体の生産に用
いられた方法は、メタンスルホン酸エチルによる初期の
突然変異、引き続く６Ｔの濃度の増大（１，２５μｌ／
　−５ｔｔ　Ｉ　／　ｍｅ　）　、その稜の突然変異体
細胞を１６．７μＩ／がｌ゛の６−チオグアニン中で維
持することからなっていた。

Ｉｒｉｇｏｙｅｎ、ｅｔ　ａｌ　、　ｋｌ、、６Ｔ抵抵
抗性突然変体ＣＥＭ系統、の特性ついて報告された出願
人について知られている唯一の群である。そｆＬらの突
然変異体の系統ＣＥＡｉ−Ｔ１５（参考文献中で論じら
れている唯一つのもの）ｉｉ、０ＫＴ３抗凰を欠乏しか
つ３５〜４７の染色体数（抜型）（その生産に１吏用さ
れた親ＣＥＭと同一）をイｊすると記載された。さらに
、ＩｒｉｇｏｌｌｅｎのｇｃＥＭ系統および突然ＩＲ８
４体系統ＣＥＭ−Ｔ１５の両者に通常１０−８モルのア
ミノ１テリｙ　（ａｍｉｎｏ−ｐｔｅｒｉｎ）（０，０
０４ｐｌｉ／ｍｅ）の存在下に生長し、両者ば１０−７
モルの７ミノプテリン（０，０４μｉ　／　ｍｅ　）の
存在下で死滅し、そして３Ｘ　１０−’モルおよび６．
６ｘｌ□−ａモルの了ミノプテリン（それぞれ、０．０
１３および０．０２６μｌ／ｍｔ）において生長の差が
存在した（ＣＥＭに生長し、たが、ＣＥＡｆ−Ｔ１５は
死滅した）。また、この参考文献に、ＣＥＭ−Ｔ１５が
・川・・「Ｂ細胞およびＰｔ１７Ｍ　（アメリカヤマゴ
ボウのミトゲン）を含有する培養物中で４６生したＰＥ
Ｃ（プラーク形成細胞）の基底値レベル金阻害した。」
ことを示している。この結果が示すように、ＣＥｋｉ−
Ｔ１５はＢ細胞の分化を阻害する。Ｔ細胞の分化に対す
る作用に関して情報は存在りない。

これらの結果から、きわめてすぐれた生長特性を宿しか
つ高い力価のサプレッ丈−因子を分泌する安定な突然変
異体細胞系統全生産することができるであろうことは示
唆されない。事実、本発明ギー丈ンチングアニンリボト
ランスフエラーゼ（んｙｐｏｘａｎｔｈｉｎｅ　ｇ＊ｂ
ａｎｉｎｅ　ｒｉｂｏｔｒａｎｓ−ｆｅｒαｓｅｌの欠
乏を示す（６ＴＴ抗性突然変異体に似た）が本発明の細
胞系統において見い出される有益な特性を示さない、ア
ザグアニン抵抗性突然変異体ＣＥＭが生産されることを
観察した。

Ｔ細胞サブレツナ−因子（Ｔ　ＳＦ　）の生産を誘導す
る非ミトケ９ン（ｎｏｎ−ｔｎｉｔｏｇｅｎｉｃ　ｌ　
ｃ７）非細胞傷讐性（ｎｏｎ−ｃｙｔｏｔｏｘｉｃ　）
７’細胞誘導物質（１ｎｄｑｂｃｅｒ　）因子（、”；
　Ｉ　Ｆ　）　ｋ　ｈ％い力価で生長培地中に構成的に
分泌する、リン／Ｆ芽球様（ｌｙｍｐｈ、ｏｂｔａｓｔ
ｏｉｄ　）細胞系統ＣＣ／＜　Ｆ　−ＣＥＷ　［６Ｔ−
ＣＥＭと表示するンの新規な安定な６−チオグアエン抵
抗性突然′す゛異体を、今回本発明者らは発見した。こ
れらの因子は本発明以前において未知である。この発見
ｔ６、Ｖｅｓｏｔｅ。

ｅｔ　ａｌ、およびＩｒｉｇｏｙｅｎ、ｅｔ　ａｌによ
個−一一一■■―−−−一時一−Ｎ−−−輪−１−り報
告された結果を見るとりくべきものである。

この新規な突然変異体の細胞不含上澄み（ＳＩＦを含有
する）はミドダン誘導Ｔ細胞増殖の少なくとも９０％ｌ
１ｏ−’程度に商い希釈で抑制するが、そのほとんどの
生産的サブクロン（ｓｕｂ−ｃｌｏｎｅ）の細胞不含上
Ｍみはこのような抑制を１０−’までの希釈において示
す。これらの上澄みホミトケ°ン誘４Ｂ細胞増殖をこれ
らの希釈において抑制しない。この力価は８が月間にわ
たって一定に維持される。観測さｔした抑制の原因とな
る因子の作用の機、溝、細胞の標的、および生化学的特
性づけは決定された。また、因子ＳＩ／！−を生木内で
Ｔ細胞増鴫抑制を示す。

主題の突然変異体およびそのサブクロン類を参照してこ
こで１更用する「安定な」という用語は、その突然変異
体およびそのサブクロン類が旨い力価の５ＩＦＴ少なく
とも６か月曲分泌し続けることを意味する。さらに、「
安定な」突然変異体およびそのサブクロン類ニ、この同
じ期間にゎ／こってそれらの核ｔ４（ｋαｒｏｔｙｐｅ
）ｋ吃められうるぽど変化しない。一般に、安定でない
突然変異体類また（１ズ然笈異体知のナブクロン項は、
一般にあるい（まとくにＳＩＦにおけるリンフ才力イン
類の信頼性ある源として役立たないので、笑鹸には有用
ではない。

ここで！史用する「非ξトグンの」という用ｒｒｒＥ　
Ｆｊ、作用ケも／ζないことτ意味する。ここで開用す
る「非細胞傷害性の」といつ用語ば、主題の突然変異体
およびそのサブクロンがヒトＴ細胞へ観測される細胞傷
害作用をもたないこと？意味する。ここで使用する「抑
制」およびその変体は、［抑制される」活性の減少を意
味し、この減少は部分的であるかあるいは完全であるこ
とがある。

この突然変異体の細胞系統は、サプレッサー誘導物質因
子の分泌にとって有用であるばかりでなく、かつまたバ
イブリド−又形成において効力のある相手として有用で
ある。この第２の有用性に関すると、アミノプテリン感
受性はきわめて重装である。ヒト１７１９球（およびこ
うしてヒドリンツク球から生木されたヒトハイブリドー
マ）は対応するマウスのり７７９球まｆｃＵハイプリド
ーマエリも了ミノプテリンに対して非常に感受性である
からである。したがつて、ＩＩＡＴ培地を用いてヒトハ
イフリドーマを差別的に選択するためには、より少量の
アミノプテリンを培地中に使用して所望のハイプリドー
マの生存を確保しなくてはならず、それゆえ融合されな
い細胞系統にこの物質に対して非常に感受性でなくては
ならない。

本祐明の一部分として生産されたＳＩＦおよびＴＳＦは
、試験管内および生体内の両者において１′細胞増殖を
抑制するために市川である。

本発明の範囲門には、主題の突然変異１不細胞系統６ｒ
−ＣＥＭ、この突然変異体細胞系統のサブクロノ（６１
’−ＣＥＭ−２０と表示されるものを含む）、ｎ’Ｕ記
の細胞系統および〕サブクロノを調製する方法、前記突
然変異体Ｒよびそのサブクロノにより生産されたサプレ
ッサー誘導物質因子、それにより誘導されたｒ細胞サル
ッサー因子、および前記因子を用いてＴ細胞増殖を抑制
する方法（試験管内および生体内の両者）が包含させる
。

これらの方法は、有効Ｔ細胞増殖抑制量のサプレッサー
誘導物質因子またはＴ細胞ナゾレッサー因子で、Ｔ細胞
を処理する（試験′自白）か、あるいはそれ２Ｔ細胞増
殖の抑制を必要とする動物に投与する（生体内）ことか
らなる。また、本発明は、リンツク芽球様細胞系統〔Ｔ
細Ｊ戊筺たはＢ細胞の起源（ｏｒｉｇｉｎ））の〕を突
然変異させて、増大した水準のリンフ才力インを生理す
る突然変異体細胞系統を生じさせる方法ケ含む。

主題の突然変異体細胞系統６Ｔ−ＣＥＭは、親系統ＣＥ
Ｕ（アメリカン・タイプ・カルチャー・コレクシＥ１７
　（Ａｒｎｅｒｉｃａｎ　Ｔｙｐｅ　Ｃ”ｒＬｌｔｕｒ
ｅＣｏｌｌｅｃｔｉｏｎ　）から得た〕を初期の高い濃
度の６７’（約２０〜３　Ｑ　Ｉｔ　、！ｉ’　／　ｍ
ｅの６１）で十分な時間処理して細胞の少なくとも９０
％を殺すことによって生産した。７日＋Ｈ１３０ｔｔ　
Ｉ　／　ｍｌの６ｆで処理後生存する小さい百分率に突
然変異体の細胞系統全構成した、先行技術と対照的に、
追加の突然変異体を１史用せず、そして細胞を漸進的に
増大するａ！よりにむしろ初期の旨い濃度に暴露した。

開始から肯い濃度の６Ｔで親系統を処理することに、主
題の突然変異体の細胞系統を生ずるとき有意であったと
思われる。突然変異体の一＋ＩＭを取扱う先行技術の参
考文献に、低濃度の突然変異剤ケ用いて開始し、そｔ７
てその１？漸進的に増加することケ孜示し７’Ｃ，、Ｉ
ｒｉｇｏｙｅｎ、ｅｔ　ａしの参考文献に典型的である
。

主題の細胞系統がいったん得られたとき、既知の技術に
まり主題の突然変異体〃＋ｌｌ胞系統全系統クローニン
グして、より市いレベルのサルッサー誘導吻質因子の生
＃に刹°するサブクローン（５ｕｂｃｌｏｎｅ　ｌ　ｌ
ｒ）得ることが可能であった。主題の突然変異体細胞系
統およびそのサブクローンは、ＵＫＴ３抗原金有し、０
ＬＴ３モノクロナル抗体で検出することができる。

このＳＩＦ分泌突然変異体細胞系統の発見は、技術状態
ヲ見てばかりでなく、かつアザグアニンを用いてこのよ
りなＣＥＭの突然変異体細胞系統を生産しようとする不
発明者らの不成功に終った試みを見て、′斡＜べきこと
である。親、系統ＣＥＭｆｉ、Ｖｅｓｏｌｅ、ｅｔ−リ
ーの文献に記載されているように、わずかに低いレベル
の特徴づけられないサグレッグ−因子を分泌する。ｍ記
のＯｋαｄα。

ｅｔ　ａｔ、の文献１１、Ｃ’ＥＭのアザグアニン砥抗
性突然変異体全開示し〔おり、この細物系統を用いて調
製した７’　−Ｔハイブリドーマ類がＩＬ−２およびヘ
ル・ぐ−因子を分泌したことのみを示している。アザグ
アニン抵抗性突然変異体ＣＥｌｌｆ自体により分泌され
つる因子に関する情報に存在しない。その上、０ｋａｄ
ａ、ｅｔ　ａしは、７７２０ページの右欄において、「
い〈棹類かの他のリンフ才力イン類たとえばキラーヘル
パー因子（・唄）またｎ　Ｔ　ＩＩ　１ｌｆｆ、　ｉｌ
ｔ、換因子（ｒｅｐｌａｃｉｎｇ　ｆａｃｔｏｒ）を生
産するＴ白面病ｙ）旧泡系杭ゲ＠県することは、不可能
であろう」ことヲ７］＼している。このζ見察は、本発
明から１Ｉｌｉｅれた内容を教示している。

低い濃度でのみ産出する因子ケ梢製することは困帷であ
るので、先行技術の低い力価の抑制因子は実際に精製し
かつ特性つけることｔま不０」能である。典型的には、
タンノぞり質の５０〜９（１％は梢↓工程において失な
われる。それゆえ、先行技術の因子（たとえばメｅｓｏ
ｌｅ、μ旦、の因子ンを稍嫂しようと試みたとき、活性
は和製が達成される前に矢なわＩしてし１うであろう。

４：発明者は、突然変異体細胞系統６　Ｔ−（、’　Ｅ
　Ｍを生産するために用いる上の方法が、鴎のリン、ぞ
芽球１１細胞系統の安定な突然変異体金生産するために
も有効であり、この突然変異体が・突然変異体の生産に
１更用する親細胞系統よりもリンフ才力イン・頑の生産
を増大することを発見した。たとえば、リン・ぐ芽球１
１．に細胞系統ＨＳＢ　（Ａ　ｆＣ’　ＣＣＣＬ１２０
、ｌ）は、特性づけられない抑制因子を生グン韻４Ｔ細
胞分化を抑制する。６ｆ−ＣＥＭと・い１同じ方法によ
り生産された安定な突然変異体細胞系統６Ｔ−１１ｓＢ
Ｉｔｌ、比較スルト、１．０−’ノ希釈においてこのよ
うな増殖を抑制する因子を生産する。

したがって、不発明は、親リン・ぞ芽球様細胞系統を約
２０〜約３０μｇ　／　ｔｎＡの６Ｔで十分な時間処理
して親細胞の少なくとも９０％？：殺し、その後生存し
つる細胞を単離することからなる、親リン・ぐ芽球様細
胞系統を突然変異させて、増大したレベルのリンフ才力
インを分泌する安定な突然変異体細胞系統を生じさせる
方法を包含する。この方法にヒトまた＆′ｉ動物起源の
リンノｅ芽球様細胞系統、ならびにＴ細胞またｎＢ細胞
起源のリン・９芽球様細胞系統に適用できる。

主鴎の突然変異体細胞系統および得られる丈ルッサー＠
導＋７／Ｊ質因子およびそれによりＶヶ導きれたＴ細胞
サプレッサー因子の調製および♀「性つけに、以下の説
明および実施例からよりよく理解されるであろう。

以下の材料を夷加１例において１更用した。硝製びれた
フィトヘマグルチニン（ｐｔｔ　、４−ｐ　）　ｉｓウ
ェルカム（ＬＶｅｌｃｏｍｅ　）から入手した。アメリ
カヤマゴボウ（ｐｏｋｅｗａｅｄ　）のミトケ゛ン（Ｐ
ＷＭ）Ｕギブ＝＋　（Ｇｉｂｃ６　）から人手した。ア
ミノプテリンおよびマイトマイシンＣ“（ｍｉｔ−Ｃ）
はシダーｒ　（’、’；ｉｇｍａ　）から入手シ／コ。

Ｃ”５’ｌ／Ｂ６マウスおよびＤＢＡ／２マウスは、ジ
ャクソン・ラゼラトリ−（Ｊａｃｋｓｏｎ　Ｌａｂｏｒ
ａｔｏｒｙ　）から入手した。ヒト細胞系統のための生
長培地に、α−最小必須培地（α−ＭＥＮ）（Ｇｉｂｃ
ｏ　）から成り、ベニシリ：ｙ　（Ｇｉｂｃｏ　、ｓ　
Ｏμ）Ｉｌｌ　／ｍｅ　）、ストレゾトマイシ：ｙ　（
Ｇｉｂｃｏ　、１　ｏＯｔｉＪＪ／ｍｅ）、Ｌ−グルタ
ミン（Ｇｉｂｃｏ、ｚＯミリモル）および２〜１０％の
胎児子牛血（＊　（Ｆ　Ｃ５ＸＧｉｂｃｏ　）が補充さ
れていた。ｌ゛細胞増殖検定の１こめの培地に、α−１
Ｗ　Ｅ　Ｍのｒ’ｃわりにＩ髪ＰＡｉｌ１６４０（Ｇｉ
ｂｃｏ）紮１史）１」シかつ常時１０％ｐ　（、’　ｓ
を匣用した以外、同一であつ７辷。単糖翅のツルク）　
−ス、＃　Ａ　Ｇ　、　ラムノース、お工びα−メチル
マンノシドおよびプロスタグランジン路双阻害γ１１イ
ンドメタシンはシグマ（Ｓｉｇｍα）から入手した。

実施し１ｊ１ す７ｉｅＴ）ｉング−ｑ　（Ｓｉｇｍ（Ｌ　）　（カタ
Ｃ’　り４号Ａ−４８８２）から人手した。１００■の
６１を１０　（１ｍｌの異積水中に溶かした。１滴また
は２滴のｌ　Ｏ＃　Ｎ　ａ　０１１を加えて、６１ケ完
全に溶かし／ζ。最終浴液のｐＲに約９でぬる。

リンノぞｇ−琢の臼曲病系統Ｃ’　Ｅ　ｔ＞）ｌ（Ｃｔ
”ＲＦ−ＣＥＭ、ＡｆＣＣＣ’Ｃ’Ｌ　１１９ンｔま、
アメリカン・タイプ・カルチャー・コレクション（Ａｍ
ｅｒｉｃａｎ　ｉ’ｙｐｅ　Ｃｒｂｔｔｕｒｅ、Ｃｏ１
Ｌｅｃ−ｔｉｏｎ＋　ＲｏｃｋｖｉＬｌｅ、ＭＤ）から
人手し、そ１、　テ９０　％　Ｃｔ　−Ａｉ　Ａ’　ｔ
Ｉｉ　第１０１１）　％ノ？’　（、’　Ｓ　中−（’
ａ４ｐ持した。対数相（ｌｏｇ　ｐｈａｓｅ　）にアル
Ｃ’　Ｅ　、４（細胞し１　（１’　＋１４ｄ胞／（ｔ
ｆ−；　（ｗ、ｅｌｌ　）　〕’ｆｃＡ’ａｋのｆ尚１
ｉの６１゛で処理し、でして生春１１μカケ７日後に評
１曲した（表１）。３０μｇ　／　ｍｅの６Ｆでシ匹理
した細１１ｉ！Ｉ　’！　、それ以上の研究の１こめに
Ｊン＼択した。残りの生存しつる細胞（４％）を２５朋
の培養フラスコ内で、有５Ｖな１の細胞が観測される贅
で、生により除去した。生存しつる細胞を２つの部分に
分けた。一方の部分をα−１１Ｅ　Ｍ　＋　Ｆ　ＣＳ中
で維持し、３日毎に新しい培地を加え、そして細＠全毎
週継代培＊　ｔ　ｐａｓｓαｙｅ）シた。他方の部分を
９６のくばみの微小力価の固形常道培地（ｍｉｃｒｏｔ
ｉｔｅｒ　ｐｌａｔｅ　）上で・丈フ゛クローニングの
ため培養した。サブクローンは約２〜３個で生長し、そ
の侵２４のくほみのリンプロトレー（Ｌｉｎｂｒｏ　ｔ
ｒａｙ　）に４−４シた。細胞が１０６／くぼみのＷ？
度に到達したとき、それらをアミノグチリン感受性およ
びサブレツナ−請導物質因子の生産について試験した（
表２）。６Ｔ−ＣＥＭ−２０、最ｇのレベルの因子の生
産を示したサブクローンの１つ、をそれ以上の研究のた
めに選択した。

生長の特性、抜型、了ミノプテリンへの感受性、サプレ
ッサー活性のレベルおよび他の免疫学的検足への上澄み
の効果を、ＣＡ　ｈｌ　＊’　６　Ｔ−ＣＥ　Ｍ　＋６
Ｔ−ＣＥＭ−２０，およびＡｚ−Ｃ’ＥＭ（アザグアニ
ン抵抗性ＣＥＭ突然変異体）について表３に８己載する
。

系統６Ｔ−（、’ＥＭ−２０は、８月より長期間にわた
り一定したレベルのサブレッ丈−銹導Ｔ／Ｉ實因子の分
泌を示し続け、この因子の分泌物中に営まれる染色体の
損失を示さなかった。安定性のデータを表４に示す。

実施例　■ 抑制性上澄みの生産 ６Ｔ−Ｃ８Ｍ細胞を、１０％ｐｃｓを含有するα−ＭＥ
Ｍ中で通常のように維持した。６Ｔ−ＣＥｙから抑制性
上澄みを生産するため、ａＩ胞を洗浄し、そして２％Ｆ
Ｃ５ｆ含むα−ｔＷ　Ｅ　Ｍ中に２ＸＩＯ’細胞／−ま
たは１０６ボロ胞／　ｍｅで懸濁させた。上澄み′！ｌ
ｉ？４８時間後収検し、機能的Ｙ占性紮評価した。リン
・ぞ球訪導サプレッサー因子Ｔ　Ｓ／’を生産する標準
手準は、問題のリン・ぞ球集団全３ｘ　１０’　ｌＪＪ
胞／　ｍｅで’／′ｌｏｏ　’ｔｈ釈の６Ｔ−２０５１
Ｆ（サブクローン６Ｔ−Ｃ’ＥＭ−２０により生産され
たサプレッサー訓導物質因子）の存在下にインキュベー
ションすることからなっていた。２４時間後、細胞を３
〜４回洗浄し、次いで２％ＦＣ５含有ＲＰＭＩＬ６４０
中でＩ　Ｘ　Ｉ　Ｏ６細胞／−とした。上澄みを、特記
しないかぎり、７２時１６」後に収穫した、 実施例　■ リンパ球の精製さオした集団の調製 末梢血液のリンパ球（ＰＢＬ）ｆｚ、正常の供給体の血
液から、標準のフィコール−ハイバーク勾配技術（２１
）に従い得た。ｒ　ａ］胞および非Ｔ細胞を、標準のヒ
ツジ赤血球（ＳＲＢＣ）ロゼツテイング（ｒｏｓｅｔｔ
ｉｎｇ　）技術（２１）により分離した。簡単に述べる
と、５　Ｘ　１０’　／ｍｌＪ’ＢＬ’ｆｔ：　１　’
％のノイラミニダーゼ処可！シ／こＳ　／ｌ’　Ｉｉ　
ＣととモニインキュペーゾヨンＬ、−ｔＬ？ロゼツト細
胞をＴａＩ胞と表示した。精覗これた１３１Ｊンパ球を
ロゼツト細胞から、残留Ｔ細胞の除去により、ｐａｎ　
Ｔモノクロナル抗体０ＫＴ１１および補体を用いて１４
＋た。精製きれたＯ　Ｋ　Ｔ、およびＯＫ　Ｆ。

細胞は、リンパ球１１０７／ゴ）全１μｌのそれぞれの
モノクロナル抗体で処理し、次いで補体ゲ溶解すること
により得た。死んだｌ１１ｕ胞ゲフイコールーハイ・９
−り勾配により除去し、そして部分集団（５ｕｂｓｅｔ
　）の純度を螢光標識モノクロナル抗体金柑いてＵ　Ｒ
Ｔ　ＩＩ　Ｏスペクトル■サイトフルオａグラフ（ｃｙ
ｔｏｆｌｗｏｒｏｇｒａｐｈ）（Ｕｒｔｈ。

１）ｉａｇｎｏｓｔｉｃ　Ｓｙｓｔｅｍｓ　）で評価し
た。１００鶴のペトリ皿（ＦａＬＣｏｎ）上に１０−の
９７２５球ｆｌＯ’／ｍｌで１葭〈ことにより、付着性
細胞を除去した。細胞を３７℃で２〜３時間インキュベ
ーションした。非付肩性細胞を培地から回収し、次いで
おだやかなピペット処理により洗浄＋、ｆｃ。

エチレンジアミン四酢ｍ（ＥＤＴＡＸ　Ｏ，２ミリモル
、Ｇｉｂｃｏ）の添加により、付看性細１ＩＬＩ平板培
地から解放させた。これらの技術を用いると、Ｔ　１７
７８球に付着性細胞の除去前において９５％ＯＫ　’ｒ
　Ｌ　１　”　オＪ：ヒ１〜２　’ＶｏＯＫ　Ｍ　１　
ｆアｋ＞、そして付着性細胞の除去後において９６％０
ＫＴ１１＋２よびＯＫＭｌ−であった。Ｂ細胞は付着性
細胞の除去前におい−（ＯＫＴｌｌ−１６８％Ｉｇ　お
よび２０％ＯＫＭ　１　であり、そして付着性細胞の除
去後７８％Ｉｇ　および、２％ＵＫＭ　１　であった。

Ｆ　Ｉ　ＴＣ複’ＪＦｉ（（、”ｏｎｊｒｔ、−ｇａｔ
ｅｄ）モノクロナル抗体分用いるｔｉｗ：＊光技術によ
り、ＯＫＴ　１１０着色（ｓｔａｉｎｉｎｇ　）’ｆ−
施した。Ｉｇの着色はＦＩＴＣ復台ヤギ抗ヒトＩｇ（Ｍ
ａｌａｙ）の使用により笑かハし、セしてυＫＡ１１の
着色はＯＫＭｌお工びＦＩｒＣ複合ヤギ抗マウス１ｇ（
Ａｌｅｌｏｙ）のｉ四相による直接螢光着色技術により
実施した。すべてのＯＫモノクロナル抗体は、オーツ・
ダイアグノスチツク・システムズ（Ｏｒｔ）Ｌｏ　Ｄｉ
ａｇｎｏｓｔｉｃ　Ｓｙｓｔｅｍｓ　）により供給され
た。

実施例　■ リンパ球の増殖 ＴＨＥＩ４Ｆａ（７）増殖ニアＸ１０’　−１０’　ヒ
ト７’ｌＪンパ球２Ｕ形の底の戴小力価の向形宋養培地
（Ｆｌ　ｏｗ　）中で０．１％ｐＨＡ−ＰｉたＶま’／
１４ｐＷＭの存在下に４１：１ｌＩＪ】培養した。３ｕ
チミジン（ｔｈｙｍｉｄｉｎｅ　ｌ　（０，１ｕ　Ｃｉ
　／（はみ）を、培養期間の最後の６時間の間に加えた
。Ｔ細胞依存性Ｂ細胞の増殖：２ＸｌＯ’７’細胞およ
び１０１１Ｂ細胞を１／６４希釈のＰｉ／７　Ａノの存
在下に４Ｂｉ！Ｊ−緒に培養した。３Ｂチミジンを培養
朝間の最後の６時間の間に加えた。Ｂ細胞の増殖金、培
地へＴ細胞會加えないで、正確に同じ方法で実施した。

すべての場合において、細胞を引き続いて沖紙上へ多く
ぼみ自動化細胞収穫器（ｍｕｌｔｉｐｌｅ　−ｃｈａｎ
ｎｅＬ　ａｕｔｏｒｎａｔｅｄ　ｃｅｌｌ　ｈａｒｖｅ
ｓｔｅｒ（Ｆｌｏｗ）により収穫し、蒸留水で反復洗浄
した。、細胞に１欄連する放射能を、自動化カウンター
でシンチレーション計数により測定した。ｘ１〜果のす
べてに、次式に従い計算した応答％として表わした： 対照培養物のｃｐｍ 実施例　Ｖ 同時培養（Ｑｏｃｖ、ｌ　ｔｒｂｒｅ　）　実験リンノ
ソ球を３　Ｘ　１０’細胞／πｅにおいて神々の希釈の
６Ｔ−２Ｏ５ＩＰ′！ｌ−たけ生長培地で２４時間処理
した。細胞をよく（３〜４１「」−１１洗浄して残留す
る６Ｔ−２０ＳＩＦを除去し、その代イＳ１１図および
第１２図に示す神々のＬＩｊｌ　Ｉｆの異型的Ｔ細胞お
よびＢ細胞で同時培養検定を開始した。７”　４１１胞
増殖検定において、種りの濃度の培養した細胞）　６Ｆ
ｘ　１０’　の’ＪＲ鮮ｆｘ　ＴａＩ＊ＪＬ　Ｏ，１％
Ｐ　ＩＩ　ＡノアＪ−右下に加えた。Ｔ細＠銹導Ｂ則胞
増η１１倹定において、槙々のａ度の培養した細胞をλ
ＸｌＯ’　Ｔ細胞および１０”Ｂ細胞へ１／１４希釈の
ｐｉＶＭの存在下に加えた。Ｂ細胞増殖検定において、
種々の一度の培養した細胞を１０’　Ｂｄｌｌはへ１４
４希釈のｐ　ＩＦ　Ｍの存在下に加えた。細胞を４日間
培養し、（ＭＬＣ）実験において、神々の希釈の培養し
た細胞を、１０’ｍｉｔ　−Ｃ処４ＳＢｈａ胞（Ａ７′
ｃｃから入手したヒトリンノゼ芽球様細胞、ＡＴＣＣカ
タログ舎号ＣＣ’Ｌ１２０、系統名ＣＣＲＦ−８Ｂ。

３０　ｐ　、ｌｉ’　／　ｍ７！の５ｉｔ−Ｃ’、３０
分）で刺激した５Ｘ１０’７“リンパ球へカロえた。渭
ＩＩＩ収を５日ｉｉｊ培養し、３〃チミジンケ培養期間
の最後の６時ｆｉｌの間に加えた。細胞の培養を前述の
ようにして実施した。応答％は、次式に従って計−ｔＳ
：＋、た。

実施例■ ヒト：５ＸＩＯ’またはｌｏｌ′ヒトＴリンノぐ球を、
１０’　ｍ１ｔ−Ｃ処理した（３（ｌｆ／ｄ／１０’細
胞、３７℃において３０分１…）異型的非ロセット　（
ｎｏｎ−ｒｏｓｓｅｔｔｅｄ　）細胞、オートローガス
非ロゼツト細胞またはＤＢＡ牌細胞（異種間のａ　ｊｌ
！　）とともに５日間培養した。３Ｂチミジンを培養期
間の最後の１２時間の間に加えた。マウｘ：　２ｘ　ｔ
　ｏ’　（’５７／／Ｊ６１１１？＊１ｌ−１１４Ｌｌ
ｅ２Ｘ　ｌ　Ｏ’ｍ１ｔ−Ｃ処理したＤＢＡ牌卸Ｊ胞と
ともに５日間培養し、そして１ｕチミジンを培養地１＃
４］の岐佐の１２時間の闇に加えた。応答自分率は、リ
ンパ球増殖の検定に使用したのと同じ式に債−って自１
算した。

同時培養検定のため、６Ｔ−２ｏｓＩＦまたは培地で予
備処理した１９７７４球の撞々の希釈物を、５ＸｌＯ’
の新鮮なＴＩ！ｌ１ｌＩｌ！１とともに、刺激体細胞と
して１０’ｍ１ｔ−Ｃ処理ＳＲ細胞を用いて同時梠養し
た。ｒ（１１側を５日間培産し、そして３Ｈチミジンを
培養期間の最後の６時間の１川に加えた。

実施例ｖｎ 細胞傷害性Ｔ細胞恢定 精製した１９７２球を、５チヒトＡＢ血清を含有するＲ
ＰＭＩ中にＬＯ”／ｍｅで瞥濁させた。１００μｔの細
Ｄｉ９．　’ｔ：　、Ｕ形の底の微小力価のくぼみ中に
、ｌ　Ｏ’　ｍ１ｔ−Ｃ処理ＳＢ細刈（３０μ？ｍ１ｔ
−ｃ、３ｏ分ｉＭＩ）　オよびｔｔｆｉ　ｋ　（７）　
ｆ６釈ノｌ’ｓＦと一節に入れた。３８後、１０　’　
”　Ｃｒ　Ｍ　ＳＢ細胞を各くほみへ加え、そして平板
冶池を１０００ｆで１０分１「１１回転させた。３７℃
ＶＣおいて４時ｆｉｌンキュペーションした≠、１００
μＶの上澄みを取り出し、ベックマン（１３ｅｃｋｍα
ｎ）ガンマカウンターでぽ１数した。＃ｌＩＩ胞・Ｄｆ
ｉ害率係を、次式に従って計算した： （ＳＲ細胞刺激培養物により 実施例ｖｍ 細胞不含上記み１に３０分間１ｏｙｎｅｔで酸性化しあ
るいｒｊ、　Ｉ　ＯＡ’　Ｎｏ、０１１でアルカリ性と
し、次いで中性の７Ｊ／／にもどしｌこ。対照は前５己
のｌｌＣｌまたはＮａ０１１の代わりに培地で構成した
。

熱の不ｌ舌性化 ６Ｔ−２Ｏ３ＩＦを５６℃の浴中Ｔ　：（０分間不活性
化した。

トリフ０シンを６Ｔ−２ｏｓＩＦへＯ１係の最終禰度で
η目え、３７℃において２１＋１＋ＪＪインキユベーシ
ヨンした。酵素のＪヌＧｆ’）ｌま、Ｆｅ２をＬＯチの
最終濃度に厳加することにより停止した。対ロー、はト
リアジンの代わりに培地で構成した。

硫酸アルミニウムの沈殿 細胞不言上ｒｔｆみをＩ　Ｏ，０００ｒｐｒｎで２０分
間遠心して破片（ｄｅｔｂτ１ｓ）ｆ除去した３１次い
で硫扉アンモニウムを徐々に加えて、カン終曲に５０係
の硫酸アンモニウム綱耽にした。４５分間か＠まぜた恢
、酢液？ｌ１−１０．０００　Ｑ１７／Ｌで３０分ＩＭ
Ｉ　Ａ心した。

沈殿はザプレッサーｌ占性勿′８鳴し、これをＰＢＳに
対して完全に透析させた。すべての工程ｆ！：昂°時に
実施し、ｐｈをｐ　ＩＩ　７．０〜７）ツノ７．４のＩ
ＮＩに維持した。

■ セフ７クリル（Ｓｅｐｈａｃｒｙｌ　）　Ｓ　−２００
カラツーグレツサー活性を首肩する５０％の硫酸アンモ
ニウムの分画を、セファクリルＳ−２００スーパーファ
イン（５ｕｐｅｒｆ　ｉｎｅ　）　カラムでさらに精製
した。このカラムをリン酸塩緩衝塩水（ｐｈｏｓｐｈａ
ｔｅ−ｂｕｆｆｅｒｅｄｓａＬｉｎｅ）　（ｐＢｓ）と
平情化させた。流速を３Ｏｍｅ１時とした。２　ｍｅの
透析した５０％の眺Ｉ″！呪アンモニウムで沈殿した分
画をカラムに適用した１、それをＰＢＳＣ溶離し、５ｔ
ｒｔの体ｆｉｌｔ集めた。タン・ζり′ｌのノ′ロフイ
ルケ２３９？ｌ−ｍにおける光学６度のｎｌ：ｔメ１り
により追跡した。

ＣＥＭ、６Ｔ−ＣＥＭおよびそのサブクローンによる抑
制性上澄みの生産（第１図） ６Ｔ−ＣＥＭ、リンノ臂芽球ＪｌｌＴ！、浮ｌｉｔ胞禾
統ＣＥＭのチオグアニン抵抗性突然変異体は、ｐＨＡに
対するＴ細胞の増殖を９５チのレベルに阻吾する高い力
価の抑制因子を生長培地中に分泌する（ｌＯ／ｌＯ実験
）。ここで１史用する散細胞系統ＣＥＭはサプレッサー
因子を分泌するが、この因子の力価は６Ｔ−ＣＥＨによ
り生産されたＳＩＦの力価の約１０００分の１であるこ
とを、本発明者は発見した。６Ｔ−ＣＥＭをサブクロー
ニングすることにより、１つのクローン６Ｔ−ＯＥＭ−
２０が得られ、これは６Ｔ−ＣＥＭよりも１０倍大きい
押粕１盲古１牛を生り父した（第１図）。５Ｔ−ＣＥＡ
ｉ−２０は８か月間以上の間安定なレベルの因子の生産
をボしつづけた。６Ｔ−ＯＥＭ−２０の上澄みをここで
６　Ｔ−２０５１Ｆと呼ぶ。６Ｔ−２０５１Ｆの抑制活
性（５０係のｌ、ｊ−、、答）はまた１Ｏ−９の希釈で
観測された。

Ｔ卸１胞の異なる部分集団への６１−２　ＯＳ　Ｉ　Ｐ
のＴ？ＡＩ胞をモノクロナル抗体仲介補体勾配によりＯ
ＫＴ　４　および０ＫＴ８　の細区分に分別した。

死んだＩＩｄ胞をフィコ−ルーツ・イ・ぐ−り勾配で除
去した。精製され７１Ｌｃ＃ｌ＠は９５チが′１ミ存し
、螢光抗体標識づけによりＫＭしかつ０ＲＴＫＯスペク
トルｌｌサイト７ｏｏメーター（ｃｙｔｏｆｌｏｒｏｍ
ｅｔｓｒ　ｌで測定したーとき、９０〜９５％の純度を
示した。

０ＫＴ４（ヘルツぐ−／誘導物質）およびＯＫＴ　８（
サプレッサー／細胞傷害性）の部分集団への６７−２０
５ＩＦの差別的効果は第２図に示されている。

６　Ｔ−２ＯＳ　Ｉ　Ｆは細胞ｊ”Ｊ　’＋Ｍ　＋ａ　
＋Ｑ＋’ｉにより抑制しない。トリノクンブル−（ｔｒ
ｙｐａｎ　ｂｌｕｅ　）　の存在下に積極的に着色する
細胞のＶｉは、ミトゲンまたはアｏ　＋、７ｔ、原（ｎ
、１ｌｏａ、ｎｔｉ（Ｈｎ）　の不存下に３〜７田山培
養したとき、増加しない。

Ｂ細胞増殖への６７−２０ＳＩｆｉ“の効果（第３図）
ミトゲン推進（ｍｉｔｏｇｅｎ　ｄｒｉｖｅｎ）　（Ｐ
ＩＦ’Ｍ）Ｂ細胞、Ｔａ胞またはＢ十Ｔ細胞の増夕１に
への６Ｔ−２ｏｓＩＦ抑制効果を研究した。６　Ｔ−２
０ＳＩＦはＢ細胞増殖をわずかに１Ｏ−１の希釈で抑制
したが、これに対してｒｔ、＋ｔ＋胞増熾のｔ９とんど
ｌＯＯチの抑制は１０−’の希釈において観測された。

Ｔ細胞依存性ＢＩＩ４１１胞の抑制は、６Ｔ−２０５Ｉ
ＰによりｌＯ″″４の希釈において部分的に抑制された
。同様な６結果は２つの他の実験において得られた。６
　Ｔ　−２０Ｓ　Ｉ　ＦｎＰＩＦ’Ｍ、ｐＨ４１、甘酸
を１０’″１の希釈において抑制しなかった。

６Ｔ−２Ｏ５ＩＰ誘導抑制の時間経過（第４図および第
５図） ６Ｔ−２ｏｓＩＦを培養期１ｈｉ）の開始時に加えたと
き観測される者しい抑制と対照的に、同じ細胞不含上澄
みの抑制効果はさらに２４時ｒｉ５彼に劇的に減少した
。ａＴ−２ｏｓＩＦを増養開始後４８時間に加えたとき
、抑制効果は観測されなかった。

最大の抑制を得るためには、最小の培養期間が４日であ
ることが重要である。３Ｈチミジンの吸収を培養開始後
４日ではなく３日に！′１１１足した場合、６Ｔ−２Ｏ
５ＩＰを培養期間の初めに加えると、抑制はほとんど観
測されなかった。

しかしながら、培養の全期１０１中に６Ｔ−２０５ＩＦ
がノ！Ｐ、＃ｉ的に存在することは、最大の抑制を達成
するためには、必・Ｉ２ではない。１９７８球を培地″
１ｆｃは１０−’　ｍｌ　６−ｉ希釈の６Ｆ−２０５１
Ｆで１０’細胞／　ｍｅおよび３７℃において８〜２４
時間処理した。次いでカ↓ｌｊ胞を３〜４回洗浄し、こ
こに６己載するようにして、ｐＨＡ誘風壇殖を行った。

第５図に見られるように　１０−８布釈の６Ｔ−２０Ｓ
ＩＦと８時ｆｂｔＪあルイＦａｒ　ｉ　Ｑ　−４希釈の
６　Ｆ−２０Ｓ　Ｉ　ｐと２４時間接触した１゛リンフ
９は、ＰＲＡ＃ｌＩｒｌ１．に応答して増殖しなかった
。

一方向混合リンパ球培養物への６Ｔ−２Ｏ５ＩＦの効果
（第６図および嚇７図） １０’　とトＴ細胞をｉｏ’異型異型ゼロゼット細胞　
Ｘ　ｌ　Ｏ’　ＤＢＡＪ１１１＃細胞また１ｚｉｏ’オ
’−トａガス非ロゼツト細胞とともに培養゛・シた。刺
激した細胞をｍ１ｔ−Ｃで処理して、増殖を阻止した。

第６図から理解できるように、６Ｔ−２０ＳＩＦは１０
−’の希釈において、アロ抗）ｙｐ　（ａｌｌｏａｎｔ
ｉ−１７ｇ？Ｌｌ、ゼノ抗％ｔ　（ｘｅｎｏａｎｔｉｇ
ｅｎ）およびオート抗原（αｕｔｏαｎｔ　ｉｇｅｎ　
）により刺激に対する１９７８球の増カリ的応答を抑制
した。

また、６Ｔ−２Ｏ５ＩＦをマウス牌細胞混台リンパ球培
養央砿において試験した。２ＸｉＯ’（１’ｓ　７　／
　１１６＋ｌＪｉ田１１包金、Ａ’ｌｌｉ々のｒＡＩＩ
Ｉｊｔの６７−２　ＯＳ７　Ｆ　（！：　、！：モｉ／
Ｃ１２Ｘ　１０　’　ｍ１ｔ−Ｃ’ｌＪｊ、埋Ｄ　ＨＡ
ｆｇ胞の存在下に培養した。第７図に示すように鯖ｊ（
１１１ｊされた抑制効果は、ヒトリンノ（球のそｔＬに
非富にＦＡ（以した。こうして６ｌ−２Ｏ５ＩＰは１電
の制限を示さない。

６Ｔ−２Ｏ５ＩＦのγ６性への熱、酸、アルカリお第８
図に示すように、トリフ゛シンとともに２時間インキュ
ベーションすると、（＾帽子の活性（’）　約９０安が
失なわれる。また、因子は熱処理に対して感受性であり
、５６℃において３０分牛でに不活性化きれる。上澄み
忙ｐＨ２，４ｉたけｉｏに滴定すると、活性は完全に破
壊されたが、ｐＨ６およびｐ　Ｍ　ｓ、　ｓにおいて因
子はわずかに５０％の活性ケ保持した。因子は生理的１
／（７，４）において最も活性でめるように思われる（
第９図）。

６　Ｔ　−２０Ｓ　ＩＦ　ｃ、）−ｂ７７　り　１ノ　
７゜　（Ｓ　ｅｐｈａｃｒｙｌ　”７２００　ｍｌの１
ｔ１１．ｌ胞不含上ン０み全、睡を夜アンモニウムの沈
殿により分別した。粘性の９０〜９５％を含有する５０
係の＋ｌｌ１ｔＨアンモニウムの分両全、セファクリル
Ｓ−２ＬＪＯカラム上に直いた。第１０図から理解でき
るように、ザプレッザー活性の大部分は・吊ｌタンパク
質ピーク中に出現し、因子の分子量は１１０，０００ダ
ルトン付近であることが示される。

６Ｔ−２０５ＩＦによるサプレッサー細１１１す、の縛
導Ｔリンパ球ｆ：３　Ｘ　１０’ρ１１胞／　ｍｅにお
いて異なる希釈の６Ｔ−２Ｏ５ＩＦまたは生長培地とと
もに２４時間インキュベーションした。細胞をよく洗浄
し、次いでｐＨＡ訪導増殖検定において５×１０’の新
鮮な異型的Ｔ細胞を用い、あるいはノ〕１＃’Ｍ誘導Ｔ
細胞依存Ｂ細胞の増殖侠定において２５ＸｌＯ’　Ｔｉ
（ｆｌ胞およびｌＯ％Ｂ？ｆＭＩ胞を用いて、同時培養
実験を実施した。第１１図から理解できるように、１０
””希釈のＢＴ−２Ｏ５ＩＦへ２４時間暴露した。１゛
リンノｅは同時培養実験において９０〜９　ｒ−ｓ％の
Ｔ細胞増殖を抑制した（抑制は３実験のうち３ｖＬ：、
おいて観測された。ＴＭ１１１胞詩４Ｂ細胞増殖は、は
ぼ１Ｏ−２布釈において部分的に抑制された。惧ｉｔ−
Ｃ処理ＳＲ細胞により刺激された一方向混曾リンパ球培
養（ＭＬＣ）における、新鮮なＴ細胞の増殖への６１’
　−２０５Ｉ　Ｆ処理Ｔ細胞の効果Ｆｉ第１２図に示さ
れている。６１’−２０ＳＩＦ予備処理Ｔ細胞は一方向
ＭＬＣにおいて投与量に関係する方式でＴ細胞の増′ｌ
＠を抑制し、そして抑制のパターンはミトゲン刺激の阻
害に類似した。

６７’　−２０８Ｉ　Ｆ処理リンパ球によるサプレッサ
ー因子の生産（第１３図、表５） ６Ｔ−２Ｏ５ＩＦまたは生長用地へ２４時間暴露し、次
いでよく洗浄した後、１９７８球をｌＸ１０６細胞／ｍ
／でＲＰＭＩ＋２ＳＦＣ５中に供給した。上澄みｔ−ｐ
ＨＡ誘導Ｔ細胞増殖検定においてサプレッサー活性を試
験するため、槙々の時間において収穫した。第１３図は
この時間経過の結果を示す。有意な電のサプレッサー活
性は２４時間において培地中に放出され、これに対して
Ｔ細胞サプレッサー因子（ＴＳＦ）の生産はほぼ４８〜
７２時間において最高レベルに到達したく３回の実験の
うち３）。

異なるリンパ様来団によるＴＳＦの生産およびその生産
への種々の処理および培養条件の効果を表５に示す。精
製されｆｃＴ細胞集団はＴＳＦＯ主要な生産体（ｐｒｏ
ｄｕｃｅｒ　）であるが、残留する付着性細胞（ａｄｈ
ｅｒｅｎｔ　ｃｅｌｌｓ　）（７）欠乏は生産される因
子の量に影響を及はさない（２笑験のうち２）。

＋ ０ＸＴ４　集団およびＯＫ７８　集団の両者は効力のあ
る生産体である。精製されたＢ細胞集団（Ｔ細胞の０．
１％より小）は、１′細胞が同一培養条件下で生産する
もののｈｈ／ｆ半分を生産する（２実験のうち２）。

ＴＳＦの生産は血清依存性を示す。血清不含培地は完全
な生産を皮付しないが、これに対して２チのＦｅ２の存
在は１９７８球によるＴＳＦの最高の分泌のために十分
であった。ｍ１ｔ−Ｃの処理および６０００　Ｈにおけ
る照、ｆｉＪは、６Ｔ−２０５１Ｆ処理細胞がＴＳＦを
作り出すｈｉ′″、力をほとんど完全に壊滅させた。２
０００Ｒまたは３０００Ｒｒおける照射は、ｉ”ｓＦの
生産を部分的にのみ破壊した。

ｐｌノ　Ａ誘導Ｔ細刀ト冒殖、　Ｐ＃７Ｍ誘４１゛イ州
月包依存Ｂ、ＨＢ胞増Ｗ４およびｐＨ’Ｍ誘導Ｂ細胞増
殖へのＩ“ＳＩ゛の抑制効果は第１４図に７Ｊ＜されて
いる。ＴＳＦはゼノｔｏ−”屈択において８５〜９０チ
のｌ）　１１　Ａ誘得ｌ゛細胞増殖を抑制したが、１０
−”希釈において１’　ｒｆｌｉＩ胞依存Ｂ細胞増殖？
Ｌ一部分的にのみ抑制した。ｌ）４７Ｍ刺激刺激ンパ球
の謂殖は、１０−’希釈においてほんのわずかに抑制さ
れただけであった（３実緘のうち３）。こうして、抑制
活性のパターンは６Ｔ−２Ｏ５ＩＦのそれに匹敵する。

６Ｔ−２０５ＩＦと同様に、ＴＳＦはプラーク形成性細
胞の生成に対して抑制効果をもた力い。

細胞傷害性Ｔ細胞の生成へのＴＳＦの効果は、表６に示
されている。Ｂ細胞リンパ芽球様細胞系統ＳＲに対する
細胞傷害性Ｔ細胞の生成は、１０−１程度に高いｍ度の
ＴＳＦにより影響を受けなかった（２回の実験のうち２
）。

リンパ球の種々の機能的部分集団への７’　ＳＦの差別
的抑制効果は、Ｔ　Ｓ　Ｉ’が非細胞傷害機構により抑
制することを示す。このことは研究によりさらに実証さ
れ、この研究において、ＴＳＦはミトゲンの不存在で３
〜５Ｂ１川培養したとき、トＩＪ／＃ンプルー染料の存
在下で積・１包的に着色する細胞の数を苅り口させなか
った。同様な−ホ児は６７”　−２０５ＩＦについても
４ｆｉ−夫であった。

ＴＳＦをＰＢＡ篩導Ｔ削胞増殖使定に、坏１書開始後オ
；；テ々の時間に加えた。培養期間の中間において加え
たとき、抑制活性は５０チだけ減少したが、ＴＳＦ全培
養期間の６町後の日に加えたとき抑−制効果はｎ測され
々かった。培養期間の初期の相にνけるＴＳＦの存在は
こうして耐大の→１１　ｔｔｉｌｌのために必豊であり
、これは６Ｔ−ｚＯ５ＩＦを用いたとき観測されるもの
に類似する。しかしながら、Ｔ、ＳＦ７．Ｈ培′改の開
始時に加えると、３口重たは４日のｐ　ｔｔ　Ａｇ導Ｔ
細胞増殖検定において’ｆ＋Ｎ　６１１」される百分率
にほとんど差が存在しない。６　Ｔ−２０５ＩＦは、他
方において、３日のレシナン訪導ミドゲネシス（ｍｉｔ
ｏｇｅｎｅｓｉｓ　）検定において１′細胞の増殖に対
して非常な抑制効果を示さなかった。

６Ｔ−２０５ＩＦは、最大の抑制を示すためには、最小
４Ｈの培養期間を心安とする。

単糖類およびインドメタシンによる抑制活性の阻Ｐ　Ｉ
Ｉ　、４　誘４７’　？ＫＩＪＩｎｕ増ｑｆＪへ（７）
　６７’　−２ＯＳＩ　Ｆ　オよびＴ　ＳＦの抑制効果
を、５０ミリモルのα−メｆルーｒ７／”／ド（ｍａｎ
、ｎｏｓｉｄｔｔ　）、フルクトース、ＮＡＧまたはラ
ムノースの各々、あるいは１０μｔ　／　ｍｌのインド
メタシンの存在下に試験した。

第１６図に示すように、試験した単糖類のすべてのうち
で、ラムノースのみは６Ｔ−２Ｏ５ＩＰおよび７’　Ｓ
　Ｆの抑制活性を遮断した（２実験のうち２）。プロス
タグランジンシンセターゼ１８１ｉ　・％　剤インドメ
タシンはいずれの、抑制活性に対しても効果をもたず、
こうしてプロスタグランジンｈＴ’分子は抑制の仲介に
参加しないように思わ扛る。

６Ｔ−２Ｏ５ＩＰによる遅延型過敏症反応（ｈｙｐｅｒ
ｓｅｎｓｉｔｉｖｉｔｙ　ｒｅａｃｔｉｏｎ）　の阻害
（第１７図） マウスにおける遅帆型過敏症の阻害を測定することによ
り、６Ｔ−２Ｏ８ＩＦの生体内効果を評価した。第０日
において、０３　Ｂ　）１ｊマウスを０．２ωのヒツジ
赤血球のｏ、　ｏ　１％酔液（静脈１７ｉ１（２Ｘ　ｌ
　（１’　Ｍｌｌｔｔβ」マウス）で免疫化した。ｉｔ
’、　４日および第５Ｈの各々において、５０μｔの６
　Ｔ−２０ＳＩＦのｌＯ係酎耐を各マウスの左足心に注
入した。対照として、５０．Ｌｔｔの２艮塩水を・１４
４日および第５日の各々において各マウスの右足磯へ注
入した。第５日に、３０ｔｔｔのヒツジ赤血球の２０４
　（ｔ４　′！ｂ、で谷足裏において対抗（ｃｈａｌ　
ｌａｎ！Ｉｅ　）させ、そして足裏の測定を２４時間作
に長側した。’Ｉ＞　１７図に示すように、スｌｊ＜ｉ
＋；された過敏症反Ｌ１・；は６Ｔ−２０ＳＩＦを投与
されたマウスに２いて有意に阻害された。この実施例は
望ましくないＴ細胞増殖を抑制するためのＳＩＦの生体
内の実用性を実部ニする。

ヒ）　ＩＪンパ芽球様細胞系統ＣＥＨの主題の６−チオ
グアニン抵抗性突然変異体は、生長培地中に高に力価の
免疫抑制因子を構成的に分泌する。

１Ｏ−０程度に高い希釈において細胞不含上澄み６Ｔ−
２Ｏ５ＩＰは、ミドダンおよび抗原の両者の刺激に対し
て少なくとも９０％の１゛細胞増殖を抑制した。Ｔ細胞
誘導Ｂ細胞増殖はより低い希釈の上澄み（ｌＯ−’　）
によってのみ抑制され、そしてミドダン誘導ＢＩｌｌｌ
胞増殖は１Ｏ−１の田１釈において部分的に影ｐｇ＋　
＝ｌ、受けるだけであった。

親系統ＣＥＭも生長培地中へ低いレベルの従来特性づけ
られていない抑制因子を分泌する。

Ｖａａｏｌｅ、　ｔｔｔ　ａｌ、が示すように、ＯＥＭ
上澄みはミトゲン防導Ｔ細胞増殖をｌＯ−〇・畠希釈に
おいて５０チたけ阻害した。本発明渚が使用し７’Ｃ親
ＣＥＭは５ＸｌＯ−”希釈で同程度の１う１１害を達成
できたが、この＠央は従来知られていなかった。

これと対照的に、主題の突然変異体細胞系統およびその
最も生産的なサックローンはそれぞれ１Ｏ−６およびｌ
Ｏ−＠の希釈において同程度の阻害を示すことができる
。６−チオグアニンにより誘導された親細挿系統よりき
わめて増大されたｓＴ−ＣＥＭおよびそのサブクローン
によるこの分泌は、酵素のハイボキサンテングアニンホ
スホリがジルトランスフェラーゼ（ｈｙｐｏｚａｎｔｈ
ｉｎｓｇｕａｎｉｎａ　ｐｈｏｓｐｈｏｒｉｂｏｓｙｌ
　ｔｒａｎｓｆｇｔｒａｓｅ）（ＨＧｐＲＴ）　の欠乏
に関係しないように思われる。なぜなら、ＨＧＰＲＴが
同様に欠乏するアザグアニン抵抗性ＣＥＭは親系統ＣＥ
Ｈに比べてＳＩＦの生産の増大を示さ彦いからである。

Ｖｔｔｓｏｌｇ、　ａｔ　ａＬ、およびＩｒｉｇｏｙｅ
ｎ　ｔｔｔ　ａｌ。

により代表される先行技術の状態に基づくと、このよう
に高い力価の５ＩＦｆ：分泌するＣＥＨの６１感受性突
然変異体または他の細胞系統をつくることができるであ
ろうことは最も驚ろくべきことである。

上に示したように、ＳＩＦの生産のげく犬な増大は初め
てその精製および特性づけを可能とした。

６Ｔ−ＣＡＭ−２０、ｆ３Ｔ−２０ＳＩＦの細胞不含上
澄みは、ｐＨＡ刺激に対するＯＫＴ　４　およびＯＫＴ
　８　の両者の集団の増夕直を寺しくよく抑制した。フ
ル１ｔ−Ｃ処理し、刺市された細胞による１９７１球の
異型、異種間およびオートロガス刺激は、マトグン刺激
と四球な方式で抑制された。

６Ｔ−２Ｏ５ＩＦはマウス牌細胞の増殖をマドダン刺激
および同徨間（ａＬＬｏｇｅｎｉｃ　）刺激の両者に対
してまた抑制するので、樟の制限ヲ示さなかった。

最大の抑制４ノ釆會達成するために、６Ｔ−２Ｏ５ＩＰ
は培養期間の闘始に最適に存在する。６Ｔ−２０ＳＩ　
Ｆを培養開始後４８時間に加えるとき、抑制効果が暖測
されなかった。このことが示すように、６　Ｔ−２０Ｓ
　Ｉ　Ｆはミドｌ”７訪導増殖の早い段階の抑制に多分
参加し、終りの段階において？’Ｊｔとんどあるいはま
ったく効果ケ示さない。培壓期間全体（ｉｌ−通じて６
Ｔ−ｚｏｓＩＦが連続的に存在することは必要ではない
。なぜなら、６Ｔ−２０５ＩＦへ８〜２４時間暴露した
細胞はＰＥＡ誘導増殖に応答しなかったからである。こ
れ＆：ｔｆｌ留６Ｔ−２ｏｓＩＦの存在によっては起こ
りえない。

なぜなら最後の洗浄からの培地は抑制活性を含有しなか
ったからである。６　Ｔ　−２１Ｊ　Ｓ　Ｉ　Ｆは３日
の培養よりも４日の培養においてｐ　、／／　Ａ誘導Ｔ
細胞増殖をより大きく抑制したが、６Ｔ−２０５１Ｆの
不存在下のＰＩＩＡ−導増殖の程度は２つの培養期１川
の間の有意走を示さなかった。これらの発見は、６Ｔ−
２，０５ＩＦがリン／Ｊ球を誘導して、観測される抑制
を仲介する原因と々る第２因を分泌させることを示唆す
る。

■ セファクリル（ＳｅｐｈａｃｒｙＬ　）Ｓ−２００’ｙ
’Ａｎ）カラムクロマトグラフィーによる部分的精製は
、６Ｔ−２０５ＩＦが約１１０，０００ダルトンの高分
子瞳であることを示す。活性および光学濃度のプロフィ
ルはメルカプトエタノールまたは０．１モルの塩の存在
下に愛化しなかった。活性分画の５ＤＳｒル電気泳励は
、ｌｌｏ、０００ダルトン付近にタンパク員の主要帝を
示した。

ＣＡＭの主題の６−チオグアニン抵抗性突然変異体は、
ヒトＰＢＬを誘導してＴ細胞特異的サプレッサー因子（
ＴＳＩ？）ｋ生産させるサプレッサー−導物質因子を、
生長培地中に構成的に分泌する。因子はＩｖ４ＩＩ胞傷
害機構によりその抑制効果を発揮しない。なぜなら、イ
ンキュベーション後３〜５日において抑Ｔｈ＋ｌＪされ
た培養物と対照培養物との１山において、細胞の生存能
力に差が存在しなかったからである。

Ｔ＃ｌＩｌ！１増燗への６Ｔ−２０５ＩＦの効力のある
抑制効果は、次の理由でリンパ球性異的ＴＳＦの誘導を
介して仲介されると信じられる：ｌ）作用の標的は２つ
の因子についてｆｉｌ−である。６Ｔ−２ｏＳＩＦおよ
びＴＳＦの両者は、それぞれｌｏ−９および１０−”の
高い希釈においてミトゲンおよび抗原の刺激に対してＴ
細胞増殖を９０〜９５チ抑制する。ミトゲンに対するＴ
細胞依存Ｂ細胞増殖は、１０−’および１Ｏ−２のより
低い希釈の両者により部分的に抑制された。ミドダン誘
導Ｂ細胞増殖およびＢ細胞増殖はいずれによっても抑制
されなかった。２）抑制の時間経過は、ＴＳＦは直ちの
サプレッサー因子であるが、６Ｔ−２０５ＪＰはそうで
はないことを示す。培養の開始時に加えたとき、ＴＳＦ
は３日または４日の培養においてＰＨＡ誘導刺激に対し
てＴ細胞増殖を等しくよく抑制したが、これに対して６
Ｔ−２ｏｓＩＦは同一条件下１ｃ３日の培養においてわ
ずかに部分的抑制を示し、かつ最大の抑制は４日の培養
においてのみＱ’７測された。この観、測は次の事実に
よって説明することができる。すなわち、６ｒ−２ｏｓ
ｒｐはリンツク球からのＴＳＦの発生を誘導し、次いで
ＴＳＦは適当な抑制を仲介し、培養の開始と抑制の開始
との間の短い遅れ期間を生じさせた。したがって、４日
の最小の培養期間を最大の抑制のために６７”　−２０
ｓ　ｉ　ｐは必要とする。７’　ＳＦにつし＾て、直接
の抑制は培誉期間の開始時Ｖこリンパ球へ及＃グされ、
そして最大の抑制は７２時後に検出することができ、そ
の時間はＰＲＡ誘４利１胞のｆ工とんどその最大のレベ
ルに到達する時間である（ＰＨＡ？Ｌｆｊ得増殖が海常
第４日にピークに達する培養条件のもとて）。３）６７
’−２Ｏ５ＩＦにおよび７’　Ｓ　Ｆの両者の抑制活性
は単糖のラムノースにより遮断されたが、他の単結類た
とえばフルクトース、ＮＡＧまたはα−メチルマンノシ
ドによりあるいはプロスタグランジン阻害剤インドメタ
シンにより外！Ｉ　ｌ打ｒされ々かった。ラムノースの
イチ仕は６　Ｔ　−２０Ｓ　Ｉ　７”誘４ＴＳＦ生産の
レベルに！響を及１’！さなかりたので、ラムノースは
ＴＳＦを誘導する６Ｔ−２Ｏ５ＩＦの能力を妨害するこ
とにより６　Ｔ　−２０Ｓ　Ｉ　ｌ？のリンツク球抑制
活性を通断したとは考えられない。それゆえ、ラムノー
ス仲介遮断の標的は７’　Ｓ　Ｆ’である。

検出される１“ＳＦ活性は、リンパ球六面へゆるく結合
され、次いで引き続く老貢期間の間に上澄み甲へ１゛な
々に岸ｒ放さ扛ていく・残留６７’　−２０Ｓ　ＩＦに
単に原因したと思われない。なぜなら、３０μ／　ｍｅ
の＋ｎ１ｔ−Ｃで処理したリンパ球は、６Ｔ−２０５Ｉ
Ｆの暴露後、Ｔ　Ｓ　１？を生長培地中へ分泌しなかっ
たからである。２０００〜３０００　／＜で照射したリ
ンパ球は’ｒ　ｓ　ｐ生産ｈシカを部分的泣損失したが
、これに対して６０００７？照射は１”ＳＦ生産を究全
にＪａ滅させた。活性な細胞の代謝はＴＳＦの合成に要
求されるように思われる。

ＴＳＦは＃ｔｌｌ胞傷害性ｒＭＩ胞の発生捷たはＴ細胞
依存Ｉ７合成にほとんどあるいはまったく影＃を及ぼさ
ないで、９０％のＴ細胞増殖を抑制したということは、
注肱するに１１へする。これは次の仮説により説明でき
る。すなわち、ＴＳＦは、すべての部分集団の槍能的活
性に影響を及ばさないで、ミトケ゛ン刺激または同株間
刺激により開始される急速にｊＷ焔する集団を主として
抑制した。モノクロナル抗体を用いる研究により、０Ｋ
Ｔ４　およ十 びＯＫ１’ｓ　の両者の集団は同種［１１刺激およびミ
トケ゛ンの刺激の両省に対して等しくよく応答し、ＯＫ
Ｔ　８　集団内の部分集団のみはクラス■ＭＭＣ抗原（
２２）により刺激されたとき細胞傷害性エフェクター（
ｅｆｆｅｃｔｏｒ　）細胞となるであろう。Ｒｅ１ｎｈ
ｅｒｚ、　ｇｔ　ａｌ、　、（２３）およびＩ’ｈｏｍ
ａｓ　、ｅｔ　ａｌ、　、　（２４）　も、ＯＫ７’４
集団内のより小さい部分集団が１．全生産するＢ細胞へ
のヘルパー活性を提供することを明らかにした。これら
の特定の部分集団のり能的性質はＴｓＦにより影＃を受
けなかったように思われる。

Ｔ　Ｓ　ｌ？は抑制されたマウスＴ細ＪＪ’Ｕにおける
インタールーキン−２（ＩＬ−２１受容体の合成を阻害
するが、ＩＬ−２生産を阻害しないように思われる。こ
の観察はここに記載した結果を説明するであろう。

ＴＳＦの機能的特性は、それをコンカナバリン（Ｃｏｎ
ｃａｎａｖａｌｉｎ）　Ａ　（ｃｏｎ　、４）またはＰ
ｉＶＨの刺激の間にリンパ球により生産された他の可溶
性因子から明瞭に区別する（２５〜２７）。第１に、そ
れはＢ細胞の増殖またはＩ、の分泌に影響をはとんとあ
るいはまったく及ぼさないで主としてＴａＵ胞の増殖を
抑制する。第２に、それはＭＬＣ検定におけるＴ細胞の
増殖を抑制するが、同じ実際における細胞傷害性Ｔ細胞
の発生に影響を及ぼさない。第３に、Ｔ細胞の増殖を最
大に抑制するために要するＴＳＦの濃度は、これまで記
載されてきた他の可溶性因子よりも非常に低い（ｙ６ま
たは殉の希釈に比べてＩＩＭ”）。

ヒトＴ細胞により分泌された既知の免疫抑制性因子の大
部分は、Ｂ細胞の分化を抑制する。

Ｇｒｏｉｌｌｏｔ−Ｃｏｕｒｖａｌｉｎ、　ａｔ　ａｌ
、　＊　（１５）は、ＰＷＭ誘導３細胞の分化を抑制す
るがＪＴＦ’Ｍ誘導ＴまたはＢ細胞のミドゲネシス（ｒ
ｎｉｔｏｇｇｎｅｓｉｇ　）を阻害しないサプレッサー
因子を分泌する、ヒトＴ−Ｔハイツリドーマを最近構成
した。Ｆｌｇｉ−ａｈｇｒ　、　ｇｔ　ａｌ、　、（２
８）は、また、細胞仲介免役すなわちＭＬＣおよび細胞
傷害性Ｔ細胞の生成に抑制効果を与えないで、Ｉ、生産
を抑制するＢ細胞の免疫サプレッサースーパーネイト（
ｓｒｂｐｅｒｎａｔａ　）　（Ｓ　Ｉ　Ｓ　Ｓ　−Ｂ）
　の生産を報告した。これらのデータは、Ｔ細胞誘導Ｂ
細胞特異性サプレッサー因子がＴ細胞特異性サプレッサ
ー因子から区別される分子であることを示唆する。

Ｔ細胞増殖のよりよく特性づけられたリンノ七球　・サ
プレッサー因子のうちの２つは、Ｔ細胞増殖のヒト可溶
性サプレッサー＜５１５５−ＴＩ　（２５）および脂質
サプレッサー物質（ＬＳ、Ｓ）　（２９）である。５１
５５−ＴはコンカナバリンＡ（ＣａｎＡ）による活性化
時にＰＥＬにより分泌され、３θ〜４５，０００ダルト
ンの分子量ヲ有し、そして釣部の希釈でミトゲンおよび
抗原で刺激されたＴ細胞増殖を抑制した。５１５５−Ｔ
はＢ細胞の増殖および分化に対してほとんど影響企及は
さなかりた。５１５５−Ｔの抑制活性は、単糖ＮＡＧに
より遮断されたが、ラムノース、α−メチルマンノシド
またはフルクトースにより遮断されなかった。５１５５
−Ｔは５６℃において部分的に失活するが、酸また（は
塩基への長期間の暴露に対して安定であった。ＬＳＳｆ
ま皮膚Ｔ細胞リンパ腫（２９）から確立されたクローニ
ングされないヒト細胞系統により構成的に分泌され、ｌ
／１０００の希釈で活性であった。同様な物質はヒトＴ
細胞の抗原活性化された普通の培養物により分泌され、
殉希釈で活性であった。ＴＳＦは酸または塩基への長期
１■の暴露に対して不安定でありかつ非常に大きい分子
ｔをもつので、５１５５−Ｔに類似しない。ＴＳＦは１
Ｏ−１希釈で９０〜９５％のＴ細胞増殖を抑制し、これ
に対して５１５５−Ｔは１Ｏ−１希釈で４０〜７０％の
Ｔ細胞増殖を阻害した。さらに、ＴＳＦの抑制活性はラ
ムノースにより遮断されるが、ＮＡＧにより遮断され彦
いので、ＴＳＦおよび５１５５−　ＴはＴ細胞表面の異
なる受容体へ多分結合している。ＬＳＳは血清または　
□生長培地からエタノールにより抽出される脂質様物質
である。われわれの予備的精製研究から知られるように
、ＴＳＦはタンパク質または糖タンパク（Ｋ用分子であ
５．５０％の硫酸アンモニウム分画中で沈殿する。

また、６７’　−２０Ｓ　Ｉ　ＦはＰＩＩＡ活性化リン
パ球により分泌された増殖阻害因子＜ＰＩＥ’）と異な
る（８．９）。ＰＩＦの活性はＰＩＦが誘導されるのと
同じ柚の細胞に限定されるが、これに対して６Ｔ−２０
５ＩＦは種の制限を示さない。６Ｔ−２ｏｓＩＦは、同
様な効力をもって、ヒトＰＢＬおよびマウス）が細胞の
両者の増３１１！を同ｉｌｌ旧司刺激（αｌｔｏｇｅｎ
ｉｃ　ｓｔｉｍ、ｗｌα１ｔｏｎ）に対して抑制する。

ミドダン活性化リンパ球からの上澄今は、通常、生物学
的に活性な回心性仲介体（ｍｅｄｉａｔｏτ）様遊走阻
止因子ＭＩＦ　（２３）　、リンフォトキシン（ｌｙｍ
ｐｈｏｔｏｘｉｎ　）　（４，５）およびインターフェ
ロン（１０，３０）のスペクトルを含有する。＋ｊＡ＊
Ｑ的特性、生化学的性質および生物学的性＠、は、ｌ゛
ＳＦが前述の分子のいずれかと同一である可能性ｋ　４
’ｊＦ除−１゜６Ｆ−２０ＳＩＦ！ｄ、ＰＩＩＡ（Ｄよ
うな先行技術の物質と対照的に、知られている唯一の非
ミドｒンザプレツサーー導物質であることに注意すべき
である。

ＴＳＦの様態的特性、生化学的性質および生理学的性：
ｉは、それを文献中に記載された他のサプレッサー因子
から明瞭に区別する。こうして、６Ｔ　−２ＯＳＩ　Ｆ
および７’　Ｓ　Ｆは独！侍の因子である。

主題の突然変異体δ（上前系統およびサブクローンの生
産、ならひにそれらの性餉を下表にｉピ載する。

表１ ０．５　５１ ５　４３ １０　３２ ２０　５ ３０　４ ＩＣＥＭ細胞を種々の濃度の６Ｔに７日間輩露し、そし
て生存能力全色素排除により評価した。

表　２ ＣＥＭ　１００５Ｘ１０”ｊ ６Ｔ−ＣＥｋｉ　１０　１０−’ ６’ｌ’−ＣＥＭ　２　０　１０−’ ４　０　１０−’ １３　２　＞１０”’ １４　４　１０’−’ １７　２　＞１０”” １８　０　１０−’ １９　０　１０−’ ２０　１　１０−’ Ｉ　ＣＥＭ、６Ｔ−ＣＥＬおよびそのサブクローンを、
アミノプテリン（０，００５μ２〜０．５μ２／　ｍｌ
　）に対する感受性について試験した。０，０５μｆの
アミノゾテリ／へ７日間暴露した後の種々の細胞系統の
生存能力を示した。

２　Ｔ細胞増殖へのサプレッサー効果は、実施例■に記
載する方法に従って測定した。５０チの抑制を示す種々
の上澄みの希釈を示１．た。

“＞１０−’、”は５０係の抑制が１０−’より高い希
釈で得られたことを意味する。

４　Ｔ細胞およびＢ細胞の増殖へのサプレッサー活性を
実施例１■に記載する方法に従い測定した。

詳細については表２の注す参照。”（１０−Ｉ　ＩＩは
１０−１より低い希釈がｌ）細胞増殖の５０’ｌを抑制
するために要することを意味する。”＞　１０−”は５
０％の抑制が１０−６より高い希釈で達成されたことを
意味する。

５　同種間ＭＬＣへのサプレッサー活性は実施例Ｖに記
載する方法に従って測定した。５０循の抑制を示す上澄
みの希釈を示した”＜ｔｏ−’“はｌ　Ｏ−”より低い
希釈がＭＬＣ反応の５０ＬＬの抑制に必要であることを
意味する。

６　細胞傷害性Ｔ細胞の生成の効果を実施例■に記載す
る方法に従って測定した。上澄み＋　１０−’で使用し
た）処理細胞と培地処理細胞との間の細胞傷害性の差幅
を示した。

ｊ　ＴＳＦの誘導は実施例１１に記載する方法に従つて
測定した。Ｔ細胞増殖の５０ｑｂの抑制を示す種々の上
澄みにより誘導されたＴＳＦの希釈を示した。

表　４ ６Ｔ−ＣＥＭ−２０についての安定性のデータ１９８２
年７月〜９月　１Ｏ−７ １９８２年ｌＯ月〜１２月　５Ｘ１０−’１９８３年１
月〜３り　１０−７ １　抑制上澄みは６Ｔ−ＣＥＭ−２０から実施例■■に
記載する方法に従って調製した。

２　Ｔ細胞増殖への抑制活性は、実施例１ｖに記載する
方法に従って測定した。

表　５ リン・９球様細胞の異る集団によるＴＳＦの生産および
その生産への培養条件の効果 ″１０−’希釈のＴＳＦの存在下のｐ　１１　Ａ誘導Ｔ
細胞増殖検定における応答係。

ｌ　異る精製リンパ球様集団を３×１ｏ６／ｒｎ／ｌに
おいて２４時間１１５００希釈ノロ　１−２０　ＳＦの
存在下にインキュベーション【また。卸１胞をよく洗浄
し、次いで１０　’　／　ｍｌにした。上澄みを７２時
間後に収穫した。

２　Ｔリン／４’球を１１５００希釈ノロ　Ｔ−２０Ｓ
Ｆで（（１）に記載するように２４時間処理し、この表
に示すような異る濃度の血清の存在下に１０６／−にし
た。

３　Ｔす７　ｔ４球を１１５００希釈（７）　６　Ｔ−
２０ＳＦで（ａ）に記載するように２４時間処理し、次
いで３０μＶのｍ１ｔ−Ｃで３０分間処理するか、ある
いけ２００　ＯＲおよび６００ＯＲで照射し、次いで７
’　ＳＦ生産のために１０’／ｒｎ／！とじた。

表　６ −６９ １０””　６７ １０−”　６６ ５Ｘ１０−２６２ ＩＱ−１６２ １１０’７’リンパ球をｌＯ’ｒｎｉｔ−Ｃ処理ＳＢ細
胞とともに３〜５日間種々の濃度のＴＳＦの存在下に培
養した。５１Ｃｒ標識ＳＢ細胞を細胞傷害性についての
標的として使用した。細胞傷害性係は、実施例■に記載
される式に従って計算した。

実施例　ＩＸ 一般に、患者からのリンパ球の応答は、種々の自己免疫
病たとえば全身的紅斑性狼癒の診断に使用されてきた［
Ｇ、Ｍ、Ｋａｔｎｍｅｒ　ｅｔ　ａｌ、、ｔｈｅ＋１９
７９）：およびり、　Ｂ、　Ｋ’ａｕｆｍａｎ、ｅｔ　
ａｌ、、Ｃ１１ｎｉｃａｌ　Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ　ａ
ｎｄ　Ｉｍｍｕｎｏｐａｔん〇−１ｏｇｙ、１３．９　
（１９７９）参照〕ヒドリンツク芽球様細胞系統ＯＥＭ
の６−チオグアニン抵抗性突然変異体は、ここでＳＩＦ
と呼ぶ高い力価の免疫抑制因子を分泌する。この因子は
誘導性ヒトＴリン・１球を介して１゛細胞サプレツサー
因子１“ＳＦを分泌することを抑制する。この内因性サ
プレッサー因子は、多分、文献にこれまで記載されてき
たいかなるＴ細胞サプレッサー因子よりも、きわめて活
性である。このような内因性因子が免疫応答の調節にお
いて重要な生理学的役割を演することができると期待す
ることは合理的である。

本発明のＳＩＦを使用して人間におけるリューマチ性関
節炎を正確かつ精密に診断することができることを今回
発見した。これは後述するように比較的安価なかつ速い
手順である。

プロトコール 次のプロトコールは異る年金の群による正常の個体間の
ＴＳＦ生産の変動、正常の個体間のＳＩＦへの応答の毎
日の変動および試験自体の恒常性を考慮する。一般に、
このプロトコールは、次の工程を含む。すなわち、患者
から全血を取り、単核（白色）ｉ胞を単離し、単核細胞
をヒツジ赤血球（Ｓ　Ｒ／３　Ｃ）でロセッテインｙ　
（ｒｏｓｅｔｔｉｎｇ　）してＨ＋　を赤血球のロゼツ
テイング）細胞を単離し、そして本発明のＳＩＦととも
にインキュベーションした後、Ｅ子細胞によるＴＳＦの
生産を試験しくＡ試験）そしてＳＩＦおよびＴＳＦの両
者とともにインキュベーションした後、Ｅ　細胞の同一
試料の応答を試駆する（Ｂ試験と呼ぶ）。／Ｉ試験を用
いて、評価する特定の患者が患者自身のＴＳＦへの１非
応答体ｉ　ｎｏｎ　−ｒｅｓｐｏｎｄｅｒ　）″でない
ことを確かめる。

１’、４０＋ａ／のべ／ぞリン化血液を１５００５Ｎ正
常の重力の１５００倍）で１０分間回転する。

２、軟膜を取り出し、フィコール−ハイ・ぞ−ク勾配（
Ｆｉｃｏｌｌ　−１１１ｐａｑｕｅ　ｇｒａｄｉｅｎｔ
　）上に層状にする（５ｍ／のフィコール−ハイバーク
に対して７＋＋＋／の軟膜）。次いで管を１５００　ｆ
で３０分間回転する。

３、　界面の単核細胞を取り出し、υノ酸塩緩衝塩水Ｉ
　Ｐ　７？　Ｓ　）で３回洗浄する）。

４、洗浄した単核細胞をＲＰＭＩ　１６４０および１０
９６胆児子牛血清＋ｐＣｓ）中に５Ｘ１０’／７で懸濁
させる。ｌπｌの０，１憾のノイラミニダーゼ処理した
Ｓ　ＲＢ　Ｃを５−の単核細胞へ加え、この混合物を約
２０分間静置する。管を１０００２で２０分間フィコー
ル−ハイバーク勾配の上で回転する。

５、非ロゼツトＩｎｏｎ−ｒｏｓｅｔｔｅｄ　）細胞（
Ｂリン・ぞ球および単球および付着性細胞）は界面に存
在し、そしてｅｌセット（ｒｏｓｅｔｔｔｔｄ　）細胞
は５ＲＢＣとともに沈殿物中に存在するであろう。次い
で５ＲＢＣを塩化アンモニウムで回収することにより、
１９７７４球を沈殿物から回収する。Ｔリン／４’球を
ＰＢＳで３回洗浄する。

６、洗浄したＴす７１球を２つの部分に分け、１つをＳ
ＩＦ誘導によるＴＳＦの生産（Ａ試験）に使用しそして
１つをＳＩＦまたは７’　Ｓ　Ｆの標準調製物へのリン
ノソ球の応答の試験（Ｂ試験）に使用する。

７、Ａ試験：　７’　Ｓ　Ｆの生産を試験するため、３
×１０’　ＴＩＪン・ぞ球を生長培地（ＲＰＭＩおよび
１０チＦＣ５）あるいは５　Ｘ　１０−”希釈のカラム
精製したＳＩＦとともにインキュベーションする。

ＳＩＦの生産はこの明細書の実施例１１に記載されてお
り、そしてフラクトグル（Ｆｒａｃｔｏｇｅｌ　）のカ
ラムの精製は後述する。２４時間のインキュベーション
後、細胞をＰＢＳで３回洗浄【７、ＲＰＭ１１６４０お
よび１０係ＦＣ５中に１０６細胞／　ｍｅで再懸濁する
。ＴＳＦを含有する上澄みを３日後に集め、そしてＳＩ
Ｆにより誘導されたＴＳＦ活性を下の≠９に記載するｐ
　１１　Ａ　誘導Ｔ細胞増殖検定において同日に応答体
として正常の供給体のリンパ球を用いて、試験する。

フラクトグル（Ｆｒａｃｔｏｇｅす、ＴＳＫ　ＩＩＷ−
５ｓｌＦ）カラムのクロマトグラフイー：サグレッサー
活性（ＳＩＦ）を含有する５０憾の硫酸アンモニウムの
カット（ｃｒｂｔ）を、ラクトグルＴＳＫＨＦ−ｓｓ（
Ｆ）カラム（２，５ｃｒｎＸ　５０ｃｍ）でさらに精製
する。このカラムをα−ＭＥＮで平衡化し、流速を３０
ｒｎｌ／時とする。２ｍｌの透析した５０係の硫酸アン
モニウム沈殿分画をこのカラムに適用する。それを緩衝
液α−ＭＥＭで溶離する。

４−の分画を集める。２８０ナノメートルで光学濃度を
読むことによりタンパク質のプロフィルを追跡し、そし
て＋９に後述するｐＨＡ誘導Ｔ細胞増殖検定を用いて抑
制活性を監視する。

８　Ｂ試験：ＳＩＦおよび７’　Ｓ　Ｆの標準調製物へ
の応答を試験するため、患者からの７’　１７７８球を
１０　’　＝ａ胞／ｒｎ／でＲＰＭＩ　１６４０および
１０４ＦＣ５中に懸ｌ葡てせ、そして＋９に後述する。

ＰＨＡ訪棉Ｔ　＋１ｉｉｊｌ胞増９ｆ４検定において、
応答体として患者の１９２７９球を用いてＳＩＦまたは
ＴＳＦへの応答を試り韓する。

９、ＰＨＡ詩碑詩碑側細胞増殖９７２球を１０６細胞／
　ｍｌでＲＰＭＩ　１６４０および１０　’６ＦＣ８中
に懸濁させる。これらのＴ　ＩＪ　／・ぞ球は正常の個
体から入手ｉ〜、そしてＴＳＦの再現性応答について前
もってスクリーニングしたものである。

１０μｔの細胞をＵ形の微小力価の固形培地（ｐｌａｔ
ｅ　）の各〈はみ中へ入れる。種々の希釈のＴＳＦ（Ａ
試験）およびＳＩＦまたはＴ　Ｓ　Ｉ？　（Ｈ試験）を
２０μｔの容量で各くぼみへ加える。

８０ｕＬの１／４００希釈のＰＪＩ　Ａ　−Ｐ　（Ｗｅ
ｌｌｅ−ｏｍｅ）を各くぼみへ加える。固形培地を４日
間インキュベーションし、８Ｈ−チミジンをフロー−セ
ル収穫器（Ｆｌｏｗ−ｃｅｌｌ　ｈａｒｖｅｓｔｅｒ　
）による収穫の前の４〜５時間に加える。３回の反復実
験を各希釈の７”　Ｓ　ＦまたはＳＩＦについて行う。

検定ごとに、既知の活性のＳＩＦおよびＴＳＦを未知の
試料とともに標準化の目的で同時に使用する。

１０、データの分析：すべでの試料をインターテクニー
ク・シンチレーション・カウンター１１ｎｔｅｒｔｅｃ
ｈｎｉｑｕｇ　５ｃｉｎｔｉｌｌａｔｉｏｎ　Ｃｏｗｎ
ｔｅｒ）で計数する。コンピューターの出力は３回の反
復実験の３Ｂ−チミジンの吸収の平均および標準偏差（
ＳＤ）を示し、そして次式に従って応答幅を計算する：
反応答４＝（ＴＳＦまたはＳＩＦ処理培養物のｃｐｆｎ
／培地処理培養物のｃ　ｐｍ）　Ｘ１００゜次いで応答
幅を抑制の誘導に使用したＴＳＦまたはＳＩＦの適当な
希釈に対してプロットし、そして最もよく適合する線を
データの点を通して描いて勾配を構成させる。次いで５
０幅だけ応答を抑制するＴＳＦまたはＳＩＦの希釈を計
算する。勾配は次式に等しいと考える：勾配＝（Ｙｌ−
Ｙｔ　）　／　（Ｘ１Ｘｔ　）ここでＹｌは１００係で
あり、Ｘｌは０であり、Ｙ２は５０％であり、そしてＸ
２は５０憾の抑制を与える希釈である。

１１、次の年令の群の各々からの１０〜１５の正常な個
体を試験した：２０〜４０．４１〜５０および５１〜６
５゜選択した正常な個体を毎月試験して、正常な個体間
の毎日の応答の変動および検定の恒常性を評価する。

３２の正常な個体およびリューマチ性関節炎をもつ６０
個体からの血液試料を、前述のプロトコールに従って試
験した。結果を下表７に示す。これらの結果から明らか
なように、リューマチ性関節炎をもつ患者のＴＳＦ活性
は同様な年令群の正常な個体から得られたものよりも有
意に低い、すなわち、メジアン＝９Ｘ１０−”これに対
し８．５〜９×１０°４゜一般に、リューマチ性関節炎
をもつ患者についてのこの試験におけるＴ細胞増殖の５
０％抑制を生成するために必要なＴＳＦの濃度は、正常
な個体から生成するときのＴＳＦの濃度よりも少なくと
も１０倍高い。こうして、本発明によシ生産されるＳＩ
Ｆはリューマチ性関節炎の診断において有用であること
が示された。

要約すると、本発明のこの面は、ｉ）人間の患者からの
ＴＩＪンノク球を標準かつ有効Ｔ細胞サプレッサー因子
誘導濃度の本発明のサプレッサー誘導物質因子で処理し
、ｉｉ）生産されたＴ細胞サプレッサー因子の活性を決
定し、そしてｉｉｉ　）工程１１）において得られだＴ
細胞サプレッサー因子の活性を、本発明のサプレッサー
誘導物質因子によりｉ導されたＴ細胞サプレッサー活性
の対照値と比較することからなり、前記対照値は人間の
正常な個体およびリューマチ性関節炎をもつ人間の個体
から得られる、人間の患者におけるリューマチ性関節炎
を診断する方法からなる。

表　７ １　１、ｌＸ１Ｏ−’ ２　５ｘｉｏ−ｓ ３　６Ｘ１０−’　、５Ｘ１０−’　、５ｘ１ｏ−’＊
４　９Ｘ１０−’　、２Ｘ１０−’ ５　５．５Ｘ１０”　、６．２Ｘ１０”＊６　？Ｘ１０
−’ ７　７．０Ｘ１０”’ ８　１．２Ｘ１０” ９　７Ｘ１０−’ １０　８Ｘ１０−” １１　９Ｘ１０−’ １２　６．５Ｘ１０”’ １３　６．４Ｘ１０−’ １４　７．９ＸｌＯ−’ １５　７．３Ｘ１０鴫 １６　６Ｘ１０−’ １７　６．８Ｘ１０−’ １８　７．５８１Ｏ−’ 供給体１−１８は年令が２１−４０才である。

ｎ＝　１８ メジアン＝７．０Ｘ１０−４ １９　８．３Ｘ１０一番 ２０　６Ｘ１０−３．ａ２Ｘ１０−”＊２１　５．５Ｘ
ＩＯ” ２２　８．５Ｘ１０−’ ２３　８、ｌＸ１０−’ ２４　７．３Ｘ１０−３ ２５　７Ｘ１０−４ 供給体は１９−２５は年令が４１−５０才である。

ｎ＝７ メソアン＝８．３Ｘ１０−’ ２６　８Ｘ１０−’　、１０９＊ ２７　８．４Ｘ１０−’　、８Ｘ１０”２８　９Ｘ１０
−’ ２９　７Ｘ１０−’ ３０　９Ｘ１０−４ ３１　７Ｘ１０−’ ３２　８Ｘ１０”” 供給体２６−３２は年令が５ｌ−６ｓ才である。

ｎ＝７ メソアンー９ＸｌＯ−４ ＊ＴＳＦ活性は１回よシ多く試験した。

１　＞１０−１ ２　＞１０−１ ３　〉１０−・１ ４　８Ｘ１０−” ５　６Ｘ１０”２ ６　８ＸｌＯ−２ ｎ＝６ メジアンー９ＸＩＯ−２ 実施例Ｘ ５ＩＦを用いる移植 供給体動物からの組織の宿主動物への移植は、２つのタ
イプの細胞仲介応答を含むことができる。

第１は移植物対宿主の病気（ｇｒａｆｔ−ｖｅｒｓｕｓ
−ｈｏｓｔｄｉｓｅａｓｅ　）　（Ｇ　ｖｌｌｉ）　）
と呼ばれ、これはことに骨髄移植における臨床的意味を
もつ。第２は宿主対移植物の病気（ｈｏｓｔ−ｖｅｒｓ
ｕｓ−ｇｒａｆｔ　ｄｉｓ−ｓｅａｓｅ）　（ＨｖＧＩ
））であシ、異型移植の拒絶または単に拒絶であシ、こ
れは腎臓、肝臓および他の柔らかい組織の移植において
重要な意味をもつ。

このような移植の現象の細胞の基準は、次の文献に記載
されている：　Ｅｄｗａｒｄ　Ｓ、Ｇｏｌｖ、ｂ、　”
ＴｈｅＣｅｌｌｕｌａｒ　Ｂａｔｔｉｓ　ｏｆ　ｔｈｅ
　Ｉｒｍｍｂｎｅ　Ｒｅ５ｐｏｎｓｅ”。

第２版、５ｉｎａｕｅｒ　Ａｓ５ｏｃｉａｔｅｓ、　５
ｕｎｄｅｒｌａｎｄ。

Ｍａｓｓａｃｈ、ｕｓｅｔｔｓ　（１９８１）の（：／
＋、ａｐｔｅｒ　４゜両者の応答は、移植された組織の
宿主受容体に重大な問題を持ち出す。参考文献は、次の
とおシである：　Ｒ，Ｋｏｒｎｇｏｌｄ　ａｔ　ａｔ、
　ｔｈｅ　／、　Ｅｘｐ。

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／。

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１−３１．（１９７９）および”　ｆＪｏｎｅ　Ｍａｒ
ｒｏｗＴｒａｎｓｐｌａｎｔａｔ　ｉｏｎ″、　ｔｈｅ
　＃ｇｗ　ＥｎｇｌａｎｄＪｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｍｅ
ｄｉｃｉｎｅ、　２９２　、　Ｎｏ、　１７　。

８９５−９０２　（１９７５１゜本発明のサプレッサー
誘導物質因子は、供給体の組織、たとえば、骨髄を試験
管内処理して、受容体宿主におけるＧ　ｖ　ＨＩ）を減
少しあるいは排除するために使用することができ、そし
てまた異型移植の拒絶を、たとえば、生体内投与に減少
しあるいは排除するために使用することができる。

骨髄移植において、骨髄を組織適合性供給体（ＩＩ　Ｌ
　Ａ適合性またはＨＬＡ同一および混合リンパ球培養物
合致）から取シ出し、宿主へ、たとえば、静脈内注射に
よシ、移植する。通常、これは供給体から兄弟、姉妹へ
の骨髄の使用を包含する。

骨髄移植の理由は、宿主中の免疫系中の悪性細胞の存在
、たとえば、急性リンパ球白血病、急性非リン・ぐ球白
血病または慢性骨髄性白血病、あるいは先天的な血液の
病気、たとえば、形成不全貧血または重い合作免疫欠乏
症にあり、そして治療は骨髄幹細胞を健康な供給体から
の細胞と置換することである。こうして、移植前、通常
身体全体の照射によシ、骨髄細胞を破壊する。移植され
た細胞の成熟は、宿主のリン・七球様細胞および造血系
を徐々に置換する。移植された未成熟の幹細胞、リン・
ぐ球および赤血球の前駆体は宿主組織を異質と認識せず
、かつ成熟して宿主にとって械能的に有用な細胞になる
であろうことが発見された。問題は、成熟Ｔ細胞が移植
された骨髄細胞と一緒に運ばれるとき、生ずる。いった
ん宿主中に入ると、それらは宿主をＧ　ｖ　、Ｄ　ＩＩ
を起こす異質物質として攻撃する。移植物中の所望の未
成熟幹細胞を成熟Ｔ細胞から分離する方法は、まだ考案
されていない。供給体からの移植物中の成熟Ｔ細胞が宿
主へ移植されると、ザプレッサー型Ｔ細胞はまず活性化
され、この場合は重い免疫抑制を生じ、多分所望の未成
熟幹細胞の成熟を妨害し、”急性Ｇ　ｖ　ＩＩ　Ｄ”と
呼ばれるものを生ずる。急性Ｇ　ｖ　１１１）は、約１
００日間連続し、そして化学治療剤および免疫変更剤（
ｉｍｒｒＬｌＬｎｏｄｕｌａｔｉｎｇ　ａｇｅｎｔ　）
たとえばメトスレキセー）　（ｍａｔｈｏｔｈ、ｒｅｚ
ａｔｅ　）、異型（ｈｅｔｇｒｏｌｏｇｏｕｓ　）抗胸
腺＃ｌＩＩ胞グロブリン、コルチコステロイド類および
シクロスポリンＡを投与することによシ装置できる。こ
れらの薬剤は桟能的Ｔリンツク球への阻害効果のために
選択される。

しかしながら、このような伸性異的薬剤は移植後数か月
間にわたって投与されなくてはならず、そして悪い副作
用は肝臓および胃腸の毒性を含む。

“慢性のＧ　ｖ　／／　Ｄ″は、骨髄移植後約１００日
間起こり、そして供給体からの成熟へルック−７’リン
ノ臂球の増殖によシ生ずると考えられる。次いでこのよ
うなヘルツ七−細胞は宿主を攻撃し、そして宿主は漸進
的な全身の硬化症、狼でまたは５３８ｇ−急性および慢
性のＧＶＨＤについての上の説明から、骨髄移植の研究
の主な目標は供給体からの成熟Ｔ細胞を破壊するかある
いは望ましい未成熟幹細胞から分離することでるること
が理解されるでおろう。それぞれ米国特許第４．３６１
．５４９号および同第４．３６４．９３７号に記載され
ている０ＫＴ３およびＯＫＴ　１１として知られるモノ
クロナル抗体を包含する、モノクロナルＴ細胞抗体で移
植物を処理する試みがなされた。骨髄移植中の０ＫＴ３
の使用は、次の文献に記載されている：Ａ、Ｈ，ＦｉＬ
ｉｐｏｖｉｃｈ　ｅｔ　ａＬ、、　”　ｐｒｅｔｒｅａ
ｔｍｅｎｔｏｆ　Ｄｏｎｏｒ　ＢｏｎｅＪｆａｒｒｏｗ
　ＴＰ’ｉｔｈ　ＭｏｎｏｃｌｏｎａｌＡｎｔｉｂｏｄ
ｙ　ＯＫＴ　３　ｆｏｒ　ｐｒｅｖｅｎｔｉｏｎ　ｏｆ
　ＡｃｕｔｅＧｒａｆｔ−Ｖｅｒｓｕｓ−Ｅｏｓｔ　Ｄ
ｉｓｅａｓｅ　ｉｎ　ＡｌｌｏｇｅｎｉｃＥｉｓｔｏｃ
ｏｍｐａｔｉｂｌｅ　Ｂｏｎｅ−Ｍａｒｒｏｗ　Ｔｒａ
ｎｓｐｌαｎｔα−ｔｉｏｎ”、　ＴｈｅＬａｎｃｓｔ
、　１２６６−１２６９゜Ｊｕｎｅ　５　、１９８２゜
ＯＫＴ　３を用いると、骨髄試料中のほとんどすべての
免疫適合性１９７７球は注入のとき０ＫＴ３で被覆され
ることが確認された。しかしながら、０ＫＴ３で被覆後
に細胞を溶解するために必要な補体を使用できなかった
。なぜなら、効果的に結合するであろうウサギ補体はヒ
ト造血細胞に対して毒性であることが知られておシ、そ
して移植物に悪影響を及ぼすであろうからである。上の
Ｌａｎｃ　ｅ　ｔの論文中に述べられているように、「
・・・・骨髄の予備処理のそれ以上の修正は、組織適合
性骨髄移植における急性ＧＶＨＤに対して効果的な予防
を達成するために必要でおろう」。

上の背景に対して、本発明のサプレッサー誘導物質因子
は、免疫学的に適合性の宿主中へ移植の合伴症を効果的
に減少することが発見された。こうして、本発明の他の
面は、宿主の骨髄を、たとえば照射によシ、破壊し、骨
髄を供給体哺乳動物から取り出し、そして移植組織を、
たとえば注入により、宿主へ移植することからなる、供
給体哺乳動物からの骨髄を宿主咄乳動物へ移植する方法
において、移植組織を、たとえば試験管内において、本
発明のサプレッサー誘導物質因子で処理することからな
る改良である。この方法は、たとえば人間における、骨
髄移植にとくに適合する。この方法は、以下の実験によ
り明らかにされる。

材料および方法 マウス：骨髄移植における本発明のサプレッサー誘導物
質因子の効能を明らかにするために、モデルとして、次
の系、すなわち、宿主へ移植される有意な数の成熟Ｔ細
胞が急性ＧＶＢＤ反応を起こさせ、そして生存する宿主
の遺伝子型〔ハブロタイブ（ｈαｐｌｏすｐｇ　）　）
を分析して移植が起こったかどうかを決定できる系を使
用することが必要でらる。

Ｂ−２複合体はマウスの染色体１７の小さいセグメント
中の遺伝子の結合した系列である。この実験のために、
Ｂ６Ｄ、Ｆ、（Ｈ−２ｂ−ｄ）株で表示される親Ｃ５’
ｌＢＬ／６　（Ｈ−２ｂ　）およびＤＢＡ／２　（Ｅ−
２ｄ　）からの子孫を宿主受容体として使用した。その
親の１つ′（Ｃ５７ＢＬ／６）を供給体として使用した
。マウスはジャクノン・ラボラトリーズ（Ｊαｃｋｓｏ
ｎ　Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ　ｏｆＢａｒ　Ｈａｒｂ
ｏｒ、　Ｍａｉｎｅ　）から購入し、実験の開始時の年
令が８〜１０週であった。宿主マウスに１８７（？８で
１０２ラド／分の総量において合計線量９５０ラドを照
射した。

細胞の懸濁：供給体マウスの大腿骨の骨髄腔を通してリ
ン酸塩緩衝食塩水を吸引することによシ、骨髄懸濁液を
得た。細胞をＲＰ　Ｍ　Ｉ中に３回洗浄し、処理のため
ＲＰＭＩ＋１０％胎児子牛血清中に懸濁させた。

ＳＩＦ：実施例■中に記載する本発明のサプレッサー誘
導物質因子の透析した５０％旬（Ｌ酸アンモニウム分画
を調製した。対照上澄みは５０チ硫酸アンモニウム分画
であり、上の表３中に記載するＡｚ−ＣＥｋｆ系統から
調製した。対照上澄みは、Ｔ細胞増殖に対して検出され
つる抑制効果を示さなかった。

手順：供給体マウスから骨髄細胞を取シ出し、５ｘｌＯ
’細胞／−でｌ？　Ｐ　Ｍ　Ｉ中に懸濁させ。サプレッ
サー誘導物質因子または対照上澄みとともに１：３００
ｖ／ｖ（ＳＩＦ／ａＩ胞）の量で２４時ｔＪ］インキュ
ベーションした。次いで細胞を２回洗浄し、２．５Ｘ１
０７の親骨髄細胞を受容体に尾の静脈を経て静脈内注射
した。移植後６５日に、生存するマウスの遺伝子型（ま
たはバグロタイブ）を、次の文献の方法に従い決定した
：“Ｈｕｍｏｒａｔａｎｄ　Ｃｅ１ｌ　Ｍｅｄｉａｔｅ
ｄ　Ｉｒｖｍｔ、ｎｅ　Ｒｅ５ｐｏｎｓｅｓ　ｉｎＦｒ
ｂｌｌｙ　Ａｌｌｏｇｅｎｉｃ　Ｂｏｎｅ　Ｍａｒｒｏ
ｗ　ＣｈｉｍｅｒａＭｉｃｅ″、　Ｆ、Ｇ、Ｏｎｏ！著
、　Ｊ、Ｅｘｐ、Ｍｅｄ、、　１５ユ。

１１５（１９８０）。

得られた結果を、下表８に示す。

表８ 移植後の生存時間 ２　３９　− ３　４５　− 平均＝　３９．６±５ 処理移植物　４　＞６０　＞９５％Ｈ２ｂ５　＞６０　
＞９５チＲ２ｂ ６　＞６０　＞９５％、／ｌ／２ｂ 平均＝〉６０ 上の表８から理解できるように、対照群（ｎ＝３）から
のすべての動物は４５日以内に死んだが、これに対して
ＳＩＦで処理した骨髄を受け取った群（ｎ＝３）は６０
日を超えて生存し続けた。さらに、ＳＩＦ処置動物の体
重は減少せず、そして生理的状態は研究全体を通じて良
好に維持された。

これと対照的に、移植後２０日において、対照マウスの
体重は減少しはじめ、生理的状態は劣っているように見
えた。ＳＩＦを１：１０，０００ｖ／τ以下の量で使用
すると、Ｔ細胞増殖はわずかに約９０俤だけ減少した。

しかしながら、ＳＩＦを１：１０００ｖ／υ以上、たと
えば、１：３００以上または１：１００または１：５０
０の量で使用すると、Ｔ細胞増殖は約９５チ以上で減少
した。

こうして、ＳＩＦは本発明において骨髄移植のとき好ま
しくは少なくとも約１：１０００ｖ／υ（ＳＩＦ／細胞
）の量で使用される。

２、異型移植の拒絶〔免疫感応（ｉｒｒｗｒｎｂｎｇ　
ｃｏｍｐｅ−ｔｅｘｔ　）宿主〕 前述のように、供給体からの組織、たとえば、腎臓、心
臓、肝臓または肺の免疫感応宿主への移植は、宿主の免
疫系が移植物を攻撃するという有意な問題を生ずる。免
疫抑制薬物は宿主に対して毒性であることがある。宿主
が移植物をしばらくの間破壊せずに受容できるようにす
る、無毒の免疫抑制物質が要求されている。本発明のそ
れ以上の面は、宿主１１１ｈ乳動物が免疫学的に感応性
である場合、供給体哺乳動物から組織を取シ出し、そし
てその組織を宿主に移植すると同時に本発明のサプレッ
サー誘導物質因子を投与する工程からなる、供給体から
の組織を宿主哺乳動物へ移植する方法である。本発明の
サプレッサー誘導物質因子の量は主治医が滴定すること
ができるが、使用量は一般に実施例■記載の５０チ硫酸
アンモニウム沈殿サプレツサー誘導物質因子の約０．１
〜１．　Ｏｍｔ／に９宿主体重／日である。このような
ｌｏの本発明のサプレッサー誘導物質因子は、移植前の
約１日から開始し、その後毎日約２週間投与されるでろ
ろう。

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ｎｓｔｉｔｕｅｎｔｓｏｒｄｉｓｒｕｐｔｅｄ　１ｅｕ
ｋｏｃｙｔ、ｅｓ、Ｊ、Ｃ１１ｎ、Ｉｎｖｅｓｔ、３３
：９５１−７、Ｖｉｓａ、　Ｄ、、Ｊ、Ｍ、Ｇｏｕｓｔ
、Ｒ，Ｍｏｕｌｉａｓ、Ｌ、Ｋ。

Ｔｒｅｊｄｏｓｉｅｗｉｃｚ、　Ａ、　Ｃｏ１１ａｒｄ
およびＮ、　Ｍｕｌ、１ｅｒ−Ｂｅｒａｔ。

１９７５、　Ｉｎ　ｖｉｔｒｏ　ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ
　ｏｆ’　ｔｒａｎｓｆｅｒ　ｆａｃｔｏｒ　ｂｙｌｙ
ｍｐｈｏｂｌａｓｔｏｉｄ　ｃｅｌｌ　１ｉｎｅｓ、Ｔ
ｒａｎｓｐｌａｎｔ　Ｐｒｏｃ。

Ｂ：３２９゜ ８、Ｈａｎ、　Ｔ、、　Ｊ、Ｌ、　ＰａｕｌｙおよびＪ
　、　Ｍｉｎｏｗａｄａ　、　１９７５゜Ｄｉｓｐａｒ
ｉｔｙ　ｉｎ　ｔｈｅ　ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ　ｏｆ　
ｌｙｍｐｈｏｃｙｔ、ｅｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ　ｆａｃ
ｔｏｒ　ｂｙ　ｃｕｌｔｕｒｅｄ　ｈｕｍａｎ　Ｔ　ａ
ｎｄ　Ｂｌｙｍｐｈｏｂｌａｓｔｏｉｄ　ｃｅｌｌ　１
ｉｎｅｓ、　Ｃ１１ｎ、Ｅｘｐ、Ｉｍｍｕｎｏｌ。

２ニア３゜ ９、Ｂａｄｇｅｒ、　Ａ、Ｍ、、　Ｓ、Ｒ，Ｃｏｏｐｅ
ｒｂａｎｄおよびＪ、Ａ。

Ｇｒｅｅｎ、１９７４．　５ｔｕｄｉｅｓ　ｏｎ　Ｌｈ
ｅ　ｍｅｃｈａｎｉｓｍ　ｏ「　ａｃｔｉｏｎｏｒｐｒ
ｏｌｉｆ’ｅｒａｔｉｏｎ　１ｎｈｉｂｉｔ、ｏｒｙ　
ｒａｃｔｏｒ　（ＰＩＦＩ。

Ｃｅ１１．　Ｉｍｍｕｎｏｌ、１３：３３５゜１０、　
Ｗｈｅｅｌｏｃｋ、Ｅ、Ｆ、１９６５．　Ｉｒ＋ｔｅｒ
ｒｅｒｏｎ−１ｉｋｅ　ｖｉｒｕｓｉｎｈｉｂｉｔｏｒ
　１ｎｄｕｃｅｄ　ｉｎ　ｈｕｍａｎ　１ｅｕｋｏｃｙ
ｔｅｓ　ｂｙｐｈｙｔｏｈｅｍａｇｇｌｕｔｉｎｉｎ、
５ｃｉｅｎ、ｃｅ　１４９：３１０゜１１、Ｗａｌｌｅ
ｎ、　Ｗ、Ｃ，、Ｊ、Ｈ，Ｄｅａｎおよびり、Ｏ，Ｌｕ
ｃａｓ。

１９７３、Ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎ　ａｎｄ　ｔｈｅ　ｃ
ｅｌｌｕｌａｒ　ｉｍｍｕｎｅｒｅｓｐｏｎｓｅ：　５
ｅｐａｒａｔｉｏｎ　ｏｒ　１ｎｔｅｒｆ’ｅｒｏｎ　
ｐｒｏｄｕｃｉｎｇｃｅｌｌｓ　ｒｒｏｍ　ＤＮＡ　５
ｙｎｔｈｅｔｉｃ　ｃｅｌｌｓ、Ｃｅ１１．Ｉｍｍｕｎ
ｏｌ。

６：ｌｌＯ。

１２、Ｍｏ１１ｅｒ、Ｇ、１９８０．Ｉｍｍｕｎｏｌ、
Ｒｅｖ、５４．ＡｃａｄｅｍｉｃＰｒｅｓｓ、Ｎｅｗ　
Ｙｏｒｋ。

１３、Ｔａｎｉｇｕｃｈｉ、　Ｍ、およびＪ、Ｆ、Ａ、
Ｐ、　Ｍｉｌｌｅｒ、　１９７８゜５ｐｅｃｉ「ｉｃ　
５ｕｐｐｒｅｓｓｏｒ　Ｔ　ｃｅｌｌ　ｈｙｂｒｉｄｏ
ｍａｓ、Ｃｕｒｒ、Ｔｏｐｉｃｓｉｎ　Ｍｉｃｒｏｂｉ
ｏｌ、ａｎｄ　Ｉｍｍｕｎｏｌ、８１：２１２゜１４、
Ｇｒｅｅｎｅ、Ｗ、Ｃ，、Ｔ、Ａ、Ｆｌｅｉｓｃ？ｒｅ
ｒ、Ｄ、Ｌ、Ｎｅ１ｓｏｎおよびＴ、Ａ、　Ｗａｌｄｍ
ａｎ、　１９Ｂ２．　Ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ　ｏｆ　ｈ
ｕｍａｎｓｕｐｐｒｅｓｓｏｒ　Ｔ　ｃｅｌｌ　ｈｙｂ
ｒｉｄｏｍａｓ、　Ｊ、Ｉｍｍｕｎｏｌ、１２９：１９
８６゜ １５、　Ｇｒｉｌｌｏｔ−Ｃｏｕｒｖａｌｉｎ、Ｃ，、
Ｊ、Ｃ，Ｂｒｏｕｅｔ、Ｒ。

ＢｅｒｇｅｒおよびＡ、　Ｂｅｒｎｈｅｉｍ、　１９８
１．　Ｅｓｔａｂｌｉｓｈｍｅｎｔｏｆ　ａ　ｈｕｍａ
ｎ　Ｔ　ｃｅｌｌ　ｈｙｂｒｉｄ　１ｉｎｅ　ｗｉｔｈ
　５ｕｐｐｒｅｓｓｉｖｅａｃｔｉｖｉｔｙ、Ｎａｔｕ
ｒｅ　２９２：８４／４゜１６、　ＤｅＦｒｅｉｔａｓ
、Ｅ、Ｃ，、Ｓ、Ｖｅｌｌａ、ハ、Ｌｉｎｎｅｎｂａｃ
ｈ、Ｃ。

Ｚｍｉｊｅｗｅｓｋｉ、ｔ−１，Ｋｏｐｒｏｗｓｋｉ、
　ａｎｄ　Ｃ，Ｍ、Ｃｒｏｃｅ、１９８２゜Ａｎｔｉｇ
ｅｎ−ｓｐｅｃｉｆｉｃ　ｈｕｍａｎ　Ｔ−ｃｅｌｌ　
ｈｙｂｒｉｄｏｍａｓ　ｗｉｔｈｈｅｌｐｅｒ　ａｃｔ
ｉｖｉｔｙ、　Ｐｒｏｃ、Ｎａｔ、１．　八ｃａｄ、Ｓ
ｃｉ、ＵＳＡ７９：６６４６゜ １７、Ｉｒｉｇｏｙｅｎ、　Ｏ，、Ｐ、Ｖ、　Ｒｉｚｚ
ｏｌｏ、　Ｙ、　Ｔｈｏｍａｓ、　Ｌ。

Ｒｏｇｏｚｅｎｓｋｉ　、およびり、　Ｃｈｅｓｓ、　
１９８１．　Ｇｅｎｅｒａｔｉｏｎｏｆ　ｆｕｎｃｔｉ
ｏｎａｌ　ｈｕｍａｎ　Ｔ　ｃｅｌｌ　ｈｙｄｒｉｄｓ
、Ｊ、　Ｅｘｐ。

Ｍｅｄ、１５４：１８２７゜ １８、Ｇ１１ｌｉｓ、　Ｓ、、およびＪ、　Ｗａｔｓｏ
ｎ、　１９８０゜Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ　ａｎｄ　ｂ
ｉｏｌｏｇｉｃａｌ　ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏ
ｎ　ｏｒｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅ　ｒｅｇｕｌａｔｏｒｙ
　ｍｏｌｅｃｕｌｅｓ、Ｖ、Ｉｄｅｎｔｉｆ’１ｃａｔ
ｉｏｎｏｆ’　ａｎ　１ｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ　２　ｐ
ｒｏｄｕｃｅｒ　ｈｕｍａｎ　Ｔ　ｃｅｌｌ　１ｉｎｅ
。

Ｊ、Ｅｘｐ、Ｍｅｄ、５２：１７０９゜１９、Ｆａｒｒ
ａｒ、　Ｊ、Ｊ、、　Ｊ、　Ｆｕｌｌｅｒ−Ｆａｒｒａ
ｒ、　Ｐ、Ｌ、　Ｓｉｍｏｎ。

Ｍ、Ｌ、　Ｈｉｌｆｉｋｅｒ、　Ｂ、Ｍ、　５ｔａｄｌ
ｅｒおよびＷ、Ｌ、　Ｆａｒｒａｒ。

１９８０、　Ｔｈｙｍｏｍａ　ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ　
ｏｆ’　Ｔ　ｃｅｌｌ　ｇｒｏｗｔｈ　ｆａｃｔｏｒ（
ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ　２１．　Ｊ、Ｉｍｒｎｕｎｏ
ｌ、１２５：２５５５゜２０、Ｖｅｓｏｌｅ、Ｄ、）］
、、］Ｊ、−Ｍ、Ｇｏｕｓｔ、Ｊ、Ｗ、ＦｅｔおよびＨ
，Ｈ，Ｆｕｄｅｎｂｅｒｇ、　、１９７９．Ｓｉｍｕｌ
ａｔｏｒｓ　ａｎｄｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ　ｏｒｌｙｍ
ｐｈｏｃｙｔｅ　ＤＮＡ　５ｙｎｔｈｅｓｉｓ　１ｎｓ
ｕｐｅｒｎａｔａｎｔｓ　ｆ”ｒｏｍ　ｈｕｍａｎ　ｌ
ｙｍｐｈｏｉｄ　ｃｅｌｌ　１ｉｎｅｓ。

Ｊ、Ｉｍｍｕｎｏｌ、１２３：１３２２゜２１、Ｌａｕ
、　Ｃ，およびＧ、　Ｇｏｌｄｓｔｅｉｎ、　１９Ｂ１
．　０ＫＴ３ｉｎｄｕｃｅｓ　５ｕｐｐｒｅｓｓｏｒ　
ｃｅｌｌｓ　ｒｏｒ　ｍ１ｘｅｄ　ｌｙｍｐｈｏｃｙｔ
ｅａｎｄ　ＰＨＡ　ｍｉｔｏｇｅｎｉｃ　ｒｅｓｐｏｎ
ｓｅｓ　ｉｎ　ｈｕｍａｎ　ｐｅｒｉｐｈｅｒａｌｌｙ
ｍｐｈｏｃｙｔｅｓ、Ｉｎｔ、Ｊ、Ｉｍｍｕｎｏｐｈａ
ｒｍａｃ、３：１８乙２２、Ｒｅ１ｎｈｅｒｚ、Ｅ、Ｌ
、、Ｐ、Ｃ，Ｋｕｎｇ、Ｇ、Ｇｏｌｄｓｔｅｉｎおよび
Ｓ、Ｆ、　Ｓｃｈｌｏｓｓｍａｎ、　１９８０．　Ａ　
ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌａｎｔｉｂｏｄｙ　ｒｅａｃｔｉ
ｖｅ　ｗｉｔｈ　ｔｈｅ　ｈｕｍａｎ　ｃｙｔｏｔｏｘ
ｉｃ／５ｕｐｐｒｅｓｓｏｒ　Ｔ　Ｃｅ１ｌ　５ｕｂｓ
ｅｔ　ｐｒｅｖｉｏｕｓｌｙ　ｄｅｆｉｎｅｄ　ｂｙａ
　ｈｅｔｅｒｏａｎｔｉｓｅｒｕｍ　ｔｅｒｍｅｄ　Ｔ
ｔｌ　、Ｊ、Ｉｍｍｕｎｏｌ、１２４：１３０１゜２３
、Ｒｅ１ｎｈｅｒｚ、Ｅ、Ｌ、、Ｃ，Ｍｏｒｉｍｏｔｏ
、に、Ａ、Ｆｉｚｇｅｒａｌｄ。

Ｒ，Ｅ、　Ｈｕｓｓｅｙ、　Ｊ、Ｆ、　Ｄａｌｅｙおよ
びＳ、Ｆ、Ｓｃｈｌｏｓｓｍａｎ。

１９８２、　Ｈｅｔｅｒｏｇｅｎｅｉｔ、ｙ　ｏｆ　ｈ
ｕｍａｎ　Ｔ４”　１ｎｄｕｃｅｒ　Ｔｃｅｌｌｓ　ｄ
ｅｆ’１ｎｅｄ　ｂｙ　ａ　ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ　ａ
ｎｔｉｂｏｄｙ　ｔｈａｔｄｅｌｉｎｅａｔｅｓ　ｔｗ
ｏ　ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ　５ｕｂｐｏｐｕｌａｔｉｏ
ｎｓ。

Ｊ、Ｉｍｍｕｎｏｌ、１２８：４６３゜２４、Ｔｈｏｍ
ａｓ、　Ｙ、、　Ｊ、　Ｓｏｓｍａｎ、　Ｄ、Ｉｒｉｇ
ｏｙｅｎ、　Ｓ、Ｍ。

Ｆｒｉｅｄｍａｎ、　Ｐ、Ｃ，Ｋｕｎｇ、　Ｇ、　Ｇｏ
ｌｄｓｔｅｉｎおよびり、　ｃｈｅｓｓ。

１９８０、Ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ　ａｎａｌｙｓｉｓ　
ｏｆ　ｈｕｍａｎ　Ｔ　ｃｅｌｌｓｕｂｓｅｔｓ　ｄｅ
ｆｉｎｅｄ　ｂｙ　ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ　ａｎｔｉｂ
ｏｄｉｅｓ・１、　Ｃｏ１１ａｂｏｒａｔｉｖｅ　Ｔ−
Ｔ　１ｎｔｅｒａｃｔｉｏｎｓ　ｉｎ　ｔｈｅｉｉｎｍ
ｕｎｏｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ　ｏｆ　Ｂ　ｃｅｌｌ　ｄ
ｉｒｆ’ｅｒｅｎｔ、１ａｔｉｏｎ。

Ｊ、Ｉｍｍｕｎｏｌ、１２５：２４０２゜２５、Ｇｒｅ
ｅｎｅ、　Ｗ、Ｃ，、Ｔ、Ａ、　Ｆｌｅｉｓｈｅｒおよ
びＴ、Ａ。

Ｗａｌｄｍａｎｎ、１９８１．　５ｏｌｕｂｌｅ　５ｕ
ｐｐｒｅｓｓｏｒ　５ｕｐｅｒｎａｔａｎｔｓｅｌａｂ
ｏｒａｔｅｄ　ｂｙ　ｃｏｎｃａｎａｖａｌｉｎ　Ａ−
ａｃｔｉｖａｔｅｄ　ｈｕｍａｎｍｏｎｏｎｕｃｌｅａ
ｒ　ｃｅｌｌｓ、　Ｊ、工ｍｍｕｎｏ１．１２６：１１
８５゜２６、Ｗｉｌｌｉａｍｓ、　Ｒ，Ｃ，およびＳ、
Ｊ、　Ｋｏｒｓｍｅｙｅｒ、　１９７８゜５ｔｕｄｉｅ
ｓ　ｏｎ　ｈｕｍａｎ　ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅ　ｉｎｔ
、ｅｒａｃｔｉｏｎｓ　ｗｉｔｈｅｍｐｈａｓｉｓ　ｏ
ｎ　ａ　５ｏｌｕｂｌｅ　５ｕｐｐｒｅｓｓｏｒ　ａｃ
ｔ、１ｖｉｔｙ。

Ｃ１１ｎ、Ｉｍｍｕｎｏｌ、Ｉｍｍｕｎｏｐａしり、９
：３３５゜２７、　Ｋａｕｒｍａｎ、Ｄ、Ｂ、、Ｃ：、
Ｃａｒｎａｕｄ、Ｊ−Ｌ、５ｔａｃｈおＵＪ−Ｆ、ａｃ
ｈ、１９７９．　Ｔｈｅ　５ｕｐｐｒｅｓｓｉｖｅ　ｅ
ｆ’ｆｅｃｔ　ｏｆ　ａｓｕｐｅｒｎａｔｅ　ｆｒｏｍ
　ｃｏｎｃａｎａｖａｌｉｎ　Ａ−ａｃｔｉｖａｔｅｄ
　ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅｓ。

Ｅｆｆｅｃｔｓ　ｏｆ　ｃｏｎｃａｎａｖａｌｉｎ　Ａ
　ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅｓ　ａｎｄ　ｔｈｅｉｒｓｕｐ
ｅｒｎａｔｅｓ　ｏｎ　ｃｙｔｏｔｏｘｉｃ　ａｎｄ　
ｍ１ｘｅｄ　ｌｙｍｐｈｏｃｙＴ、ｅｒｅａｃｔｉｏｎ
ｓ、　Ｃｅ１１．Ｉｍｍｕｎｏｌ、４７：１５３゜２８
、Ｆｌｅｉｓｈｅｒ、Ｔ、Ａ、、Ｗ、Ｃ，Ｇｒｅｅｎｅ
、Ｒ，Ｍ、ＢｌａｅｓｅおよびＴ、Ａ、　Ｗａｌｄｍａ
ｎｎ、　１９８１．　５ｏｌｕｂｌｅ　５ｕｐｐｒｅｓ
ｓｏｒｓｕｐｅｒｎａｔａｎｔｓ　ｅｌａｂｏｒａｔｅ
ｄ　ｂｙ　ｃｏｎｃａｎａｖａｌｉｎ　Ａ−ａｃｔｉｖ
ａｔｅｄ　ｈｕｍａｎ　ｍｏｎｏｎｕｃｌｅａｒ　ｃｅ
ｌｌｓ、　ＩＩ。

Ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ　ｏｆ’　ａ　ｓｏ
ｌ、ｕｂｌｅ　５ｑｐｐｒｅｓｓｏｒ　ｏｆ　Ｂｃｅｌ
ｌ　ｉｍｍｕｎｏｇｌｏｂｕｌｉｎ　ｐｒｏｄｕｃｔｉ
ｏｎ、Ｊ、１：ｍｍｕｎｏｌ。

１２６：１１９２゜ ２９、Ｗｏｌｆ、　Ｒ，Ｌ、、　Ｓ、Ｈ，Ｐｉｎｃｕｓ
、　Ｅ、　ＭｅｒｌｅｒおよびＦ、Ｓ、Ｒｏｓｅｎ、１
９８１．　Ａ　ｄｉｆｆｕｓｅ　ｃｕｔａｎｅｏｕｓ　
ｌｙｍｐｈｏｍａｓｅｃｒｅｔｉｎｇ　ａ　ｐｏｔｅｎ
ｔ　ｉｍｍｕｎｏｓｕｐｐｒｅｓｓａｒ＋ｔ、　Ｃ１１
ｎ。

Ｉｍｍｕｎｏｌ、Ｉｍｍｕｎｏｐａｔｈｏｌ、１８：３
５１゜３０、Ｗａｌｌｅｎ、　Ｗ、Ｃ，、Ｊ、Ｈ，Ｄｅ
ａｎおよびり、Ｏ，Ｌｕｃａｓ１９７３、Ｉｎｔｅｒｆ
”ｅｒｏｎ　ａｎｄ　ｔｈｅ　ｃｅｌｌｕｌａｒ　ｉｍ
ｍｕｎｅｒｅｓｐｏｎｓｅ＋　５ｅｐａｒａｔｉｏｎ　
ｏｆ　１ｎｔｅｒｆ’ｅｒｏｎ　ｐｒｏｄｕｃｉｎｇｃ
ｅｌｌｓ　ｆ’ｒｏｍ　ＤＮＡ　５ｙｎｔｈｅｔｉｃ　
ｃｅｌｌｓ、Ｃｅ１１．Ｉｍｍｕｎｏｌ。

６：１１０゜ 主題の突然変異体細胞系統６Ｔ−ＣＥＭおよびそのサブ
クローン６Ｔ−ＯＥＭ−２０は、アメリカン・タイプ・
カルチャー・コレクション（Ａｍｅｒｉｃａｎ　Ｔｙｐ
ｅ　Ｃｕ１ｈｂｒｅ　Ｃｏ１１ｅｃｔｉｏｎ。

１２３０１　Ｐａｒｌｃｌａｗｎ　Ｄｒｉｖｅ、　Ｒｏ
ｃｋｖｉｌｌｅ、　ＭＤ２０８５２　）に１９８３年４
月２６日に受託され、そしてそれぞれＡＴＣＣ受託番号
ＣＲＬ８２９６およびＣ７？Ｌ８２９５を付された。

本発明は、突然変異体細胞系統６Ｔ−ＣＥＭおよびその
サブクローン６Ｔ−ＣＥｋｆ−２０、およびこのサブク
ローンによシ生産されだ５ＩＦ（６Ｔ−２Ｏ５ＩＰ）を
参照して例示されてきた。この説明は例示の目的での升
提供され、本発明の範囲を限定するものではない。

【図面の簡単な説明】

第１図は、ＣＥＨの上澄み、６Ｔ−ＣＩ！、“Ｍおよび
そのサックローン６Ｔ−ＣＥＭ−２０によるＴ細胞増殖
の抑制を示す。１０’細胞／くほみ（ｗｅｌｌ）のＴリ
ンノＱｌｅヲ０．１％のフィトヘマグルチニン（ｐＨＡ
）で刺激した。ＣＥ　ＩＩ（（△）、６Ｔ−ＣＥＭ（Ｏ
）および６Ｔ−ＣＥＭ−２０（×）を図におけるように
異なる希釈で加えた。 増殖を第４日目に３Ｈ−チミジンの吸収の測定により定
量した。ＰＩＩＡ中の１゛細胞単独についての”Ｈ−チ
ミシ：、’Ｏ吸１［ｉｌ　２０２１±１２１６ｃｐ脩で
あった。 第２図は、Ｔ細胞の異なる部分集合（５ｕｂｓｅｔ　）
への６Ｔ−２Ｏ５ＩＦ　（６Ｔ−ＣＥルｆ−２０によシ
分泌された５ＩＦ）の抑制効果を示す。分ル１゛［され
ない（△）、０ＫＴ４　（ｘ）またはＯＫＴ　８　＋（
０）の集団を、種々の希釈の６Ｔ−２Ｏ５ＩＦの存在下
にＰＨＡで刺激した。増殖は第４日目に３Ｂ−チミジン
の測定により定量した。ｐＨＡの存在下のそれぞれの集
団単独についての３Ｈ−チミジンの吸収は、２９５２０
±２８１　ｃｐｍ。 ２７０６３±１３４４　ｃｐｍ、および２４９２０±２
６３Ｔｃｐｍであった。 第３図は、Ｂ細胞増殖への６Ｔ−２０５１７”の抑制効
果を示す。１０ＩＩＢ細胞（Δ）、１ＯＩＩＢ＋２Ｚ１
０’Ｔ（Ｘ）または１０ＩＩＴ（○）を、種々の濃度の
６　Ｔ　−２０８Ｉ　Ｆの存在ＴＫ％希釈のアメリカヤ
マゴ？つ（ｐｏｋｅｗｅｅｄ　）のミトケ０ン（ｐＷＭ
）で刺激した。増殖を第４日目にｓＨ−チミジンの吸収
により定量した。ｐＷＭ中のそれぞれの集団単独につい
ての３１１−チミジンの吸収は、７゛２１±１２８０Ｈ
ｍ、１７５５８±１２１６ｃｐｍ、および４１７２０土
１９１０Ｃｐｍであった。 第４図は、６Ｔ−２０ＳＩＦ誘導抑制の時間経過を示す
。ｉｏ’：ｙ’細胞を０．１％のｐ　ＩＩ　Ａとともに
培養期間の開始（・）、２４時間後（Ｘ）−！たは４８
時間後（○）添加した穐々の希釈の６Ｔ−２Ｏ５ＩＰの
存在下に培養した。５ｌｌ−チミジンの吸収を４日後に
測定した。培養期間の開始時にＢＴ−２Ｏ５ＩＦを加え
て（Δ）、３Ｈ−チミジンの吸収をまた培養開始後３日
目に測定した。３日間の培養におけるＰＨＡの存在下の
Ｔ細胞単独についての３万一チミソンの吸収は、１６２
０１±５２０Ｃｐｍであシ、そして４日間の培養におい
て、１９８１１±３００ｃｐｍであった。 第５図は、１９７２球を６Ｔ−２Ｏ５ＩＦへ暴露する種
々の時間の、ＰＩＩＡ誘導増殖への応答に対する効果を
示す。１９７２球を１０７細胞／−において、示した種
々の希釈（Ｄ６Ｔ−２０５ＩＦへ８時間（×）または２
４時間（・）暴露した。 細胞はＰ　Ｉｆ　Ａ誘導増殖の開始前によく洗浄した。 ３Ｂ−チミジンの吸収を４日後に測定した。 第６図は、混合リンパ球培養物（ｈｉＬｃ）への６Ｔ−
２０５ＩＦの効果を示す。１０６ヒトＴ細胞を１０６異
型的な細胞（×）、２×１０”ＤＢＡマウス細胞（０）
または１０１１　（△）オートロガス非ロゼツト細胞で
刺激した。すべての刺激体細胞を３０ｐ？のマイトマイ
シフＣ（ｍｉｔ−Ｃ）で３０分間処理した。３Ｈ−チミ
ジンの吸収を５日後に測定した。６Ｔ−２０５ＩＦの不
存在下のｓＨ−チミジンの吸収は、それぞれの刺激につ
いて１３，２８１±１９２７ｃｐｍ、７６９土１３８ｃ
ｐｔｒＬおよび１２３４±１０７　ｃｐｍであった。 第７図は、ＭＬＣ検定におけるマウス牌細胞への６ｌ−
２Ｏ５ＩＦの効果を示す。２Ｘ１０’Ｃ５７／Ｂ６細胞
を２Ｘ１０６ｒｎｉｔ−Ｃ処理ＪＯＢΔ細胞（×）で刺
激した。３Ｈ−チミジンの吸収を５日後に測定した。６
Ｔ−２Ｏ３ＩＦの不存在下の３Ｈ−チミジンの吸収は１
４１６１±１４１ｃｐｍであった。 第８図は、熱またはトリプシン処理による６Ｔ−２Ｏ５
ＩＦの抑制活性の阻害を示す。６Ｔ−２０５ＩＦを５６
℃で３０分間インキュベーションするか、あるいは０．
１％のトリプシンで３７°Ｃにおいて２時間処理した。 次いで、処理した試料をＰＨＡ誘導Ｔ細胞増殖を抑制す
る能力について試験した。１０−１希釈の示した試料の
存在下のｐＨＡ刺激１゛細胞の応答％をプロットした。 第９図は、６Ｔ−２０５ＩＦの活性への異なるｐＨ値の
効果を示す。６Ｔ−２０ＳＩＰを、図に示すように、種
々のｐＨ値に３０分間酸性化まだはアルカリ性化した後
、中性にもどした。次いで処理した試料をｐ　ＩＩ　Ａ
誘導Ｔ細胞増殖検定において試験した。１０”希釈の種
々の試料の存在下のＰＥＡ刺激Ｔ細胞の応答％をプロッ
トする。 第１０図は、セファクリル（５ｅｐｈ、ａｃｒｙｌ■）
Ｓ−２００カラムによる５０％硫酸アンモニウムの分画
のクロマトグラフィーを示す。９０％より大きい抑制活
性を含有する６Ｔ−２Ｏ５ＩＰの５０％硫酸アンモニウ
ムの分画の２ｍｌを、セファクリルＳ−２００カラムに
適用した。光学濃度（−〜・）およびＰ　ＩＩ　Ａ誘導
Ｔπｉｌｌ胞増殖への抑制効果（０−−−０）の両者を
、グラフに示すように交互する分画について測定した。 次式に従い抑制％を計算する： 第１１図は、異型的なＴリン／、ｏ球の増殖をミトケ°
ン刺漱に対して抑制するときの、６Ｔ−２０５ＩＦ処理
した１９７８球の効果“を示す。１９７８球を種々の希
釈の６Ｔ−２０５ＩＦまだは培地へ２４時間暴露し、次
いで５Ｘ１０’の新鮮な異型的Ｔ細胞を用いてｏ、　ｉ
％のＰＩＩＡの存在下に（−）あるいは１０６Ｂ細胞お
よび５Ｘ１０’Ｔ細胞を用いて１／６４希釈のｐｌＦＭ
の存在下に（−ｍ−）　同時培養検定（ｃｏｃｕＬｔｕ
ｒｅ　ａｓｓａｙ　）を開始した。使用した予備培養１
°リンパ球の希釈は１０’　（ｘ）、２．．５Ｘ１０’
　（・）および５×ｌＯ′　（Δ）であった。８Ｈ−チ
ミジンの吸収を４日後に測定した。０．１％のＰＥＡ中
の５Ｘ１０’Ｔ細胞単独についての３Ｈ−チミジンの吸
収は１２６１１±５３２　ｃｐｍである。１／６４　希
釈のｐＷＭ中の１０６１３細胞および２．５Ｘ１０’　
Ｔ細胞についての３Ｈ−チミジンの吸収は、７２１４±
６５０　ｃｐｔｎ　である。 第１２図は、一方向（ｏｎｅ−ｗａｙ　ｌ　Ｍ　Ｌ　Ｃ
検定において異型的な７゛リンパを抑制するときの、６
　Ｔ−２ＯＳ７　Ｆ処理したリンパ球の効果を示す。 ７ｙンパ球を種々の希釈の６Ｔ−２Ｏ５ＩＦまたは生長
培地へ２４時間暴露し、次いで１０’ｍ１ｔ−Ｃ処理Ｃ
ＣＲＦ−５Ｂ細胞によシ刺激された一方向ＭＬＣ反応に
おいて、５×１０４の新鮮なＴ細胞を用いて同時培養検
定を開始した。使用した予備培養したＴ細胞の希釈は、
１０’　（Ｘ）、２．５Ｘ１０’（・）および５ｘｔｏ
’（Δ）であった。３Ｈ−チミン／の吸収を５日後に測
定した。 上澄みを添加しない標準ＭＬＣ検定如おける３〃−チミ
ジンの吸収は１３３２６±２１６ｃ７＞ｒｎである。 第１３図は、６　Ｔ　−２０Ｓ　Ｉ　Ｉ２処理リンパ球
によるＩ゛細胞サプレッサー因子（７’　Ｓ　Ｆ　）の
生産を示す。Ｔリンノミ球をａｘｘｏ’／＜？Ｙみにお
いて１１５０θ希釈の６Ｔ−２Ｏ５ＩＦとともに２４時
間インキュベーションし、洗浄シ、ｌ？ＰＭＩ＋２％Ｆ
Ｃ５中で１０６細胞／　ｍｅにおい゛Ｃ開始した。上澄
みを培養開始後２４時間（△）、４８時間（０）または
７２時間（・）に東めだ。種々の希釈の上澄み（ＴＳＦ
）を、ＰＨＡ誘導Ｔ細胞増殖検定において準備した。 第１４図は、種々の希釈のＴＳＦ　（図に示すように）
を、０，１％のｐ　ＩＩ　Ａで刺激した１０５Ｔリンパ
球（２０２１６±２１６２　ｃｐｍ）（・）、ｌ／６４
希釈のＰＷＭで刺敏した２Ｘ１０’　１９７２球、１０
５Ｂリンパ球（９４２１０２±２ｔｔ６Ｃ７＋ｍ＋（△
）、または１　／　６４　ｍ釈のＰＷＭで刺激した１０
６Ｂリンパ球（６２５±２５Ｃｐｍ）（Ｘ）の培養物に
加えた。応答％は、ＴＳＦで処理した細胞による８Ｂ−
チミジンの吸収対培地で処理した細胞による３Ｈ−チミ
ジンの吸収の比で表わす。Ｔ　、５　Ｆの不存在下の各
群についての実際の３Ｈ−チミジンの吸収＜ｃｐｍ）を
、カッコ内に示しだ。 第１５図は、ＴＳＦ訪導抑制の時間経過を示す。 種々の希釈のＴＳＦをｐＨＡ誘導Ｔ細胞増殖の検定に８
Ｈ−チミジン添加直前の第θ１目（・）、第２１目（△
）または第４１目（×）に加えた。 ｐ　ＩＩ　Ａの存在下の１゛リンパ単独による３１１−
チミジンの吸１区は、１２１１２±１２３　ｃｐｍであ
る。培養期間の開始時に１”Ｓ　ｌ？　ｆ加えて、培養
期間開始後３日目（△）に、また３１１−チミジンの吸
収を側足した。３０の検定におけるＰＨＡの存在下のＴ
細胞単独の３Ｈ−チミジンの吸収は１０２１６±１２３
　ｃｐｍである。 第１６図は、６　Ｔ　−２ＯＳ　Ｉ　ＦおよびＴ、ＳＦ
の抑制活性への単糖類およびインドメタシンの効果を示
す。７”　ＩＪンパ球を０．１％のＰＩＩＡで１０″″
ｌ希釈の６Ｔ−２Ｏ５ＩＦまたは１Ｏ−３希釈の１’　
Ｓ　Ｆの存在下に、５０ミリモルのα−メチルマンノシ
ド、ＮＡＧ、フルクトース工たはシムノース、または１
０μｔのインドメタシンを加えて、刺激した。３Ｈ−チ
ミジンの吸収を第４１目に測定し、そして応答％を計算
した。 第１７図は、遅延した過敏症における６Ｔ−２ＯＳｌ　
、１？の効果を示す。Ｃ“３ＪＪ雄マウスの左足裏のふ
くしみに６１−２０　Ｓ　ｌ　７ｉ’を、免疫化後第４
日日および第５１目に投与した。マウスを第５１目に対
抗させ、そして足板のふくらみの測定を２４時間後に行
った。 特許出願人　オーフ・ファーマシューテカル・（カナダ
）・リミテッド １４−−ミ巨 Ｆｉｇ、　１ 上ｊ菅けの尋仄 Ｆｉｇ、　４ ６７−２０ＳＩＦ　／）　ｈ釈 Ｆｉｇ、　５ ６Ｔ−２０５ＩＦのに〆 Ｆｉｇ、　６ ６Ｔ−２Ｏ５ＩＦの希釈 Ｆｉｇ、７ ６Ｔ−２Ｏ５ＩＦのｈ釈 Ｆｉｇ、　９ Ｆｉｇ。 今画８号 ０ Ｆｉｇ、１Ｉ ６Ｔ−２０ＳＩＦの奉叔 Ｆｉｇ、　１２ ６Ｔ−２０ＳＩＦ　ｔ＞希釈 Ｆｉｇ、１３ ＴＳＦの４蚊 Ｆｉｇ、　１４ ＴＳＦの４釈 Ｆｉｇ、　１５ ＴＳＦの肩り来尺 Ｆｉｇ、　１６ Ｆｉｇ、　１□　′”［ 遅差：ｒ水に運敏澹 ぼる ｇｌ、臘　６Ｔ−２Ｏ５ＩＦ 頁の続き Ｃｌ２Ｒ１：９１）

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １、高い力価の非ミトデンの非線；賎傷害性Ｔ細胞ケグ
   レツサー誘導：物質因子を構成的に分泌するりンノク芽
   球様細胞系統ＣＥＨの安定な６−チオゲアアニ／抵抗性
   突然変異体。 ２、　７２±１２の抜型を有する特許請求のＩ＋１）間
   第１珀記載の突然変異体細胞系統。 ３、Ｃ’ＥＭｆ２０１ｔｇ／ｍｌ〜３０μＩ／ｄの６−
   チオグアニンで細胞の少なくとも９０％を殺すために十
   分な時間処理することにより生産された特許請求の範囲
   第１項記載の突然変異体細胞系統。 ４、ミトケ゛ン誘導Ｔ細胞増殖の少なくとも９０％を１
   ０−６の希釈で抑制するが、ミトケ゛ン誘導Ｂ細胞の増
   殖を前記希釈で抑制しないサプレッサー誘導物質因子を
   分泌する特許請求の範囲第１項記載の突然変異体７翻胞
   系統。 ６、特許請求の範囲第１項記載の突然変異体細胞系統の
   安定なサブクローン。 ７、ミトケ“ン椅導ネＴ細胞増殖の少なくとも９０％♀
   １０−９の希釈で抑制するが、ミトケ′ン誘導Ｂａ胞の
   増殖を前記希釈で抑制しないサプレッサー誘導物質因子
   を分泌する特許請求の範囲第６項記載のサブクローン。 ８、ＡＴＣＣＣノ（Ｌ　８２９５の性・１４１を有する
   特許請求の範囲第６項記載のサブクローン。 ９、リンツク芽球様細胞系統會約２０μｊｊ／ｍｌ〜約
   ３０μｍ１　／　ｍｅの６−チオグアニンで前日己卸ｊ
   胞の少なくとも９（）％を殺すために十分な時間処理し
   、そして生存章しうる細胞を単離す◇ことを特徴とする
   、聖火したレベルのリンフ才力インを分泌するリン・ぐ
   芽球様細胞系統の安定な６−チオグアニン抵抗性突然変
   異体の生産方法。 １０、前記リン・ぞ芽球様細胞系統がヒトのものである
   特許請求の範囲第９項記載の方法。 １１、前記リン・ぞ芽球様細胞系統がＴ細胞起源である
   特許請求の範囲第９項記載の方法。 ｌλ　前記リン・ぞ芽球様細胞系統がＣ’　Ｅ　Ｍであ
   る特許請求の範囲第９項記載の方法。 １３、特許請求の範囲第９項記載の方法によって生産さ
   れた突然ｆ異体細胞系統。 １４、特許請求の範囲第１２項記載の方法によって生産
   された突然変異体細胞系統。 １５、α）　ｉｏ””−１での希釈においてミドダン誘
   導Ｔ細胞１の増殖の少なくとも９０％を抑制ｂ）　約１
   １０，０００ダルトンの冒分子歇タン・セフ室中に含有
   されており、 Ｃ）　生理的ｐＨにおいて最大のサデンソサー活件を示
   し、 ｄ）　５６℃において不活性化され、 ｅ）　非ミトケ９ンおよび非ｆ、ｉｌｌ　ｔｔｉｉｌ、
   　ｆ４害性であり、そして ｆ）　ヒト末梢血液リン・母球の増殖をミトゲン刺激に
   対して抑制するのと同じ効力で、マウス肝細胞の増殖を
   ミトゲン刺激に対して抑制する、ザデレッサー誘導物質
   因子。 １６、　６Ｔ−Ｃ’ＥＭｉたは６Ｔ−Ｃ’ＥＭのサブク
   ローンにより生産された特許請求の範囲第１５項記載の
   サプレッサー誘導′勿質因子。 １７、　Ｔ細胞の増殖の少なくとも９０％をミトゲン刺
   激に対しで２×１０″″４筐での希釈において抑制し、
   その抑制活性が単糖類ラムノースにより辿断される、非
   ミトゲンの非細胞傷害性Ｔ細胞・丈デレッ丈−因子。 １８．７’クリンパを有効Ｔ　、ｒｌｌ胞ナデレッサー
   因子誘導濃度の特許請求の範囲第１５項記載のサプレッ
   サー誘導物′崎因子で処理することを特徴とする、Ｔ細
   胞サプレッサー因子の調製方法。 １９、１イＩｌｌ胞サルツナ−因子が６　Ｔ　−２０８
   ＩＦである特許請求の範囲第１８項記載の方法。 ２０、有効Ｆ細胞ナデレツ丈−因子物導濃度が６Ｔ−２
   ０５ＩＦの１０−４希釈である特許請求の範囲第１９項
   記載の方法。 ２Ｌ、Ｔ細胞を有効１゛細胞増殖抑制量の特許請範囲第
   ２１項記載の方法。 ２３、動物に有効Ｔ細胞増殖抑制［λの特許請求の範囲
   第１５ｆ自記、戒のサブレツザー誘導ｉ吻質因子を投与
   することを特許とする、Ｔ細胞の増殖の抑制を必要とす
   る動物におけるＩ“細胞の増殖の抑制方法。 ２４、前記ｒＩ山物がヒトである７特許請求の範囲第２
   ３項記載の方法。 ２５、１細胞ケ有効Ｔ細胞増殖抑制閲の特許請求の範囲
   第１７項記載のＴ細胞サプレッサー因子で処理すること
   を峙斂とするＴ　ｄｌｌｉ１３の増殖抑制方法。 ２６、前記Ｔ細胞がヒトＴ細胞である特許請求の範囲第
   ２５項記載の方法。 ２７、ｖｌ物に有効Ｔ　４１１１　胞増殖Ｆｌｌ　ｉｔ
   ’ｌｌ　ｔ　（７）　’を干許Ｋｎ　）Ｆ−の範囲第１
   ７項記載の１゛細胞サプレツサー因子全投与することを
   特徴とする、Ｔ・１．１１１１１神１の増殖の抑制を必
   要とする動物におけるＴＩＩ（ＩＩ胞の増殖の抑制方法
   。 ２８、ｉ）　人間の被検者の血ｌ仮からのＴ　１７７８
   球を標進かつ有効Ｔ細胞サブレツナ−因子誘導濃度の特
   許請求の範囲第１５項記載のサプレッサー誘導物質因子
   で処理し、 １１）　生産きれたＴ細胞サルッサー因子の活性を測定
   し、そして １１１）　工１呈１１）においてイしｔられたＴ＆４旧
   １寓サプレッサー因子の活性を、特許請求の範囲第１５
   項記載のサプレッサー誘導物質因子により誘導されたＴ
   細胞サプレッサーの活性の対照値と比較することからな
   り、 前記対照は正常の人間およびリウマチ様関節炎を有する
   ことが知られている人間から得られたものである、 ことを％徴とする人間の被、灰者におけるリウマチ２９
   、ｉ）　宿主咄乳両物の骨髄を破壊し、１１）　骨髄移
   植物を供給咄乳動物から取り出し、そして １１１）　前記移植物を宿主咄乳動物へ移植動物へ移植
   する方法におりて、 骨髄移植物を特許請求の範囲第１５珀記載のサプレッサ
   ー誘導物質因子で処理することを、時機とする方法。 ３０、前記骨髄移植物の処理を試験管内で実施する特許
   請求の範囲ｉ＠２９項記載の方法。 ３１、組織移植物を供給呻乳動物から取り出し、そして
   前記組織移植物を宿主ＩＱｔｉ乳動物に移植する工程か
   らなる供給咄乳動物からの組織を宿主咄乳動物へ、１４
   便する方法において、宿主咄乳動物へ特許請求の範囲第
   １５項記載のサプレッサー誘導物質因子を投与すること
   を特徴とする方法。 ３２　組織移植物釈が腎臓、心臓、肝臓せたは