JPS6016926A - 抗腫瘍剤 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 本発明はホモカルノシンまたはその塩を有効成分として
含有する抗腫瘍剤に関するものである。

腫瘍治療剤の開発は現在大別して二つの概念に基いて行
なわれている。その一つは腫瘍組織の旺盛な核酸生合成
を阻害して癌を制圧するという考えに基くものである。

本邦においては例えばプレオマイシン（日本化薬株式会
社）、マイトマイシンＣ（ＭＭＣ（協和醗酵株式会社）
〕、５−Ｆ’Ｕ（協和醗酵株式会社）などがこの考えに
基き創製された治療剤である。その第二は宿主の免疫を
利用する非特異性能動免疫療法、いわゆる免疫促進剤に
よって治療するという考えに基くものであり、ピシパエ
ール（ＯＫ−４ｔ３コ（中外製薬株式会社刀、丸山ワク
チン（ＳＳＭ（ゼリア新薬株式会社）〕、クレスチン（
”ＰＳＫ（呉羽化学工業株式会社、三共製薬株式会社）
〕のごとき治療剤がこの範躊に属する。

しかしながら何れによる療法も完全な臨床目的を達し得
ない欠陥がある。前者は核酸合成の阻害作用が癌特異的
でないため肝癌組織以外の核酸合成をも阻害するので副
作用を避は得ない難がある。

後者の免疫促進剤による療法には免疫応答が癌特異的で
なくまた用いられる免疫促進剤の量と質の如何にか＼わ
らず基本的問題は産生される免疫応答量が網内系臓器固
有の応答機能に制約されることである。旺盛に増殖する
腫瘍を制圧するため何らかの方法によシ免疫応答効率を
高める手段が構しられなければならない。

ホモカルノシンは／ｑ６７年ビサノ（ｐ　ｌ５ａｎｏ）
らにより牛脳から抽出されたジペプチド、すなわちＬ−
ヒスチジニル−γ−アミノ酪酸で、脳髄中に約０．００
’ｌ　％含有される。発見以来その生理学的存在意義お
よび薬理学的有用性は未解明であった。

林ら（／ｑＡ、Ｓ−年）はホモカルノシンが脳髄に局在
し、γ−アミノ酪酸（以下ＧＡＢＡと略称する）をその
構造中に含むため、中枢運動系の抑制作用に注目し、て
んかん患者の脳を髄腔内注入によるてんかんの治療を試
みた。藤井およびエルトン・ニス・タックら（７９７７
年）は牛脳抽出成分がマウスのスタフィロコッカス・ア
ウロイス（Ｓｔ、ａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ　ａｕｒｅ
ｕｓ　）による感染に抗感染作用のあることを発見し、
その有効成分はホモカルノシンであることを決定した。

ホモカルノシンがインビトロで抗菌性を示さず動物に投
与して抗菌性を示すことはホモカルノシンの免疫応答に
対する増感作用を示唆するが、その研究は以後免疫研究
に発展せず、＋た免疫応答増強による抗腫瘍作用につい
ても今日まで全く発表はなかった。本発明者らは同種異
系ｐＤｙ＝ｓ−／ざθおよび同種同系ＢＡＬＢ／Ｃ−Ｍ
ＥＴＨ−Ａの二つの実験系を用い、移植癌に対し癌細胞
への直接作用でない、また従来の免疫促進剤の作用と異
る、非特異的能動免疫反応（免疫促進剤）、あるいは腫
瘍免疫反応を増強するホモカルノシンの抗頼瘍作用を移
植癌について確定して本発明を完成させた。

ホモカルノシンはつぎの化学構造式であられされるＬ−
ヒスチジニルＧＡＢＡで、脳髄巾約ｏ　、　ｏｏｑ％含
有される被デチドである。

■（ 融点コグコ〜おり’Ｃ１ｌ［、＝＋コ３．コ０の白色結
晶性粉末でその７０％水溶液は無色透明で弱アルカリ性
を呈し、弱いアルカリ性味覚を有する。

投与されたホモカルノシンは加水分解されてＬ−ヒスチ
ジンとＧＡＢＡになる。Ｌ−ヒスチジンは日常食品から
栄養素として多重に摂取されるアミノ酸でありまたＧＡ
ＢＡは脳代射促進剤として製薬化され〔第一製薬株式会
社、ガンマロン（商標）〕、安全性の確認された物質で
ある。前記ホモカルノシンの有効量３θ■／ｋｔ（皮下
注）（成人換算λ１．９ｇ）はＧＡＢＡ換算約／、７ｇ
である。ＧＡＢＡの薬剤として許容されている量は点滴
で０．７Ｓ〜／ｌ／３００〜ｇｏｏ−ブドウ糖液／、２
〜３時間／／日／〜３回である。しだがって、以上の両
面からホモカルノシンの抗腫瘍有効量のＳθｍｙ／ｋｙ
（皮下注）は点滴注射量の半分以下の量であり、その安
全性は十分に推測できる。

ホモカルノシンの合成については種々の方法が知られて
いるが、例えばつぎのようにして合成される（　Ｊｏｕ
ｒｎａｌ　ｏｆ　Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ　Ｃｈｅｍｌｓ
ｔｒｙ・、　：１８゜Δ（，２、ダ　デ　デ　〜　Ｓ　
０．２　、／９Ａ／）　。

カルがベンジルオキシ−γ−アミノ酪酸のメチレンクロ
ライド中の懸濁液にトリエチルアミンを加える。得られ
た溶液を一５℃に冷却したのちにエチルクロロホーメー
トを加え、この混合物をこの温度に７０分間保つ。この
溶液へ、予めθ℃に冷却したメチレンクロライド中し−
ヒスチジンメチルエステルジハイドロクロライドの懸濁
液にトリエチルアミンを加えることによってつくったＬ
−ヒスチジンメチルエステルの溶液を急速に加える。得
られた混合物を一夜間Ａ、！；ｏＣに放置する。

ついでこれを水および／　Ｎ　−ＮａＨＣＯｇで洗浄し
、Ｎａ　２８ＯＡで乾燥し、シラツブ状になるまで濃縮
する。

この生成物をメタノール中に溶解し、／Ｎ−ＮａＯＨを
加える。コタ℃において３時間保った後、その溶液を希
硫酸によりｐＨ左に調節し、減圧のもとに濃縮乾固する
。残渣を熱エタノールでコ回抽出し、この抽出物に水を
加える。１０％パラジウム−チャコールを加えて後、Ｃ
０２を吸収させる念めにカロクサイト管（Ｃａｒｏｘｉ
ｔｅ　ｔｕｂｅ　）を装備した装置の中でこの混合物を
水素添加する。水素添加後この溶液を１過し、減圧のも
とで濃縮する。得られた残渣状シラツゾを水に溶解し、
希硫酸でｐｎ　３に調節する。エタノールを徐々に加え
ると、この・ゾ啄プチドの硫酸塩が粒状結晶として分離
する。生成物を沢過し、水−エタノールから上記と同じ
方法で再結晶する。融点、２りθ’Ｃ（分解点）のホモ
カルノシン硫酸塩が得られる。

ダウエックス左θ（Ｄｏｗｅｘ　！ｒ　Ｏ）をカラムに
充填し／　Ｎ　−ＨＣ／で処理した後、チモールブルー
中性寸で水洗し、ホモカルノシン硫酸塩を／θチ溶液と
して流し、チモールブルー中性まで水洗して硫酸基を除
いた後、／　Ｎ　−ＮＨ４Ｏ’Ｈでホモカルノシンを溶
出する。濃縮１〜た後エタノールを加え、冷室に放置し
て、遊離ホモカルノシンの結晶を得る。

本発明はホモカルノシンの塩からなる治療剤をモ包含す
るが、ホモカルノシンの塩としてはカルデン酸基に基づ
く塩と、アミノ基にもとづく、薬理学上許容される酸と
の酸付加塩があり、またカルデン酸基とアミノ基の双方
にもとづく塩がある。

カルデン酸基にもとづく塩にはナトリウム、　カリウム
、　カルシウム、　マグネシウム、　亜鉛およびアルミ
ニウムのような金属との塩、　アンモニウム塩および置
換アンモニウム塩たとえばトリエチルアミンのようなト
リアルキルアミンその他のアミンとの塩があり、アミン
基にもとづく塩には塩酸、　硫酸、　リン酸、　酢酸、
　プロピオン酸、　乳酸、　酒石酸、　クエン酸、　コ
ハク酸、マレイン酸、ベンゼンスルホン酸、トルエンス
ルホン酸などの無機酸、　有機酸との塩があるが、これ
らはそれ自体公知の方法により、遊離のホモカルノシン
を化学量論的に計算された量の、選択された酸または塩
基と反応させることによって製造することができる。

つぎに実験例をあげてホモカルノシンの優れた抗肺瘍効
果を説明する。

実験例／ 材　料＋　ＤＤＹマウス、♂左週令（静岡系実験動物農
業協同組合から入手） 腫瘍細胞；ザルコ−ｒ　／　Ｋ　Ｏ（Ｓａｒｃｏｍａ　
／　ｇｏ）（北里研究所制癌教室小宮山保存株） 移　植Ｉ１０　個を正中肩甲部皮下に移植した。

投　与”Ｗｔ瘍移植後Ｊ＋時間（１日）から隔日／回計
ｌＳ回（２９日まで）および毎 日／回連続ＩＯ日間移植部から尾側に 約−２ｍ離し背部皮下に投与した。対照動物には生理食
塩水θ、／−を移植部から約、２　ｃｌｎＭ　Ｌ、背部
皮下に投与し、実験動物にはθ、／−生理食塩水中０．
θ／、０、θＳ１　θ、２、／Ｔｎ９のホモカルノシン
を移植部から約、２硼離し背部皮下に投与した。

９−１へ！ ＼　ベ 巽　仙　！＞　悟　夷　［６ Ｑ　胤　Ａ　兄　Ｒ梅　傅 ＾　３　足　１！Ｉ　諒　Ｑ　シ 脳　ｋ　塑　想　匪　＊　Ｏ 國　＠　誂　足　戻　■　φ 東　ｔｎＱ　侭　旨　も　東 、ｊ　ゆ　−ＩＪ　ハ　ｊ　喝　０ 伸　州　享　「　碗　セ　過 ＠　ｆＱ　晃　叫　冬　リ　。

匡　＋　０　沿　過　城　過　剖 Ｃ・　セ　檻　郡　櫨　舛　ｐｊ 電　翠　Ｕ　冊　■　Ｑ　過　Ｑ ＩＩＩ　表　剖　。　、、　任　固　ボＱｊね　剖　ｊ
Ω賂凶Ｐ 門 述　−− 一〇　あ　痔　３ 叫 実験成績：第１表に示すように３群のマウスに対しホモ
カルノシンの投与が平均生存日 数、死亡率、腫瘍の容積において抗腫 瘍効果を示した。

実験例コ 併用による抗腫瘍作用 材　料：実験例１に同じ。

腫瘍細胞：実験例１に同じ。

移　植：７０５個を正中肩甲部皮下に移植した。

投　与：腫瘍移植後−ダ時間（７日）から毎日／回連続
ｉｏ日間移植部から尾側に約 、２儂離し背部皮下に投与した。対照動物には生理食塩
水０．／ｄを移植部から約Ｊａｍ離し背部皮下に投与し
、実験動物にはＯ６／１生理食塩水中０．／　、　０．
、！？、／ダのホモカルノシンを移植部から約 、２ｃＩＬ離し背部皮下に投与した。またＯＫ−ダ３コ
単独使用の場合は０．／−生理食塩水中０゜ｓＫＥを腹
腔内に隔日／回計ｊ回、０Ｋ−１Ｉ３コとホモカルノシ
ンとの併用の場合は０．／　ｙｔｔ生理食塩水中θ・、
３−ＫＥの０Ｋ−１Ｉ３コを腹腔内に隔日１回計３回、
／ｌのホモカル ノシンを含有するものを移植部から約 −ｃｍｍし背部皮下に毎日／回計１０回投与した。

実験成績：０Ｋ−４＜３２との併用でホモカルノシ。

ンの効果は増強された。特に消滅例は 注目すべきである。

実験例３ 材　科：実験例１に同じ。

腫瘍細胞：実験例１に同じ。

移　植ニア０５個を正中肩甲部皮下に移植した。

投　与：腫瘍移植後、２１Ｉ時間（第１日）からホモカ
ルノシンｌＱ１０．／ｄ生理食塩水を毎日／回連続ＩＯ
日間移植部から約 コｃｌＬ１ｍシ背部皮下に投与した。

測　定：移植７３日後に殺して腫瘍を摘出して秤量し、
各５例の平均値をめた。

実験成績：第３表の各５例の平均値に示されるように、
腫瘍の電蓄に及ぼしたホモカル ノシンの抑制効果はいちぢるしい。

実験例グ マウス肉腫に対するホモカルノシンの抗腫瘍作材　料：
ＢＡＬＢ／Ｃマウス、♂Ｓ週令（静岡系実験動物農業協
同組合から入手） 腫瘍細胞：ＭＥＴＨ−Ａ（、？−Ａ−／−，２）（北大
株、第一製薬中央研究所保存） 移　植：腹水型のもの！×７０　個（第７表の／）およ
びツ×１０　個（第７表のコ）を正中肩甲部皮下に移植
した。

投　与：腫瘍移植後コダ時間（第１日）から毎日／回連
続ＩＯ日間移植部から尾側に 約コα離し背部皮下に連続投与した。

対照動物には生理食塩水Ｏ３／４を移植部から約２ｃｍ
離し背部皮下に投与し、実験動物にはｏ、ｉ　ｙ生理食
塩水中／、０９（第弘表の／）およびＯ，Ｓダ（第ダ表
のコ）のホモカルノシンを移植部か ら約−ｃａ　１ｍ　Ｌ背部皮下に投与した。

作用 １　！×１０５ 対照　３１７．／　／θ／１０　／θＯθＨ，Ｃ，／　
ダ　１１２．／　１０／１０　１００　０．２．　コ×
１０５ 対照　３’１．Ａ　９／ｑ／ＤＯＯ Ｈ，Ｃ，０−３；　Ｗ　、３に、ｇ　１０／／／　９／
　／実験成績：　ＢＡＬＢ／Ｃ−ＭＥＴＨ−Ａにおいて
もＤＩ）Ｙ−８−／ｇＯの場合と同様にホモカルノシン
による抗腫瘍作用を認 めた。またコ×ＩＯの移植例で１例 の消滅を認めた。

総括 （１１Ｄ　Ｄ　Ｙ　−Ｓ　−／　ｇ　Ｏの系に対し腫瘍
移植後第１日ないし第３０日の間、隔日７回、計ｌ！ｒ
回投与および移植後第１日ないし第１θ日の間、連続７
日／回、計７０回投与により、ホそカルノシンは対照に
比し、平均生存日数の延長効果、腫瘍容積において抗腫
瘍作用を示し、また連続７日７回、計１０回投与での７
３日における測定結果で腫瘍重量は対照に比しいちぢる
しく抑制されていた。特に北里研究所制癌教室の小宮山
保存株は本邦では他の研究所に保存されているどのザル
コマ／ｇＯよりも極めて強力な増殖性を有する癌株であ
るといわれており、従来の免疫促進癌治癒剤では容易に
抑制出来ない株であるから、小宮山株（Ｓ−／ざＯ）で
示されるホモカルノシンの効果はその人癌に対する有効
性を充分に実証する。

（２）ホモカルノシンと免疫促進剤の代表例として用い
た０Ｋ−４ｔ３．１との併用投与は何れの単独投与より
も著名な平均生存日数の延長と消滅の効果を示す。第−
表に示す実験結果を米国国立癌研究所の抗癌化学物質効
果判定の規準に従い計算すれば第３表のごとくである。

Ｔ　／　Ｃ係評価法でもホモカルノシンは０Ｋ−ｌＩ３
２よりもすぐれた効果を示した。更にホモカルノシンと
０Ｋ−１１３４との併用はホモカルノシン単独よりも、
またアクテイプゾラセが−として使用した０Ｋ−１１，
３コよりも効果を示し、両者の併用によって効果は３３
％増強した。

第　Ｓ　表 処置　ＴｉＣチ Ｈ，Ｃ・／■　／３４ ＯＫ−ＩＩ３．２θ、５ＫＥ　／　／　、？評価の方法 判定の最終日は第６０日でおる。生存日数中央値（Ｍ、
Ｓ、Ｔ−ｍｅｄｉａｎ　ａｕｒｙｌｖａｌ　ｔｉｍｅ）
はＣ×Ｊ Ｍ、Ｓ、Ｔ・＝Ｌ十□で表わされる。

ｆＭ （但しＬは中間のマウスの死亡日の下限値、 Ｃは死亡日の１区切、したがって 普通は／、 ｆＭは中間のマウスの死亡日に死亡 したマウスの総数、 Ｊａ中間のマウスの死亡日のマウ スの中で中間マウスに到達す るまでのマウス数である。） 抗癌化学物質のスクリーニングでＴｉＣ％ｌユ０以上が
有効として評価される。

ｆ３１　ＢＡＬＢ／Ｃ−ＭＥＴＨ−Ａ系のａ群に対する
ホモカルノシンの投与は生存日数を延長し、かつ消滅例
がおシ抗腫瘍効果を示した。

Ｂ　Ａ　Ｌ　Ｂ　／　Ｃ−Ｍ　Ｅ　Ｔ　Ｈ−Ａ系は同種
同系であるから、移植免疫のない同種同系に対する抗腫
瘍作用は人癌に対する有効性を更に確実とする。

以上のようなホモカルノシンの抗腫瘍作用はホモカルノ
シンを各種臓器癌、例えば胃癌、　直腸癌、　乳癌、　
子宮癌、　口腔癌、　食道癌。

胆癌、　胆管癌、　胆道癌、　膵臓癌、　前立腺癌、　
悪性甲状腺腫瘍、　肺癌、脳腫瘍、　肝臓癌、　舌癌、
　胸腺腫、　皮膚癌などの治療に単独で、或いは例えば
０Ｋ−１３−のような免疫促進剤と併用してその作用を
増強することによシ非常にすぐれた治療効果が期待でき
る。

本発明の抗腫瘍剤は疾患に対するホモカルノシンの経口
投与または非経口投与が都合よく行われるのであればど
んな剤形のものであってもよく、例えば注射液、　粉末
剤、　顆粒剤、　錠剤、カプセル剤、　腸溶剤、　軟膏
剤、　坐剤、　注腸剤、トローチなどの種々の剤形なあ
げることができるが、これらを患者とその腫瘍の種類、
症状などに応じてそれぞれ単独で、または組合せて使用
する。基礎的効力実験から推定される成人の臨床用量は
７日当り、一般的にはＯ−５〜３１１（経口）で、症体
に応じて適当な時間間隔で分割投与するのが好ましい。

ホモカルノシンは水に易溶であるため、無菌的操作のも
とに容易にホモカルノシンの３％、３％またはＩＯ係氷
水溶液つくることができる。これを不活性ガス気流下に
アンプルに封入したものを普通の注射器によって注射す
る。また予め無菌的操作によ）アンプルあるいはバイア
ル瓶に凍結乾燥して封入したホモカルノシン粉末を注射
直前に無菌蒸留水で溶解し、３チ、３％またはＩＯ係の
水溶液として直ちに注射に使用してもよい。

経口投与の粉末剤、顆粒剤、錠剤またはカプセル剤は結
合剤例えばシロップ、　アラビヤゴム、ゼラチン、　ソ
ルビット、トラガントまたはポリビニルピロリドン、　
賦形剤例えば乳糖、　とうもろこしデンプン、リン酸カ
ルシウム、　ソルビットまたはグリシン、　潤滑剤例え
ばステアリン酸マグネシウム、　タルク、　ポリエチレ
ングリコール、　ヒドロキシプロピルメチルセルロース
またはシリカ、　崩壊剤例えば馬鈴薯デンプン、或は湿
潤剤例えばラウリル硫酸ナトリウムなどを使用し、当業
界で慣用の方法で製剤する。錠剤は当業界において周知
の方法でコーティングしてもよい。

軟膏剤を製造するには、製剤界に公知の技術にしたがい
、所望濃度の軟膏となる量のホモカルノシンの微粉末を
軟膏基剤例えばサラシ密ロウ、鯨ロウ、　脱水ラノリン
、　白色ワセリン、　高級アルコール、　マクロゴール
類あるいはゾラスチベース（大正製薬Ｋ・Ｋ−製　ハイ
ドロカーがンｒル軟膏基剤）、日本薬局性収載の親水性
軟膏、吸水軟膏またはこれらの混和物と混和し、これに
必要に応じコ９７油、　落花生油、　オリーブ油等の油
類、　樹脂類、　グリセリン、　プロピレングリコール
、　界面活性剤、　殺菌剤、　防黴剤、酸化防止剤等を
添加し、均質となるまで十分にか＠まぜて練如合わせる
。

坐剤も軟膏剤とほぼ同じ様につくられ、例えば溶解した
坐剤基剤中に防腐剤とホモカルノシンとを加えて均一に
混合し、鋳型に流し込み、固化させて取り出す。

つぎに本発明の抗腫瘍剤の製剤例をあげる。

製剤例／（注射剤） 無菌的操作のもとに、合成したホモカルノシンを３チ１
．！ｒチまたはＩＯ’ＡＣいずれもホモカルノシンとし
て）の水溶液としてアンプルに充填した。

製剤例コ（Ｉ１１１Ｉ粒剤） 合成したホモカルノシンを用い下記処方ホモカルノシン
　０．２　１ 乳　糖　０６３グ　ｇ とうもろこしデンプン　ｏ、ｌＩ！ｒｙ顆粒剤　／、０
０１１ で顆粒剤を製造した。

製剤例３（軟膏剤） 合成したホモカルノシンを用い、ハイドロヵーゼンｒル
軟膏基剤を基剤として下記処方ホモカルノシン　Ｏ０Ω
　Ｉ ハイドロカーがンｒル軟膏基剤９９．ｇ　Ｉ００　ｇ で０−．１　％軟膏剤を製造した。

製剤例１Ｉ（層剤） 合成したホモカルノシンを用いホスコｓ−，ｒｔ（丸石
製薬ＫＫ）を基剤として下記処方（層剤／ケ分） ホモカルノシン　Ｏ２０コ　Ｉ 、４ラオキシ安息香酸エチル　θ、Ｏθθｇｓ　１ホス
コ５−ｔｔ　適　量 で層剤を製造した。

ホモカル７ノシンと７９ラオキシ安息香酸エチルを一〇
〇メツシュで篩過し、！ｒ０°Ｃで溶解させたホスコＳ
−ｊ’ｊに多音づつ加え均一になるように調製した。鋳
型への注加は３ざ０Ｃで行ない、室温で放冷固化後冷蔵
庫で冷却した。これを鋳型から除き、ノぜラフイン紙で
包装した。

Claims (1)

【特許請求の範囲】
1. ホモカルノシンまたはその塩を有効成分として含有する
   抗腫瘍剤。