JPS6018762A - 安定化された凝固対照試薬 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 本発明は臨床分野に有用な安定化された対照生成物に関
するものであり、そして殊に安定化された凝固対照試薬
及び血漿−レニン（ｒｅ％ｉ′ｒＬ）対照試薬に関する
ものである。

本発明は本発明の発明者により同時出願される［安定化
された多指標（ｍｕｌ　ｔ　ｉｐａｒａｍｅ　ｔ　ｅｒ
　）対照生成物（ＯＲＤ−５０）Ｊなる表題の関連出願
に関連がある。

止血は血管、血漿、血小板、血管壁、神経及び面素性（
ｈｕｍｏｒαｌ）活性を含めた複雑な生命救助方法であ
り、すべて出血を止める目的である。

特に最近の数十年間に殊に凝固の過程及び一般的−ｌ　
Ｏ− に止血に関する多くの研究が々されたが、特に寄与機構
の相互作用についての詳細に関しては完全には理解され
ていない。セ１１えば、固い血液の凝固の生成に関与す
る化合圀はＳ５槙以上であることが知られている。かく
て表面上、血液の凝固は体内で起こる複雑な化学工柳の
１つである。事実、凝固の過程で非常に多くの分離され
た成分があるため、Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａ、ｌ　Ｉ
ｌｔｔｍａｔｏｌｏｇｙ　Ｃｏｎｇｒｅｓｓによシ組織
されたＩｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ　Ｃｏｍｍ１ｔｔｅ
ｅｏｎ　Ｎｏｍｅｎｃｉａｔｕｒｅ　ｆｏｒ　Ｂｌｏｏ
ｔｌ　Ｃｏａｇｗｌａｌｉｏｎは今や一般的に昭められ
るようになった一連の名称を採用した。最も普通のこれ
らの名称（一般的に交代で使用）及び内子の指定には次
のものが含１れる： 第１因子　フィブリノダン、 第■因子　プロトロンビン、 第１１１子トロン＋１６ノラステン、 第Ｗ因子　カルシウム、 第■因子　（現在使用せず）、 第■因子　血清プロト呻ンビン転化促進剤（Ｓ７）（：
’、４）　、安定因子、 第■因子　抗血友病性因子（ＡＨＦ）、第Ｘ因子　クリ
スマス因子、血漿トロンホゾシスチン成分＜ｐｒｃ＞、 第Ｘ因子　スチュアル）　（Ｓｔｒｂａｒｔ）因子、ス
チュアルトープラウア−（ｐｒｏｗｅｒ）因子、 第Ａ因子　血漿トロンボプラスチン前駆体、第Ｘ因子　
ハーグマン（Ｈａｇｅｍａｎ　）因子、第ＸＩ［Ｉ因子
　フィブリン安定化因子、グロフイプリノリジン　プラ
スミノダン、フィブリノリジン　プラスミン。

上記の袖々の因子の存在及び定量の診断的測定は重要で
あり、その理由は異常凝固に伴なわれる多くのＣＩＡ床
的に関連ある病気がこれに伴なわれるからである。例え
ば、第１因子の不在が奴も多く、そして２．０００６ト
μ上も知られているＡ型血友病の如き遺伝的な凝固欠陥
の叡大な原因となる。第Ｘ因子のｉｎ　ＩＢＭ濃度にお
ける不足は一般的にＢ型血友病お引越こす遺伝的に決め
られた欠如を伴なう。

出血症は第ｘ及びＸ因子の欠如から生じ、一方第刈因子
の欠如は長い凝固時間の原因となるが、実質的な凝１ｍ
ｌは生じる。また肝臓症患またはビタミンＸ欠乏は第■
、１、■及びＸ凝固因子の異′に値を伴ない、峰の埋田
はこれらのものが主に肝臓で生成されるからである。異
’ｇ＃固の他の原因１皿小板数の減少、ｌ１ｊｌ小破減
少症に関連し、しはしば第■、■、■及びＸ凝固因子の
異冨値を伴ない、その理由はこγしらのものが肝臓で生
成されるからである。異常幾Ｈの他の原因は血小板数の
減少、−１３− 血小板減少症に関連し、しばしば悲性貧血、ある種の薬
剤治療、光線療法または抗体による増加した末梢破壊に
伴なわれる。

凝固時間の試験の臨床値は遺伝的または病理学的病状の
検出に限定されず、抗凝固剤療法のｚｇ＝にも有用であ
る。抗絣固剤は代表的には例えばアンチトロンビンｍに
よる第Ｘ因子のヘパリン媒介阻害による凝固機序を阻害
する。先天性欠如、病理学的病状または抗凝固剤療法に
よる凝固機序における欠乏は一般的にＲｏｂｅｒｔ　Ｄ
　、　Ｌａｎｇｄｅｌｌ。

Ｉｎ　Ｃ１１ｎｉｃａｌ　Ｄｉａｇｎｏｓｉｓ、Ｄａｖ
ｉｄｓｏｎ　及びＨｅｎｒｙ、１９７９による「Ｃｏａ
ｇｕｌａｔｉｏｎ　ａｎｄ１１ｅｍｏｓｔα８ｉ８」第
７章に示されている。

通常理解されるように、凝固は２つの経路、いわゆる内
的経路及び外的経路によシ生じる。前者は一般的に安定
化されたフィブリン凝固の生成を実質的に刺激する多数
の過程を介して表面（第■−１４− 活性化因子と名りられる）の存在により、リン脂質及び
カルシウムの存在と共同して開始される。

部分的トロンボプラスチン（ＰＴＴＩ試験は代表的には
最も先天性欠乏柾が生じる内的経路を測定する。従って
このタイプの試験は優れた予備外科的凝固スクリーニン
グ試験として役立つが；この試験に用いる試薬は代表的
には血小板代替物であるため、ＰＴＴ試騨は皿小板清性
を測定しない。

外的経路は一般的に組懺に対する損傷により開始され、
そして生じる組織トロンがグラスチンの浸出が第■及び
Ｘ因子に作用し、その後一連の過程によりフィブリン凝
固が生じる。この外的経路は一般的にいわゆる一段プロ
トロンビン時間試験により試験され、これによシ抗凝固
剤療法対照に対して、ｌ洋口抗凝固桑によシ抑制される
ほとんどの因子を検出する。トロンビン時間試験は代表
的にはフィプリノグンのｍｌｏ及び反応性を測定する。

この試験は迅速な牛定量的試峡であり、征って脈管向凝
固及び線＃索ｍ解分析に対する選択のへ訣である。上記
のことをまとめて次の第１表並ひにＯｒｔ　）Ｌｏ　Ｄ
ｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ、　Ｉｎｃ、、　Ｒａｒｉｔａｎ
、ＮｅｗＪｅｒｓｅｙ出版（７）　［Ｃｏｎｃｔｒｎｔ
ｒｉｃ　Ｃｏｎｃｅｐｔｓ　ｏｆＣｏａｇｕｌａｔｉｏ
ｎ　１９７１．１９７５Ｊなる表題の小冊子に表わす。

−　１７− かかる注意を特定の患者の凝固能力及び特殊な因子の存
否にそそぐ際に、これらの因子量及び凝固を一般に測定
するように計画された手動及び自動的方法のべ正な操作
を確認するために適当な対照を入手しなければならない
ことは自明のことである。従来、入子し得るかかる対照
は代表的には部分的に成分の不安定な性質に大々的に依
存して液状及び乾燥状態の両方において比較的寿命が短
かいか、または凍結乾燥の如き乾燥工程に耐え得ないこ
とに特徴があった。

安定な状態で存在する特定の因子の適当量をイイし、凍
結乾燥し得る血漿レニン及び凝固対照試粟を提供するこ
とが本発明の目的である。

凝固対照及び血漿レニン対照試薬を安定化し得る方法を
提供することが本発明の他の目的である。

手動及び自動的な腎性（ｒｅｎαｌ）高血圧試験及び凝
固試験に有用な安定化された状態の試薬を提−１８− 供することが本発明の他の目的である。

本発明の目的及び原理によれば、層状安定化媒体（ｐｌ
ｅｘｉｆｏｒｍ　ｓｔａｂｉｌｉｚｉｎｇ　ｍｅａｎｓ
　）ノ添加により実質的に安定化さルた凝固対照試薬及
び血漿し二ン対照試薬を提供する。凝固対照試薬の場合
、抗峡１６１媒体を′・す（的に脱畑維化した血漿に加
え、これにより凝固成分をもとのままに保持し、そして
ｈ’＋Ｗフィブリン生成を抑制する。加えて、ショ糖、
膚元性ＪＰ　’ｉ９類糖及び還元性二糖類糖よりなる抑
から選ばれる層状安定化媒体は約３〜ｉ。

容梱、チの前回の最終生成物として存在させるように加
える。好飛な姥状安定化１“１■体はマルトース、マン
ニトール、セロビオース、グルコース及ヒラクトースよ
りなるＢ′ｃがら選ばれ、最後のものが最も好ましい。

加えて、所望のタイプの凝固対照試薬によれば、杓可の
（１石ｃ１１１子塘たは囚１子（複数）？Ｕえは第■及
び／′−ｉた１、↑夏因子は除去することができる。

本発明の血漿レニン対照試薬は凝固成分が実質的にもと
のま捷に保持される抗凝固媒体、及び凝固対照試薬に記
載したものと同様の涜状安定化媒体を加えた選択された
皿泉からなる。抗凝固坐（体はクエン酸塩、シュウ酸塩
、ＥＤＴＡ　（エナレンジアミン四酢酸）、ヘパリン及
びそのいずれかの組合せより々る群から瑞ぶことが理想
的である。

最も好適な具体？１」では保結乾燥の如き公知の方法に
より央′Ｕ的にすべての水を除去する。

本発明の試薬生成物は化学分析において手動方法並びに
自動的方法に使用する際に有用であり、そして凝固及び
血漿し二ン活性を含む試験に殊に有用である。これらの
−（験には例えば゛庁性尚血圧試験、実際の凝固試験、
アンジオテンシン（ａｎｇｉｏｔｔｔｎｓｉｎ　）　Ｉ
及び／丑たは■に対する試験、並びに代表的には新鮮な
人間の血漿のみで試験されるレニン活性試験が含まれる
。殊に最後の試験に関して予期されるように、特に適当
に安定化された状態で適当な対照試薬を得ることは困邸
である。

かかる安定化された状態は経費を最少にし、そして毎日
の試験ベースに対するデータの比較統合性を増大させる
ために端圧分野において殊に望ましい。

因子欠如対照’ｒ％定の症患状態で通常予期される程匿
で提供するためにある程度対照を人工的に変え得る以外
は対照試薬物質はできる限り患者の試料に近づけて似さ
せることが理想的である。例えば、心臓梗塞にかかった
患者は増加したレニン量を有することを予期し得る。レ
ニンは血漿蛋白質に作用し、これによジ狭窄した血管に
ょシ生じる血圧の上昇の原因となるアンジオテンシンを
生じることは公知である。遠心性ゴルメルーラー−２１
− （ｇｏ　ｌ　ｍｅｒｖ、ｌ　ａｒ　）細動脈中に生じる
と思われる蛋白質分解酵素であるレニンはハイ・９−テ
ンシノケ゛ンと反応してアンジオテンシン■を生じさせ
る。

この＠後のものはデカベゾチドオルモンであり、血管狭
窄に影響する上に副腎皮質によりアルドステロン分泌も
変える。またアンジオテンシンはハイパーテンシンとし
ても公知である。アルドステロンは主にナトリウム及び
カリウム代謝を調節する作用を市し、それによシ心臓の
機能に７１１．要力作用を及ばずスラロイドホルモンで
おる。

従って、正確な試験方法を確認するために、血漿しニン
対照試楽は実情的に必要であり、そして安定状態である
場合に殊に望塘しい。本発明の目的によれは、かかる対
麟試梨はここに可能である。

このものは理想的には人間からの、好ましくはその高い
レニン量に対して選はれた血漿からなるものである。加
えて、抗凝固剤を加えζしこのことに−２２− より凝固成分けもとのｉｔに保持し、且つフィブリン生
成ｗ　ｊ＋（＋制ｔ、　イ４Ｉる。かかるト＾−凝固削
はクエン酸塩、シュウ酸Ｑ、Ｅ　ｌ）　７”　Ａ、ヘパ
リンまたけそのｉｆ、Ｉ−１合ぜよりｌる１１１−から
路択し７伶る。

コブ元性単ｑ＋Ａ知砧及び頑元１′４−二糖類糖よりな
る群から選ばれる履状安′ＩＬ化媒体を加えることによ
り所室の安定性がイＳられる。好適な具体例ではマルト
ース、マンニトール、セロビオース、ラク’ｐ−スまた
はグルコースを用いる。最終の係頭度が好ましくは約３
係〜ｌＯ％の範囲になるように硬状安穎化媒体を加える
。先に示した関連出願である０ＲＤ−５０に史に評卸１
にｉ６収したコルシ、褒状安定化媒体は三仏元「相部１
牛」構造を与えると考えられ、これによりｉｈ白質、ア
ナライト　（αｎａｌｙｔｓ　）、及び対照眩柴の成分
ケ安定化された近位に保持する。更に本明細畳の発明者
は層状安定化媒体が実質的に強面な状態で個々の成分全
保持する役目をし、それによりアナライトの物理的移動
に伴われるか、またはそれにより生じ得る劣化外たは不
安産性の、１呈褪が減少すると考えているが、かかる考
えが不発明を限定しないことを希望している。

更に、褒状安定化媒体は凍結乾燥の如き水の除去エイ１
三申に水の昇華を助ける作用がある。このことが達成さ
れる実際の憬横は未知であるが、凍結乾燥後の試薬の再
生が迅運に且つ試薬瓶−試薬瓶の＋ｌｌ）視性が増大し
て行われることが殊にＯＲＩ）　−５０符計出願の贈１
圧化学的夕」照試薬に関して見い出された。またこ扛ら
の利点は次のへ発明の対照試呆の凍結乾沫でも予期し倚
る。

同様に、凝固対照試薬は理想的にはこのものに上記の如
き抗訣固創を加えた血漿から生成し、これにより硬固成
分はもとの１１に保持され、そして残留フィブリン生成
が実智的に抑制される。上記の淑状安定化婢体に追加し
て、所望の凝固対照試薬のタイプに従って一片足の凝固
因子の１つまたは複数個をｌｊ、ｊ去するために凝固対
照試薬を調整することができる。１夕１１えば、第１因
子（フィブリノダンまたは第■因子（抗［ｒｌ［太柄性
因子）が実質的に欠如している試薬が望ましく、次にこ
れらの成分を例えはエタノール抽出もしくは冷却により
除去できるか、または他の因子に対しては本分野で公知
の他の方法によシ除去できる。

血漿レニン対照試薬と共に、褒状安定化媒体は三次元構
造を与えて安定性、凍結乾燥に続いての再生の速度及び
優れた試薬瓶−試薬瓶の再現性を太いに増大場せる。更
に、０ＲＤ−５０特許出願において更に十分に説明され
ているように、凍結乾燥が達成される速度は凍結点が低
下したにもかかわらず実際は増加され得る。このことは
主に共融点プラトーの除去によるものと考えられる。力
１）えて、十分には所、明でき力い理由によるが、再生
−２５− された物質は代表的にはより太き々光学的透明度を示す
。

とのことは多分、少なくともある部分において蛋白質の
劣化、殊に凍結乾燥中での問題が減少したためである。

また本発明によシ他の利点も得られ、そしてそれには脱
線雑業化された血漿が褒状安定化媒体を加えることによ
り、それ程促進されていない脱線維累化された血漿に比
べてより児全に脱線維素化されるように見えることが含
まれる。かくて、ここで見られる史に映いｒル状凝固物
はこのものから自然に進行したものであり、そしてまた
血漿中に存在する他の固層の凝固因子の全体の安定性を
市め得ることが示される。

また本発明の最も好適々試薬は本分野で公知の方法によ
り実質的にすべての水を味云したものである。かかる方
法には無制限に凍結乾燥などが含−２６− まれ、そして貯蔵寿命を増大させるのに役立つ。

理想的には、生じる乾燥生ｂｖ物を約２〜８℃で貯峨し
、そして使用内前に丙生ずる。

本明細書に用いる安定性とは最初に測定された宿性の少
々くとも９０係の活性がその後に測定されることを意味
する。

本分野に硝萌せる者には容易に認識され得る通り、本発
明の硝神または範囲から離れることなしに多数の実質的
でない変法筐たは上記の成分の代替物を作ることができ
る。

％許出顧人　オーツ・ダイアグノスティック・システム
ズ・インコー、ｌ？レーテッド２７−

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １、ａ）聞喚； ｂ）凝固成分をもとのままに保持し且つフィブリン生成
   を抑制する抗凝固媒体； Ｃ）約３係〜１０チの最終容ｔｔ％の範囲で選ばれる襞
   状安定化媒体を含有して彦す；そしてｄ）所望の凝固対
   照試薬のタイプに従って特定の凝固因子の１つまたは複
   数個を調整するために、形血漿が手で扱われることを特
   命とする安定化された凝固対照試薬。 ｚｇ状安定化媒体がショ糖、ラクトース、マンニトール
   、セロビオース及びマルトースヨシする鮮から選らばれ
   る特許請求の範囲第ＵＩ己載の試薬。 ３、血漿が人間の血漿である特許請求の範囲第２項記載
   の試薬。 ４、抗凝固剤がクエン酸塩、シュウ酸塩、ＥＤＴＡ、ヘ
   パリン及びそれらの組合せよシなる群から選らばれる特
   許請求の範囲第３項記載の試薬。 ５、除去される凝固因子が第１因子、第８因子及びその
   組合せよりなる群から選らばれる特許請求の範囲第４項
   記載の試薬。 ６　襞状安定化媒体がラクトースである特許請求の範囲
   第４項記載の試薬。 ７、襞状安定化媒体がショ糖である特許請求の範囲第４
   項記載の試薬。 ８、襞状安定化媒体がセロビオースである特許請求の範
   囲第４項記載の試薬。 ９、実質的にすべての水が除去されている特許請求の範
   囲第４ｒ頁記載の試薬。 １０．　実ノ員的にすべての水が除去されている特許請
   求の範囲第６頂ｂｌｉ載の試薬。 １１、実質的にすべての水が除去されている特許請求の
   範囲第７ｊロ記載の試薬。 ｉｚ　実質的にすべての水が除去されている特許請求の
   範囲第８　’Ｊ−ａ、　ｍ：載の試薬。 １＆　α）全廂を準備し； ｆ））、１ｆ１１漿を得るために該全面から実質的にす
   べての細胞（−シル）を除去し冨 Ｃ）凝固成分をもとのままに保持しそしてフィブリン生
   成を抑制する抗凝固媒体を加え冨ｄ）所望のん←固対照
   試薬のタイプに従って特定の凝固因子の１つ捷たけ複数
   個を調整し；そして ８）約３％〜ＩＯ％の最終容量チの範囲で存在するよう
   にショ糖、題元性単糖類糖及び還元性二糖類砧よりなる
   群から選ばれる嵌状安定化媒体を加える、 上記（α）〜（ｅ）の工程を包含することを特徴とする
   安尼化された凝固対照試薬の製造方法。 １４、敵状安定化媒体がショ糖、ラクトース、マンニト
   ール、セロビオース及ヒマルトースより力る肝から選ら
   ばれる特許請求の範囲第１３項記載の方法。 １５、蔽状女定化媒体がラクトースである特許ｌ１ｉｉ
   ｌ末の範囲第１３項記載の方法。 １６、Ｊ抗凝固媒体がクエン酸塩、シュウ酸塩、ＥＤＴ
   Ａ、ヘパリン及びそのｍ台せよυなる群から選らばれる
   特許請求の範囲ム’４１４項記載の方法。 １７、該抗凝固媒体がクエン酸塩、シュウ酸塩、ＥＤＴ
   Ａ、へＩ’　ＩＪン及びその組合せよりなる群から選ら
   ばれる特許請求の範囲第１５項記載の方法。 １８、因子除去工程が冷却による第■因子の除去、エタ
   ノール抽出による第１因子の除去及びその組合せよりな
   る群から選ばれる工程を包含する特許請求の範囲第１６
   項記載の方法。 １９、除去工程が冷却による第■因子の除去、エタノー
   ル抽出による第！因子の除去及びその組合せよりなる師
   から選ばれる工程を包含する特許請求の範囲第１７項記
   載の方法。 ２０、実鴇的にすべての水を除去する工程をさらに含む
   特許請求の範囲第１３項記載の方法。 ２１、実費的にすべての水を除去する工程をさらに含む
   特許請求の範囲第１８項記載の方法。 ２Ｌ　実装的にすべての水を除去する工程をさらに含む
   特許請求の範囲＠１９項記載の方法。 ２３、水の除去工程を凍結乾燥によシ行う特許請求の範
   囲第２０珀記載の方法。 ２４、水の除去工程を凍結乾燥により行う特許請求の１
   ｌｌｐ、門弟２１　、’ｒＲＦｔｉ載の方法。 ２５、水の除去工程を凍結乾燥により何う特許請求の範
   囲第２２項記載の方法。 ２６　ａ）既知のレニン水準を有する血漿；ｂ）凝固成
   分をもとの寸まに保持し且つフィブリン生成を実質的に
   抑制する抗凝固媒体；及びＣ）約３係〜１０係の最終容
   量係の範囲で存在する還元性単糖類糖及び還元性二糖類
   糖より力る群から選ばれる叢状安Ｗ化媒体、 を含有してなるアンジオテンシン試験に有用な安定化さ
   れた血漿レニン対照試薬。 ２７、嵌状安定化媒体がマルトース、マンニトール、セ
   ロビオース、ラクトース及ヒグルコースよシなる群から
   選らばれる相許請求の範囲第２６項記載の試薬。 ２８、襞状安定化媒体がラクトースである特許請求の範
   囲第２６項記載の試薬。 ２９、血漿が人間の血漿である特許請求の範囲第２７項
   記載の試薬。 　６　− ３０　血漿が人１１１１の血漿であるｔ特許請求の範囲
   ２９．２　ｓ　ＪＫ＋　ｄ１載のＢ＋１．：、’、’＋
   ｋ。 ３１、、、、Ｔｊ抗凝固媒体がクエン酸塩、シュウ酸塩
   、Ｅ　、Ｄ　ＴＡ　、ヘパリン及びその組合せよりなる
   群から蓮らばれる特許請求の範囲第２９項記載の試薬。 ３λ　形わロノＱ固媒体がクエン酸塩、シュウ酸塩、Ｅ
   　ｌ）　Ｔ　Ａ、へ・−Ｉ’ｌｌン及びその組合せより
   なる群から２１ζらばれる特許請求の範囲第３０項記載
   の試薬。 ａ３．実Ｊ４ｉ的にすべでの水が除去されている特許誼
   ）ｌテの卸、回虫２６唄１−１１；載の試薬。 ３４、夷′１」的にすべての水が除去されている特許請
   求の範囲第２７肩記載の試薬。 ３５、実ノｔｔ的にすべての水が除去されている特許請
   求の範囲第２８：’−１１ｉ由奴の試薬。 ３６、実質的にすべての水が除去されている特許請求の
   ｉト１１囲第２９項記載の試薬。 ３７、実質的にすべての水が除去されている特許請求の
   範囲第３０項記載の試薬。 ３８、実質的にすべての水が除去されている特許Ｗ内求
   の範σ旧第　３１　ノ追１ｈ己川父の静こ梨。 ３９、α）既知のレニン活性を有する血漿を選択し： ｂ）凝固１與分をもとのままに保持し且つフィブリン生
   成を実質的に抑制する抗凝固媒体を加え；そして Ｃ）約３チ〜ｌＯ％の最終容量チの範囲で存在するよう
   に還元性単糖碩糖及び還元性二循類糖よりなる群から瀉
   ば、？Ｌる叢状安定化媒体を〃口える、上記（α）〜（
   Ｃ）の工Ａ％ｆ：包含−ｆることを％徴とする、アンジ
   オテンシン試験に適する安定化された血漿レニン対照試
   薬の製造方法。 ４０−　７Ｊ板板状安定化体がマルトース、マンニ１・
   −ル、セロビオス、ラクトース及びダルコースよりなる
   評から選すばれるｌ侍ｉｔ’［−請求の範囲第３９項記
   載の方法。 ４１、庇叢状安矩化媒体がラクトースである特許６汀氷
   の朝囲・、Ｎ、　３１１　、＋４ｉ１１．：載の方法。 ４２、ｊｒｌ１県が人間の血漿であり且つ抗凝固媒体が
   クエン酸塩、シュウ酸塩５．ＥＤＴＡ、ヘパリン及びそ
   の組すせよりなる群から選らばれるｑ″＋Ｉ＋Ｉ請求第
   ４０駒ｈＩ２載の方法。 ４３、血漿が人１ｂ’ｌの血漿であり且つ抗凝固媒体カ
   クｒ−ン酸塩、シュウ酸ｍ、ＥＤＴＡｓ　ヘノクリン及
   びその組会せよりなる群から選らばれる特許請求の範囲
   第４１項記載の方法。 ４４、実質的に−ｊ゛べての水を除去する工程をさらに
   含む特♂１−硝求の範囲第３９項記載の方法。 ４５、実質的にすべでの水を除去する工程をさらに含む
   ｌｈ　ｈ　請求の範囲第４０項記載の方法。 ４６、笑声的にすべての水音除去する工程をさ　′らに
   含む特許請求の範囲第４１項記載の方法。 　９− ４７、実質的にすべての水を除去する工程をさらに含む
   特許請求の範囲第４２項記載の方法。 ４８　実質的にすべての水を除去する工程をさらに含む
   特許請求の範囲第４３項記載の方法。