JPS60262593A - 酵母グルコアミラ−ゼ遺伝子 - Google Patents
酵母グルコアミラ−ゼ遺伝子Info
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- JPS60262593A JPS60262593A JP59116636A JP11663684A JPS60262593A JP S60262593 A JPS60262593 A JP S60262593A JP 59116636 A JP59116636 A JP 59116636A JP 11663684 A JP11663684 A JP 11663684A JP S60262593 A JPS60262593 A JP S60262593A
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- satucharomyces
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- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
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- C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
- C12N9/14—Hydrolases (3)
- C12N9/24—Hydrolases (3) acting on glycosyl compounds (3.2)
- C12N9/2402—Hydrolases (3) acting on glycosyl compounds (3.2) hydrolysing O- and S- glycosyl compounds (3.2.1)
- C12N9/2405—Glucanases
- C12N9/2408—Glucanases acting on alpha -1,4-glucosidic bonds
- C12N9/2411—Amylases
- C12N9/2428—Glucan 1,4-alpha-glucosidase (3.2.1.3), i.e. glucoamylase
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
- Y02E—REDUCTION OF GREENHOUSE GAS [GHG] EMISSIONS, RELATED TO ENERGY GENERATION, TRANSMISSION OR DISTRIBUTION
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Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
本発明は、酵母に澱粉資化性を賦与し、そして酵母にお
ける発現、分泌ベクター創製に使用し得る酵母グルコア
ミラーゼ遺伝子を含むｒ）ＮＡ配列に関する。
ける発現、分泌ベクター創製に使用し得る酵母グルコア
ミラーゼ遺伝子を含むｒ）ＮＡ配列に関する。
一般に、澱粉を基質とする工業的アルコール発酵は、中
アミラーゼ群による澱粉のグルコースへの糖化、および
（１１）酵母菌によるグルコースのエタノールへの転換
の２つの過程によシ成立する。これらの２つの過程を一
つの生物によって触媒させることは、生産システムの合
理化上必要であシ、多年来求められてきた技術体系の一
つである。
アミラーゼ群による澱粉のグルコースへの糖化、および
（１１）酵母菌によるグルコースのエタノールへの転換
の２つの過程によシ成立する。これらの２つの過程を一
つの生物によって触媒させることは、生産システムの合
理化上必要であシ、多年来求められてきた技術体系の一
つである。
従来、酵母菌の中でも特定の菌であるサツカロミセス
、５アステイカス（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓｄｉａ
ｓｔｉｃｕｓ ）が澱粉を加水分解してグルコースを生
成させるグルコアミラーゼを分泌することが知られてい
た。しかしながら、サツカロミセス・ジアスティカスは
グルコースからのエタノール生産能およびグルコアミラ
ーゼ産生分泌能ともに弱く、澱粉を基質とする直接アル
コール発酵に使用する工業用菌株としては不適格であっ
た。
、５アステイカス（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓｄｉａ
ｓｔｉｃｕｓ ）が澱粉を加水分解してグルコースを生
成させるグルコアミラーゼを分泌することが知られてい
た。しかしながら、サツカロミセス・ジアスティカスは
グルコースからのエタノール生産能およびグルコアミラ
ーゼ産生分泌能ともに弱く、澱粉を基質とする直接アル
コール発酵に使用する工業用菌株としては不適格であっ
た。
他方、グルコースを基質とするアルコール発酵は、通常
、サツカロミセス・セレビシェとして用いられている。
、サツカロミセス・セレビシェとして用いられている。
サツカロミセス・セレビシェのアルコール耐性度は、１
７チから２１チに達するが、サツカロミセス・セレビシ
ェは、グルコアミラーゼ産生能を全く有せず、澱粉を基
質とする直接アルコール発酵はできなかった。
７チから２１チに達するが、サツカロミセス・セレビシ
ェは、グルコアミラーゼ産生能を全く有せず、澱粉を基
質とする直接アルコール発酵はできなかった。
そこで、本発明者等は、サツカロミセス・ジアスティカ
スの分泌酵素であるグルコアミラーゼ遺伝子をアルコー
ル生産に使用する工業用菌種であるサツカロミセス・セ
レビシェに導入すれば、酵母菌による澱粉基質とした直
接アルコール生産が可能となることに着目した。さらに
、導入すべきグルコアミラーゼ遺伝子の給源として、サ
ツカロミセス・ジアスティカスを選択する理由は遺伝子
受容−１がサツカロミセス・セレビシェであるからであ
る。即ち両者は、ともにサツカロミセス属に属し、遺伝
学的に近縁関係にあるためサツカロミセス・ジアスティ
カスのグルコアミラーゼ遺伝子が、サツカロミセス・セ
レビシェによってモ発現し、遺伝子産物の産生が予測さ
れるのである。グルコアミラーゼ遺伝子の給源として、
サツカロミセス・ジアスティカス以外に、アスはルギル
ス・アワモリ（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ａｗａｍｏｒ
ｉ ）、リゾプス・考えられるが、生物学的近縁塵が低
く、これら菌株のグルコアミラーゼ遺伝子をサツカロミ
セス・セレビシェで発現させることは、極めて困難であ
ると考えられる。
スの分泌酵素であるグルコアミラーゼ遺伝子をアルコー
ル生産に使用する工業用菌種であるサツカロミセス・セ
レビシェに導入すれば、酵母菌による澱粉基質とした直
接アルコール生産が可能となることに着目した。さらに
、導入すべきグルコアミラーゼ遺伝子の給源として、サ
ツカロミセス・ジアスティカスを選択する理由は遺伝子
受容−１がサツカロミセス・セレビシェであるからであ
る。即ち両者は、ともにサツカロミセス属に属し、遺伝
学的に近縁関係にあるためサツカロミセス・ジアスティ
カスのグルコアミラーゼ遺伝子が、サツカロミセス・セ
レビシェによってモ発現し、遺伝子産物の産生が予測さ
れるのである。グルコアミラーゼ遺伝子の給源として、
サツカロミセス・ジアスティカス以外に、アスはルギル
ス・アワモリ（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ａｗａｍｏｒ
ｉ ）、リゾプス・考えられるが、生物学的近縁塵が低
く、これら菌株のグルコアミラーゼ遺伝子をサツカロミ
セス・セレビシェで発現させることは、極めて困難であ
ると考えられる。
このように、本発明者等は、遺伝子組換えの手法によシ
、澱粉を基質として、直接アルコール発酵に使用し得る
工業用菌株の育種を目標として鋭意研究を行い、サツカ
ロミセス・ジアスティカスのグルコアミラーゼ遺伝子の
クローニングに成功し、該遺伝子の構造を決定し、さら
に該遺伝子をサツカロミセス・セレビシェに導入して得
られた形質転換株が、澱粉からのアルコール直接発酵能
を有することを確認した。この結果は、酵母系における
グルコアミラーゼ遺伝子のクローニングに関するはじめ
ての成功例であり、グルコースから、アルコールを直接
発酵させるという多年求められてきた技術体系の実施に
向けての１つの可能な方法を提供するという意味で、そ
の意義は極めて大きい。さらに１本発明によって得られ
るもう１つの大きな利点はサツカロミセス・ジアスティ
カスのグルコアミラーゼが、菌体外分泌酵素である点に
ある。即ち、本発明によって得られたグルコアミラーゼ
をコードするＤＮＡ配列は、グルコアミラーゼ自身を酵
母菌体外に多量に分泌、蓄積させることを勿論可能にす
るが、さらに酵母系における遺伝子の強力な発現を行い
得るプロモーター領域およびリボゾーム結合領域、しよ
び蛋白の効率的な分泌を行う分泌に関与する領域を有す
るものであるので、このＤＮＡ配列の下流に所望の異種
遺伝子、例えば、インターフェロン、成長ホルモン、イ
ンターロイキン、神経成長因子、カリクレイン、プラス
ミノーゲ゛ンアクチベーター、あるいは、その他の生理
活性ポリペプチド、または、酵素等の構造遺伝子を結合
することによ）酵母菌を宿主としてこれらの蛋白を菌体
外に効率的に分泌蓄積させる発現分泌ベクターの造成を
１Ｊ能にするものである。しかも、本発明によって得ら
れたＤＮＡ配列が、サツカロミセス属以外の酵母におい
ても、有効であることは、該ＤＮＡ配列を用いて実施例
に示したように、シゾサツカロミセス・ボン：（８ｃｈ
ｉｚｏｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｐｏｍｂｅ ）を
形質転換して得られた形質転換株が、サツカロミセス・
ジアスティカス由来のグルコアミラーゼを産生ずること
から、明らかである。即ち、本発明によって得られたＤ
ＮＡ配列は、サツカロミセス属以外の酵母系においても
、異種遺伝子産物の発現、分泌ばフタ−の造成に使用し
得るものである。
、澱粉を基質として、直接アルコール発酵に使用し得る
工業用菌株の育種を目標として鋭意研究を行い、サツカ
ロミセス・ジアスティカスのグルコアミラーゼ遺伝子の
クローニングに成功し、該遺伝子の構造を決定し、さら
に該遺伝子をサツカロミセス・セレビシェに導入して得
られた形質転換株が、澱粉からのアルコール直接発酵能
を有することを確認した。この結果は、酵母系における
グルコアミラーゼ遺伝子のクローニングに関するはじめ
ての成功例であり、グルコースから、アルコールを直接
発酵させるという多年求められてきた技術体系の実施に
向けての１つの可能な方法を提供するという意味で、そ
の意義は極めて大きい。さらに１本発明によって得られ
るもう１つの大きな利点はサツカロミセス・ジアスティ
カスのグルコアミラーゼが、菌体外分泌酵素である点に
ある。即ち、本発明によって得られたグルコアミラーゼ
をコードするＤＮＡ配列は、グルコアミラーゼ自身を酵
母菌体外に多量に分泌、蓄積させることを勿論可能にす
るが、さらに酵母系における遺伝子の強力な発現を行い
得るプロモーター領域およびリボゾーム結合領域、しよ
び蛋白の効率的な分泌を行う分泌に関与する領域を有す
るものであるので、このＤＮＡ配列の下流に所望の異種
遺伝子、例えば、インターフェロン、成長ホルモン、イ
ンターロイキン、神経成長因子、カリクレイン、プラス
ミノーゲ゛ンアクチベーター、あるいは、その他の生理
活性ポリペプチド、または、酵素等の構造遺伝子を結合
することによ）酵母菌を宿主としてこれらの蛋白を菌体
外に効率的に分泌蓄積させる発現分泌ベクターの造成を
１Ｊ能にするものである。しかも、本発明によって得ら
れたＤＮＡ配列が、サツカロミセス属以外の酵母におい
ても、有効であることは、該ＤＮＡ配列を用いて実施例
に示したように、シゾサツカロミセス・ボン：（８ｃｈ
ｉｚｏｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｐｏｍｂｅ ）を
形質転換して得られた形質転換株が、サツカロミセス・
ジアスティカス由来のグルコアミラーゼを産生ずること
から、明らかである。即ち、本発明によって得られたＤ
ＮＡ配列は、サツカロミセス属以外の酵母系においても
、異種遺伝子産物の発現、分泌ばフタ−の造成に使用し
得るものである。
また、本発明のＤＮＡ配列のうち、遺伝子の発現に関与
する部分であるプロモーター領域ならびにリボゾーム結
合領域の塩基配列、および蛋白の分泌に関与する領域の
塩基配列を各々単独で、あるいは、いずれかを組み合わ
せた形で取シ出して使用する場合、あるいは、蛋白をコ
ードする領域の塩基配列について、指定するアミノ酸配
列が異ならないように置換して得たＤＮＡ配列も更に、
１本発明のＤＮＡ配列の任意の部分の塩基を他のもの
と置換した９、新たに塩基を挿入したり、または削除し
た場合、あるいは塩基配列の一部を転位させた場合に得
られる誘導体も、遺伝子の発現、および分泌に良好な結
果を与えることが想定され、本発明の範祷に入るもので
ある。
する部分であるプロモーター領域ならびにリボゾーム結
合領域の塩基配列、および蛋白の分泌に関与する領域の
塩基配列を各々単独で、あるいは、いずれかを組み合わ
せた形で取シ出して使用する場合、あるいは、蛋白をコ
ードする領域の塩基配列について、指定するアミノ酸配
列が異ならないように置換して得たＤＮＡ配列も更に、
１本発明のＤＮＡ配列の任意の部分の塩基を他のもの
と置換した９、新たに塩基を挿入したり、または削除し
た場合、あるいは塩基配列の一部を転位させた場合に得
られる誘導体も、遺伝子の発現、および分泌に良好な結
果を与えることが想定され、本発明の範祷に入るもので
ある。
以下、具体例によって本発明のＤＮＡ配列を含むサツカ
ロミセス・ジアスティカスのグルコアミラーゼ遺伝子の
取得方法および本発明のＤＮＡ塩基配列の決定および、
本発明のＤＮＡを用いて形質転換して得られる澱粉資化
性を有するサツカロミセス・セレビシェによる澱粉から
アルコール直接醗酵および、本発明のＤＮＡによるサツ
カロミセス属以外の酵母の形質転換例について説明する
。
ロミセス・ジアスティカスのグルコアミラーゼ遺伝子の
取得方法および本発明のＤＮＡ塩基配列の決定および、
本発明のＤＮＡを用いて形質転換して得られる澱粉資化
性を有するサツカロミセス・セレビシェによる澱粉から
アルコール直接醗酵および、本発明のＤＮＡによるサツ
カロミセス属以外の酵母の形質転換例について説明する
。
実施例１．サツカロミセス・ジアスティカス染色体遺伝
子のジーン・ライブラリーの作 製 サツカロミセス・ジアスティカス（Ｓａｃｃｈａｒｏｍ
ｙｃｅｓｄｉａｓｔｉｃｕｓ ） ５１０６−９ Ａ株
（８ＴＡ、１）（ｐＥＲＭＰ−７６４１）をＹ］１３Ｐ
Ｄ培地（１チ酵母エキス、２％ペプトンおよび２チグル
コース）２Ｊを用いて２８℃で２日間培養し、 得られた菌体からＩＮ、 Ｗ、 Ｄａｖｊｓ等の方法（
ＬＷ、 Ｄａｖｉａ ｅｔ ａｌ ： Ａｄｖａｎｃｅ
ｄ ｂａｃｔｅｒｉｏｌ ｇｅｎｅｔｉｃｓ＋Ｃｏ１ｄ
Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ
１９８０ ）により染色体ＤＮＡを抽出して、１．
ＯｆＩＱのＤＮＡを得た。この染色体ＤＮＡ２０（１１
１１，９を制限酵素８ａｕ３ＡＩ（全酒造製）を用いて
、３７℃で部分分解し、得られた反応物全量から蔗糖密
度勾配（１０〜４゜チ）遠心法によ）、約５ ｋｂ以上
のＤＮＡを分画し、回収した。該回収ＤＮＡを５０ ｒ
ｒＭ トリス−塩酸緩衝液（ｐＨ７５）１０［）μｌに
溶解し、供与染色体断片とした。この供与染色体断片を
５本発明者等が作製した酵母−大腸菌シャトルベクター
ｐＫｓ２−２０ （Ｋ、 ８ｕｚｕｋＬ Ｙ、 Ｉｍａ
ｉ、 １． ＹａｍａｓＬｉｔａａｎｄ Ｓ、 Ｆｕｋ
ｕｉ； Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｂｏｃｔｅｒｉｏｌｏ
ｌｏｇｙ １５５＋７４７〜７５４ 、（１９８３））
のＢａｍ ＨＩ切断部位にＴ４９ガーゼ（全酒造°製）
を用いて文献記載の方法（Ｍ、 Ｃａｒｌｓｏｎ ａｎ
ｄ Ｄ、 Ｂｏｔｓｔｅｉｎ； Ｃｅ１１゜２−８．１
４５（１９８２））により結合した。得られた融合プラ
スミドを１００ｍＭ塩化カルシウムを用いる方法（８，
Ｎ、 Ｃｏ１ｔｎ＋ Ａ、 Ｃ，Ｙ、 Ｃｈａｎｇ ａ
ｎｄ２１１０−２１１４（１９７２）によりＦｒ、 Ｃ
ｏ１１ＪＡ２２１ （Ｌｅｕ−、Ａ＋ｎｐ’ ）（ＮＲ
ＲＬＡ１５０１４）に導入し、アンピシリン耐性を示す
形質転換株的２０．０００株を取得した。これらの２０
．０００株の形質転換株の各々から、ラピッド法（Ｄａ
ｖｉｄＳ、正（ｏｌｍｅｓ ａｎｄ Ｍｉｃｈａｅｌ
ＱｕｉｇＪｅｙ ； ｋｎａＩｙｔＬｃａｒラスミドＤ
Ｎ人を抽出し、混合して、ジーン・ライブラリーとした
。
子のジーン・ライブラリーの作 製 サツカロミセス・ジアスティカス（Ｓａｃｃｈａｒｏｍ
ｙｃｅｓｄｉａｓｔｉｃｕｓ ） ５１０６−９ Ａ株
（８ＴＡ、１）（ｐＥＲＭＰ−７６４１）をＹ］１３Ｐ
Ｄ培地（１チ酵母エキス、２％ペプトンおよび２チグル
コース）２Ｊを用いて２８℃で２日間培養し、 得られた菌体からＩＮ、 Ｗ、 Ｄａｖｊｓ等の方法（
ＬＷ、 Ｄａｖｉａ ｅｔ ａｌ ： Ａｄｖａｎｃｅ
ｄ ｂａｃｔｅｒｉｏｌ ｇｅｎｅｔｉｃｓ＋Ｃｏ１ｄ
Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ
１９８０ ）により染色体ＤＮＡを抽出して、１．
ＯｆＩＱのＤＮＡを得た。この染色体ＤＮＡ２０（１１
１１，９を制限酵素８ａｕ３ＡＩ（全酒造製）を用いて
、３７℃で部分分解し、得られた反応物全量から蔗糖密
度勾配（１０〜４゜チ）遠心法によ）、約５ ｋｂ以上
のＤＮＡを分画し、回収した。該回収ＤＮＡを５０ ｒ
ｒＭ トリス−塩酸緩衝液（ｐＨ７５）１０［）μｌに
溶解し、供与染色体断片とした。この供与染色体断片を
５本発明者等が作製した酵母−大腸菌シャトルベクター
ｐＫｓ２−２０ （Ｋ、 ８ｕｚｕｋＬ Ｙ、 Ｉｍａ
ｉ、 １． ＹａｍａｓＬｉｔａａｎｄ Ｓ、 Ｆｕｋ
ｕｉ； Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｂｏｃｔｅｒｉｏｌｏ
ｌｏｇｙ １５５＋７４７〜７５４ 、（１９８３））
のＢａｍ ＨＩ切断部位にＴ４９ガーゼ（全酒造°製）
を用いて文献記載の方法（Ｍ、 Ｃａｒｌｓｏｎ ａｎ
ｄ Ｄ、 Ｂｏｔｓｔｅｉｎ； Ｃｅ１１゜２−８．１
４５（１９８２））により結合した。得られた融合プラ
スミドを１００ｍＭ塩化カルシウムを用いる方法（８，
Ｎ、 Ｃｏ１ｔｎ＋ Ａ、 Ｃ，Ｙ、 Ｃｈａｎｇ ａ
ｎｄ２１１０−２１１４（１９７２）によりＦｒ、 Ｃ
ｏ１１ＪＡ２２１ （Ｌｅｕ−、Ａ＋ｎｐ’ ）（ＮＲ
ＲＬＡ１５０１４）に導入し、アンピシリン耐性を示す
形質転換株的２０．０００株を取得した。これらの２０
．０００株の形質転換株の各々から、ラピッド法（Ｄａ
ｖｉｄＳ、正（ｏｌｍｅｓ ａｎｄ Ｍｉｃｈａｅｌ
ＱｕｉｇＪｅｙ ； ｋｎａＩｙｔＬｃａｒラスミドＤ
Ｎ人を抽出し、混合して、ジーン・ライブラリーとした
。
実施例２．８ＴＡ１遺伝子を含むプラスミドｐｓＴＡＩ
の分離 実施例１で得たシーンライブラリーＤＮＡ１００μＡｔ
−用いてサツカロミセス・セレビシェ３６８（Ｌｅｕ’
−、８ｔａ ） （８ａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｃｅ
ｒｅｖｉａｉａｅ。
の分離 実施例１で得たシーンライブラリーＤＮＡ１００μＡｔ
−用いてサツカロミセス・セレビシェ３６８（Ｌｅｕ’
−、８ｔａ ） （８ａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｃｅ
ｒｅｖｉａｉａｅ。
ＦＥＲＭＰ−７６５７）をＪ、 Ｄ、 Ｂｅｇｇｓの方
法によシ形質転換して選択培地にブレーティングしＬｅ
ｕ＋、 ８１ａ＋を示す形質転換株を得た。約３０，０
００株のＬｅｕ＋を示す形質転換株からコロニーの回シ
にグルコアミラーゼの産生を示すハローを生じる形質転
換株（Ｓｔａ” ） ５株が得られた。なお、選択培地
の組成は１襲グルコース、２チ可溶性澱粉、１．２Ｍソ
ルビトール、２０ Ｉｒｙ ／ ｍｌヒスチジン、６０
ｎｙ ／ ｒｔｌリジン、２チ寒天である。コロニーの
回りにハローを生じた５株の形質転換株のうちの１株を
ＹＥＰＤの培地ｉＱｍ／で２８℃で２４時間培養して得
られる菌体から文献記載の方法（Ｈ，Ｃ。
法によシ形質転換して選択培地にブレーティングしＬｅ
ｕ＋、 ８１ａ＋を示す形質転換株を得た。約３０，０
００株のＬｅｕ＋を示す形質転換株からコロニーの回シ
にグルコアミラーゼの産生を示すハローを生じる形質転
換株（Ｓｔａ” ） ５株が得られた。なお、選択培地
の組成は１襲グルコース、２チ可溶性澱粉、１．２Ｍソ
ルビトール、２０ Ｉｒｙ ／ ｍｌヒスチジン、６０
ｎｙ ／ ｒｔｌリジン、２チ寒天である。コロニーの
回りにハローを生じた５株の形質転換株のうちの１株を
ＹＥＰＤの培地ｉＱｍ／で２８℃で２４時間培養して得
られる菌体から文献記載の方法（Ｈ，Ｃ。
Ｂｉｒｎｂｏｉｍ ａｎｄ Ｊ、 Ｄｏｌｙ ： Ｎｕ
ｃｌｅｉｃ Ａｃ１ｄｓ Ｒｅｓ、；）によりプラスミ
ドを抽出した所、該形質転換株から１μｇのプラスミド
ＤＮＡが得られた。このプラスミドＤＮＡを用いて実施
例１にｉｄ載したのと同じ方法により、Ｅ、 ｃｏｌｉ
ＪＡ２２１株を形質転換し、Ｌｅｕ＋、 Ａｎｎｒ、
Ｔｃ’を示す形質転換株を得た。
ｃｌｅｉｃ Ａｃ１ｄｓ Ｒｅｓ、；）によりプラスミ
ドを抽出した所、該形質転換株から１μｇのプラスミド
ＤＮＡが得られた。このプラスミドＤＮＡを用いて実施
例１にｉｄ載したのと同じ方法により、Ｅ、 ｃｏｌｉ
ＪＡ２２１株を形質転換し、Ｌｅｕ＋、 Ａｎｎｒ、
Ｔｃ’を示す形質転換株を得た。
この形質転換株をＬＢ（０，５％酵母エキス、１チペプ
トン、０．５％ＮａＣ１）の培地５Ｔｌｔｌを用いて３
７℃、１６時間培養して得られる菌体から、プラスミド
を上記Ｂｉｒｎｂｏｉｍ ａｎｄ Ｄｏｌｙの方法によ
り分離、カ 精製したところ１μＩのプラスミドＤＮＡが得られた。
トン、０．５％ＮａＣ１）の培地５Ｔｌｔｌを用いて３
７℃、１６時間培養して得られる菌体から、プラスミド
を上記Ｂｉｒｎｂｏｉｍ ａｎｄ Ｄｏｌｙの方法によ
り分離、カ 精製したところ１μＩのプラスミドＤＮＡが得られた。
このプラスミドＤＮＡを用いて、本実施例の最初に記載
した方法により、−サツカロミセス・（１５） セレビシェ５３８ （Ｌｅｕ”−、８ｔａ〜）を形質転
換した所、Ｓｔａ＋を示す形質転換株が得られたので、
このプラスミドをｐｓＴＡｌと名づけだ。ｐ８’ｌ’Ａ
Ｉの制限酵素地図は第１図に示される。ｐｓＴＡｌは第
１図に示すように２．８ｋｂの挿入ＤＮＡを有し、制限
酵素Ｂａｍ ＨＩサイトが１ケ所、Ｓａｌ Ｉサイトが
２ケ所、Ｐｖｕ Ｉサイトが２ケ所、Ｈｉｎｄ Ｉ［サ
イト、ＥｃｏＲＩサイト、ｐｓｔＩサイトが各１ケ所存
在していた。
した方法により、−サツカロミセス・（１５） セレビシェ５３８ （Ｌｅｕ”−、８ｔａ〜）を形質転
換した所、Ｓｔａ＋を示す形質転換株が得られたので、
このプラスミドをｐｓＴＡｌと名づけだ。ｐ８’ｌ’Ａ
Ｉの制限酵素地図は第１図に示される。ｐｓＴＡｌは第
１図に示すように２．８ｋｂの挿入ＤＮＡを有し、制限
酵素Ｂａｍ ＨＩサイトが１ケ所、Ｓａｌ Ｉサイトが
２ケ所、Ｐｖｕ Ｉサイトが２ケ所、Ｈｉｎｄ Ｉ［サ
イト、ＥｃｏＲＩサイト、ｐｓｔＩサイトが各１ケ所存
在していた。
実施例３０分泌延素グルコアミラーゼ遺伝子８ＴＡ１の
塩基配列の決定 実施例２で得られたｐｓＴＡｌを有する形質転換株（Ｂ
、ｃｏｌｉ ＪＡ２２１−ｐｓＴＡｌ 、ＦＩＲＭＰ〜
７６４０ ）をＬＢ培地２１を用いて３７℃で１６時間
培養した菌体から実施例２に示した方法により、プラス
ミドの調製を行った結果１ダの精製プラスミドが得られ
た。このプラスミドを制限酵素８ａｌＩおよびＢａｍＨ
Ｉで部分分解し、アガロース電気泳動で、約２．８ｋｂ
の挿入ＤＮＡ断片をＭＳ、分離した。この挿入ＤＮＡ断
片について（１６） ＭａｘａｍとＧｆｌｂｅｒｔの方法（Ａ、 Ｍａｘａｍ
ａｎｄ Ｗ。
塩基配列の決定 実施例２で得られたｐｓＴＡｌを有する形質転換株（Ｂ
、ｃｏｌｉ ＪＡ２２１−ｐｓＴＡｌ 、ＦＩＲＭＰ〜
７６４０ ）をＬＢ培地２１を用いて３７℃で１６時間
培養した菌体から実施例２に示した方法により、プラス
ミドの調製を行った結果１ダの精製プラスミドが得られ
た。このプラスミドを制限酵素８ａｌＩおよびＢａｍＨ
Ｉで部分分解し、アガロース電気泳動で、約２．８ｋｂ
の挿入ＤＮＡ断片をＭＳ、分離した。この挿入ＤＮＡ断
片について（１６） ＭａｘａｍとＧｆｌｂｅｒｔの方法（Ａ、 Ｍａｘａｍ
ａｎｄ Ｗ。
Ｇ１１ｂｅｒｔ、ｐｒｏｃ、Ｎａ１１． Ａｃａｄ、Ｓ
ｃｉ Ｕ、８． Ａ、７４ ＋５６０ （１９７７））
によシ、第２図に示した塩基配列決定のための戦略図に
よって、全塩基配列を決定した。その結果、次に示すＤ
ＮＡ塩基配列が、得られ、この塩基配列はサツカロミセ
ス・ジアスティカスのグルコアミラーゼ遺伝子の発現、
分泌に必要なＲＮＡポリメラーゼの結合部位、リボゾー
ムの結合部位（ＲＢ８）、シグナル配列（Ｓｉｇｎａｌ
５ｅｑｕｅｚｃｅ ）および分泌された成熟蛋白に対
応するＤＮＡ配列、停止配列（８ｔｏｐ ） さらに下
流には、ポリＡシグナル（ｐｏｌｙ Ａ ｓｉｇｎａｌ
）を含むことが判明した。
ｃｉ Ｕ、８． Ａ、７４ ＋５６０ （１９７７））
によシ、第２図に示した塩基配列決定のための戦略図に
よって、全塩基配列を決定した。その結果、次に示すＤ
ＮＡ塩基配列が、得られ、この塩基配列はサツカロミセ
ス・ジアスティカスのグルコアミラーゼ遺伝子の発現、
分泌に必要なＲＮＡポリメラーゼの結合部位、リボゾー
ムの結合部位（ＲＢ８）、シグナル配列（Ｓｉｇｎａｌ
５ｅｑｕｅｚｃｅ ）および分泌された成熟蛋白に対
応するＤＮＡ配列、停止配列（８ｔｏｐ ） さらに下
流には、ポリＡシグナル（ｐｏｌｙ Ａ ｓｉｇｎａｌ
）を含むことが判明した。
（１８）
７００
１
（２２）
３ＡＡＣＡＡＣＧＧＴＣＣＴ
８００
実施例４．形質転換株サツカロミセス・セレビシェ５３
Ｂ−ｐｓＴＡｌは、サツカロミ セス・ジアスティカス５１０６−９Ａ株（ＳＴＡｌ）と
同じグルコアミラーゼ を分泌する。
Ｂ−ｐｓＴＡｌは、サツカロミ セス・ジアスティカス５１０６−９Ａ株（ＳＴＡｌ）と
同じグルコアミラーゼ を分泌する。
実施例２で得られたｐｓＴＡｌを用いて実施例２で示し
たのと同じ方法によ）、サツカロミセス・セレビシェ６
３８株を形質転換して得られる株サツカロミセス・セレ
ビシェ３３８−ｐｓＴＡｌをＹＰ８培地（１チイースト
・エキス、２チペプトン、３チ可溶性澱粉）１／を用い
て２８℃で６日間培養した。この培養液上清のグルコア
ミラーゼ活性を文献記載の方法（１，Ｙａｍａｓｈｉｔ
ａ ａｎｄ Ｓ。
たのと同じ方法によ）、サツカロミセス・セレビシェ６
３８株を形質転換して得られる株サツカロミセス・セレ
ビシェ３３８−ｐｓＴＡｌをＹＰ８培地（１チイースト
・エキス、２チペプトン、３チ可溶性澱粉）１／を用い
て２８℃で６日間培養した。この培養液上清のグルコア
ミラーゼ活性を文献記載の方法（１，Ｙａｍａｓｈｉｔ
ａ ａｎｄ Ｓ。
ＦｕｋｕＬ Ａｇｒｉｃ、 Ｂｊｏ↓、 Ｃｈｅｍ；
４７ 、２６８９ 、１９８３ ）により測定しＤＮＡ
供与株であるサツカロミセス・ジアスティカス５１０６
−９Ａ株由来のグルコアミラーゼと比較した。その結果
、サツカロミセス・セレビシェ５３８−ｐｓＴＡｌ株は
第１表に示すように至適温度、至適ｐｌ（、熱安定性に
関し、サツカロミセス・ジアスティカス５１０６−９Ａ
株由来のものと全く同じ性質を示すグルコアミラーゼを
産生、分泌し、しかもその産生蓋は、１．ＤＸ１０’単
位１１に達し、サツカロミセス・ジアスティカス５１０
６−９Ａ株の産生、分泌量の１０倍以上であった。さら
に、両菌株由来の精製酵素をエンドグリコシグーゼＨ（
Ｆｉｎｄｏ Ｈ、生化学工業製）で処理して、得られる
ペプチドの分子量をＳＤＳ−ポリアクリルアミドゲル電
気泳動法で比較するといずれのグルコアミラーゼも４１
．０００ ダルトンを示した。また、サツカロミセス・
ジアスティカス５１０６−９Ａ株の分泌するグルコアミ
ラーゼのペプチド部分を抗原とするモノクローナル抗体
を調製し、サツカロミセス・セレビシェ３３８−ｐｓＴ
Ａｌのグルコアミラーゼと反応させたところ、強い沈降
反応がみられた。
４７ 、２６８９ 、１９８３ ）により測定しＤＮＡ
供与株であるサツカロミセス・ジアスティカス５１０６
−９Ａ株由来のグルコアミラーゼと比較した。その結果
、サツカロミセス・セレビシェ５３８−ｐｓＴＡｌ株は
第１表に示すように至適温度、至適ｐｌ（、熱安定性に
関し、サツカロミセス・ジアスティカス５１０６−９Ａ
株由来のものと全く同じ性質を示すグルコアミラーゼを
産生、分泌し、しかもその産生蓋は、１．ＤＸ１０’単
位１１に達し、サツカロミセス・ジアスティカス５１０
６−９Ａ株の産生、分泌量の１０倍以上であった。さら
に、両菌株由来の精製酵素をエンドグリコシグーゼＨ（
Ｆｉｎｄｏ Ｈ、生化学工業製）で処理して、得られる
ペプチドの分子量をＳＤＳ−ポリアクリルアミドゲル電
気泳動法で比較するといずれのグルコアミラーゼも４１
．０００ ダルトンを示した。また、サツカロミセス・
ジアスティカス５１０６−９Ａ株の分泌するグルコアミ
ラーゼのペプチド部分を抗原とするモノクローナル抗体
を調製し、サツカロミセス・セレビシェ３３８−ｐｓＴ
Ａｌのグルコアミラーゼと反応させたところ、強い沈降
反応がみられた。
実施例５． サツカロミセス・セレビシェ６３８−ｐｓ
ＴＡｌによる澱粉を基質としたエ タノールの生産 サツカロミセス・セレビシェ３３８−ｐｓＴＡｌをＹＰ
ｇ培地（１チイースト・エキス、２％ペプトン、６％可
溶性澱粉）５ｍＡ！を用いて、２０℃で６日間静置培養
し、培地中のエタノール量とグルコース量を高速液体ク
ロマトグラフィー（ポンプ、液、５チリン酸液；ディテ
クター、屈折計ＲＩ−８東洋ソーダ）で測定した。その
結果培地１１中にエタノール９７５ｇとグルコース０．
３２９の生成が認められ、消費澱粉のほとんどすべてが
、エタノールに転換されていた。
ＴＡｌによる澱粉を基質としたエ タノールの生産 サツカロミセス・セレビシェ３３８−ｐｓＴＡｌをＹＰ
ｇ培地（１チイースト・エキス、２％ペプトン、６％可
溶性澱粉）５ｍＡ！を用いて、２０℃で６日間静置培養
し、培地中のエタノール量とグルコース量を高速液体ク
ロマトグラフィー（ポンプ、液、５チリン酸液；ディテ
クター、屈折計ＲＩ−８東洋ソーダ）で測定した。その
結果培地１１中にエタノール９７５ｇとグルコース０．
３２９の生成が認められ、消費澱粉のほとんどすべてが
、エタノールに転換されていた。
実施例＆ 本発明のＤＮＡを含むプラスミドｐｓＴＡ１
による分裂酵母シゾサツカロミ セス・ボンベの形質転換株による澱粉 からのグルコアミラーゼの産生、分泌 実施例２で得られたｐｓＴＡｌを用いて、実施例２で示
した方法により、シゾサツカロミセス・ポンベＨＭ１２
３ （ｈ 、 ｌｅｌ］１ ）の形質転換を行い得られ
た転換株を、実施例４に記載した方法により、培養して
、産生分泌されたグルコアミラーゼの性質を検討したと
ころ形質転換株は培地１１中に１．５Ｘ１０’単位の５
ＴＡＩ遺伝子由来のグルコアミラーゼを産生、分泌して
いることを確認した。この結果は本発明のＤＮＡ配列お
よびｐ８ＴＡ１はサツカロミセス嘱以外の酵母であるシ
ゾサツカロミセス属においても、機能することを示し、
本発明のＤＮＡ配列が、酵母における発現、分泌ベクタ
ーの造成に使用し得ることを意味する。
による分裂酵母シゾサツカロミ セス・ボンベの形質転換株による澱粉 からのグルコアミラーゼの産生、分泌 実施例２で得られたｐｓＴＡｌを用いて、実施例２で示
した方法により、シゾサツカロミセス・ポンベＨＭ１２
３ （ｈ 、 ｌｅｌ］１ ）の形質転換を行い得られ
た転換株を、実施例４に記載した方法により、培養して
、産生分泌されたグルコアミラーゼの性質を検討したと
ころ形質転換株は培地１１中に１．５Ｘ１０’単位の５
ＴＡＩ遺伝子由来のグルコアミラーゼを産生、分泌して
いることを確認した。この結果は本発明のＤＮＡ配列お
よびｐ８ＴＡ１はサツカロミセス嘱以外の酵母であるシ
ゾサツカロミセス属においても、機能することを示し、
本発明のＤＮＡ配列が、酵母における発現、分泌ベクタ
ーの造成に使用し得ることを意味する。
第１図は、ｐ８ＴＡ１の制限酵素地図を示す。
第２図は、ｐ８ＴＡ１の挿入ＤＮＡの塩基配列決定のた
めの戦略図を示す。 代理人 弁理士 戸 １）親 男 （２７） 第１頁の続き ■Ｉｎｔ、ＣＩ、４ 識別記号 庁内整理番号６０９−
めの戦略図を示す。 代理人 弁理士 戸 １）親 男 （２７） 第１頁の続き ■Ｉｎｔ、ＣＩ、４ 識別記号 庁内整理番号６０９−
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 １、 サツカロミセス属酵母において遺伝子の発現に関
与するプロモーター領域、リボゾーム結合領域、発現の
結果合成された蛋白の菌体外への分泌に関与する領域お
よび、酵素蛋白のアミノ酸配列をコードする領域を含む
ＤＮＡ配列。 ２、プロモーター領域、リボゾーム結合領域、蛋白の分
泌に関与する領域および酵素蛋白のアミノ酸配列をコー
ドする領域を含むＤＮＡ配列がサツカロミセス属酵母の
グルコアミラーゼ遺伝子に由来するものであることを特
徴とする特許請求の範囲第１項記載のＤＮＡ配列。 ３、サツカロミセス属酵母のグルコアミラーゼ遺伝子が
サツカロミセス・ジアスティカスのものであることを特
徴とする特許請求の範囲第２項記載のＤＮＡ配列。 ４、 プロモーター領域、リボゾーム結合領域、蛋白の
分泌に関与する領域および酵素蛋白のアミノ酸配列をコ
ードする領域を含むＤＮＡ配列が下記の塩基配列、また
はその一部を含むものであることを特徴とする特許請求
の範囲第２項記載のＤＮＡ配列。 ＧＴＡＴＴＧＴＧＧＴ ＡＧＴＴＧＴＴＧＧＴ Ｃ３八
１ハ八１（コｌｊｌＩｊ（３） ６６１１） ６７０ ６ＥＩＯ 八Ｃ八ＴＴＴＧＴＣＡ ＣＣＡＡへ＾へＣＡＴ ＴＣＣ
ハ八ＣへＡＣＴＴＧＴ＾＾八ＣへＧＴ ＧＧＴＴＴＴＴ
ＧＴ＾ ＾ＧＧＴＴＧＧＴＧ＾７１０ ７２０ ７３０ 八＾ＣＴＴＣＡＴＣＡ ＧＴＣＡＣＴＡＣＧＧ ＴＴＡ
ＣＣＡＡＴＴＴＴＴＧＡＡＧＴＡＧＴ ＣＡＧＴＧＡＴ
ＧＣＣＡＡＴＧＧＴＴ八へへ７６０ ７７０ ７８０ ＣＴＡＣＧＧＴＴＴＧ ＣＴＣＴＡＣＡＧＧＡ ＡＣ八
へへＣＴＣＴＧＧＡＴＧＣＣ八へＡＣＧＡＧＡＴＧＴＣ
ＣＴ ＴＧＴＴＴＧＡＧＡＣＡＣＧＡＧＡＧＧＴＴ Ｔ
ＣＴＧＡＣＡＧＴＧ ＴＴＧＴＴＧＡＣＡＡＧＣＴＴＡ
ＴＧＴＧＡ ＴＧＡＣＴＴＣＧＡＴ ＧＧＣＧＧＧＧＡ
ＣＡＧＧＣＡＡＣＡＡＴＧ ＧＴＧＡＣＴＴＡＧＧ Ａ
ＧＡＴＧＣＣＣＡＴＴＧＴＴＧ＾ＴＣＡＡ ＴＧＴＧＴ
ＴＧＴＴＴ ＣＡＧＡＣＡＴＧＧＴＡＣＣＧＴＴＣＣＣ
Ｇ ＴＡＡＧＡＧＣＴＡＧ ＴＴＴＣＧＡＣＧＣＣＣＧ
ＡＧＡＡＧＣＧＴ ＴＣＡＣＧＴＣＧＡＣＧＣＣＣＴＡ
ＣＡＴＣＣＡＴＡＴＧＣＴＡＡ ＧＴＴＴＧＣＣＧＣＧ
ＡＡＣＣＣＴＧＴＣＡ６９（’ｌ ７００ ■＾ＣＣＴＡＡＣＴＡ Ｃ＾へＴＴＧＣＴＣＣ八ＴＧＧ
ＡＴへＧＡＴ ＧＴ１’ＡＡＣＧＡＧＧ７４０ ７５０ ＣＡＣＣＣＣＡＡＣＣＡＣＴＡＴＴＡＣＴへＧＴＧＧＧ
ＧＴＴＧＧ ＴＧＡＴＡＡＴＧＡＴ７９０ ８００ ＣＣＧＧＴＧＡＡＡＣＴＡＣＣＴＣＴＧＧ＾ＧＧＣＣＡ
ＣＴＴＴＧ ＡＴＧＧＡＧＡＣＣＴＥ１４０ Ｅ１５０ ＣＣＴＴＧＴＴＣＡＡ ＣＴＧＧＴＡＣＴＧＧＧＧＡＡ
ＣＡＡＧＴＴ ＧＡＣＣＡＴＧＡＣＣ８９０９００ ＴＡＣＡＡＣＡＧＣＴ ＧＴＣＡＣＡＡＣＣ八ＡＴＧＴ
ＴＧＴへＧＡ ＣＡＧＴＧＴＴＧＧＴ９４ｏ ９５０ ＣＴＡＡＣＴＣＣＧＣＴＧＧＴＡＡＧＡＣＧＧＡＴＴＧ
ＡＧＧＣＧ ＡＣＣＡＴＴＣＴＧＣ９９０１０００ ＾ＣＣＡＣＣＴＡＴＧ ＴＡＴＴＴＧＡＣＴＴＴＧＧＴ
ＧＧＡＴＡＣＡＴＡ八＾へＴＧＡへ１０１１０ １０５
０ ＣＧＧＴＧＴＡＴＴＴ ＴＣＡＡＡＣＡＡＣＧＧＣＣＡ
ＣＡＴ八＾Ａ ＡＧＴ丁ＴＧＴＴＧＣ１へ９０ １１．
００ 。 ＴＣＴＴＧＡＴＧＡＡ ＴＧＧＧＡＣＡＧＴＧＡＧＡＡ
ＣＴＡＣＴＴ ＡＣＣＣＴＧＴＣＡＣ１１４０１１５０ ＡＧＴＧＣＧＣＴＧＧ ＡＧＧＡＧＴＧＧＣＴＴＣＡＣ
ＧＣＧＡＣＣＴＣＣＴＣＡＣＣＧ＾１１６０ １１７０
１１８０ ＧＧＴＣＧＣＴＧＴＣＴＴＴＴＴＴＣＡＡＡ ＧＧＴＡ
ＧＣＴＴＴＣＡＧＣＧＴＴＴＧＣＧ ＴＡＧＧＴＣＴＧ
ＡＴ Ｇ＾＾ＧＡＴＧＧＴＴ 。 （ ５９７− １１９０１２００ へＡＴＡｌ、ＴＴＧＡＡ ＾＾ＴＡＴＴＧＧＧＣＴＴＡ
ＴＡＡＡＣＴＴ ＴＴＡＴＡＡＣＣＣＧ１２４０ １２
５０ ＧＧＧＴＣＧＴＧＡＴ ＴＧＣＧＴＣＡＣＣＡＣＣＣＡ
ＧＣＡＣＴＡ ＡＣＧＣＡＧＴＧＧＴ１２９０ １３０
０ 丁ＧＧＡＴ＾へＧＧＧ ＡＣＡＧＣＧＣＧＴＴへＣＣＴ
ＡＴＴＣＣＣＴＧＴＣＧＣＧＣＡＡ１３４０ １３５０ ３ＧＡＣＣＣＧＧＣＡ ハＴＡＧＡＧＡＣＧＴコＣＴＧ
ＧＧＣＣＧＴ ＴＡＴＣＴＣＴＧＣＡＣへＧＴＣＴＧＴ
ＧＣＧＧＣＣＣ１Ｌｉｌハ（ｊ ＋０ｔｂＬ＋ｌ ＩＬ
ＭＩＡ／Ａ−５９８− ２５１０ ２５２０ ２５３０ ＴＧＧＧＡＴＧＣＣＴ ＡＴＣＡＡＡＴＡＡＧ ＡＣＡ
ＡＧＡＡＧＴＴＡＣＣＣＴＡＣ１３ＧＡ ＴＡＧＴＴＴ
ＡＴＴＣＴＧＴＴＣＴＴＣＡＡ２５４０ ２５５０ ＴＴＡＣＡＧＡＧＴＴ ＴＧＴＡＧＡＣＡＡＡＡ＾ＴＧ
ＴＣＴＣＡＡ ＡＣＡＴＣＴＧＴＴＴ２５６０ ２５７
０ ２５ＥＩＯ ＡＡＡＡＡＡＴＡＡＡ ＡＧＡＡＡＡＧＣＧＡ ＧＡＡ
ＧＴＡＴＡＣＡＴＴＴＴＴＴＡＴＴＴ ＴＣＴＴＴＴＣ
ＧＣＴ ＣＴＴＣＡＴＡＴＧＴＡＡＴＧＴＡＧＴＴＴ
ＡＴＡＴＡＴ八ＴＡＴ へＡＴＡＴＧＡＡＴＡ＾ＴＴＡ
ＡＴＴＡＡＴＣＴＡＴＧＡＴＡＣＡＧ ＣＣＴＴＧＣＡ
ＧＧＴＧＡＡＡＡＧＴＧＡＡ ＡＧＡＧＴＡＧＧＡＣＡ
ＣＡＧＴＴＧＡＡＣ７６０ ＡＣ ＴＧ （６） ２５９０ ２６００ ＣＡＡＧＴＧＴＡＴＴ ＴＣＣＴＡＧＡＴＡＴＧＴＴＣ
ＡＣＡＴＡＡ ＡＧＧＡＴＣＴＡＴＡ２６４０ ２６５
０ ＴＡＣＡＡＡＡＣＴＣＴＧＡＴＡＴＴＡＴＡＡＴＧＴＴ
ＴＴＧＡＧ ＡＣＴＡＴＡＡＴＡＴ２６Ｃ；１０ ２７
００ ＧＣＣＣＡＡＣＣＡＣＧＴＴＴＧＣＡＧＴＴＣＧＧＧＴ
ＴＧＧＴＧ ＣＡＡＡＣＧＴＣＡＡ２７４０ ２７５０ ＴＴＧＣＣＡＧＧＡＴ ＴＧＴＡＴＣＴＧＴＣＡＡＣＧ
ＧＴＣＣＴＡ ＡＣＡＴＡＧＡＣＡＧ５、特許請求の範
囲第４項に記載した塩基配列または、その一部を塩基の
置換、挿入、削除および転移することにより得られるＤ
ＮＡ配列。 ６、特許請求の範囲第５項に記載のＤＮＡ配列を含む組
換えシラスミド。 ｌ 特許請求の範囲第３項記載のＤＮＡ配列を用いるグ
ルコアミラーゼの製造法う ８、特許請求の範囲第４項記載のＤＮＡ配列を用いる澱
粉資化性を有する酵母の育種法。 ９ 特許請求の範囲第７項に記載の酵母を用いるグルコ
ースの製造法。 １０特許請求の範囲第７項記載の酵母を用いるエチルア
ルコールの製造法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP59116636A JPS60262593A (ja) | 1984-06-08 | 1984-06-08 | 酵母グルコアミラ−ゼ遺伝子 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP59116636A JPS60262593A (ja) | 1984-06-08 | 1984-06-08 | 酵母グルコアミラ−ゼ遺伝子 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS60262593A true JPS60262593A (ja) | 1985-12-25 |
| JPH0569510B2 JPH0569510B2 (ja) | 1993-10-01 |
Family
ID=14692103
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP59116636A Granted JPS60262593A (ja) | 1984-06-08 | 1984-06-08 | 酵母グルコアミラ−ゼ遺伝子 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS60262593A (ja) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS63133984A (ja) * | 1986-08-21 | 1988-06-06 | ロベルト バン デン ベルグ | 組換えｄｎａ技術によって構築されるデンプン分解酵素産生微生物及びその発酵法用途 |
-
1984
- 1984-06-08 JP JP59116636A patent/JPS60262593A/ja active Granted
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| AGRICULTURAL AND BIOLOGICAL CHEMISTRY=1983 * |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS63133984A (ja) * | 1986-08-21 | 1988-06-06 | ロベルト バン デン ベルグ | 組換えｄｎａ技術によって構築されるデンプン分解酵素産生微生物及びその発酵法用途 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPH0569510B2 (ja) | 1993-10-01 |
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