JPS6031055A - 試料の前処理法 - Google Patents
試料の前処理法Info
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- JPS6031055A JPS6031055A JP13947483A JP13947483A JPS6031055A JP S6031055 A JPS6031055 A JP S6031055A JP 13947483 A JP13947483 A JP 13947483A JP 13947483 A JP13947483 A JP 13947483A JP S6031055 A JPS6031055 A JP S6031055A
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- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
- G01N30/02—Column chromatography
- G01N30/04—Preparation or injection of sample to be analysed
- G01N30/06—Preparation
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- Pathology (AREA)
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
本発明は、イオンクロマトグラフィーを用いた生体液中
の陰イオン種または陽イオン種の分離分析に際しての試
料の前処理法に関する。更には生体液中の除タンパクに
際し、有機溶媒（エタノール、アセトニトリル等）や強
酸（過塩素酸、トリクロロ酢酸等）を用いることなく樹
脂を詰めた小容量のカラムに生体液を直接注入し、その
日液を用いてイオンを迅速に測定できる試料の前処理法
を特徴とする。
の陰イオン種または陽イオン種の分離分析に際しての試
料の前処理法に関する。更には生体液中の除タンパクに
際し、有機溶媒（エタノール、アセトニトリル等）や強
酸（過塩素酸、トリクロロ酢酸等）を用いることなく樹
脂を詰めた小容量のカラムに生体液を直接注入し、その
日液を用いてイオンを迅速に測定できる試料の前処理法
を特徴とする。
従来、生体液中のイオンの測定には、比色法。
沈殿滴定法１発光分光分析法、原子吸光法やイオン選択
性電極を利用する方法があるが、最近では数種のイオン
を同時に分離分析できるイオンクロマトグラフィーが利
用されている。イオンクロマトグラフィーで生体液中の
イオンを分析する場合、試料中のタンパク質や他の有機
物が分離カラムに吸着し、樹脂基材のイオン交換基とイ
オン種間の正常なイオン交換を妨害するため適切なタン
パク質や有機物の除去が必要である。ところが、従来知
られている除タンパク法である過塩素酸、トリクロロ酢
酸−やエタノール、アセトニトリルを加える方法では極
めて重要な問題が存在する。
性電極を利用する方法があるが、最近では数種のイオン
を同時に分離分析できるイオンクロマトグラフィーが利
用されている。イオンクロマトグラフィーで生体液中の
イオンを分析する場合、試料中のタンパク質や他の有機
物が分離カラムに吸着し、樹脂基材のイオン交換基とイ
オン種間の正常なイオン交換を妨害するため適切なタン
パク質や有機物の除去が必要である。ところが、従来知
られている除タンパク法である過塩素酸、トリクロロ酢
酸−やエタノール、アセトニトリルを加える方法では極
めて重要な問題が存在する。
まず、酸を用いる方法では、生体液中の陰イオンを分析
する場合、酸である過剰の過塩素酸イオンやトリクロロ
酢酸イオンなどが生体液中の塩化物イオン、硝酸イオン
、リン酸イオン、硫酸イオンなどと同様に隘イオン交換
樹脂上でイオン交換するため測定目的イオン種の正常な
イオン交換反応を妨害したり、りｒ１マドグラム上に過
塩素酸イオンあるいはｌ・リクロロ酢酸イオンの極めて
大きなピークが出現するため目的とする陰イオンの定限
が困難である。
する場合、酸である過剰の過塩素酸イオンやトリクロロ
酢酸イオンなどが生体液中の塩化物イオン、硝酸イオン
、リン酸イオン、硫酸イオンなどと同様に隘イオン交換
樹脂上でイオン交換するため測定目的イオン種の正常な
イオン交換反応を妨害したり、りｒ１マドグラム上に過
塩素酸イオンあるいはｌ・リクロロ酢酸イオンの極めて
大きなピークが出現するため目的とする陰イオンの定限
が困難である。
一方、４１機溶媒を用いる方法では、種々の特異的な現
象が生ずる。すなわち、エタノールあるいはアセトニト
リル除タンパク法では、生体液中のリン酸イオン、カル
シウムイオンの回収率が著しく低く、正確な濃度の測定
が不可能である。
象が生ずる。すなわち、エタノールあるいはアセトニト
リル除タンパク法では、生体液中のリン酸イオン、カル
シウムイオンの回収率が著しく低く、正確な濃度の測定
が不可能である。
本発明者らは、イオンクロマトグラフィーによる生体沿
中のイオン種の測定に際し、従来の前処理法によって生
ずる欠点を除去し、更により簡単な試料前処理法を開発
することに鋭意努力の結果、本発明を完成するに至った
。
中のイオン種の測定に際し、従来の前処理法によって生
ずる欠点を除去し、更により簡単な試料前処理法を開発
することに鋭意努力の結果、本発明を完成するに至った
。
すなわち、本発明はイオンクロマトグラフィーによる生
体液中のイオン種の分離分析に際し、特に生体液をポリ
スチレン系、ポリアクリレート系および／またはこれら
のイオン交換体樹脂を詰めた小容量カラムに通し、タン
パク質や他の有機物を該樹脂に吸着除去することを特徴
とする生体液の前処理法である。
体液中のイオン種の分離分析に際し、特に生体液をポリ
スチレン系、ポリアクリレート系および／またはこれら
のイオン交換体樹脂を詰めた小容量カラムに通し、タン
パク質や他の有機物を該樹脂に吸着除去することを特徴
とする生体液の前処理法である。
以下、本発明を図面によシ詳細に説明する。
本発明の生体液中のイオン種を測定するだめの装置の代
表的な例としては、送液ポンプ、陰イオン、？Ｆ♂論つ
へ芦ムと電気伝導度検出器から構成されている。
表的な例としては、送液ポンプ、陰イオン、？Ｆ♂論つ
へ芦ムと電気伝導度検出器から構成されている。
本発明で使用する小容量カラムの一例を第１図に示す。
この小容量カラム本体（１）はそのまま市販の注射筒（
４）と接続できるルアーハブを有し、タンパク質や他の
有機物除去のだめの樹脂（２）はフィルター（３）を介
して充填されている。本体およびフィルターの材質Ｆ、
１プラスチックであり、本体の大きさは内径が５鯖〜２
０關、長さが５關〜７０關の範囲のもので十分使用でき
る。カラムの大きさは樹脂の有するタンパク質や有機物
の吸着能と生体液の注入量を考慮して定められるが、好
ましくは内径が７ａｍ 〜１５ ｗｓ 、長さが１０Ｉ
ＩＩＩＩ〜６０朋である。
４）と接続できるルアーハブを有し、タンパク質や他の
有機物除去のだめの樹脂（２）はフィルター（３）を介
して充填されている。本体およびフィルターの材質Ｆ、
１プラスチックであり、本体の大きさは内径が５鯖〜２
０關、長さが５關〜７０關の範囲のもので十分使用でき
る。カラムの大きさは樹脂の有するタンパク質や有機物
の吸着能と生体液の注入量を考慮して定められるが、好
ましくは内径が７ａｍ 〜１５ ｗｓ 、長さが１０Ｉ
ＩＩＩＩ〜６０朋である。
本発明のカラムに充填する樹脂の基材としてはシリカ、
アルミナ、デキストラン。セルロース。
アルミナ、デキストラン。セルロース。
ポリアクリル、ポリスチレンなどが使用できるがタンパ
ク質や他の有機物との疎水的相互作用による吸着能を考
慮するとポリアクリル系、ポリスチレン系の充填剤が最
も好ましい。また、特にタンパク質の分子サイズを考慮
すると充填剤のポアサイズは１００〜１ｏｏｏＸの範囲
に制御されたもので、特に２５０〜５００Ｘのものが好
ましい。
ク質や他の有機物との疎水的相互作用による吸着能を考
慮するとポリアクリル系、ポリスチレン系の充填剤が最
も好ましい。また、特にタンパク質の分子サイズを考慮
すると充填剤のポアサイズは１００〜１ｏｏｏＸの範囲
に制御されたもので、特に２５０〜５００Ｘのものが好
ましい。
また、有機物の中でイオン化しているものをより効果的
に除去するために樹脂の基材上にイオン交換基を導入し
たイオン交換体も生体液の前処理として有効であること
が判明した。このイオン交換体の交換容量はα１〜５ミ
リ当量／９で、陰イオンを分析対象とした場合にはスル
ホン酸基あるいはカルボキシル基、陽イオンを分析対象
とした場合には４級アミン基、３級アミン基を有するイ
オン交換体を用いることが好ましい。
に除去するために樹脂の基材上にイオン交換基を導入し
たイオン交換体も生体液の前処理として有効であること
が判明した。このイオン交換体の交換容量はα１〜５ミ
リ当量／９で、陰イオンを分析対象とした場合にはスル
ホン酸基あるいはカルボキシル基、陽イオンを分析対象
とした場合には４級アミン基、３級アミン基を有するイ
オン交換体を用いることが好ましい。
各種樹脂の小容量カラムへの充填量は、カラムサイズに
合わせ、αロ５ゴ〜２０ｗＬｔの範囲であるが、好まし
くＦｉ［１３〜Ｂ−である。
合わせ、αロ５ゴ〜２０ｗＬｔの範囲であるが、好まし
くＦｉ［１３〜Ｂ−である。
また測定目的に応じ、上記樹脂を単独で使用しても、あ
るいはポアサイズの異なる樹脂を組み合わせるか、更に
はイオン交換基を保有していない樹脂と保有している樹
脂を組み合わせることもできる。
るいはポアサイズの異なる樹脂を組み合わせるか、更に
はイオン交換基を保有していない樹脂と保有している樹
脂を組み合わせることもできる。
以下、本発明を実施例によシさらに説明するが、本発明
はこれら実施例のみに限定されるものではない。
はこれら実施例のみに限定されるものではない。
実施例１
試料の測定に使用したイオンクロマトグラフは東洋曹達
工業■製［ａＬｃ−６０１Ｊ （商品名）で陰イオン分
析用カラムに東洋曹達工業■製［ｓｘｇｅｌＩＣ−＝Ａ
ｎ１ｏｎ−ｐｗｊ （商品名）を、溶離液Ｋｔｉ １．
３ ｍ Ｍグルコン酸カリウムと１．５ ｍ Ｍホウ砂
／１２チアセトニトリル（ｐＨａ５）を用いた。
工業■製［ａＬｃ−６０１Ｊ （商品名）で陰イオン分
析用カラムに東洋曹達工業■製［ｓｘｇｅｌＩＣ−＝Ａ
ｎ１ｏｎ−ｐｗｊ （商品名）を、溶離液Ｋｔｉ １．
３ ｍ Ｍグルコン酸カリウムと１．５ ｍ Ｍホウ砂
／１２チアセトニトリル（ｐＨａ５）を用いた。
第２図に試料として血清を希釈し、小容量のカラムに結
めた樹脂（［Ｔ Ｓ Ｋ ｇｅｌ、 ５ｔｙｒｅｎｅ−
２５０七「丁日Ｋ ｇｅｌ ５ｔｙｒｅｎｅ−６０ｊ
（東洋曹達工業■製画品名）と（−ＴｓｘｇｅｌＳＣ！
Ｘ（Ｈ”）Ｊ （東洋曹達工業■製画品名）を各０．５
−づつの３相系）を通して得られたクロマトグラムを示
す。リン酸イオンは６．６Ｉθｉａ Ｌである。
めた樹脂（［Ｔ Ｓ Ｋ ｇｅｌ、 ５ｔｙｒｅｎｅ−
２５０七「丁日Ｋ ｇｅｌ ５ｔｙｒｅｎｅ−６０ｊ
（東洋曹達工業■製画品名）と（−ＴｓｘｇｅｌＳＣ！
Ｘ（Ｈ”）Ｊ （東洋曹達工業■製画品名）を各０．５
−づつの３相系）を通して得られたクロマトグラムを示
す。リン酸イオンは６．６Ｉθｉａ Ｌである。
比較例１
実施例１と同様な溶離条件で、血清にエタノールを１：
１の比率で加え、振とり後、遠心分離（３５００ｒｐｍ
、５分間）後、上澄液を実施例１と同じ希釈率に１〜で
得られたクロマトグラムを第３図に示す。リン酸イオン
のピークは激減し・正常値を示Ｉ−でいない。
１の比率で加え、振とり後、遠心分離（３５００ｒｐｍ
、５分間）後、上澄液を実施例１と同じ希釈率に１〜で
得られたクロマトグラムを第３図に示す。リン酸イオン
のピークは激減し・正常値を示Ｉ−でいない。
比較例λ
実施例１と同様な溶離液条件で、血清を希釈し、小容量
のカラムに詰めた樹脂（ｒＴＳ Ｋ ｇｅｌ ｏＩ）ｓ
−１２ＯＮ東洋曹達工業■製商品名、１ｄ）を通して得
られたクロマトグラムを第４図に示す。
のカラムに詰めた樹脂（ｒＴＳ Ｋ ｇｅｌ ｏＩ）ｓ
−１２ＯＮ東洋曹達工業■製商品名、１ｄ）を通して得
られたクロマトグラムを第４図に示す。
シリカ基材の樹脂で処理した場合、血清中のタンパク質
以外の有機物を完全に取シ除くことができず、クロマト
グラム上に有機物の影響を受けた極端なベースラインの
落ち込みがあり、また元のベースラインに復帰するのに
２５〜５０分の時間を要した。
以外の有機物を完全に取シ除くことができず、クロマト
グラム上に有機物の影響を受けた極端なベースラインの
落ち込みがあり、また元のベースラインに復帰するのに
２５〜５０分の時間を要した。
実施例２
装置は実施例１と同一で、陽イオン分析用カラムに東洋
曹達工業■製「ＴＳＫｇｅｌ工０−ＯａｔｉｏｎＪ（商
品名）を、溶離液には［１５ｍＭエチレンジアミン（ｐ
Ｈ６）を用いて、血清を希釈して小容量のカラムに詰め
た樹脂（「Ｔ Ｓ Ｋ ｇｅｌ ５ｔｙｒｅｎｅ−２５
０」 と「Ｔ Ｓ Ｋ ｇｅｌ ５ｔｙｒｅｎｅ−６０
Ｊ東洋曹達工業■製商品各各０．５ｍ／づつの２相系）
に通して得られたクロマトグラムを第５図に示す。
曹達工業■製「ＴＳＫｇｅｌ工０−ＯａｔｉｏｎＪ（商
品名）を、溶離液には［１５ｍＭエチレンジアミン（ｐ
Ｈ６）を用いて、血清を希釈して小容量のカラムに詰め
た樹脂（「Ｔ Ｓ Ｋ ｇｅｌ ５ｔｙｒｅｎｅ−２５
０」 と「Ｔ Ｓ Ｋ ｇｅｌ ５ｔｙｒｅｎｅ−６０
Ｊ東洋曹達工業■製商品各各０．５ｍ／づつの２相系）
に通して得られたクロマトグラムを第５図に示す。
血清中の遊離カルシウム濃度は２．４ｍθφであった。
比較例５
実施例２と同様な溶離条件で、血清にエタノールを１＝
１の比率で加え、振とり後、遠心分離（３５００ｒｐｍ
、５分間）後、上澄液を実施例２と同じ希釈率にして得
られたクロマトグラムを第６図に示す。
１の比率で加え、振とり後、遠心分離（３５００ｒｐｍ
、５分間）後、上澄液を実施例２と同じ希釈率にして得
られたクロマトグラムを第６図に示す。
血清中の遊離カルシウムイオンのピークは、４分の１以
下に激減し正常値を示していない。
下に激減し正常値を示していない。
第１図は、血清の前処理用樹脂を詰めた小容量のカラム
に注射筒を備え付けた場合の構成図である。 第２図は、血清を前処理用樹脂で処理した無機陰イオン
のクロマトグラムである。第３図は、血清ヲエタノール
で除タンパクして得られる無機陰イオンのクロマトグラ
ムである。 第４図は血清をシリカ基材の前処理用樹脂で処理した無
機陰イオンのクロマトグラムである。 第５図は、血清を前処理用樹脂で処理したアルカリ土類
金属イオンのクロマトグラムである。第６図は、血清を
エタノールで除タンパクして得られるアルカリ土類金属
イオンのクロマトグラムである。 １、 小容量カラム ２ 前処理用樹脂 五 フィルター ４、注射筒 ５ リン酸イオン ＆ 硫酸イオン ｌ マグネシウムイオン ａ カルシウムイオン 特許出願人 東洋曹達工業株式会社 第 １ 図 第 ２ 図 第 ３ 図 第４図 第５図 第６図
に注射筒を備え付けた場合の構成図である。 第２図は、血清を前処理用樹脂で処理した無機陰イオン
のクロマトグラムである。第３図は、血清ヲエタノール
で除タンパクして得られる無機陰イオンのクロマトグラ
ムである。 第４図は血清をシリカ基材の前処理用樹脂で処理した無
機陰イオンのクロマトグラムである。 第５図は、血清を前処理用樹脂で処理したアルカリ土類
金属イオンのクロマトグラムである。第６図は、血清を
エタノールで除タンパクして得られるアルカリ土類金属
イオンのクロマトグラムである。 １、 小容量カラム ２ 前処理用樹脂 五 フィルター ４、注射筒 ５ リン酸イオン ＆ 硫酸イオン ｌ マグネシウムイオン ａ カルシウムイオン 特許出願人 東洋曹達工業株式会社 第 １ 図 第 ２ 図 第 ３ 図 第４図 第５図 第６図
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 １）生体液中の陰イオンまたは陽イオンをイオンクロマ
トグラフィーにより分離分析するに際し、タンパク質や
他の有機物を樹脂を詰めた小容量のカラムを用いて取り
除くことを特徴とする試料の前処理法。 ２）充填する樹脂がイオン交換体である特許請求の範囲
第１項記載の前処理法。 ３）充填する樹脂がポリスチレン系基材である特許請求
の範囲第１項及び第２項記載の前処理法。 ４）充填する樹脂がポリアクリレート系基材である特許
請求の範囲第１項及び第２項記載の前処理法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP13947483A JPS6031055A (ja) | 1983-08-01 | 1983-08-01 | 試料の前処理法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP13947483A JPS6031055A (ja) | 1983-08-01 | 1983-08-01 | 試料の前処理法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS6031055A true JPS6031055A (ja) | 1985-02-16 |
Family
ID=15246082
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP13947483A Pending JPS6031055A (ja) | 1983-08-01 | 1983-08-01 | 試料の前処理法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS6031055A (ja) |
Cited By (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4680272A (en) * | 1985-10-23 | 1987-07-14 | University Of California | Method for detecting molecules containing amine or thiol groups |
| JPS63281051A (ja) * | 1987-05-13 | 1988-11-17 | Sekisui Chem Co Ltd | Ｄｎａを含む試料の処理方法 |
| JPH01320460A (ja) * | 1988-06-21 | 1989-12-26 | Toyo Jozo Co Ltd | イオンクロマトグラフィー方法 |
| JPH04225158A (ja) * | 1990-12-27 | 1992-08-14 | Sekisui Chem Co Ltd | 無機陰イオンの分析方法および分析装置 |
| JPH0643146A (ja) * | 1992-03-26 | 1994-02-18 | Ajinomoto Co Inc | 分析用生体試料中の蛋白質分離除去方法 |
| CN103411809A (zh) * | 2013-08-13 | 2013-11-27 | 中国水产科学研究院淡水渔业研究中心 | 一种常温保存克氏原螯虾各组织蛋白质组学用蛋白样品的方法 |
-
1983
- 1983-08-01 JP JP13947483A patent/JPS6031055A/ja active Pending
Cited By (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4680272A (en) * | 1985-10-23 | 1987-07-14 | University Of California | Method for detecting molecules containing amine or thiol groups |
| JPS63281051A (ja) * | 1987-05-13 | 1988-11-17 | Sekisui Chem Co Ltd | Ｄｎａを含む試料の処理方法 |
| JPH01320460A (ja) * | 1988-06-21 | 1989-12-26 | Toyo Jozo Co Ltd | イオンクロマトグラフィー方法 |
| JPH04225158A (ja) * | 1990-12-27 | 1992-08-14 | Sekisui Chem Co Ltd | 無機陰イオンの分析方法および分析装置 |
| JPH0643146A (ja) * | 1992-03-26 | 1994-02-18 | Ajinomoto Co Inc | 分析用生体試料中の蛋白質分離除去方法 |
| CN103411809A (zh) * | 2013-08-13 | 2013-11-27 | 中国水产科学研究院淡水渔业研究中心 | 一种常温保存克氏原螯虾各组织蛋白质组学用蛋白样品的方法 |
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