JPS6035357B2 - ペプタイド - Google Patents

Description

【発明の詳細な説明】 本発明は神経細胞を賭活し、アデニルサィクレース活性
を上昇をきたし、細胞内３・５′ーサイクリック・ＡＭ
円濃度を上げるという重要な生理作用を示す新現べプタ
ィド‘こ関するものである。

脳から分離され、その化学構造が決定されたＳ肋ｓ−ｔ
ａｎｃｅ Ｐ（〜ｇ−Ｐｒｏ−Ｌｙｓ−Ｐｒｏ−ＧＩｕ
−Ｇｉｎ−Ｐｈｅ−Ｐｈｅ一ＧＩｙ−比ｕ−Ｍｅｔ一Ｎ
Ｈ２）はその後神経細胞に広く分布することが知られる
に至っているが、その生理作用の本質について不明の点
が多い。しかし、筋収縮作用を指標とした研究ではＣ−
末端べプタィドＰｈｅ−ＧＩｙ−仏ｕ−Ｍｅｔ−ＮＨ２
がその活性中心であることが明瞭に示されている。本発
明者らはＳｕ戊ｔａｎｃｅ ＰがＮｅｍｏｂｌａｓｔｏ
ｍａｃｌｏｎｅ Ｎ−１８をＥａｇｅｍｅｄｉｍｍを基
礎培養液とする細胞培養した培養液に添加すると、細胞
内Ｃｙｃｌｉｃ ＡＭＰ含量の増加をきたし「 ついで
神経細胞突起の伸長作用を示すことを知見したが、この
作用の本体を追究することによって、本発明を完成した
ものである。すなわち、本作用の本体を各種のＳｕ船ｔ
ａｎｃｅ Ｐ断片を使用して調べたところ、従来Ｓｕ広
ｔａｎｃｅＰの活性中心とされていたＣ−末端側には本
作用は認められず、意外にもＮ−末端部に活性中心が存
在することを知見し、さらに本知見をもとに各種の関運
べプタィドを合成し、作用を確認したものである。本発
明の物質を具体的に示すと次の式で示されるべプタイド
である。

Ｒ，一Ａｒｇ−Ｐｒｏ一Ｌ＊一Ｒ２ （１）
（Ｒ，は日またはアシル基、Ｒ２はＯＨ、Ｎ比、Ｐｒｏ
またはＰｒｏ−ＮＨ２を示す。

）本明細書において、アミノ酸、ベプタィド、保護基等
に関する表示は、ＩＵＰＡＣ−ＩＵＢＣｏ−ｍｍｌｓｓ
ｌｏｎｏｎＢｉｏｌｏｇｉｃａＩＮｏｍｅｎｃｌａｔｕ
ｒｅによる略記法あるいは当該分野における慣用略号に
基ずし、ており、それらの例を次に示す。

Ａ止ｇ：アルギニン Ｌｙｓ：リジン Ｐｒｏ：プロリン Ｚ：カルポベンゾキル基 ＢＯＣ：ターシヤリーブチルオキシカルボニル基Ｎ０２
：ＮＧーニトロ基ＨＯＮＢ：Ｎ−ハイドロキシー５ーノ
ルボルネンー２・３−ジカルボキシイミドＯＮＢ：同ェ
ステル 〇Ｍｅ：メチルエステル 日２／Ｐｄまたは５％Ｐｄ一Ｃ パラジウム黒又は５％パラジウム−炭素上接触還九ＨＦ
：無水発化水素 ＣＦ３ＣＯＯＨ：トリフルオロ酢酸 ＤＣＨＡ：ジシクロヘキシルアミン ＯＢｚｌ：ペンジルエステル ＤＣＣ：ジシクロヘキシルカルボジイミドｐ−Ｔｓ−Ｏ
Ｈ：ｐ−トルェンスルホン酸Ａｃ：アセチル ｎ−Ｂｕ：ｎーブチリル 本明細書において、アミノ酸に関し、光学異性体があり
うる場合、特に明記しない場合は、すべての光学活性体
およびラセミ体を包含するものとする。

前記式（１）において、Ｒ，で示されるアシル基として
は、炭素数１〜６のもの、たとえばホルミル、アセチル
、プロピオニル、ブチリル、ｉープチリル、バレリル、
カプロイルなどがあげられる。

本発明の化合物（１）は、ベプタィド縮合、アミノ基の
アシル化の常套手段を適宜使用して実施しうる。

そのようなべプタィド縮合反応は、たとえば‘‘Ｔｈｅ
Ｐｅｐｔｉｄｅｓ’’、第１巻（１９６６）、Ｓｃｈ
ｒｏｄｅて ａｎｄ Ｌｕｂｋｅ著、Ａｃａｄｅｍｉｃ
Ｐｒｅｓｓ、ＮｅｗＹｏｒｋ、Ｕ．Ｓ．Ａあるいは“
べプチド合成、泉屋ら著、丸善株式会社（１９７３王）
に記載されており、より具体的には、たとえばアジド法
、クロラィド法、酸無水物法、濃酸無水物法、ＤＣＣ法
、活性ェステル法、ウッドワード試薬Ｋを用いる方法、
カルボジィミダゾール法、酸化還元法、ＤＣＣ／アディ
テブ（ＨＯＮＢＨＯＢｔ、日０６ｕ）法などがあげられ
る。本発明の化合物（１）は、そのべプタィド結合また
はそのＣ末端のアミド結合またはそのＮ末端のＲ，で示
されるアシル結合の任意の結合位で２分される２種の断
片の一方に相当する反応性カルボキシル基を有する原料
と他方に相当する反応性アミノ基を有する原料（アンモ
ニアも含む）を常套手段で縮合させ、生成する縮合物が
保護基を有する場合、その保護基を常套手段で脱離させ
ることにより製造しうる。

化合物（１）はリジン残基を有しており、それを製造す
る原料化合物の中のりジン残基は反応中保護しておくの
が好ましいので、少なくともリジン残基が保護された化
合物（１）から保護基を脱離させることにより化合物（
１）を有利に製造する場合が多い。

化合物（１）を製造するための最終べプタィド縮合反応
は、化合物（１）のべプタィド結合の任意の位置で実施
してもよいが、工業的には２位と３位のアミノ酸、すな
わち化合物（１）のアミノ酸配列に従ってプロリン残基
をＣ末端アミノ酸として有する反応性原料とこれに対応
するりジン残基をＮ末端として有する反応性原料との間
で統合反応を有利に実施しうる場合が多い。

べプタィド縮合反応を行なう前に、それ自体公知の手段
により原料の反応に関与すべきでないカルボキシル基、
ァミノ基などの官能基を保護したり、また反応に関与す
るカルボキシル基、アミノ基を活性化させてもよい。

原料のカルボキシル基は、たとえば金属塩（例、ナトリ
ウム、カリウム塩等）、ｔ−アルキルアミン塩（例、ト
リェチレアミン、Ｎーメチルモルホリン等）あるいはェ
ステル（例、メチル、エチル、プロピル、ｔ−ブチル、
ｔ−アミル、ベンジル、ｐーニトロベンジル等のェステ
ル）の形で保護することもできる。

顕相合成法においては、ェステルとして、たとえばポリ
スチレン樹脂にペンジルアルコールを導入したものを使
用したもよい。原料のアミノ基の保護基としては、たと
えばカルボベンゾキシ、ｔーブチルオキシカルボニル、
ｔ−アミルオキシカルボニル、インポルニルオキシカル
ボニル、ｐーメトキシベンジルオキシカルボニル、２−
クロルーベンジルオキシカルボニル、アダマンチルオキ
シカルボニル、トリフルオ。

アセチル、フタリル、ホルミル、ｏーニトロフエニルス
ルフエニル、ジフエニルホスフイノチオイルなどがあげ
られる。アルギニンのグアニジノ基の保護基としては、
たとえばニトロ基、トシル基、カルボベンゾキシ、イン
ポニルオキシカルボニル、アダマンチルオキシカルボニ
ル等が例示される。

原料のカルボキシル基の活性化されたものとしては、た
とえば対応する酸無水物、アジド、活性ェステル〔アル
コール（例、ペンタクロロフェノール、２・４・５−ト
リクロロフエノール、２・４−ジニロフエノール、シア
ノメチルアルコール、ｐーニトロフヱノール、Ｎ−ハイ
ドロキシ−５−ノルボルネンー２・３ージカルボキシイ
ミド、Ｎーハイドロキシサクシンイミド、Ｎーハイドロ
キシフタルイミド、Ｎ−ハイドロキシベンズトリアゾー
ル）とのェステル〕などがあげられる。原料のアミノ基
の活性化されたものとして、たとえば対応するリン酸ア
ミドがあげられる。べプタィド結合形成反応は、脱水剤
（例、ジシクロヘキシルカルボジイミド、力ルボジイミ
ダゾール等のカルボジィミド試薬）の存在下に実施しう
る場合がある。

本べプタィド縮合反応は溶媒の存在下に行うことができ
る。

溶媒としては、ベプタィド縮合反応に使用しうろことが
知られているものから適宜選択されうる。たとえば無水
または含水のジメチルホルムアミド、ジメチルスルホキ
サイド、ピリジン、クロロホルム、ジオキサン、ジクロ
ルメタン、テトラハイドロフラン、酢酸エチルあるいは
これらの適宜の混合物などがあげられる。反応温度は、
ベプタィド結合形成反応に使用されうろことが知られて
いる範囲から適宜選択され、通常約−３０００〜約６０
ｏｏの範囲から適宜選択される。

また化合物（１）は園相合成法によっても容易に製造す
ることができる。本縮合反応終了後、生成物が保護基を
有している場合、それは常法により離脱できる。

かかる常法としては、たとえば還元的方法（例、パラジ
ウム黒、パラジウム−炭素、白金等の触媒を用いる水素
添加、液体アンモニア中金属ナトリウムによる還元）、
ソルボリシス（例、トリフルオロ酢酸、フッ化水素、メ
タンスルホン酸の強酸によるソルボリシス）などがあげ
られる。上記のようにして製造されたべプタィド（１）
は、反応終了混合物から、ベプタィドの分離手段、抽出
、分配、カラムクロマトグラフイーなどにより採取でき
る。

べプタィド（１）は、ァルギニン残基を有するので、塩
としても採取しうる。

べプタィド（１）の塩を形成しうる酸としては、たとえ
ば塩酸、臭化水素酸、硝酸、硫酸、リン酸などの無機酸
、あるいはたとえばギ酸、酢酸、プロピオン酸、乳酸、
クエン酸、シウ酸、マレィン酸、フマール酸などの有機
酸などがあげられる。

Ｒ，で示されるアシル基は、アルギニンまたはＮ末端と
してアルギニン銭基を有する保蓬べプタィド原料にアシ
ル化の常套手段を適用して導入しうる。

このアシル化は、アミノ基をアシル化するために知られ
ているアシル化手段、たとえば酸無水物、活性ェステル
、酸ハラィドなどを使用して実施しうる。アシル化の反
応温度は、たとえば約一５０〜十８０ｑｏの範囲から適
宜選択しうる。Ｒ，で示されるアシル基はアルギニン残
基のＱ一位のアミノ基に１個導入される。Ｒ，で示され
るアシル基は、如何なる反応工程で導入してもよいが、
たとえばアルギニン残基のＱ−位のアミノ基以外の官能
基を保護した化合物（１）、あるいはそのＮ末端側アミ
ノ酸またはべプタィド断片をァシル化することにより有
利に導入しうる場合が多い。ァシル化は溶媒の存在下に
行なうことができ、溶媒としては、公知のアシル化に使
用しうるものから適宜選択しうる。

たとえば、ジオキサン、ジメチルホルムアミド、クロロ
ホルム、ジクロルメタン、テトラヒドロフラン、ピリジ
ンなどから適宜使用しうる場合がある。前記製法に使用
しうる原料もまた常套手段により容易に製造できる。

本発明のべプタィド（１）は、動物（例、マウス、ラツ
ト、ウサギ、ネコ、イヌ、サル、ニワトリ等）に対し、
神経細胞賦活作用を奏し、神経細胞のァデニルサィクラ
ーゼを活性化し、神経細胞内のサィクリックＡＭＰを増
加させる作用を奏するので、有用である。

べプタィド（１）は、毒性も低く前記作用効果を期待し
て動物に経口あるいは非経口的に投与しうる。投与量は
所望の作用効果を奏しうるに十分な量であればよく、投
与方法によって異なるが、一般に１回当りたとえば約０
．０１〜１００の９′ｋ９程度の範囲から適宜選択しう
る場合もある。べプタィド（１）は、それ自体で投与し
うる場合もあるが、医薬的に許容さる非憲性担体と混合
して使用しうる場合もある。

注射剤としては、たとえば注射用生理食塩水に溶解した
ものを使用しうる場合もある。化合物（１）は、神経細
胞の培養系に共存させると、神経細胞のァデニルサィク
レースを活性化し、神経細胞内のサィクリックＡＭＰを
増加させるので、そのような条件を必要とする場合に有
用である。

そのような場合には、ベプタイド（１）は約１０‐２〜
１０‐ｌｏモル濃度の範囲から適宜選択しうる。べプタ
ィド（１）を構成するアミノ酸残基に関し、光学活性体
がありうる場合は、Ｌ体が作用効果の点から好ましい。

以下の実施例、参考例において、アミノ酸に関し光学活
性体がありうる場合は、特に明示しない場合は、Ｌ体を
示すものとする。

実施例 １ 日一〜ｇ−Ｐｒｏ一Ｌ＄一Ｐｒｏ−ＯＨの製造Ｈ−〜ｇ
−Ｐｍ−ＬバーＰｒｏ−ＯＨの合成は以下のように行な
われる。

それぞれの合成工程は末尾の表１にまとめられている。
‘１１ ＢＯＣ−〜ｇ（Ｎ０２）−Ｐｒ０一Ｌ＄（ＢＯ
Ｃ）−Ｐｒｏ−ＯＭｅの合成油状のＺ−Ｌ淡（８０Ｓ）
−ＯＨ（Ｚ−Ｌｙｓ（ＢＯＣ）−ＯＨ・ＤＣＨＡＩ１２
．４夕（０．２Ｍ）から調製）とＨＯＮＢ３６．０夕（
０．２Ｍ）を５００の‘のジオキサンにとかし、冷却下
にＮ・Ｎ′ージシクロヘキシルカルボジイミド４１．２
夕（０．２Ｍ）を加えて、室温で３時間かきまぜる。

一方、Ｈ−Ｐｒｏ一ＯＭｅ・ＨＣ１３９．８夕（０．２
４Ｍ） を１００の‘のジメチルホルムアミドにとかし
、冷却下にトリェチルアミン３３．６の‘（０．２４Ｍ
）を加えて、生ずる塩の結晶を炉別する。炉液に先の活
性ェステル溶液を生ずるジシクロヘキシル尿素を炉則し
ながなら加える。反応液は１狐寺間、室温でかさまぜる
。溶媒を減圧で留去し、残った油状物を酢酸エチルにと
かし、酢酸エチル層は常法通り０．が一日ＣＩ、５％Ｎ
ａＨＣ０３で洗浄する。無水Ｎａ２Ｓ０４で乾燥後、酢
酸エチルを減圧で留去する。残った油状物（Ｚ−Ｌ＄（
ＢＯＣ）−Ｐｒｏ−ＯＭｅ）を石油ベンジンでよく洗う
。収量：１０５．０夕（８９．０％）、Ｒｆｌ（クロロ
ホルム：メタノール：酢酸＝９：１：０．５）＝０．７
１この油状のＺ−Ｌｙｓ（ＢＯＣ）−Ｐｒｏ−ＯＭｅｌ
０５．０夕を２５００の‘のメタノールにとかし、Ｐー
トルェンスルフオン酸３３．９夕（０．１７８Ｍ）と５
％パラジウム−炭素２０夕を加え、室温で５時間接触還
元する。触媒を炉別し、炉液を濃縮する。得られる油状
物を５００の上のジメチルホルムアミド‘ことかし、冷
却下にトリェチルアミン２４．９の．Ｚ（０．１７９Ｍ
）を加え、中和する。これにＺ−Ｐｒｏ−ＯＮＢ７３．
１夕（０．１７８Ｍ）を加え、１２時間室温でかきまぜ
る。溶媒を減圧で留去し、残った油状物を酢酸エチルに
とかして、、０．が一日ＣＩ、５％ＮａＨＣ０３で常法
に従って洗浄する。無水Ｎａ２Ｓ０４で乾燥後、酢酸エ
チルを減圧で蟹去する。残った油状物（Ｚ−Ｐｒｏ−Ｌ
ｙｓ（ＢＯＣ）−Ｐｒｏ−ＯＭｅ）を石油ベンジンでよ
く洗う。収量：１１０．０夕（１００％）、Ｒｆｌ＝０
．６９この油状のＺ−Ｐｒｏ−Ｌ＄（８０Ｃ）一Ｐｒｏ
−ＯＭｅ８６．ｏ夕（０．１４８ゆ を１０００の【の
メタ／ールにとかし、５％パラジウム−炭素１５夕の存
在下に、室温で６時間接触還元する。触媒を炉別し、炉
液は減圧で濃縮する。残った油状物にＢＯＣ−Ａｒｇ（
Ｎ０２）−ＯＮＢ（ＢＯＣ−Ａｒｇ（Ｎ０２）−ＯＨ５
４．５夕（０．１８Ｍ）、ＨＯＮＢ２６．９夕（０．１
８心とＮ・Ｎ′−ジシクロヘキシルカルボジィミド３０
．９夕（０．１９Ｍ）から調製）の溶液（ジオキサン：
テトラヒドロフラン＝３：１）１０００机‘を加えて、
低温室（４００）で１２凪時間かきまぜる。溶媒を減圧
で蟹去し、残った油状物を酢酸ェチにとかして、酢酸エ
チル層は０．州一日ＣＩ、５％ＮａＨＣ０３で常法通り
洗浄する。無水Ｎａ２Ｓ０２で乾燥後、酢酸エチルを減
圧で留去する。残った油状物はエーテルでよく洗浄した
あと、石油ベンジンを加えて粉末として炉取する。もう
一度同様の操作を行って精製する。収量：７５．５夕（
６８．５％）、融点８０．０〜８２．０ｑｏ（発泡分解
）、旋光度：〔Ｑ〕色７一４８．００（ｃ＝０．６８、
ジメチルホルムアミド）、元素分析：Ｃ３３日５７０，
．Ｎ９として、計算値Ｃ、５２．４４；日、７．６０）
Ｎ、１６．６８：実験値Ｃ、５２．７３：日、８．２０
；Ｎ、１６．６１Ｒｆｌ＝０．６７‘２） ＢＯＣ−〜
ｇ（Ｎ０２）一Ｐｒｏ一Ｌ侭（ＢＯＣ）一Ｐｒｏ−ＯＨ
の合成ＢＯＣ−ふｇ（Ｎ０２）−Ｐｒｏ−Ｌｙｓ（ＢＯ
Ｃ）−Ｐｍ−ＯＭｅ７１．８夕（０．０９９Ｍ）をアセ
トン６００の‘にとかし、冷却下にＮ−ＮａＯＨ１２０
のとを加え、室温で１時間かきまぜる。

さらに７０舷のＮ−ＮａＯＨを加え、２時間かきまぜる
。冷時１９０私のＮ一日ＣＩで中和し、減圧でアセトン
を蟹去する。析出する油状物を酢酸エチルにとかし・酢
酸エチル層は水で３回洗浄する。無水Ｎａ２Ｓ０４で乾
燥後、酢酸エチルを減圧で留去する。残った油状物に石
油ベンジンを加えて粉末とする。酢酸エチル一石油ベン
ジンから再沈殿する。収量：６５．０夕（９２．２％）
、融点９５．０〜９８．０００（発泡分解）、旋光度：
〔Ｑ〕色７−４６．７０（ｃ＝０．５４、ジメチルホル
ムアミド）、元素分析：Ｃ３２日５５０，．Ｎ９として
、計算値Ｃ、５１．８１：日、７．４７：Ｎ、１６．９
９：実験値Ｃ、５２．２４：日、７．７０；Ｎ、１６．
００Ｒｆｌ＝０．３０‘３ｌ Ｈ−山ｇ−Ｐｒｏ−Ｌ＄
−Ｐｒｏ−ＯＨの合成‘ａ’無水弗化水素による方法Ｂ
ＯＣ−〜ｇ（Ｎ０２）−Ｐｒｏ−Ｌｙｓ（ＢＯＣ）−Ｐ
ｒｏ−ＯＨ７４２の９をアニソール０．７の‘の存在下
に５机との無水弗化水素で０℃、３び分間常法に従って
処理する。

無水弗化水素を減圧で留去し、残燈は減圧で（ＮａＯＨ
上で）１時間乾燥する。

これを少量の水にとかしてエーテルで洗浄する。水層に
１０の‘のアンバーライトＩＲＡ−４１０（酢酸型）を
加えて、室温で２時間かきまぜる。樹脂を炉別し、炉液
は凍結乾燥する。アメ状の凍結乾燥物を５０の上の水に
とかして、力ルボキシメチルセルロースの力ラム（３．
０×２４．０肌）に注ぎ込む。

カラムを２００の‘の水で洗ったあと、水（５００羽と
）と０．２Ｍ酢酸アンモニウム（５００叫）の間で直線
的濃度勾配法で溶出を行う。主漆出画分（１９０の上〜
３００のと）を集めて凍結乾燥する。凍結乾燥物を少量
の０．１Ｍ酢酸にとかしてセフアデツクスＬＨ−２０の
カラム（３．０×１３５．０弧）を通して、脱塩を行い
、凍結乾燥する。収量：４７４の９、旋光度：〔Ｑ〕客
−８９．３０（ｃ＝０．５４、水）、元素分析：Ｃ２２
Ｎ４ｏ０５Ｎ８・２日３ＣＯＯ日・２．班２０として、
計算値Ｃ、４７．１９；日、８．０７；Ｎ、１６．９３
；実験値Ｃ、４７．２８；日、８．０２；Ｎ、１７．２
雌酸分解物のアミノ酸比（洲‐ＨＣ１、１１０℃、２４
時間）：Ａｒｇ、１．０２‘１｝：Ｌｙｓ、１．００‘
１｝；Ｐｒｏ、２．０７｛２｝。（ ）内の数字は理論
値、平均回収率９２．６％、Ｒｆ４＝０．２０（ｎーブ
タノール：ピリジン：酢酸：水＝３０：２０：６：２４
）、Ｒｆ５二０．０６（ｎーブタノール：酢酸エチル：
酢酸：水＝１：１：１：１）｛ｂ｝ 接触還元とトリフ
ルオロ酢酸による方法Ｂ。

Ｃ−〜ｇ（Ｎ。２）−Ｐｒｏ−ＬｙＳくＢ。

Ｃ）−Ｐｒｏ−ＯＨ１５．０夕を４００の‘の水：酢酸
（２：８）の混液にとかし、５％パラジウム−炭酸７．
５夕を触媒として、室温で８時間接触還元を行う。さら
に５．０夕の触媒を追加して、８時間接触還元を行う。
触媒を炉別し、炉液は減圧で濃縮する。残った油状物を
水にとかし、減圧で水を蟹去する。

この操作を３回くりかえして過剰の酢酸を除去する。残
った油状物（ＢＯＣ−Ａｒｇ−Ｐｒｏ−Ｌｙｓ（ＢＯＣ
）−Ｐｒｏ−ＯＨ）を１５物‘のトリフルオロ酢酸にと
かし、１時間室温でふりまぜる。減圧でトリフルオロ酢
酸の大部分を留去し、残留物にエーテルを加える。生ず
る油状物を傾斜法を用いてエーテルでよく洗う。この油
状物を少量の水にとかしてアンバーライトＩＲＡ−４１
０（酢酸型）のカラム（６．０×１３．０弧）を通過さ
せて、イオン交換する。イオン交換液は減圧で留去し、
残澄は２０００柵の水にとかして、カルボキシメチルセ
ルロースの力ラム（６．０×２８．０弧）に注ぎ込む。
カラムを１５００奴の水で洗い、ついで水（３０００の
（）と０．２Ｍ酢酸アンモニウム（３０００の‘）の間
で直線的濃度勾配法で溶出を行う。主溶出画分（１５０
０叫〜２８００の‘）を集めて凍結乾燥する。凍結乾燥
物を少量の０．１Ｍ酢酸にとかしてセフアデックスＬＨ
−２０のカラム（４．０×１４０．０弧）を通して、脱
塩を行い、凍結乾燥する。収量：８．７夕、旋光度：〔
Ｑ〕費−８２．７０（ｃ＝０．６７、水）、元素分析：
Ｃ２２日４ｏ０５Ｎ８・ＸＨ３ＣＯＯ日・汎２０として
、計算値Ｃ、４７．８４：日、８．０３：Ｎ、１７．１
７；実験値Ｃ、４７．４８：日、８．３２：Ｎ．１７．
３６酸分解物のアミノ酸比（磯一日ＣＩ、１１０℃、２
４時間）：Ａｒｇ、０．９７０１：Ｌｙｓ、１．００‘
１｝；Ｐｒｏ、２．０６‘２｝ （ ）内の数字は理論
値、平均回収率８６．１％ Ｒｆ４＝０．２６、Ｒｆ５
＝０．０６表Ｉ 日 Ａｒｇ Ｐｒｏ Ｌｙｓ Ｐｒ
ｏ ＯＨの合成表実施例 ２Ｈ−〜ｇ−Ｐｒｏ−Ｌ俺一
〇日の製造 Ｈ−Ａｒｇ−Ｐｒｏ−Ｌ＄−ＯＨの合成は以下のように
行なわれる。

それぞれの合成工程は、末尾の表２にまとめられている
。（１ー Ｚ‐Ａｒｇ（Ｎ０２）一Ｐｒｏ一Ｌｙｓ（Ｚ
）一ＯＢＺＩの合成Ｚ −Ａｒｇ（Ｎ０２）−Ｐｒｏ−
ＯＨ２．２５ 多く０．００９Ｍ）、Ｈ−Ｌｙｓ（Ｚ）
−ＯＢｚｌ・ｐ−Ｔｓ・〇日３．２６ 夕 （ ０．０
０８Ｍ ）と 日〇ＮＢＩ‐０７ 夕（０．００ａＭ）
を２０舷のジメチルホルムアミドもことかして氷冷する
。

Ｎ−エチルモルフオリン０．７７の‘（０．００８Ｍ）
を加え、ついでＮ・Ｎ′−ジシクロヘキシルカルボジ
イミド１．２４夕（０．００８ Ｍ）を加えて１幼時間
室温でかさまぜる。生ずる尿素体を炉別し、炉液は減圧
で濃縮する。残った油状物を酢酸エチルにとかして、Ｎ
一日ＣＩ、５％ＮａＨＣ０３で常法通り洗浄する。無水
Ｎａ２Ｓ０４で乾燥後、酢酸エチルを減圧で留去する。
残った油状物に石油ベンジンを加えて粉末とする。酢酸
エチル一石油ベンジンから再沈殿する。収量：３．４夕
（８５．０％）、融点７５．０〜７８．０００（分解）
、旋光度：〔Ｑ〕奪−２６．６ｏ（ｃ＝０．６ふ ジメ
チルホルムァミド）元素分析：Ｃ４瓜５００，。Ｎ８と
して、計算値Ｃ、５９．８４：日、６．２８：Ｎ、１３
．９６；実験値Ｃ、５９．６２：日、６．５７；Ｎ、１
３．８０Ｒｆｌ＝０．７４（２）Ｈ−〜ｇ−Ｐｒｏ−Ｌ
＄−ＯＨの合成Ｚ−Ａｒｇ（Ｎ０２）一Ｐｒｏ一Ｌｙｓ
（Ｚ）−ＯＢｚ１８０３の９をアニソール１．２の‘の
存在下に１０の‘を無水※化水素で０００、６０分間常
法に従って処理する。

無水弗化水素を減圧で留去し、残燈は真空で（ＮａＯＨ
上で）、３０分間乾燥する。乾燥残澄を少量の水にとか
して、酢酸エチルで洗浄する。水層に５０叫のアンバー
ライトＩＲＡ−４１０（酢酸型）を加え、２時間ふりま
ぜる。樹脂を炉刻し、炉液は凍結乾燥する。凍結乾燥物
を５００の【の水にとかして、カルボキシメチルセルロ
ースのカラム（３．０×２５．０肌）に注ぎ込む。１０
０の上の水でカラムを洗ったあと、水（７００の上）と
０．２Ｍ酢酸アンモニウム（７００の‘）の間で直線的
濃度勾配法で溶出を行う。

主溶出画分（５４０の【〜８００の上）を集めて、凍結
乾燥する。凍結乾燥物を少量の０．１Ｍ酢酸にしかして
セフアデックスＬＨ−２０のカラム（５．０×３６．０
伽）を通して、一層の脱塩を行い、凍結乾燥する。収量
：３０５の９、旋光度：〔Ｑ〕費−４０．６ｏ（ｃ＝０
．４９水）、元素分析：Ｃ２１日４１０８Ｎ７‐享母。
として、計算値Ｃ、４７．７４：日、８．０２：Ｎ、１
８．５４：実験値Ｃ、４７．８４：日、８．３１：Ｎ、
１８．６１ 酸分解物のアミノ酸比（州一日ＣＩ、１１
０ｏｏ、２４時間）：Ｌｙｓ、０．９７‘１｝；Ａ増、
１．００１’；Ｐｒｏ、１．１１【１１（ ）内の数字
は理論値、平均回収率８７．０％ Ｒｆ４＝０．２０、
Ｒｆ５＝０．０８表２ 日 Ａｒｇ Ｐｒｏ Ｌｙｓ
ＯＨの合成素実施例 ３Ｈ−〜ｇ−Ｐｒｏ−Ｌ侭−Ｐ
ｒｏ−ＮＨ２の製造Ｈ−Ａｒｇ−Ｐｒｏ−Ｌｙｓ−Ｐｒ
ｏ−ＮＨ２の合成は以下のように行なわれる。

‘１｝ ＢＯＣ−〜ｇ（Ｎ０２）−Ｐｒｏ−ＬＷ（ＢＯ
Ｃ）−Ｐｒｏ−ＮＨ２の合成８０Ｃ−〜ｇ（Ｎ０２）−
Ｐｒｏ一Ｌｙｓ（ＢＯＣ）−Ｐｒｏ一〇日５‐２夕（０
‐００７Ｍ）と日〇ＮＢ２．５２夕（０．０１４Ｍ）を
テトラヒドロフランとジオキサン（１：１）の混液２０
肋【‘ことかし、氷冷下にＮ・Ｎ′−ジシクロヘキシル
カルボジイミド１．４４夕（０．００７Ｍ）を加え、５
時間かきまぜる。

生ずるジシクロキシル尿素を炉別し、炉液は氷袷する。
この溶液に激しくかきまぜながら濃アンモニア水７．０
Ｍを滴下する。１時間後溶液を蟹去し、残澄は酢酸エチ
ルとｎ−ブタノール（３：１）の漉液にとかして、常法
通り０．１Ｎ塩酸と５％重曹水で洗浄する。

溶媒を減圧で留去し、残澄はアセトニトリルにとかし、
不溶物を炉刻する。アセトニトリルを減圧で留去し、残
澄にエーテルを加えて粉末として炉取する。エタノール
ノェテールから再沈殿して精製する。収量：４．３夕（
８２．７％）、融点８０．０〜９０．０００（分解）、
旋光度：〔Ｑ〕客４１．１ｏ（ｃ＝０．６８、ジメチル
ホルムアミド）、元素分析：Ｃ３２日５６０，ｏＮ，。

・２日２０として、計算値Ｃ、４９．４８：日、７．７
９：Ｎ、１８．０３：実験値Ｃ、４９．４７；日、７．
２４：Ｎ、１５．７８■ Ｈ−〜ｇ−Ｐｒｏ−ＬバーＰ
ｒｏ−ＮＨ２の合成ＢＯＣ−〜ｇ（Ｎ０２）−Ｐｒｏ−
Ｌｙｓ（ＢＯＣ）−Ｐｒｏ−ＮＨ２１．４８夕（０．０
０２Ｍ）をパラジウム黒の存在下、酢酸と水（８：２）
の混液５０地中で６時間接触還元を行う。触媒を炉別し
、炉液は減圧で濃縮する。残った油状物は水にとかし、
減圧で水を蟹去する。この操作を３回くり返したあと、
残澄を２０泌のトリフルオｏ酢酸にとかして３０分間振
りまぜる。トリフルオｏ酢酸を減圧で蟹去し、残った油
状物はエーテルでよく洗う。これを水にとかし、アンバ
ーライトＩＲＡ−４１０（酢酸型）４０の‘を加えて、
５時間時々振りまぜながら放置する。樹脂を炉別し、炉
液は凍結乾燥する。凍結乾燥物は少量の０．１Ｍ酢酸に
とかし、セフアデツクスＬＨ一２０のカラムクロマト（
５．５×３５．０肌）を２回くり返して精製する。収量
５８０の９、旋光度：〔Ｑ〕色１−９７．１ｏ（ｃ＝０
．５２、水）、元素、分析：Ｃ２２日，０４Ｎ９・＊Ｑ
ＣＯＯＨ・仏○として、計算値Ｃ、４８．４７；日、７
．９９：Ｎ、８．１７：実験値Ｃ、４８．１５：日、８
．０１：Ｎ、１８．２１ Ｒｆ４＝０．２２、Ｒｆ５＝
０．０６実施例 ４Ｈ−〜ｇ−Ｐｒｏ−Ｌ鱗−ＮＨ２の
製造 Ｈ−〜ｇ−Ｐｒｏ−Ｌ＄−ＮＨ２の合成は以下のように
行なわれる。

‘１｝ ＢＯＣ−Ｌ＄（Ｚ）−ＮＨ２の合成ＢＯＣ−Ｌ
ｙｓ（Ｚ）−ＯＨ・ＤＣＨＡ２２．５夕（０．０４Ｍ）
を常法に従って、ＢＯＣ−Ｌ史（Ｚ）−ＯＨとし、これ
をジオキサン中でＨＯＮＢ７．２夕（０．０４Ｍ）とＮ
・Ｎ′−ジシクロヘキシルカルボジイミド８．２夕（０
．０４Ｍ）を用いて、ＢＯＣ一Ｌｙｓ（Ｚ）−ＯＮＢと
する。

ジシクロヘキシル尿素を炉別し、炉液は氷冷し、激しく
かきまぜる。これに濃アンモニア水１５の【を加え、３
時間かきまぜる。ジオキサンを減圧で留去し、残澄は酢
酸エチルにとかして、酢酸エチル層は常法通り洗浄する
。乾燥後、酢酸エチルを減圧で留去すると結晶が析出す
る。石油ベンジンを加えて炉取し、酢酸エチルから再結
晶する。収量１２．０夕（７９．０％）、融点１４１．
０〜１４３．０００、旋光度：〔Ｑ〕色５−０．７ｏ（
ｃ＝０．５５、ジメチルホルムアミド）、元素分析：Ｃ
，９仏９０５Ｎ３として、計算値Ｃ、６０．１４；日、
７．７０；Ｎ、１１．０７；実験値Ｃ、６０．６０：日
、７．７９；Ｎ、１１．０５【２ー Ｚ一Ａｒｇ（Ｎ０
２）−Ｐｒｏ一Ｌｙｓ（Ｚ）−ＮＨ２の合成ＢＯＣ一Ｌ
ｙｓ（Ｚ）−ＮＨ２３．８０夕（０．０１Ｍ）を１０ｑ
○で、２０の‘のトリフルオロ酢酸にとかし、３０分間
放置する。

５分間減圧でトリフルオロ酢酸を留去したあと、エーテ
ルを加え、析出する結晶を炉取し乾燥する。

この結晶を１０のとのジメチルホルムアミド‘ことかし
、氷冷下に１．４の上のトリェチルアミンを加えて中和
する。この液にＺ−〜ｇ（Ｎ０２）−Ｐｒｏ−ＯＮＢ〔
Ｚ−Ａｒｇ（Ｎ０２）−Ｐｒｏ−ＯＨ４．５０夕（０．
０１Ｍ）、ＨＯＮＢＩ．７９夕（０．０１Ｍ）とＮ・Ｎ
′−ジシクロヘキシルカルボジィミド２．０６夕（０．
０１Ｍ）から調製〕のジメチルホルムアミド溶液を加え
、室温で１幼時間かきまぜる。ジメチルホルムアミドを
真空で蟹去し、残留物は酢酸エチル：ｎ−ブタノール（
１：１）の混液にとかして、常法通りＮ塩酸と５％重曹
水で洗浄する。

溶液を留去し、残留物にエーテルを加えて、粉末として
炉取する。アセトニトリルーェーテルから再沈殿する。
収量６．６夕（９２．７％）、融点１００．０〜１０５
．０００（分解）、旋光度：〔Ｑ〕客−２７．９ｏ（ｃ
＝０．６７、ジメチルホルムアミド）、元素分析：Ｃ斑
日４５０９Ｎ９として、計算値Ｃ、５５．６８：日、６
．３７：日、１７．７１：実験値Ｃ、５５．９５；日、
６．６４：Ｎ、１６．９５‘３｝ Ｈ−〜ｇ−Ｐｍ−Ｌ
バーＮＨ２の合成Ｚ−〜ｇ（Ｎ０２）−Ｐｒｏ−Ｌ侭（
Ｚ）−ＮＱＩ．４２夕（０．００２Ｍ）を酢酸と水（８
：２）の濠液８０の‘にとかし、パラジウム黒存在下に
６時間接触還元を行う。触媒を炉別し、炉液は濃縮する
。残留物は少量の０．１Ｎ酢酸にとかし、セフアデーク
スＬＨ一２０のカラムクロマトグラフイー（５．５×３
５．０肌）を２回くり返して精製する。収量６１８の９
、旋光度：〔Ｑ〕色１一３９．００（ｃ＝０．６９、水
）、元素分析：Ｃ，７日桝０３比・＊日３ＣＯＯ日・日
２０として、計算値Ｃ、４６．３０；日、８．１１；Ｎ
、１８．８０：実験値Ｃ、４６．０８：日、８．１１；
Ｎ、１８．８４Ｒｆ４＝０．２０、Ｒｆ５＝０．０８実
施例 ５Ａｃ一Ａｒｇ−Ｐｒｏ−Ｌｙｓ−Ｐｒｏ−ＮＱ
の製造Ａｃ−Ａｒｇ−Ｐｒｏ−Ｌｙｓ−Ｐｒｏ−ＮＨ２
の合成は以下のように行なわれる。

｛１｝ Ｚ−Ｌｙｓ（８０Ｃ）−Ｐｒｏ−ＮＨ２の合成
Ｚ−Ｐｒｏ−ＮＨ２６．２夕（０．０２９Ｍ）を常法に
従って、メタノール中で接触還元し、Ｈ−Ｐｒｏ−ＮＨ
２とする。

これにＺ−Ｌ＄（ＢＯＣ）−ＯＮＢ〔Ｚ−Ｌの（ＢＯＣ
）一ＯＨ９．５夕（０．０２８Ｍ）、ＨＯＮＢ４．５夕
（０．０２９Ｍ）とＮ・Ｎ′−ジシク。へキシルカルボ
ジィミド５．２夕（０．０２９Ｍ）から調製する〕のジ
オキサン溶液を加え、室温で１幼時間かきまぜる。ジオ
キサンを留去し、残留物は酢酸エチルにとかす。酢酸エ
チル層は常法に従って、０．１Ｎ塩酸、５％重曹水で洗
浄する。乾燥後、酢酸エチルを留去する。残留物にェー
ナルを加え、いまらく放置すると結晶化するので炉取す
る。エーテルから再結晶する。収量８．３夕（７０．０
％）、融点１１０．０〜１１２．０℃、旋光度：〔Ｑ〕
啓一２３．５ｏ（ｃ＝０．６０、ジメチルホルムアミド
）、元素分析：Ｃ２４日３６０６Ｎ４として、計算値Ｃ
、６０．４９；日、７．６１：Ｎ、１１．７６：実験値
Ｃ、６０．６１；日、７．５７；Ｎ、１１．７９【２１
Ｚ−〜ｇ（ＭＢＳ）−Ｐｒｏ−Ｌｙｓ（ＢＯＣ）−Ｐ
ｒｏ−Ｎ舷の合成Ｚ−Ｌ＄（ＢＯＣ）−Ｐｒｏ−ＮＨ２
３．８２夕（０．００８Ｍ）を塩酸の存在下で、常法に
従ってメタノール中で接触還元を行い、Ｈ−Ｌｙｓ（８
０Ｃ）−Ｐｒｏ−ＮＨ２・ＨＣＩとする。

本品をジメチルホルムアミド３０のとにとかし、氷冷下
にＮ−エチルモルフオリン１．０２の【（０．００８Ｍ
）で中和する。この液に、Ｚ−〜ｇ（ＭＢＳ）−Ｐｒｏ
−〇日４‐６１ 夕 （ ０．００８Ｍ ）と日〇ＮＢ
Ｉ．４３ 夕（０．０側Ｍ）を加えてとかし、Ｎ・Ｎ′
ージシクロヘキシルカルボジイミド１．６５夕（０．０
惚け）を加えて氷冷下３時間、ついで室温で１幼時間か
きまぜる。生ずるジシクロヘキシル尿素を炉別し、炉液
は真空で濃縮する。残留物を酢酸エチルとｎーブタノー
ル（１：１）の混液にとかし、常法通り０．１Ｎ塩酸、
５％重曹水で洗浄する。溶媒を留去し、残った油状物は
クロロホルムにとかし、シリカゲルのカラム（７．０×
１１．０肌）に注ぎ込む。クロロホルム９００の‘で洗
い、ついでクロロホルム：メタノール（９．５：０．５
）で目的物を溶出する。主溶出画分を集めて、溶媒を留
出し、残留物をエーテルで粉末とする。収量２．３夕（
３２．０％）、融点９０．０〜９７．０ｏｏ（分解）、
旋光度：〔Ｑ〕各−３２．４０（ｃ＝０．６４ ジメチ
ルホルムアミド）、元素分析：Ｃ４２日６，Ｃ，．ＮＳ
・日２０として、計算値Ｃ、５４．９４；日、６．９２
：Ｎ、１３．７３；Ｓ、３．４９：実験値Ｃ、５４．７
９：日、６．６４；Ｎ、１３．５９；Ｓ、３．３４（３
｝ Ａｃ−Ａｒｇ−Ｐｒｏ−Ｌｙｓ−Ｐｒｏ−Ｎ仏の合
成Ｚ−〜ｇ（ＭＢＳ）−Ｐｒｏ−Ｌｙｓ（ＢＯＣ）−Ｐ
ｒｏ−ＮＨ２９００の９（０．００１Ｍ）をメタノール
中で、パラジウム黒存在下に、常法に従って接触還元を
行う。

触媒を炉別し、炉液は濃縮する。残留物は減圧下でよく
乾燥したあと、ピリジン３０の‘にとかし、氷冷する。
これに無水酢酸０．１４凧【（０．００１８Ｍ）を加え
、１時間かきまぜる。さらに室温で３時間かきまぜたあ
と、ピリジンを留去し、残留物はエーテルを加えて粉末
として炉取する。これをそのままメタンスルフオン酸：
アニソール（９：１）の濠液で、室温、１時間処理する
。エーテルを加え、生ずる油状物を傾斜法で取り、エー
テルでよく洗う。油状物を水にとかし、アンバーライト
ＩＲＡ−４１０（酢酸型）５０私を加えて、イオン交換
を行う。樹脂を炉別し、炉液は凍結乾燥する。残留物を
０．１Ｎ酢酸にとかし、セフアデックスＬＨ−２０のカ
ラム（５．５×３５．０肌）に注ぎ込み、同じ溶媒で展
開する。主溶出画分を集めて凍結乾燥し、さらに再クロ
マトを行って精製する。収量２６０の９、旋光度：〔Ｑ
〕啓一１０１．９０（ｃ＝０．５３、水）、元素分析：
Ｃ離日４３Ｃ５Ｎ９・本日３ＣＯＯ日・１．９日２０と
して、計算値Ｃ、４９．１１：日、７．９５；Ｎ、１８
．４１：実験値Ｃ、４９．１０：日、８．１４；Ｎ、１
８．３６Ｒｆ４＝０．４５Ｒｆ５：０．１２実施例 ６ ｎ−Ｂｕｔ−〜ｇ−Ｐｒｏ−Ｌ鱗−Ｐｒｏ−ＮＨ２の製
造ｎ−Ｂｕｔ−Ａｒｇ−Ｐｒｏ−Ｌｙｓ−Ｐｒｏ−ＮＨ
２の合成は以下のように行なわれる。

鞘ｎ−Ｂｕｔ＝ｎーフチル（ＣＨ３ＣＨ２ＣＨ２ＣＯ−
）Ｚ−〜ｇ（ＭＢＳ）−Ｐｒｏ−Ｌｙｓ（ＢＯＣ）−Ｐ
ｒｏ−ＮＨ２９００の９（０．００１Ｍ）をメタノール
中で、パラジウム黒存在下に、常法に従って接触還元を
行い、日一Ａ鴇（ＭＢＳ）一Ｐｒｏ一Ｌｙｓ（ＢＯＣ）
一Ｐｒｏ一ＮＱとする。

これをピリジン３０の【にとかし、氷冷下に、無水ｎ−
酪酸０．２５泌（０．００１８Ｍ）を加え、１時間かき
まぜ、ついで室温で３時間かきまぜたあと、ピリジンを
留去する。残留物はエーテルを加えて、粉末として炉取
する。これをメタンスルフオン酸：アニソール（９：１
）の混液１０の‘で室温、１時間処理し、エーテルを加
える。生ずる油状物を傾斜法で取り、エーテルでよく洗
う。油状物を水にとかし、アンバーライトＩＲＡ−４１
０（酢酸型）５０肌を加えて、イオン交換を行う。樹脂
を炉別し、炉液は凍結乾燥する。残留物は０．１Ｎ酢酸
の少量にとかし、セフアデックスＬＨ−２０（５．５×
３５．０弧）のカラムクロマトを２回行って精製する。
収量２３０の９、旋光度：〔Ｑ〕色７−１０４．３ｏ（
ｃ＝０．６８、水）、元素分析：Ｃ被Ｈ４７０５Ｎ９・
ＸＨ３ＣＯＯ日・１．斑２０として、計算値Ｃ、５０．
５４；日、８．２０；Ｎ、１７．６８；実験値Ｃ、５０
．４６：日８．１３；日、１７．５８Ｒｆ４＝０．７５
Ｒｆ５＝０．２０参考例神経系モデルとしてＮｅｍｏ
ｂｌａｓｔｏｍａＮ１８の細胞を使用した生物活性につ
いて述べる。

｛ａ’ ｎｅｕｒｉｔｅ伸長作用 ＮｅｕｒｏｂｌａｓｔｏｍａＮ１８１び個を６伽のプラ
スチックシヤレーにとり、５％ｆｅｔａｌＣａｌｆＳｅ
ｒｍｍを含むＥａｇｌｅｍｅｄｉ山ｍで２４時間培養す
る。

その細胞体の２倍以上の長さのｎｅｍｊにを２本以上も
つている細胞数を倒立顕微鏡下（×１００）で計数し、
次の式でｎｅｕｒｊｔｅ伸長の度合を算出し、Ｓ吻ｓｔ
ａｎｃｅ Ｐでのｎｅｍ船伸長度を１００として％で表
現した。ｎｅｕｒｉｔｅを伸長している細胞数ＸＩ。

〇全細胞数｛ｂ｝ ＣｙｃｌｉｃＡＭＰの定量培養液を
除去後、細胞を０．０１％ＥＤＴＡ−ｐｈｏｓｐｈａｔ
ｅｂｕｆ鷺ｒ−Ｓａｌｉｎｅで洗い、５％トリクロロ酢
酸５００仏そを加えて均一化し、４℃で３０分放置後、
遠心分離し、可溶部を水飽和エーテルで３回洗い、０．
州Ｔｒｉｓ−ＨＣ１ ｂｕｆｆｅｒ（ｐＨ７．４）で中
和して０．３Ｍ ＺｎＳ０４および０．３Ｍ舷ＣＩ２溶
液を加えて上情液のＣｙｃｌｉｃ ＡＭＰ濃度をＯｉｌ
ｍａｎ法〔Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳ
Ａ．、６７、３０５（１９７０）〕で測定した。

‘ａ｝と同じくＳ帆ｓｔａｎｃｅ Ｐを１００として表
現した。本発明の代表的なべプタィドの生理活性を次表
に示す。以上の様に本発明のべプタィドはＳｕ戊ｔａｎ
ｃｅＰと比較して同程度または、これに近い生理作用を
持っているが、脳から分離されたＬＨ−ＲＨやＳ肋ｓｔ
ａｎｃｅ Ｐの腸管収縮作用の本体であるＣ−端べプタ
ィドモこは作用は無い。

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １ 次式のペプタイド。 Ｒ＿１−Ａｒｇ−Ｐｒｏ−Ｌｙｓ−Ｒ＿２（Ｒ＿１はＨ
   またはアシル基、Ｒ＿２はＯＨ、ＮＨ＿２、Ｐｒｏまた
   はＰｒｏ−ＮＨ＿２を示す。 ）