JPS6043387A - 抗腫瘍性物質およびその製造法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 本発明は新規な抗腫瘍性物質並ひに本発明者によって分
離固定されたリゾプス・オリーゼ−（Ｒｈ１ｚｏｐｕｓ
　ｏｒｙｚａｅ　）　Ｍ　−２４株を使用する抗腫瘍性
物質の製造法に関する。

糸状菌類、すなわちリゾプス・オリーゼ−を種々の穀類
に作用させて発酵させ醸造物を製造することが行われて
いる。しかし、該菌を、硫酸アンモン、（ｌｌｉｔ酸マ
グネシウム、第一リン酸カリウム、炭酸カリウム、炭酸
カルシウム、ブドウ糖、寒天からなる従来の培地で培養
したものは、＃素泊性が比較的弱く、そのため糖化力及
び有機酸類の生産量が低いという欠府があった。

そこで、本発明者ｔｌ’　、該餉の酵素活性を向上せし
めんと鋭童仙究を行い、粉末化した粘板岩の抽出物を基
本培養基として該菌を培養し、その胞子等を無菌の砂中
で純粋培養を繰り返１〜た結果、強い酵素活性を有する
固定された菌株が得られること、並びに驚くべきことに
、該菌株を用いて穀類を発酵さぜると、優れた抗腫瘍性
物質か産生されることを見出し、本発明を完成した。

従って、本発明Ｌ１新規な抗腫瘍性物質を提供するもの
でを）る。更に捷だ、本発明は、リゾプス・オリーセー
に属する新菌株を用いて新規万抗Ｐａ瘍性物質を製造す
る方法を提供　３− するものである。

本発明で使用される、本発明者によって固定された菌株
は次のような自学的性状を有する。

（１）形態的性質 コロニーは、ポテト・デキストロース寒天培地上、３０
℃でけじめ白色のちに灰色をおひる。栄養菌糸はよく発
達し、生長が速く、巾２３μｍに至に、はふく枝を形成
する。＃３ふく枝は基質に接着すると分枝した仮載を形
成する。胞子のり柄は菌糸から直接にも生えるが、典型
的な柄口會１ふく枝が基ＩＪ！に接着して仮載を生じた
部位より生ずる。通常１本が直立し、時々２本直立する
。無分枝で、はじめ無色のちに褐色になる。中７．８〜
１４μｍ　４− 胞子のうは球形〜血球形で、はじめ無色、成熟すると黒
色になる。胞子のり下部に直径６２〜１５０　ｐｍのア
ボフイシスをもつ。柱軸は亜球形〜卵形で、巾３４〜１
１０μｍである。胞子を放出稜は杯をふせた形につぶれ
る。胞子はオリーブがかった灰色、６．６〜９、３　ｐ
ｍ　Ｘ　４．６〜６．３μｍで、表面にや一角ばった亜
球形〜卵形、ダ円形の縁状模様をもつ。

ｔＷ膜胞子は栄養菌糸、気中菌糸中に多数形成される早
生する、球形、卵形又は円筒形。接合胞子は観察されな
い。

（ＩＤ　生理的性質 ｑ）生育範囲 温度＝５℃で生育せず。１０℃で貧弱。

１５〜４０℃で生育。至適温度３０℃０ｆｌ）Ｉ　：　
ｓ〜７ （２）　ＮａＣＡ耐塩性 １％生育良好。３％貧弱。５％生育せず。

■　ｖ−ｐテストニー ■　糖類の発酵性 Ｄ−グルコース（−Ｆｌ、Ｄ−フラクトース仕）、Ｄ−
ｉラフ）−ス（→、シュクロース（４）、マルトース（
→、スターチ（−Ｆ）、ラフィノースＨ１イヌリン（→
、グリセリン（ト） ■　クエン酸ナトリウムの利用二十 ■　コハク識ナトリウムの利用：＋ ■　窒素源の利用 硫酸アンモニウム（→、グルタミン酸ナトリウム（用、
ペプトン（→、硝酸ナトリウム（ハ）、亜硝酸ナトリウ
ム←） （！３）酸の生成（り゛ルコース）二十以上の１学的性
状について、■・■・１ｔｌｎｓ（１９５０）及びＺｙ
ｃｈａ　＠ｔ　ａｔ　（１９６９）　’に参照して検討
した結果、本菌株ｋまリゾプス・オリーゼ−に輌するが
、酵素活性が公知菌より俊っているので、新菌株と同定
し、リゾプス・オリーゼ・ウェット・エト・プリンセン
ーゲールリングス（Ｒｈｌｚｏｐｕｍ　ｏｒｙｚａｅ　
Ｗｅｎｔ　ａｔＰｒｌｎａｅｎ　−Ｇｅ＠ｒｌ１ｇｍ　
）　Ｍ　−２４（以下［リゾプス・オリーセーＭ−２４
Ｊと称する）と命名し、工業技術院微生物工業技術研究
所に微工研菌寄第７１９５号（ＦｂｎＭｐ−７１９５）
として寄託した。

本発明の抗腫瘍性物質は、リゾプス・オリーゼ−Ｍ−２
４を用いて穀類を発酵させ、そ　７− の発酵液中の水溶性成分を採取することによって製造さ
れる。

本発明方法で発酵原料として使用される穀類としては、
例えば白米、〈す米、側木、麦、ひえ、あわ、きび、は
と麦、とうもろこし、こうりやん等が挙けられる。これ
らの穀類は水に浸漬して充分に吸水させた後、煮炊し、
これにリゾプス・オリーゼ−Ｍ−２４を接種して発酵を
行う。発酵は最初が３０℃で最後が４０℃程度になるよ
うに日毎に昇温し、３〜５日間行うのが好ましい。

斯くして得た発酵液に水を加え、濾過、遠心分離、傾斜
等によって不溶物を除去し、水溶液を採取する。この水
溶液を噴霧乾燥等により乾燥すれば抗腫瘍性物質が得ら
れる。

　８− このようにして得らｆｌ−る抗ｌｌ！Ｊ８瘍性物質は次
の如き物性含有する。

■　元素分析値（約）：Ｃ４ｏ５’６、Ｎ７％、Ｎ１％
。

■　分子蓋：５，０００〜１００，０００゜■　融　点
：明確な融点を示さないが、２２０℃以上で分解がみら
れる１、 Ｃ）　比旋光度：〔α）Ｄ５９．９°（１０％水）。

■　紫外ｔ１ｉＩｍ収スペクトル：２５７．２６３　ｎ
ｍ付近に極大吸収を有する（第１図）。

蟻）赤外線吸収スペクトル（ＫＢｒ　）　：　１６５０
．１４００．１０５０ｃｒｎ−’　に土載ピークを有す
る（第２図）。

■　溶剤に対する溶解性：水に易溶。メタノール、エタ
ノール、クロロホルム、エーテル、アセトン、酢酸エチ
ル及び゛ｎ−ヘキサンに不溶。

■　呈色反応：ピユーレット反応、キサントプロティン
反応、ミロン反応、アンスロン−伽。

酸反応、フェノール硫酸反応及びシスティン倣酸反応は
陽性。

■　塩基性、酸性、中性の区別二両性 （！９　物質の色：白色。

Ｏ糖含量エフエノール硫酸法により測定したグルコース
換算糖含有蓋は約８５〜９０％。

０　蛋白質含量：フオーリンーロウソー法で測定した牛
血清アルブミン換算蛋白質含有量は約１％。

斯くして得られた本発明の抗腫瘍性物質の当該効果を試
験した結果は次のとおりである。

試験例１ 平均体ｆｆ１２Ｏｆの６週令ＢＡＬＢ　／　ｅ　マウス
腹腔内にＭｓｔｈ−Ａｌｌ！ｉ！ａ細＆を接種し、１週
間後に増殖１〜たｌｈｌ瘍細脳細胞水と共に抜き取り、
この細胞１０５個を他の６週令のＢＡＬＢ　／ＣＣママ
ウスそけい部皮下に移植し、実施例２で得た粉末標品を
注射用蒸留水に溶解し、移植稜３日目から１日１回１（
１％！／匹ずつ連続７日間ｌ！１￥瘍内に直接投与した
。腫瘍移植５週間後の固型肺癌の直径または固型腫瘍を
摘出し、その重−ｍｉ試料の代りに生理食塩水を投与し
た対照区の場合と比較した。得られた結果を次の式によ
って表示した。

総マウス匹数 １１− 第１表 試験例２ 本発明の抗腫瘍性物質の投与によ抄完全治癒したマウス
は、これに新ｆｃＫ腫瘍細胞を再接種してももはや生着
せす腫瘍の形成は見られない。

Ｍ＠ｔｈ−ムＰＩＡ瘍に対し本発明の物質を投与して完
全治癒したマウス（接種後６週）に対し、試験例１で述
べたと同様にして得られたＭ＠ｔｈ−Ａｌｌｉ瘍細胞を
最初に腫瘍が形成され治癒したと反対側のそけい部皮下
に接種して１２− その生殖腫瘍形成を調べた。これらの結果を第２表に示
す。

第２表 試験例３ 平均体重２２ｆの６週令のマウス（ＩＣＲ系、雌）腹腔
内にサルコーマ１８０肺瘍細胞を接種し、１週間俵に増
植した腫瘍細胞を腹水と共に抜きと艶、この細胞４　Ｘ
　１０’個を他の６週令マウス（ＩＣＲ系雌）のそけい
皮下に移植し、実施例２で得た粉末標品を注射用蒸留水
に溶解し、移植後２４時間目から１日１回１　ｆ　／　
’ｐずつ連続１５日間経口投与した。腫瘍移植５週間後
の固型腫瘍の直径または固型腫瘍を摘出し、その重量を
試料の代抄に生理食塩水を投与した対照区の場合と比較
した。

中間経過については固型腫瘍の直径を測定することによ
って調べた。その結果は第３表の通りであり、粉末標品
を１回投与量ｔｆ、、’Ｋｙで腫瘍発育は、経口投与で
も抑制された。

第３表 マウス及びラットを用いた急性毒性試験の結果、そのＬ
Ｄ、Ｑ打ｊ％給口投与でｓｔ７’ｉｃｙ以上、わ腔内投
力で２９／に’−９以上であった。

以上の試験結果から明らかな如く、本発明の抗腫瘍性物
ＪＪｔは毒性が低く、各種腫瘍、特に治療困難とされて
いる固型ｔｉｌ！瘍に対して優れた抑制作用含有する。

本発明の抗ＩＩ！１！網性物質をヒト又は動物に投与す
るには、一般的方法を採用することができ、例えに経口
投与、皮下、筋肉内、静脈内もしくは［１１！　動向注
射、直腸内投与、外用剤投与、点滴投与が可能である。

投与量は、腫瘍の種類、年令、症状等によって異なるが
、約０．２〜２，０００Ｍｇ／Ｋｙ／ＩＥ、特に３〜５
ｏ。

　１５− ｑ／に９／日を１日１〜６回に分けて投与するのが好ま
しい。尚本発明の抗腫瘍性物質には免疫増強剤を併用す
ることもできる。

次に実施例を挙けて説明する。

実施例１ （１）大豆６０ｔを水に１２時間浸漬して吸水させ、粉
砕抜水１ｔを加え、１時間煮沸する。

これに塩化カルシウム７ｆ′１を加えて凝固させ、不溶
性蛋白を除去し、Ｆ液に水１ｚを加えてム液とする。

他方、馬鈴薯２００９を０．１９６昇東水に１時間浸漬
した後、水洗し、剥皮し、これに水ｌｔｆ加えて１時間
煮沸する。これを濾過し、ｐ液に水を加えて１ｔとして
Ｂ液とする。

上記ム及びＢ液を６対４の割合で混和して１６− 基本培養液とする。

（１１）粘板岩５０ｆを粉砕（７０〜８０メツシユ以下
）シ、基本培養液５００−に入れ、沸騰水浴上で３０分
間加熱する。斯くして得た粘板岩抽出液を５〜１０％に
なるように古本培養液に加え、培養液とする。

（−）　有機物を殆んど含捷ない砂を蒸留水で充分に洗
浄し、１６０℃の乾熱殺菌器にて３０分間焙焼する。

（１ｖ）　培養液をペトリシャーレに入れ、中国産１色
子より分離した糸状菌（リゾープス属）を接種し、２５
〜３０℃で５〜１０日間培養し、充分に菌糸、胞子が増
殖した自体を選び、（ｉｉｉ）で得た砂５０ｆ中に入れ
、無菌箱中で充分に攪拌して混和する。これをシャーレ
に入れ、−４℃〜１０℃の冷凍庫中に５目間保存した仮
、胞子を分離し、試験管培地（Ｍ＠ｙ＠ｒ氏の変成人工
培地）に１白金耳接種し、２５〜３０℃の恒温器中に５
〜１０日保存した。この冷温、恒温保存を１０回繰粉返
して行い、固定されたＭ−２４株を得た。

実施例２ 精白米Ｉ　Ｋｙをよく洗浄した抜水に１２時間浸漬して
充分に吸水させた後煮炊した。この白米に殺菌水４００
−を加えてよく攪拌して混和し、これに実施例１で固定
し７’（Ｍ−２４株を接種し、３０℃で２４時間、３５
℃で２４時間、更に４０℃で２４時間発酵を行った。こ
の発酵液に水１〜１．５ｔ′（ｆ−加え、４５℃に加温
し、２４時間後に濾過した。Ｆ”ｌの３００℃、出口温
度８０〜１７０℃）を用いて、滞留時間５〜８０秒で乾
燥し、白色粉末の抗腫ａ性物質管得た。

【図面の簡単な説明】

第１図は本発り］抗腫瘍性物質の紫外線吸収スペクトル
、第２図は同物質の赤外線吸収スペクトルである。 以上 出願人　篠　崎　晶　敬

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １、　次の物性を有する抗腫瘍性物質、■　元素分析値
   （約）：Ｃ４０％、Ｈ７％、ＮＩＸ。 ■　分子量：５，０００〜１００，０００゜■　融　点
   ：明確な融点を示さないが、２２０℃以上で分解がみら
   れる。 ■　比旋光度：〔α）Ｄ５９．９°（１０％水）。 ■　紫外線吸収スペクトル：　２５７．２６ａｎｍ付近
   に極大吸収を有する。 ■　赤外線吸収スペクトル（ＫＢｒ　）　：　１６５０
   　。 １４００．１０５０　ｏｎ−１に上狭ビークを有する。 ■　溶剤に対する溶解性：水に易溶。メタノール、エタ
   ノール、クロロホルム、エーテル、アセトン、酢酸エチ
   ル及びｎ−ヘキサンに不溶。 申）呈色反応：ピユーレット反応、キサントプロティン
   反応、ミロン反応、アンスロン−硫酸反応、フェノール
   硫酸反応及びシスティン硫酸反応は陽性。 ■　塩基性、酸性、中性の区別：両性 ［相］　物質の色：白色。 ０　糖含量：フェノール硫酸法により測定したダルコー
   ス換算糖含有量は約８５〜９０％。 ［相］　蛋白質含ｆｔ：フオーリンーロウリー法で測定
   した牛血清アルブミン換算蛋白質含有量は約１％。 ２、　リゾプス・オリーゼ−Ｍ−２４株を用いて穀類を
   発酵させ、その発＃捨中の水溶性成分を採取することを
   ％徴とする抗腫瘍性物質の製造法。