JPS6044913B2 - 微生物用保存培地 - Google Patents
微生物用保存培地Info
- Publication number
- JPS6044913B2 JPS6044913B2 JP13217281A JP13217281A JPS6044913B2 JP S6044913 B2 JPS6044913 B2 JP S6044913B2 JP 13217281 A JP13217281 A JP 13217281A JP 13217281 A JP13217281 A JP 13217281A JP S6044913 B2 JPS6044913 B2 JP S6044913B2
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- medium
- bacteria
- gelatin
- microorganisms
- freeze
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Expired
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- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Description
【発明の詳細な説明】
本発明は単に滅菌水を加えるだけで、例えば微生物保
存の培地とすることができる乾燥培地に関するものであ
る。
存の培地とすることができる乾燥培地に関するものであ
る。
臨床検査においては、検体を一個所に集めて検査した
り、休日があるなどの作業の都合上、患者より分離した
検体の病原菌を最長で１力月程度まで変異させずに簡単
に保存できる培地が望まれている。
り、休日があるなどの作業の都合上、患者より分離した
検体の病原菌を最長で１力月程度まで変異させずに簡単
に保存できる培地が望まれている。
ところが、溶連菌、インフルエンザ菌などの多くの病原
菌は外界での生存性が弱いために保存中に死滅しやすく
、また、例えば継代培養すると病原性が変異するなど一
般に変化しやすいため、保存が難しいという問題点があ
つた。このことは何ら臨床検査に限られるものではなく
、一般に病原菌等の微生物を保存する必要がある場合に
広くいえることである。 従来、病原菌等の細菌の保存
法は、リン菌を中−心として種々研究されてきた。
菌は外界での生存性が弱いために保存中に死滅しやすく
、また、例えば継代培養すると病原性が変異するなど一
般に変化しやすいため、保存が難しいという問題点があ
つた。このことは何ら臨床検査に限られるものではなく
、一般に病原菌等の微生物を保存する必要がある場合に
広くいえることである。 従来、病原菌等の細菌の保存
法は、リン菌を中−心として種々研究されてきた。
リン菌はやはり死滅しやすくかつ変異しやすいところか
ら、保存法としては菌懸濁液を凍結乾燥する方法が広く
採用されてきたが、この方法は手間と時間がかかり、、
＋ι↓ｋＵユｎ＆！朴＾Ａ−゛、ｌ讐呼一う欠点があつ
た。また、凍結乾燥処理によつて細胞が損傷され、細菌
の性質が変つてしまうこともあつた。 リン菌の別の保
存法として、リン菌検体を検査機関へ輸送する場合など
に用いるＳｔｕａｒｔらやＡＴＴ１ｉｅＳの輸送培地が
あるが、このものは精々３日間程度しか保存てきす、し
かも純化菌保存用の培地ではない。
ら、保存法としては菌懸濁液を凍結乾燥する方法が広く
採用されてきたが、この方法は手間と時間がかかり、、
＋ι↓ｋＵユｎ＆！朴＾Ａ−゛、ｌ讐呼一う欠点があつ
た。また、凍結乾燥処理によつて細胞が損傷され、細菌
の性質が変つてしまうこともあつた。 リン菌の別の保
存法として、リン菌検体を検査機関へ輸送する場合など
に用いるＳｔｕａｒｔらやＡＴＴ１ｉｅＳの輸送培地が
あるが、このものは精々３日間程度しか保存てきす、し
かも純化菌保存用の培地ではない。
また、Ｓｔａｍｐのゼラチン・ディスク法をリン菌の
保存に適用した例も知られているが、この方法ではイン
フルエンザ菌の保存は困難であり、また、下記の炭末ゼ
ラチン・ディスク法と共通の欠点がある。
保存に適用した例も知られているが、この方法ではイン
フルエンザ菌の保存は困難であり、また、下記の炭末ゼ
ラチン・ディスク法と共通の欠点がある。
ゼラチン・ディスク培地に炭末を加えた小原らの炭末ゼ
ラチン、ディスク法の場合にはインフルエンザ菌の保存
も可能であるが、菌を植えてからゼラチンを乾燥してい
るので乾燥過程で細菌細胞の損傷が起こるためか、生菌
数が少なくなり、ゼラチンディスクを溶解してから更に
一晩培養しないと菌液として使用できないという欠点が
あつた。 本発明者らは、外界での生存性が弱い病原菌
であつても簡便な手段で長期間安定保存てきる手段を開
発すべく種々検討の結果、小原らの炭末ゼラチン・ディ
スク法の培地用のΞ液を予め混合しで凍結乾燥し、低温
で保存しておけば、この乾燥培地は使用時に、単に滅菌
水で希釈して菌を加えて低温で保存しておくだけで、菌
が病原菌のような外界での生存性が弱いものであつても
長期間安定して保存できることを見出し、これに基いて
本発明を完成するに到つたものである。
ラチン、ディスク法の場合にはインフルエンザ菌の保存
も可能であるが、菌を植えてからゼラチンを乾燥してい
るので乾燥過程で細菌細胞の損傷が起こるためか、生菌
数が少なくなり、ゼラチンディスクを溶解してから更に
一晩培養しないと菌液として使用できないという欠点が
あつた。 本発明者らは、外界での生存性が弱い病原菌
であつても簡便な手段で長期間安定保存てきる手段を開
発すべく種々検討の結果、小原らの炭末ゼラチン・ディ
スク法の培地用のΞ液を予め混合しで凍結乾燥し、低温
で保存しておけば、この乾燥培地は使用時に、単に滅菌
水で希釈して菌を加えて低温で保存しておくだけで、菌
が病原菌のような外界での生存性が弱いものであつても
長期間安定して保存できることを見出し、これに基いて
本発明を完成するに到つたものである。
すなわち本発明は、ゼラチン及び炭素粉末を含有する微
生物保存栄養培地の凍結乾燥物に関するものてある。
生物保存栄養培地の凍結乾燥物に関するものてある。
ゼラチンは細菌培地に通常用いられているものでよく、
含有量は滅菌液を加えて復原した状態で３〜１０％、好
ましくは６〜８％が適当である。
含有量は滅菌液を加えて復原した状態で３〜１０％、好
ましくは６〜８％が適当である。
炭素粉末も細菌培地用のものがよく、例として各種の脱
色炭とか獣炭末などを挙げることができる。含有量は保
存しようとする細菌の量などによつて異なるが通常は復
原状態の培地の０．０５〜５％程度てある。その他の培
地成分としては、細菌用培地に含まれている通常の栄養
成分、すなわち、炭素源、窒素源、ビタミンその他の栄
養物、及び無機塩類が必要である。
色炭とか獣炭末などを挙げることができる。含有量は保
存しようとする細菌の量などによつて異なるが通常は復
原状態の培地の０．０５〜５％程度てある。その他の培
地成分としては、細菌用培地に含まれている通常の栄養
成分、すなわち、炭素源、窒素源、ビタミンその他の栄
養物、及び無機塩類が必要である。
炭素源としては、グルコース、シユクロース、各種デキ
ストリン、デン粉などの糖類、あるいは酢酸、クエン酸
などの有機酸類、窒素源としては、スキムミルク、ミル
クカゼイン、大豆蛋白、ベプトン、肉工キズ、アミノ酸
混合物、コーンスチープリカ一などの含窒素有機物、あ
るいは硫酸アンモニウム、コハク酸アンモニウム、アン
モニアガスなどの窒素化合物、無基塩類としてはリン酸
１カリ、硫酸マグネシウム、鉄、マンガン等の微量の化
合物等種々のものが知られている。これらは細菌の種類
等に応じて適宜組合．せて用いる。本発明の乾燥培地の
調整方法としては、まず各培地成分を所定の添加溶解後
、オートクレーブ加熱あるいは滅菌？過等により滅菌す
る。
ストリン、デン粉などの糖類、あるいは酢酸、クエン酸
などの有機酸類、窒素源としては、スキムミルク、ミル
クカゼイン、大豆蛋白、ベプトン、肉工キズ、アミノ酸
混合物、コーンスチープリカ一などの含窒素有機物、あ
るいは硫酸アンモニウム、コハク酸アンモニウム、アン
モニアガスなどの窒素化合物、無基塩類としてはリン酸
１カリ、硫酸マグネシウム、鉄、マンガン等の微量の化
合物等種々のものが知られている。これらは細菌の種類
等に応じて適宜組合．せて用いる。本発明の乾燥培地の
調整方法としては、まず各培地成分を所定の添加溶解後
、オートクレーブ加熱あるいは滅菌？過等により滅菌す
る。
そして、必要により試験管等の培養容器に一定量づつ分
注．”してから凍結乾燥する。凍結乾燥方法は天然有機
物を凍結乾燥する常法によつて行なえばよく、例えば、
当該培地を液体窒素で急速凍結してから減圧して乾燥す
ればよい。得られた乾燥培地は培地成分にもよるが通常
はく低温て保存するのがよい。
注．”してから凍結乾燥する。凍結乾燥方法は天然有機
物を凍結乾燥する常法によつて行なえばよく、例えば、
当該培地を液体窒素で急速凍結してから減圧して乾燥す
ればよい。得られた乾燥培地は培地成分にもよるが通常
はく低温て保存するのがよい。
温度としては、１０′Ｃ以下が適当であり、特にアスコ
ルビン酸塩のような分解しやすいものを含んでいる培地
は０℃以下で保存するのが望ましい。乾燥培地を使用す
る場合には、滅菌水とかブイヨンなどの復原液を所定量
加えて培地を復原してから使用すればよい。
ルビン酸塩のような分解しやすいものを含んでいる培地
は０℃以下で保存するのが望ましい。乾燥培地を使用す
る場合には、滅菌水とかブイヨンなどの復原液を所定量
加えて培地を復原してから使用すればよい。
本発明の乾燥培地はゼラチン及び炭素粉末を含む培地で
、真菌類（特に酵母）、カビ、細菌等すべての微生物に
適用できるが、特に外界で生存させにくい病原菌に好適
である。
、真菌類（特に酵母）、カビ、細菌等すべての微生物に
適用できるが、特に外界で生存させにくい病原菌に好適
である。
このような病原菌として、ストレフトコッカス●ピオゲ
ネス（ＳｔｒｅｐｔＯｃＯｃｃｕｓｐｙＯ？Ｎｅｓ）、
スタフイロコツカ）ス●アウレウス（ＳｔａｐｈｙｌＯ
ｃＯｃｃｕｓａｕｒｅｕｓ）、ヘモフイルス●インフル
エンザエ（ＨａｅｍＯｐｈｉｌｕｓｉｎｆｌｕｅｌａｅ
）、ナイセリア◆ゴノローエアエ（Ｎｅｉｓｓｓｅｒｉ
ａｇＯｎＯｒｒｈＯｅａｅ）、エシエリヒア●コリ（Ｅ
ｓｃｈｅｒｊｃｈｉａｃＯｌｉ）、シユードモナス◆エ
ルギノ・−サ（ＰｓｅｕｄＯｍＯｒｌａｓａｅｒｕｇｉ
ｎＯｓａ）、リステリア モノサイトゲネス（Ｌｉｓｔ
ｅｒｉａｍＯｎＯｃｙｔＯ？Ｎｅｓ）などを例として挙
げることができる。
ネス（ＳｔｒｅｐｔＯｃＯｃｃｕｓｐｙＯ？Ｎｅｓ）、
スタフイロコツカ）ス●アウレウス（ＳｔａｐｈｙｌＯ
ｃＯｃｃｕｓａｕｒｅｕｓ）、ヘモフイルス●インフル
エンザエ（ＨａｅｍＯｐｈｉｌｕｓｉｎｆｌｕｅｌａｅ
）、ナイセリア◆ゴノローエアエ（Ｎｅｉｓｓｓｅｒｉ
ａｇＯｎＯｒｒｈＯｅａｅ）、エシエリヒア●コリ（Ｅ
ｓｃｈｅｒｊｃｈｉａｃＯｌｉ）、シユードモナス◆エ
ルギノ・−サ（ＰｓｅｕｄＯｍＯｒｌａｓａｅｒｕｇｉ
ｎＯｓａ）、リステリア モノサイトゲネス（Ｌｉｓｔ
ｅｒｉａｍＯｎＯｃｙｔＯ？Ｎｅｓ）などを例として挙
げることができる。
これらの細菌の保存方法としては、復原液を加゛えて復
原した培地にこれらの菌液を加えて、凍結保存し、使用
時に流水等て解凍すれはよい。
原した培地にこれらの菌液を加えて、凍結保存し、使用
時に流水等て解凍すれはよい。
ゼラチン及び炭素粉末を含有する保存培地は、従来はゼ
ラチン液と各種栄養物の含有液とに分けて２〜３液の形
で氷室等であるいは凍結して保存されていた。そして使
用に際して所定の割合に混合し、菌液を加え滅菌したポ
リシヤーレ等にこの菌浮遊液を滴下して五酸化リン等の
はいつたデシケータ内で減圧下で乾燥してゼラチン・デ
イスクを形成してこれを冷凍庫等に保存していた。そし
て使用に際しては、このゼラチン◆デイスクをブイヨン
等に溶して培養してから菌液として使用していた。本発
明の培地を用いれば、培地を複数液に分けて保存する必
要がないのみならず、この乾燥培地をメーカーから供給
を受けたユーザーは使用する際に滅菌水等を加えれば直
ちに、保存培地として使用でき、更に菌液を加えて冷凍
庫に入れるだけで簡単にしかも１力月以上という長期間
にわたつて保存できるのである。
ラチン液と各種栄養物の含有液とに分けて２〜３液の形
で氷室等であるいは凍結して保存されていた。そして使
用に際して所定の割合に混合し、菌液を加え滅菌したポ
リシヤーレ等にこの菌浮遊液を滴下して五酸化リン等の
はいつたデシケータ内で減圧下で乾燥してゼラチン・デ
イスクを形成してこれを冷凍庫等に保存していた。そし
て使用に際しては、このゼラチン◆デイスクをブイヨン
等に溶して培養してから菌液として使用していた。本発
明の培地を用いれば、培地を複数液に分けて保存する必
要がないのみならず、この乾燥培地をメーカーから供給
を受けたユーザーは使用する際に滅菌水等を加えれば直
ちに、保存培地として使用でき、更に菌液を加えて冷凍
庫に入れるだけで簡単にしかも１力月以上という長期間
にわたつて保存できるのである。
本発明の乾燥培地はこのような特性を有するものであり
、特に病院の臨床検査における検体の保存用として好適
てある。以下、実施例を示す。実施例 蒸溜水１００ＴｒＬｔにバクト・デキストロース（デイ
フコ社登録商標）５ｇ１バクト・スキムミルク（デイフ
コ社登録商標）３ｇ１および脱色炭（ノーリツト社製、
特級品）０．５ｇを加えて加温し、オートクレーブで１
１０℃、１扮間加熱して滅菌し、これをＡ液とした。
、特に病院の臨床検査における検体の保存用として好適
てある。以下、実施例を示す。実施例 蒸溜水１００ＴｒＬｔにバクト・デキストロース（デイ
フコ社登録商標）５ｇ１バクト・スキムミルク（デイフ
コ社登録商標）３ｇ１および脱色炭（ノーリツト社製、
特級品）０．５ｇを加えて加温し、オートクレーブで１
１０℃、１扮間加熱して滅菌し、これをＡ液とした。
また、蒸溜水１００ｍｔにＬ−アスコルビン酸ナトリウ
ム塩（和光純薬（株）製）５ｇを溶解し、ミリボアフイ
ルタ一（イ）．２２μの泊過フイルタ一、ミリボア社登
録商標）で枦過して滅菌し、これをＢ液とした。Ｃ液は
、蒸溜水１００ｍＬにバクト・ゼラチン（デイフコ社登
録商標）２０ｇを加温溶解してオートクレーブで１２ｒ
ｃ１１紛間加熱滅菌して調製した。Ａ液、Ｂ液およびＣ
液を無菌状態でよく混合し、この混合液を、予め１６０
℃で９０分間乾燥滅菌しておいた。
ム塩（和光純薬（株）製）５ｇを溶解し、ミリボアフイ
ルタ一（イ）．２２μの泊過フイルタ一、ミリボア社登
録商標）で枦過して滅菌し、これをＢ液とした。Ｃ液は
、蒸溜水１００ｍＬにバクト・ゼラチン（デイフコ社登
録商標）２０ｇを加温溶解してオートクレーブで１２ｒ
ｃ１１紛間加熱滅菌して調製した。Ａ液、Ｂ液およびＣ
液を無菌状態でよく混合し、この混合液を、予め１６０
℃で９０分間乾燥滅菌しておいた。
直径１．０ｃｍ１長さ３．５ｃ！ｎのスクリユ一・キヤ
ツプ付の小試験管に０．５ｍ１づつ無菌的に分注した。
分注した各混合液を液体窒素中で急速に凍結させ、共和
式真空凍結乾燥機ＲＬ−２０ＭＢ型を用いて凍結乾燥し
た。乾燥条件としては、品温が約３０〜３５゜Ｃ１真空
度が約０．５５Ｔ０ｒｒに達したとき棚温を２０℃に設
定し、約比時間運転を行なつた。そして、品温および棚
温がいずれも２０′Ｃになり、なおかつ真空度が一定に
なつたとき、凍結乾燥を終了した。得られた乾燥培地は
使用直前まで−２００Ｃのアイス・ストツカ一に保存し
た。このようにして得られた１１７本の各乾燥培地に滅
菌蒸溜水を０．５ｍ１づつ無菌的に加えて復原し、第１
表の各細菌をＰＨ７．２の食塩加リン酸緩衝液に浮遊さ
せた液を一定量づつこの復原培地に添加した。
ツプ付の小試験管に０．５ｍ１づつ無菌的に分注した。
分注した各混合液を液体窒素中で急速に凍結させ、共和
式真空凍結乾燥機ＲＬ−２０ＭＢ型を用いて凍結乾燥し
た。乾燥条件としては、品温が約３０〜３５゜Ｃ１真空
度が約０．５５Ｔ０ｒｒに達したとき棚温を２０℃に設
定し、約比時間運転を行なつた。そして、品温および棚
温がいずれも２０′Ｃになり、なおかつ真空度が一定に
なつたとき、凍結乾燥を終了した。得られた乾燥培地は
使用直前まで−２００Ｃのアイス・ストツカ一に保存し
た。このようにして得られた１１７本の各乾燥培地に滅
菌蒸溜水を０．５ｍ１づつ無菌的に加えて復原し、第１
表の各細菌をＰＨ７．２の食塩加リン酸緩衝液に浮遊さ
せた液を一定量づつこの復原培地に添加した。
Claims (1)
- １ ゼラチン及び炭素粉末を含有する微生物保存用栄養
培地の凍結乾燥物。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP13217281A JPS6044913B2 (ja) | 1981-08-25 | 1981-08-25 | 微生物用保存培地 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP13217281A JPS6044913B2 (ja) | 1981-08-25 | 1981-08-25 | 微生物用保存培地 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS5836384A JPS5836384A (ja) | 1983-03-03 |
| JPS6044913B2 true JPS6044913B2 (ja) | 1985-10-05 |
Family
ID=15075049
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP13217281A Expired JPS6044913B2 (ja) | 1981-08-25 | 1981-08-25 | 微生物用保存培地 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS6044913B2 (ja) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPH021310U (ja) * | 1988-06-16 | 1990-01-08 |
Families Citing this family (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS59168351A (ja) * | 1983-03-14 | 1984-09-22 | Toyota Central Res & Dev Lab Inc | 潤滑油の性能測定装置 |
| JPS59162444A (ja) * | 1983-03-07 | 1984-09-13 | Toyota Central Res & Dev Lab Inc | 油の性能測定方法およびその装置 |
| JPH02104456U (ja) * | 1989-02-06 | 1990-08-20 | ||
| US11325129B2 (en) * | 2016-04-29 | 2022-05-10 | Oxoid Limited | Swab collection kit |
-
1981
- 1981-08-25 JP JP13217281A patent/JPS6044913B2/ja not_active Expired
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPH021310U (ja) * | 1988-06-16 | 1990-01-08 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPS5836384A (ja) | 1983-03-03 |
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