JPS6045640B2 - ホ−テイマイシンｋｏ↓１およびその製造法 - Google Patents

Description

【発明の詳細な説明】 本発明はホーテイマイシンに０、およびその無毒性酸付
加塩ならびにその製造法に関する。

ホーテイマイシンに０１は広範囲のグラム陽性菌やグラ
ム陰性菌に対して強い抗菌力を有する化合物であり、抗
生物質としての用途が期待される新規化合物である。

ホーテイマイシン類化合物については、ホーテイマイシ
ンＡ（特開昭５０−２９７８９）、ホーテイマイシンＢ
（特開昭４９−１２６８９２）およびホーテイマイシン
Ｃ（特開昭５２−１８８８８）などが、ミクロモノスポ
ラ属に属する微生物によつて生産されることが知られて
いる。

また、ホーテイマイシンＤ（特公昭５８−３４１１９号
公報）、ホーテイマイシンＫＥ（特開昭５３−９０２４
１号公報）、ホーテイマイシンＫＦ及びホーテイマイシ
ンＫＧ（特開昭５４−６６６７時公報）ならびにホーテ
イマイシンＫＯ（特公昭５８−５２６３時公報）が知ら
れている。

本発明者らはミクロモノス、ポラ属に属する微生物がさ
らにホーテイマイシンに０、と命名した抗菌活性を有す
る新規化合物を生産することを見出し本発明を完成する
に到つた。以下本発明を詳細に説明する。本発明のホー
テイマイシンＫＯ、（遊離塩基）はフ次の理化学的性質
を有する。

１）性状：塩基性白色粉末 （２）高分解能マススペクトル ３４９．２４５５（Ｍ＋１）＋ （Ｃｌ５Ｈ３３Ｎ
４Ｏ，）３４８．２３５２（Ｍつ （Ｃｌ５Ｈ
３。

Ｎ４Ｏ５）３３１．２１１５（Ｃｌ５Ｈ２９Ｎ３Ｏ５）
２８６．１７９１（Ｃｌ３Ｈ２４Ｎ３Ｏ４） ２３５
．１２９５（Ｃ９Ｈｌ４Ｎ２Ｏ５） ２０７．１３４２
（Ｃ８Ｈｌ〜２０４） １８９．１２２９（Ｃ８Ｈｌ７
Ｎ２Ｏ３） １４３．１１９０（Ｃ，Ｈｌ，Ｎ２Ｏ）こ
の結果ホーテイマイシンＫＯｌ遊離塩基の分子量は３４
Ｆ！８分子式はＣｌ５Ｈ３。

Ｎ４Ｏ５が与えられる。（３）融点：７７〜７９ＣＣ（
４）紫外部吸収スペクトラムニ水溶液は２２０〜３６０
ｒ１ｍで特徴的な吸収極大を示さず、末端吸収を示すの
みである。

（５）比旋光度〔α〕ｗ＝＋７９を（Ｃ＝０．３，Ｈ２
０）（６）赤外部吸収スベクトルニＫＢｒ錠剤法で測定
した結果を第一図に示す。

吸収極大を示す波数（ｄ一１）は３３７０，３３００，
２９４０，１５９０，１４５５，１３７５，１０８８，
１０２０，９３０，９１０，６６０，５６５である。（
７）元素分析値Ｃ：５１．７７％ Ｈ：９
．２４％ Ｎ：１６．１０％ （８）炭素核々磁気共鳴スベクトルニ測定は、ＪＥＯＬ
，ＪＮＭ−ＦＸｌＯＯを用い重水溶液（ＰＤ＝ー１０．
４）で行つた。

その結果を第２図に示す。

シグナルの帰属は次の通りである： １０２．０（Ｃ−『）、８３．０（Ｃ−６）、８２．６
（Ｃ−３）、７４．０（Ｃ−５″）、７３．６（Ｃ−５
）、７２．６（Ｃ−．２）、６７．４（ジオキサン、内
部標準物質）、５９．９（Ｃ−４）、５７．８（０ＣＨ
３）、５５．９（Ｃ−１）、５１．０（Ｃ−６″）、５
０．２（Ｃ−７）、３８．４（ＮＣＨ３）、２７．３（
Ｃ−４″）、２６．６（Ｃ−３″）、１７．７（６″−
ＣＨ３）（９）呈色反応：ニンヒドリン反応
陽性． 過マンガン酸カリ反応 陽性
エルソン●モルガン反応 陰性
ビューレット反応 陰性ＱＱ上記の理
化学的性質からホーテイマイシンＫＯｌの立体構造式は
次のごとく推定される。

（１１）溶媒に対する溶解性：水にきわめてよく溶け、
メタノールにも溶け、エタノールやアセトンにもやや溶
けるが、クロロホルム、ベンゼン、酢酸エチル、酢酸ブ
チル、エーテル、ブタノール、石油エーテル、ｎ−ヘキ
サンなどの有機溶媒には不溶である。（１２）展開剤を
してクロロホルム、メタノール、２８％アンモニア水（
２：１：１）（容量比、以下溶媒はすべて容量比を示す
）の下層部を用いた上昇式ベーパークロマトグラフィー
〔ＷｈａｔｍａｎＮＯ．ｌ（ｗ＆ＲＢａＩｓｔＯｎＬｔ
ｄ）使用、室温、展開時間４時間〕でのＲｆ値を第１表
に示す。ホーテイマイシンＫＯｌに近いと思われる抗生
物質のＲｆ値も比較のため記載する。 第
１表 抗生物質名 Ｒｆ値 ホーテイマイシンＡ （ＦＯｒｔｉｍｊｃｉｎＡ） ０．４１
ホーテイマイシンＢ（ＦＯｒｔｉｍｉｃｉｎＢ）
０．７２ホーテイマイシンＣ（ＦＯｒｔ
ｉｍｉｃｎＣ） ０．２２ホーテイ
マイシンＤ（ＦＯｒｔｉｍｉｃｉｎＤ）
０．２２ホーテイマイシＡ伍（ＦＯｌｌｍｉｃ
ｉｎＫＥ） ０．６３抗生物質名
Ｒｆ値ホーテイマイシン湘（Ｆ
ＯｒｔｉｍｉｃｉｎＫＦ） ０．４
９ホーテイマイシンＫＧ（ＦＯｒｔｉｍｉｃｉｎＫＧ）
０．６７ホーテイマイシンＫＯ（
ＦＯｒｔｉｍｉｃｉｎＫＯ） ０．
５３ホーテイマイシンＫＯｌ（ＦＯｒｔｉｍｉｃｉｎＫ
Ｏｌ） ０．７３（１３）シリカゲ
ル薄層クロマトグラフィー〔ＭｅｒｃＫ＆ＣＯ社製使吊
（以下同じ）室温、展開時間３時間〕のＲｆ値を第２表
に示す。

他のホーテイマイシン類を比較のために併記する。
第２表 Ｒｆ値 抗生物質名 展開剤１※ 展開剤■※※ホーテイ
マイシンＡＯ．３６Ｏ．Ｏ９ホーテイマイシンＢＯ．７
５Ｏ．ｌ３ ホーテイマイシンＣＯ．２３Ｏ．２Ｏ ホーテイマイシンＤＯ．２ｌＯ．Ｏ６ ホーテイマイシ＞′ＫＥＯ．５ＯＯ．ｌ２ホーテイマイ
シンＫＦ′ ０．３５０．１２ホーテイマイシンＫＧＯ
．５５Ｏ．ｌ２ホーテイマイシンＫＯＯ．５５Ｏ．２４ ホーテイマイシンＫＯｌＯ．７４Ｏ．ｌ５※ 展開剤１
：クロロホルム、メタノール、２８％アンモニア水（２
：１：１）の下層※※ 展開剤Ｈ：１０％醋酸アンモニ
ウム水溶液、メタノール、２８％アンモニア水（５０：
５０：１）つぎに、ホーテイマイシンＫＯｌの各種微生
物に対する抗菌スペクトルを示すと第３表の通りである
。

第３表中、ＭＩＣはＰＨ８．韓天培地を用いる寒天稀釈
法により測定した。 第３表 被検微生物 ＭＩＣ（Ｐｇ／ＭＬ）バチルス●
ズブチリスＮＯ．ｌＯ７Ｏ７（ＫＹ４２７３）０．４０
スタフイロコツカス●アウレウスＡＴＣＣ６５３８ＰＯ
．Ｏ９ クレブシエラ●ニユーモヤ ＡＴＣＣｌＯＯ３ｌＯ．４Ｏ 被検微生物 ■Ｃ（μｇ／ｍｌ）エツシエリ
ヒア●コリＡＴＣＣ２６Ｏ．４Ｏエツシエリヒア●コリ
ＫＹ８３Ｏ２Ｏ．４Ｏ（クロラムフエニコール、ストレ
プトマイシカナイシン，パロモマイシン，テトラサイク
リン，スペクチノマイシン耐性）エツシエリヒア・コリ
ＫＹ８３２７Ｏ．３５（カナマイシンジエンタマイシン
，トブラマイシン耐性） エツシエリヒア・コリＫＹ８３４８Ｏ．ｌ８（ストレプ
トマイシン，ジエンタイシン耐性） プロテウス・ブルガリス ＡＴＣＣ６８９７Ｏ．３５ シゲラ・ゾネイＡＴＣＣ９２９ＯＯ．４Ｏサルモネラ●
タイホーサ ＡＴＣＣ９９９２Ｏ．２Ｏ プシユードモナス●エルギノーザ ＢＭＨ＃１５．３ このように、ホーテイマイシンＫＯｌは広範囲のグラム
陽性菌や陰性菌に対して強力な抗菌力を有している。

その広範囲で、強力な抗菌性のなかでも、特に特徴的な
点は、カナマイシン、ジエンタマイシン、トブラマイシ
ンなどに耐性な或る種の水腸菌に有効な点である。また
本ホーテイマイシンＫＯｌは、以上述べた種々の菌が起
炎菌となつたいろいろの感染症（人間や動物における）
に対してきわめて優れた治療効果を示すことも判明して
いる。ホーテイマイシンＫＯｌのこのようにきわめて優
れた抗菌性は、本物質が特に抗菌性抗生物質として医薬
用などに適用できることを示すもので１ある。つぎに本
物質を既知の抗生物質と比較してみる。

ミクロモノスポラ属の生産する水溶性塩基性て且つ広範
囲の抗菌スペクトルを有する抗菌物質としては、ジエン
タマイシンＣＯｍｐｌｅｘ（Ｍ●−Ｊ●Ｗｅｉｎｓｔｅ
ｉｎら：ＡｒｌｔｉｍｉｃｒＯｂｉａｌＡｇｅｎｔｓＡ
ｎｄＣｈｅｍＯｔｈｅｒａｐｙ，ｌ９６３，ｌ及びＤ．
Ｊ．ＣＯＯｐｅｒら、Ｊ．Ｉｎｆｅｃｔ．Ｄｉｓ．叩，
３４２，１９６９，Ｊ．Ａ．ＷａｉｔＺら、ＡＪｌｔｉ
ｍｉｃｒＯｂ．Ａｇ．ＣｈｅｍＯｔｈ．ヱ１４６４，１
９７２）、アンチバイオチツクＮＯ．４６Ｏ（特公昭４
６−１６１５３号公報）、シソマイシン（Ｍ．Ｊ．Ｗｅ
ｉｎｓｔｅｉｎら、Ｊ．ＡｎｔｉｂｌＯｔｉｃｓ？５５
１，５５５，５５９，１９７０）、ＸＫ−６２−２（特
開昭４７−１３３９１）、ホーテイマイシンＢ１ホーテ
イマイシンＡ１ホーテイマイシンＣ１ホーテイマイシン
Ｄ１ホーテイマイシンＫＥｌホーテイ５マイシＡσ、ホ
ーテイマイシンＫＧおよびホーテイマイシンＫＯなどの
抗生物質がある。これらの内、ホー、テイマイシンＡ，
Ｂ，Ｃ，Ｄ，ＫＥ，ＫＦ′，ＫＧおよびＫＯとＫＯｌと
直接比較すると、第１表および第２表に示した様に、Ｋ
Ｏｌは、ベーパ０−クロマトグラフィー〔展開剤、クロ
ロホルム、メタノール、２８％アンモニア水（２：１：
１）の下層〕およびシリカゲル薄層クロマトグラフィー
〔展開剤１１クロロホルム、メタノール、２８％アンモ
ニア水（２：１：１）の下層〕でホーテイマイシンＢと
近いＲｆ値を示した。シリカゲル薄層クロマトグラフィ
ー〔展開溶剤■、１０％酢酸アンモニウム水溶液、メタ
ノール、２８％アンモニア水（５０：５０：１）〕でホ
ーテイマイシンＢ（Ｒｆ＝０．１３）とは近いＲｆ値を
示す。しかし、シリカゲル薄層クロマトグラフィー〔展
開溶剤、クロロホルム、メタノール、２８％アンモニア
水（７：２：２）の下層〕ではホーテイマイシンＫＯｌ
はＲｆＯ．４ｌを示し、ホーテイマイシンＢ（Ｒｆ＝０
．４９）と区別することができる。またホーテイマイシ
ンＫＯｌは、ホーテイマイシンＢに比べはるかに強い抗
菌力を示す点で明らかに区別される。ホーテイマイシン
ＫＯｌはホーテイマイシンＢと全く同じ分子式Ｃｌ５Ｈ
３。Ｎ４Ｏ５を示し、同じ平面構造式によつて表わされ
るが、ホータミン部分の立体構造が異つた物質と考えら
れる。なお、ジエンタマイシン類、シソマイシン、ＸＫ
−６２−２とはその物理化学的性質を異にしている。さ
らにミクロモノスポラ属以外の放線菌が生産する水溶性
塩基性で且つ広範囲の抗菌スペクトラムを有する抗生物
質としてストレプトマイシン、リボスタマイシン、リビ
ドマイシン、スペクチノマイシン、カスガマイシン、ネ
オマイシン、カナマイシン、ネブラマイシン、パロモマ
イシンなどがあげられるが、ホーテイマイシンＫＯｌは
このいずれの抗生物質とも、理化学的性状の点および第
１表に示したベーパークロマトグラフィーのＲｆ値にお
いて異るものであることは明白である。以上のことから
、ホーテイマイシンＫＯｌは、新規な抗生物質と考えら
れる。

次に本発明の化合物ホーテイマイシンＫＯｌの製造法の
一例を示す。

ミクロモノスポラ属に属し、ホーテイマイシンＫＯｌ生
産能を有する微生物を培地に培養し、培養物中にホーテ
イマイシンＫＯｌを蓄積せしめ、該培．養物からホーテ
イマイシンＫＯｌを採取する。

使用微生物としては、ミクロモノスポラ属に属し、ホー
テイマイシンＫＯｌを培地中に生成蓄積することができ
る菌株であば、いかなる菌株をも用いることができる。
具体的に好適な例としてはミクロモノスポラ●オリボア
ステロスボラＭＫ−７０（微工研菌寄第１５（１）号）
（ＡＴＣＣ２ｌ８ｌ９）、ミクロモノスボラ●オリボア
ステロスポラＭＫ８Ｏ（微工研菌寄第２１９四）（ＡＴ
ＣＣ３ｌＯｌＯ）、ミクロモノスポラ●オリボアステロ
スポラＭｍ７４４（微工研菌寄第２１９３号）（ＡＴＣ
Ｃ３ｌＯＯ９）などが挙げられる。これらの菌株の菌学
的性質は特開昭５０−２９７羽号公報に明記されている
。培地は通常の放線菌の培養に用いられる培地が用いら
れる。

炭素源としてはブドウ糖、殿粉、マンノース、フラクト
ース、シユークロース、糖密などが単独または組み合わ
せて用いられる。

さらに、菌の資“化性によつては炭化水素、アルコール
類、有機酸なども用いうる。無機および有機窒素源とし
ては塩化アンモニウム、硫酸アンモニウム、尿素、硝酸
アンモニウム、硝酸ソーダなどが、また天然窒素源とし
てはペプトン、肉工キズ、酵母工キズ、乾繰酵母、コー
ン・スチーブ・りカー、大豆粉、カザミノ酸、ゾリユブ
ル・ベジダブル・プロテインなどが単独または組み合わ
せて用いられる。そのほか必要に応じて食塩、塩化カリ
、炭酸カルシウム、燐酸塩などの無機塩類を加えるほか
、用いる菌株の生育やホーテイマイシンＫＯｌの生産を
促進する有機物や無機物を適当に添加することができる
。培養法としては、液体培養法、とくに深部攪拌培養法
がもつとも適している。

培養温度は、２５〜４０℃、ＰＨは中性付近で培養を行
なうことが望ましい。液体培養で通常２日いし１５日間
培養を行なうと、ホーテイマイシンＫＯｌが培養液中に
生成蓄積される。培養液中の目的物質の生成量が最大に
達したときに培養を停止し、培養戸液中より目的物を精
製単離する。ホーテイマイシンＫＯｌの精製・単離は次
のごとく行なわれる。

培養炉液からホーテイマイシンＫＯｌの精製単離には、
微生物代謝生産物を、その培養液から単離するためにふ
つうに用いられる分離、精製の方法が利用される。

ホーテイマイシンＫＯｌは、水によく溶けるが、一般の
有機溶媒にはよく溶けない塩基性物質なので、いわゆる
水溶性塩基性抗生物質の精製によく用いられる方法によ
り行なわれる。

すなわち、カチオン交換樹脂による吸脱着法、セルロー
スのカラム●クロマトグラフィー、セフアデツクスＬＨ
一２０カラムによる吸脱着法、シリカゲルカラムクロマ
トグラフィーなどの方法を適当に組み合わせて用いるこ
とができる。次にホーテイマイシンＫＯｌの具体的精製
法の１例を示す。

即ち、培養ｐ液ＰＨ７．５に調整した後、カチオン交換
樹脂アンパーライト１ＲＣ−５０（アンモニア型）（Ｒ
Ｏｈｍ＆ＨａａｓＣＯ．製）に吸着させ、水洗後、０．
５Ｎ−アンモニア水で溶出する。活性画分を集め減圧濃
縮後、濃縮液をカチオン交換樹脂アンパーライトＣＧ−
５０（アンモニア型）（ＲＯｈｍ＆ＨａａｓＣＯ．製）
吸着させ、水洗後、０．１ＭＮＦ［４ＣＩを含む０．１
Ｎアンモニア水で溶出する。このときまず、ホーテイマ
イシンＫＯおよびホーテイマイシンＣが溶出され、つづ
いてホーテイマイシンＫＯｌがホーテイマイシンＢとと
もに溶出してくる。

その後、ホーテイマイシンＡ，Ｄ，ＫＥ，ＫＦ，ＫＧが
溶出してくる。ホーテイマイシンＫＯｌを含む画分を集
めて硫酸で中和した後、アンパーライトＩＲＣ−５０（
アンモニア型）に吸着させ、水洗後、０．５Ｎアンモニ
ア水で溶出し活性画分を集め濃縮乾固してホーテイマイ
シンＫＯｌを含む粗粉末を得る。この粗粉末をシリカゲ
ルカラムにのせクロロホルム、メタノール、２８％アン
モニア水（５：１：１）の下層で展開溶出する。この場
合、まず混在しているホーテイマイシンＢが溶出し、次
いでホーテイマイシンＫＯｌが溶出してくる。ホーテイ
マイシンＫＯｌを含む画分を集めて、減圧濃縮し、凍結
乾繰することにより白色のホーテイマィシンＫＯｌの遊
離塩基を得ることができる。このようにシリカゲル・カ
ラムクロマトグラフィーでかなりきれいなホーテイマイ
シンＫＯ，を得ることができるが若干の不純物が混在す
るので、さらにバイオレツクスー７０（アンモニア型）
（ＢｉＯＲａｄＬａｌｘ）ＲｔＯｒｉｅｓ製）に吸着さ
せ、水洗後、０．０４Ｍ醋酸アンモニウムを含む０．０
４Ｍアンモニア水で溶出する。ホーテイマイシンＫＯ，
を含む画分を集め、中和後アンパーライトＣＧ−５０（
アンモニア型）に吸着させ、水洗後、０．５Ｎアンモニ
ア水で溶出し、活性画分を集め濃縮し、凍結乾繰するこ
とによりホーテイマイシンＫＯｌの純粋な標品（遊離塩
基）を得ることができる。また混在するニンヒドリン陽
性物質の除去には、カルボキシメチルセルロースによる
カラムクロマトグラフィーも有効である。すなわち、こ
の場合は、粗粉末の溶液をカルボキシメチルセルロース
（アンモニア型）を充填したカラムに通し活性物質を吸
着させる。その後水でよく洗滌し、大部分の色素および
無機塩を溶出させ、続いて０．２１１！４−クエン酸・
リン酸緩衝液ＰＨ３．Ｏ）で溶出すれば、活性物質が溶
ｂ 出されてくる。ホーテイマイシンＫＯｌを含む画分
を集め、凍結乾燥することにより、精製ホーテイマイシ
ンＫＯｌを得ることができる。 上記の精製工程中のホ
ーテイマイシンＫＯｌの活性画分の動向はシリカゲル薄
層クロマトグラフィ１ −によりチェックする。

展開溶媒としては、クロロホルム、メタノール、２８％
アンモニア水（３．５：１：１）の下層および１０％醋
酸アンモニウム水溶液、メタノール、２８％アンモニア
水（５０：５０：１）を用い、検出はニンヒドリン発色
法とパルス・ズブチリスＮＯ．ｌＯＯ７を被検菌とした
バイオオートグラフィー法でつた。 ホーテイマイシン
ＫＯｌの無毒性酸付加塩は、ホーテイマイシンＫＯｌｌ
分子と薬理的に許容される無毒性の酸１〜４当量の反応
によつて生成される、モノ、ジ、トリ、テトラ塩を意味
する。酸としては塩酸、臭化水素酸、ヨウ化水素酸、硫
酸、 リン酸、炭酸、硝酸などの無機酸、酢酸、フマル
酸、リンゴ酸、クエン酸、マンデル酸、アスコルビン酸
、酒石酸、コハク酸などの有機酸があげられる。 以下
、本発明化合物の製造を実施例で示すが、これらは単な
る一例示であつて、何等本発明を限定するものではない
。

実施例１ ）Ａ．ＭＫ一冗株の培養 種菌としてミクロモノスポラ・オリボアステロスポラ
（ＭｉＣｒＯｍＯｒＫ）ＳＰＯｒａＯＩｉｖＯａｓｔｅ
ｒＯｓｐＯｒａ）Ｋ．Ｋ−７０（ＡＴＣＣ２ｌ８ｌ９）
（微工研菌寄第１５６０号）を用い、第一種培地として
グルコース２ｇ／ｄ１、ぺ５プトン０．５ｇ／ＤＩｌ酵
母工キズ０．５ｇ／ｄ１、炭酸カルシウム０．１ｙ／ｄ
１（殺菌前ＰＨ７．５）の培地を用いた。

種菌一白金耳を、５０ｍＬ太型試験管中１０Ｔ！Ｌｌの
上記培地に植菌し、３０℃５日間培養する。この種培養
液１０ｍ１を２５０ｍ１エルレンマイヤーフラスコに入
Ｏつた３０ｍｔの第二種培地に植菌する。第二種培地の
組成は第一種培地の組成と同じである。第二種培養は３
０℃で２日間振盪培養する。この種培養液３０ｍ１を２
１バッフル付きエルレンマイヤーフラスコに入つた３０
０ｍ１の第三種培地に植菌する。第三種培地の組成は第
一種培地の組成と同じである。第三種培養は３０℃で２
日間振盪培養する。この第三種培地１．５１（フラスコ
５本分）を、３０１容量のステンレスステイール製ジヤ
ーフアーメンター中の第四種培地１５１に植菌する。第
四種培地の組成は第一種培地の組成と同じである。

このジヤーフアーメンター培養は、３ｒＣで２日間、通
気攪拌方式（回転数３５０ｒ′Ｐｍ、通気量１５１／Ｍ
ｉｎ）により行なう。この第四種培養液１５１を３００
】容量のフアーメンター中の発酵培地１５０１に植菌す
る。発酵培地組成は、可溶性殿粉４ｇ／ｄ１、ソイビー
ンミール２ｇ／Ｄｌｌコーンステイープリカー１ｙ／Ｄ
ｌ．．Ｋ２ＨＰＯ４Ｏ．Ｏ５ｇ／ｄ１、ＭｇＳＯ４７Ｈ
２ＯＯ．Ｏ５ｇ／ｄ１、ＫＣｌＯ．Ｏ３ｇ／Ｄｌ，．Ｃ
ａＣＯ３Ｏ．ｌｇ／ｄ１（殺菌前ＰＨ７．５）の培地を
用いた。このフアーメンター培養は３７℃で４日間通気
攪拌方式（回転数１５０ｒ′Ｐｍ，通気量８０１／Ｍｉ
ｎ）により行なつた。ＢホーテイマイシンＫＯｌの単離
●精製培養終了後、培養液のＰＨを濃硫酸を添加してＰ
Ｈ２５に調整し、３紛攪拌する。

そののち、淵過助剤として、ラジオライト＃６００（昭
和化学工業製）を約７ｋｇ加え、菌体を酒別する。戸液
に？−水酸化ナトリウムを加えてＰＨを７．５に調整す
る。この沖液をカチオン交換樹脂アンパーライトＩＲＣ
−５０（アンモニア型）約２０１を充填したカラムに通
し、流出液は捨てる。活性物質は樹脂上に吸着されるの
で、水で樹脂を洗滌したあと、０．５Ｎ−アンモニア水
で吸着された活性物質を溶出する。バチルス●ズプチリ
スＮＱ．ｌＯ７Ｏ７の寒天平板を用いてベーパーディス
ク法により、溶出液の．活性を測定する。活性のある区
分を合し、減圧下て約１１ま濃縮する。この濃縮液を濃
塩酸でＰＨ７にした後、アンパーライトＣＧ−５０（ア
ンモニア型）３１のカラムに通す。

活性物質は吸着されるので、水洗後、２０．１ＭＮ１１
４Ｃ１を含む０．１ＮＮＨ４０Ｈで溶出する。溶出液を
５００ｍ１ずつに分画し、各画分中の成分をバチルス・
ズブチリスＮＯ．７Ｏ７Ｏ７（ＫＹ４２７３）に対する
抗菌活性、シリカゲル薄層クロマトグラフィー〔展開剤
クロロホルム−メタノールーアンモニア水イ（２：１：
１）の下層〕およびニンヒドリン呈色で調べた。ホーテ
イマイシンＫＯｌは約３０１溶出したところに溶出して
くる。ホーテイマイシンＫＯｌを含む画分を集め、減圧
濃縮によりアンモニアを除去した後、中和しアンパーラ
イトＩＲＣ−５０（アンモニア型）５００ｎｔを含むカ
ラムに通塔し、水洗後０．５Ｎアンモニア水で溶出し減
圧濃縮後、凍結乾燥して、約Ｋｇの白色粉末を得た。こ
の粉末中に約４００ｊ！９のホーテイマイシンＫＯェが
含まれていた。Ｃ純ホーテイマイシンＫＯｌの調製 上記工程Ｂで得られた粗ホーテイマイシンＫＯｌ粗粉末
を１．５１のシリカゲルカラム（シリカゲル、フ和光純
薬製ワコーゲルＣ−２００、カラム径約５Ｃ７りにのせ
、クロロホルム、メタノール、アンモニア水（５：１：
１）の下層で展開溶出する。

溶出液は、２０ｍ１ずつ分画し、各画分中の成分をシリ
カゲル薄層クロマトグラフィーで調べると、まずホーテ
イマイシンＢが溶出し、次いでホーテイマイシンＫＯｌ
が溶出してくる。ホーテイマイシンＫＯｌの画分を集め
、減圧下て濃縮し、凍結乾燥しホーテイマイシンＫＯｌ
３６Ｏｍ９を得た。活性は９３０単位であつた。（活性
は純品１ｍｇを１０００単位とす・る）得られたホーテ
イマイシンＫＯｌ３６Ｏｍｇを水にとかしＰＨを７に調
整し、バイオレツクス７０（アンモニア型）５０ｍ１に
吸着さ水洗後、０．０４Ｍ酢酸アンモニウムを含む０．
０４Ｎアンモニア水で溶出する。

溶出液を１０ｍ１ずつ分画し、各画分についてシリカゲ
ル薄層クロマトグラフィーを行ないホーティマイシンＫ
Ｏｌのみを含む画分を集め、減圧濃縮によりアンモニア
を除去した後、ＰＨを７に調整し、アンパーライトＩＲ
Ｃ−５０（アンモニア型）１００ｍ１に吸着させ、水洗
後、０．５Ｎアンモニア水で溶出する。活性画分を集め
、減圧濃縮し、最終的に凍結乾燥を行なうと、純粋なホ
ーテイマイシンＫＯｌ遊離塩基３３０ｍ９が白色粉末と
して得られた。実施例２実施例１のＡ項と同様に培養し
て得られた培養液を実施例１のＢ項と同様に処理する。

得られた粗粉末５００ｍｇを５ｍ１の水に溶解しカルボ
キシメチルセルロース（アンモニア型）約２００ｍ１を
充填したカラムに通す。つづいて約１０００ｍ１の水を
流すと、活性成分はカルボキシメチルセルロースに吸着
され、カルボキシメチルセルロースに吸着されない大部
分の色素および無機塩は流出される。その後、０．？）
Ａ−クエン酸・リン酸緩衝沼弔Ｈ３．Ｏ）でカラムを溶
出する（流速は約５０ｍＬ／時間）。溶出されてくる液
を１０ｍ１すつの分画として採取し、各画分をベーパー
ディスク法により活性を検定する。活性のある画分につ
いてシリカゲル薄層クロマトグラフィーを行ない、ホー
テイマイシンＫＯｌに該当する成分の含まれる画分を集
める。この画分を、アンパーライトＩＲＣ−５０（アン
モニア型）５０ｍＬに通塔し、活性成分を吸着せしめる
。水洗の後、０．５Ｎアンモニア水で溶出を行ない、活
性のある画分を凍結乾燥することにより、ホーテイマイ
シンＫＯｌ遊離塩基約１００ｍｇを得ることができる。
活性は９８弾位／Ｍｇであつた。実施例３ 種菌としてミクロモノスポラ●オリボアステロスポラＭ
ｍ７４４、ＫＹｌｌＯ６７株（微工研菌寄第２１９３号
、ＡＴＣＣ３ｌＯＯ鰐）を用い、第一種培地としてグル
コース２ｇ／Ｄｌｌペプトン０．５ｇ／Ｄｔｌ酵母工キ
ズ０．３ｇ／Ｄｌｌ炭酸カルシューム０．１ｇ／ＤＬ（
殺菌前ＰＨ７．２）の培地を用いた。

実施例１に示したと同一の方法で種培養（第一種培養〜
第四種培養）を行なつた。第二種培地〜第四種培地の組
成はすべて第一種培地の組成と同一である。かくして得
られる第四種培養液１５１を３００１容のステンレスス
テイール製フアーメンター中の主発酵培地１５０１に植
菌する。主発酵培地組成は可溶性殿粉２ｇ／Ｄｌｌソイ
ビーンミール０．５ｇ／Ｄｌｌグルコース２ｇ／Ｄｌｌ
コーンステイープリカー１ｇ／ＤＬｌ酵母工キズ１ｇ／
ＤｌＫ２ＨＰＯ４Ｏ．Ｏ５ｇ／ＤｌＭｇＳＯ，７Ｈ２Ｏ
Ｏ．Ｏ５ｇ／ＤｌＫＣｌＯ．Ｏ３ｇ／ＤｌＣａＣＯ３Ｏ
．ｌｇ／ＤＬ（殺菌前ＰＨ７．Ｏ）の培地を用いる。

この主発酵培養は３０′Ｃで４日間通気攪拌方式（回転
数１５０ｒ″Ｐｍ通気量８０１／Ｍｉｎ）により行なつ
た。かくして得られた主発酵液を実施例１、Ｂ項に示し
た方法に従つてホーテイマイシンＫＯｌ粗粉末を単離し
たところ、活性約２２師位／Ｍ９の粗製ホーテイマイシ
ンＫＯｌ約１ｇが得られた。この粗粉末を実施例１、Ｃ
項に示したと同一方法で精製を行なつたところ、活性約
９８弾位／ＭｇのホーテイマイシンＫＯｌ遊離塩基約１
６０ｍ９が得られた。実施例４種菌としてミクロモノス
ポラ・オリボアステロスポラＭＫ８ＯｌＫＹｌｌＯ５５
株（微工研菌寄第２１９２号、ＡＴＣＣ３ｌＯ■号）を
用い、第一種培地としてグルコース１ｇ／Ｄｌｌ可溶性
殿粉１ｇ／ＤＬ、酵母工キズ０．５ｇ／Ｄｌｌペプトン
０．５ｇ／Ｄｌｌ炭酸カルシューム０．１ｇ／ｄｌ（殺
菌前ＰＨ７．Ｏ）の培地を用いた。

実施例１に示したと同一の方法で種培養（第一種培養〜
第四種培養）を行なつた。第二種培地〜第四種培地の組
成はすべて本実施例第一種培地の組成と同一のものを使
用した。かくして得られた第四種培養液を実施例３に示
したと同一の方法で主発酵培養を行なつた。主発酵培地
組成は、実施例３に示した主発酵培地と同一のものを使
用した。かくして得られた主発酵培養液を実施例１、Ｂ
項に示したと同一の方法によりホーテイマイシンＫＯｌ
粗粉末を単離したところ、活性約２８弾位／Ｍ９の粗製
ホーテイマイシンＫＯｌ約９００ｍｇが得られた。この
粗製ホーテイマイシンＫＯｌ粉末を実施例１、Ｃ項に示
したと同一の方法で精製を行なつたところ、ホーテイマ
イシンＫＯｌ遊離塩基約２００ｍ９の精製標品が得られ
た。この精製ホーテイマイシンＫＯｌの活性は約９８弾
位／７ｎ９であつた。ｊ実施例５ホーテイマイシンＫＯ
ｌ遊離塩基１ｇを少量の水に溶解し、？一硫酸を用いて
ＰＨを４．５に調整した後、約１嗟量のアセトンを添加
することにより、ホーテイマイシンＫＯｌ硫酸塩が沈殿
してくる。

この沈殿を遠心分離機で集め、乾燥して約１．５ｇのホ
ーテイマイシンＫＯｌ硫酸塩の白色粉末を得た。活性は
６０弾位／Ｍ９であつた。

【図面の簡単な説明】

第１図は、ホーテイマイシンＫＯｌの赤外部吸収５スペ
クトルと、第２図は、ホーテイマイシンＫＯｌの炭素核
核磁気共鳴スペクトルを示す。

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １ 式 ▲数式、化学式、表等があります▼ で示されるホーテイマイシンＫＯ＿１およびその無毒性
   酸付加塩。 ２ ミクロモノスポラ属に属し、ホーテイマイシンＫＯ
   ＿１生産能を有する微生物を培地に培養し、培養物中に
   ホーテイマイシンＫＯ＿１を蓄積せしめ、該培養物から
   ホーテイマイシンＫＯ＿１を採取することを特徴とする
   ホーテイマイシンＫＯ＿１の製造法。