JPS6045852B2

JPS6045852B2 - 胎盤性性腺刺戟ホルモンの製造法

Info

Publication number: JPS6045852B2
Application number: JP56197380A
Authority: JP
Inventors: 一平谷; 義和幸; 豊彦西村
Original assignee: JCR Pharmaceuticals Co Ltd
Current assignee: JCR Pharmaceuticals Co Ltd
Priority date: 1981-12-07
Filing date: 1981-12-07
Publication date: 1985-10-12
Also published as: JPS5899421A

Description

【発明の詳細な説明】本発明は胎盤性性腺刺戟ホルモン（ＨＣＧ）の製造法に
関する。

ＨＣＧは分子量約３００００〜４００００の糖蛋白性ホ
ルモンで、胎盤で作られ、妊婦尿に含有されている。

妊婦尿からＨＣＧを採取する方法は多数発表されている
が、代表的なものは安息香酸吸着法〔Ｋａｔ２ｍａｎら
、Ｊ、Ｂｉｏｌ、Ｃｈｅｍ、９８７３９（１９３２）〕
、カオリン吸着法〔Ｂｒｏｄｌｕｒｇら９Ｐｒｏ、Ｓｏ
ｃ、Ｅｘｐｔｌ、Ｂｉｏｌ。

＆Ｍｅｄ、７１２２８（１９４７）〕である。これらの
方法はいずれもＨＣＧを選択的に吸着させることができ
ないので製品ＨＣＧ中に異種物質が多く混在し、単位活
性の低い製品しか得られないなどの欠点がある。本発明
者は従来の方法の欠点を克服したより有利な製造法を確
立するために広範囲な研究を行つた。

先ず、妊婦尿をイオン交換樹脂やイオン交換体に接触さ
せてＨＣＧを捕集しようとしたが、原尿を用いた場合Ｈ
ＣＧをよく吸着するイオン交換樹脂やイオン交換体はほ
とんどなく、また吸着しても溶出液としてΛ−アンモニ
ア水、ＩＮ塩化ナトリウム水溶液、５０％アルコール、
４０％アルコールや１０％ＡｃＮＨ、を用いる各種の溶
出法で溶出率が４０％を越えるものはなかつた。

また、２−３倍希釈の尿を用いた場合イオン交換樹脂や
交換体の種類によつてはＨＣＧを吸着するものもあるが
各種溶出法で溶出率が７０％を越えるものはなく、製品
の比活性は１００〜５００１Ｕ／ｍｇ（蛋白質）にす
ぎ・ず、高価な吸着体を多量に必要とするなど工業的に
有利な方法ではないことが判明した。そこで、ＨＣＧの
製造に従来用いられている公知の吸着剤について尿中Ｈ
ＣＧ吸着の最適ｐＨを調べ、そのｐＨで吸着を行い、州
一アンモニア水でフ溶出して第１表の成績を得た。

なお、比活性は吸着率十以上のものにつき溶出成分をア
セトン・パウダーとして測定した。第１表から明らかな
ように、吸着率はカオリン系のものがよかつたが、溶出
率、比活性はよくなかつた。

それで、本発明者らはさらに広範囲の吸着剤について上
記同様の試験を行い第２表の結果を得た。

１）日本活性白土製カオリン系材料２）林化成製同３）同同４）白石工業製同７５）富田製薬製ケイ酸アルミン酸ニマグネシウムすな
わち、上記多数の吸着剤よりも公知のカオリンの方がす
ぐれており、またカオリン中のＨＣＧ吸着因子としてＡ
ｌ。

Ｏ３・ＳｉＯ２，ＭｇＯなどが考えられるがアルミナ、
シリカ、マグネシアの単ク体はＨＣＧを吸着しないこと
が判つた。続いてさらに種々の組成を有する合成吸着剤
について同様の試験を行つたところ、第３表に示すよう
に、合成ゼオライト、アルミナ水和物、水酸化アルミニ
ウム、炭酸水素ナトリウム分子化合物７はＨＣＧを吸着
せず、ケイ酸マグネシウムは吸着、溶出率ともに劣り、
本発明の合成ケイ酸アルミニウム（アルミノケイ酸塩）
のみが吸着、脱着率、比活性のすべての点ですぐれた成
績を示しカオリンに遥かに勝る効果のあることが判明し
た。

上記各表中、吸着および溶出率、比活性についての記号
は次の数値を示す。本発明は、以上述べたような知見に
基いて完成されたもので、妊婦尿を弱酸性で式Ａｌ２Ｏ
３・？ＩＯ２・ＸＨ２Ｏを有するケイ酸アルミニウムよ
りなる吸着剤に接触させて尿中の成分を吸着させ、吸着
剤から被吸着物をアルカリ性水溶液で溶出したのち溶出
液を弱酸性にして生成する沈澱を除去した残留液、また
は上記吸着物を低級アルコールとそれに可溶性の塩を含
有する水溶液で溶出した溶出液、から有効成分を採取す
ることを特徴とする胎盤性性腺刺戟ホルモンの製造法で
ある。

本発明の方法においては、妊婦尿をそのま）用いてもよ
いが、予めＰＨ８−９、好ましくは８．５として夾雑す
るムコ多糖類等の不純物を沈澱させ、淵過その他の手段
により除去したものを用いるのが望ましい。吸着剤とし
て用いる式．Ａｌ２Ｏ３・Ｃｆ：）ＩＯ２・ボ。

０を有するケイ酸アルミニウム（アルミノケイ酸塩、商
品名キヨーワード７００協和化学工業製）はＡｌ２Ｏ３
９〜１３％、ＳｉＯ２５８〜６４％の合成ケイ酸アルミ
ニウム粉末であつて、本発明の目的を達しうる限り粒径
は特に限定されないが、吸着、脱着の操作法によつて下
記のような好ましい範囲がある。

尿と吸着剤の接触および吸着剤から被吸着物の溶出はバ
ッチ法、バッチ−カラム法、カラム法のいずれの操作法
によつて行いうる。吸着剤の好ましい粒径は、バッチ法
においては１００〜２００メッシュ、尿との接触をバッ
チ法で行い、溶出をカラムで行うバッチ−カラム法およ
びカラム法においては５０−１００メッシュである。

尿と吸着剤を接触させる際、尿は弱酸性とするのがよく
、特にＰＨ約３−５とするのが好ましい。ＰＨ５を越え
るとＨＣＧの吸着が阻害される傾向がある。吸着剤の使
用量が接触時間は特に限定されないが、実用上添加量は
尿１ｅあたり０．５−１．０ｇの吸着剤が好ましく、ま
た約２時間接触させるのが好ましい。

溶出に用いるアルカリ性水溶液は中等度のアルカリ性が
よく、ＰＨｌＯ．５−１２が好ましい。

水溶液をアルカリ性とする材料は目的を達しうる範囲で
適宜選択できるが、好ましい例はボーアンモニア水や△
一炭酸ナトリウム水溶液（ＰＨｌｌ）などである。被吸
着物を吸着剤からアルカリ性水溶液で溶出して得られた
溶出液からＨＣＧを採取するには種々の方法を用いうる
。

たとえば、溶出液を希塩酸などで弱酸性に調整して、硫
安などで塩析してＨＣＧを沈澱させてもよく、またアセ
トンを加えて沈澱させてもよい。また、溶出は低級アル
コールとそれに可溶性の塩を含有する水溶液を用いても
行いうる。

低級アルコールとしては、たとえばメタノール、エタノ
ール、イソプロパノールなどが用いられる。低級アルコ
ールに可溶性の塩としては酢酸アンモニウム、ギ酸アン
モニウムなどが挙げられる。水溶液中のアルコール濃度
は余り高くない方がよい。

アルコール濃度が約７０％になるとＨＣＧはほとんど溶
出しなくなる。また、塩濃度が高くなると、たとえば酢
酸アンモニウムの濃度が１５％以上になると、ＨＣＧが
変性しやすくなる。好ましい水溶液の例はアルコール約
４０％、酢酸アンモニウム約１０％を含有するものであ
る。上記の低級アルコールと可溶性塩含有水溶液で溶出
して得られた溶出液に低級アルコールを加えればＨＣＧ
は沈澱する。

アルコールの添加量が少いと目的物の収率が悪くなり、
また多すぎると沈澱中に不純物が増加するので、通常溶
出液に対して約３倍量程度のアルコールを加えるのが好
ましい。以上のようにして沈澱として採取されるＨＣＧ
Ｌは一般に２０００−３０００１Ｕ／Ｍｇ（蛋白質）に
達しさせることができ、これは従来の方法によるものに
対して５−１＠の比活性に相当する。

次に実施例を挙げてさらに詳しく本発明を説明する。

７実施例１妊娠２ケ月から６ケ月の妊婦尿５０ｅを４Ｎ一水酸化ナ
トリウム液でＰＨ８．５として生じた沈澱をＰ去した後
、泗一塩酸でＰＨ３．５とし合成ケイ酸アルミニウム（
キヨーワード７凹協和化学工業製、２００フメツシユ）
２５０ｇを加えて２時間接触させる。

静置後、上清と吸着剤とを分離し、５．０ｅの水て吸着
剤を洗い、？−アンモニア水３．０ｅで溶出する。溶出
液をＰＨ５．Ｏとして生じた沈澱を除いた液に流酸アン
モンを５０％になるように加えてＨＣＧを沈澱させた。
得られたＨＣＧは１５０００００１Ｕ１比活性は２００
０１Ｕ／Ｍｇ（蛋白質）、収率は９１．２％であつた。

実施例２妊娠２ケ月〜６ケ月の妊婦尿１０ｅを実施例１
と同様にＰＨ８．５として沈澱を除き希塩酸でＰＨ３．
５とする。

例１と同様の合成ケイ酸アルミニウム（５０〜１００メ
ッシュ）１００ｇを直径１０Ｃｒ！ｌのカラムにつめ、
上記の処理尿を２ｅ／時間の速さて流下し、水１．０ｅ
で洗浄後４０％エタノール・１０％酢酸アンモニウム液
１．０′で溶出し溶出液５００ｍ１に３倍量の９５％エ
タノールを加えてＨＣＧを沈澱させた。回収されたＨＣ
Ｇは２９６０００１Ｕ１比活性は３０００１Ｕ／Ｍｇ（
蛋白質）、収率は８５％であつた。実施例３妊娠２ケ月
〜６ケ月の妊婦尿５０ｅを実施例１と同様にＰＨ８．５
で処理して希ＨＣｌでＰＨ３．５として例１と同様の合
成ケイ酸アルミニウム（５０〜１００メッシュ）５００
ｇを加えて２時間接触させる。

静置後吸着剤と上清と分離し、５．０ｅの水で吸着剤を
洗い、直径１０ｃｍのカラムにつめ、さらに５．０ｅの
水で洗浄後、５．０ｅ（１）２Ｎ一炭酸ナトリウム水溶
液で溶出する。溶出液３．０ｅを希ＨＣｌでＰＨ５．Ｏ
として生じた沈澱を遠心分離後、硫酸アンモンを５０％
になるように加えて、ＨＣＧの沈澱を得た。収率９０．
２％比活性２０００１Ｕ／Ｍｇ（蛋白質）。実施例４妊娠２ケ月〜６ケ月尿１００ｅを実施例１と同様にＰＨ
８．５で処理して希塩酸でＰＨ３．５とし、例１と同様
の合成ケイ酸アルミニウム（２００メッシュ）５００ｇ
を加えて２時間接触させる。

静置後上清と”吸着剤とを分離し５．０ｅの水で洗浄後
４０％メタノール・１０％酢酸アンモニウム液５．０′
で溶出する。溶出液４．０ｅにメタノール１２．０ｅを
加えてＨＣＧの沈澱を得た。回収されたＨＣＧは２５０
００００１Ｕ１比活性は２７００１Ｕ／Ｍｇ（蛋白質）
、収率は８５％であつた。

Claims

【特許請求の範囲】

１妊婦尿を弱酸性で式Ａｌ＿２Ｏ＿３・９ＳｉＯ＿２
−ｘＨ＿２Ｏを有するケイ酸アルミニウムよりなる吸着
剤と接触させて尿中の成分を吸着させ、吸着剤から被吸
着物をアルカリ性水溶液で溶出したのち溶出液を弱酸性
にして生成する沈澱を除去した残留液、または上記吸着
物を低級アルコールとそれに可溶性の塩を含有する水溶
液で溶出した溶出液、から有効成分を採取することを特
徴とする胎盤性性腺刺戟ホルモンの製造法。