JPS6048483B2 - 脂質膜薬剤送達 - Google Patents

Description

【発明の詳細な説明】 枝術分野 本発明は、薬理学的に活性な薬剤を優先的に肝膵に発達
する複合物に関する。

更に特定的には、構造体の構成の必須部分としてジガラ
クトシルジグリセリドを含む脂質膜構造体〔「小胞（Ｖ
ｅｓｌｃｌｅｓ）」、「脂肋小体（１ｉｐ（）ＳＯｍｅ
ｓ）」〕が、インシュリン等の薬剤を優先的に肝膵の肝
細胞へ搬送することに関する。

肝脆は人体の最も大きな腺であり、それとして門脈およ
び肝動脈を通つて多量の血液の供給を受入れている。

代謝的には、肝膵は人体の中で最も複雑な器官であり、
そして他の多くの橙能のほかに肝職はそこに導入される
薬剤を代謝／分配する。また肝膵は、体内にて製造され
る薬理学的に活性な物質の的器官でもある。従つて、肝
脈に薬剤を侵先的に送達する改善された手段によつて、
より自然な態様で薬剤が体内にて処理される手段が提供
され、これによつて薬剤治療法が改善される。肝朦がイ
ンシュリンを処理する仕方により、この重要な対象器官
の活性を示すことができる ）インシュリンは、動物の
代謝に全般的に影響をおよぼすホルモンである。

このホルモンの最も顕著な効果は、、血漿中のグルコー
ス濃度を低下させる能力てある。摂取された炭水化物系
の食事は腸内にてグルコースに通常消化され、そして門
脈循環中に吸収される。膵臓は腸内の炭水化物に応答し
て門脈循環中にインシュリンを放出する。吸収されたグ
ルコースおよび放出されたインシュリンは、門脈によつ
て肝臓に運ばれる。肝臓にて、グルコースの肝細胞によ
る代謝をインシュリンが調節する。機能は不明であるが
、肝臓は大部分のインシュリンを保持するが若干を放出
して、筋肉および脂肪組織によるグルコースの利用を促
進する。血中グルコースの低減は、肝臓および末梢組織
におよぼすインシュリンの効果によるものである。従つ
て、膵職は生体内のインシュリン源であり、肝臓はイン
シュリンを正常に利用することを支配する。糖尿病は、
後期には過血糖症、糖尿、増加蛋白分解、ケトン症およ
びアシドージスにて発現される一般化した慢性代謝障害
である。

この疾病が長びくと、血管、網膜、腎臓および神経系の
変性症が併発する。、糖尿病の場合、炭水化物系の食事
に応じて膵臓が不足のインシュリンを生産するかもしく
は放出す。このインシュリンの欠乏によつて、血液中の
グルコースを大部分の組織が利用できないという状態が
生ずる。その結果、血中グルコースが異常に高い量に達
する。この血中グルコース量が、血漿の限外胛過液から
グルコースを再吸収する腎臓の能力を超過する場合、グ
ルコースが尿中に出現する。更に、身体の細胞が他の栄
養物を適切に代謝できなくなりそして生長が通常阻害さ
れる。また、組織に対するインシュリンの欠乏は結局、
血液中に異常に高い量の毒性ケトン代謝物を生じさせる
。これら変化の最終的な総台結果は、昏睡および死とい
うことになろう。糖尿病のインシュリン療法は１９２奔
に始まつた。

最近の医療では、インシュリンは皮下に投与される。こ
れは、インシュリンの経口投与が多分蛋白質分解のため
に非能率的てあるためである。インシュリンを皮下投与
すると、主に筋肉および脂肋組織に対するインシュリン
の作用の結果、血中グルコースの量が低下する。重症の
インシュリン欠乏糖尿病患者の維持にはインシュリンの
投与が不可欠である。

しかし、注射によるインシュリンの投与は正常に近い状
態としては分類できない。重要なことは、正常な人間の
膵臓の解剖学的配置によれば、口腔内のグルコースの量
に応答して膵臓から分泌される多量のインシュリンが末
梢循環系に入る前に門脈循環を経て肝朦に供給されるよ
うになつていることである。比較してみると、インシュ
リンが糖尿病患者に皮下投与される場合、末梢組織がま
ずこのホルモンに接近し、そして肝職に送られるインシ
ュリンの量を低減する一方、重要なグルコース調節機構
としての肝臓の効果を低下させる。そのため、注射によ
り投与されたインシュリンの作用は、膵腺から放出され
たインシュリンとしての生理学的 ）作用と同一てはな
い。本発明は、インシュリンまたは他の薬理学的に活性
な薬剤が人体または低級動物の肝臓に優先して送達され
得る手段を提供するものである。

また本発明は、酵素、ビタミン類および他の薬剤、特に
インターフエロンをこのような治療を必要とする人体お
よび低級動物に投与する改善された手段を提供するもの
である。背景技術 下記の文献は、この分野の研究を概観するもの ・てあ
る。

各出版物には追加的参照用の引用が含まれている。ＥＤ
ＴＡか脂肪小体により被包化（Ｅｎｃａｐｓｕｌａｔｅ
）されそして重金属中毒の治療用に注射されている。

肝膝等の軟組織における組織の被包化されたＥＤＴＡの
吸収は、被包化されていないＥＴＴ）Ａが直接注射され
る場合よりも約２賠も増加されるといわれている。脂肪
小体の製造および肺腋塞栓症に関する問題が言及されて
いる。Ｒａｈｍａｎ他によるＪ．Ｌａｂ．Ｃｌｌｎ．Ｍ
ｅｄ．８３（４）、６４０〜７（１９７４）およびＴｈ
ｅＵ．Ｓ．ＥｎｅｒｇｙＲｅｓｅａｒｃｈａｎｄＤｅｖ
ｅｌＯｐｍｅｎｔＡｄｍｉｎｉｓｔｒａｔｉＯｎに譲渡
された１９７６年１月１３日附の米国特許第３９３２６
５７号明細書を参照のこと。レシチン／コレステロール
の脂肪小体内に被包．されたインシュリンの経口投与が
、ＥＦＢＳレＴｔｅｒｓ６２、１、６０〜３ （１９７
６）にＰａｔｅｌ他によつて報告されている。

また、南アフリカ共和国の特許出願第７３／１８５吋明
細書には、種々の脂肪小体形成材料を用いて経口投与用
にインシュリンを・被包化することが開示されそして特
許の請求がなされている。湿潤剤を含む脂肪小体材料お
よび局部的に適用して皮１・Ｈを湿化する使用法が、１
９７師５月１８日附の米国特許第３９５７９７１号明細
書中に開示されている。

米国特許第５１３２■号（１９７４年１０月１９日附）
がＴｈｅＵ．Ｓ．ＥｎｅｒｇｙＲｅｓｅａｒｃｈａｎｄ
ＤｅｖｅｌＯｐｍｅｎｔＡｄｍｉｎｉｓｔｒａｔｉＯｎ
によつて出願された。

これは、癌の治療用に脂肪小体中に被包化されたアクチ
ノマイシンＤを含む。この出願は実施許諾用に公開され
ている。この特許出願発明に関連する研究報告が、Ｐｒ
ＯｃｅｅｄｉｎｇｓＯｆＴｈｅＳＯｃｉｅｔｙｆＯｒＥ
ｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌＢｉＯｌＯｇｙａｎｄＭｅｄｉ
ｃＩｎｅｌ４仄１１７３〜７６（１９７４）に掲載され
ている。ベルギー特許第８３０６２吟（１９７５）明細
書には、負に帯電した脂肪体中に添加された免疫学的に
有効な物質を特徴とする免疫学的に活性の複合物が開示
されそして特許請求されている。

このように被包化された物質のいくつかは、ビールス抗
原、バクテリア抗原等を含んでいる。一定のガラクトシ
ル脂質を含む脂肪小体が、ＴｈｅＷａｌｔｅｒＲｅｅｄ
ＡｒｍｙＩｎｓｔｉｔｕｔｅＯｆＲｅｓｅａｒｃｈの研
究者によつて、ＩｍｍｕｎＯｃｈｅｍｉｓｔｒｙ）第１
１巻、４７５〜８１（１９７４）に記載されている。

ＢｉＯｃｈｉｍｉｃａｅｔＢｉＯｐｈｙｓｉｃａＡｃｔ
ａ３ｌｌ、５３１〜４４（１９７３）によると、ガラク
トシル脂質膜に関する他の研究が、ＴｈｅＰａｓｔｅｕ
ｒＩｎｓｔｉｔｕｔｅその他にて実施されている（Ｉｍ
ｍｕｎＯｃｈｅｍｉｓｔｒｙ第Ｂ巻、２８９〜９４）。
これら後者の出版物には、膜材料から脂肪小体を製造す
ることは報告されいないようである。１９７師２月１０
日附の米国特許第３９３７６６８号明細書には、アルブ
ミンの超微小球中に被包化されたインシュリンが開示さ
れている。

超音波振動枝術を用いて脂肪小体中で各種の水溶性薬剤
を被包する装置方法が、ＢａｔｔｅｌｌｅＭｅｍＯｒｉ
ａｌＩｎｓｔｉｔｕｔｅ−ＩｎｔｅｒｎａｔｌＯｎａｌ
ＤｌＶｉＳｉ（）ｎによつて開示された。

ドイツ国公開公報第２５３２３１７号明細書（１９７４
）を参照のこと。全く異なる種類の「ＵＦＡＳＯＭＥＳ
」と呼はれる被包化用小胞が、不飽和脂肪酸から製造さ
れ、そして構造および性質がリン脂質脂肪小体に極めて
類似すると報告されている。

ＧｅｂｌＣｋｌ他によるＣｈｅｍ．Ｐｈｙｓ．Ｌｌｐｌ
ｄｓｌα２）、１４２〜６０（１９７６）を参照のこと
。ＴｈｅＮｅｗＥｎｇｌａｎｄＪＯｕｒｎａｌＯｆＭｅ
ｄｉｃｉｎｅの１９７師９月２３日刊行の７０４〜１０
頁および１９７師９月３０日刊行の７６５〜７０頁には
、脂肪小体類、それらの薬剤用の使用に関する広範な報
告があり、そして脂肪小体中に被包化された薬剤の種類
について多数の参照が含まれている。

ＴｈｅＪＯｕｒｎａｌＯｆＬｉｐｉｄＲｅｓｅａｒｃｈ
９、３１０〜１８（１９６８）に記載された概観に、脂
肪小体およびこの小体の形成に関する種々の一般的態様
が開示されている。

しＢＯｒａｔＯｒｙＩｎｖｅｓｔｉｇａｔｉＯｎ３４、
ＮＯ．．３、２７６以降、（１９７６）に記載された他
の論文には、肝臓中の脂肪小体の取込みについて検討さ
れている。台成脂質小胞の生物体中における運命および
分布が研究され、そしてＰｒＯｃｅｅｄｉｎｇｓＯｆｔ
ｈｅＮａｔｉＯｎａｌＡｃａｄｅｍｙＯｆＳｃｉｅｎｃ
ｅｓ７ｌ，ＮＯ．．９，３４８７〜９１（１９７４年９
月）に報告されている。この研究では、脂肪小体の運命
をモーターするために放射性テクネチウムが用いられた
。腫傷を有するマウスについての他の研究が、Ｌｉｆｅ
Ｓｃｉｅｎｃｅｓｌ７、７１５〜２４に記載されている
。ラットに薬剤（インシュリンを含む）を注射すること
による筋肉間吸収の期間についての研究が、Ｃｈｅｍ．
Ｐｈａｒｍ．Ｂｕｌｌ．２３（１０）２２１８〜２２（
１９７５）に報告されている。

Ｊ．Ａｒｅｈａｒｔ−Ｔｒｅｉｃｌｌｅｌ，Ｓｃｉｅｎ
ｃｅＮｅｗｓ，第１１４巻、第４号、（１９７ａ年７月
２２日）の６０頁に、ある研究者が脂肪小体を抗体と結
合させて、脂肪小体包封酵素を或る病状を処理するため
に対象（ターゲット）細胞に充当させたことが報告され
ている。

本発明に特に関連する論文は、ＭａｕｋおよびＧａｍｂ
ｌｅによる、ＰｒＯｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．
ＵＳＡ）７６、ＮＯ．．２、７５６〜７６９頁、１９７
奔２月、ＢｌＯＰｈｙＳｌＣＳである。

この論文にて、著者はＬｕｎｎｅｙおよびＡｓｈｗｅｌ
ｌの研究（ＰｒＯｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ
ＳＡ）７３、３４１〜３４３、１９７６）に関する実験
、すなわち、表面の炭水化物が特定組織による脂肪小体
の認定の決定要素として役立つ可能性が生じたことを報
告している。ＬｕｎｎｅｙおよびＡｓｈｗｅｌｌの研究
には、ガラクトース末端処理グリコプロテインを認定し
そして結合させ得る特定の肝臓受容器について記述され
ている。しかし、ＭａｕｋおよびＧａｍｂｌｅの研究
ノては、研究した特定の小胞の表面にフルクトースもし
くはガラクトースのいずれかが存在すると「この小胞の
組織分布に統計的に有意な変化が生じない」ことが示さ
れている。ＧｒｅｇＯｒｉａｄｉｓによるＢｉＯｃｈｅ
ｍｉｃａｌＳＯｃｉｅｔｙＴｒａｎｓａｃｔｉＯｎｓ）
第３巻（１９７５）６１３頁に、アシアロフエチユイン
（ＡｓｉａｌＯｆｅｔｕｉｎ）（アシアロフエチユイン
はガラクトシル単位を含有する）を含む脂肪小体を用い
た、肝臓へのプレオマイシンおよび放射性アイソトープ
（インシュリンまたはインターフエロンではない）の送
達が報告されている。

この研究は調節処理によつて肝臓の吸収が向上されたこ
とを示すが、データの統計的意義は明らかでない。１９
７７年４月５日附の米国特許第４０１６１０吟明細書に
薬剤複合物が開示されており、この複合物は、リン脂質
を水に分散させ、この分散液に医薬を添加し、得られた
水性分散液を凍結して脂質小球体中にその医薬を取込み
、そして次にこの凍結分散物を解かして脂質小球体中に
取込まれた医薬の水性分散物を得ることによつて調製さ
れる。

１９７７年４月５日附の米国特許第４０１６２９吋明細
書には、荷電したキレート化剤を脂肪小体（この小体は
細胞に吸収される）にて被包することによつて、キレー
ト化剤を細胞膜中に移行させる方法が開示されている。

１９７師３月７日附の米国特許第４０７８０５訝明細書
には、薬剤を被包化する単層の小胞が開示されている。
ＴｈｅＬａｎｃｅｔ）１９７４年６月２９日発行、１３
１３〜１３１６頁には、転移癌（Ｍｅｔａｓｔａｔｉｃ
ｃａｎｃｅｒ）の患者に薬剤坦体として脂肪小体を用い
て可能性が開示されている。ＳｈｉｐｌｅｙによるＢｉ
ＯｃｈｉｍｉｃａｅｔＢｉ（）ＰｈｙｓｉｃａＡｃｔａ
３ｌｌ（１９７３）５３１〜５４４には、モノーおよび
シカラクトシルジグリセリドの水中の相挙動が開示され
ている。

糖脂質およびリン脂質の相挙動が、植物および動物の細
胞膜中の個々の役割に関して比較されそして考察されて
いる。発明の開示 本発明は、人体または低級動物に薬剤、診断用剤等を投
与するための脂質膜構造体を包含するものであり、そし
てこの構造体は大部分の極性（ＰＯｌａｒ）脂質と少部
分の少くも一個の脂肋置換基を有するジガラクトシル誘
導体、特にジガラクトシルジグリセリドとの混合物を含
むものである。

本発明はまた、上記の脂質膜構造体を含む第二構成分中
に被包されるかまたはこの第二構成分と組合されている
第一構成分（薬剤または診断用剤等である）を包む複合
物を包含する。ここにおいて、上記の構造体は、大部分
の極性脂質と少部分の少くも一個の脂肪置換基を有する
ジガラクトシル誘導体、特にジガラクトシルジグリセリ
ドとの混合物を含む。本発明はまた、本発明にて開示さ
れる種類の脂質膜構造体を用いて、人体または低級動物
の肝臓の肝細胞に薬剤または放射線診断用剤を送達する
手段を包含する。

フ本発明の特別の利点は、上記のジガラクトシル部分
が脂質膜構造体を優先的に肝臓の肝細胞に指向させると
いう発見にある。従つて、糖尿病患者の肝臓にインシュ
リンを送達することができ、そこで非糖尿病患者の場合
と同様にインシュリンが処理される。また、本発明の脂
質膜構造体は、肝臓自体に関与する疾病の治療の補助手
段として、肝臓に他の薬剤および診断用剤を送達するた
めにも使用てきる。本発明において開示される種類の脂
質膜構造体を用いて、人体および低級動物に投与できる
物質の非限定的な例を下記に示す。

（１）放射性核種、特に、テクネチウムー９９ｍ）タリ
ウムー２０Ｌインジウムー１１３ｍ）インジウムー１１
１、フッ素−１８、ストロンチウムー８５およびヨウ素
−１２５の放射性核種。

（２）重金属キレート化剤、特に、エチレンジアミンテ
トラアセテートおよびジエチレントリアミンペンタアセ
テート。

（３）インシュリンまたはインシュリン誘導体。

（４） 抗ウィルス剤、特に肝炎の治療に用いられるも
の。（５）インターフエロン。

（６）ホルモン類、例えば、エストロゲン（肝臓再生）
、グルカゴン、カテコールアミン等。

（７）必須アミノ酸。

および（８）肝臓の機能を向上させるヌクレオチド類（
例えはＡＴＰ）。

種々の他の酵素類、薬剤、ビタミン類、およびＧｒｅｇ
ＯｒｊａｄｉｓによるＮｅｗＥｎｇｌａｎｄＪＯｕｒｎ
ａｌＯｆｌ，Ｍｅｄｌｃｈｊｎｅ２９５、１３の７０４
〜７０９頁に記載されているような巨大分子物質も、本
発明の脂質膜構造体を用いて人体および低級動物に投与
できる。

このような物質には、メソトレキセート ］（Ｍｅｔｈ
Ｏｔｒｅｘａｔｅ）、ブレオマイシン、アクチノマイシ
ンＤ等が含まれる。

本発明の最良の態様 本発明にて用いられる脂質膜構造体は、極性脂質および
ジガラクトシル誘導体、特にジガラクトシルジグリセリ
ドを含む。

本発明の実施に用いられる最も好ましい極性脂質は、ジ
ステアロイルレシチンである。

天然のレシチン（ホスファチジルコリン、ビテリン）は
、リン酸のコリンエステルに結合したステアリン酸、パ
ルミチン酸およびオレイン酸のジグリセリド類の混合物
を含み、生存するすべての植物および動物中に見出され
る。レシチンは下記の構造を有し、こゝに各Ｒ’ＣＯＯ
−置換基は脂肪酸残基である。市販のレシチンは、主と
して大豆レシチンであり、大豆油の製造の副生成物とし
て得られる。

Ｋ．Ｓ．Ｍａｒｋｌｅｙ）ＳＯｙｂｅａｎｓ第■巻（Ｉ
ｎｔｅｒｓｃｉｅｎｃｅ）ＮｅｗＹＯｒｋ）１９５ハの
Ｓｔａｎｌｅｙによる５９３〜６４７頁を参照のこと。
大豆レシチンは、パルミチン酸１１．７％、ステアリン
酸４．０％、パルミトレィン酸８．６％、オレイン酸９
．８％、リノール酸５５．０％、リノレン酸４．０％、
Ｃ２Ｏ−ーＣ２２酸（アラキドン酸を含む）５．５％を
含有する。混合酸α−レシチンの合成は、ＤｅＨａａｓ
）ＶａｎＤｅｅｎｅｎＮＴｅｔｒａｈｅｄｒＯｎｌｊ２
ｔｔｅｒＳｌ９６Ｏ（ＮＯ．９）１に開示されている。
合成Ｌ−α−（ジステアロイル）レシチン（「ジステア
ロイルレシチン」）は、卵の黄味レシチンを水素添加し
て商業的に製造される。Ｌ−α−（ジパルミトイル）レ
シチンは、脳、肺および牌臓の天然リン脂質と同一であ
る。本発明の方法て使用される最も好ましいジガラクト
シル誘導体は１−Ｏ −〔６ −Ｏ−（α−Ｄーガラク
トピラノシル）−β−Ｄ−ガラクトピラノシル〕−２，
３−ジーＯ−アシルーＤ−グリセリトールであり、便宜
上「ジガラクトシルジグリセリド」と呼ばれ、「ＤＧＤ
Ｇ」と省略されている。

狭義において、本発明はジガラクトシル誘導体がこのＤ
ＧＤＧに限定されるものである。ＤＧＤＧは随意にそし
て好ましくは、単に貯蔵による酸化の機会を減じるため
に、不飽和結合を標準的方法で（１１２、Ｐｄ−Ｃ）水
素添加する。〃天然のＪＤＧＤＧの物理化学的特性は、
そのほかには影響を受けない。本発明において用いるＲ
ＤＧＤＧョの用語は水素添加型および未水素添加型の両
者を含む。ＤＧＤＧは天然に産出し、下記の構造を有す
ると報告されている。ここで各Ｒ置換基はＣェ，〜Ｑ，
の鎖長範囲にあり、約２０％のパルミチン酸、９％のオ
レイン酸、６６％のリノール酸、残量はステアリン酸、
リノレン酸およびその他少量からなる。

ＭｙｈｒｅによるＣａｎａｄｉａｎＪＯｕｒｎａｌＯｆ
Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ４６、１９、３０７１〜７７頁（１
９６ａ年）を参考として引用するものとする。本発明で
使用するＤＧＤＧは、上記Ｍｙｈｒｅにより開示された
方法により得られた。

Ｒｕｓｓｅｌｌ−ＭｉｌｌｅｒＡｒＴｌｅｒｉＣａｎＢ
ｅａｕｔｙの軟質（ＳＯｆｔ）小麦粉（２３ｋ９）をエ
タノール（４６リットル）中に懸濁させ、そして混合物
を数時間放置した。上澄液を取出し、ろ過して不溶性残
留物を前のようにして２回抽出を行つた。枦液を蒸発さ
せてシロツプ（２１５ｙ）にした。代表的な実施例にお
いては、上記からのエタノール抽出物の一部（２０〜３
０ｆ）をクロロホルムに溶解し、そして前もつて初めて
クロロホルム−メタノール（５０：５０Ｖ／ｖ）、次に
クロロホルムで洗浄したケイ酸のカラム（１００メッシ
ュ）（３．６×８８ｃｍ）に通した。

このカラムを、Ｃａｒｔｅｒ他によるＪ．ＬｊｐｊｄＲ
ｅｓ．２、２１５頁（１９６１年）の方法と同様にクロ
ロホルムで洗浄し、次いでクロロホルムとメタノールと
の混合物て洗浄した。収集した各部分は約１５〜２０ｍ
ｔにのぼつた。適当な部分を合わせ、蒸発させて残留物
を使用時まで０゜Ｃにて貯蔵した。収集した部分は次の
通りであつた。（個々の部分を完全に分析するには、上
記のＭｙｈｒｅを参照のこと）。ＬＭＳの製造 下記の工程は、インシュリンを含む脂質膜構造体（ＬＭ
Ｓ）の製造を例示するものである。

同方法はその他の薬剤を含むＬＭＳの製造に使用できる
。この工程において、用語ＤＳＬはジステアロイルレシ
チンを示し、そして用語ＤＧＤＧは上記のＭｙｈｒｅの
方法により製造されたジガラクトシルジグリセリドを示
す。ガラス注射器にポリプロピレン管の一片を取り付け
て、ＤＧＤＧ原液（下記）の分取を容易にした。

同様に、５．０ｍＬガラス注射器に１罵Ｄポリプロピレ
ン管の一片を取り付けて、ＤＳＬ原液（下記）を分取し
た。１８ゲージの針を取り付けた１０．０ｍ１ガラス注
射器を、市販のインシュリン原液の８．０Ｔｎ１を分取
するために全工程中で使用した。

６．０ｍｔの原液ＤＳＬと２．０ｍＬの原液ＤＧＤＧを
、乾燥窒素下にて非常に静かに混合しながら５０ｍＬエ
ーレンマイヤー秤量フラスコに移した。

次にフラスコを５５゜Ｃ水溶中に置き、一方窒素を試料
上に吹きつけて脂質成分を乾燥させた。次に試料フラス
コを系の減圧（ＨＯｕｓｅＶａＣｕｕｎｌ）下にてＢｕ
ｃｈｉの回転式蒸発器上に置き、そして水浴で温度を６
５℃に維持しながらル分間ゆつくり回転した。

乾燥した試料を次に窒素で洗い流し、そして１２．０ｍ
ιのインシュリン原液（下記）を加えた。次にフラスコ
を、微小先端型のもしくは、好ましくはカップホーン型
の超音波処理器の受器（ヒートシステムウルトラソニツ
ク製）中に、フラスコの底面がホーンの放射表面から１
１１６インチ（１．６ｗ１）の間隙を保つように設置し
た。反応温度を連続的に監視するために、サーミス プ
タ探針を水相に挿入した。

次にガラス栓をフラスコの首部に挿入しそしてバラフィ
ルムでしつかりと包んで密封し、超音波処理中の水性成
分の蒸発を防止した。反応混合物の温度を仙分間６０℃
±０．５゜Ｃの定温に維持した。温度制御はＬａｕｄａ
Ｋ−２／Ｒ循環水浴を用いて行つた。更に、カップホー
ン型受器中の浴の高さをホーンの放射表面から１〜１１
４インチ（２．５〜０．６ｃｍ）上に保つて、反応媒体
の温度制御を容易にした。超音波処理に必要な出力は、
ヒートシステムウ ’ルトラソニツク製の＃３５０型出
力増幅器によつて得られる。

出力制御は、増幅器容量の４０％〜６０％に相当する出
力を供給するように＃３の位置に調節した。ホーンに送
られる電気エネルギーを、超音波処理に必要な超音波エ
ネルギーを提供するように変換した。超音波処理の後、
凝縮蒸気および脂質成分を混合した。

次に試料をＢｕｃｈｉの回転式蒸発器上に置き、そして
６５゜Ｃの水浴中で１時間ゆつくり回転しながら除冷し
た。この最初の徐冷の直後、試料を．室温て１ｈ時間保
温した。最切と同様の２回目の徐冷を保温後に行つた。
インシュリン含有ＬＭＳから外面付着のインシュリンを
取り除くために、Ｓ −Ｗ ・６０ヘッドを備えたＢｅ
ｃｋｍａｎＬ−５超遠心分離機を使用して最−低５回の
洗浄を行つた。インシュリンーＬＭＳ製剤を３．０ｍ１
容量のポリアロマー遠心分離管に移して５５００＆Ｐｍ
にて２時間遠心分離を行つた。前記工程で使用した原液
は次の通りであつた。原液ＤＳＬは２：１ｖ／ＶＣＨＣ
ｌ３／メタノール１ｍ１当・り５７．６９ｍｇのＤＳＬ
を含む。原液ＤＧＤＧはＣＨＣｌ３／ｊメタノール（２
：１ｖ／ｖ）１７７！ｌ当り６．９２６ｍｇのＤＧＤＧ
を含む。インシュリン原液は下記の成分を含む。８．０
ｍ１のりソー（Ｌｉｌｌｙ）インシュリン（１ｍ１当り
１０弾位）０．踵量％のフェノール、および０．５重量
％のアルブミンおよび０．０５重量％のチメロサールを
含む４．０ヨウ素−１２５インシュリン（Ａｍｅｒｓｈ
ａｍ）。

上記工程においてＬＭＳと結合したより濃度の高いイン
シュリンを確保するのに好ましい別の態様に於ては、１
００ｍ９の結晶インシュリンを直接ＤＳＬおよびＤＧＤ
Ｇの原液の混合物に加える。

結晶インシュリンの懸濁液をカップホーン型超音波処理
器を用いて超音波処理し（約３０秒／室温）、インシュ
リンを調剤する。記載した溶剤の減圧蒸発の後、乾燥試
料を上記の如くインシュリン原液で処理し、超音波処理
等をう。インシュリン溶液を好みの他の薬剤の溶液で置
き換えることにより前記の操作を変更して、そのような
他の薬剤を含むＬＭＳを確保できることが理解できるで
あろう。

いろいろの割合のＤＧＤＧを含むＬＭＳ）或いは比較
実験として使用するためのＤＧＤＧを含まないＬＭＳも
また前記の超音波法を用いて製造できる。同様にして、
種々のＤＧＤＧ−含有ＬＭＳを、ＤＳＬ以外のグリセリ
ド／脂質を用いてＤＧＤＧを超音波処理することにより
製造できる。

ＤＧＤＧを含まないＬＭＳを製造するための他の一般的
操作法は、参考として本明細書に含ませるものとする米
国特許第４０１６２９吟（１９７７年４月５日発行）明
細書中に開示されている。

そのような操作法もまた、適当量のＤＧＤＧを技術的に
概知の極性脂質に加えそして上記引用の特許に記載した
方法にて処理することにより本発明において使用できる
。本発明のＬＭＳの安定性は、電解質水溶液に懸濁する
ことにより実質的に高められる。

これは浸透圧の理由によるものと思われる。ＫＣＩおよ
びＮａＣｌ（好ましい）ような薬学的に許容される電解
質がこの目的に有用である。生理食塩水（市販）を使用
できる。得られた電解質水溶液中のＬＭＳ懸濁液は、前
述の方法において直接使用するのに適している。前記の
方法で製造したインシュリンＬＭＳは、標準的方法を用
いてセフアローズ（ＳｅｐｈａｒＯｓｅ）２ｂ（Ｐｈａ
ｒｍａｃｉａ）上の液相クロマトグラフィーにより「分
粒」できる。

例えば、超音波処理したインシュリンＬＭＳを１０００
００Ｘｙにて１時間遠心分離して大きな粒径の小胞、塊
および規定外の構造物を除去する。残留物をセフアロー
ズ２ｂ上のクロマトグラフィーに付すことにより、７５
０オングストローム〜３０００オングストロームの範囲
のインシュリン小胞が得られる。更に、ＬＭＳと結合し
ていないインシュリンは、この操作により最終複合物か
ら除去するのか好ましい。所望により、大きな小胞（約
４０００八より大）を流体力学的クロマトグラフィーに
より小さな小胞から分離することができる。動物実験 ＤＧＤＧを用いたインシュリンＬＭＳのグルコール調節
効果を実証するために、動物実験を実施した。

この研究によつて、ＤＧＤＧを用いないインシュリンＬ
ＭＳは、これに関して、インシュリンとほぼ同程度にし
か効果的でないことも実証された。この研究はまた、糖
尿病動物におけるＤＧＤＧを用いたインシュリンＬＭＳ
の効果が、健康な動物における自然の身体桟構によつて
得られた効果と非常に似ていることを実証した。これに
対して、インシュリンおよびＤＧＤＧを用いないインシ
ュリンＬ〜４Ｓは、正常体と非常に異なる投量反応を示
す。研究Ｉ この研究に使用したインシュリンは、通常の注射用ポー
クインシユリン、１００単位／Ｃｃ（米国ＥｌｉＬｌｌ
ｌｙ製）であつた。

ジガラクトシルジグリセリド（ＤＧＤＧ）およびジステ
アロイルレシチン（ＤＳＬ）は前記の通りのものである
。４種類の調剤、すなオ）ち、１００％ＤＳＬ＋インシ
ュリン、９６％ＤＳＬ＋４％ＤＧＤＧ＋インシュリン、
９６％ＤＳＬ＋４％ＤＧＤＧ＋生理食塩水、およびイン
シュリンについてテストした。

インシュリンまたは生理食塩水を含みそしてＤＧＤＧを
含有もしくは含有しないＬＭＳを、超音波処理によつて
調製した。 フ要約すると、上記の４種類の複合物を、
−ニ指腸に直接挿入したカテーテルによつて動物に別々
に投与した。動物は投与の２０１１寺間前から絶食させ
た。この研究結果から、ＤＧＤＧを用いたインシユリ
フンＬＭＳ複合物を投与された動物は、インシュリン投
与の対照動物と比較して、有意の低血糖症効果を示した
。

実際に、インシュリン、ＬＭＳ＋ＤＧＤＧ＋生理食塩水
、およびＤＧＤＧを含まないＬＭＳ＋インシュリンの場
合は、有意の低血糖症を示さなかつた。ＤＧＤＧを用い
たインシュリン＋ＬＭＳの場合のグルコース価は、通常
のインシュリン処理の楊合と、５吟、７粉、９吟、１０
紛および１２紛にて有意に相異していた。ＤＧＤＧを用
いたインシュリン＋ＬＭＳのグルコース価は、ＤＧＤＧ
を用いないインシュリンーＬＭＳと７５分、１０？およ
び１２？にて、そしてまた生理食塩水ＬＭＳ＋ＤＧＤＧ
の場合とも１２紛にて、有意に相異していた。

上記のように、脂質脂肪小体インシュリン調剤によつて
糖尿病のラットに低血糖症を起させることが、他の研究
者によつて示された。

彼らが用いた投与量は、５０〜１０弾位のインシュリン
／Ｋ９の範囲であつた。低血糖症効果は、糖尿病のラッ
トだけに認められ、健康な動物には認められなかつた。
この研究において、有意の低血等症を示したグループは
、ＤＧＤＧを用いたインシュリンーＬＭＳのグループだ
けであつた。この研究における投与量は、紫外線吸収に
よつて約３単位／Ｋ９であると評価された。研究 ■ 研究■は、低投与量のインシュリン（０．３５単位／体
重Ｋ９）を使用したほかは、研究Ｉと実質的に同態様に
て行なつた。

ＬＭＳは、超音波処理しそして６７゜Ｃにて印分間熟成
させて調製した。研究■の結果、低投与量（０．３弾位
／Ｋ９体重）のＤＳＬ／ＤＧＤＧ−インシュリンーＬＭ
Ｓを絶食させた健康な覚醒状態にある動物に−ニ指腸投
与するノと、投与後４５〜７粉にて、生物学的および統
計学的に有意の低血糖症反応が生ずる、ことを確認した
。更に、ＤＧＤＧを含有しないＤＳＬ−インシュリンー
ＬＭＳは、血漿のグルコースに何ら影響を及ぼさなかつ
た。最後に、−ニ指腸に投与された通フ常のインシュリ
ンおよび生理食塩水は、研究■の血漿のグルコース価に
影響を及ぼさなかつた。研究 ■この研究では、吸収さ
れたインシュリンがすべて門脈循環を通じて肝臓に提供
され、これによつフてインシュリンの送達の正常形態が
模擬されるように、糖尿病の動物に−ニ指腸動物を通じ
てインシュリンを投与した。

下記の３形態のインシュリン、すなわち、通常のインシ
ュリン、ＤＧＤＧを用いないＤＳＬＬＭＳ構造体中のイ
ンシュリン、およびＤＧＤＧを含有するＤＳＬＬＭＳ構
造体中のインシュリンをテストした。絶食させた動物に
５０ｍｇのアロキサン／Ｋ９体重および３０ｍ９のスト
レプトゾトシン（ＳｔｒｅｐｔＯｚＯｔＯｃｉｎ）／Ｋ
９体重を静脈内投与して動物を糖尿病とした。

カテーテル挿入の梠時間前に各動物のインシュリン投与
を中止した。糖尿病の生起の６日後に、研究１および■
の一般的技術に従つて研究を開始した。この研究に用い
たインシュリンは注射用の通常のポークインシユリン（
Ｌｉｌｌｙ）であつた。

ＬＭＳ調剤は研究１および■と同様であつた。この研究
に３グループの動物を用いた。

これら動物に麻酔をかけそして外科的にカテーテルを挿
入した。血漿のグルコースおよびインシュリン濃度測定
用の血液を、０分、１紛、３紛、６吟、７５分、９０分
、１２Ｃｙ））および１５吟に採取した。０分時に、各
テスト動物に、３７℃の生理食塩水１０ＴｒＬＬを十二
指腸中に注入した。

６吟の血液試料を採取の直後に、グループＩの動物に−
ニ指腸中に注入された通常インシュリンとして１０単位
のインシュリン／Ｋ９体重を投与し、グループ２の動物
にＤＧＤＧを含まないＬＭＳインシュリン１０単位／Ｋ
９体重を投与し、そしてグループ３の動物には４％のＤ
ＧＤＧを含有するＬＭＳにて１０単位インシュリン／、
Ｋ９体重を投与した。

研究■にて、通常のインシュリンは、血漿のグルコース
の循環量にもまたは肝臓のグルコース吸収にも影響しな
いことを示された。

ＤＧＤＧを含有しないＬＭＳにて投与されたインシュリ
ンは、血．漿のグルコースに影響をおよぼさず、また糖
尿病動物の肝臓によるグルコース保持の利用状況を回復
しなかつた。これに対して、ＤＧＤＧ含有ＬＭＳにてイ
ンシュリンを−ニ指腸に投与された動物は、３頭のテス
ト動物中の２頭に血漿のグルコースの！有意な降下が認
められた。グルコースの減少は投与後９吟にて最大てあ
り、そして降下は１紛後に始まつた。グルコースの肝臓
による保持の増加は、１紛にて示されそして６吟にて最
大であり、次いで９Ｃｙ）テにて基準線の量にもどつた
。肝臓組織くによるグルコースの吸収が、血漿のグルコ
ースの降下の原因となり得る。研究■の結果にもとずき
、通常のインシュリンおよびＤＧＤＧを添加しないＬＭ
Ｓにて投与されたインシュリンは、血漿のグルコースま
たはグルコースの肝臓もしくは末稍の保持のいずれにも
影響をおよぼさないと結論された。

これに対し、ＤＧＤＧを含有するＬＭＳ中の同投与量の
インシュリンによつて、末稍プラズマ中に低血糖症の反
応が生起した。更に、グルコースの差（門静脈マイナス
肝静脈）を計算して、ＤＧＤＧを用いたインシュリンＬ
ＭＳを投与した動物ては肝臓によるグルコースの吸収が
増加することが示された。ノ研究 ■ 正常の対照動物において、肝臓が、基本絶食状態にてグ
ルコース放出の状態から、注入グルコースを供給される
場合のグルコース吸収の状態に変化することが見出され
た。

これは、膵臓および肝．臓が正常に機能している個々の
動物に予期される反応である。これに対し、対照の糖尿
病動物は、多量のグルコースが門脈系に注入されても、
肝臓によつてグルコースを取入れる能力を失なつており
そして実験の間グルコースの正味の放出を続ける。その
ため、多量のグルコースが消化管および門脈血液系を通
して摂取されても糖尿病の場合肝臓は摂取されたグルコ
ースを貯えずに更に多くのグルコースの生産を続けると
いう問題に直面する。この研究にて、脂質膜構造体（９
６％ＤＳＵおよび４％ＤＧＤＧ）中のインシュリンを、
糖尿病の犬の頚静脈に注入した。

この期間中に、これらの同じ犬に、腸間膜静脈（静脈系
）を通して０．５グラムのグルコース／Ｋｇ体重／時の
速度にてグルコースを注入した。代謝の研究のために肝
臓を隔離するように、これら動物を処理した。肝動脈を
結紮して、流人血液だけが門脈系を通して流入しそして
肝静脈を経て流出するようにした。門脈の肝門中にカテ
ーテルを挿入して、流人血液がその点で採取できるよう
にした。肝臓を出る血液が採取できるように、別のカテ
ーテルを肝静脈に挿入した。腸間膜静脈中にインドシア
ニングリーンの塊りを注入して、肝臓の血液流を測定し
た。このインドシアニングリーンの出現を、肝静脈から
血液を常時取出して検出して、流速を計算するギルフオ
ード（ＧｉｌｆＯｒｄ）の心臓血液搏出量系によつて分
析した。従つて、この系は肝臓に流入およびそこから流
出するグルコースの濃度が決定できるものであり、そし
て血液の流速も既知であつた。流速×グルコース濃度を
計算して、肝臓により吸収されるかまたは放出されるグ
ルコースの絶対量が得られる。頚静脈かまたは門静脈の
いずれかを経由して糖尿病の犬に、インシュリンを注入
した。

肝臓のグルコース保持の現象におよぼすインシュリンの
影響に関する投与量の反応を測定した。門脈に注入した
インシュリンによつて、体重Ｋ９あたり毎分１．０ミリ
単位の注入インシュリンの量にてグルコースの正常な肝
臓の吸収が得られることが示された。これに対し、同一
の効果を達成するには、頚静脈中に注入されたインシュ
リンの場合、６．２５ミリ単位／Ｋ９体重／分の量を必
要とした。２．５ミリ単位／Ｋｇ体重の頚静脈投与量で
は、肝臓をグルコース放出の状態からグルコース吸収の
状態に転換するには非効果的てあつた。

ジガラクトシルジグリセリド（４％ｗ／ｗ）を含有する
インシュリン／脂質構造体は、０．０２６〜０．４ミリ
単位／Ｋｇ体重／分の投与量範囲にて頚静脈中に注入さ
れた場合活性であつた。

この低投与量にてグルコースの放出からグルコースの吸
収に肝臓系を劇的に逆行させることは、ＤＧＤＧ含有Ｌ
ＭＳ中のインシュリンが、肝細胞に指向される情況に一
致する。肝細胞はインシュリンを或る態様にて放出し、
そのため、グルコース放出の状態からグルコース吸収の
状態に転換させる。研究■の結果にもとずき、肝臓に指
向されたＤＧＤＧ含有ＬＭＳ系によつて適当量のインシ
ュリンを肝臓に提供して、通常のインシュリンの場合よ
りも非常に低い投与量にて肝臓をグルコース貯蔵の状態
に転換すると決論された。

このようにして、上記のＤＳＬ／ＤＧＤＧＬＭＳによっ
て、摂取されたグルコース量を処理する通常の代謝形態
を動物が有するようにてきる。これと比較して、通常に
投与された（ＤＳＬ／ＤＧＤＧＬＭＳを用いすに）イン
シュリンは上記の効果を発揮できない。工業上の利用性
一般にＬＭＳは、約９０〜９９．踵量％の極性脂質と約
０．１〜約１０重量％のジガラクトシルジ誘導体を含む
。

約９５〜約９踵量％の極性脂質と約１〜約５重量％のジ
ガラクトシル誘導体を含むＬＭＳが非常に好ましい。以
下は本発明の実施に有用な代表的極性脂質である。リン
酸ジセチル、ステアリルアミン、ホスフアチジン酸、ジ
パルミトイルホスフアチジルコリン、ジミリストイルホ
スフアチジルコリン、スフィンゴミエリン、ホスファチ
ジルイノシトール、カルジオリピン、リソホスフアチジ
ルコリン、ホスファチジルエタノールアミン、ガングリ
オシド、ホスファチジルセリン、およびそれらの混合物
。これらの極性脂質は、技術開示された方法（上記Ｇｒ
ｅ？Ｒｉａｄｉｓにて引用した文献を参照のこと）を用
いて入手できる。コレステロールは、小胞および脂肪小
体の壁を安定化するために、開示された極性脂質と組合
せてしばしば使用される極性脂質であり、本発明のＬＭ
Ｓと共に同様にして随意使用できる。ＬＭＳの製造に好
ましい極性脂質はジアルカノイルレシチンを含み、ここ
で各アルカノイル基は約１２〜約２柵の炭素原子を含む
。

アルカノイル基がパルミトイルおよびステアロイルから
選ばれるＬＭＳｌ特にジステアロイルレシチンが最も好
ましい。ジガラクトシル誘導体が脂肪グリセリドジガラ
クトシル誘導体でありそして少なくとも一個の脂肪置換
基が約Ｃｌ２〜約Ｃ２Ｏの範囲の鎖長を有することを特
徴とするものである場合、特にジガラクトシル誘導体が
ジグリセリドであるものが非常に好ましい。

ジガラクトシル誘導体が前に開示した式を有するジガラ
クトシルジグリセリド（ＤＧＤＧ）であるＬＭＳが、薬
剤、放射性核種、その他を人体および低級動物の肝臓に
指向させるのに最も好まし′い。

約９４〜約９７重量％のジステアロイルレシチンおよび
約３〜約６重量％のジガラクトシルジグリセリドの混合
物を含む脂質膜構造体が、薬剤およびその他に最も好ま
しい担体である。

付加成分とし５て安定量（通常約０．５％〜約３％）の
コレステロールを含むＬＭＳもまた、薬剤担体として人
体および低級動物に注入するのに有用である。前記ＬＭ
Ｓは、薬剤、放射線診断用剤又はそのようなものなどの
成分と共に使用されるように意Ｏ図され、このような成
分はＬＭＳに被包されるか域いはＬＭＳと組合されてい
る。

ＬＭＳ一薬剤、ＬＭＳ一診断用剤等の組合せは、人体又
は低級動物に注入ないし注射するのに適した液体担体よ
り具体的には、薬学的に許容される発熱物質不含解質水
溶液（通常、無菌の発熱物質を含まない食塩水）中て使
用するのが好ましい。本発明で開示した種類の複合物で
非常に好ましいものは、脂質膜構造体と組合されたイン
シュリンを含みそしてこの構造体が約９４〜約９７重量
％のジステアロイルレクチンおよび約３〜約６重量％の
ジガラクトシルジグリセリドの混合物を含むものてあり
、この脂質膜構造体が人体又は低級動物に注射するのに
適した液体担体（例えば水）中に分散されているのが最
も好ましい。

薬剤等を含むＬＭＳを製造するための好ましい手順は、
インシュリンーＬＭＳ＋ＤＧＤＧの製造について前文て
もつて詳細に開示した。

この手順は他の薬剤を有しそして他の極性脂質を用いる
ＬＭＳの製造に同様に有用である。そのようなＬＭＳは
、代表的には約１０ミクロン（ｐ）以下の平均粒子径を
有する実質的に球状の小胞（又は脂肪小体）を含み、そ
して人体および低級動物に注射するのに適している。好
ましい平均粒径範囲は約２５０Ａ〜約３０００Ａであり
、最も好ましいのは７５０Ａ〜３０００Δである。この
方法により製造されそして人体および低級動物に使用す
るのに適した薬剤、放射性核種等の代表的濃度を第■表
に掲ける。ｘ 「純」ＬＭＳとは、水のような担体を加
えないＬＭＳを表わす。 ３＋ｘ
量は使用的卦よび放射線強度により変化するであろう。
放射線診断に対しては、２０→２０，０００ｔｔｃｉが
代表的使用量である。

放射線治療に対しては、使用量は病状に従つて約１０→
１００倍以上である。

４・下記の
諸例は本発明の実施を更に例示するものであり、本発明
を限定するためのものではない。

各患者（人間又は動物）に投与する特定のＬＭＳ／薬剤
の実際の量の採択は治療する医師（又は獣医）の裁量に
ゆだねられ、そして特定の患者についての適当な危険率
：利益比にふさわしいように処方されるであろうことが
理解されるであろう。

適当な投与量は患者の年令、体重、性別、病気の段階お
よびその他の要因に依存し、治療する医師の独自の権限
内にある。概して、本発明で開示したＬＭＳと組合せて
投与される特定の薬剤の量は、ＬＭＳを用いずに投与す
る量の２０％〜１００％の範囲にあるであろう。ＬＭＳ
複合物は、）胃腸管経由で、例えば静脈内注入によりお
よび注射により非経口的に投与することができる。例１
９９ｍＴｃを含むＬＭＳを前に開示したような方法で製
造するが、それらは次のものを含む。

来ＬＭＳｌダ当り約１０００μＣｉを考えるように９９
ｍＴＣ０４○として。

例１の放射性ＬＭＳ複合物を無菌の、発熱物質を含まな
い食塩水に懸濁させる（重量でＬＭＳ対１喰塩水）。

３ｍ１の懸濁液を、調製の約１時間後に患者に静脈内注
入する。

患者を１時間休ませ、次に肝臓走査写真を標準的方法て
撮影する。写真は周囲の軟組織から実質的に妨害される
ことなく肝臓の詳細を良く示す。例１の複合物はＤＳＬ
を以下の極性脂質でそれぞれ置き換えることにより変更
される。

リン酸ジアセチル、ステアリルアミン、ホスフアチチジ
ン酸、ジパルミトイルホスフアチジルコリン、ジミリス
トイルホスフアチジルコリン、スフィンゴミエリン、ホ
スファチジルイノシトール、カルジオリピン、リソホス
フアチジルコリン、ホスファチジルエタノールアミン、
ガングリオシド、ホスファチジルセリン、およびそれら
の混合物、優れた肝臓走査が確実に得られる。放射性Ｌ
ＭＳ複合物が同様の方法てそれぞれＴ１一２０１、Ｉｎ
−１１３ｍ．．Ｉｎ−１１１、Ｆ−１８、Ｓｒ−８５お
よびＩ−１２５を用いて製造される。

例■ 重金属キレート化剤を含むＬＭＳを前に開示したような
方法で製造するが、それらは下記を含有する。

例■の複合物を無菌の、発熱物質を含まない食塩水に懸
濁させ（１：１）、そして鉛中毒に病む動物（体重８０
ｋｇ）に静脈内投与する。

１日当り合計１０ｙ（７）懸濁液を還流させる。

その操作を毎日１回、７日間繰返す。動物の糞便および
尿をこの７日の処理期間にわたつて監視する。期間の終
りの時点て、実質的に全ての鉛残留物が動物の肝臓から
除去される。例■の複合物を、ＮａＥＤＴＡを等量のエ
チレントリアミン五酢酸のナトリウム塩、クエン酸ナト
リウム、およびエタンー１−ヒドロキシー１，１ージホ
スホン酸ナトリウムでそれぞれ置き換えることにより変
更するが、同等の結果が得られる。

例■の複合物を経口的に摂取して、鉛を確実に除去する
。例■ ガンマグロブリンを含有するＬＭＳを前に開示したよう
な方法で製造し、そしてウィルス性肝炎をわずらつてい
る患者と接触する被実験者に投与する。

約０．０２ｍ１／Ｋ９のガンマグロブリンを含むＬＭＳ
投与量は、肝炎Ａに対して少なくとも一時防御するのに
十分である。慢性肝炎を、ＪＯＯｍ９までのアザチオプ
リンを含有する例■の方法で製造したＬＭＳ懸濁液を注
射することにより、本発明の方法て治療する。

アサチオプリンーＬＭＳの投与を１ケ月の期間医師の注
射により行うとは、慢性の活性肝炎を処理するのに有効
な手段てある。例■のアサチオプリンーＬＭＳを経口投
与すると、良い結果が得られる。

例■ 例１（７）ＬＮ４Ｓ複合物を、Ｔｃ放射性核種をそれぞ
れ５−フルオロウラシル、アクチノマイシンＤ１および
メソトレキセートで置き換えることにより変更する。

優れた肝臓細胞ターゲット剤が得られる。例■ ビタミンＤ（４０００１Ｕ）を超音波処理したＤＳＬ一
ＤＧＤＧ−コレステロール（９６％：３％：１％）脂質
膜構造体で被包化し、そして本発明て開示した方法で静
脈内投与すると、肝臓に特定的に指向される。

例■ 人間の白血球培養物から製造したインターフエロンを、
以下のようにしてＤＳＬ−ＤＧＤＧ脂質膜構造体に添加
する。

インターフエロンは種々の方法で得られる（Ｇｒｅｅｎ
他によるＳｃｉｅｎｃｅ上江、１４１５頁、１９６９年
、ＷｈｅｅｌＯｃｈによるＳｃｊｅｎｃｅ↓坦、３１０
頁、１９６５年、ＲｉｃｈｍＯｎｄによるＡｒｃｈｉｖ
ｆｕｒｄｉｅＧｅｓａｍｔｅＶｌｒｕｓｆＯｒｓｃｈｕ
ｎｇａ−、２８２頁、１９６９年、およびＦｒｉｅｎｄ
ｍａｎ他によるＰｒＯｃ．ＳＯｃ．Ｅｘｐｔｌ、ＢｉＯ
ｌ．Ｍｅｄ．ム９０１頁、１９６７年）。

以下の好ましい方法は、０人間のウィルス感染の治療お
よび予防のためのインターフエロンの製造および使用ョ
１９Ｂ年５月、ＴｉｓｓｕｅＣｕｉｔｕｒｅＡｓｓＯｃ
ｊａｔｉＯｎ発行、１２１１ＰａｒｋＩａｗｎＤｒｊｖ
ｅ．．Ｒ０ｃｋｖ１１１ｅ．．Ｍａｒｙ１ａｎｄ２０８
５２、に完全に記載されている。報告された方法は下記
の段階からなる。（正確な詳細を知るためには、原文を
参照することができる。）（１）０．４エチレンジアミ
ン四酢酸塩（ＥＤＴＡ）ＰＨ７．２、中の゜“軟膜゛の
収集および貯槽。

（２）４゜Ｃにて一夜貯蔵。（３）１０容量の０．８３
％ＮＩｌｌＣｌ、４ＴＣにて１０分間処理。

（４）ＭＳＥ３ＯＯバスケット遠心分離機で１２００ｒ
′Ｐｍｌ毎分５００ｍ１にて遠心分離。

２（５）０．５％のＥＤＴＡおよび１ｍＬ当り２５μｙ
のネオマイシンを含有するリン酸塩緩衝食塩水（ＰＢＳ
）中への細胞の再懸濁。

（６）上記の如くＮＨ４Ｃｌにて再処理。

（７） （ＮＨ４）２Ｓ０４処理した人間血清を４％、
１ｍ１当り３ｍ９のトリジンおよび２５μｑネオマイシ
ンを追加したイーグルの最低必須媒体（リン酸塩緩衝剤
を含まない）中への細胞の再懸濁。

（８）上記媒体を用いて細胞濃度を１ｍｔ当り１０７に
調整。

ノ（９）３７．５℃の水浴内で磁気攪拌器上の２〜６ｆ
丸底フラスコ中にて細胞の保温。

このフラスコは少なくとも５０％の空間を有しそして金
属薄片で覆われている。（１０）１ｍ１当り１０師位の
白血球インターフエロンの添加。

（１１）１７ｒＬ１当り１００血球凝集（ＨＡ）単位の
センダイーウイルスを２時間後に添加。

（１２）３７．５゜Ｃにて２（２）間保温。

（１３）２０００ｒ′Ｐｍにて４吟間遠心分離。上澄液
は粗製インターフエロンてある。連続流遠心分離で、１
日当り１４０〜２１０の軟膜の処理がてきる。

最適な収率を得るには、媒体中に血清又は力ティンが連
続的に存在することが必要である。上に開示したＬＭＳ
製造法に従つて、前記の方法で製造したインターフエロ
ンを含む実質的に球状の（平均粒径範囲２５０Ａ〜約３
０００Ａ）小胞か製造される。

小胞の壁は約９６％のＤＳＬおよび約４％のＤＧＤＧを
含む。人体、特にウィルス性肝炎の治療が必要な人体、
に投与するのは適当な代表的インターフエロン／小胞製
剤は、小胞担体楕円体１ｍｇ当り約１００００〜約１０
００００瞳位のインターフエロンを含有する。別の態様
においては、例■の小胞の製造に使用したＤＳＬを、そ
れぞれ等量のジパルミトイルホスフアチジルコリン、ス
テアリルアミンおよびスフィンゴミエリンで置き換える
。

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １ 下記の（Ａ）および（Ｂ）を含むことを特徴とする
   複合物。 （Ａ）薬剤または診断用剤の第一構成分。 （Ｂ）大部分の極性脂質の少部分のジガラクトシルジグ
   リセリドとの混合物を含む脂質膜構造体から成る第二構
   成分。 ただし、この脂質膜構成体は平均粒子の大きさが約２５
   ０〜約３０００オングストロームの範囲内にある小胞あ
   るいは脂肪小体の形状である。 ２ 約９０〜約９９．５重量％の極性脂質および約０．
   ５〜約１０重量％のジガラクトシルジグリセリドを含む
   、特許請求の範囲第１項に記載の複合物。 ３ 約９５〜約９９重量％の極性脂質および約１〜約５
   重量％のジガラクトシルジグリセリドを含む、特許請求
   の範囲第２項に記載の複合物。 ４ 極性脂質がジアルカノイルレシチンを含む、特許請
   求の範囲第１項に記載の複合物（ただし、アルカノイル
   基は各々約１２〜約２０個の炭素原子を含む）。 ５ アルカノイル基がパルミトイルおよびステアロイル
   から選ばれる、特許請求範囲第４項に記載の複合物。 ６ 極性脂質がジステアロイルレシチンである、特許請
   求の範囲第５項に記載の複合物。 ７ 脂質膜構造体が約９４〜約９７重量％のジステアロ
   イルレシチンと約３〜約６重量％のジガラクトシルジグ
   リセリドとの混合物を含む、特許請求の範囲第１項に記
   載した複合物。 ８ 小胞あるいは脂肪小体が約７５０〜約３０００オン
   グストロームの大きさ範囲内にある、特許請求の範囲第
   ７項に記載した複合物。 ９ 脂質膜構造体の付加成分として安定量のコレステロ
   ールを含む、特許請求の範囲第１項または第７項に記載
   した複合物。 １０ 第一構成分が放射性核種を含む、特許請求の範囲
   第１、７または８項に記載した複合物。 １１ 放射性核種がテクニチウム−９９ｍ、タリウム−
   ２０１、インジウム−１１３ｍ、インジウム−１１１、
   フッ素−１８、ストロンチウム−８５およびヨウ素−１
   ２５から選ばれる、特許請求の範囲第１０項に記載した
   複合物。 １２ 第一構成分が重金属キレート化剤である、特許請
   求の範囲第１、７または８項に記載した複合物。 １３ 重金属キレート化剤がエチレン−ジアミンテトラ
   アセテート類およびジエチレントリアミンペンタアセテ
   ート類から選ばれる、特許請求の範囲第１２項に記載し
   た複合物。 １４ 第一構成分がインシュリンまたはインシュリン誘
   導体を含む、特許請求の範囲第１項に記載した複合物。 １５ 約９０〜約９９．９重量％の極性脂質および約０
   ．１〜約１０重量％のジガラクトシルジグリセリドを含
   む、特許請求の範囲第１４項に記載したインシュリン複
   合物。１６ 約９５〜約９９重量％の極性脂質および約
   １〜約５重量％ジガラクトシルジグリセリドを含む、特
   許請求の範囲第１５に記載したインシュリン複合物。 １７ 極性脂質がジアルカノイルレシチンである、特許
   請求の範囲第１４項に記載したインシュリン複合物（た
   だし、アルカノイル基は各々約１２〜約２０個の炭素原
   子を含む）。 １８ アルカノイル基がパルミトイルおよびステアロイ
   ルから選ばれる、特許請求の範囲第１７項に記載したイ
   ンシュリン複合物。 １９ 極性脂質がジステアロイルレシチンである、特許
   請求の範囲第１８項に記載したインシュリン複合物。 ２０ 脂質膜構造体が約９４〜約９７重量％のジステア
   ロイルレシチンと約３〜約６重量％のジガラクトシルジ
   グリセリドとの混合物を含む、特許請求の範囲第１４項
   に記載したインシュリン複合物。 ２１ 小胞あるいは脂肪小体が約７５０〜約３０００オ
   ングストロームの大きさ範囲内にある、特許請求の範囲
   第２０項に記載したインシュリン複合物。 ２２ 付加成分として安定量のコレステロールを含む、
   特許請求の範囲第１４項または第２１項に記載したイン
   シュリン複合物。 ２３ 第一構成分がインターフェロンを含む、特許請求
   の範囲第１項に記載した複合物。 ２４ 約９０〜約９９．９重量％の極性脂質および約０
   ．１〜約１０重量％のジガラクトシルジグリセリドを含
   む、特許請求の範囲第２３項に記載したインターフェロ
   ン複合物。 ２５ 約９５〜約９９重量％の極性脂質および約１〜約
   ５重量％のジガラクトシルジグリセリドを含む、特許請
   求の範囲第２４項に記載したインターフェロン複合物。 ２６ 極性脂質がジアルカノイルレシチンを含む、特許
   請求の範囲第２３項に記載したインターフェロン複合物
   （ただし、アルカノイル基は各々約１２〜約２０個の炭
   素原子を含む）。２７ アルカノイル基がパルミトイル
   およびステアロイルから選ばれる、特許請求の範囲第２
   ６項に記載したインターフェロン複合物。 ２８ 極性脂質がジステアロイルレシチンである、特許
   請求の範囲第２７項に記載したインターフェロン複合物
   。 ２９ 脂質膜構造体が、約９４〜約９７重量％のジステ
   アロイルレシチンと約３〜約６重量％にジガラクトシル
   ジグリセリドとの混合物を含む、特許請求の範囲第２３
   項に記載したインターフェロン複合物。 ３０ 小胞あるいは脂肪小体が約７５０〜約３０００オ
   ングストロームの大きさ範囲内にある特許請求の範囲第
   ２９項に記載したインターフェロン複合物。 ３１ 付加成分として安定量のコレステロールを含む、
   特許請求の範囲第２３項または第２９項に記載したイン
   ターフェロン複合物。 ３２ 人間または低級動物への注射に適切な薬学的に許
   容される発熱物質不含電解質水溶液中に下記の（Ａ）お
   よび（Ｂ）を含むことを特徴とする複合物。 （Ａ）薬剤または診断用剤の第一構成分。（Ｂ）大部分
   の極性脂質と少部分のジガラクトシルジグリセリドとの
   混合物を含む脂質膜構造体から成る第二構成分。 ３３ 脂質膜構造体が約９４〜約９７重量％のジステア
   ロイルレシチンと約３〜約６重量％のジガラクトシルジ
   グリセリドとの混合物を含む、特許請求の範囲第３２項
   に記載した複合物。 （ただし、脂質膜構造体は、平均粒子の大きさが約１０
   μおよびこれ未満の範囲内にあることにより特徴づけら
   れる小胞あるいは脂肪小体の形状である）３４ 第一構
   成分がインシュリンまたはインシュリン誘導体を含む、
   特許請求の範囲第３２項に記載した複合物。 ３５ 脂肪膜構造体が、約９４〜約９７重量％のジステ
   アロイルレシチンと約３〜約６重量％のジガラクトシル
   ジグリセリドとの混合物を含む、特許請求の範囲第３４
   項に記載したインシュリン複合物。 （ただし、脂質膜構造体は、平均粒子の大きさが約１０
   μおよびこれ未満の範囲内にあることにより特徴づけら
   れる小胞あるいは脂肪小体の形状である。）３６ 小胞
   あるいは脂肪小体が約２５０〜約３０００オングストロ
   ームの大きさ範囲内にある特許請求の範囲第３５項に記
   載したインシュリン複合物。 ３７ 第一構成分がインターフェロンを含む、特許請求
   の範囲第３２項に記載した複合物。 ３８ 脂肪膜構造体が、約９４〜約９７重量％のジステ
   アロイルレシチンと約３〜約６重量％のジガラクトシル
   ジグリセリドとの混合物を含む、特許請求の範囲第３７
   項に記載したインターフェロン複合物。 （ただし、脂肪膜構造体は、平均粒子の大きさが約１０
   μおよびこれ未満の範囲内にあることにより特徴づけら
   れる小胞あるいは脂肪小体の形状である。）３９ 小胞
   あるいは脂肪小体が約２５０〜約３０００オングストロ
   ームの大きさ範囲内にある、特許請求の範囲第３８項に
   記載したインターフェロン複合物。