JPS6049256B2 - 蛋白質分析用詩薬 - Google Patents

Description

【発明の詳細な説明】 本発明は蛋白質分析用試薬に関する。

従来蛋白質分析用試薬としては特開昭５３−２５４９吋
公報に記載された試薬が知られいる。

斯・かる蛋白質分析用試薬は式で表わされる染料とＰＫ
ａＯ〜４の酸とからなるものである。

該試薬はそれ自身茶褐色を呈しているが、該試薬と蛋白
質を含有するサンプルとを混合すると式（１）で表わさ
れる染料が蛋白質と結合して混合液は青色に変色する。
そしてその混合液の呈色度合を吸光度によつて求めその
値からサンプル中に含有される蛋白質の量を測定しよう
とするものである。しかしながら特開昭５３−２５４９
０号公報に記載の蛋白質分析用試薬には下記（１）〜（
３）に示す難点がある。（１）式（１）で表わされる染
料と蛋白質とが結合して得られる蛋白質一染料錯体を含
む混合液は安定性に乏しく、時間の経過と共に混合液の
呈色度合が変化し、その為に蛋白質分析用試薬とサンプ
ルとを混合してから何分後に吸光度を測定するかによつ
て測定される蛋白質量が異な．り、サンプル中に含有さ
れている蛋白質の量を正確に定量するのが困難になる。

（２）蛋白質分析用試薬とサンプルとを混合する際の撹
拌又は振盪の程度により混合液の呈色度合が異なりそれ
故吸光度も異なつてくる。

これは！攪拌又は振盪条件を常に一定に維持することに
より解消し得るように思われるが、測定者の間に個人差
もあり攪拌又は振盪条件を常に一定に保つことは困難で
ある。その為に蛋白質の量を正確に定量するのが困難に
なる。 ４（３）蛋白質分析用試薬は広範囲
の異なる蛋白質に感応するが、その感応の程度（感度）
には大小のばらつきがあり、そのために吸光度と蛋白質
量との関係を示す検量線の傾きは各種蛋白質にダ より
異なソー定していない。それ故サンプル中に含まれてい
る蛋白質が一種でありしかもその蛋白質種が明らかであ
る場合には、その蛋白質を用いて予め作成した検量線か
らサンプル中に含有されている蛋白質量を精度よく定量
し得るノ が、サンプル中に含まれている蛋白質が二種
以上である場合やサンプル中に含まれている蛋白質が一
種てあつてもその蛋白質種が不明である場合には、各種
蛋白質を用いて作成される種々の検量線のうちどの検量
線を基準に定めるかによつて、決定されるべきサンプル
中の蛋白質量が異なり、精度よく蛋白質を定量すること
が困難になる。このように特開昭５３−２５４９吟公報
に記載の蛋白質分析用試薬には種々の難点があり、それ
らの難点を有さない蛋白質分析用試薬の開発が望まれて
いるのが現状である。

本発明者らは斯かる現状に鑑み上記（１）〜（３）の難
点を有することのない蛋白質分析用試薬を開発すべく鋭
意研究を重ねてきた。

その結果上記式（１）で表わされる染料と酸とからなる
混合物にメチルセルロースを配合した場合に所望の蛋白
質分析用試薬が得られることを見い出した。本発明は斯
かる知見に基づき完成されたものてある。本発明の蛋白
質分析用試薬は、特開昭５３−２５４（社）号公報に記
載の蛋白質分析用試薬の有する利点をそのまま保持し、
しかも該試薬の有する上記（１）〜（３）の難点を解消
したものてある。即ち本発明試薬は、サンプル中に共存
する物質の影響を受けにくく、サンプル中に含有される
各種蛋白質を再現性よく優れた検出感度で定量すること
ができる。また本発明試薬とサンプルとを混合して生成
する蛋白質一染料錯体を含む混合液は極めて安定である
。従つて本発明試薬とサンプルとを混合してから３時間
経過した場合においてもサンプル中二に含有されている
蛋白質の量を正確に定量し得る。また本発明試薬を使用
することにより臨床検査上要求される大量のサンプル処
理が可能になる。また本発明試薬とサンプルとを混合す
る際の攪拌又は振盪条件が変化しても混合液の呈色度合
１は極めて変化を受けにくく、その為に吸光度も一定し
ている。従つて本発明試薬とサンプルとを混合する際の
攪拌又は振盪条件が異なつた場合においてもサンプル中
に含有されている蛋白質の量を正確に測定することがで
きる。さらに本発明試薬５は、広範囲の異なる蛋白質の
いずれにも感応し、しかも各種蛋白質に対する感度もよ
く一定しており、そのために各種蛋白質の検量線の傾き
は極めて近似している。それ故サンプル中に含まれてい
る蛋白質が一種てありしかもその蛋白質が明らか４であ
る場合は勿論のこと、サンプル中に含まれている蛋白質
が二種以上である場合やサンプル中に含まれている蛋白
質の種類が不明である場合においても、サンプル中の総
蛋白質量を精度よく測定し得る。加えて本発明試薬自身
の吸収曲線を測定したときの蛋白質測定波長での吸光度
（ブランク値）は低く、そそのためにサンプル中の蛋白
質含有量が多い場合においてもシングルビームの比色計
を使用できる。本発明試薬は上述した通り種々の利点を
有し、その為特に蛋白質が低濃度で含有されているサン
プルを定量した場合にも極めて良好な結果を得ることが
できる。本発明試薬において色調を変化させる活性成分
は上記式（１）て表わされる公知の染料即ちクーマシイ
ブリリアント ブルー（ＣＯＯｍａｓｓｊｅＢｒｉｌ
ｌｊａｎｔＢ］Ｕｅ）Ｇ−２５０である。

本発明試薬中に含有させるべき式（１）の染料の配合量
としては通常本発明試薬中に０．００４〜０．０２％（
ｗ／ｖ）、好ましくは０．００８〜０．０１４％含有さ
れるように式（１）の染料を配合すればよい。本発明試
薬においてはメチルセノレロースが配合される。

メチルセルロースの配合量としては通常本発明試薬中に
０．０１〜０．５％（ｗ／ｖ）、好ましくは０．０１〜
０．１％、特に好ましくは０．０１〜０．０３％程度含
有されるようにメチルセルロースを配合すればよい。本
発明試薬中に配合される酸としては公知のものを広く使
用でき、具体的には過塩素酸、塩酸、硫酸、過沃素酸、
りん酸、亜りん酸、セレン酸、亜硫酸等の無機酸や蓚酸
、マレイン酸、、トリクロル酢酸、ジクロル酢酸等の有
機酸を例示できる。上記酸のうちＰＫａが０〜４の酸が
好ましく、ＰＫａが１〜２の酸が特に好ましい。ＰＫａ
がＯ〜４の酸のうち過沃素酸、りん酸、亜りん酸、セレ
ン酸、亜硫酸、マレイン酸、蓚酸、ジクロル酢酸等が好
ましく、りん酸、蓚酸等が特に好ましい。本発明試薬の
液性は通常酸性であればよく、好ましくはそほのＰＨが
０．５〜２．＼特に好ましくは０．７〜０．９である。
酸の配合量としては用いられる酸の種類により異なソー
概には言えないが、上記ＰＨとなるように適宜配合すれ
ばよい。式（１）の染料、メチルセルロース及び酸は例
えば水性媒体、好ましくは水に添加される。

これら成分の添加順序としては特に限定がなく、例えば
これらの成分を同時に水に添加してもよいし、これら成
分をそれぞれ水に添加した後これらを混合してもよい。
本発明試薬には試薬のＰＨを安定させるために通常の緩
衝剤を適量添加してもよい。

また本発明試薬には適当な溶媒、例えばメタノール、エ
タノール等の低級アルコール類、ジメチルスルホキシド
、ジメチルホルムアミド、ヘキサメチルリン酸トリアミ
ド等を適量添加してもよい。ノ 本発明試薬は広範囲の
異なるタイプの蛋白質に対して優れた感度を示す。

斯かる蛋白質としては例えばアルブミン（人血清アルブ
ミン、牛血清アルブミン）、グロブリン（人血清γ−グ
ロブリン、ウサギγ−グロブリン）、ヘモグロビン（牛
７ヘモグロビン）、キモトリプシノゲンＡ１α−キモト
リプシン、チトクロームＣ１α−アミラーゼ、カタラー
ゼ、フィブリノーゲン、ヒストン、ヘモシアニン、ペプ
シン、トランスフエリン、トリプシン等を挙げることが
できる。θ 本発明試薬を用いてサンプル中に含有され
ている蛋白質を定量するに際し、本発明試薬の使用量と
してはサンプル中の蛋白質の量によつて異なソー概には
言えないが、蛋白質が本発明試薬中の式（１）の染料に
より完全に捕捉されるような割合で本発明試薬を用いる
のがよい。

例えば定量すべきサンプル中に蛋白質が０〜２００μｇ
含有されている場合には０．００４〜０．０２％（ｗ／
ｖ）の染料を含有する本発明試薬を３〜５ｍ１程度用い
るのがよい。本発明試薬は茶色に着色されているが、式
（１）の染料が蛋白質と結合すると本発明試薬とサンプ
ルとの混合液は青色に呈色される。

蛋白質一染料錯体を含有する混合液は極めて安定であり
、該混合液を３時間以上という長時間に亘つて放置した
場合においても呈色度合は極めて変化しにくい。また蛋
白質一染料錯体の上記混合液中における濃度が増えるに
つれて青の呈色度合はより強くなる。それ故本発明試薬
とサンプルとの混合液の呈色度合を測定することにより
サンプル中に含有されている蛋白質を定量することがで
きる。該混合液の呈色度合を測定する方法としては特に
制限されず従来この分野て慣用されている方法を広く適
用できる。而して例えば分光光度計や５８５〜５９５ｎ
ｍの領域の波長の吸収を測定できるような−比色計等の
光学機器により混合液の呈色度合を容易に測定できる。
より具体的には、例えば分光光度計により混合液の吸光
度を測定し、予め標準サンプルを用いて作成した検量線
からサンプル中に含有されている蛋白質の量を読み取る
ことができ，る。測定の際に用いられるスペクトルの波
長としては一般に５８５〜５９５ｎｍ１好ましくは５９
０ｒ１ｍ程度とするのがよい。本発明では本発明試薬と
サンプルとを混合した後、この混合液を試料として分光
光度計による測定に用いることができる。本発明試薬は
尿、血清、髄液、食品、その他生物学的に誘導された液
体やこれらの抽出物中の蛋白質の検出に好適に用いられ
る。

以下に実施例を挙けて本発明をよソー層明らかにする。

尚実施例にて比較較のために用いられて３いるバイオ・
ラット●プロテイン●アツセイ●キット〔商標、バイオ
・ラット・ラボラトリイーズ社製〕は特開昭５３−２５
４９吟公報に記載の試薬と同一のものであり、下記実施
例ではこの市販品を５倍に希釈し、次いでこれをろ過し
たもの（以下４これを１ＢＲキット希釈液ョという）を
使用した。実施例１ 精製水に蓚酸を添加し、３吟間加温攪拌後室温まで冷却
して１．９Ｍ／′の蓚酸水溶液を調製する。

以下で使用する蓚酸水溶液は斯かる蓚酸水溶液の上澄で
ある。

精製水を沸騰させ、最終濃度（本発明の蛋白質分析用試
薬中における濃度）が０．０２５Ｗ／■％となるように
メチルセルロース〔商標メトローズ６０ＳＨ５０１信越
化学（株）製〕を加え、１紛間攪拌後等量の冷却した精
製水を加えてメチルセルロースノ水溶液を調製する。

次に上記メチルセルロース水溶液７５ＴｒＬＬにクーマ
シイブリリアント ブルーＧ２５Ｏ〔商標、シグマ社製
〕２０ｍ９を溶解し、この溶液に蓚酸水溶液７５ｍ１を
混合する。

混合液を２回Ｐ過し、得られる沖液を本発明の蛋白質分
析用試薬とする。実施例２ 実施例１の試薬３ｍ１と標準サンプル（予め人血清アル
ブミンを０．１ｍｇ／ｍｌ〜１．０ｍ９／Ｍｔの割合と
なるように配合したもの）５０Ｐｅとを混合する。

１０分後に分光光度計〔ヒタチ１２榛分光光度計、日立
製作所製〕を用い、５９０ｒ１ｍの波長にて吸光度を測
定し検量線を作成する。

得られる検量線を第１図に示す。次に正常人又は腎疾患
のある患者の尿を採取し、上記標準サンプルに代えて該
尿５０Ｐｅを用いる以外は上記と同様にして吸光度を測
定する。

尿は必要ならば測定濃度範囲内にある様に希釈しておく
。測定された吸光度及び検量線から尿中の蛋白質量を求
める。その結果を第１表に示す。実施例３実施例１の試
薬３ｍ１と人血清アルブミン５０ｍｇ／Ｄｅの割合で含
有するサンプル中５０μｌとを混合する。

この混合は手で５回振盪することにより行なう。混合し
てから５分後〜３時間後における混合液の吸光度を５９
０ｎｍて測定する。混合後の時間と吸光度との関係を第
２図に示す。比較のためにＢＲキット希釈液５ｍＬと人
血清アルブミン５０ｍ９／Ｄｆの割合で含有するサンプ
ル１００Ｐｅとを上記と同様にして混合し、吸光度を５
９５ｎｍて測定する。

混合後の時間と吸光度との関係を第３図に示す。第２図
及び第３図より次のことがわかる。

本発明試薬とサンプルとの混合により速やかにクーマシ
イ ブリリアント ブルーＧ２５Ｏ一人血清アルブミン
錯体が生成する。該錯体を含有する混合液は３時間後に
おいても極めて安定であり、吸光度も一定している。こ
れに対してＢＲキット希釈液とサンプルとの混合液の場
合には、吸光度がほぼ一定している期間はわすかに混合
液の５ 〜３紛間程度てあり、それ以降は時間の経過と
共に吸光度がかなり減少する。本発明試薬とサンプルと
の混合液の安定性はＢＲキット希釈液とサンプルとの混
合液のそれに比し６倍以上に優れたものである。

実施例４ 人血清アルブミンを含有するサンプル（サンプルと実施
例１の試薬との混合液中における濃度が１８ｍｇ／ｄｌ
となるように人血清アルブミンを調製したもの）を５０
ｐ１すつ採取し、５検体を用異する。

この５検体のそれぞれに実施例１の試薬３ｍ１を加え、
手て５回振盪する。５分後に５９０１１ｍの波長て吸光
度を測定する。

得られる結果を第２表に示す。まやた上記と同様にして
異なる濃度で人血清アルブミンを含有するサンプル（サ
ンプルと実施例１の試薬との混合液中における濃度が７
５ｍ９／ｄｌとなるように人血清アルブミンを調整した
もの）を用いる以外は上記と同様にして吸光度を測定す
る。結果を第２表に併せて示す。また人血清アルブミン
を含有するサンプル（サンプルとＢＲキット希釈液との
混合液中における濃度が１８ｍｇ／ｄｌ又は７５ｍｇ／
Ｄｅとなるように人血清アルブミンを調製したもの）１
００Ｐｅを採取すること及びＢＲキット希釈液５ｍ１を
用いる以外は上記と同様にして吸光度を測定する。

その結果を第３表に示す。第２表及び第３表におけるＹ
は検体を５回測定して得られる吸光度の平均値であり、
ＳＤは標準偏差であり、またＣＶは次式により求められ
るばらつきである。

第２表及び第３表から次のことがわかる。

本発明試薬を用いた場合には、低濃度及び高濃度におけ
るはらつき（ＣＶ）はそれぞれ１．３％、０．６％であ
り、これにし対してＢＲキット希釈液を用いた場合には
、低濃度及び高濃度におけるばらつき（ＣＶ）はそれぞ
れ４．７％、２．８％であり、本発明試薬を用いた場合
のばらつきはＢＲキット希釈液を用いた場合のそれに比
し極めて小さい。それ故上記結果は本発明試薬を用いる
とＢＲキット希釈液を用いる場合に比しより正確に蛋白
質含有量を定量し得ることを示している。実施例５ 人血清アルブミンを含有するサンプル（サンプルと実施
例１の試薬との混合液中における濃度が１８ｍｇ／Ｄｅ
となるように人血清アルブミンを調製したもの）を５０
ｐ′ずつ採取し、５検体を用意する。

この５検体のそれぞれに実施例１の試薬３Ｔｎｔを加え
、次いでボルテツクスージエニー モデルＫ−５５６Ｇ
（ＶＯｌｔｅｘ−ＧＥＮＩＥＭＯｄｅｌＫ−５５６Ｇ）
〔商標、サイエンテイフイツクインダストリイーズ イ
ンコーポレーテツド製〕を用いスピード目盛にて５秒間
攪拌し放置する。放置してから５分後の時点、３時間後
の時点及び３時間後に再びスピード目盛２にて５秒間攪
拌し次に５分間放置した時点において５９０ｒ１ｍの波
長で吸光度を測定する。得られた結果を第４表に示す。
スピード目盛２に代えてスピード目盛５にて攪拌する以
外は上記と同様にして吸光度を測定する。得られる結果
を第５表に示す。またスピード目盛２に代えてスピード
目盛８にて攪拌する以外は上記と同にして＊＊吸光度を
測定する。得られる結果を第６表に示す。また人血清ア
ルブミンを含有するサンプル（サンプルとＢＲキット希
釈液との混合液中における濃度が１８ｍｇ／ｄ′となる
ように人血清アルブミンを調整したもの）１００μ′を
採取すること及びＢＲキット希釈液５ｍ１を用いる以外
は上記と同様にしてスピード目盛２，５又は８にて攪拌
し、５９５ｎｍの波長で吸光度を測定する。

スピード目盛２の攪・拌条件下に得られる結果を第７表
に、スピード目盛５の攪拌条件下に得られる結果を第８
表に、スピード目盛８の攪拌条件下に得られる結果を第
９表にそれぞれ示す。第４表乃至第９表に於ける測定条
件Ａ，Ｂ及びＣは次の通りである。

Ａ：放置してから５分後に吸光度を測定 Ｂ：放置してから３時間後に吸光度を測定Ｃ：放置して
から３時間経過した時点で、再び 同一のスピード目盛
にて５秒間攪拌し次に ５分間放置してから吸光度を測
定第４表乃至第９表に示す結果から次のことが明らかで
ある。

ます第４表の測定条件Ａ，Ｂ，Ｃにおける各吸光度（計
比個のデータ）から又、ＳＤを求め、これらの値からＣ
Ｖ値を算出すると、Ｃ■（％）＝３．３となる。

また第５表、第６表、第７表、第８表及び第９表の測定
条件Ａ，Ｂ，Ｃにおける各吸光度からそれぞれＸ，ＳＤ
を求めＣＶ値を算出するとそれぞれ５．１，５．４，１
２．５，１３．３，１３．６となる。このように本発明
試薬を用いた楊合のＣＶ値（３．３，５．１及ひ５．４
）はＢＲキット希釈液を用いた場合のＣＶ値（１２．５
，１３．３及び１３．６）に比し極めて小さく、このこ
とから本発明試薬とサンプルとの混合液が経時変化を受
けず長時間安定であることがわかる。次に第４表、第５
表、及び第６表の測定条件Ａ，Ｂ，Ｃにおける各吸光度
（計４５個のデータ）よりＹ＝０．１５８．ＣＤ＝０．
００８が求まり、ＣＶ値を算出すると４．９となる。

これに対して第７表、第８表及ひ第９表の測定条件Ａ，
Ｂ，Ｃにおける各吸光度（計４５個のデータ）よりＹ＝
０．２９９、ＳＤ＝０．０３９が求まり、ＣＶ値は１３
．０となる。このことから本発明試薬を用いる場合の方
がＢＲキット希釈液を用いる場合に比し、サンプル中の
蛋白質含有量を極めわて正確に定量でき、また現在臨床
上要求される大量サンプルを簡便な流れ作業の作にてい
ち早く処理することができる。実施例６ 人血清アルブミン、牛血清アルブミン、牛ヘモグロビン
又は人血清γ−グロブリンを種々の濃度て含有する標準
サンプルを調整する。

実施例１の試薬３ｍＬに人血清アルブミンを含有する標
準サンプル５０Ｐｅを加え５回振盪し、５９０ｎｍの波
長で吸光度を測定し検量線を作成する。同様にして牛血
清アルブミン、牛ヘモグロビン、人血清γ−グロブリン
についても検量線を作成する。斯くして作成される検量
線を第４図に示す。またＢＲキット希釈液５ｍ１に人血
清アルブミン．を含有する標準サンプル１００ｐ′を加
え５回振盪し、５９５ｎｍの波長で吸光度を測定し検量
線を作成する。

牛血清アルブミン、牛ヘモグロビンについても同様にし
て検量線を作成する。斯くして作成される検量線を第５
図に示す。 ；第４図及び第第５図に
おける・印を結ふ曲線は人血清アルブミンについての検
量線であり、Ａ印を結ぶ曲線は牛血清アルブミンについ
ての検量線であり、Δ印を結ぶ曲線は牛ヘモグロビンに
ついての検量線であり、またＸ印を結ぶ曲線は人血清４
γ−グロブリンについての検量線である。第４図及び第
３図から次のことがわかる。

本発明試躍及びＢＲキット希釈液はいずれも各種蛋白質
と反応するが、本発明試薬の場合は各種蛋白質との反応
性がほぼ同程度であり、そのために各種蛋白質の検量線
の傾きが極めて近似している。それ故サンプル中に含有
されている蛋白質が１種であり且つその蛋白質種が明白
である楊合には本発７明試薬及びＢＲキット希釈液のい
ずれを用いても問題はないが、サンプル中に含有されて
いる蛋白質種が未知てある場合や含有されている蛋白質
種が２種以上である場合は、本発明試薬を用いることに
よりサンプル中に含有されている総蛋白質をθＢＲキッ
ト希釈液を用いる場合に比しより精度よく定量し得ると
いうことができる。実施例７ 実施例１の試薬の３９０ｎｍ〜７３０ｒ１ｍの波長にお
ける吸光度を測定し、吸収曲線を作成する。

この吸５収曲線を第６図に示す。またＢＲキット希釈液
の４１０ｒ１ｍ〜７００ｎｍの波長における吸光度を測
定し、吸収曲線を作成する。この吸収曲線を第７図に示
す。第６図及び第７図から次のことがわかる。

蛋白ノ質定量用波長における本発明の試薬自身の吸光度
（ブランク値）は、ＢＲキット希釈液のそれに比し約１
ノ２である。このためにＢＲキット希釈液を用いて吸光
度を測定するに際し、ダブルビームの吸光光度計を使用
する場合には問題を生じないが、シングルビームの吸光
光度計を使用する場合で特に測定されるべきサンプル中
に含有される蛋白質濃度が高い場合には精度が悪くなる
。これに対して本発明試薬を用いる場合には、シングル
ビームの吸光光度計を使用する時でも極めて精度よくサ
ンプル中の蛋白質を定量することができる。実施例８ 蒸留水適量を７０℃に加熱し、次いでメチルセルロース
〔商標メトローズ６０ＳＨ５０、信越化学（株）製〕０
．４ｑを加えて攪拌し、更にクーマシイブリリアント
ブルーＧ２５Ｏ〔商標、シグマ社製〕０．２４ｑ、濃塩
酸２７．４ｍ１及び無水酢酸ナトリウム７．３８Ｖを加
えて攪拌後、蒸留水を加えて全量量を１ｅとする。

この混合液を更に攪拌し、一昼夜放置後沖過し、得られ
る胛液を本発明の蛋白質分析用試薬とする。上記で得ら
れる試薬の３７０ｒ１ｍ〜７５０ｒ１ｍの波長における
吸光度を測定し、吸収曲線を作成する。

この吸収曲線を第８図に示す。比較例１ メチルセルロースの代りにＴｗｅｅｎ−２０〔和光純薬
（株）製〕を４ｍＬ又は４００μｅを用いる以外は、上
記実施例８と同様にして蛋白質分析用試薬を得る。

得られる試薬の３７０ｒ１ｍ〜７５０ｒ１ｍの波長にお
ける吸光度を測定し、吸収曲線を作成する。

この吸収曲線を第９図に示す。比較例２ メチルセルロースの代わりにＮＯＮＩＤＥＴ−Ｐ一４０
〔ＢＩＴＨＥＳＲＡＲＥＳＥＲＣＨＬａｂ．製〕を４ｍ
１又は４００μ′を用いる以外は、上記実施例８と同様
にして蛋白質分析用試薬を得る。

得られる試薬の３７０ｎｍ〜７５０ｒ１ｍの波長におけ
る吸光度を測定し、吸収曲線を作成する。

この吸収曲線を第１０図に示す。比較例３ メチルセルロースの代りにＢｒｉｊ３５〔和光純薬（株
）製〕を４ｆ１又は０．４ｙを用いる以外は、上記実施
例８と同様にして蛋白質分析用試薬を得る。

得られる試薬の３７０ｎｍ〜７５０ｎｍの波長における
吸光度を測定し、吸収曲線を作成する。この吸収曲線を
第１１図に示す。比較例４ メチルセルロースの代りにトリトンＸｌＯＯ〔和光純薬
（株）製〕を４ＴｒＬ１又は４００μｌを用いる以外は
、上記実施例８と同様にして蛋白質分析用試薬を得る。

得られる試薬の３７０ｎｍ〜７５０ｎｍの波長における
吸光度を測定し、吸収曲線を作成する。この吸収曲線を
第１２図に示す。第８図〜第１２図から次のことがわか
る。

蛋白定量用波長（５９０ｒ１ｍ）における本発明試薬自
身の吸光度（ブランク値）は低い。これに対して比較例
１〜４の蛋白質分析用試薬は５９０ｒ１ｍで吸収が認め
られ、５９０ｎｍにおける吸光度は著しく高くなる。従
つて比較例１〜４の蛋白質分析用試薬を用いてサンプル
中の蛋白質を測定する場合には、精度が著しく悪くなる
のを避け得ず、本発明の所期の効果が発輝され難くなる
。

【図面の簡単な説明】

第１図は本発明試薬を用いて測定した標準サンプル中の
蛋白質（人血清アルブミン）量と吸光度との関係を示す
図である。

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １ 式 ▲数式、化学式、表等があります▼ で表わされる染料、メチルセルロース及び酸を有効成分
   として含有することを特徴とする蛋白質分析用試薬。 ２ 染料濃度が０．００４〜０．０２％（ｗ／ｖ）であ
   り、メチルセルロースの濃度が０．０１〜０．５％（ｗ
   ／ｖ）である特許請求の範囲第１項記載の試薬。 ３ 染料の濃度が０．００８〜０．０１４％（ｗ／ｖ）
   であり、メチルセルロースの濃度が０．０１〜０．１％
   （ｗ／ｖ）であり、酸がｐＫａ０〜４の酸である特許請
   求の範囲第１項記載の試薬。 ４ ｐＨが０．５〜２．５である特許請求の範囲第２項
   又は第３項に記載の試薬。