JPS605279B2 - 微生物の生産法 - Google Patents

Description

【発明の詳細な説明】

本発明は微生物の生産法に関する。 多くの徴生物は、炭化水素またはその酸素化譲導体ある
いは他の誘導体をそれらの炭素源および／またはエネル
ギー源として利用することができるものであり、そして
このことは既に公知である。こうした微生物の培養によ
って得られる乾燥したビオマス（ｂｉｏｍａｓｓ）はい
よいよたんぱく質が豊富でありそして人間および動物に
対する可能な食料または食料供給源として考慮されてき
た。この問題においては１個の炭素原子を分子中に含有
する有機化合物例えばメタンまたはメタノールを利用す
ることが出来る微生物に特に関心が寄せられる。本発明
の目的はメタノール一利用微生物の改良培養法を提供す
ることにある。したがって本発明はメタノール一利用微
生物をメタノール、同化しうる窒素源および必須鉱物塩
からなる液体の生長媒体中での好気性の条件下でそして
生長するメタノール利用微生物によって製造される物質
を代謝処理しうる１種以上の非ーメタノール一利用微生
物の存在下で生長さすことからなる微生物の生産法を提
供する。 ここで“微生物（ｍｉｃｒｏ−ｏｒｇａｎｉｓｍ）”と
いう用語は広義で、バクテリア（細菌）のみならず、酵
母、菌類およびアクチノマィセト（ａｃｔｉｎｏｍｙｃ
ｅｔｅｓ）などに対して使用される。 メタノール一利用微生物の混合した培養液中にある種の
非ーメタノール一利用微生物が存在すると、協力作用効
果を起し、メタノール一利用微生物が単独で存在する場
合よりもその微生物のより高い生長速度およびより高い
収量をもたらす。こうした混合培養を採用する方法にお
いては、単独の微生物使用に比較して感染に対して高抵
抗力を有しそして起泡の生成も抑制されるというもう１
つの利点を有している。本発明の方法において使用され
る混合培養体は２つの方法の１つにつて得られる。 ‘ａ｝ より少量の非−メタノール一利用微生物と一緒
にメタノール一利用微生物を含有する混合培養体は天然
源から分離される。 こうした混合培養体の隔離および性格は以下参考例１お
よび２において例示する。特に好ましい混合培養体はＪ
ＭＳ７２（参考例２において特定化されるもの）で示さ
れるもので、分離されそして新規な、従来述べられたこ
とのないメタノール一利用微生物“ＥＮ”（ＮＣＩＢ受
入れＮｏ．１１０４０）（徴工研に寄託のための昭和４
乎王２月２０日東京芝西久保巴町郵便局小包引受番号１
０６オ１５２号）（昭和４ｇ壬２月２０日微生物受託番
号 徴工研菌寄第２４８６号）および４つの非−メタノ
ール一利用微生物つまり２種のＰｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ
（ＮＣＩＢＮｏ．１１０１９および１１０２２）、１種
のＡｃｊｎｅｂｂａｃｔｅｒ（ＮＣＩＢＮｏ．１１０１
２０）および１種のＣｍのｂａｃｔｅｒｉｕｍ（ＮＣＩ
ＢＮｏ．１１０２１）からなることがわかった。新規な
メタノール一利用微生物例えば混合培養体ＪＭＳ７２の
成分として上記した１種のものはまた非−メタノール一
利用微生物の不存在下でも生長する。したがって純酔な
培養体例えば新規な微生物の生産法も本発明の範囲に入
る。

【ｂー 好適な混合培養体はまた１種以上の公知の
〆タノール一利用微生物の種族と１種以上の公知の非−
メタノール一利用微生物の種族とを組み合せることによ
って得られる。明かにメタノール一利用微生物は非−メ
タ／ールー利用微生物の生長をささえることが可能な１
種以上の物質を放つ。より好ましいメタノール一利用微
生物は好気性で、グラム陰性で、非一連勤性で、非−胞
子−生成性、榛形状のバクテリア、例えば新規な微生物
“ＥＮ”（ＮＣＩＢ受入れＮｏ．１１０４０）（徴工研
に寄託のための昭和４単羊２月２０日東京芝西久保巴町
郵便局小包引受番号１０６オ１５２号）（昭和４９年２
月２０日微生物受託番号 徴工研菌寄第２４８６号）で
ある。 こうした微生物は優先的にメタノールまたは他のＣ，炭
化水素源を利用する。好適なメタノール利用種族を提供
するバクテリアおよび酵母の類はＰｓｅｕｄｏｍｏｎａ
ｓ、例えばＰｓｅｕｄｏｍｏｎａＳｅ幻ｏｒｑｕｅｎＳ
ＨｙｐｈｏｍｉｃｒｏｂＭｍ、ある種のＶｉｂｒｉｏバ
クテリア、Ｐｉｃｈｉａ、Ｃａｎｄｉｄａ、Ｔｏｍｌｏ
ｐｓｉｓおよび也ｎｓｅｎｕｌａである。好適な非−メ
タ／‐ルー利用種族を提供するバクテリア種の例はＰｓ
ｅｕｄｏｍｏｎａｓ Ａ九ｈｒｏｂａｃ
にｒＣｈｒｏｍｏｂａｃにｒｉ山ｍ 、 Ｍｙｃｏ
ｂａｃｔｅｒｉｕｍ 、Ａｃｈｒｏｍｏｂａｃｔａ
ＡｃｉｎｅｔｏｂａｃｔｅｒＣｍｔｏ礎ｃ
ｔｅｒｉｕｍ お よ び ／ ま た はＥｎｔｅｒ
ｏ舷ｃｔｅｒｉａｃｅａｅである。 液状の生長媒体は好適には１〜２００夕／そ、好ましく
は２０〜１００夕／そのメタノールを含有する。この媒
体はまた窒素−含有化合物例えばアンモニア、アンモニ
ウム塩例えば流酸塩または塩化物、硝酸塩、例えばアル
カリ金属塩または尿素を含有する。 この化合物は好適には３〜５０夕／その濃度で存在する
。この媒体中に存在する他の元素はリン、ィオウ、マグ
ネシウム、および鉄である。 リン源は好ましくは１種以上のリン酸塩例えばＫ２ＨＰ
０４，ＫＨ２Ｐ０４ ， Ｎａ２ＨＰ０４ ， ＮａＨ
２Ｐ０４ ま た は（Ｎ凡）２ＨＰ０４またはリン酸
で、好ましくは３〜２０夕／その濃度で存在する。ィオ
ウ源は硫酸または硫酸塩例えば硫酸アンモニウムで、好
ましくは０．５〜５．０夕／その濃度で存在する。二種
の金属はそれらの塩例えば０．２〜２．０夕／その濃度
の硫酸マグネシウムＭｇＳ０４・７日２０および０．０
１〜０．１夕／その濃度のＦｅＣ１３・母ＬＯとして提
供される。この媒体はまた痕跡量の他の元素、例えばカ
ルシウム、マンガン、亜鉛、コバルト、モリブテンおよ
びホウ素を適当な塩の形で含有する。適当な媒体の例を
以下の参考例１および実施例４で示す。本発明の方法は
バッチ式、半−連続的または連続的フローで行なわれる
。 この方法が連続的に行なわれる場合には、それはバッチ
式でまたは英国特許出願第３７１７３／７２号‘こ示さ
れているより急速な出発進行手順を使用す・ることによ
って開始される。定常状態が到達されたならば、連続的
培養は連続的に生長培養物から連続的に取り除かれる媒
体から微生物を取り入れることによって行なわれ、一方
同時に一定量の培養液は連続的に新鮮な媒体を加えるこ
とによって維持される。連続的な培養の間に、生長培養
体上澄液中のメタノールの濃度は培養体に供給される媒
体のアルコールの量に関係なく生長限界水準に維持され
そしてこの濃度は好ましくは０．０１％ｖ／ｖを越さな
い低水準に維持される。微生物は適当に工夫された発酵
容器例えば額幹調節板付き発酵器またはスパージ塔発酵
器中で生長処理させられる。 そして前記発酵器は内部冷却または外部再循環冷却環を
備えている。培養体の好気性処理は空気、酸素または酸
素化空気によって行なわれる。培養体の温度は一般に３
０〜５０ｑｏ、好ましくは総〜４５℃の間に維持される
。 培養体のｐＨは６．０〜８．０好ましくは６．４〜７．
４に、アルカリ例えばＮａＯＨ，ＫＯＨ，ＮＨ４０日、
および／または酸例えばりＳ０４，日３Ｐ０４を適当に
加えることにより行なわれる。微生物のセルは従来公知
の標準的技術例えば凝集、沈降（ｓｅｄｉｍｅｎｔａｔ
ｊｏｎ）および／または沈澱、さらに続く遠心分離およ
び／またはろ過操作によって採取される。 ビオマスはそれから例えば結凍または頃霧乾燥によって
乾燥処理され、そしてこの形で人間または動物のたんぱ
く質性の食物または食物供給源として使用される。本発
明を次の実施例でもつてさらに例示する。 参考例 １混合した培養体の分離 適当な源から混合培養体を分離する三つの技術を以下に
例示する。 それぞれの方法に使用した生長媒体はＤＣＲ２でそして
次の組成を有する：メタノール ５
−５０夕／そＮａ２ＨＰ０
３．０〃ＫＨ２Ｐ０４
３．０〃（Ｎ比）２Ｓ０４
４．５〜９．０多／〆クエン酸ナトリ
ウム ０．１２５〃ＭｇＳ０４・７
日２０ ０．５０〃Ｆ
ｅＣ１３・母ＬＯ ○．１
６７〃ＣａＣ１２・比０ ０．６
６のｐ／ＺＺｎＳ０４・７日２０
０．１８″ＣｕＳ０４・７弦０
０．１６″ＭｎＳ〇４・４日２〇
０．１５の２／そＣ。ＣＩ２・ＳＬ
Ｏ Ｏ．１８〃日３Ｂ０３
０．１０
〃Ｎａ２Ｍｏ０４・２ＬＯ ０
．３０〃水 残部
合計 １ぞこの媒
体のｐ比ま６．８に、適当なアルカリ例えば水酸化ナト
リウムを添加することによって調節された。‘ａー 振
動フラスコ法（ＳｈａｋｅＦｌａｓｋＭｅｔｈの）ｌｏ
ｏ似ＤＣＲ勿媒体、０．１ｖ／ｖメタノールおよび５夕
の源物質を含有するシェイクフラスコを４が０において
シェイクテーブル上で２０比ｐｍでもつて培養した。微
生物の生長によるはっきりした混濁が得られたとき、培
養体の５の‘の試料を１００ＭのＤＣＲ２媒体および０
．１ｖ／ｖメタ／−ルを含有する第２番目のシェイクフ
ラスコに移した。この方法を良好な繁殖する生長が得ら
れるまで繰り返した。こうして得られた培養体は後の培
養のための培養液として使用された。この方法を使用す
ることによってＢＭ４２と名付けられた培養体をアフリ
カのブルンジの天然の熱い泉のはとりの泥から分離した
。肋 ケモスタツト法（ＣｈｅｍｏｓねｔＭｅｔｈｏｄ
）ＤＣＲ湖媒体を４〆○そしてｐＨ６．８において含有
する２．４その操作量を有する実験的規模の発酵器を３
００〜１００仇ｐｍで額拝しそして毎分２その量の空気
をスパージした。 発酵器を１００夕の源物質を加えて培養処理しそしてメ
タ／ールを０．５％ｖ／ｖの濃度で加えた。もし培養体
の混濁がさらに観察されたならばさらにメタノール（０
．５％ｖ／ｖ）を加えた。 さらに増加した混濁度において、発酵器に１％ｖ／ｖの
メタノールを含有するＤＣＲ数媒体を０．０８時‐１の
希釈速度でもつて連続的に供給した。定常状態の条件が
到達されたとき（これは培養体の光学密度の一定値によ
って示される）、希釈速度をだんだんと増加させ０．水
‐１とした。この方法を使用して、ＪＭＳ７２と呼だれ
る培養体を英国のＳｉｔｔｉｎ教ｏｍｎｅにおける廃
水の出口の流出液から分離した。 【ｃ】 タービドス タット法（Ｔｕｒｂｉｄｏｓｔ
ａｔＭｅｔｈｏｄ）この方法においては、発酵器中の条
件は最も速く成長する微生物の生長ほみが促進され、他
のよりゆっくりした生長の微生物を洗い出すように注意
深く制御される。 これは生長記録計（ｃｆＮｏｒｒｉｓｅｔａｌ“微生物
学におけるオートメーション、機構およびデータ処理”
における‘‘微生物培養のための自動生長記録計”Ｅｄ
ＢｍｌｉｅおよびＧｉｌｂｅｎ、アカデミックプレス、
１９７０、Ｐ１５１〜１６１）を使用して発酵器中の培
養体の光学密度（濃度）を連続的に監視することによっ
て達成される。この生長記録計は光学密度があらかじめ
決定した値を超過したときスイッチが入りそして光学密
度がこの値以下に落ちたときスイッチが切れる媒体移送
ポンプ用の自動スイッチを備えている。５夕の源物質を
前記｛机こおいて述べた方法と同様な方法で培養した。 バクテリアの生長による混濁が観察されたとき、培養体
をろ過し粗い粒子を取り除さそしてそれから１％ｖ／ｖ
のメタノールを含有するＤＣＲ雛媒体が供給されるター
ピドスタットを培養処理するために使用された。この温
度は４〆０でそしてｐＨは６．８に維持された。この方
法を使用して、ＳＴ４２と呼ばれる培養体をＫｅｎｔの
Ｓｉｔｔｉｎ沙ｏｍｎｅにおける朽ちる植物から分離し
た。この培養体の分離において、光学密度は約３夕／そ
の微生物の乾燥重量に相当する値に制御された。そして
培養体は三日後１．６時間の世代交代時間を有していた
。参考例 ２ 代表的な混合培養体（ＪＭＳ７２）の分離および特性記
述‘ａ｝ 参考例１‘ｂ｝の方法によって製造された培
養体ＪＭＳ７２の１の‘の試料を発酵器から引き出し、
小さなガラスピンの中に層きそしてメタノールを含有し
ないＤＣＲ勿媒体で希釈して発酵器中で１０‐６、１０
‐７または１０‐８倍の濃度になるようにした。 ０．１の‘の試料をビンから取り除きそして‘ａ｝ＤＣ
Ｒ幻媒体および｛ｂ｝ＬａｂＬｅｍｃｅ媒体の微生物培
養基板上に広げた。 それぞれの板はフタで覆われ、ＯＣＲ２板の場合には少
量のメタノールが付与された。それらの板はそれから裏
返されそして４２０において、４曲時間培養した。この
期間経過後に、板を検査したところ、｛ａー一種の微生
物（ＥＮと名付けられたもの）だけがＤＣＲ勿反上で生
長し、そして（ｂ’４種の区別のできる微生物（ＭＵ，
ＦＧ，ＹＬ，ＧＲと名付けられたもの）が仏ｂＬｅｍ坂
上で生長した。白金線の環を使用して、それぞれの微生
物の個々の群生を十分な生長媒体を含有する新しい板に
移しそして生長させて、それぞれの種の純粋な培養体を
得た。’ＪＭＳ７２から分離された５種の微生物を、そ
れらが所属する微生物の種々の属を決定するために一連
の標準試験（表１における１〜３０）に服せしめた。使
用した試験は次に述べるような標準操作で、従来から公
知の方法である。 ‘ａ’“医学上のバクテリアの同定への手引（Ｎねｎ肌
ｌ ｆｏｒ ｔｈｅ ｌｄｅｎｔｍｃａｔｉｏｎ ｏｆ
Ｍｅｄｉｃａｌ母ｃｔｅｒｉａ）”、Ｓ．Ｔ．Ｃｏ肌
ｎおよびＫ．Ｊ．Ｓｔｅｅｌ、ケンブリッジ大学発行所
（１９６６）｛ｂ’ “決定細菌学のベルジェイの手引
（氏ｒ袋ｙ′ｓ Ｍａｎ雌ｌ ｏｆ 戊ｔｅ皿ｉ
岬ｔｉｖｅ欧ｃｔｅｒｉｏｌｏ期”、第７版Ｗｉｌｌｉ
ａｍｓおよびＷｉｌｋｉｎｓ（１９５９）‘ｃ｝ “バ
クテリアの属の同定へのガイド（ＡＧｕｉｄｅ ｔｏｔ
ｈｅ １ｄｅｎｔｉｆｉＣａｔｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ
Ｃら肥ｒａ ｏｆ舷ｃｔｅｒｉａ）”Ｖ．Ｂ．ＤＳｋｅ
ｒｍａｎ、第２版、ＷｉｌｌｉａｍｓおよびＷｉｌｋｉ
ｎｓ（１９６７）これらの試験のうち、選択的にそれぞ
れの手順が利用されそしてさらに簡単な詳細文献をこれ
らの場合に実際に使用される試験方法を示すために以下
に述べる。 ｛則 オキシダーゼ試験−Ｋｏｖａｃｅ、１９５６（１
３）ＫＣＮブロス（ｂｒｏ仇）上での生長一Ｍぐｌｉｅ
ｒ、１９５４ｂ；Ｒｅｓｅ岱およびＴａｙｌｏｒｌ９６
１による修正雛鰐禁罵り鯛鶴 （１９）アルギニンジヒドラーゼ （２１）ゼラチン加水分解−Ｋｏｈｎ、１９５３（２２
）インドール生成−Ｋｏｖａｃｓ試薬（２３）Ｖｏ袋ｓ
−Ｐｒｏｓｋａ雌て試験−母ｒｒｉｔｔｌ９３６（２４
）日２Ｓ生成−トリプルシュガー鉄細菌培養基（２５）
ウレアーゼ生成−オキソイド媒体、クリステンセン媒体
、１９４６（２６）クエン酸塩利用ーサイモンス（Ｓ手
ｍｏｎｓ）クエン酸塩スロープで、Ｋｏｓｅｒ′Ｓブロ
ス（ｂｒｏｔｈ）によって確認されている。 （２８）クエン酸塩還元ークェン酸塩に対するデンブシ
ョゥ化物スポット試験。 これらの試験の結果を表１に要約するそして十印に試験
に対して陽・性反応を示しそして−印は陰性反応を示す
。 これらの結果にもとづいて、４種の微生物が次のように
分類された：ＭＵ Ｐｓｅｕｄｏｍｏ雌ｓｓｐ （ＮＣ
ＩＢＮｏ．１１０１９）（国際寄託当局における寄託番
号ＮＣＩＢＩ１７３４）ＦＧ Ｃｍｔｏ舷ｃｔｅｒｉｕ
ｍ（ＮＣＩＢＮｏ．１１０２１）（国際寄託当局におけ
る寄託番号ＮＣＩＢＩ１７３６）ＹＬ Ｐｓｅｕｄｏｍ
ｏＭｓｓｐ（ＮＣＩＢＭ．１１０２２）（国際寄託当局
における寄託番号ＮＣＩＢＩ１７３７）ＧＲ Ａｃｉ肥
ｔｏｂａｃにｒ（ＮＣＩＢ恥．１１０２０）（国際寄託
当局における寄託番号ＮＣＩＢＩ１７３５）メタノール
一利用微生物ＥＮ（ＮＣＩＢＮｏ．１１０４０）はこれ
らの性質にもとづいては、公知の微生物のいかなる属に
も分類するこができなかった。 これらの微生物のいくつかの公知の抗生物質に対する反
応をまた測定しそしてこれらの試験の結果を次の表２に
示す。表 １ ２ Ｓ＝感じやすい Ｒ中抵抗性あり 参考例 ３ ＪＭＳ７２のメタノール一利用微生物（ＥＮ）を使用し
た実験【ａｌ 管の水平部分に設けられた透析膜によっ
て二つの部分に分割されているＨ−型管からなる器具を
使用した。 該管の各部分に２５の‘のＤＣＲ２媒体および０．２％
メタノールを満たした。三つの別個の実験において、該
管の二つの部分のうち一つの部分には（ｉ）微生物ＥＮ
を接種し、（ｉｉ）徴生物ＥＮを接種し、側微生物を接
種せず、そして該管の二つの部分のうち他の部分にはそ
れぞれ（ｉ）微生物を接種せず、（ｉｉ）および（ｉｉ
ｉ）は非ーメタノール利用微生物ＭＵ，ＦＧ，ＹＬ，Ｇ
Ｒの混合物を接種した。それぞれの実験において、その
器具は４〆０においてシェイクテーブル上で培養処理さ
れる。 それぞれの実験において得られた光学密度の結果を以下
の表３に示す。３ これらの結果はＥＮが非−メタノ−ルー利用微生物ＭＵ
，ＦＧ，ＹＬ，ＧＲの混合物と接触して生長したときに
その微生物の最も高い生長が得られることを示している
。 これらの結果はまた微生物ＥＭこよって製造される物質
は分離膜を通って拡散することができそして微生物ＭＵ
，ＦＧ，ＹＬおよびＧＲによって利用されうろことを示
している。｛ｂ｝… 純粋なメタノール一利用微生物Ｅ
Ｎを５００のとのＤＣＲ２媒体および０．１％ｖ／ｖの
ＣＩ４を使用したメタノールを含有するシェイクフラス
コ中で成長させた。 このフラスコをそれから４２℃において２．５伽の軌道
半径を有する回転シェィカー上で２０仇ｐｍの回転で培
養処理した。培養の間に製造されたいかなる二酸化炭素
もフラスコに装備したガード管中の水酸化ナトリウムの
べレット上に吸収させた。２日後に培養体の光学密度は
一定になり（つまり生長の終りを示す）そしてメタノー
ルは培養液体中に検出されなかった。 培養体をそれから１０，００びｐｍの回転で遠心分離処
理しそして上燈液を殺菌ろ過した。（ｉ）１００の‘の
この上燈液中に１．０の上の培養体ＪＭＳ７２を入れそ
して培養体を前記したと同様な方法でシェイクフラスコ
中で生長させた。 前記した段階川および（ｉｉ｝のそれぞれにおいて、Ｃ
Ｉ４による放射能を測定した。Ａ 開始時 Ｂ 製造した細胞中において Ｃ 終りの上澄液 Ｄ 製造したＣ０２中において 段階（ｉｉにおいてはメタノールは存在しないから、微
生物の生長はＪＭＳ７２中の非−メタノール−利用微生
物の生長のみとなる。 これらの結果を次のフロ−図を示す。非−メタノール−
利用バクテリアの生長はビオマスの全製造量に増加をも
たらすということはこれらの結果より明かである。 またこの実験はメタノール一利用微生物により非−メタ
ノール一利用微生物に供給される物質はこれらの微生物
の生長のための炭素基質である。実施例 ４ ＪＭＳ７２の連続的培養 ４．２その作動容積を有する７その発酵容器中に４．０
夕／そのメタノールを含有するＤＣＲ功媒体を導入しそ
してあらかじめ４２０において１日間培養処理した１０
０のＺのＪＭＳ７２の培養体を入れた。 媒体のｐＨを６．８に制御しそして温度は４２０とした
。培養体を１００仇ｐｍの回転で鷹拝しそしてそ／時の
割合で空気を吹き込む処理をした。発酵の開始時は培養
体の光学密度が１．５（６２則ｍ）に到達するまでバッ
チ式で行なわれた。連続的な培養はそれから０．０５〜
０．６６時‐１の範囲の希釈速度をもって開始された。
定常状態が０．６曲時‐１以外のそれぞれの希釈速度で
少くとも２日間維持されたそして培養体は全部で７０餌
時間以上維持された。収率（タ乾燥ビオマスノタメタノ
ール）およびそれぞれの希釈速度において得られたビオ
マスのたんぱく質含量を表４に示す。表 ４ 前記した実験はメタノール一利用微生物ＥＮを単独に使
用してまたはＥＮを１種の非−メタノール一利用微生物
型ＦＧと一緒に使用して繰り返した。 これらの実験の結果を表５に示す。表 ５ 表４および５中の結果の比較から４種の非ーメタノール
ー利用微生物すべてとＥＮとの組み合せは純粋なＥＮの
培養体またはＥＮおよびこれらの非−メタノール一利用
微生物のうち１種のみからなる培養体に比較してメタノ
ールのグラムあたりより大きいビオマスの収量をもたら
すことがはっきりとわかる。 ＪＭＳ７２の使用はこの方法がより高い希釈速度で行な
われることを可能にする。ＪＭＳ７２およびＥＮのアミ
ノ酸含量を表６に示す。表 ６ これらの数値は、ＪＭＳ７２中の非ーメタノールー利用
微生物の存在は生成物のアミノ酸舎量にあまり影響を及
ぼさないことを示している。 実施例 ５ 連続的培養中におけるＧＭＳ７２中の微生物の割合ＪＭ
Ｓ７２の連続的培養は参考例２で述べた方法と同様な方
法で行なわれた。 実験の間板計算は異つた微生物の集団の相対的な大きさ
を探知するためにそれぞれの希釈速度において行なわれ
た。直接発酵器から採取した培養体の試料を殺菌した塩
溶液（０．８５％）で希釈しそして×ｌび，×１０７お
よび１ぴ希釈液の０．１の上をそれぞれ乾燥した対のＬ
ａｂ比ｍｃｏ板の表面に拡げた。この板を４ぞ０で４斑
時間培養処理しそして異つた群生型がそれから数えあげ
られた。この結果を以下の表７に示す。表 ７ これらの結果から、すべての場合において、製造された
ビーオマスの最も大きいかさのものはメタノール一利用
微生物ＥＮからなるのがわかる。 非ーメタノール一利用微生物の％は希釈速度にしたがっ
て全培養体の約０．８〜７．６％の範囲にわたってさま
ざまである。実施例 ４ 急激な開始法を使用したＪＭＳ７２の連続的培養この実
験において使用した媒体は次の組成を有していた。 Ｎａ２ＨＰ０４ ３．０ ９／ＺＫ
Ｈ２Ｐ０４ ３．０ ９／Ｚ（Ｎ
Ｈ４）２Ｓ０４ ２０．００ ９／ＺＭｇ
Ｓ〇４・７日２〇 〇‐７５ ９ノ多Ｆ
〇１３‐６日２〇 〇‐１６７ ９／多０ａ
ｏ１２・日２０ ５．３ 雌ソ多Ｚｎ
Ｓ０４・７日２０ １．４ 物ソＺ○ａＳ
０４・５日２０ １．３ 雌ソ多ＭｎＳ
０４・４日２０ １．２ 物ソ多０ｏｏ
１３・６日２０ １．４ 雌ソＺＨ３Ｂ０３
０．８ 物ソＺＮａ２Ｍｏｏ
４・２日２０ ２．４ 物ソメメタノール
８０ ９／Ｚ水 残部全 旦
ＩＺ ７その発酵器中にＪＭＳ７２の培養体を入れたこの媒体
４．２そを導入した。 前記した特許出願第３７１７３／７２号に示した開始手
順を使用し細胞乾燥重量濃度を１６夕／夕とした。メタ
ノール濃度をそれから細胞乾燥重量濃度が２５９／その
過剰になるまで１．０夕／その増加分でもつて少しずつ
増加させた。実験の内の条件は次の通りであった。温度
４グ０柵６．６でＫＯＨにより制御 １５０仇ｐｍで擁拝 ５夕／分の空気吹込み ０．０７〜０．糊時‐１の希釈速度。 この実験の詳細な結果を次の表８に要約した。 表 ８実施例 ５ 追加比較実験 ‘ａ）微生物プＥＮのバッチ式培養体３その実験用発酵
器中で４２ｏｏにおいて１．５％メタノールを含有する
２．４そのＤＣＲ勿媒体中で、導入後のあまり用心する
ことなく生長させた。 細胞密度が３．０夕／そ乾燥重量に到達したとき連続的
培養が０．０虫時‐１の希釈速度でもつて開始された。
２日以内に培養体は胞子を生じる微生物で汚染されたそ
して洗い出した。 同じ実験を混合媒養体ＪＭＳ７２を使用して繰り返した
とき、培養体は３００日の連続的培養の間胞子−生成微
生物によって汚染されなかった。これらの実験は混合培
養は純粋なメタノール一利用培養体よりも感染に対して
より大きな抵抗力を有していることを示す。｛ｂ’微生
物ＥＮの連続培養は１％メタノールを含有する２．４そ
のＤＣＲ２媒体中で、ｐＨ６．８および温度４２０で行
なわれた起泡の生成が培養の間観察されそしてシリコン
ーベースの起泡防止剤を連続培養の６日間において３回
添加しなければならない必要が起った。

Claims (1)

【特許請求の範囲】
1. １ メタノール−利用微生物を、メタノール、同化しう
   る窒素源および必須鉱物塩を含む液体の生長媒体中で、
   好気性の条件下で生長させる微生物の生産法において、
   前記の生長するメタノール−利用微生物によって生産さ
   れる物質を代謝処理しうるシユードモナス（Ｐｓｅｕｄ
   ｏｍｏｎａｓ）、アシネトバクター（Ａｅｉｎｅｔｏｂ
   ａｃｔｅｒ）および／またはカートバクテリウム（Ｃｕ
   ｒｔｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ）の菌株である１種またはそ
   れ以上の非−メタノール−利用微生物の存在下で生長を
   行なう、ことを特徴とする微生物の生産法。