JPS6054688A - 細胞を融合するための方法 - Google Patents
細胞を融合するための方法Info
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- JPS6054688A JPS6054688A JP15949284A JP15949284A JPS6054688A JP S6054688 A JPS6054688 A JP S6054688A JP 15949284 A JP15949284 A JP 15949284A JP 15949284 A JP15949284 A JP 15949284A JP S6054688 A JPS6054688 A JP S6054688A
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- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
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- C12N13/00—Treatment of microorganisms or enzymes with electrical or wave energy, e.g. magnetism, sonic waves
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- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12M—APPARATUS FOR ENZYMOLOGY OR MICROBIOLOGY; APPARATUS FOR CULTURING MICROORGANISMS FOR PRODUCING BIOMASS, FOR GROWING CELLS OR FOR OBTAINING FERMENTATION OR METABOLIC PRODUCTS, i.e. BIOREACTORS OR FERMENTERS
- C12M35/00—Means for application of stress for stimulating the growth of microorganisms or the generation of fermentation or metabolic products; Means for electroporation or cell fusion
- C12M35/02—Electrical or electromagnetic means, e.g. for electroporation or for cell fusion
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- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
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Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
本発明は、融合室内で細胞懸濁液内に存在している細胞
を僅かな相互間隔に置き、細胞にその膜が破壊されるほ
どの強さの電気的な磁場のパルスを作用させ、これによ
シ隣接し合っている細胞にあって膜構造内の破壊が訴因
させ、この破壊によシ＠接し合っている細胞間の膜橋絡
と細胞融合が誘起させて行う、細胞を融合するための方
法およびこの方法を実施するための装置に関する。
を僅かな相互間隔に置き、細胞にその膜が破壊されるほ
どの強さの電気的な磁場のパルスを作用させ、これによ
シ隣接し合っている細胞にあって膜構造内の破壊が訴因
させ、この破壊によシ＠接し合っている細胞間の膜橋絡
と細胞融合が誘起させて行う、細胞を融合するための方
法およびこの方法を実施するための装置に関する。
ドイツ連邦共和国特許公報第２４０５１１９号から、電
気的な場において細胞全処理するための方法が公知にな
っている。この方法にあっては細胞の膜は１０”〜１０
６ｖ２４の強さの電気的な場の適用の下に破壊される。
気的な場において細胞全処理するための方法が公知にな
っている。この方法にあっては細胞の膜は１０”〜１０
６ｖ２４の強さの電気的な場の適用の下に破壊される。
、この際誘起される細胞膜の透過性の増大は、細胞の生
命力を損うことなく、膜による物質交代を可能にする。
命力を損うことなく、膜による物質交代を可能にする。
なぜなら、透過性の増大は物質交代が行われた後簡単な
方法段により可逆性になし得るからである。このように
して、例えば遺伝子或いは酵素を細胞内に沈着させるこ
とが可能である。
方法段により可逆性になし得るからである。このように
して、例えば遺伝子或いは酵素を細胞内に沈着させるこ
とが可能である。
上記の特許公報から公知の細胞膜の透過４５増大させる
ための方法は細胞を融合させるのにも使用できる。
ための方法は細胞を融合させるのにも使用できる。
懸濁液内の二つの細胞は、これらが互いに接触し、両細
胞の膜間にあって緊密な接触が生じると、互いに融合し
合う。なぜなら膜内において構造要素が可動であるから
である。しかし。
胞の膜間にあって緊密な接触が生じると、互いに融合し
合う。なぜなら膜内において構造要素が可動であるから
である。しかし。
細胞のこのような自然な融解（融合）は自然的な条件で
は発生することはないが、或いは極めて稀れにしか観察
されない。知られている例外は性繁殖における精子細胞
による卵子細胞の受精である。これに対して自然融合は
燐脂質或いは他の膜要素の負の電荷によって妨げられる
。
は発生することはないが、或いは極めて稀れにしか観察
されない。知られている例外は性繁殖における精子細胞
による卵子細胞の受精である。これに対して自然融合は
燐脂質或いは他の膜要素の負の電荷によって妨げられる
。
この負の電荷＃′ｉ、細胞が僅かな間隔で接近し１合っ
た際、細胞同志の反＠を招く。しかも、細胞融合は、両
膜が１０”−’０１以下の間隔にまで接近し得るととｔ
ｉ件とする。
た際、細胞同志の反＠を招く。しかも、細胞融合は、両
膜が１０”−’０１以下の間隔にまで接近し得るととｔ
ｉ件とする。
技術的な手段、即ち人工的な方法で行われる細胞の融合
は他の応用分野にも使用可能である。
は他の応用分野にも使用可能である。
こう云ったことから、生−医学的な研究にとって、大多
数の細胞を互いに融合させることけ極めて重要なことで
ある。大多数の或いは場合によっては多数の細胞〜例え
ば１０００〜１００００の血球−の融合によって生じる
大きな細胞の大きさが適当である場合は、マイクロ電極
、マイクロ圧力計ゾンデセよび他のセンサｔ、膜を不戻
性に破壊することなくこれらの大きな細胞内に導入する
ことが可能である。この場合、七ンサを介して直接細胞
列および膜機能を検出することの技術は臨床診断学にと
って、例えば疾病の早期発見の際、或いは一般的に基礎
研究にとって重要である。
数の細胞を互いに融合させることけ極めて重要なことで
ある。大多数の或いは場合によっては多数の細胞〜例え
ば１０００〜１００００の血球−の融合によって生じる
大きな細胞の大きさが適当である場合は、マイクロ電極
、マイクロ圧力計ゾンデセよび他のセンサｔ、膜を不戻
性に破壊することなくこれらの大きな細胞内に導入する
ことが可能である。この場合、七ンサを介して直接細胞
列および膜機能を検出することの技術は臨床診断学にと
って、例えば疾病の早期発見の際、或いは一般的に基礎
研究にとって重要である。
更に、細胞の融合の技術は、発生的にあまりかけ離れて
いてはならな−い素性の異る二つの細胞の融合によるハ
イブリッドーマ細胞の形成に使用することができる。こ
の場合、再び植物全体を育生できる植物細胞の細胞ハイ
ブリッドーマ或いは動物の細胞−これを介してモノクロ
ナール抗体、例えばＢ４４１ｍおよび白崩病に対する抗
体倉得ることのできる−の細胞ハイブリッドーマを形成
することができる。この例として掲げれば、特に医学的
なまた医薬的な観点で重要なりンバ細胞と骨髄腫細胞と
の融合が骸当する。一定のリンパ細胞は有機体内の異種
物質に対して、例えば血路に内に注射により注入される
異種蛋白に対する抗体を形成する。リンパ細胞を単離し
、このリンパ細胞を骨髄細胞のような腫瘍細胞と融合さ
せた場合、二つの親細胞の性質を有するいわゆるハイブ
リッドーマ細胞が生じる機会が得られる。この細胞は抗
体、しがも特に問題となっている異種物質に対してのみ
の抗体（いわゆるモノクロナール抗体）を造る。
いてはならな−い素性の異る二つの細胞の融合によるハ
イブリッドーマ細胞の形成に使用することができる。こ
の場合、再び植物全体を育生できる植物細胞の細胞ハイ
ブリッドーマ或いは動物の細胞−これを介してモノクロ
ナール抗体、例えばＢ４４１ｍおよび白崩病に対する抗
体倉得ることのできる−の細胞ハイブリッドーマを形成
することができる。この例として掲げれば、特に医学的
なまた医薬的な観点で重要なりンバ細胞と骨髄腫細胞と
の融合が骸当する。一定のリンパ細胞は有機体内の異種
物質に対して、例えば血路に内に注射により注入される
異種蛋白に対する抗体を形成する。リンパ細胞を単離し
、このリンパ細胞を骨髄細胞のような腫瘍細胞と融合さ
せた場合、二つの親細胞の性質を有するいわゆるハイブ
リッドーマ細胞が生じる機会が得られる。この細胞は抗
体、しがも特に問題となっている異種物質に対してのみ
の抗体（いわゆるモノクロナール抗体）を造る。
この細胞は死なず、リンパ細胞のような正常な細分化さ
れた細胞と異って持続的に培養液内マ増える。Ｊ、 Ｍ
ｅｍｂｒａｎｅ Ｂｉｏｌ、 ６７巻、１６５〜１８２
頁（１９８２年）、Ｕ、 ＺｉｍｍｅｒｍａｎｎとＪ。
れた細胞と異って持続的に培養液内マ増える。Ｊ、 Ｍ
ｅｍｂｒａｎｅ Ｂｉｏｌ、 ６７巻、１６５〜１８２
頁（１９８２年）、Ｕ、 ＺｉｍｍｅｒｍａｎｎとＪ。
Ｖｉｅｎｋｅｎ著Ｅｌｅｃｔｒｉｃ ’Ｐｉｓ１ｄ−工
ｎａｕａｅａ ０ｅｌｌ−ｔｏ−Ｏｅｌｌ Ｆｕａｉｏ
ｎ （電気的な場により誘起される細胞と細胞の融合）
）から公知である。この公知の方法−その経過は顕微鏡
下で観察できる−にあっては隣接している細胞間の膜構
造内における破壊は電気的な破壊パルスによって誘起さ
れる。この場合、−従来の模型表現により一隣接してい
る細胞の膜接触帯域において孔が形成され、これらの孔
は両細胞間の細胞形質的な連続き隣接した細胞の膜間の
脂質の橋絡ｆｔ銹起する。側質分子はもはやそれらの本
来の膜内に配列しない。橋が形成されると直ちに、エネ
ルギー上の理由から、脂質橋絡を介して互いに結合した
細胞から成る生成する形成物の円味化が起る。
ｎａｕａｅａ ０ｅｌｌ−ｔｏ−Ｏｅｌｌ Ｆｕａｉｏ
ｎ （電気的な場により誘起される細胞と細胞の融合）
）から公知である。この公知の方法−その経過は顕微鏡
下で観察できる−にあっては隣接している細胞間の膜構
造内における破壊は電気的な破壊パルスによって誘起さ
れる。この場合、−従来の模型表現により一隣接してい
る細胞の膜接触帯域において孔が形成され、これらの孔
は両細胞間の細胞形質的な連続き隣接した細胞の膜間の
脂質の橋絡ｆｔ銹起する。側質分子はもはやそれらの本
来の膜内に配列しない。橋が形成されると直ちに、エネ
ルギー上の理由から、脂質橋絡を介して互いに結合した
細胞から成る生成する形成物の円味化が起る。
この公知の方法を実施するｒ（は、細胞を含んでいる懸
濁液を収容するための非導電性の壁体から形成された空
間を備え、？：、の空間内に少くとも二つの金属性の電
極が突出し、これにより細胞にこれらの電極間に形成さ
れる電気的な場の作用が与えられる領域が形成されるよ
うに、構成されている様式の室が使用される。この場合
、電極は電気的な破壊を発生させるため電気的な電圧パ
ルスを発生させるための装置に接続されている。したが
ってこの公知の方法はその実施のため金属電極２よびこ
れに接続可能な装置を有する室と結合される。
濁液を収容するための非導電性の壁体から形成された空
間を備え、？：、の空間内に少くとも二つの金属性の電
極が突出し、これにより細胞にこれらの電極間に形成さ
れる電気的な場の作用が与えられる領域が形成されるよ
うに、構成されている様式の室が使用される。この場合
、電極は電気的な破壊を発生させるため電気的な電圧パ
ルスを発生させるための装置に接続されている。したが
ってこの公知の方法はその実施のため金属電極２よびこ
れに接続可能な装置を有する室と結合される。
本発明の課題は、従来一般的であった金属電極を有して
いる装置を使用することなく電気的な破壊により細胞の
融合を可能にする方法？造ることである。
いる装置を使用することなく電気的な破壊により細胞の
融合を可能にする方法？造ることである。
更に本発明の課題は上記方法を実施するための装置ケ造
るこ七である。
るこ七である。
上記の課題は本発明により以下のようにして解決される
。即ち、電気的な場を送信器として形成された電気的な
パルス発信器により造シ、融合室内において電気的なエ
ネルギーを受容するためこの融合室内に存在している細
胞懸濁液に比して高い、少くとも１０” ８７ｃｍの導
電率を有する材料から成り上記融合室を区画する電極を
設けて結線によらず電気エネルギーを伝達することによ
って解決される。
。即ち、電気的な場を送信器として形成された電気的な
パルス発信器により造シ、融合室内において電気的なエ
ネルギーを受容するためこの融合室内に存在している細
胞懸濁液に比して高い、少くとも１０” ８７ｃｍの導
電率を有する材料から成り上記融合室を区画する電極を
設けて結線によらず電気エネルギーを伝達することによ
って解決される。
本発明による方法は金属電極全備えた室によっても行う
ことができる。しかし、このような装置は必要ではない
。なぜなら、電気的な場を結線全使用せず電磁波によっ
て伝達することにより、本発明による方法は高い導電率
を有する電極の使用を必要としないからである。
ことができる。しかし、このような装置は必要ではない
。なぜなら、電気的な場を結線全使用せず電磁波によっ
て伝達することにより、本発明による方法は高い導電率
を有する電極の使用を必要としないからである。
本発明による方法の他の構成にあっては、層および相が
水性溶液から成る電極として働く溶液層或いは溶液相を
介して電気エネルギーが伝達される。この場合もちろん
との容液から成る電極を金属電極と共に設けることも可
能である。
水性溶液から成る電極として働く溶液層或いは溶液相を
介して電気エネルギーが伝達される。この場合もちろん
との容液から成る電極を金属電極と共に設けることも可
能である。
本発明による方法により、融合室を満しかつ１０”””
Ｂ ／ ａｎ以下の導電率を持つ細胞倉含んでいる懸
濁溶液に境を接するように細胞に対する相容性を考慮し
て選択した容液を添えることができる。即ち、融合室に
境を接する一つ或いは多数の溶液層或いは溶液相（Ｌ’
ｏｓｕｎｇ８１ａｄ８ｎ ）を形成する溶液が細胞にと
って等張圧の塩容液であるのが有利である。この塩溶液
は例えば融合が行われた直後に細胞を含んでいる懸濁溶
液と混合される培養液である。
Ｂ ／ ａｎ以下の導電率を持つ細胞倉含んでいる懸
濁溶液に境を接するように細胞に対する相容性を考慮し
て選択した容液を添えることができる。即ち、融合室に
境を接する一つ或いは多数の溶液層或いは溶液相（Ｌ’
ｏｓｕｎｇ８１ａｄ８ｎ ）を形成する溶液が細胞にと
って等張圧の塩容液であるのが有利である。この塩溶液
は例えば融合が行われた直後に細胞を含んでいる懸濁溶
液と混合される培養液である。
特に、細胞途流動する懸濁溶液内に存在していて、溶液
層或いは溶液相を形成している溶液も流動している場合
、電気エネルギーを融合室内の懸濁液から非導電性の分
離層、例えば合成物質箔等によって区画されている溶液
層或いは゛溶液相を介して伝達するのが有利である。こ
の場合、物質の懸濁溶液内への供給を行う際は、半透過
性の分離層を使用するのが有利である。
層或いは溶液相を形成している溶液も流動している場合
、電気エネルギーを融合室内の懸濁液から非導電性の分
離層、例えば合成物質箔等によって区画されている溶液
層或いは゛溶液相を介して伝達するのが有利である。こ
の場合、物質の懸濁溶液内への供給を行う際は、半透過
性の分離層を使用するのが有利である。
電気的な場において融合工程を行うに先立って細胞を相
互に接近させるには色々な方法がとられる。例えば、従
来知られていなかった構成（ドイツ連邦共和国特許出願
第３３２１ ２３＆４号記載の構成）により、細胞に磁
気粒子を附与し、融合室を貫通する不均一な磁場の作用
において、磁気粒子が附与された細胞が僅かな相互間隔
で集合するようにして細胞を接近させる。
互に接近させるには色々な方法がとられる。例えば、従
来知られていなかった構成（ドイツ連邦共和国特許出願
第３３２１ ２３＆４号記載の構成）により、細胞に磁
気粒子を附与し、融合室を貫通する不均一な磁場の作用
において、磁気粒子が附与された細胞が僅かな相互間隔
で集合するようにして細胞を接近させる。
この工程にあっては電流が流れず、したがって細胞にと
って不都合な温度上昇が生じないので、この場合細胞は
細胞を集合させるために電気的な場を使用した場合にお
けるよりも高い導電率の容液内で集まる。しかし、磁場
における集合は細胞への磁気粒子の附与が必要である。
って不都合な温度上昇が生じないので、この場合細胞は
細胞を集合させるために電気的な場を使用した場合にお
けるよりも高い導電率の容液内で集まる。しかし、磁場
における集合は細胞への磁気粒子の附与が必要である。
したがって、このことを度外視した場合、細胞を電気的
な破壊を起す電気的な場パルスの作用下に置く以前に、
細胞を細胞の大きさに応じて１ ｋＨｚ 〜１００ Ｍ
Ｈｇ ％特に５ ｋＨｇ５〜５ ＭＨｚの周波数および
１０ Ｖ ／ ｃｍ〜２ｏｏｏｖ／鐸の強さの同様に無
結線で伝達される電気的な場の作用を与えて細胞を所定
の整向で並列させるのが有利である。
な破壊を起す電気的な場パルスの作用下に置く以前に、
細胞を細胞の大きさに応じて１ ｋＨｚ 〜１００ Ｍ
Ｈｇ ％特に５ ｋＨｇ５〜５ ＭＨｚの周波数および
１０ Ｖ ／ ｃｍ〜２ｏｏｏｖ／鐸の強さの同様に無
結線で伝達される電気的な場の作用を与えて細胞を所定
の整向で並列させるのが有利である。
細胞を電気的な場において並列させるための方法は、［
Ｂｉｏａｈｉｍｉａａ ｓｔ Ｂｉｏｐｈｙｓｉｃａ
Ａｃｔａ 。
Ｂｉｏａｈｉｍｉａａ ｓｔ Ｂｉｏｐｈｙｓｉｃａ
Ａｃｔａ 。
６９４巻（１９Ｂ２］、２２７〜２７７頁（［Ｅｌｅｃ
ｔｒｉｃ ＩＰｉａ１４−ＭａｄｉａｔｅｃＬ Ｐｕａ
ｉｏｎ ａｎｃｌＲｅｌａｔｅｌ Ｒｌｅｃｔｒｉｃａ
ｌ Ｐｈｅｎｏｍｅｎａ （電気的な場を仲介とした融
合およびこれと関連した電気的現象） ） Ｕ、Ｚｉｍ
ｍｅｒｍａｎｎ著」 から公知である。
ｔｒｉｃ ＩＰｉａ１４−ＭａｄｉａｔｅｃＬ Ｐｕａ
ｉｏｎ ａｎｃｌＲｅｌａｔｅｌ Ｒｌｅｃｔｒｉｃａ
ｌ Ｐｈｅｎｏｍｅｎａ （電気的な場を仲介とした融
合およびこれと関連した電気的現象） ） Ｕ、Ｚｉｍ
ｍｅｒｍａｎｎ著」 から公知である。
この公知の方法−その経過は顕微鏡で観察できる−にあ
っては、少くとも二つの細胞間の膜接触は交代する一般
に僅かに均質な場に１りくことによって造られる。この
電気的な場によって、細胞内の種化行程に条件ずけられ
はするが、二極が形成され、この二極は細胞が電気的な
場において移動する間に互いに接近した場合（いわゆる
ジエクトロフオーレス（Ｄｉｅｌｅｋｔｒｏｐｈｏｒｅ
−８８）の場合）相互に引合う。
っては、少くとも二つの細胞間の膜接触は交代する一般
に僅かに均質な場に１りくことによって造られる。この
電気的な場によって、細胞内の種化行程に条件ずけられ
はするが、二極が形成され、この二極は細胞が電気的な
場において移動する間に互いに接近した場合（いわゆる
ジエクトロフオーレス（Ｄｉｅｌｅｋｔｒｏｐｈｏｒｅ
−８８）の場合）相互に引合う。
細胞列が形成された稜隣接する細胞間の膜構造内の障害
は電気的な破壊パルスによって誘起される。
は電気的な破壊パルスによって誘起される。
本発明による方法を実施には、細胞を含んでいる懸濁液
全収容するための非導電性の壁体によって形成されてい
る空間と電極間に存在している領域が形成され、この領
域内で細胞がこれら′＃を極間に形成された電気的な場
の作用を受けるように設けられた少くとも二つの電極が
設けための装置を備えている装置が適している。
全収容するための非導電性の壁体によって形成されてい
る空間と電極間に存在している領域が形成され、この領
域内で細胞がこれら′＃を極間に形成された電気的な場
の作用を受けるように設けられた少くとも二つの電極が
設けための装置を備えている装置が適している。
本発明による装置にあっては電気的なパルスを発生させ
るための装ｆ＃は送信器として形成されている。
るための装ｆ＃は送信器として形成されている。
送信器が充分に強力な場合には受信器としての電極への
適合は必装で社ない。しかし、電極を受信器として形成
するのが有利である。この場合、電極の一方は接地され
ておシ、他方の電極は、−可能な限り一受信される電気
信号の周波数領域に調節されているアンテナを備えてい
る。
適合は必装で社ない。しかし、電極を受信器として形成
するのが有利である。この場合、電極の一方は接地され
ておシ、他方の電極は、−可能な限り一受信される電気
信号の周波数領域に調節されているアンテナを備えてい
る。
本発明による装置の他の実施形にあっては、電極は融合
室内に突出して設けられる金属、例えば白金から成る。
室内に突出して設けられる金属、例えば白金から成る。
本発明による装置の他の実施形は、溶液から成る電極を
形成するため電極を細胞懸濁液を収容するために設けら
れた室に対して区画する非導電性の材料から成る分離層
が設けられていることである。
形成するため電極を細胞懸濁液を収容するために設けら
れた室に対して区画する非導電性の材料から成る分離層
が設けられていることである。
電極全区画している分離層は小管体として形成されてお
り、細胞を含んでいる懸濁液を収容するための室内に設
けられている。
り、細胞を含んでいる懸濁液を収容するための室内に設
けられている。
細胞懸濁液を融合室内に連続的に供給するには、細胞懸
濁液を収容するために設けられた空間を貫流空間として
形成するのが有利である。
濁液を収容するために設けられた空間を貫流空間として
形成するのが有利である。
これにより、例えば、細胞懸濁液溶液を漸次融合室に供
給することが可能となシ、この場合本来の融合工程の間
流過は停止されている。したがって、溶液から成る電極
を形成するために細胞懸濁液を収容するために設けられ
ている空間に対して分離層によって区画されている空間
が流過空間として形成されている。
給することが可能となシ、この場合本来の融合工程の間
流過は停止されている。したがって、溶液から成る電極
を形成するために細胞懸濁液を収容するために設けられ
ている空間に対して分離層によって区画されている空間
が流過空間として形成されている。
電極を形成している溶液から成る物質を細胞を含んでい
る融合室へ達せさせるため−これけ細胞を更に処理する
のに重要であるー、分離層として半透過性の層が設けら
れる。この場合、小管状の分離層として透析−ホース或
いは薄い多孔性のガラス毛細管が使用される。
る融合室へ達せさせるため−これけ細胞を更に処理する
のに重要であるー、分離層として半透過性の層が設けら
れる。この場合、小管状の分離層として透析−ホース或
いは薄い多孔性のガラス毛細管が使用される。
細胞゛を融合する以前に細胞をジエレクトロフオレーゼ
によシ並列させ、これによシ互いが接触するようにさせ
るため、更に１ ｋｅｇ〜１００ＭＨｚ 、特に５ ｋ
Ｈｚ 〜５ ＭＨｚの領域の周波数、および１０Ｖ／ｃ
ｍ〜２０００ Ｖ ／ ｏｎの領域の強さの電気的な場
を形成するための送信器として形成される他の装＃が設
けられる。
によシ並列させ、これによシ互いが接触するようにさせ
るため、更に１ ｋｅｇ〜１００ＭＨｚ 、特に５ ｋ
Ｈｚ 〜５ ＭＨｚの領域の周波数、および１０Ｖ／ｃ
ｍ〜２０００ Ｖ ／ ｏｎの領域の強さの電気的な場
を形成するための送信器として形成される他の装＃が設
けられる。
以下に添付図面に図示した実施形につき本発明を詳説す
る。
る。
第１図から、送信器３として形成された／（ルスジェネ
レタおよび周波数ジェネレータおよび受信器４として設
けられた融合室が明らかに認められる。この図面におい
て細胞を含んでいる懸濁液を収容するための空間Ｒが示
されている。
レタおよび周波数ジェネレータおよび受信器４として設
けられた融合室が明らかに認められる。この図面におい
て細胞を含んでいる懸濁液を収容するための空間Ｒが示
されている。
この空間内に二つの電極１と２−この実施例の場合二つ
の金属電極−が突出している。これらの電極はそれぞれ
外部へと通じていてかつアンテナとして働くケーブルと
結合されている。
の金属電極−が突出している。これらの電極はそれぞれ
外部へと通じていてかつアンテナとして働くケーブルと
結合されている。
電極間に存在している領域内に在る細胞は、送信器３か
ら受信器４へと結線によらない伝達により形成された電
気的な場の作用を受ける。
ら受信器４へと結線によらない伝達により形成された電
気的な場の作用を受ける。
第２図には、第１図に図示されている装置１の他の構成
が図示されている。この構成にあっては電気的な振動回
路のための５電気的な等価回路の様式の融合室６が図示
されている。
が図示されている。この構成にあっては電気的な振動回
路のための５電気的な等価回路の様式の融合室６が図示
されている。
第１図に図示した様式の装置（白金線から成る電極：３
００μｍの電極厚み、約２ｔ−Ｉｎの電極長さ、２００
μｍの電極間隔、約４０ｏｎのケーブル５の長さ、ケー
ブル５′はアースされている）により、アベナーサテイ
バー細胞体をα５Ｍのマニットー水溶液中で先ずＩ Ｍ
Ｅｇの周波数と２０［ＩＶ／αの強度の結線によらない
で伝達された交番場内で並列させた。
００μｍの電極厚み、約２ｔ−Ｉｎの電極長さ、２００
μｍの電極間隔、約４０ｏｎのケーブル５の長さ、ケー
ブル５′はアースされている）により、アベナーサテイ
バー細胞体をα５Ｍのマニットー水溶液中で先ずＩ Ｍ
Ｅｇの周波数と２０［ＩＶ／αの強度の結線によらない
で伝達された交番場内で並列させた。
次いで並列された細胞ｔ−２０μ秒の時間持続でかつ７
５０Ｖ／３の強度の同様に結線によらずに伝達された場
パルスによって融合させた。
５０Ｖ／３の強度の同様に結線によらずに伝達された場
パルスによって融合させた。
この場合、送信器Ｓと受信器４０間隔は約３餠である。
第３図には、非導電性の壁体によって区画されていて、
内部にポリエチレンから成る分離層ＴＩおよびＴ、が設
けられている融合室の一部分が図示されている。これら
の分離層により電極とし−て働く液体層が本来の融合室
から区画される。
内部にポリエチレンから成る分離層ＴＩおよびＴ、が設
けられている融合室の一部分が図示されている。これら
の分離層により電極とし−て働く液体層が本来の融合室
から区画される。
第４図には、融合室の一実施例全図示している。この融
合室内に小管様に形成されている分離層Ｔ、例えば４５
０μｍの外径と３４０μｍの内径のガラス毛細管が突出
している。この小管内に存在している液体（例えばＫＯ
Ｌ−溶液、濃度（＝１０１ｊｍＭ、導電率： Ｇ＝１０
−” ｓ／ｃｍ’）が電極として働き、これらの電極の
間で細胞列が形成され、並列した細胞は融合される。
合室内に小管様に形成されている分離層Ｔ、例えば４５
０μｍの外径と３４０μｍの内径のガラス毛細管が突出
している。この小管内に存在している液体（例えばＫＯ
Ｌ−溶液、濃度（＝１０１ｊｍＭ、導電率： Ｇ＝１０
−” ｓ／ｃｍ’）が電極として働き、これらの電極の
間で細胞列が形成され、並列した細胞は融合される。
第５図に図示した融合室にあっては、電極の一方電極２
は金属針金から成る。これに対して他方の電極は小管内
に存在している溶液によって形成される。
は金属針金から成る。これに対して他方の電極は小管内
に存在している溶液によって形成される。
第４図に図示した様式の装置で、ビシアーファーバー細
胞体１０．５ Ｍ水性マニットー溶液中で融合した。ガ
ラス毛細−管は約２ｃｍの長さであシ、ＫＯｌ−導電性
ペーストを介して電気的に約４０傷の長さのケーブルと
結合されている。
胞体１０．５ Ｍ水性マニットー溶液中で融合した。ガ
ラス毛細−管は約２ｃｍの長さであシ、ＫＯｌ−導電性
ペーストを介して電気的に約４０傷の長さのケーブルと
結合されている。
第１図は受信器として働く電極機構を有・する送信器と
して形成された本発明による装置。 第２図は電気的な等側口−として形成された第１図によ
る装置。 第３図は電極としての融合室を区画する溶液層を有する
融合室、 第４図は融合室内に突出していてかっ′！！極として働
く溶液相を備えた融合室、 第５図は電極として働く溶液相と金塊電極と？組合せた
融合室。 “図中符号は １．２・・・電極 ３・・・・・送信器 ４・・・・・受信器 Ｔ・・・・・分離層 代理人 江 崎 光 好 代理人 江 崎 光 史
して形成された本発明による装置。 第２図は電気的な等側口−として形成された第１図によ
る装置。 第３図は電極としての融合室を区画する溶液層を有する
融合室、 第４図は融合室内に突出していてかっ′！！極として働
く溶液相を備えた融合室、 第５図は電極として働く溶液相と金塊電極と？組合せた
融合室。 “図中符号は １．２・・・電極 ３・・・・・送信器 ４・・・・・受信器 Ｔ・・・・・分離層 代理人 江 崎 光 好 代理人 江 崎 光 史
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 １、 融合室内で細胞懸濁液内に存在している細胞を僅
かな相互間隔に置き、細胞にその膜が破壊されるほどの
強さの電気的なｄ場のパルス全作用させ、これにより隣
接し合っている細胞にあって膜構造内の破壊が誘因させ
、この破壊により隣接し合っている細胞間の膜橋絡と細
胞融合が誘起させて行う、細胞を融合するための方法に
おいて、電気的な場を送信器として形成された電気的な
パルス発信器により造シ、融合室内において電気的なエ
ネルギーを受容するためこの融合室内に存在している細
胞懸濁液に比して高い、少くとも１０−１８ ／ ｃｔ
ｎの導電率を有する材料から成シ上記融合室全区画する
電極を般社て結線によらず電気エネルギーを伝達するこ
とｔ特徴とする上記方法。 ２ 層および相が水性溶液から成る電極として働く溶液
層或いは溶液相を介して電気エネルギーを特徴する特許
請求の範囲第１項に記載の方法。 五 溶液層或いは溶液相を形成する溶液として細胞にと
って等張圧の塩溶液を使用する、前記特許請求の範囲第
２項に記載の方法。 ′４、 電気的なエネルギーを融
合室内で細・−懸濁液から非導電性の分離層、例えば合
成物質等によって区画されている溶液層或いは溶液相を
介して伝達する、特許請求の範囲第１項から第３項まで
のうちのいずれか一つに記載の方法。 ５ 半透過性の分離層を使用する、前記特許請求の範囲
第４項に記載の方法。 瓜 細胞を電気的な破壊を惹起する電気的な騙 □パル
スの作用下に置く以前に細胞を細胞の大きさＫよ？）
１ ｋｅｇ 〜１００ ＭＨｚ 、特に５ ｋＨｚ〜５
ＭＨｚ Ｆ）周波数と１０ｖ１５Ｉ！１〜２ｏｏｏｖ
／ａｌｌの強さの同様に結線によらずに伝達される電気
的な場の作用下におき、細胞を所定の整向で並列させる
、特許請求の範囲第１項から第５項までのうちのいずれ
か一つに記載の方法。 ２ 細胞を含んでいる懸濁液を収容するための非導電性
の壁体によって形成されている空間と電極間に存在して
いる領域が形成され、この領域内で細胞がこれら電極間
に形成された電気的な場の作用を受けるように設けられ
たシス様の電気的な場を形成するための装置を備えてい
る装置において、電気的なパルスを発生させる装置が送
信器（３）として形成されていることを特徴とする、上
記装置。 ａ 電極が受信器（４）として形成されている、前記特
許請求の範囲第７項に記載の装置。 ９ 電極が金属、例えば白金から成り、細胞を含んでい
る懸濁液管収容するための空間内に突出するように設け
られている、前記特許請求の範囲第７項或いは第８項に
記載の装置。 １α 溶液から成る電極を形成するため細胞懸濁液を収
容するための空−間に対して電極を区画する薄いかつ非
導電性の材料から成る分離層（Ｔ）が設けられている、
前記特許請求の範囲第７項に記載の装置。 １１、電極を区画する分離層が小管様に形成されていて
、かつ細胞懸濁液を収容するための空間内に設けられて
いる、前記特許請求の範囲第１０項に記載の装置。 １２、細胞懸濁液を収容する九めの空間が流過空間とし
て形成されている、特許請求の範囲第７項から第１１項
までのうちのいずれか一つに記載の装置。 １五 溶液から成る電極を形成するため分離層により細
胞懸液を収容するための空間に則して区画されている空
間が流過空間として形成されている、特許請求の範囲第
７項から第１２項までのうちのいずれか一つに記載の装
置。 １４、分離層が半透過性である、特許請求の範囲第１０
項から第１３項までのうちのいずれか一つに記載の装置
。 １５１ｋＨｚ 〜１００ ＭＨｔａ、特に５ ｋＨｚ
〜５ ＭＨｔ；ｓの領域の周波数と１０ｖ／ｃＩｎ〜２
０００ｖ／Ｇの領域内の強さの電気的な場を造るための
、送信器（３）として形成された他の装置が設けられて
いる、特許請求の範囲第７項から第１４項までのうちの
いずれか一つに記載の装置。
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| DE3327690.0 | 1983-08-01 | ||
| DE19833327690 DE3327690C2 (de) | 1983-08-01 | 1983-08-01 | Verfahren zur Fusion von Zellen |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS6054688A true JPS6054688A (ja) | 1985-03-29 |
Family
ID=6205445
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP15949284A Pending JPS6054688A (ja) | 1983-08-01 | 1984-07-31 | 細胞を融合するための方法 |
Country Status (3)
| Country | Link |
|---|---|
| EP (1) | EP0133978A3 (ja) |
| JP (1) | JPS6054688A (ja) |
| DE (1) | DE3327690C2 (ja) |
Families Citing this family (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| DE3321238C2 (de) * | 1983-06-11 | 1985-05-02 | Kernforschungsanlage Jülich GmbH, 5170 Jülich | Verfahren und Vorrichtung zur Fusion von Zellen |
| KR890003947B1 (ko) * | 1985-12-11 | 1989-10-13 | 가부시기가이샤 시마즈세이사구쇼 | 세포융합장치 |
| EP0281374B1 (en) * | 1987-03-06 | 1994-06-01 | Mitsui Petrochemical Industries, Ltd. | Method of multiplicating plant seedlings |
-
1983
- 1983-08-01 DE DE19833327690 patent/DE3327690C2/de not_active Expired
-
1984
- 1984-07-28 EP EP84108984A patent/EP0133978A3/de not_active Withdrawn
- 1984-07-31 JP JP15949284A patent/JPS6054688A/ja active Pending
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| DE3327690A1 (de) | 1985-06-13 |
| EP0133978A2 (de) | 1985-03-13 |
| EP0133978A3 (de) | 1986-07-16 |
| DE3327690C2 (de) | 1986-04-10 |
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