JPS6054697A - 診断方法および装置 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 本発明は、癌及びその他の病気、例えば心臓病、糖尿病
、アテローム性硬化症の早期診断に関するものであり−
、病気にかかったヒト或いは動物は血液中に比較的高い
濃度のウィルス様ＤＮＡポリメラーゼを有するという事
実に基づくものである。

本発明の一つの側面によれば、患者の血液の分析により
病気の時或いは潜在的病気を検知する方法において、ウ
ィルス様ＤＮＡポリメラーゼの割合を血液学的に正常な
患者のそれらと相対的に定量することを特徴とする方法
が提供される。

癌細胞内のウィルス様ポリメラーゼの存在については、
既に報告されている。例えば、ガロ等（Ｇａ１ｌｏ　ｅ
ｔ　ａｌ、、　Ｃｏ１ｄ　Ｓｐｒｉｎｇ　Ｈａｒｂｏｒ
Ｓｙｍｐｏｓｉｕｍ　Ｑｕａｎｔ　Ｂｉｏｌ、　３９　
：　９３３　（１９７４））及びバクスト等（Ｂａｘｔ
　ｅｔ　ａｌ、、　Ｎａｔｕｒｅ　ＮｅｗＢｉｏｌ、２
４０ニア２−７．５（１９７２））参照。

ウィルス様ＤＮＡポリメラーゼの存在は各種方法により
検知することが可能である。本発明の極めて好ましい態
様において、減少した範囲のポリメラーゼを有する核の
ない細胞断片である血小板或いは血小板粒子が使用され
る。血小板の異常がしばしば転移の開始を予言すること
が発見された。白血球或いは癌細胞よりもむしろ血小板
の使用が酵素活性と病気の状態の間の相関関係を可能に
した。

血小板は血小板泳動或いは直接に全血液から得ることが
できる。血小板のその他の血液成分からの分離は分画遠
心或いは個々の血液成分を別々に固体表面例えば顕微鏡
スライド上に沈積することにより行われる。血小板粒子
の調製には、数基率で９９．９９　％の純粋血小板が均
質化、音波処理或いは混合などの手段により破壊される
。好ましくは、血小、板は５〜５０ストロークの緊密−
嵌合Ｄｏｕｎｃｅホモジナイザーにより分裂される。大
きな細胞器官及び細胞破片はほぼ４０’Ｏ，ＯＯＯ×Ｎ
　−分の遠心分離により除去することができる。

小さなウィルス様粒子は次いで浮力密度により粒子の通
常蔗糖な含有する密度勾配への粒子の遠心分離により分
解される。公知量の血小板通常＆’１４ｇＫ相当する４
　００，０００　Ｘ　９−分の上澄液が密度勾配上に重
層され平衡までに遠心分離される。これは、１００，０
００×９において２〜２４時間必要とすることが見出さ
れた。勾配から分両分がＤＮＡポリメラーゼ活性のため
に集められた。これは、本発明の好ましい実施態様にお
いて、この物質の合成ＲＮＡ鋳型に応答するＤＮＡ合成
を触媒する能力により行われる。

好ましい特徴において、小容量の密度勾配画分が緩衝液
、洗剤、Ｋ（Ｊ、ＮａＣＪ、還元剤、二価カチオン、放
射性ヌクレオシドトリホスフエート、合成ＲＮＡ鋳型及
び相補的プライマーを含有する溶液に添加される。１０
〜１００ｍＭのＮａ或いはに濃度が最適であることが認
められた。一般的にＭｎ　が二価カチオンとして使用さ
れ、Ｔｒｉｔｏｎ　Ｘ　−１００が洗剤として使用され
、ジチオスレイトールが還元剤として使用される。しか
しながら、Ｍｎ　の代りＩｃ　Ｍ９　などを用い、Ｔｒ
ｉｔｏｎの代りにＮＰ４Ｑを用い、ジチオスレイトール
の代りｆｃＢ−メルカプトエタノールも使用することが
可能であった。０．５〜１０　ｍＭの範囲の二価カチオ
ンが必要とさ−れる。

「標準的測定条件」は５０　ｍＭ、Ｔｒｉｓ　−ＨＣＪ
、Ｐ）（’７．ｓ、６８　ｍＭＫｃＬ、０．０３％Ｔｒ
ｉｔｏｎ　、　、０５ｍｌ／ｍｌＢ　Ｓ　Ａ、　５　ｍ
ＭＮａｃＪ！、、３２μ！ｑ／ｍｌ！鋳型プライマー、
１５　ｍＭジチオスレイトール、０．５ｍＭＭｎＣｆ２
　、０．０５　ｍＣ／ｍｌ　”Ｈヌクレオシドトリボス
フエートである。

ＤＮＡの合成は、好ましくは３７°Ｃにおいて２０分間
行われる。異ったｉ度或いはより短い時間は次善である
。ＤＮＡ形成は酸不溶性、ＤＢＡＥ−結合性、放射能な
どの蓄積により追跡される。高い浮力密度（例えば蔗糖
中１．１６９７ｍｌを越える）の血小板粒子により合成
さｎる全ＤＮＡ放射能は血小板物質の量１分析される密
度勾配画分の容積、ヌクレオシドトＩＪホスフェートの
特異的放射能及び標準測定条件からの片寄りの補正後−
に血小板ＤＮＡポリメラーゼ活性の目安となる。

本発明は更に、血液試料から得られた血小板から病気を
同定するための試験キットにおいて、 ａ）鋳型プライマー、及び ｂ）　ＤＮＡポリメラーゼ活性を許容し、増強するため
の公知組成の測定溶液 よりなり、これが血小板から調製されるウィルス様粒子
の生物学的標本について最大ＤＮＡ合成のために（ｄＴ
）ｍ（ｒＡ）ｎ　プライマー鋳型を用いてｉｎ　ｖｉｔ
ｒｏでＤＮＡポリメラーゼ活性の酵素内測定を行うよう
に適用されていることを特徴とする方法を含むものであ
る。

本発明の理解を容易ならしめるために、以下に実施例に
より本発明を説明する。特に断りのない限り全ての係は
重量基準である。

血小板を血小板泳動或いは本態性血小板血症（ＥＴ　）
　、真正赤血球増加症（ｐｖ　）及び骨髄様化成を有す
る骨髄繊維症（ＭＦ　）を有する２０人の未治療患者、
９人の正常な供血者及び８人の骨髄性白血病（ＣＭＬ　
）を有する患者からの血液単位から得られた。患者数及
び患者の臨床状態は下記表１にまとめて示す。

血小板は２５°Ｃにおいて、プロトスキー等の方法（Ｂ
ｒｏｄｓｋｙ　ｅｔ　ａｌ、Ｊ、Ｎａｔ、Ｃａｎｃ、Ｉ
ｎ５ｔ。

５５　１０６９−．１０７４頁（１９７５年）〕に従っ
て精製された。全血液の１単位は三重パック内に集め、
３３００ｒｐｍにおいて６分間遠心分離した。血小板に
富んだ血漿は一つの袋に分離し、バツフイコートは第２
の袋に分離し、血赤球は第３の袋に分離した。バツフイ
コートを５０ｍ１遠心管内において、、１１０００ｒｐ
　ＶｃＭいて１２分間再遠心分離し、上澄液を血小板に
富んだ血漿に添加した。その袋を次いで３３００ｒｐｍ
において３０分間遠心分離した。血小板を３０〜４’　
Ｏｍｌの上澄液に懸濁り、５０ｍ１管に移し、３３００
　ｒｐｍ　において３０分間遠心分離した。

血小板泳動がらの試料は５０ｍ１管に入れ１０００　ｒ
ｐｍで１２分間遠心分離した。血小板を上澄液から、３
３００　ｒｐｍにおいて３０分間の遠心分離によりベレ
ット化した。光学顕微鏡で測定したところ、Ｉ　Ｏ’個
の血小板当り白色細胞は１個未満であった。

全ての操作は特に断りのない限り４°Ｃで行われた。濃
縮血小板を等容量の緩衝液Ｃ（５０ｍＭ　Ｔｒｉｓ−Ｈ
ＣしｐＨ７，９，１ｍＭジチオスレイトール、２０％ク
リセロール及び１　ｍＭ　ハラメチルスルホニルフルオ
ライド）に再懸濁し、２０分間インキュベートした。血
小板を３０ストロークのモーター駆動、緊密−嵌合Ｄｏ
　ｕｎ　Ｃｅホモジナイザーにより分裂した。大粒子（
膜、ミトコンドリア、顆粒）を２０，０ＯＯＸ、Ｆにお
いて２０分間遠心分離して除去した。゛゛＼上澄液中の
小粒子を浮力密度に従？て（即ち生化学組成に従って）
粒子の遠心分離により庶糖勾配に分別した。

４ｇの血小板出発物質に相当する容量の２０．０００　
Ｘ　９の上澄液をＴＮＥ緩衝液（１００ｍＭ　ＮａＣｊ
！、、１　ｍＭ　ＥＤＴＡ　、１０　、ｍＭ　ｔｒ？ｓ
　−Ｈ（Ｊ、ＰＩ（７，５）中の３０〜ｂ し％　５Ｗ２７０−ター中において１００．０００Ｘ、
！；ＮＣおいて１６時間に亘って平衡になるまで遠心分
離した。ｌ　ｍｌの画分を管の底から集め、ＤＮＡポリ
メラーゼ活性を分析した。

５μｌの蔗糖画分を１０μｌのプレミックス（４ｍＭｔ
ｒｉｓ　−ＨｃＬ％ｐＨ７，５，６８０ｍＭ　Ｋ（Ｊ。

０．３％’ｒｒｉｔｏｎ　Ｘ　−１００，５ＴＱ　／　
ｍｌ　Ｂ８Ａ　。

４０　ｍＭ　ＮａＣｊ！及び３２０　μ９７ｍｌの鋳型
プライマー、ポリ（ｒＡ）、オリゴ（ｄＴ　）１２−１
８或いはポリ（ｄＡ）、オリゴ（ｄＴ　）１２−８　）
に添加し、氷上で１５分間インキュベートした。８５μ
ｌのカクテルミックス（４７ｒｎＭ　ｔｒｉｓ　−ＨＣ
ｆ、、ｐ）Ｉ７．８．１７　ｍＭジチオスレイトール、
０．５８ｍＭＭｎ　Ｃｌ！２．０．０７　ｍＣｉ　／ｍ
ｌ　３ＨＴＴＰ　、　５　Ｑ　７５Ｃｉ　／　ｍＭ　）
　ヲ添加し、インキュベーションを口酢酸を１０％まで
添加し、析出物をニトロセルロース或いは酢酸セルロー
ス膜上に集めた。シンチレーション計数を各乾燥フィル
ターについて９〜１０ｍ１のＥｃｏｎｏｆｌｏｕｒ中で
行った。

存在し得る末端トラ・フーラニゼ活性を検知するために
、１０μｌの蔗糖勾配画分を１０μｌのプレミックス（
３２０μ９７ｍ１のオリゴ（ｄ’　、）１２−１８が鋳
型プライマーを置換した他はＤＮＡポリメラーゼ測定プ
レミックスと同一）に添加し、氷上で１５分間インキュ
ベートした。８０μｌのカクテルミックス（７０ｍＭｔ
ｒｉｓ　−ＨＣＪ、ｐＨ８，３％１．２５　ｍＭ’ジチ
オスレイトール、１２．５　ｍＭ　ＭＩＣ，１２，０，
４２ｍＣｊ、７ｆｎ１３ＨｄＧＴＰ　、５　”−１５Ｃ
ｉ　７ｍＭ　）を添加し、インキュベーションを３７℃
で３０分間継続した。各反応をトリクロロ酢酸を１０％
まで添カル、停止し、析出物を集め、計数を行った。

結果は表Ｉに１外因性活性」の見出しの下に示されてい
る。これらの結果は、病気の患者（・マ健康な患者より
も高い外因性活性値を有したことを示している。これは
、病気の存在を臨床的に診断できなかった場合にも真実
であった。

実施例Ｉの血小板ＤＮＡポリメラーゼ測定は血小板粒子
から可溶化された血小板ＤＮＡポリメラーゼにより利用
される合成鋳型を用いるものである。鋳型及びプライマ
ー分子は又血小板粒子中にも存在する（　ｏｉｌｌｅｓ
ｐｉｅ　。

Ｇａ５ｐａｒｉ及び５ｔｒａｙｅｒ　、　Ｂｉｏｃｈｅ
ｍ　、ＢｉｏｐｈｙｓＲｅｓ、Ｃｏｍｍ、　９９　：　
１１９１〜１１９８．１９８１年）。滞留血小板ＲＮＡ
を用いて、血小板ＤＮＡポリメラーゼによるＤＮＡ合成
の測定条件は下記の通りである。

血小板泳動により得られた血小板を実施例Ｉと同様にし
て精製した。血小板分裂、粒子分別及びＤＮＡポリメラ
ーゼ活性はプロトスキー等（Ｂｒｏｄｓｋｙ　ｅｔ　ａ
’１．　Ｊ、Ｎａｔ、Ｃａｎｅ、　Ｉｎ５ｔ。

５５．１０６９〜１０７４（１９７５年）及び５９．６
１〜６７（１９７７年）〕及び前記技術を用いて行われ
た。

ＤＮＡポリメラーゼ活性を有する蔗糖勾配からの画分を
合せ１等容量のＥＰ緩衝液（５０ｍＭｔｒｉｓ−ＨＣＪ
、、ｐＨ８，０、１ｍＭジチオスレイトール、０．５　
ｍＭ　ＥＤＴＡ　、　５　ｍＭ　ＭｙＣｊ！２及び３０
ｍＭＮａＣＪ！　）　テ稀釈Ｌ　タ。小粒子を１００．
（１００Ｘｇにおいて１時間の遠心分離後にペレットと
して集めた。２ｇの血小板からの粒子を１．２５μｌの
Ｒ緩衝液（５０ｍＭ　Ｎａ（Ｊ、２０　ｍＭジチオスレ
イトール、５０　ｍＭ　ｔｒｉｓ　−’ＨＣＪ、　ｐＨ
７，８，１０ｍＭ　ＭｇＣｊ！２０．５　ｍＭ　ＭｎＣ
Ｊ！２．５２　μｇ／ｍｅアクチノマイシンＤ、０．３
３ｍＭの非標識化ヌクレオチドトリホスフェート（ｄＣ
ＴＰ％ｄＧＴＰ、ＴＴＰ　）、３．２　ｍｃｉ／ｍＡ’
　３２　ｐ−ａＡＴｐ　（４００〜６００　Ｃｉ　／　
ｍｍｏｌ　）及び０．０１　％　Ｔｒｉｔｏｎ　ｘ　−
１００）に懸濁し、３７℃で３０分間インキュベートし
た。

インキュベーション後３７５μｌ　（７）　ＬＥＴＳ　
緩漬液（１００ｍＭ　ＬｉＣＬ、１　ｍＭ　ＥＤＴＡ、
　１０ｍＭｔｒｉｓ　−Ｈ（Ｊ、　ｐＨ７，２，０，０
５％　８ＤＳ　）　、１００μｌのジエチルピロカーボ
ネート、２５μｌの２０％ＳＤ８及び１００μｌの０．
ＩＭ　ＥＤＴＡ／２．０Ｍ　ＮａＣＪを添加し、懸濁液
をポルテックスミキサー上テ混合１−タ。ＬＥＴＳ緩衝
液（Ｑ、８＋＋＋ｌ）及び８−ヒドロキシキノリン（３
，７ｇ７１００ｍ１　）を含有するｌ　ｍｌのフェノー
ル−クレゾール（７：１．５０　ｍＭ　ｔｒｉｓ　−Ｈ
ＣＪで飽和、ＰＨ７，６）ヲ添加し、エマルジョンを２
５°Ｃで５分間振盪した。このエマルジョンを１０，０
００×ｇにおいて１０分間遠心分離して破壊した。

ｃＤＮＡ含有上部層を取り出し、フェノール−クルゾー
ルで再抽出し、再遠心分離を行った。

抽出は上部層と下部層の間に界面が残らなくなるまで繰
り返された。２５μＩの酵母ｔ　ＲＮＡ及びＮａ（Ｊを
０．３　Ｍまで添加後核酸を３回のエタノール析出によ
り採取した。

３番目のエタノール析出物をＱ、３ｍＡ！のＴＥ（０，
１Ｍ　ｔｒｉｓ−ＨＣＬ、　０．１　Ｍ　ＥＤＴＡ％ｐ
Ｈ８）に溶解した。ポリアロマ−遠心管に７．４ｍｌの
水、０．５ｍｌの’ｒＥ緩衝液、０．２ｍｌの５チサル
コシル及び６．６３５　ｇの固体Ｃｓ　２８０４を添加
した。０８２ＳＯ４を十分に溶解後試料を添加し、屈折
率を２５°において１．３７５に調節した。

この系をＴ１５０ローター（３６，００Ｏｒｐｍ）中に
おいて８５．ＯＯＯＸｇにお℃・て３日間２０°で遠心
分離した。

ＲＮＡと共に移動する全放射能を血小板ＤＮＡポリメラ
ーゼ活性の目安として採用しに０結果を表Ｉに１内因性
活性」と１−て示す。病気にかかった患者は、正常な患
者よりも高い値を有することが認められる。

実施例■の技術を用いて、その徴候が現在の臨床診断か
らは十分でなかった患者における血小板ＤＮＡポリメラ
ーゼを定量した。結果を引続いて得られた臨床データに
基づいた診断と比較した。結果を表Ｈに示す。患者には
１人の上昇した血小板カウント数を有さない真正赤血球
増加症の患者、及び２人の二次血小板血症を有する疑い
のある本態性血小板血症患者を含んだ。３人の患者の全
ては、引き続く骨髄増殖性病気の臨床診断と一致する高
し・血小板ＤＮＡポリメラーゼの量を有するものであっ
た〇 第一の患者（患者番号１４）は上昇したヘマトクリット
及び正常の血小板カウント数を示した。この患者の血液
の１単位をマイクロアッセイを用いてＤＮＡポリメラー
ゼ活性の分析を行ったところ、陽性であった（表■）。

この患者は実施例２に記載し１．ＨＲＮＡ−鋳型反応に
おいてｃＤＮＡを合成した。引き続く赤面球塊及び牌臓
径の測定は真正赤血球増殖症を確認した。

第二の患者（患者番号１０）は外科手術後に上昇した血
小板カウント数を示した。血小板は粒状ＤＮＡポリメラ
ーゼに対して陽性であった（表■）。血小板カウント数
は、数回の測定において１０６個より犬であった。患者
の記録を見ると以前は無視された上昇した血小板量の履
歴を示していた。彼女の血小板機能は正常であった。引
き続く研究は二次血小板血症に通常伴う病気は現れなか
った。従って、本能性血小板血症の診断がなされた。

第三の患者（患者番号４）は肺臓炎と診断された腹部の
苦痛の再発注症状を有したが、しかし彼女の膵臓は何等
の異常も示さなかった。次い−で、この患者は上昇した
血小板カウント数を有することが認められた。彼女の血
小板は高い粒状ＤＮＡポリメラーゼ（表Ｉ）を示した。

彼女の記録を見ると高い血小板量の履歴が示され、本態
性血小板血症の診断がなされた。この患者の上昇した血
小板カウント数は低投与量のブスルファン治療に応答さ
れ、現在彼女は無症候状態である。

実施例Ｉと同様に、血小板ＤＮＡポリメラーゼを血小板
血症骨髄層殖性病気の患者において繰り返し定量した。

血小板は化学療法前、化学療法後、ブラタレットカウン
ト数の下降前及び下降が起った場合には下降後に集めた
。

化学療法に血小板減少の下降により応答した全ての患者
は血小板ＤＮＡポリメラーゼにおける前減少を示した。

結果を表■に示す。

これらの実施例は、ＤＮＡポリメラーゼを用いて前白血
病状態を診断し、患者の化学療法に対する応答を予測す
ることができる。これは、あ・る高いリスクの癌患者に
ついて観察或いは治療のための検知を行う手段を提供す
る。

ｉｎ　ｖｉｔｒｏの酵素活性の使用はヒト血小板の粒子
における血小板ＤＮＡポリメラーゼを定量する単なる例
示にすぎない。その他の検定法、例えば全血小板調剤上
に抗−ポリメラーゼ抗体を使用する免疫学的検定法も又
使用することができる。

表　１ 患者　血小板数　外因性　内因性 ］　ＣＭＬ　１．０　２６５　４．４ ２　ＣＭＬ　１．０　２４０ ３　ＣＭＬ、　２．５　２２６　３４ ４　ＥＴ　０．８　１９１　’　１９ ５　ｐｖ　０．７　１７５ ６　ＥＴ　１．５　１７４　２３ ７　ｇＴ　Ｏ，８１４３１５ ８ｐｖ　Ｏ１３１３６２６ ９ｃＭｒ、　２．５　１２２　６．３ １０　ＥＴ　１．２　１１５　１６ １ｉ　ｐｖ　Ｏ，６９９３７ １２ＣＭＬ　Ｏ，６８３ １３ＣＭＬ　２．ｉ　７０ １４　ｐｖ　Ｏ，２６３ １５ｐｖ　１．０　５５　４．５ １６　ＥＴ　２．０　５１　４．２ １７　ＥＴ　Ｏ，８４９７，３ １８ＭＰ　Ｏ，８４５４，５ １９ＭＰ　Ｏ，９４１１２ ２Ｑ　ｐｖ　Ｏ，４４１ ２１ＣＭＬ　１．５　４０ ２２　ｐｖ　Ｏ，６３９２４ ２３ＣＭＬ　Ｏ，５３７ ２４ＭＦ　１．０　３４　１．４ 邑上亙亘ｌ」 患者　血小板数　外因性　内因性 ２５　ＭＦ　１．０　２９　１．３ ２６　正常　０．３−　２９ ２７　正常　０．２　２８＊３．３ ２８　正常　Ｑ、４　２７ ２９　ｐｖ　Ｏ，ｓ　２４　５．１ ３０　ｐｖ　Ｏ，５２３２，９ ３１ＭＦｏ、８　２１ ３２　正常　０．４　１８ ３３　正常　０．４　１４ ３４　正常　０．３　１２　２．９ ３５　正常　０．２　９　１．０ ３６　正常　０．４　７＊１．２ ３７　正常　０．３３ ＊ピークなし 表　１ １４　６３　ＰＶ １０　１１５　ＥＴ ４　１９１　ＥＴ 表　ｌ Ａ　ＰＶ　２５　０．８　１１　１．０　０．２ＢＥＴ
　５３　２．０　１　２．０　０．２ｃＥＴ２３０　１
．６　２５　１．０　０．２Ｄ　ＩＥ’Ｉ’　１５４　
１．０　７３　１．０　０．５Ｅ　ＰＶ　１７５　０，
７　１０９　０．８　１．ＯＦ’ＭＦ　４０　’　１．
０　３Ｂ　１．０　１．Ｏｏ　ＥＴ　１７４　１，０　
１Ｂ５　１．０　１．０代理人　弁理士　河　野　昭 第１頁の続き ［相］発　明　者　デビット　ジリスピイ　アメリ。

ア、メ ０発　明　者　デビット　ストレイア　アメリ。

モア、１ 力合衆国ヘンシルバニア州１９３４３％グレンムーイプ
ルフラワー　ロード、ボックス１３８力合衆国　ペンシ
ルバニア州　１９０１０．ブラインロック　クリーク　
ロード、９１８ 手続補正補正自発） ｉ和４８年１０月１２日 特許庁長官殿 １、事１′１の表示 昭和５８年特許願第１６３１０７号 ２、発明の名称 診断方法およびａＡ＠ ３、補正をする者 事件との関係　特許出願人 氏　名　イザドーラ　プロトスキイ （ほか２名） ４、代理人　〒１０７ （１所　東京都港区赤坂２丁目２番２１号６、補正の対
象 明細出　タイプ浄書　（内容には変更ありまＩん）およ
び長任状およびその訳文各１通 ７、補ｉ・の内容

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 （１１患者の血液の分析により病気、或いは潜在的病気
   を検知する方法において、ウィルス様ＤＮＡポリメラー
   ゼの割合を血液学的に正常な患者のそれらと相対的に定
   量することを特徴とする方法。 （２）血液から血小板及び／又は血小板粒子を単離し、
   その中のウィルス様ＤＮＡポリメラーゼを検知する特許
   請求の範囲第１項記載の方法。 （３）血小板或いは血小板粒子から得らｊ、タウイルス
   様ＤＮＡポリメラーゼを合成ＲＮＡ鋳型プライマーと反
   応させ、合成されたＤＮＡを測定する特許請求の範囲第
   １項又は第２項記載の方法。 （４）鋳型が（ｄＴ）（ｒＡ）　プライマー鋳型ｍ　ｎ であり、ウィルス様ＤＮＡポリメラーゼが鋳型上でプレ
   ミックスとインキュベートされ、ＤＮＡを析出し、測定
   する特許請求の範囲第３項記載の方法。 （５）血小板粒子中に滞留する血小板ＲＮＡを用いて血
   小板ＤＮＡポリメラーゼにより生成したＤＮＡ合成を測
   定する特許請求の範囲第１項又は第２項記載の方法。 （６）　プライマー鋳型が血小板ＲＮＡである特許請求
   の範囲第２項〜第５項のいずれかに記載の方法。 （力　測定が血小板ＤＮＡポリメラーゼ或いは交差反応
   ＤＮＡポリメラーゼに対して生産された抗体を用いる免
   疫学的なものである特許請求の範囲第１項又は第６項の
   いずれかに記載の方法。 （８）試験血液がヒト或いは非−ヒト動物のそれである
   特許請求の範囲第１項〜第７項のいずれかに記載の方法
   。 （９）血液が先ず、 ａ）その他の血液成分から血小板を分離し、ｂ）分画遠
   心を用いて公知量の血小板、分裂体から小粒子を調製し
   、及び Ｃ）等比重遠心分離を公知容量の勾配内において用いて
   、ウィルス様粒子をその他の小粒子から分離することに
   より処理さ扛る 特許請求の範囲第１項〜第８項のいずれかに記載の方法
   。 （１０）　血液試料から得られた血小板から病気を同定
   するための試験キットにおいて、 ａ）鋳型プライマー、及び ｂ）　ＤＮＡポリメラーゼ活性を許容し、増強するため
   の公知組成の測定溶液 よりなり、これらが血小板から調製されるウィルス様粒
   子の生物学的標本について最大ＤＮＡ合成のために（’
   ｄＴ）（ｒＡ）、プラｍ、　ｎ イマー鋳型を用いて１ｎｖｉｔｒｏでＤＮＡポリメラー
   ゼ活性の酵素的測定を行うように適用されていることを
   特徴とする方法。