JPS6056985A - クマリン誘導体 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 本発明は新規なりマリン誘導体に関する。

本発明の新規なりマリン誘導体は螢光標識試薬として有
用である。

従来、クマリン誘導体としては１位にアミン基、メチル
アミン基、ジメチルアミノ基、水酸基、６位および７位
に水酸基を有する化合物が知られている（Ｇｏｏｄｗｉ
ｎら、　Ａｒｃｈ、Ｂｉｏｃｂｅｍ、Ｂｉｏｐｈｙｓ；
２Ｔ巻、１５２頁、　１９５０年）。しかしながら、１
位にアミン基、メチルアミン基、ジメチルアミノ基を有
するクマリン類はメタノール、エタノール等の有機溶媒
中での相対螢光強度は太きいが、水溶媒中では小さい。

また、１位に水酸基、６位および７位に水酸基を有する
クマリン類はアルカリ水溶液中での相対螢光強度は大き
いが、中性ないし弱酸注水溶液中での相対螢光強度はア
ルカリ水溶液中のそれと比べて％ａａ以下という欠点を
有する。また７位にアミノ基、モノアルキルアミノ基、
ジアルキルアミノＳｔ−有するクマリン類は光に対して
感受性が高いため、遮光が必要という欠点を有する。

更ＪＣ７−メドキシー４−ブロモメチルクマリンが知ら
れている（Ｄｕｎｇｅｓ　、　Ａｎａｌ、Ｏｈｅｍ　；
　４９巻ｐ４４２〜４４５頁、　１９７７年）。　しか
しながら、該化合物は相対螢光強度が小さい欠点を有し
ている。

更にＮ　−［：　Ｓ　−（７’−アジドクツリン−４′
−カルボナミド）−ペンチルオキシカルボニルメチル〕
−マレイミド等が知られている（特開昭５７−１４６７
７１号）。しかしながら、これらの化合物は光に対して
感受比が高く不安定でおるという欠点を有する。

更に６．７−メチレンジオキシクマリンが知られている
（Ｓｐａｔｈら、　Ｂｅｒ　；　１０巻、１０２頁、　
１９３７年）。しかしながら、この化合物については螢
光標識試薬としての用途についての記載はない。

更に６．７−メチレンジオキシ−４−メチルクマリンが
知られている（Ｋ−Ｆｕｋｕｉら、　Ｊ、ｓｃｉ、Ｈｌ
ｒｏ−ｓｈｉｍａ　Ｕｎｉｖ、　；　Ａ−Ｍ　、　２６
巻、１３１頁、　１９６３年）。

しかしながら、この化合物についても螢光標識試薬とし
ての用途についての記載はない。

本発明者らは、クマリン誘導体について鋭怠研究した結
果、下記に示すクマリン誘導体が螢光標識試薬として有
用なことを見出し、本発明を完成した。

本発明は式 〔式中、 Ｘ　ｉｔ、　メ５−ル基、ホルミル基、ｐ−）ルエンス
ルフオニルヒドラジノメチル基、ジアゾメチル基、ヒド
ロキシメチル基、ハロホルミルオキシメチル基、カルボ
キシメチル基、ハロホルミルメチル基、アルコキシカル
ボニルメチル基、ヒドラジノカルボニルメチル基、シア
ノカルボニルメチル基、ジアゾアセトニル基、ハロアセ
トニル基、ハロメチル基、フタルイミドオキシメチル基
、アミノオキシメチル基、フタルイミドメチル基、アミ
ノメチル基またはインシアナートメチル基、 Ｙは水素原子、ニトロ基、アミノ基、３−カルボキシア
クリロイルアミノ基、マレインイミド基、アセチルアミ
ノ基、ハロアセチルアミノ基また鉱イソシアナート基、 を示す。但し、Ｘがメチル基、Ｙが水素原子の場合を除
く。〕 を有するクマリン誘導体に関する。

一般に化合物の分析定量方法として、化合物の可視また
は紫外部吸収スペクトルを利用する分光学的方法が広く
利用されている。そして、化合物の吸光度係数が小さい
場合は、吸光度係数の大きい誘導体に変換するとか、あ
るいは螢光性を有する誘導体に変換すること等によって
、高感度定量が可能となる。前記式（１）ｔ−有する化
合物は３２０〜３７０　ａｍにおける分子吸光係数か少
（とも１０’　Ｌ　／　ｍｏｔｅ　ｃｍでｓｂ、相対螢
光強度１ｊ。

巾広いｐＨ領域（ｐＨｔ、ｓ〜ＩＱ　）の水溶液中で大
きく、かつ同等の強さを有する。また、前記式（１）　
ｆ、有する化合物線含水系有機溶媒中でもｐＨによる影
響を受けることなく大きい相対螢光強度を示す。更に、
前記式（Ｉ）を有する化合？！Ｉは光に対する感受性が
小さく、遮光を必要とすることもない。更に、前記式（
１）　を有する化合物から誘導される変換化合物は高速
液体クロマトグラフ法によシ、高感度で分離・定量が可
能である。

例えは高速液体クロマトグラフ装置に螢光検出器を附属
させることにょシ、カルボキシ基、メルカプト基、カル
ボニル基、アルコールｕ　水酸基、ヒドラジノ基、アミ
ノ基等を有する化合物’１ｌｏＯフェムトモルのレベル
で高感度で分離・定量することができる。従って、前記
式（Ｉ）を有する化合物は螢光標識試薬として有用であ
る。

本発明の前記式ＣＩ）を有する化合物はベヒマン（Ｐθ
ｃｈｍａｎｎ）反応に準じて製造される。

例えばＸがホルミル基である化合物線メチル基を酸化す
ることによって得られる。Ｘがｐ−トルエンスルフォニ
ルヒドラジノメチル基である化合物はホルミル基をトシ
ルヒドラジンと反応させることによって得られる。Ｘが
ジアゾメチル基である化合物はｐ−トルエンスルフォニ
ルヒドラジノメチル基をアルカリで分解することによっ
て得られる。Ｘがヒドロキシメチル基である化合物はホ
ルミル基を還元することによって得られる。Ｘがハロホ
ルミルオキシメチル基である化合物Ｌヒドロキシメチル
基をトリハロメチルハロホルメートと反応させることに
よって得られる。

また、Ｘがカルボキシメチル基である化合物は、３，４
−メチレンジオキシフェノールｔ−原料化合物として、
濃硫酸などの脱水触媒の存在下で無水クエン酸と縮合さ
せることによって得られる。Ｘがハロホルミルメチル基
である化合物はカルボキシメチル基を有機酸ハロゲン化
物と反応させることによって得られる。Ｘがアルコキシ
カルボニルメチル基である化合物はハロホルミル基をア
ルコールと反応させることによって得られる。Ｘがヒド
ラジノカルボニルメチル基である化合物はアルコキシカ
ルボニルメチル基を抱水ヒドラジンと反応させることに
よって得られる。Ｘがシアノカルボニルメチル基でりる
化合物は、ハロホルミルメチル基金トリアルキルシリル
シアニドと反応させることによって得られる。Ｘがジア
ゾアセ）ニル基である化合物はハロホルミル基をジアゾ
メタンと反応きせることによって得られる。Ｘがハロア
セトニル基である化合物はジアゾアセトニル基をハロゲ
ン化水素酸と反応させることによって得られる。

ｘがハロメチル基である化合物は、カルボキシメチル基
をハロゲンと反応させることによって得られるＯＸが７
タルイミドオキシメチル基である化合物りへロ゛メチル
基をＮ−ヒドロキシフタルイミドと反応させることによ
って得られる。

Ｘがアミノオキシメチル基である化合物はフタルイミド
オキシメチル基を酸で加水分解することによって得られ
る。Ｘが７タルイミドメチル基である化合物はハロメチ
ル基をフタルイミドのアルカリ金属塩と反応させること
によって得られる。Ｘがアミノメチル基である化合物は
フタルイミドメチル基を酸で加水分解“することによっ
て得られる。Ｘがイソシアナートメチル基である化合物
はアミノメチル基をトリノ・ロメチルハロホルメートと
反応させることによって得られる。

次にＹがニトロ基である化合物はＹが水素原子である化
合物ｔ−濃硝酸と反応させることによって得られる。Ｙ
がアミノ基である化合物はニトロ基を還元することによ
って得られる。Ｙが３−カルボキシアクリロイルアミノ
基である化合物はアミノ基を無水マレイン酸と反応させ
るこ走によって得られる。Ｙがマレインイミド基である
化合物は３−カルボキシアクリロイルアミノ基を閉環さ
せることによって得られる。Ｙがアセチルアミノ基であ
る化合物はアミノ基金無水酢酸と反応させることによっ
て得られる。

Ｙがハロアセチルアミノ基である化合物はアミン基をハ
ロアセチルハライドと反応場せることによって得られる
。Ｙがイソシアナート基である化合物はアミノ基をトリ
ハロメチルハロホルメートと反応させることによって葡
られる。

次に実施例金あげて、本発明を更に詳しく説明するが、
本発明はこれらの実施例に限定されるものではない。

実施例１．６．１−メチレンジオキシ−４−メチル−３
−ニトロクマリン ６．１−メチレンジオキシ−４−メチルクマリン６．１
２Ｉｉを無水酢酸４００−に溶解した後、５℃以下に保
持した。これに濃硝ｆ１１！（ｄ　＝　１．４２　）　
３．６−および無水酢酸５０−の混液を撹拌下で徐々に
加えた。滴加終了後、′約２時間放冷した。Ｉｉ出した
結晶を分取し、水冷エーテルで洗浄すると粗結晶６．８
ｇが得られた。得られた粗結晶をアセトニトリルを用い
て再結晶すると融点２３４〜２３５℃を有する表記化合
物６．０．９が黄色釧状品として得られた。

元素分析値　ａ、１ｕ、ｏ６ｎとして 計ｊし１Ｌイ１荏　ａ　、５３．０２　；　）イ　、２
．８３　；　ＩＪ　、５．６２実測値　０　、５３．３
０　；　Ｈ、２，６３；　Ｎ　、　５．３１１実施例２
．６．７−メチレンジオキシ−４−メチル−３−アミノ
クマリン 実施例１で得られた６、７−メチレンジオキシ−４−メ
チル−３−ニトロクマリン、乙５ｇをテトラヒドロフラ
ン１．６ｔに溶解した後、１０％パラジウム−炭素４．
０．９’を加え室温で攪拌下水素ガスを約２時間通気し
た。接触還元反応終了後、反応混合物より不溶物をろ去
し、得られたろ液を減圧下で沿線すると粗結晶３．３ｇ
が得られた。得られた粗結晶をジクロルメタンを用いて
再結晶すると融点２５１〜２５２℃を有する表記化合物
３．０．９が白色針状晶として得られた。

元素分訪値　Ｃ１１ＪＯ４１４として 計算値　０　、６０．２７　；　Ｈ、４，１４；　Ｎ　
、　６．３９実測値　ｃ　、　６０．４１　；　Ｈ、３
，９６；　Ｎ　、　５．９４実施例３．６．７−メチレ
ンシオキシーーーメチルー３−（３−カルボキシアクリ
ロイルアミノ）クマリン 実施例２で得られた６、　７−メチレンジオキシ−４−
メチル−３−アミノクマリン５０（ｌ１ｇに無水マレイ
ン酸３１０■を加え、沸騰水浴中で１０分間加温した。

次いでジメチルホルムアミド１，０−を加え丈に２０分
間加温した。反応終了後、反応混合物に飽和炭酸す）　
ＩＪウム水溶液會加え、次いでジクロルメタンで洗浄後
、２Ｎ塩酸を加えて酸性にした。生成した白色沈澱を分
取し。

ジクロルメタンを用いて再結晶すると融点１８０〜１８
４℃を有する表記化合物３８２■が白色釦状晶として得
られた。

元素分析値　０＋ｓＨｔ＋０７Ｎとして計算値　ｃ　、
　５６．７８　；　Ｈ、ａ、ｓｏ　；　Ｎ　、　４．４
２実測値　ａ　、　ｓｅ、ａｙ　；、Ｈ、３４９；　Ｎ
　、　４．１１実施例４、６．１−メチレンジオキシ−
４−メチル−３−マレインイミドクマリン 実施例３で得られた６、７−メチレンジオキシ−４−メ
チル−３−（３−カルボキシアクリロイルアミノ）クマ
リン３１Ｔ１１９に酢酸ナトリウム２００ｍｙ、ホウ酸
ＴＯ＊９および無水酢酸２−を加えて９０℃で１０分間
加温した。反応終了後、反応混合物を氷冷水５〇−中に
注ぎ、生成した黄褐色沈澱を分取し乾燥した。得られた
粗結晶をアセトニトリル４ゴに溶解後、活性炭を加えて
加温し脱色、次いで放冷し析出した結晶を分取すると融
点２５６〜２５Ｔ　’Ｃを有する表記化合物ＩＢ０．２
Ｍ９が淡黄色柱状晶として得られた。

元素分析値　０＋５ＨｐＯ６Ｎとして 組語値　ａ　、　６０．２Ｑ　；　Ｈ、３，０３；　ｘ
　、　４．６８実測値　ａ　、　ｓｏ、ｏａ　；　Ｈ、
２，９９；　Ｎ　、　５．０８実施例５、６、Ｔ−メチ
レンジオキシ−４−メチル−３−アセチルアミノクマリ
ン 実施例２で得られた６、１−メチレンジオキシ−４−メ
チル−３−アミノクマリン５００■を無水酢酸５ゴに懸
濁した後、油浴中１２０℃で１０分間加温した。反応終
了後、反応混合物を放冷すると平板状白色結晶が析出し
た。析出した結晶を分取し、水冷エーテルで洗浄し、乾
燥した。

得られた結晶をアセトニトリルを用いて再結晶すると融
点１５１〜１５２℃を有する表記化合物４６０ｍｇが白
色針状晶として得られた。

元素分析値　０＋５１１１５０６Ｎとして計算値　ａ　
、　ｓａ、ｒｒ　；　Ｈ、４，２４；　Ｎ　、　ｓ、ａ
ａ実測値　０　、５９．６８　；　Ｈ、４，２１；　Ｎ
　、　５．２５実施例６．６．Ｔ−メチレンジオキシ−
４−メチル−３−ブロモアセチルアミノクマリン実施例
２で得られた６、　Ｔ−メチレンジオキシ−４−メチル
−３−アミノクマリン４３８嘘を乾燥テトラヒドロ７ラ
ン１２０−に俗解後、ブロモアセチルプロミド４０４Ｑ
およびトリエチルアミン２０３８９を加えて室温で３０
分間、次いで１時間加熱遠離した。反応終了後、反応混
合物より溶媒を減圧下で留去した。得られた残留物を少
量のジクロルメタンに溶解し、次いでシリカゲルを用い
たカラムクロマトグラフィーに付し、ジクロルメタンで
溶出・精製した。得られＩｃ粗結晶をアセトニトリルを
用いて再結晶すると融点２１２〜２１４Ｃを有する表記
化合物２３８■か淡黄色板状晶として得られた。

元素分析値　０＋５Ｈ１６０ｓＮＢｒとして計算値　Ｉ
Ｊ　、　４５．８９　；　Ｈ、２，９６；　Ｎ　、　４
．１２実測値　０　、４５．２０　；　Ｈ、２Ｊ８　；
　Ｎ　、　４．０９実施例７６．１−メチレンジオキシ
−４−メチル−３−インシアナートクマリン トリクロロメチルクロロホルメー）　１．１　ｇを酢酸
エチル１０−に加え氷冷後、活性炭１０ｊ１ｇを加え、
次いで攪拌下で約１０分間で２５〜３０　Ｃに昇温させ
た。次いでこの溶液を再び氷冷した。

次いでこの溶液に、実施例２で得られたｓ、　ｒ　−メ
チレンジオキシ−４−メチル−３−アミノクマリン１．
０３．９を酢酸エチル１５０−に溶解した溶液を約３０
分間で滴加した。滴加終了後、油浴上で攪拌しつつ徐々
に加温した後、約１時間加熱還流した。反応終了後１反
応混合物をろ過して活性炭を除去した。得られたろ液を
減圧下で濃縮し放冷すると淡黄色針状晶の粗結晶が得ら
れた。得られた粗結晶を酢酸エチルを用いて再結晶する
と融点２１０〜２７１℃を有する表記化合物０．９５　
ＩＩが淡黄色針状晶として得られた。

元素分析値　Ｃｌ２Ｈ７０５Ｎとして 計算値　０　、５８７８　；　Ｈ、２，８８；　Ｎ　、
　５．７１実側値　ｃ　、　５Ｂ、２０　；　Ｈ、２，
７９；　Ｎ　、　５．５６実ｔｊｆｆｉ例８．　Ｇ、７
−メチレンジオキシ−４−ホルミルクマリン ６、１−メチレンジオキシ−４−メチルクマリン６・０
１　ｆ：ｐ−キシレン２５０−に溶解した後、よく粉砕
した二酸化ゼレン６ｏＩを加え激しく攪拌しつつ、油浴
上で約８時間加熱還流した。

酸化反応終了後、反応混合物よｐ速やかに不溶物をろ去
した。不溶物を加温したｐ−キシレンで洗浄し、この洗
液と先に得だろ液を合せた。

ろ液を減圧下で濃縮し、次いで残留物にメタノール８０
０−を加え、次いで活性炭を加えて脱色、次いで放冷し
析出した結晶を分取すると融点２３４〜２３５℃を有す
る表記化合物５．４ｇが微黄色針状晶として得られた。

元素分析値　ＣｌｌＨ６０１ｉとして 計算値　０　、６０．５６　；　Ｈ、２，７７実測値　
ａ　、　６０．３９　；　Ｈ、２，６４実施例９６．１
−メチレンジオキシ−４−（ｐ−トルエンスルフォニル
）ヒドラジノメチルクマリン 実施例８で得られた６、１−メチレンジオキシ−４−ホ
ルミルクマリン１．０９．９　ｅメ”タノール４００コ
に溶解した後、攪拌下でトシルヒドラジン２．０．９　
ｉ少量づつ加えた。反応混合物ｔ−ｅｏ’ｃで３０分間
加温した後、水冷中で一夜放置した。

析出した鮮黄色針状晶を分取して粗結晶１．３４　ＩＩ
が得られた。得られた粗結晶をジクロルメタンを用いて
再結晶すると融点１８８〜１９０℃を有する表記化合物
１．２０　Ｉｆが黄色綿状晶として得られた。

元素分析値　Ｃｌ８Ｈ１４０６Ｎ２日として計算値　ｅ
　、　５５．９６　；　Ｈ、３，６２；　Ｎ　、　７．
２５　；Ｓ　、　８．２９ 実測値　ａ　、　５５．７０　；　）ｌ　、　３．４５
　；　Ｎ　、　６．８２　；Ｓ　、　７．７１ 実施例１０．６．７−メチレンジオキシ−４−ジアゾメ
チルクマリン 実施例９で得られた６、Ｔ−メチレンジオキシ−４−（
ｐ−）ルエンスルフオニル）ヒドラジノメチルクマリン
５００■をジクロルメタン２００ｄｌｃｌ解した後、０
．ＩＮ水酸化ナトリウム水溶液１２，５−を加え室温で
２時間撹拌した。反応終了後１反応混合物は二層に分れ
、水層はほば無色、有機溶媒層は黄色を示した。水層を
除去し、有機溶媒層は水２０−で３回洗浄後、硫酸ナト
リウムを加えて脱水した。有機溶媒層を減圧下で濃縮し
放冷して析出する結晶を分取すると分解点２８２〜２８
４℃を有する表記化合物２４５Ｑが黄橙色柱状晶として
得られた。

元素分析値　０．１Ｈ６０４Ｎとして 計算値　ｃ　、　５７．４０　；　Ｈ、２，６３；　Ｎ
　、　１２．１７実測値　ａ　、　５７．２９　；・Ｈ
、２，４５；　Ｎ　、　１１．５０実施例１１．６．７
−メチレンジオキシ−４−ヒドロキシメチルクマリン 実施例８で得られた６、　７−メチレンジオキシ−４−
ホルミルクマリン１．５　ｇ　ｆｃメタノール８０−に
懸濁し、室温で攪拌しながら水酸化ホウ素ナトリウム５
６０■をメタノール１０ｍｇＫ溶解した溶液を少量づつ
滴加した。反応の進行につれ、反応溶液は無色透明とな
シ、次いで淡黄色結晶が析出した。析出した結晶全分取
し、得られた粗結晶をアセトニトリルを用いて再結晶す
ると融点０１１〜１１９℃を有する表記化合物１．２１
　ｇが淡黄色針状晶として得られた。

元素分析値　ＵｕＨｓＯｓとして 計算値　ａ　、　ｅｏ、ｏｏ　；　Ｈ、３，６７実測値
　ａ　、　ｓｓ、ａｓ　；　Ｈ、３，４６実施例１２．
６．７−メチレンジオキシ−４−クロロホルミルオキシ
メチルクマリン トリクロロメチルクロロホルメー）　１．１１９を酢酸
エチルｔａｇに加え水冷後、活性炭１０ｍ９ｆｔ加え、
次いで攪拌下で約１０分間で２５〜３０℃に昇温させた
。次いでこの溶液を再び氷冷した。

次いでこの溶液に実施例１１で得られた６、１−メチレ
ンジオキシ−４−ヒドロキシメチルクマリンｏ、ｓａｇ
およびキノリン３８３Ｑ’に含むトルエン溶液２００−
を滴加した。滴加終了後、攪拌下で一夜放置した。反応
終了後、析出する沈澱を除去し、減圧下で濃縮した。得
られた残留物をｎ−へキサンを用いて洗浄すると融点１
４４〜１４８　Ｃを有する表記化合物ｏ、ｙｙ　ｙが淡
黄色結晶として得られた。

元素分析値　０１２Ｈ７０６０ｚとして計算値　ａ　、
　５０．９６　；　Ｈ、２，５０実測値　ｃ　、　ｓｏ
、ｓｏ　；　Ｈ、２，４１実施例１３．６．１−メチレ
ンジオキシ−４−カルボキシメチルクマリン よ（粉砕した無水クエン酸ｓｏｇを濃硫酸６１．５−に
約３０分間で加えた。次いで６０〜１０℃に３０分間加
温した。得られた淡黄色シロップ状溶液を氷冷して５℃
以下に保持し、次いで粉砕した３、４−メチレン・ジオ
キシフェノール３４．５　Ｆを攪拌下で徐々に加えた。

添加終了後、更に５℃以下で一夜攪拌した。反応終了後
、反応混合物を水１００Ｇ−に分散した。生成した黄褐
色沈澱を分取し、氷冷水で洗浄後、２．０　Ｎ水酸化す
）　ＩＪウム水溶液に溶解した。次いで２．ＯＮ硫酸を
加えてｐＨ２，５に調整した後、−夜放冷した。生成し
た沈澱を分取し水洗、乾燥後、再びアセトニトリルに溶
解し活性炭で脱色し、氷冷した。析出した結晶を分取す
ると融点１７７〜１１９℃を有する表記化合物ＩＴ、０
１１が淡黄色柱状晶として得られた。

元素分析値　Ｃ１２Ｈ６０６として 計算値　０　、５８．０７　；　Ｈ、３，２５実測値　
ロ、　５７．９８　；　Ｈ、３，０８実施例１４．．６
．７−メチレンジオキシ−４−クロルホルミルメチルク
マリン 実施例１３で得られた６、　Ｔ−メチレンジオキシ−４
−カルボキシメチルクマリンＬｏｙ？乾燥したジメトキ
シエタン２００−に溶解した後、蓚酸クロリド２．０９
−を加え、次いで窒素ガスを吹寿込んだ。反応終了後、
反応混合物よシ減圧下で溶媒を留去すると表記化合物が
淡黄色無定形状として得られた。本化合物はメトキシカ
ルボニルメチル体（次の実施例１５）に変換することに
よって確認した。

実施例１５．６．７−メチレンジオキシ−４−メトキシ
カルボニルメチルクマリン 実施例１４で得られた６、７−メチレンジオキシＰ４−
クロルホルミルメチルクマリン５００１１！９に過剰量
のメタノールを加えて室温に約３０分間放置した。反応
終了後、反応混合物より溶媒を留去した。得られた残留
物をアセトニトリルを用いて再結晶すると融点２０６〜
２０７　Ｃを有する表記化合物４７２Ｑが得られた。

元素分析値　ａ１５”ｆｏｏｄとして 言１３（［０、５９，５４：　Ｈ、３，８４実測値　０
　、５９．２９　；　Ｈ、３ＪＯ実施例１６．６．７−
メチレンジオキシ−４−ヒドラジノカルボニルメチルク
マリン 実施例１５で得られた′６．１−メチレンジオキシー４
−メトキシカルボニルメチルクマリンＬ　５．９　ｆｔ
メタノール２５−に溶解した後、抱水ヒドラジン０．６
−を加え室温で３０分間攪拌した。

反応混合物を一夜放冷し析出した結晶を分取した。得ら
れた結晶をアセトニトリルを用いて再結晶すると融点２
０４〜２０６℃を有する表記化合物θ、９Ｉ！が白色針
状晶として得られた。

元素分析値　０＋２Ｈ１ｏＯｓＮ２として計算値　ａ　
、　５４．９６　；　Ｈ、３，８４；　Ｎ　、　１０．
６８実測値　ａ　、　５４．６１　；　Ｈ、３，７８；
　Ｎ’　、　ｔｏ、ａａ実施例１γ、６．１−メチレン
ジオキシ−４−シアノカルボニルメチルクマリン 実施例１４で得られた６、　Ｔ−メチレンジオキシ−４
−クロロホルミルメチルクマリン１．０７ｇに沃化亜鉛
４ｑおよびトリメチルシリルシアニド４００１１９を含
むジメトキシエタン溶液１ｏ−を加え、室温で一夜放置
した。反応終了後、反応混合物よ少溶媒を減圧下で留去
した。得られた残留物をシリカゲル音用いたカラムクロ
マトグラフィーに付し、ジクロルメタンで溶出・精製す
ると、分解点１８４〜１８６℃を有する表記化合物０．
３７　ｙ　ｂ：淡黄色板状晶として得られた。

元素分析値　Ｕｊ５Ｈ７０５Ｎとして 計算値　０　、６０．６９　；　Ｈ、２，７５；　Ｎ　
、　５．４５実測値　０　、８０．３２　；　Ｈ、２，
８７；　Ｎ　、　５．５２実施例ＩＢ、６．７−メチレ
ンジオキシ−４−ジアゾアセトニルクマリン 実施例１４で得られた６、１−メチレンジオキシ−４−
クロルホルミルメチルクマリン４００１９にジアゾメタ
ンのエーテル溶液を過剰量加え、Ｖｉｓａｇｒらの方法
（Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ　、　１０巻、１３５頁。

１９１１年）に準じて反応を実施した。ジアゾメタンの
添加と共に激しく反応した。反応終了後、反応混合物よ
り鼠素気流下で溶媒を留去すると淡黄色無定形状物が得
られた。得られた淡黄色無定形状物をシリカゲルを用い
たカラムクロマトグラフィー（溶媒ニジクロルメタン）
に付して精製すると表記化合物２４０１１９が得られた
。

元素分析値　０１ａＨ８０５Ｎ２として計算値　ａ　、
　ｓｒ、ｓｓ　；　（（、２，９４；　Ｎ　、　１０．
２９実測値　Ｃ，５７，１２；　１（、３，００；　Ｐ
Ｉ　、　９．９８ＩＲｘペクト／’　Ｖ　Ｎｕ”’　ｌ
ｆｆ−’　：ａｘ ２１０Ｇ　（０＝Ｎ＝Ｎ） 実施例１９．６．７−メチレンジオキシ−４−ブロモア
セトニルクマリン 実施例ＩＢで得られた６、１−メチレンジオキシ−４−
ジアゾアセトニルクマリン１３６ｍ１ｇｔ−アセトニト
リル２づに溶解した後、４８％臭化水素酸８４，４μｔ
を静かに注入した。窒素ガスが激しく発生した。反応終
了後、反応混合物を水冷下で放置すると結晶が析出した
。析出した結晶を分取し、夕景の水冷エーテルで洗浄し
乾燥すると融点２１２〜２１４℃を有する表記化合物８
２．４■が白色綿状晶として得られた。

元素分析値　０＋５ＨｐＯｓＢｒとして計算値　０　、
４８．００　；　Ｈ、２ＪＴ　；　Ｂｒ　、　２４．５
８実測値　０　、４Ｂ、４６　；　Ｈ、２，７０；　Ｂ
ｒ　、　２４．７５実施例２０．６．７−メチレンジオ
キシ−４−ブロモメチルクマリン 実施例１３で得られた６、７−メチレンジオキシ−４−
カルボキシメチルクマリン４．！Ｊ６　ＪｉＪを氷酢酸
１５ｄＫ懸濁した後、油浴中１２０℃に加温した。これ
に米酢９１５−に臭素３．２ｙを溶解した溶液を徐々に
滴加した。滴加終了後、反応混合物を約２時間加熱還流
し、次いで放冷して生成した黄緑色結晶を分取した。得
られた結晶をエーテルで洗浄し乾燥後、再びアセトニト
リル４００−に加温溶解し活性炭で脱色し、氷冷した。

析出した淡黄色針状晶を分取し、書びアセトニトリルを
用いて再結晶すると分解点２３５〜２３８℃を有する表
記化合物３．９１１が得られた。

元素分析値　０１１Ｈ７０４Ｂｒとして計算値　０　、
４６．６４　；　Ｈ、２，４Ｔ　；　Ｂｒ　、　２８．
２３実測値　０　、４Ｂ、９３　；　Ｈ、２，４４；　
Ｂｒ　、　２８．０３実施例２１．６．７−メチレンジ
オキシ−４−７タルイミドオキシメチルクブリン 実施例２０で得られた６、　Ｔ−メチレンジオキシ−４
−ブロモメチルクマリン２．５９をジメチルホルムアミ
ドＳｏｄに溶解した。こσ）溶液を予めトリエチルアミ
ン１２．２ｔｄおよびＮ−ヒドロキシフタルイミド２．
４１１１を溶解したジメチルホルムアミド溶液に水冷下
撹拌しながら加えた。

反応混合物を３０分間攪拌し、析出する結晶を分取し、
氷冷したエーテルで洗浄、乾燥すると粗結晶２．　Ｔ　
９が得られた。得られた粗結晶をジメチルホルムアミド
−アセトニトリル混合溶媒を用いて魯結晶すると融点２
３５〜２３８℃を有する表記化合物２．０５９が白色綿
状晶として得られた。

元素分析値　０，５Ｈ９０６Ｎとして 計算値　ａ　、　６Ｇ、２０　；　Ｈ、３，０３；　Ｎ
　、　４．６８実測値　ｃ　、、　ｓｏ、ｏａ　；　Ｈ
、２，９９；　Ｎ　、　５．０８実施例２２．６．７−
メチレンジオキシ−４−アミノオキシメチルクマリン 実施例２１で得られた６、１−メチレンジオキシ−４−
フタルイミドオキシメチルクマリン１．３４１に６Ｎ塩
酸２０−および氷酢酸２０−を加えて９５〜１００℃で
１時間加温した。反応終了後、反応混合物を減圧下で濃
縮し、次いで中和した。

得られた残留物を酢酸エチルを用いて抽出した。

抽出液よシ浴媒を留去すると融点１７０〜１１２℃を有
する表記化合物４３０ｍ９が白色針状晶として得られた
。

元素分析値　０．、ＨｐＯ，Ｎとして 計算値　０　、５６．１７　；　Ｈ、３，８６；　Ｎ　
、　５．９６実測値　ａ　、　５６．３３　；　Ｈ、３
，８２；　Ｎ　、　５．９１実ｍ例２３．　６．　ｒ−
メチレンジオキシ−４−７タルイミドメチルクマリン 実施例２０で得られｆｃ　６．　Ｔ−メチレンジオキシ
−４−ブロモメチルクマリン２．０．９’をジメチルホ
ルムアミドｒａｆｎｔに溶解した後、７タルイミドカリ
ウム１．４１　ｇを加えて室温で一夜攪拌した。反応終
了後、反応混合物を水４００ｍ１中に注ぎ、生成する不
溶物全分取した。分取物をアセトニトリル２０［１ｔｄ
Ｋ加温溶解し、放冷した。析出する結晶全分取し、次い
でアセトニトリルを用いて再結晶すると融点２４８〜２
４９℃を有する表記化合物２．１ｇが白色結晶としてイ
Ｕられた。

元素分析値　０，９Ｈ，，０６Ｎとして計算値　ｃ　、
　８５．３３　；　Ｈ，３１８；　Ｎ　、　４．０１実
測値　ａ　、　６５．２４　；　Ｈ、２，９８；　Ｎ　
、　３．９６実施例２４．６．７−メチレンジオキシ−
４−アミノメチルクマリン 実施例２３で得られた６、　Ｔ−メチレンジオキシ−４
−フタルイミドメチルクマリン１．６ｇに、４８％臭化
水素酸１２５ｇおよび氷酢酸１２ｔＲｔの混液を加えて
油浴上で約３時間還流した。反応終了後、反応混合物を
水１０〇−中に注入した。

反応混合物を酸性下で酢酸エステルを用いて洗浄し、次
いでアンモニア水を加えて弱アルカリ性とし、５０以下
で放冷すると融点２０５〜２０６ｃｖｒ有する表記化合
物０．７２１９が白色綿状晶として得られた。

元素分析値　Ｌ！１．Ｈ９０４Ｎとして側算値　ｃ　、
　６０．２７　；　Ｈ、４，１４；　Ｎ　、　６．３９
笑施例２５６．Ｔ−メチレンジオキシ−４−イソシアナ
ートメチルクマリン トリクロロメチルクロロホルメー）１１Ｆを酢酸エチル
１０１１ＬＩ！に加え水冷後、活性炭１０〜を加え、次
いで攪拌下で約ｔａ５）−間で２５〜３０℃に昇温させ
た。次いでこの溶液を再び氷冷した。次いでこの溶液に
、実施例２４で得られた６、１−メチレンジオキシ−４
−アミノメチルクマリン１．ｏｆを酢酸エチル１５０ｍ
／に溶解した溶液を約３０分間で滴加した。滴下終了後
、反応混合物を以下、実施例Ｔと同様に実施すると淡黄
色針状晶の粗結晶が得られた。侑られた粗結晶を酢酸エ
チルを用いて再結晶すると融点２１０〜２１２℃を有す
る表記化合物０．Ｔ２ｆが淡黄色針状晶として得られた
。

元素分析値　ｃ１２Ｈ７０５Ｎ　七して計算値Ｃ，５Ｂ
、７８；Ｈ，２，８８；Ｎ、５．ｒ１実測値Ｃ，５Ｂ、
４２：Ｈ，２，９２：Ｎ、５．４４次に試験例を示す。

試験例１　カプトグリルの分離・足陸 ６、　Ｔ−メチレンジオキシ−４−メチル−３−マレイ
ンイミドクマリン（実施例４の化合物）は−それ自身は
とんど螢光を示さないが、メルカプト基を有する化合物
と反応して、螢光性反応物（励起波長３５５　ｎｍ、螢
光波長４３５ｎｍ）を生成することが判明した。そこで
、どの化合物を用いてカプトグリルの分離・定量を行な
った。

１）試料の調製および分析 カプトグリルのメタノール溶液（１０μｔ／ｌ１１７）
をｌ製し、メタノールで稀釈して１００Ｇ　、Ｓｏｎ　
ｊ２５０　、１２５　、６２．５μｆ／ｍとしそれぞれ
の２００μｔを試験管にとり、減圧下溶媒を留去した。

カプトグリルを含まない試験管を対照として用意した。

各試験管に予め氷冷した新鮮血漿ｏ、ｓｍを加えて混；
１１１１　、直ちに氷冷した１０チドリクロル酢酸（内
部標準物質としてクエニルメルカブタン２００μ２／罰
を含有する）９．５＊を加えよく混和した。

水冷下で遠心分離（ｚｓｏｏｒｐｍ　Ｓ　１０分）後、
その５０μｔを別の試験管に分取し、０．５Ｍリン酸緩
衝液（ｐＨｒ、　ａ　）　１ｏｏμｔ１次いで６．１−
メチレンジオキシ−４−メチル−３−マレインイミドク
マリンの０．０２％アセトニトリル溶液５０μｔを加え
て攪拌した。反応後、その混液の一定曖（１０μｔ＞を
逆相カラム（マイクロボンダツク゛ンクＣ４８、日本ウ
ォータース社製）に注入しアセトニトリル−水−酢酸（
３７：８２：１）移動相による高速液体クロマトグラフ
ィーに付した。

高速液体クロマトグラフィーの装置は日本つＡ−一ター
ス社製６０００Ａ　、　４４０−　ｎ９に型を使用し、
螢光検出器として日立８５０−１０８型を使用した。

励起波長３５５　ｎｍ　、螢光波長４３５　ｎｍが使用
された。結果を図１に示す。

２）結果 図１において、矢印Ａは各カプトグリル濃度で示される
級の試料の注入時点を示し、矢印Ｂは注入試料に対応す
るクロマトビークを示し、矢印Ｃは同様に対応する内部
標準物質由来のクロマトビークを示す。横軸は各カプト
グリル濃度における溶出時間を示し、縦軸は螢光強度を
示す。

図１より明らかの如く、血漿中のカプトグリル濃度を６
．１−メチレンジオキシ−４−メチル−３−マレインイ
ミドクマリンを使用することにより少くとも５μｔ　／
ｍｌの低濃度レベルを、抽出操作なしに再現性よく定量
することが可能である。

３）考案 ６．１−メチレンジオキシ−４−メチル−３−マレイン
イミドクマリンはメルカプト基をもつ化合物と反応し、
螢光性反応物を生成する。従って、例えばシスティン、
グルタチオン、エルゴチオネイン、コエンザイムＡ、６
−メルカブトプリン、ペニシラミン、２−チオウラシル
等の分離、定Ｉに有用である。

試験例２６，７−メチレンジオキシ−４−ジアゾメチル
クマリンによる有機酸の分離・定量６．１−メチレンジ
オキシ−４−ジアゾメチルクマリン（実施例１０の化合
物）は有４ｊ！酸と反応して螢光性エステル体を生成し
た。

即ち、８．Ｔ−メチレンジオキシ−４−ジアゾメチルク
マリン０．１ミリモルをアセトニトリル１゜ＯｍＫ溶解
した後、酢酸、プロピオン酸、ｎ−酪酸などの有ｉ酸０
．０２　ミリモルを加えて６０℃で１時間加温して螢光
性エステル体が得られた（励起波長３５５　ｎｍ、螢光
波長４３５　ｎｍ　、但しエタノール中）。この螢光性
エステル体はシリカゲルを用いた薄層クロマトグラフに
例し、トルエン−ジオキサン−酢酸（７０：２５　：５
）で展開すると新規螢ブＣスポットとして分離・定量さ
れた。同定はマススペクトルにより行なった。

試験例３　プロスタグランディン類の分類・定量 ６、γ−メチレンジオキ７−４−ジアゾメチルクマリン
を用いてグロスタグランデイン類の分離・定量を行なっ
た。

１）試量の調製および分析 プロスタグランディン類（プロスタグランディジＦ、６
ｍ　’２ｔ’　”＋及び６−ケトプロスタグランディン
Ｆ、工）の各Ｌ　Ｏμ２を含むアセトニトリル溶液１０
０μｔに６１Ｔ−メチレンジオキク−４−ジアゾメチル
クマリンの０．０２％アセトニトリル溶液２００μｔを
加え、テフロンコートしたキャップで密栓し８０℃で３
０分間攪拌した。その１０μｔを逆相カラム（マイクロ
ボンダバックＣ１Ｂ、日本ウオータース社製）に注入し
、アセトニトリル−水−酢酸（５０：５０：１）を移動
相とする高速液体クロマトグラフィーに付した。装置は
試験例１で使用したものと同じものが使用された。結果
を図２に示す。

２）結果 図２において、矢印は試料の注入時点を示し、数字１，
２．３および４で示されるクロマトピークはそれぞれ １．６−ケドグａスタグランデイン’１ｄ２、　グロス
タグランデイン’２ｃｔ ３、　プロスタグランディンＦ、あ ４、　グロスタグランデインＥ。

を示す。横軸は溶出時間を示し、縦軸は螢光強度を示す
。溶出時間の経過に伴い、良好に分離・定量された。

試験例４６．１−メチレンジオキシ−４−ジアゾメチル
クマリンによるアルコール類の分離・定量 ６、　Ｔ−メチレンジオキシ−４−ジアゾメチルクマリ
ンはアルコール類と反応して螢ブＣ性エーテル体を生成
した。

即ち、メタノール、エタノール、グロバノール、ｎ−ブ
タノール０．１ミリモルに６．　Ｔ−メチレンジオキシ
−４−ジアゾメチルクマリン０．５ミリモルを加え、次
いでこの溶液にジクロルメタン２０ｗｕ３および四フッ
化ポウｈス◎、　１ｍｇの混ｄｋの１．０Ｍを加え室温
で１時間→ｊｆ拌した。次いでこの溶液をシリカゲルを
′用いた薄層クロマトグラフに付し、トルエン−ジオキ
サン−酢酸（ｒＯ：２５：５）で展開すると、Ｒｆ値が
それぞれメタノール０．７２、エタノール０．７６、プ
ロパノ−＃０．８２およびｎ−ブタノール０．８８であ
る螢光物質として分離・定量された。同定はマススペク
トルにより行なった。

試験例５６．Ｔ−メチレンジオキシ−４−ブロモメチル
クマリン誘導体の相対螢光強度酢酸約１マイクロモルに
、ｅ、ｒ＝メチレンジオキシ−４−ブロモメチルクマリ
ン（実施例２０の化合物）の００２饅アセトニトリル溶
液０．２ｒｕ！および１Ｂ−クラウン−６をｏ、ｒｓ　
ｍｙ金含有る炭酸カリウム飽和アセトニトリル溶液０１
ｓｒｕ＆を加え、４０℃で３０分間攪拌した。次いで１
０チ酢９　Ｇ、　１　ｒｕを加えて反応を停止した。得
られた酢酸エステル体の相対螢光強度を以下に示す。即
ち、１−メトキシ−４−アセチルオキシメチルクマリン
の各溶媒中における螢光強度を１とした場合の相対螢光
強度は次の通りであった。

このことから、６．Ｔ−メチレンジオキシ−４−７’ロ
モメチルクマリンはＴ−メトキシ−４−ブロモメチルク
マリンに比べて、相対螢光強度は広いｐＨ領域（ｐＨ１
，５〜１０）の水溶液中で約２倍以上大きく、またメタ
ノール、アセトニトリル等の高速液体クロマトグラフィ
ーに頻用されるＭ機溶媒またはこれらと水との混合溶点
中でも２倍以上大きい。ＲｒＪ−ち、より高感度の＃光
性エステル体の得られることを示している。

試験例６　脂肪酸類の分離・足継 ６、Ｔ−メチレンジオキシ−４−ブロモメチルクマリン
を用いて脂肪酸類の分離・定敏を行なった。

１）試料の調製および分析 各種脂肪酸を試験例５の方法に準じて調製した。この溶
液の一定計を逆相カラム（マイクロボンダパックＣ１８
、日本ウォータース社１ｔｌ！　）　Ｋ注入し、それぞ
れの脂肪酸を次の移動相による高速液体クロマトグラフ
ィーに付した。装置は試ｊ倹例１で使用されたものと同
じものが使用された。結果を図３および図４に示す。

２）結果 図３＃ｉ下記の移動相を使用した場合の分離・定Ｉ仕図
を示す。矢印は試料の注入時点を示す。

桧１１１１は移動相の各アセトニトリルθ度におけるＵ
出時間を示し、縦軸性螢元強阪を示す。

図４はアセトニトリル−水−酢酸を）ｅ動用とし、酢酸
濃度が１．５％でアセトニトリル濃度を順次変えた場合
のカラムに対する保持ファクター（ｋ）を示す。横軸は
移動相のアセトニトリル濃度を示し、縦軸は保持ファク
ター（ｋｏ）を示す。

図３および４における１〜１３の数字は上記脂肪酸の番
号を示す。

図３および４より、いずれも良好に分離・定判されてい
ることがわかる。

そして、注入針当り、約１００フエムトモルの高感度で
カルボン９類の分離・定撒が可能なことを示している。

試験例１　カルボニル化合物の分離・定量６、　Ｔ−メ
チレンジオキシ−４−アミノオキシメチルクマリン（実
施例２２の化合物）は、塩酸、酢酸、トリクロル酢酸等
の酸触力襄の存在下でメタノール、エタノール、ベンゼ
ン等の溶媒中でカルボニル化合物と反応して、螢光性誘
導体（励起波長３５８　ｎｍ　、螢光波長４３０　ｎｍ
　）が得られた。

即ち、カルボニル・化合物約１０ナノモルに対し、６．
Ｔ−メチレンジオキシ−４−アミノオキシメチルクマリ
ンの０．０２　％混合溶媒（該混合溶媒は１％氷酢酸−
メタノール溶液）　０．２　ｍｄを加え５０℃で３０分
間加温して螢光性誘導体が得られた。得られた誘導体を
逆相カラム（マイクロボンダパックＣ１８、日本ウォー
タース社ｉｆりに注入し、各移動相による高速液体クロ
マドグ、７フイーに何した。装置は試験例１で使用され
たものと同じものが使用された。

表１に結果を示す。数値はカラムに対する保持ファクタ
ー（ｋ　＞を示す。

表　１ カルボニル化合物の高速液体クロマトグラフィーカルボ
ニル化合物　移動相１ＩＩｎＩ ＣＵ、ＣＩＯ１，８ ＣＨ，ＣＯＣＨ２Ｃ０ＯＨ２，５ Ｃｏｒｔｉ８ｏｎｅ　ｊ、う ＨｙｄｒｏＣｏｒｔｉｓｏｎｅ　１，６Ｃｏｒｔｉｃｏ
ｓｔｅｒｏｎｅ　２．４移動相Ｉニアセトニトリル−水
−酢酸 （３５：６５：１．５） 移動相■ニアセトニトリル−水−酢酸 （６６：３５：１．５） 移動相用：メタノールー水−ビツクＢ７（Ｔ　８　：　
２２　：　０．１　） 表１より、脂肪族および芳香族アルデヒド頓、ケトン類
、ケト酸類、ケトステロイド類等が定量感度０．２ピコ
モルの高感度で分離・定量の可能なことが示されている
。

試験例８　アルコール類の分離・定１１６、　Ｔ−メチ
レンジオキシ−４−メトキシカルボニルメチルクマリン
（実施例１５の化合物）を用いてアルコール類の分離・
定けを行なった。

１）試料の調製および分析 アルコール類の各５μＶを含む乾燥ジクロルメタン０．
５１溶液に、６．γ−メチレンジオキシー４−メトキシ
カルボニルメチルクマリンの００２チジクロルメタン溶
液０５ｍを加え、室温で５分以上撹拌した。その１０μ
ｔを逆相カラム（マイクロボンダパックＣ２日本ウォー
タース社８ 製）に注入し、アセトニトリル−水−酢酸（４０：ｆＪ
Ｏ７１，５）を移動相として、流速１．０１１Ｖ／分の
高速液体クロマトグラフィーに付した。装置は試験例１
で使用したものと同じものが使用された。結果を図５に
示す。

２）結果 図５において、矢印は試料の注入時点を示し、数字１〜
８で示されるクロマトピークはそれぞれ、 １、メタノール ２、エタノール ３、　ｎ−グロ／くノール ４．１−プロノ櫂ノール ５、　ｎ−ブタノール ６．８−ブタノール ７、　ｔ−ブタノール ８、オクタツール を示す。

横軸は溶出時間（分）を示し、縦軸は螢光強度を示す。

溶出時間の経過に伴い、良好に分離・定量された。

試験例９　アルコール類の分離・定量 ６、Ｔ−メチレンジオキシ−４−メチル−３−イソシア
ナートクマリン（実施例Ｔの化合物）および６．　Ｔ−
メチレンジオキシ−４−インシアナートメチルクマリン
（実施例２５の化合物）を用いてアルコール類の分離・
定量を行なった。

１）試料の調製および分析 アルコール類の各０．１ミリモルを含有するトルエン溶
液ｏ、ｓｍに、表記缶化合物２ミリモルを含むトルエン
溶液０．５−を加えて密栓し、８０℃で２時間加温した
。次いでその一定量（２μｔ）を採取し、シリカゲルを
用いた薄層クロマトグラフィーに付し、トルエン−ジオ
キサン−氷酢酸（７０：２５　：５）で展開した。

２）結果 ■６．Ｔ−メチレンジオキシー４−メチル−３−イソシ
アナートクマリンの場合 アルコールの種類　Ｒｆ値 メタノール　０．４４ エタノ−＃　０．５２ ｎ−グロノイノール　０，５１ ｎ−ブタノール　０．８１ ンクロヘキサノール　０．６２ ■６．　Ｔ−メチレンジオキシ−４−インシアナートメ
チルクマリンの場合 アルコールの種類　Ｒｆ値 メタノール　０．５１ エタノール　０．８０ ｎ−グロパノール　０．６３ ｎ−ブタノール　Ｏ，ＳＳ ンクロヘキサノール　０．６４ いずれも青色螢光物質として分離・同定された。同定社
マススペクトルにより行なうた。

６．１−メチレンジオキシ−４−メチル−３−インシア
ナートクマリンおよび６．７−メチレンジオキシ−４−
インシアナートメチルクマリンのいずれもそれ自身の螢
光は弱いが、アルコール類と反応して生成される成績体
は強い螢光性を示した。

【図面の簡単な説明】

図１　ハロ、　７−メチレンジオキシ−４−メチル−３
−マレインイミドを用いてのカプトグリルの分離・定数
を示す。横軸は各カプトグリル濃度における溶出時間を
示し、縦曲１は螢光強度を示す。 図２は６．γ−メチレンジオキシー４−ジアゾメチルク
マリンを用いてのグロスタグランデイン類の分離・定量
を示す。横軸は溶出時間を示し、縦軸は螢光強度を示す
。 図３は６．　Ｔ−メチレンジオキ／−４−フ゛ロモメチ
ルクマリンを用いての脂肪酸ｊぼ４の分し准・定量を示
す。横軸は移動相の各アセトニトリル濃度における溶出
時間を示し、縦軸は螢光強度を示す。 図４は６．γ−メチレンジオキシー４−ブロモメチルク
マリンを用いての脂肪酸碩の分離・定量を示す。横軸は
移動相のアセトニトリル濃度を示し、縦軸は保持ファク
ター（ｋ　）を示す。 図５　ハ８．１−メチレンジオキシ−４−メトキシカル
ボニルメチルクマリンを用いてのアルコール類の分離・
定量を示す。横軸は溶出時間を示し、縦軸は螢光強度を
示す。 特許出願人　三共株式会社 代理人　弁理士樫山庄治 □ ２００　１００　５０ 図　１

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 一般式 を有するクマリン誘導体。 但し、式中 ｘはメチル基、ホルミル基、ｐ−）ルエンスルフオニル
   ヒドラジノメチル基、ジアゾメチル基、ヒドロキシメチ
   ル基、ハロホルミルオキシメチル基、カルボキシメチル
   基、ハロホルミルメチル基、アルコキシカルボニルメチ
   ル基、ヒドラジノカルボニルメチル基、シアノカルボニ
   ルメチル基、ジアゾアセトニル基、ハロアセトニル基、
   ハロメチル基、フタルイミドオキシメチル基、アミノオ
   キシメチル基、フタルイミドメチル基、アミノメチル基
   またはイソシアナートメチル基、 Ｙは水素原子、ニトロ基、アミノ基、３−カルボキシア
   クリロイルアミノ基、マレインイミド基、アセチルアミ
   ノ基、ハロアセチルアミノ基またはイソシアナート基、 を示す。但し、Ｘがメチル基、Ｙが水素原子の場合を除
   く。