JPS6058073A - Ｄｎａ、それを含むプラスミドおよび該プラスミドを含む細菌細胞 - Google Patents
Ｄｎａ、それを含むプラスミドおよび該プラスミドを含む細菌細胞Info
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- JPS6058073A JPS6058073A JP58165065A JP16506583A JPS6058073A JP S6058073 A JPS6058073 A JP S6058073A JP 58165065 A JP58165065 A JP 58165065A JP 16506583 A JP16506583 A JP 16506583A JP S6058073 A JPS6058073 A JP S6058073A
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- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
- C12N15/74—Vectors or expression systems specially adapted for prokaryotic hosts other than E. coli, e.g. Lactobacillus, Micromonospora
- C12N15/75—Vectors or expression systems specially adapted for prokaryotic hosts other than E. coli, e.g. Lactobacillus, Micromonospora for Bacillus
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Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
本発明はＤＮＡに関し、詳しくはプロモーターＪｆ−Ｍ
、セー宕−Ｊ−Ｖ ｗ ％Ｉ Ａ Ｉ＋ｒ ＦｉｌＡ
→ト ＃ Ｊ ｔｌ ＋ｙｓ ｋ ｘ本発明者らは、バ
チルス・プレビス（Ｂａｃｉｌｌｕｓｂｒｅｖｉｓ ）
の表層蛋白質が菌体外に多量に生産されることに着目し
、そのプロモーターを単離するこトｔ−試み、遂にバチ
ルス・プレビスの表層蛋白質をコードする遺伝子のプロ
モーター活性を有するＩ）ＨＡを分離することに成功し
たのである。
、セー宕−Ｊ−Ｖ ｗ ％Ｉ Ａ Ｉ＋ｒ ＦｉｌＡ
→ト ＃ Ｊ ｔｌ ＋ｙｓ ｋ ｘ本発明者らは、バ
チルス・プレビス（Ｂａｃｉｌｌｕｓｂｒｅｖｉｓ ）
の表層蛋白質が菌体外に多量に生産されることに着目し
、そのプロモーターを単離するこトｔ−試み、遂にバチ
ルス・プレビスの表層蛋白質をコードする遺伝子のプロ
モーター活性を有するＩ）ＨＡを分離することに成功し
たのである。
すなわち、ベクターとして大腸菌のプラスミドｐＢＲ５
２２を選択し、該プラスミドｐＢＲ５２２を制限酵素Ｈ
１ｎ４ ［１で切断し、５′末端のリン酸基をバクチリ
アル・アルカリン替ホスファターゼ（Ｂａｃｔｅｒｉａ
ｌａｌｊｃａｌｉｎｅ ｐｈｏｓｐｈａｔａｓｅ ）処
理によって除き線状のプラスミドｐＢＲ５２２を調製し
た。一方、バチルス・プレビス４７菌の細胞から斉藤・
三浦の方法（Ｂｉ−ｏａｈｉｒｎ。
２２を選択し、該プラスミドｐＢＲ５２２を制限酵素Ｈ
１ｎ４ ［１で切断し、５′末端のリン酸基をバクチリ
アル・アルカリン替ホスファターゼ（Ｂａｃｔｅｒｉａ
ｌａｌｊｃａｌｉｎｅ ｐｈｏｓｐｈａｔａｓｅ ）処
理によって除き線状のプラスミドｐＢＲ５２２を調製し
た。一方、バチルス・プレビス４７菌の細胞から斉藤・
三浦の方法（Ｂｉ−ｏａｈｉｒｎ。
Ｂｉｏｐｈｙｓ、 Ａｃｔａ、 ７２．６１９ （１９
６５） ）によって染色体ＤＮＡを調製してドナーＤＮ
Ａに供した。この染色体ＤＮＡを制限酵素Ｈ１ｎ＋１ｌ
ｌｌで部分加水分解して種々の長さの線状ＤＮＡを調製
した。次に、線状プラスミドｐＥＲ３２２と線状ＤＮＡ
を混合し、Ｔ４ＤＮＡＩＪガーゼで両者を連結した。連
結したＤＮＡを大腸菌ＨＢ１０１にＬｅｈｒｂｅｒｇ
、 Ｂ、 Ｍ、 ａｎｄ ０ｏｈｅｎ 、 Ｓ、 Ｈ。
６５） ）によって染色体ＤＮＡを調製してドナーＤＮ
Ａに供した。この染色体ＤＮＡを制限酵素Ｈ１ｎ＋１ｌ
ｌｌで部分加水分解して種々の長さの線状ＤＮＡを調製
した。次に、線状プラスミドｐＥＲ３２２と線状ＤＮＡ
を混合し、Ｔ４ＤＮＡＩＪガーゼで両者を連結した。連
結したＤＮＡを大腸菌ＨＢ１０１にＬｅｈｒｂｅｒｇ
、 Ｂ、 Ｍ、 ａｎｄ ０ｏｈｅｎ 、 Ｓ、 Ｈ。
の方法（Ｊ、 Ｂａｃｔｅｒｉｏｌ、、 １９．１０７
２−１０７４（１９７４））により形質転換し、これを
Ｌ−ブロス培地（トリプトン（Ｄｉｒｃｏ ） １％、
酵母エキス（Ｄｉｆｃｏ ） ０．５％、１ＪａＯｔＯ
，５％、ＭｇＳＯ４１１７４００，０２５％ｒ ｐＨ７
，２）にアンピシリン５０μ？／ｄを加えたものに培養
してアンピシリン耐性の形質転換株を得た。
２−１０７４（１９７４））により形質転換し、これを
Ｌ−ブロス培地（トリプトン（Ｄｉｒｃｏ ） １％、
酵母エキス（Ｄｉｆｃｏ ） ０．５％、１ＪａＯｔＯ
，５％、ＭｇＳＯ４１１７４００，０２５％ｒ ｐＨ７
，２）にアンピシリン５０μ？／ｄを加えたものに培養
してアンピシリン耐性の形質転換株を得た。
こレラの形質転換株からバチルス・プレビス４７の表層
構造蛋白質をコードする遺伝子を有するクローンを以下
の方法によって選択した。
構造蛋白質をコードする遺伝子を有するクローンを以下
の方法によって選択した。
バチルス・プレビス４７の表層構造体は分子量１３万と
分子量１５万の主要蛋白質から構成されている。これら
蛋白質の混合物に対するウサギ抗体を調製し、この抗血
清を用いて上記形質転換株の中から表層構造体を構成す
る蛋白質遺伝子を含むクローンをＫｅｍｐ 、 Ｄ、
Ｊ、 ｓｎ６ Ｑｏｗｍｔｍ、 Ａ、 ？、の方法（Ｐ
ｒｏａ、 Ｎａｔｌ、 Ａｃａｄ、 Ｓｃｉ、 Ｕ８Ａ
、 ７８ 、４５２０〜４５２４（１９８１））によ
シ選択してＮＴ１００株を得た。
分子量１５万の主要蛋白質から構成されている。これら
蛋白質の混合物に対するウサギ抗体を調製し、この抗血
清を用いて上記形質転換株の中から表層構造体を構成す
る蛋白質遺伝子を含むクローンをＫｅｍｐ 、 Ｄ、
Ｊ、 ｓｎ６ Ｑｏｗｍｔｍ、 Ａ、 ？、の方法（Ｐ
ｒｏａ、 Ｎａｔｌ、 Ａｃａｄ、 Ｓｃｉ、 Ｕ８Ａ
、 ７８ 、４５２０〜４５２４（１９８１））によ
シ選択してＮＴ１００株を得た。
このクローンについて分子量１５万と分子量１５万の蛋
白質のそれぞれに対する抗体との反応性について検討し
たところ分子量１５万の表層構造蛋白質の抗体とのみ反
応する蛋白質を生産することが判った。
白質のそれぞれに対する抗体との反応性について検討し
たところ分子量１５万の表層構造蛋白質の抗体とのみ反
応する蛋白質を生産することが判った。
第１図はＮＴ１００株に含まれるプラスミドｐＮＴ１０
０の制限酵素地図である。図中、太線部分はバｆｋス・
プレビス４７由来の染色体Ｄ Ｎ Ａ ヲ示している。
０の制限酵素地図である。図中、太線部分はバｆｋス・
プレビス４７由来の染色体Ｄ Ｎ Ａ ヲ示している。
次に、プラスミドｐＮＴ １００を各種制限酵素（Ｈｌ
ｎｄｌｌｌ 、 ＨｐａＩ 、 ＢａｍＨＩ）を用いて
切断し１再連結することによって種々の長さのプラスミ
ドを調製した。これらプラスミドを用いて前記した方法
によって大腸菌ＨＢ１０１を形質転換し、分子量１５万
の表層蛋白質に対する抗体を用いて前記と同様にして抗
原抗体反応を行なって分子量１５万の表層蛋白質を生産
するクローンについて調べ、ｐＮＴ １００ 中のプリ
モータ一部位を決定［また。その結果、第１図における
ｂ７ラグメントに分子ｂｔ１５万の表層蛋白質のプロモ
ーター活性を示すＤＮＡ配列が存在することが明らかと
７１つプこ。すなわち、このＤＮＡはＤＮＡ鎮中にＢａ
ｍＨＩで切断される個所、その２９１ｂｐ下流に）ｌｉ
ｎｆ Ｉで切断される個所、その１５６ ｂｐ下流にＡ
ｌｕｉで切断される個所およびその２６８ ｂｐ下流に
ＨｐａＩで切断される個所を有している。
ｎｄｌｌｌ 、 ＨｐａＩ 、 ＢａｍＨＩ）を用いて
切断し１再連結することによって種々の長さのプラスミ
ドを調製した。これらプラスミドを用いて前記した方法
によって大腸菌ＨＢ１０１を形質転換し、分子量１５万
の表層蛋白質に対する抗体を用いて前記と同様にして抗
原抗体反応を行なって分子量１５万の表層蛋白質を生産
するクローンについて調べ、ｐＮＴ １００ 中のプリ
モータ一部位を決定［また。その結果、第１図における
ｂ７ラグメントに分子ｂｔ１５万の表層蛋白質のプロモ
ーター活性を示すＤＮＡ配列が存在することが明らかと
７１つプこ。すなわち、このＤＮＡはＤＮＡ鎮中にＢａ
ｍＨＩで切断される個所、その２９１ｂｐ下流に）ｌｉ
ｎｆ Ｉで切断される個所、その１５６ ｂｐ下流にＡ
ｌｕｉで切断される個所およびその２６８ ｂｐ下流に
ＨｐａＩで切断される個所を有している。
本発明のＤＮＡは、細菌細胞、たとえば大腸菌やバチル
ス屈の微生物の細胞内で増殖することができるプラスミ
ドに挿入すれば、活性の高いプロモーターとしての機能
を発揮する。すなわち、プラスミド内に挿入されたプロ
モーターＤＮＡの下流に有用な外来遺伝子を接続せしめ
、得られた組換えＤＮＡを大腸菌またはバチルス氏微生
物の細胞内に導入ずれは、これら微生物は蛋白質等の有
用物質を多足に生産するように形質転換される。
ス屈の微生物の細胞内で増殖することができるプラスミ
ドに挿入すれば、活性の高いプロモーターとしての機能
を発揮する。すなわち、プラスミド内に挿入されたプロ
モーターＤＮＡの下流に有用な外来遺伝子を接続せしめ
、得られた組換えＤＮＡを大腸菌またはバチルス氏微生
物の細胞内に導入ずれは、これら微生物は蛋白質等の有
用物質を多足に生産するように形質転換される。
ここで外来遺伝子の例としては真核生物由来のものおよ
び原核生物由３ドのもののいずれも使用することが可能
である。たとえはヒト遺伝子（たとえばインター７エリ
ン、インシュリンなど） 、 ｕＥ物の酵素蛋白遺伝子
（たとえばトリプトファナーゼ、アスパラギン酸アンモ
ニアリアーゼなど）などがある。
び原核生物由３ドのもののいずれも使用することが可能
である。たとえはヒト遺伝子（たとえばインター７エリ
ン、インシュリンなど） 、 ｕＥ物の酵素蛋白遺伝子
（たとえばトリプトファナーゼ、アスパラギン酸アンモ
ニアリアーゼなど）などがある。
限酵素Ｂｉｎｄ［［で部分加水分解し、種々の長さの線
状ＤＮＡを調製した。一方、プラスミドｐＢＢ ５２２
も制限酵素Ｈ１ｎＬｌ［ｌで切断し、５′末端のリン酸
基をバクチリアルφアルカリ・ホスファクーゼ処理によ
り除去して線状プラスミドｐＢＲ５２２を調製した。
状ＤＮＡを調製した。一方、プラスミドｐＢＢ ５２２
も制限酵素Ｈ１ｎＬｌ［ｌで切断し、５′末端のリン酸
基をバクチリアルφアルカリ・ホスファクーゼ処理によ
り除去して線状プラスミドｐＢＲ５２２を調製した。
これら線状ＤＮＡを混合し、Ｔ、ＤＩＩＡリガーゼを作
用させて両ＤＮＡを連結した。
用させて両ＤＮＡを連結した。
連結したＤＮＡを大腸菌ＨＢ１０１にＬｅｄｅｒｂｅｒ
ｇ、 Ｈ。
ｇ、 Ｈ。
Ｍ、ａａｘｄ ０ｏｈｅｎ 、 ８． Ｎ、の方法（Ｊ
、 Ｂａａｔｅｒｉｏｌ。、す１゜１０７２〜１０７４
（１９７４））によって形質転換し、さらにＩ＋ −
ｂｒｏｔｈ培地にアンピシリン５０μＦ！−／ｌｄを加
えた培地に塗布して培養し、アンピシリン耐性の形質転
換株を得た。
、 Ｂａａｔｅｒｉｏｌ。、す１゜１０７２〜１０７４
（１９７４））によって形質転換し、さらにＩ＋ −
ｂｒｏｔｈ培地にアンピシリン５０μＦ！−／ｌｄを加
えた培地に塗布して培養し、アンピシリン耐性の形質転
換株を得た。
次に、バチルス・プレビス４７菌の表層構造体を構成す
る分子量１３万と１５万の蛋白質の混合物に対するウサ
ギ抗体を調製し、この抗血清を使用して上記形質転換株
中よシ表層構造体構成蛋白ｍ ’ｍ Ｍ ｆｆ−ｊ ４
争−）＋ −−／ シー ｖ＋艷η ＴＴ Ｔ ａＭ
＋４ １’！ＡＷｍ６ＹＡ、 Ｆ、の方法（Ｐｒｏｃ、
Ｎａｔｌ、 Ａｏａｄ、 Ｓｃｉ、 ＵＳＡ 、 ７
８．４５２０〜４５２４ （１９８１））によシ選択し
てＮＴ１００株を得た。この１ＪＴ１００株について分
子ＩＩｋ１３万と１５万のそれぞれの蛋白質に対する抗
体との反応性を検討したところ、この菌株は分子量１５
万の表層構造蛋白質の抗体とのみ反応する蛋白質を生産
していることが明らかとなった。
る分子量１３万と１５万の蛋白質の混合物に対するウサ
ギ抗体を調製し、この抗血清を使用して上記形質転換株
中よシ表層構造体構成蛋白ｍ ’ｍ Ｍ ｆｆ−ｊ ４
争−）＋ −−／ シー ｖ＋艷η ＴＴ Ｔ ａＭ
＋４ １’！ＡＷｍ６ＹＡ、 Ｆ、の方法（Ｐｒｏｃ、
Ｎａｔｌ、 Ａｏａｄ、 Ｓｃｉ、 ＵＳＡ 、 ７
８．４５２０〜４５２４ （１９８１））によシ選択し
てＮＴ１００株を得た。この１ＪＴ１００株について分
子ＩＩｋ１３万と１５万のそれぞれの蛋白質に対する抗
体との反応性を検討したところ、この菌株は分子量１５
万の表層構造蛋白質の抗体とのみ反応する蛋白質を生産
していることが明らかとなった。
このＮＴ１００株を用いてＢｉｒｎｂｏｉｎ 、 Ｈ，
Ｏ，、Ｄｏｌｙ、 、ｒ。
Ｏ，、Ｄｏｌｙ、 、ｒ。
（Ｎｕｃｌｅｉｏ Ａｃ１ｄｓ Ｒｅａ、、７ 、１５
１５−１５２５（１９７９））の方法によりプラスミド
の検出および分子量の測定を行なった。その結果、分子
量は６．Ｉ Ｘ １０６ダルトンであシ、このプラスミ
ドをｐｎＴｌａｏ と命名した。ｐＨＴ１００の制限酵
素切断地図は第１図に示し九通フである。
１５−１５２５（１９７９））の方法によりプラスミド
の検出および分子量の測定を行なった。その結果、分子
量は６．Ｉ Ｘ １０６ダルトンであシ、このプラスミ
ドをｐｎＴｌａｏ と命名した。ｐＨＴ１００の制限酵
素切断地図は第１図に示し九通フである。
プラスミドｐＮＴ １００を各種制限酵素（Ｈ１ｎ４ｎ
１゜ＨｐａＩ、 ＢａｍＨｌ ）を用いて切断し、再連
結することによシ種々の長さのプラスミド７種を詞製し
、これらのプラスミドを上記した方法によシ大腸菌ＨＢ
１０１に形質転換し、７種類のクローンを得、分子量１
５万の表層構造蛋白質に対する抗体を用いて上記方法と
同様にして抗原抗体反応を行ない、分子量１５万の表層
構造蛋白質のプロモータ一部位を決定した。以下にその
詳細を示す。
１゜ＨｐａＩ、 ＢａｍＨｌ ）を用いて切断し、再連
結することによシ種々の長さのプラスミド７種を詞製し
、これらのプラスミドを上記した方法によシ大腸菌ＨＢ
１０１に形質転換し、７種類のクローンを得、分子量１
５万の表層構造蛋白質に対する抗体を用いて上記方法と
同様にして抗原抗体反応を行ない、分子量１５万の表層
構造蛋白質のプロモータ一部位を決定した。以下にその
詳細を示す。
（１１１（１ｎｄｌ［［を用いた実験
プラスミドｐＮＴ １００をＨｌｎｄｌで切断し、再連
結を行なうと、５ Ｋｌ）の）ＩｉｎｄＩｎＤ Ｎ Ａ
７ラダメントだけで分子ｆｆ１１５万の蛋白質の抗体
と反応する蛋白質を大腸菌は生産した（第２図Ｂ）。木
Ｖ’１１！＋ｅｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ ＨＢ
１０１ ／ ｐＮＴ １００は微工研にＰ！！ｉｎＭ
Ｐ−７２３１として寄託されている◎（２１Ｈｐ＆Ｉを
用いた実験 プラスミドｐＮＴ １００をＨｐａＩで切断し、再連結
し、分子ｆｉｊ１１５万の蛋白質の抗体と反応する蛋白
質を生産する大腸菌の中に含まれるプラスミドを分析し
た結果、第２図０．Ｄ、Ｅの３種類の株が得られた。す
なわち、第１図に示したＣフラグメント（Ｈｐａｉ−Ｂ
ａｍＨｌ、 ４００ ｂｐ） 、 ｂフラグメント（Ｂ
ａｍａＩ −Ｈｐａｌ 、 ７１５ ｂｐ ）およびＣ
７ラグメント（１（ｐａＩ−Ｈｐａｉ 、 ２１５ ｂ
ｐ ）の連結の仕方が種々異なっていた。クローンＤで
はＢ、ｂ、ｃのフラグメントの連結の仕方はｐＮＴ １
００ と全く逆方向であり、かつ分利１５万の蛋白質の
抗体と反応する蛋白質を生産していた。また、クローン
ＥではＣフラグメントが欠けていたが、クローンＤと同
様に分子ｊｉ１５万の蛋白質の抗体と反応する蛋白質を
生産していた。したがって、分子量１５万の蛋白質のプ
ロモーターはａ、ｂ７ラグメント中に存在することが明
らかである。
結を行なうと、５ Ｋｌ）の）ＩｉｎｄＩｎＤ Ｎ Ａ
７ラダメントだけで分子ｆｆ１１５万の蛋白質の抗体
と反応する蛋白質を大腸菌は生産した（第２図Ｂ）。木
Ｖ’１１！＋ｅｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ ＨＢ
１０１ ／ ｐＮＴ １００は微工研にＰ！！ｉｎＭ
Ｐ−７２３１として寄託されている◎（２１Ｈｐ＆Ｉを
用いた実験 プラスミドｐＮＴ １００をＨｐａＩで切断し、再連結
し、分子ｆｉｊ１１５万の蛋白質の抗体と反応する蛋白
質を生産する大腸菌の中に含まれるプラスミドを分析し
た結果、第２図０．Ｄ、Ｅの３種類の株が得られた。す
なわち、第１図に示したＣフラグメント（Ｈｐａｉ−Ｂ
ａｍＨｌ、 ４００ ｂｐ） 、 ｂフラグメント（Ｂ
ａｍａＩ −Ｈｐａｌ 、 ７１５ ｂｐ ）およびＣ
７ラグメント（１（ｐａＩ−Ｈｐａｉ 、 ２１５ ｂ
ｐ ）の連結の仕方が種々異なっていた。クローンＤで
はＢ、ｂ、ｃのフラグメントの連結の仕方はｐＮＴ １
００ と全く逆方向であり、かつ分利１５万の蛋白質の
抗体と反応する蛋白質を生産していた。また、クローン
ＥではＣフラグメントが欠けていたが、クローンＤと同
様に分子ｊｉ１５万の蛋白質の抗体と反応する蛋白質を
生産していた。したがって、分子量１５万の蛋白質のプ
ロモーターはａ、ｂ７ラグメント中に存在することが明
らかである。
Ｔ３１ ＥａｆｆＩＨｉ、 Ｈｐｈ■両制限酵素を用い
た実験プラスミドｐｌｉＴ １００をＢａｍＨＩとＨｐ
ａ） テ切断し１再連続して分利１５万の蛋白質の抗体
と反応する蛋白質を生産する大腸菌としてクローンＦ（
本菌Ｅ、 ｃｏｌｉ ＨＢ １０１ ／ｐＮＴ １５２
は微工研にＦｌ！！ＢＭＦ−７２５０として寄託されて
いる。）が得られた。第２図に示したように、クローン
ｒは＆７ラグメントが欠けているが、分子量１５万の蛋
白質の抗体と反応する蛋白質を生産している。また、ｂ
７ラグメントのみを有するプラスミドルＮ丁１４２を導
入したクローンＧ（本閑見竺見ＨＢ １０１／ｐＮＴ
１４２）は以上のように、クローンＡ −（Ｊはいずれ
も分子量１５万の蛋白質の抗体との反応性が陽性である
蛋白質を生成する。これらの結果に基いて総合的に判断
すると、第１図におけるｂフラグメントに分子量１５万
の蛋白質のプロモーター活性を示すＤＮＡ配列が存在す
る０
た実験プラスミドｐｌｉＴ １００をＢａｍＨＩとＨｐ
ａ） テ切断し１再連続して分利１５万の蛋白質の抗体
と反応する蛋白質を生産する大腸菌としてクローンＦ（
本菌Ｅ、 ｃｏｌｉ ＨＢ １０１ ／ｐＮＴ １５２
は微工研にＦｌ！！ＢＭＦ−７２５０として寄託されて
いる。）が得られた。第２図に示したように、クローン
ｒは＆７ラグメントが欠けているが、分子量１５万の蛋
白質の抗体と反応する蛋白質を生産している。また、ｂ
７ラグメントのみを有するプラスミドルＮ丁１４２を導
入したクローンＧ（本閑見竺見ＨＢ １０１／ｐＮＴ
１４２）は以上のように、クローンＡ −（Ｊはいずれ
も分子量１５万の蛋白質の抗体との反応性が陽性である
蛋白質を生成する。これらの結果に基いて総合的に判断
すると、第１図におけるｂフラグメントに分子量１５万
の蛋白質のプロモーター活性を示すＤＮＡ配列が存在す
る０
第１図はプラスミドｐｌＪＴ１００の制限酵素地図、第
２図は大腸菌に導入された各種のプラスミドを示す。 ｑ！許出出願人 鵜 高 重 三 第１図 ＝ 第２図 ←Ｂ、ｂｒｅｖｉｓ ＤＮＡ−一船一叩ＥＲ３２２−−
−→マ Ｈｉｎｄエエエ Ｗ Ｈｐａ工 ψ ＢａｍＨ工 （＃ｂｆ）ｐ） 手続補正書（自発） 昭和５８年１０月６ 日 特許庁長官 若杉和夫 殿 １、 事件の表示 特願昭５８−１６５０６５ λ 発明の名称 ＮＡ 五 補正をする者 事件との関係 特許出願人 鵜高重三 ４、代理人 〒１０４ 東京都中央区京橋１丁目１番１０号 ＆ 補正の対象 明細書の発明の詳細な説明の簡 ＆ 補正の内容 明細書第７頁８行目の「Ｂｉｒｎｂｏｉｎ 、 １１、
Ｃ５，」 を「Ｂｉｒｎｂｏｉｍ 、 ｌ（、０，、Ｊ
に訂正する。
２図は大腸菌に導入された各種のプラスミドを示す。 ｑ！許出出願人 鵜 高 重 三 第１図 ＝ 第２図 ←Ｂ、ｂｒｅｖｉｓ ＤＮＡ−一船一叩ＥＲ３２２−−
−→マ Ｈｉｎｄエエエ Ｗ Ｈｐａ工 ψ ＢａｍＨ工 （＃ｂｆ）ｐ） 手続補正書（自発） 昭和５８年１０月６ 日 特許庁長官 若杉和夫 殿 １、 事件の表示 特願昭５８−１６５０６５ λ 発明の名称 ＮＡ 五 補正をする者 事件との関係 特許出願人 鵜高重三 ４、代理人 〒１０４ 東京都中央区京橋１丁目１番１０号 ＆ 補正の対象 明細書の発明の詳細な説明の簡 ＆ 補正の内容 明細書第７頁８行目の「Ｂｉｒｎｂｏｉｎ 、 １１、
Ｃ５，」 を「Ｂｉｒｎｂｏｉｍ 、 ｌ（、０，、Ｊ
に訂正する。
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 １、 バチルス・プレビスの表層蛋白質をコードする遺
伝子のプロモーター活性を有するＤＮＡ。 ２、Ｉ）ＨＡ鎖中ＫＢ＆ｌ１）ＩＩで切断される個所、
その２９１ ｂｐ下流にＨＬｎｆ Ｉで切断される個所
、そのｌ ５６ ｂｐＴ流にＡｌｕ ｌで切断される個
所およびその２６８ ｂｐ下流にＨｐａＩで切断される
個所を有する特許請求の範囲第１項記載のＤＮＡ。 ＆ 細菌細胞内で増殖しうるプラスミドに挿入されてい
る特許請求の範囲第１項または第２項記載のＤ Ｎ Ａ
。 ４、 細菌細胞内で増殖しつるプラスミドに挿入されて
細菌細胞内に導入されている特許請求の範囲第１項また
は第２項記載のＤＮＡ。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP58165065A JPS6058073A (ja) | 1983-09-09 | 1983-09-09 | Ｄｎａ、それを含むプラスミドおよび該プラスミドを含む細菌細胞 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP58165065A JPS6058073A (ja) | 1983-09-09 | 1983-09-09 | Ｄｎａ、それを含むプラスミドおよび該プラスミドを含む細菌細胞 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS6058073A true JPS6058073A (ja) | 1985-04-04 |
| JPH0158950B2 JPH0158950B2 (ja) | 1989-12-14 |
Family
ID=15805192
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP58165065A Granted JPS6058073A (ja) | 1983-09-09 | 1983-09-09 | Ｄｎａ、それを含むプラスミドおよび該プラスミドを含む細菌細胞 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS6058073A (ja) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4994380A (en) * | 1985-11-07 | 1991-02-19 | Shigezo Udaka | Process for expressing genes by Bacillus brevis |
-
1983
- 1983-09-09 JP JP58165065A patent/JPS6058073A/ja active Granted
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4994380A (en) * | 1985-11-07 | 1991-02-19 | Shigezo Udaka | Process for expressing genes by Bacillus brevis |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPH0158950B2 (ja) | 1989-12-14 |
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