JPS6059000A - インタ−フェロンの安定化方法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 本発明はインターフェロンの安定化方法およびイどター
フェロ／と多糖類とを含有する組成物に関する。

インターフェロンは抗ウィルス、抗ガ／等の生物学的活
性のゆえに、医薬としての用途が期待されている生理活
性物質であり、生理学的、理化学的性質ならびに起源に
よりα型、β型、γ型などの分類がなされている。

従来、インターフェロンは動物、とくにヒトの細胞を培
養することによって製造されてきたが、供給量に限りが
あるため、組換えＤＮＡ技術により、インターフェロン
遺伝子をクロー／化し、微生物、たとえば大腸菌に導入
して、その微生物を培養することにより、インターフェ
ロンを生産する方法が開発されている。

インターフェロンは蛋白質または糖蛋白質であるが、不
安定な物質であることが知られている。

従来、インターフェロンの安定化のために、ｐ１１關節
、血清アルブミンの添加、可溶性ランクニド添加（特開
昭５６−６５８２２号公報）、ポリエチレン系非イオン
界面活性剤、抗生物質、キレート剤、アミノ酸などの添
加（特開昭５８−９２６１９号公報）、酸性糖の添加（
特開昭５８−９２６２１号公報）、含硫還元剤の添加（
特開昭５８−９２６２２号公報１、Ｈ３Ａ　（ヒト血清
アルブミン）を添加後、凍結乾燥する方法〔蛋白質核酸
酵素別冊インターフェロン研究の進歩Ｖｏｌ　２５．　
ｐ、３５８　ｆ１９８１）共立出版〕等が知られている
。

常に新しいインターフェロンの安定化方法がめられてい
る。インターフェロンの安定化方法について種々検討し
た結果、インターフェロンを多糖類に接触させることに
より、インターフェロンの安定化が著しく増大すること
が見い出された。

以下に本発明の詳細な説明する。

本発明に使用されるインターフェロンとしては、天然の
インターフェロン、動物軸重の培養によって製造される
インターフェロン、組換えＤＮＡ技術によって得られる
微生物の培養によって製造されるインターフェロンなど
が含まれ、また、α。

β、Ｔのいずれの型のインターフェロンも含まれる。本
発明う゛は、特に組換えＤＮＡ技術によって得られるイ
ンターフェロン−β（以下Ｇ−β−ＩＦＮと略記する）
において優れた効果が得られる。

多糖類としては、デキストラン〔デキストラン４０（平
均分子量４万）、デキストラン７０（平均分子量７万）
〕コンドロイチン硫酸、デンプン。

グリコーゲン、イヌリン、デキストリン、アルギン酸塩
等があげられる。

インターフェロンを安定化するためには、インターフェ
ロン１単位（国際単位・国際標準サンプルをもとにして
決めた値　最新インターフェロン−朝日サイエンス）当
り、５ＸＩＯ−”　モル〜４ｘ　ｌ　Ｑ−１１モルの割
で添加すれば効果はあるが、好ましくはＩ　Ｘ　ｌ　Ｏ
−”　モル〜２　Ｘ　］　Ｏ−”　モルの割で添加する
と効果が著しい。

多糖類は単独でも効果を示すが、さらに無機塩類、界面
活性剤、血清アルブミン、抗生物質、キレート剤、アミ
ノ酸および緩衝剤などと併用することにより、さらに効
果を増大することができる。

例えば、無機塩類（塩化ナトリウム、塩化カリウム、塩
化マグオ／ウム、塩化カル／ウムなど）を多糖類と併用
する場合には、無機塩類の添加量はインターフェロン１
単位当り３　Ｘ　ｌ　Ｏ−”　〜３ｘ　ｌ　Ｑ−１０モ
ルであり、その他の添加物の量も、それらの分子量等に
よるが、無機塩類の添加量とほぼ同程度である。

又、インターフェロンと多糖類との含有物を溶液の状態
で保存するよりも、さらに凍結乾燥しておいた方がより
インターフェロンの安定化の効果が増大する。

本発明は、又、インターフェロンと多糖類とを含有する
組成物に関する。該組成物に無機塩類以外に医薬品とし
て許容される保存剤、安定剤、賦形剤、結合剤、崩壊剤
、湿潤剤、滑沢剤９着色剤。

芳香剤、矯味剤、剤皮、懸濁化剤、乳化剤、溶解補助剤
、緩衝剤９等張剤、塑性剤、プラスチック界面活性剤な
どを含ませることが可能である。

以下本発明の実施例を示す。

実施例１ （ｉ）　ｃ−β−ＩＦＮの調整 特開昭５７−７７６５４に記載の方法でＧ−β−ＩＦＮ
を調整し、６０％エチレングリコールー２Ｍ　ＮａＣ１
水溶液さし、これをＧ−β−ＩＦＮ［料とした。

（２）　試料の調整 上記、Ｇ−β−ＩＦＮＩｉ料に多糖類、無機塩類および
緩衝剤を加え、凍結乾燥した。Ｇ−β−ＩＦＮ　３ＸＩ
Ｏ’　単位に対し、デキストラフ４０　１０．５０．１
００ｍｇ、ＮａＣ１６■ｇ。

１　／２０Ｍ　Ｎ　ａ、ＨＰ　Ｏ，−クエン酸緩衝液（
ｐＨ４＋　２ｍｌ相当を用い、対照としてデキストラン
４００代わりに、マンニソトール５０■を添加したもの
を用いた。

（３）　インターフェロン活性の測定 Ｇ−β−ＩＦＮｆＤ力価＋１、ＷＩＳＨｍｍ＊たはＦＬ
細胞を用いたｖＳ■ウィルスによる細胞変性阻止、色素
取り込み法（別冊蛋白質、核酸。

酵素インターフェロノ研究の進歩　ｐ３５５−３６３　
１９８１年）を用い、標準Ｇ−β−ＩＦＮ　［ＩＮＴＥ
ＲＦＥＲＯＮ−β　ＲＥＦＥＲＥＮＣＥ　５ＴＡＮＤＡ
ＲＤ（ヒト遺伝子組換えイノターフ、ｏンβ）Ｌｏｔ　
Ｋ−Ｒｅｆ−０４〕を同時に測定して相対力価をめた。

（４）　凍結乾燥による力価変化 （ａ）　第１表に示した添加物およびＮａＣ１６■。

１　／２０Ｍ　Ｎ　ａ、ＨＰ　Ｏ，−フェノ酸ｔＩＩ衝
液（１）Ｈ４）２＋１１液にＧ−β−ＩＦＮを３ＸｌＯ
’単位加え、溶解し、凍結乾燥を行い、凍結乾燥前の生
物活性に対する凍結乾燥後の生物活性の残存率をめた。

結果を第１表に示ず。

第　１　表 ら）　第２表に示したように添加物を変えて、（ａ）と
同様に凍結乾燥前後の生物活性の変化について検討した
。結果を第２表に示す。

第２表 実施例２ 無機塩類である塩化ナトリウムの量を変えて凍結乾燥品
を実施例１と同様に製造し、７０℃における保存安定性
を検討した。結果を第３表に示す。

第３表 Ｇ−β−ＩＦＮ　３Ｘ１０＠　Ｕ 実施例３ Ｇ−β−ＩＦＮ原料の水溶液の安定性について、第４表
に示したように、緩衝液中および蒸留水中において検討
した。結果を第４表に示す。

第　４　表

Claims (2)

【特許請求の範囲】
1. （１）　インターフェロンを多糖類に接触させることを
   特徴とするインターフェロンの安定化方法。
2. （２）　インターフェロンと多糖類とを含有する組成物
   。