JPS6073463A - 歯周病診断法 - Google Patents
歯周病診断法Info
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- JPS6073463A JPS6073463A JP18385983A JP18385983A JPS6073463A JP S6073463 A JPS6073463 A JP S6073463A JP 18385983 A JP18385983 A JP 18385983A JP 18385983 A JP18385983 A JP 18385983A JP S6073463 A JPS6073463 A JP S6073463A
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- JP
- Japan
- Prior art keywords
- gingivalis
- monoclonal antibody
- antibody
- hybridoma
- cells
- Prior art date
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- Pending
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- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/569—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for microorganisms, e.g. protozoa, bacteria, viruses
- G01N33/56911—Bacteria
- G01N33/56955—Bacteria involved in periodontal diseases
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Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
本発明は歯周病の診断法に関し、更に詳述すると歯周病
の原、囚菌であるバクテロイデス・ジンジバリス（Ｂａ
ｃｔａｒｏｉｄｅｓ ｇｉ＋＋ｇｉｖａｌｉｓ、以下Ｂ
。
の原、囚菌であるバクテロイデス・ジンジバリス（Ｂａ
ｃｔａｒｏｉｄｅｓ ｇｉ＋＋ｇｉｖａｌｉｓ、以下Ｂ
。
ｇｉｎｇｉｖａｌｉｓと称する）の病巣での存在や菌数
をＢ。
をＢ。
ｇｉｎｇｉｖａｉｉｓに対づ°る新規モノクローナル抗
体を用いて調べることにより、歯周病の病態、冶隙後の
状態等を確実かつ簡便にしかも迅速に診断り−ることが
できる歯周病の診断法に関する。
体を用いて調べることにより、歯周病の病態、冶隙後の
状態等を確実かつ簡便にしかも迅速に診断り−ることが
できる歯周病の診断法に関する。
３、ｇｉｎｇｉｖａｌｉｓは、成人の重症歯周炎、いわ
ゆる歯槽膿漏症病巣局所で圧倒的多数を占めてＪ３す、
最近において成人歯周症の有力な原因菌としで注目され
ているものである。
ゆる歯槽膿漏症病巣局所で圧倒的多数を占めてＪ３す、
最近において成人歯周症の有力な原因菌としで注目され
ているものである。
従来、血液平板上で黒色集落を形成する偏性嫌気性桿菌
は、全てバクテロイデス・メラニノジニカス（３ａｃｔ
ｅｒｏｉｄｅｓ ｍｅｌａｎｉｎｏｇｅｎｉｃｕｓ 、
以下３ 、 ｍｅｌａｎｎ＋ｏｇｅｎｉｃｕｓと称り−
る）として一括されていたが、歯周病原因菌としてはＢ
、 ｇｉｎｇｉｖａｌｉｓが重要であり、本菌種を他
の黒色集落形成Ｖ［バクテロイデスと区別する必要があ
る。しかし、１３゜ｇｉｎｇｉｖａｌｉｓを他の黒色集
落形成＋！１のバクテロイデスと区別づることは容易で
ない。即ち、成人の歯周病がＢ、 ｇｉｎｇｉｖａｌｉ
ｓの感染によって発病し、進行することが明確になって
以来、歯周病の予防や治療及びその予後の状態を知るた
めにも同菌種の動態を知ることが大切になっているが、
１３ 。
は、全てバクテロイデス・メラニノジニカス（３ａｃｔ
ｅｒｏｉｄｅｓ ｍｅｌａｎｉｎｏｇｅｎｉｃｕｓ 、
以下３ 、 ｍｅｌａｎｎ＋ｏｇｅｎｉｃｕｓと称り−
る）として一括されていたが、歯周病原因菌としてはＢ
、 ｇｉｎｇｉｖａｌｉｓが重要であり、本菌種を他
の黒色集落形成Ｖ［バクテロイデスと区別する必要があ
る。しかし、１３゜ｇｉｎｇｉｖａｌｉｓを他の黒色集
落形成＋！１のバクテロイデスと区別づることは容易で
ない。即ち、成人の歯周病がＢ、 ｇｉｎｇｉｖａｌｉ
ｓの感染によって発病し、進行することが明確になって
以来、歯周病の予防や治療及びその予後の状態を知るた
めにも同菌種の動態を知ることが大切になっているが、
１３ 。
ｇｉｎｇｉｖａｌｉｓの病巣での存在や菌数を知るには
嫌気的培養や菌の２０数項目にも亘る性状検査が必要と
されているため、［３，ｇｉｎｇｉｖａｌｉｓの動態を
調べる場合に非常に困月１な問題が多いものぐある。
嫌気的培養や菌の２０数項目にも亘る性状検査が必要と
されているため、［３，ｇｉｎｇｉｖａｌｉｓの動態を
調べる場合に非常に困月１な問題が多いものぐある。
この場合、本菌種を免疫したウサギ抗血清を用いてＢ、
すｉｎｇｉｖａｌｉｓの動態を調べる方法も考えられる
が、本菌種に対する免疫血清はＢ。
すｉｎｇｉｖａｌｉｓの動態を調べる方法も考えられる
が、本菌種に対する免疫血清はＢ。
ｇｉｎｇｉｖａｌｉｓに対し必ずしも特異性の点で十分
でない上、菌の同定や病巣材料での割合を知ろうとして
もその希釈や濃度の決定までには様々な検問が必要で、
煩雑である。
でない上、菌の同定や病巣材料での割合を知ろうとして
もその希釈や濃度の決定までには様々な検問が必要で、
煩雑である。
このため、Ｂ１ｇ自＞ｇｉｖａｌｉｓに対して特異性が
高く、しかも力価を損なわない抗体が望まれ、これを用
いて簡単かつ確実にＢ、 ｇｉｎｇｉｖａｌｉｓを同定
し、その動態を知ることにより、歯周病を確実に診断り
−る方法が望まれる。
高く、しかも力価を損なわない抗体が望まれ、これを用
いて簡単かつ確実にＢ、 ｇｉｎｇｉｖａｌｉｓを同定
し、その動態を知ることにより、歯周病を確実に診断り
−る方法が望まれる。
本発明者らは、上記事情に鑑み、Ｂ。
Ｑｉｎｇｉｖａｌｉｓにタリし特異性が高く、しがも力
価を損なわない抗体につき鋭意研究を行なった結果、Ｂ
、ｇｉ口ｇｉｖａｌｉｓ抗体産生性細胞とミエローマ細
胞とを融合することによって得られるハイブリドーマか
らＢｌｇｉｎｇｉｖａｌｉｓのモノクローナル抗体が産
生されると共に、このモノクローナル抗体が１３ 。
価を損なわない抗体につき鋭意研究を行なった結果、Ｂ
、ｇｉ口ｇｉｖａｌｉｓ抗体産生性細胞とミエローマ細
胞とを融合することによって得られるハイブリドーマか
らＢｌｇｉｎｇｉｖａｌｉｓのモノクローナル抗体が産
生されると共に、このモノクローナル抗体が１３ 。
ｇｉｎｇｉｖａｌｉｓに刻づる特異性が高く、同菌種の
同定に有効に使用しく９、従ってこの１ツクロ一ナル抗
体を用いて病巣にＪ３けるＢ、 ｇｉｎｇｉｖａｌｉｓ
の動態を調べることにより、歯周病の診断が確実に行な
われることを知見し、本発明をなりに至ったものである
。
同定に有効に使用しく９、従ってこの１ツクロ一ナル抗
体を用いて病巣にＪ３けるＢ、 ｇｉｎｇｉｖａｌｉｓ
の動態を調べることにより、歯周病の診断が確実に行な
われることを知見し、本発明をなりに至ったものである
。
従って、本発明はＢ、 （Ｊｉｌｌ（１ｉＶａｌｉＳニ
対４るモノクーロ−ナル抗体を用いて歯周病の病巣にお
りるＢ。
対４るモノクーロ−ナル抗体を用いて歯周病の病巣にお
りるＢ。
ｇｉｎｇｉｖａｌｉｓの動態を調べることを特徴とりる
歯周病の診断法を提供する。
歯周病の診断法を提供する。
以下、本発明につき更に詳しくμｍ明する。
本発明の歯周病診断法は、Ｂ 、 ｇｉ＋＋ｇｉｖａｌ
ｉｓｋＺヌ、１するモノク［ｌ−ナル抗体産生性ハイブ
リドーマから産生されるモノクローナル抗体を利用して
行なうものであるが、Ｂ 、 ｇｉｎｇｉｖａｌｉｓに
対Ｊるモノクローナル抗体産生性ハイブリドーマは、Ｂ
。
ｉｓｋＺヌ、１するモノク［ｌ−ナル抗体産生性ハイブ
リドーマから産生されるモノクローナル抗体を利用して
行なうものであるが、Ｂ 、 ｇｉｎｇｉｖａｌｉｓに
対Ｊるモノクローナル抗体産生性ハイブリドーマは、Ｂ
。
ｇｉｎｇｉｖａｌｉｓ抗体産生性細胞どミエローマ細胞
とを融合し、選別づることによって得られるものである
。
とを融合し、選別づることによって得られるものである
。
ここで、このハイブリドーマの製造に用いられるＢ 、
ｇｉｎｇｉｖａｌｉｓ抗体産生性細胞は、Ｂ。
ｇｉｎｇｉｖａｌｉｓ抗体産生性細胞は、Ｂ。
ｇｉｎｇｉｖａｌｉｓの全菌体或いはその血球凝集素、
莢膜、内舟索笠の菌体成分及び産生酵素をマウスなどの
動物に免疫し、免疫後その牌臓等を採取することによっ
て１りられる稗臓細胞等が用いられる。なお、Ｂ 、
ｇｉｎｇｉｖａｌｉｓはボストンのＦｏｒｓｙｔｈ ［
） ｅｎｔａｌＣｅｎｔｅｒから分与される菌株、歯周
炎の病巣局所から分離した菌株等が使用される。また、
Ｂ。
莢膜、内舟索笠の菌体成分及び産生酵素をマウスなどの
動物に免疫し、免疫後その牌臓等を採取することによっ
て１りられる稗臓細胞等が用いられる。なお、Ｂ 、
ｇｉｎｇｉｖａｌｉｓはボストンのＦｏｒｓｙｔｈ ［
） ｅｎｔａｌＣｅｎｔｅｒから分与される菌株、歯周
炎の病巣局所から分離した菌株等が使用される。また、
Ｂ。
ｇｉｎｇｉｖａｌｉｓの血球凝集素としては、例えば、
ＴｒＶｌｌｔｉｃａＳｅ （Ｂ１１） 、 Ｙｅａｓｔ
Ｅｘｔｒａｃｔ（Ｄｉｒｃｏ）の透析外液に、ヘミン
５μｇ ／ ｉｌおよびメナジＡン０．５μｇ ／ ｐ
ｉを添加したものを使用し、Ｂ 、 ｇｉｎｇｉｖａｌ
ｉｓ３８１株の５日間振盪培養液１２．００−０］を１
５分、遠心した上清から、凝集因子の精製を行ない、上
滑に４０％の硫安を加え、−夜敢置後その沈漬を回収し
、これを滅菌蒸溜水に浮遊さＶ、遠心に（沈漬を取り除
いた後、その浮ｌｉ液に１０％の硫安を加え、−夜放置
後、沈漬を回収し、さらにこれを０．１５Ｍ’ Ｎａ（
Ｊ。
ＴｒＶｌｌｔｉｃａＳｅ （Ｂ１１） 、 Ｙｅａｓｔ
Ｅｘｔｒａｃｔ（Ｄｉｒｃｏ）の透析外液に、ヘミン
５μｇ ／ ｉｌおよびメナジＡン０．５μｇ ／ ｐ
ｉを添加したものを使用し、Ｂ 、 ｇｉｎｇｉｖａｌ
ｉｓ３８１株の５日間振盪培養液１２．００−０］を１
５分、遠心した上清から、凝集因子の精製を行ない、上
滑に４０％の硫安を加え、−夜敢置後その沈漬を回収し
、これを滅菌蒸溜水に浮遊さＶ、遠心に（沈漬を取り除
いた後、その浮ｌｉ液に１０％の硫安を加え、−夜放置
後、沈漬を回収し、さらにこれを０．１５Ｍ’ Ｎａ（
Ｊ。
１０Ｊ４Ｍ ＣａＣＲ２，１０−４Ｍ ＭｇｃＪ２を含
むリン酸緩１！ｉ液に懸濁し、２時間室温および一夜４
℃に放置後、凝集してくる沈漬を回収し、この標品を０
．０２Ｍのリン酸緩衝８１２ （ＰＩＩ８ 、３ ）に
浮遊さ１！：、 ５ｅｐｌ＋ａｒｏｓｅ ４ Ｂを用い
てゲル濾過し、血球凝集能の強い両分を回収し、次いで
この両分を０、０３Ｍ ’Ｔ−ｒｉｓ−１−ｌ（Ｊ緩衝
液（＋４１８．３）に懸濁させた後、ＤＥＡＥ ５ｅｐ
ｈａｄｅｘ Ａ３０ｒｌ）イオン交換クロマトグラフィ
ーにて、０．２ＭのＨａ Ｃ１？１ ＩＩ： ’Ｔ’溶
出させた両分を水で充分透析後凍結乾燥して精製凝集素
としたものを使用り゛ることかできる（この標品１００
μ９は、１０２４倍に希釈して同舟の２％の血球を凝集
さＵる）。
むリン酸緩１！ｉ液に懸濁し、２時間室温および一夜４
℃に放置後、凝集してくる沈漬を回収し、この標品を０
．０２Ｍのリン酸緩衝８１２ （ＰＩＩ８ 、３ ）に
浮遊さ１！：、 ５ｅｐｌ＋ａｒｏｓｅ ４ Ｂを用い
てゲル濾過し、血球凝集能の強い両分を回収し、次いで
この両分を０、０３Ｍ ’Ｔ−ｒｉｓ−１−ｌ（Ｊ緩衝
液（＋４１８．３）に懸濁させた後、ＤＥＡＥ ５ｅｐ
ｈａｄｅｘ Ａ３０ｒｌ）イオン交換クロマトグラフィ
ーにて、０．２ＭのＨａ Ｃ１？１ ＩＩ： ’Ｔ’溶
出させた両分を水で充分透析後凍結乾燥して精製凝集素
としたものを使用り゛ることかできる（この標品１００
μ９は、１０２４倍に希釈して同舟の２％の血球を凝集
さＵる）。
また、！３． ｇｉｎｇｔｖａｌｉｓの全菌体又は菌体
成分を免疫する場合、必要によりアジ−１バントを使用
りることがてきる。これら３ 、 ｑｌＩＴｇＩＶ＋ｌ
ｌｌ５の全菌体又は菌体成分の免疫に用いる動物として
は、マウス、特にＢ Ａ Ｌ Ｂ ／ ｃ系マウスが好
ましく用いられる。
成分を免疫する場合、必要によりアジ−１バントを使用
りることがてきる。これら３ 、 ｑｌＩＴｇＩＶ＋ｌ
ｌｌ５の全菌体又は菌体成分の免疫に用いる動物として
は、マウス、特にＢ Ａ Ｌ Ｂ ／ ｃ系マウスが好
ましく用いられる。
なお、このようにして得られる［３ 、 ｇｉｎｇｉｖ
ａｌｉｓ抗体産生性細胞は、バラバラにほぐして使用す
ることが好ましい。
ａｌｉｓ抗体産生性細胞は、バラバラにほぐして使用す
ることが好ましい。
このＢ 、 （ｌｉｌｌ（ｌｉＶａｌｉｓ抗体産生性細
胞と融合されるミエローマ細胞としては、マウス等の骨
髄腫細胞などが有効に使用され、これら両細胞を融合り
る場合は、Ｂ−ｇｉｎｇｉｖａｌｉｓ抗体産生性細胞に
対してミコーローマ細゛胞２倍量以上の割合でイグール
の最少必須培地（Ｍ ｉｎｉｍａｌ Ｅ ５ｓｅｎＮａ
ｌ Ｍｅｄｉｕｍ 。
胞と融合されるミエローマ細胞としては、マウス等の骨
髄腫細胞などが有効に使用され、これら両細胞を融合り
る場合は、Ｂ−ｇｉｎｇｉｖａｌｉｓ抗体産生性細胞に
対してミコーローマ細゛胞２倍量以上の割合でイグール
の最少必須培地（Ｍ ｉｎｉｍａｌ Ｅ ５ｓｅｎＮａ
ｌ Ｍｅｄｉｕｍ 。
ＭＥＭ）等の適宜な培地中で混合し、遠心して上清を除
去した後、ポリエチレングリコールで融合づる方法が好
適に採用される。なおこの場合、ポリエチレングリコー
ルとしては分子１１０００〜６０００のものが好ましく
用いられ、ポリエチレングリコールは２０〜６０％水溶
液としＣ使用づることができる。また、反応は３７℃前
後で３〜７分間とづることが好ましく、反応後は、必要
により遠心し、」二清を除去した後、好適にはウシ胎児
血清を１％以上含むｔ＜ ｐ Ｍ Ｉ １ Ｃ＋ ４０
培地等の適宜な培地を加えて１日程度培養することが好
ましい。
去した後、ポリエチレングリコールで融合づる方法が好
適に採用される。なおこの場合、ポリエチレングリコー
ルとしては分子１１０００〜６０００のものが好ましく
用いられ、ポリエチレングリコールは２０〜６０％水溶
液としＣ使用づることができる。また、反応は３７℃前
後で３〜７分間とづることが好ましく、反応後は、必要
により遠心し、」二清を除去した後、好適にはウシ胎児
血清を１％以上含むｔ＜ ｐ Ｍ Ｉ １ Ｃ＋ ４０
培地等の適宜な培地を加えて１日程度培養することが好
ましい。
この細胞融合によって得られる反応物中には目的とする
ハイブリドーマのほか、未融合のＢ。
ハイブリドーマのほか、未融合のＢ。
ｇｉｎｇｉｖａｌｉｓの抗体産生性細胞、ミエローマ細
胞が混在しているため、ハイブリドーマのみを選択的に
培養する。
胞が混在しているため、ハイブリドーマのみを選択的に
培養する。
この場合、このハイブリドーマの選択には、ウシ胎児血
清を含むＲＰ’Ｍ１１６４０培地にアミ／プテリン、ヒ
ボキサンチン、チミジンを加えた１１ＡＴ培地が有効に
用いられる。このＩ−Ｉ Ａ Ｔ培地を用いた培養（選
択）により、目的とＪるハイブリドーマのみが生存し、
未融合のＢ 、 ｇｉ＋１ｇ１ｖａｌｉｓ抗体産生性細
胞、ミエローマ細胞が死滅覆るもの（−ある。
清を含むＲＰ’Ｍ１１６４０培地にアミ／プテリン、ヒ
ボキサンチン、チミジンを加えた１１ＡＴ培地が有効に
用いられる。このＩ−Ｉ Ａ Ｔ培地を用いた培養（選
択）により、目的とＪるハイブリドーマのみが生存し、
未融合のＢ 、 ｇｉ＋１ｇ１ｖａｌｉｓ抗体産生性細
胞、ミエローマ細胞が死滅覆るもの（−ある。
この場合、トＩＡＴ培地をｌ−Ｉ Ｔ ３ｆ５地に徐々
に変換することができる。
に変換することができる。
このようにして生育されたハイブリドーマは、ミエロー
マ細胞が死滅した後、１０％ウシ胎児面清を含むＲＰＭ
１１６４０Ｊｇ地にヒボキリ−ンヂン、チミジンを加え
たｌ−Ｉ Ｔ培地で５〜１０日間稈瓜培養し、更にウシ
胎児血清を含むＲＰＭ１１６４０」６地等のハイプリド
ーマ用培地で培養りることができる。
マ細胞が死滅した後、１０％ウシ胎児面清を含むＲＰＭ
１１６４０Ｊｇ地にヒボキリ−ンヂン、チミジンを加え
たｌ−Ｉ Ｔ培地で５〜１０日間稈瓜培養し、更にウシ
胎児血清を含むＲＰＭ１１６４０」６地等のハイプリド
ーマ用培地で培養りることができる。
得られたハイブリドーマから目的どりるＢ。
ｇｉｎｇｉｖａｌｉｓに対づるモノクローナル抗体産生
性ハイブリドーマを選別りる方法どじでは、間接螢光抗
体法、ソリッドフェース抗体結合法 （ＳＡＢＡ）、ピΔヂンーアビジンーシステム（ＢＡＳ
）、ラジオイムノアッセイ、エンザイムイｌ＼ノアッヒ
イ等の方ｄ１がイｊ効に使用されるが、特にＥＬＩＳＡ
法（Ｅ ｎｚｙｍｃ Ｌ １ｎｋｅｄ■ｍ１ｌｌｕｎｏ
Ｓｏｒｔ＋ｃｎｔ Ａｓ５ａｙ）は感度が高く、また簡
便であるため好適に採用される。
性ハイブリドーマを選別りる方法どじでは、間接螢光抗
体法、ソリッドフェース抗体結合法 （ＳＡＢＡ）、ピΔヂンーアビジンーシステム（ＢＡＳ
）、ラジオイムノアッセイ、エンザイムイｌ＼ノアッヒ
イ等の方ｄ１がイｊ効に使用されるが、特にＥＬＩＳＡ
法（Ｅ ｎｚｙｍｃ Ｌ １ｎｋｅｄ■ｍ１ｌｌｕｎｏ
Ｓｏｒｔ＋ｃｎｔ Ａｓ５ａｙ）は感度が高く、また簡
便であるため好適に採用される。
また、限界希釈法を採用りることにより、ハイブリドー
マのり１コーニングを行なうことができる。
マのり１コーニングを行なうことができる。
この場合、培地どしては］−ド「培地などを用いること
ができる。
ができる。
更に、目的とづるハイブリドーマは、インごトロで培養
、増殖することがＣき、またマウス腹腔等に投与してイ
ンビボで増殖りることができる。
、増殖することがＣき、またマウス腹腔等に投与してイ
ンビボで増殖りることができる。
なお、このようにして得られたＢ 、 ｇｉｎｇｉｖａ
ｌｉｓに対するモノクローナル抗体産生性ハイブリドー
マは、ウシ胎児血清及びジメブルスルホキシド（ＤＭＳ
Ｏ）ｆ含ＯＲＰＭ１１６／’１．０培地ｑの適宜な培地
で凍結保存づることができる。
ｌｉｓに対するモノクローナル抗体産生性ハイブリドー
マは、ウシ胎児血清及びジメブルスルホキシド（ＤＭＳ
Ｏ）ｆ含ＯＲＰＭ１１６／’１．０培地ｑの適宜な培地
で凍結保存づることができる。
本発明のハイブリドーマは、Ｂ 、 ｇｉｎｇｉｖａｌ
ｉｓニ対り−るモノクローナル抗体を産！１−するも
のぐ、−ト記培地に対Ｊる生育状態は下記の通りＣある
。
ｉｓニ対り−るモノクローナル抗体を産！１−するも
のぐ、−ト記培地に対Ｊる生育状態は下記の通りＣある
。
ＲＰＭ１１６４０ 、＋
８％ウシ胎児血清を含むＲＰＭｌ １６４０ −１１０
％ 〃−１ １０％ １ｚｌ−ＩＴ培地 ＋ １０％ リ １−ＩＡＴＪ９地 」 ダルベツコ変法ＭＥＭ − ＨΔＮＫＳ − １３７℃、 ＧＯ２−１’ ン＊コヘータ−（５％ＣＯ
２、Ｈ度１００９６川本発明のハイブリドーマが産生り
るＢ。
％ 〃−１ １０％ １ｚｌ−ＩＴ培地 ＋ １０％ リ １−ＩＡＴＪ９地 」 ダルベツコ変法ＭＥＭ − ＨΔＮＫＳ − １３７℃、 ＧＯ２−１’ ン＊コヘータ−（５％ＣＯ
２、Ｈ度１００９６川本発明のハイブリドーマが産生り
るＢ。
ｇｉｎｇｉｖａｌｉｓにｐｑツるモノクロ−プール抗イ
木ＬＬ Ｂ 。
木ＬＬ Ｂ 。
ｇｉｎｇｉｖａｌｉｓに対づる特異性が高く、他の黒色
集落形成性バクテ１」イデス群とは反応し辣いため、Ｂ
、 ｇｉｎｇｉｖａｌｉｓを他のバクテロイデス群と
区別して確実に同定し、菌数を知ることができ、歯周病
原因菌であるＢ ９ｇｉｎｇｔｖａｌｉｓの病巣局所に
おける局在、動態を容易に調べることができる。従って
、歯周病の診断を確実に行なうことができ、歯周病治療
後の状態等を確実に知ることができるものである。即ち
、従来は病巣局所の材料を嫌気培養し、その菌種の性状
検査を行なって同定していたものであり、この方法は時
間的にも内容的にも非常に多くの問題があり、結果も不
確かなものであったが、本発明モノクローナル抗体を用
いることにより、この七ツクローナル抗体のＢ、 ｇｉ
ｎｇｉｖａｌｔｓに対する特異性が高いので、このよう
な高い特異性を心丈る抗体を必要とり−る螢光抗体法を
利用し、或いは鋭敏度の高い抗体測定法であるＥＬＩＳ
Ａ法を利用り−るなとして、歯周病局所のＢ。
集落形成性バクテ１」イデス群とは反応し辣いため、Ｂ
、 ｇｉｎｇｉｖａｌｉｓを他のバクテロイデス群と
区別して確実に同定し、菌数を知ることができ、歯周病
原因菌であるＢ ９ｇｉｎｇｔｖａｌｉｓの病巣局所に
おける局在、動態を容易に調べることができる。従って
、歯周病の診断を確実に行なうことができ、歯周病治療
後の状態等を確実に知ることができるものである。即ち
、従来は病巣局所の材料を嫌気培養し、その菌種の性状
検査を行なって同定していたものであり、この方法は時
間的にも内容的にも非常に多くの問題があり、結果も不
確かなものであったが、本発明モノクローナル抗体を用
いることにより、この七ツクローナル抗体のＢ、 ｇｉ
ｎｇｉｖａｌｔｓに対する特異性が高いので、このよう
な高い特異性を心丈る抗体を必要とり−る螢光抗体法を
利用し、或いは鋭敏度の高い抗体測定法であるＥＬＩＳ
Ａ法を利用り−るなとして、歯周病局所のＢ。
ｇｉｎｇｉｖａｌｉｓの存在を簡便かつ迅速にしかも正
確に知ることがＣき、歯周病の診断に利用りることがぐ
きる。
確に知ることがＣき、歯周病の診断に利用りることがぐ
きる。
このように本発明のハイブリドーマが産生する３、ｇｉ
ｎｇｉｖａｌｉｓに対するモノクローナル抗体は極めて
特異性が高く、本菌種に共通する抗原と反応し得るもの
Ｃあり、Ｂ 、 ｇｉｎｇｉｖａｌｉｓの同定から病巣
材料中での本菌種の割合を正確に把ＩＲするための有用
な免疫血清である。
ｎｇｉｖａｌｉｓに対するモノクローナル抗体は極めて
特異性が高く、本菌種に共通する抗原と反応し得るもの
Ｃあり、Ｂ 、 ｇｉｎｇｉｖａｌｉｓの同定から病巣
材料中での本菌種の割合を正確に把ＩＲするための有用
な免疫血清である。
また、Ｂ９ｇｉｎｇｉｖａｌｉｓに対して高い特異性を
有りる本発明モノクローナル抗体を用いることにＪ、す
、アフィニイテーＣクロマトグラフィーを用いてＢ、
ｇｉｎｇｉｖａｌｉｓの表層物質を純度高く取り出りこ
とができるものである。
有りる本発明モノクローナル抗体を用いることにＪ、す
、アフィニイテーＣクロマトグラフィーを用いてＢ、
ｇｉｎｇｉｖａｌｉｓの表層物質を純度高く取り出りこ
とができるものである。
次に、３８ｇｉ１１ｇｉｖａｌｉｓに対するモノクロー
ナル抗体を利用して歯周病を診断づる方法につき更に述
べると、このモノクローナル抗体を歯周病の病巣から取
り出した菌と反応ざば、この菌叢中にＪ３番プるＢ 、
ｇｉｎｇｉｖａｌ ｉｓの存在を調べるものｒある。
ナル抗体を利用して歯周病を診断づる方法につき更に述
べると、このモノクローナル抗体を歯周病の病巣から取
り出した菌と反応ざば、この菌叢中にＪ３番プるＢ 、
ｇｉｎｇｉｖａｌ ｉｓの存在を調べるものｒある。
この場合、調べるべき菌は、これをマイクロヂタープレ
ート等にコーディングし、これにモノクローナル抗体（
ハイブリドーマ培養上清など）を加え、ペル第１シダー
ゼを用いてＥＬＩＳＡ法によりその吸光度を測定する方
法、モノクローナル抗体と調べるべき菌とを一緒に培養
し、これをマイクロヂタープレート等に加え、ＥＬＩＳ
Ａ法よりその吸光度を測定して抑制率をめる方法、モノ
クロ−プル抗体に直接ペルオキシダーゼを結合し、この
ベルオキシダーゼ活性を測定してめる方法、間接螢光抗
体法など、適宜な方法を採用して、調べるべき菌叢中の
３． ｇｉｎｇｉｖａｌｉｓの菌数をめ、これにより歯
周病の進行程度、治癒程度を診断することができる。
ート等にコーディングし、これにモノクローナル抗体（
ハイブリドーマ培養上清など）を加え、ペル第１シダー
ゼを用いてＥＬＩＳＡ法によりその吸光度を測定する方
法、モノクローナル抗体と調べるべき菌とを一緒に培養
し、これをマイクロヂタープレート等に加え、ＥＬＩＳ
Ａ法よりその吸光度を測定して抑制率をめる方法、モノ
クロ−プル抗体に直接ペルオキシダーゼを結合し、この
ベルオキシダーゼ活性を測定してめる方法、間接螢光抗
体法など、適宜な方法を採用して、調べるべき菌叢中の
３． ｇｉｎｇｉｖａｌｉｓの菌数をめ、これにより歯
周病の進行程度、治癒程度を診断することができる。
以下、実施例を示し、本発明を具体的に説明する。
［実施例］
［３、ｇｉｎｇｉｖａｌｉｓ３８１株を用い、これをト
リブヂクースソイの透析外液にヘミン５μｇ ／ ＭＩ
Ｎメチジオン０．５μ牙／・′厭を加えたＪ８地で３
日間１ｆＸ養した菌体を供した。
リブヂクースソイの透析外液にヘミン５μｇ ／ ＭＩ
Ｎメチジオン０．５μ牙／・′厭を加えたＪ８地で３
日間１ｆＸ養した菌体を供した。
全菌体をフロイント不完全アジュバントに懸濁し、ＢＡ
ＬＢ／ｃ系マウス１１１ｙ貯内に２回免疫した。
ＬＢ／ｃ系マウス１１１ｙ貯内に２回免疫した。
血中抗体価をＩＥＬＩｓＡ法により測定し、抗体価の上
昇したマウスに１回追加免疫し、３日後に牌臓と胸腺を
無菌的に採取した。採取した稗臓と胸腺とは別々に１」
ＡＮＫＳ中ではぐしＣ細胞浮遊液をつくり、トＩＡＮＫ
Ｓで２回洗った後、トリパンブルー液で細胞数をカウン
トした。得られｌＪ牌細胞は細胞融合に使用し、胸腺細
胞は供給１ｆＩ！ｌＩ胞に使用した。
昇したマウスに１回追加免疫し、３日後に牌臓と胸腺を
無菌的に採取した。採取した稗臓と胸腺とは別々に１」
ＡＮＫＳ中ではぐしＣ細胞浮遊液をつくり、トＩＡＮＫ
Ｓで２回洗った後、トリパンブルー液で細胞数をカウン
トした。得られｌＪ牌細胞は細胞融合に使用し、胸腺細
胞は供給１ｆＩ！ｌＩ胞に使用した。
一方、予め培養しでＪ５いた５ｔ）−２１０マウス骨髄
腫細胞を２回１」△ＮＫＳで洗った後、トリパンブルー
液ぐ細胞数をカラン１〜した。
腫細胞を２回１」△ＮＫＳで洗った後、トリパンブルー
液ぐ細胞数をカラン１〜した。
この骨髄腫細胞（約１０７個）に１０倍吊の牌細胞を加
え、ＭＥＭ中でよく混和し、１０００ｒｐｍで５分間遠
心した。その上清を吸引除去し、ペレッ［・をよく解ぎ
ほぐし、３７゛Ｃに温めてａ３いＩこ［５０％ポリ」ニ
チレングリコール／１０００溶液を約１分間で遠沈箆・
壁に伝りらＬ’−Ｔ加えた。これを３７℃の湯揚中でと
きどき振りよ「ながら４分間放回した後、ＭＥＭを加え
て反応を１にめた。次に、８５０ ｐｐｍで５分間遠心
した後、ト清を吸引除去し、３７℃に記めておいた１０
％ウシ胎児血消を含むＲ’ＰＭ１１６４０培地を加え、
９６穴平底マイク【コブレート４〜６枚に胸腺細胞とと
もに分と［し、培養した。
え、ＭＥＭ中でよく混和し、１０００ｒｐｍで５分間遠
心した。その上清を吸引除去し、ペレッ［・をよく解ぎ
ほぐし、３７゛Ｃに温めてａ３いＩこ［５０％ポリ」ニ
チレングリコール／１０００溶液を約１分間で遠沈箆・
壁に伝りらＬ’−Ｔ加えた。これを３７℃の湯揚中でと
きどき振りよ「ながら４分間放回した後、ＭＥＭを加え
て反応を１にめた。次に、８５０ ｐｐｍで５分間遠心
した後、ト清を吸引除去し、３７℃に記めておいた１０
％ウシ胎児血消を含むＲ’ＰＭ１１６４０培地を加え、
９６穴平底マイク【コブレート４〜６枚に胸腺細胞とと
もに分と［し、培養した。
翌日、トＩ Ａ Ｔ培地（１０％ウシ胎児血清を含むＲ
ＰＭ１１６４’Ｏ培地にヒボキサンチン１０″４Ｍ。
ＰＭ１１６４’Ｏ培地にヒボキサンチン１０″４Ｍ。
アミノプテリン４Ｘ１０−７Ｍ、チミジン１．６ｘ１０
″！ｉＭを加えたもの）を加え、２日目、４日目、７０
［：には培地の１／３（上清部分）を）Ｉ Ａ Ｔ’培
地で交換し、ハイブリドーマを選択した。
″！ｉＭを加えたもの）を加え、２日目、４日目、７０
［：には培地の１／３（上清部分）を）Ｉ Ａ Ｔ’培
地で交換し、ハイブリドーマを選択した。
１０日目頃から］−１丁培地（１０％ウシ胎児血清を含
むＲＰＭ１１６７１０１Ｂ地にヒポキサンチン１０−４
Ｍ、チミジン１．６Ｘ１０″５Ｍを加えたもの）に交換
し、約２週開目にＦＬＩＳＡ法によりめる３ ８ｇｉｎ
ｇｉｖａｌｉｓ抗体産生性ハイブリドーマをスクリーニ
ングした。その結果、融合細胞は５０〜７０％のウェル
に認められ、そのうちの１０〜！２０％−がめる抗体産
生性バイブリド−７であった。
むＲＰＭ１１６７１０１Ｂ地にヒポキサンチン１０−４
Ｍ、チミジン１．６Ｘ１０″５Ｍを加えたもの）に交換
し、約２週開目にＦＬＩＳＡ法によりめる３ ８ｇｉｎ
ｇｉｖａｌｉｓ抗体産生性ハイブリドーマをスクリーニ
ングした。その結果、融合細胞は５０〜７０％のウェル
に認められ、そのうちの１０〜！２０％−がめる抗体産
生性バイブリド−７であった。
スクリーニングされたハイブリドーマは２４穴マルヂウ
エルプレートに移し、＋」Ｔ培地で５日間培養した後、
再ＩａＥＬＩＳＡ法により抗体産生性の確認を行なって
から限界希釈法によってクローニングした。
エルプレートに移し、＋」Ｔ培地で５日間培養した後、
再ＩａＥＬＩＳＡ法により抗体産生性の確認を行なって
から限界希釈法によってクローニングした。
限界希釈法は、ｌ−Ｉ Ｔ培地ぐ融合細胞が５個／′厭
となるように希釈し、９６穴マイク【」プレー１〜に供
給細胞（ｉｆ常なり Ａ Ｌ Ｂ ／ ｃ系マウスの胸
腺細胞）とともに分注した。２週間後、ＥＬＩＳＡ法に
よりＢ 、 （ｌｉｎｇｉｖａｌｉｓ抗体産生性ハイブ
リドーマのクローンをスクリーニングし、２４穴マルブ
ウ１ルプレートに移し、５日間培養後、培養フラスコに
移した。なお、培地は通常培地（８％ウシ胎児血清を含
むＲＰＭ１１６４０培地）へと交換していった。
となるように希釈し、９６穴マイク【」プレー１〜に供
給細胞（ｉｆ常なり Ａ Ｌ Ｂ ／ ｃ系マウスの胸
腺細胞）とともに分注した。２週間後、ＥＬＩＳＡ法に
よりＢ 、 （ｌｉｎｇｉｖａｌｉｓ抗体産生性ハイブ
リドーマのクローンをスクリーニングし、２４穴マルブ
ウ１ルプレートに移し、５日間培養後、培養フラスコに
移した。なお、培地は通常培地（８％ウシ胎児血清を含
むＲＰＭ１１６４０培地）へと交換していった。
更に、抗体価の高いモノクローナル抗体を得るため、目
的とづるハイブリドーマ１０６〜１０７個をＢＡＬＢ／
Ｃ系マウス腹腔内に注射し、１０〜１４日後に腹水を採
取した。
的とづるハイブリドーマ１０６〜１０７個をＢＡＬＢ／
Ｃ系マウス腹腔内に注射し、１０〜１４日後に腹水を採
取した。
なお、目的と（るハイブリドーマの凍結保存は３０％ウ
シ胎児血清及び７％ＤＭＳＯを含むＲＰＭ１１６’ＩＯ
培地で０馨っだ。
シ胎児血清及び７％ＤＭＳＯを含むＲＰＭ１１６’ＩＯ
培地で０馨っだ。
次に、上記の培養フラスコ中のハイブリドーマ細胞の培
養上清及びマウス腹水をそれぞれ使用し、以下の実験を
行なった。
養上清及びマウス腹水をそれぞれ使用し、以下の実験を
行なった。
ｊｑられたモノクローナルｉ−の生
３ 、 ｇｉｎｇｉｖａｌｉｓ３８１の５ｏｎｉｃａｔ
ｅ抗原、同菌体をガラスピーズ振盪によって抽出した表
層抗原、Ｋ Ｏ＋−１で抽出した莢膜抗原、加熱フェノ
ール−水沫で抽出したリボ多糖体（Ｌｌ〕Ｓ）をそれぞ
れ１０μ２／厭の濃度でマイクロチタープレートにコー
ディングし、培養上清及び腹水をＥＬＩＳＡ法によって
どの抗原と反応するか測定した。
ｅ抗原、同菌体をガラスピーズ振盪によって抽出した表
層抗原、Ｋ Ｏ＋−１で抽出した莢膜抗原、加熱フェノ
ール−水沫で抽出したリボ多糖体（Ｌｌ〕Ｓ）をそれぞ
れ１０μ２／厭の濃度でマイクロチタープレートにコー
ディングし、培養上清及び腹水をＥＬＩＳＡ法によって
どの抗原と反応するか測定した。
その結果、Ｎｏ、１〜Ｎｏ、６の６種類の全てのモノク
ローナル抗体（培養上清、腹水）は、強弱はあるものの
５ｏｎｉＣａｔｅ抗原、表層抗原に対し反応した。
ローナル抗体（培養上清、腹水）は、強弱はあるものの
５ｏｎｉＣａｔｅ抗原、表層抗原に対し反応した。
また、第１表及び第１図に示したようにモノクローナル
抗（ｉの中でも、ＮＯ，１などの３種類は莢膜抗原に対
応し、Ｎｏ、４などの３種類はＬＰＳＧＣ対応づること
が認められ、このことは第２図に示しｌこ吸収試験結果
からも認められた。
抗（ｉの中でも、ＮＯ，１などの３種類は莢膜抗原に対
応し、Ｎｏ、４などの３種類はＬＰＳＧＣ対応づること
が認められ、このことは第２図に示しｌこ吸収試験結果
からも認められた。
Ｌ Ｐ Ｓに“・１づるモノクローナル抗体Ｎｏ、４の
ＪＦＳ養上清を使用し、ｌ−Ｐ Ｓに対するモノクロー
ナル抗体が３０ｇｉｎｇｉｖａｌｉｓ由来のＬＰＳにし
か反応しないか否かを調べるため、吸収試験を行なった
。なおこの場合、ＬＰＳはＢ。
ＪＦＳ養上清を使用し、ｌ−Ｐ Ｓに対するモノクロー
ナル抗体が３０ｇｉｎｇｉｖａｌｉｓ由来のＬＰＳにし
か反応しないか否かを調べるため、吸収試験を行なった
。なおこの場合、ＬＰＳはＢ。
ｇｉｎｇｉｖａｌｉｓ由来のもの（第３図Δ） 、Ｆ、
Ｃｏ１１由来のもの（Ｂ） 、３ 、 ｍｅｌａｎｉ
ｎｏｇｃｎｉｃｕｓＳＬＩＩ）Ｓ１１ 、ｍｅｌａｎｉ
ｎｏｇｅｎｉｃｕｓ 由来のもの（Ｃ）、Ｂ、 ｍｅｌ
ａｎｉｎｏｇｅｎｉｃｕｓ ５ｕｂｓｐ 、 ｉｎＬｃ
ｒｍｃｄｉｕｓ由来のもの（Ｄ＞１０μ牙／′厭を用い
た。
Ｃｏ１１由来のもの（Ｂ） 、３ 、 ｍｅｌａｎｉ
ｎｏｇｃｎｉｃｕｓＳＬＩＩ）Ｓ１１ 、ｍｅｌａｎｉ
ｎｏｇｅｎｉｃｕｓ 由来のもの（Ｃ）、Ｂ、 ｍｅｌ
ａｎｉｎｏｇｅｎｉｃｕｓ ５ｕｂｓｐ 、 ｉｎＬｃ
ｒｍｃｄｉｕｓ由来のもの（Ｄ＞１０μ牙／′厭を用い
た。
その結果、第３図に示したように、培養−［清は３ 、
ｇｉｎｇｉｖａｌ ｉｓ由来のＬＰＳとしか反応ｌす
゛、１．’ｊ異性を示すことが認められた。
ｇｉｎｇｉｖａｌ ｉｓ由来のＬＰＳとしか反応ｌす
゛、１．’ｊ異性を示すことが認められた。
得られたモノクローナル八 のクラス
培養上演を５０％飽゛和硫安ぐ塩析後、１０ （６に濃
縮した。これをオフテルロＺ −（Ｏｕｃｈｔｅｒｌｏ
ｎｙ）法にかけ、クラスを決定した。なおこの場合、抗
血清アンチマウスＩＱ Ｇ＋ 、Ｉ（Ｊ Ｇ２ 、Ｉｇ
Ｇ１ 。
縮した。これをオフテルロＺ −（Ｏｕｃｈｔｅｒｌｏ
ｎｙ）法にかけ、クラスを決定した。なおこの場合、抗
血清アンチマウスＩＱ Ｇ＋ 、Ｉ（Ｊ Ｇ２ 、Ｉｇ
Ｇ１ 。
１ｏＭは３１ｏｕｅｔｉｃｓのものを使用した。
その結果、得られた抗体のうち、ＮＯ，４，５のものは
１ｇＧ２で、他のしのは■す０１であることが認められ
た。
１ｇＧ２で、他のしのは■す０１であることが認められ
た。
以上の結果を第１表に示す。
更に、３ 、 ｇｉｎｇｉｖａｌｉｓ３８１に対する１
ツクｌコ一ナル抗体を用いて下記の実験を行＜ｆつだ。
ツクｌコ一ナル抗体を用いて下記の実験を行＜ｆつだ。
マイクロチタープレートにＢ、 ｇｉｎｇｉｖａｌｉｓ
３８１、＃１０２１，０Ｔ−６．Ｂ。
３８１、＃１０２１，０Ｔ−６．Ｂ。
ｎ＋ａｌａｎｉｎｏｏａｎｉｃｕｓ ５ｕｂｓｐ 、ｉ
ｎｔｅｒｍｅｄｉｕｓ ４ ０ 。
ｎｔｅｒｍｅｄｉｕｓ ４ ０ 。
２４、Ｋ１−８ 、３ 、ｍｅｌａｎｉｎｏｇｅｎｉｃ
ｕｓ 、ｓ４＋ｔ＋ｓｐｍｅｌａｎｉｎｏｇｃ＋ｒｉｃ
ｕｓ １５９３０ 、 Ｓ −１。
ｕｓ 、ｓ４＋ｔ＋ｓｐｍｅｌａｎｉｎｏｇｃ＋ｒｉｃ
ｕｓ １５９３０ 、 Ｓ −１。
１−１３に−２の各画の５ｏｎｔｃａｔｃ抗原をコーテ
ィングした。
ィングした。
これに上記の培養上清６種類とウリ”ギ抗Ｂ。
ｇｉｎｇｉｖａｌｉｓ血清を各ウェル加え、抗マウスＩ
（Ｉｓ複合ベルオキシダー１ｉ （１： ５００． Ｃ
ａｐｐｅ１社）を用いてＥＬＩＳＡ法により各ウェルの
吸光度を測定した。第２表にその結果を示づ。
（Ｉｓ複合ベルオキシダー１ｉ （１： ５００． Ｃ
ａｐｐｅ１社）を用いてＥＬＩＳＡ法により各ウェルの
吸光度を測定した。第２表にその結果を示づ。
第２表の結果Ｊ：す、培養上清は３ 、 ｇｉｎｇｉｖ
ａｌｉｓの３秤の抗原とは反応したが、Ｂ。
ａｌｉｓの３秤の抗原とは反応したが、Ｂ。
＋ｎｃｌａｎｉｎｏｇａｎｉｃｕｓ等とは反応せず、本
発明のモノクローナル抗体の特異性が認められた。
発明のモノクローナル抗体の特異性が認められた。
インヒじジョン・アッｅイ（ＥＬＩＳＡ“）：上記の培
養上清と谷内のｓｏｎ ｉ ｃａ ｔ ｅ抗原（Ｂ 、
（Ｊｉｎｇｉｖａｌｉｓ３８１ 、 Ｆ３ 、 ｍｅ
ｌａｎｉｎｏｇｅｎｉｃｕｓｓｕｌ）ｓｐ 、 ｉｎｔ
ｅｒｍｅｄｉｃｕｓ ２４ 、３ 、 ｍａｌａｎｉｎ
ｏ−ｇＣｎｉｃｕｓ ５ｕｂｓｐ 、 ｍｅｌａｎｉｎ
ｏｇｅｎｉｃｕｓ １５９３０ ）１００ｎ＋ｇ／ｉｆ
、 １０ＴＩＩ［＋／猷を３７℃で４時間培養したのち
、４０ ’ＯＯｒｐｍで遠沈し、上清だ【プを取り出し
、濾過減菌後、Ｂ、 ｇｉｎｇｉｖａｌｉｓの５ｏｎｉ
ｃａｔｅ抗原をコーティングしたマイクロヂタープレー
ト１に加え、Ｅ ｉ Ｉ ＳＡ法で測定を行なった。
養上清と谷内のｓｏｎ ｉ ｃａ ｔ ｅ抗原（Ｂ 、
（Ｊｉｎｇｉｖａｌｉｓ３８１ 、 Ｆ３ 、 ｍｅ
ｌａｎｉｎｏｇｅｎｉｃｕｓｓｕｌ）ｓｐ 、 ｉｎｔ
ｅｒｍｅｄｉｃｕｓ ２４ 、３ 、 ｍａｌａｎｉｎ
ｏ−ｇＣｎｉｃｕｓ ５ｕｂｓｐ 、 ｍｅｌａｎｉｎ
ｏｇｅｎｉｃｕｓ １５９３０ ）１００ｎ＋ｇ／ｉｆ
、 １０ＴＩＩ［＋／猷を３７℃で４時間培養したのち
、４０ ’ＯＯｒｐｍで遠沈し、上清だ【プを取り出し
、濾過減菌後、Ｂ、 ｇｉｎｇｉｖａｌｉｓの５ｏｎｉ
ｃａｔｅ抗原をコーティングしたマイクロヂタープレー
ト１に加え、Ｅ ｉ Ｉ ＳＡ法で測定を行なった。
結果を第３表に示す。なお、結果は何も処置していない
培養上清の吸光度（Ｏ［）４９０ｎｌｌｌ＝１．１７）
を１００どしたときの抑制率（％）で表わした。
培養上清の吸光度（Ｏ［）４９０ｎｌｌｌ＝１．１７）
を１００どしたときの抑制率（％）で表わした。
第３表の騨果より、Ｂ、 ｐｉｎｇｉｖａｌｉｓと培養
したモノクローナル抗体〈培養上清）は８０％の抑制率
を示したが、３’ 、 ｍｅｌａｎｉｎｏｇｅｎｉｃｕ
ｓど培養したものの抑制率は３０％以下であり、このこ
とからも本発明モノクローナル抗体の特異性が認められ
た。
したモノクローナル抗体〈培養上清）は８０％の抑制率
を示したが、３’ 、 ｍｅｌａｎｉｎｏｇｅｎｉｃｕ
ｓど培養したものの抑制率は３０％以下であり、このこ
とからも本発明モノクローナル抗体の特異性が認められ
た。
従って、本発明モノクロール抗体を用いることにより、
３ 、 ｇｉｎｇｉｖａｌｉｓの病巣て・の存右や菌数
を簡単かつ確実に調べることができ、歯周病の診断が確
実になされることが知見される。
３ 、 ｇｉｎｇｉｖａｌｉｓの病巣て・の存右や菌数
を簡単かつ確実に調べることができ、歯周病の診断が確
実になされることが知見される。
第１図はモノクロ−ナル抗体のＢ、 ｇｉｎｇｉｖａｌ
ｉｓに対りる層重性をＥＬＩＳＡ法で測定した場合の結
果を示すグラフで、第１図（１）は（３゜ｇｆｌｌｇｆ
ＶａｌｆＳの莢膜抗原を用いた場合の結果、第１図（２
）はＬＰＳを用いた場合の結果を示し、第２図は同反応
性を吸収試験により測定した場合の結果を示ずグラフで
、第２図（１）は莢膜抗原、第２図（２）はＬＰＳを用
いた場合の結果、第３図はモノクローナル抗体の各種菌
体ＬＰＳにス・１する反応性を吸収試験により測定した
場合の結果を示すグラフである。 出願人 ラ イ オ ン 株式会社 代理人 弁理士 小 島 隆 司
ｉｓに対りる層重性をＥＬＩＳＡ法で測定した場合の結
果を示すグラフで、第１図（１）は（３゜ｇｆｌｌｇｆ
ＶａｌｆＳの莢膜抗原を用いた場合の結果、第１図（２
）はＬＰＳを用いた場合の結果を示し、第２図は同反応
性を吸収試験により測定した場合の結果を示ずグラフで
、第２図（１）は莢膜抗原、第２図（２）はＬＰＳを用
いた場合の結果、第３図はモノクローナル抗体の各種菌
体ＬＰＳにス・１する反応性を吸収試験により測定した
場合の結果を示すグラフである。 出願人 ラ イ オ ン 株式会社 代理人 弁理士 小 島 隆 司
Claims (1)
- １、バクテロイデス・ジンジバリスに対する抗体産生性
細胞とミエローマ細胞とを融合することによって得られ
るハイブリドーマが産生ずるバクテロイデス・ジンジバ
リスに対するモノクローナル抗体を歯周病の病巣から採
取した菌と反応させて、この菌叢中のバクテロイデス・
ジンジバリスの存在を調べることを特徴とする歯周病診
断法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP18385983A JPS6073463A (ja) | 1983-09-30 | 1983-09-30 | 歯周病診断法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP18385983A JPS6073463A (ja) | 1983-09-30 | 1983-09-30 | 歯周病診断法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS6073463A true JPS6073463A (ja) | 1985-04-25 |
Family
ID=16143068
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP18385983A Pending JPS6073463A (ja) | 1983-09-30 | 1983-09-30 | 歯周病診断法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS6073463A (ja) |
Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS62211559A (ja) * | 1986-02-26 | 1987-09-17 | ザ リサ−チ フアウンデ−シヨン オブ ステイト ユニヴア−シテイ オブ ニユ−ヨ−ク | 歯根膜病の原因となる微生物の同定に有効なモノクロ−ナル抗体 |
| WO1992021952A1 (fr) * | 1991-06-01 | 1992-12-10 | Meito Sangyo Kabushiki Kaisha | Instrument servant a echantillonner une quantite minuscule d'un specimen |
| CN111995679A (zh) * | 2020-06-24 | 2020-11-27 | 首都医科大学附属北京口腔医院 | 特异性识别牙龈卟啉单胞菌的单克隆抗体及试纸条、试剂盒 |
-
1983
- 1983-09-30 JP JP18385983A patent/JPS6073463A/ja active Pending
Non-Patent Citations (2)
| Title |
|---|
| CAN.J.MICROBIOL=1982 * |
| J.DENT.RES=1983 * |
Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS62211559A (ja) * | 1986-02-26 | 1987-09-17 | ザ リサ−チ フアウンデ−シヨン オブ ステイト ユニヴア−シテイ オブ ニユ−ヨ−ク | 歯根膜病の原因となる微生物の同定に有効なモノクロ−ナル抗体 |
| WO1992021952A1 (fr) * | 1991-06-01 | 1992-12-10 | Meito Sangyo Kabushiki Kaisha | Instrument servant a echantillonner une quantite minuscule d'un specimen |
| CN111995679A (zh) * | 2020-06-24 | 2020-11-27 | 首都医科大学附属北京口腔医院 | 特异性识别牙龈卟啉单胞菌的单克隆抗体及试纸条、试剂盒 |
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