JPS6091927A - アルフアルフアの体細胞雑種の製造方法 - Google Patents
アルフアルフアの体細胞雑種の製造方法Info
- Publication number
- JPS6091927A JPS6091927A JP59074818A JP7481884A JPS6091927A JP S6091927 A JPS6091927 A JP S6091927A JP 59074818 A JP59074818 A JP 59074818A JP 7481884 A JP7481884 A JP 7481884A JP S6091927 A JPS6091927 A JP S6091927A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- protoplasts
- alfalfa
- fusion
- medium
- medicago
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
- C12N5/10—Cells modified by introduction of foreign genetic material
- C12N5/12—Fused cells, e.g. hybridomas
- C12N5/14—Plant cells
Landscapes
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Botany (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Breeding Of Plants And Reproduction By Means Of Culturing (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
この発明は、２種のアルファルファ、特にメディカゴ＋
＋ ７ ｙルカタ（Ｍｅｄｉｃａｇｏ ｆａｌｃａｔａ
）とメディカゴ・サチバ（Ｍｅｄｉｃａｇａ ｓａｔｉ
ｖａ） （すなわち、栽培アルファルファ）のプロトプ
ラストを融合させることによってアルファルファの体細
胞雑種を製造する方法に関する。
＋ ７ ｙルカタ（Ｍｅｄｉｃａｇｏ ｆａｌｃａｔａ
）とメディカゴ・サチバ（Ｍｅｄｉｃａｇａ ｓａｔｉ
ｖａ） （すなわち、栽培アルファルファ）のプロトプ
ラストを融合させることによってアルファルファの体細
胞雑種を製造する方法に関する。
これら２つの種の融合物により、アルファルファに遺伝
的変異を導入することが可能になる。
的変異を導入することが可能になる。
従って、産業上利用できる新品種を選択することが可能
になる。
になる。
例えばトウモロコシ等とは対照的に、商業的に有用なア
ルファルファの雑種を得ることは困難であるので、この
ことは特に重要である。白花受精、他花受精、及び４倍
体性の故に、アルファルファの選択方法は複雑である。
ルファルファの雑種を得ることは困難であるので、この
ことは特に重要である。白花受精、他花受精、及び４倍
体性の故に、アルファルファの選択方法は複雑である。
選択が困難なことが１つの原因となって、この４５年の
間にアルファルファの収量は４０％しか増加しなかった
のであろう。この間にトウモロコシの収量は３２０％増
えている（Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ、ｖｏｌ、３０． Ｎ
ｏ、 １．１９８０゜１７−２１ ）。
間にアルファルファの収量は４０％しか増加しなかった
のであろう。この間にトウモロコシの収量は３２０％増
えている（Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ、ｖｏｌ、３０． Ｎ
ｏ、 １．１９８０゜１７−２１ ）。
さらに、従来の選択方法においては、常に、同じ集団か
らの材料を用いていた。従って、他の性質を有し、遺伝
的変異を増加し得るであろう親株を導入することが有用
であるように思える。
らの材料を用いていた。従って、他の性質を有し、遺伝
的変異を増加し得るであろう親株を導入することが有用
であるように思える。
実際、アルファルファは、ある環境下において、疾病や
昆虫に対して比較的感受性が高い。体細胞雑種をつくる
ことによって、疾病や昆虫に対してより耐性で、収量を
増加させることができるアルファルファを得ることが可
能になるであろう。
昆虫に対して比較的感受性が高い。体細胞雑種をつくる
ことによって、疾病や昆虫に対してより耐性で、収量を
増加させることができるアルファルファを得ることが可
能になるであろう。
例えばＡ、Ｖ、Ｍｅｓｅｎｔｓｅｖ、 Ｃｈｅｍ、 Ａ
ｂｓ、 ｖｏｌｕｍｅ９５、１９８１．４２０．３９１
９３ｂ及びｖｏｌ、 ９Ｊ １９８２゜２６２、１５７
２５８マに記載されているように、メディヵゴ・サチバ
のプロトプラストから植物が再生することが知られてお
り、また米国特許第４，３００，３１０号に記載されて
いるように、夕へコのような、ある種の植物では体細胞
雑種化の後、植物を再生させることが可能であることは
知られているが、メディカゴ・サチバについては融合処
理後に植物が再生した例は知られておらず、また、マメ
科植物についても融合後に植物が再生した例は知られて
いない。
ｂｓ、 ｖｏｌｕｍｅ９５、１９８１．４２０．３９１
９３ｂ及びｖｏｌ、 ９Ｊ １９８２゜２６２、１５７
２５８マに記載されているように、メディヵゴ・サチバ
のプロトプラストから植物が再生することが知られてお
り、また米国特許第４，３００，３１０号に記載されて
いるように、夕へコのような、ある種の植物では体細胞
雑種化の後、植物を再生させることが可能であることは
知られているが、メディカゴ・サチバについては融合処
理後に植物が再生した例は知られておらず、また、マメ
科植物についても融合後に植物が再生した例は知られて
いない。
この発明は、
ａ）２種のアルファルファのプロトプラストを分離し、
ｂ）得られたプロトプラストを融合させ、及びＣ）融合
操作の後、植物を再生させる工程を含む、アルファルフ
ァの体細胞雑種を製造する方法を提供する。
操作の後、植物を再生させる工程を含む、アルファルフ
ァの体細胞雑種を製造する方法を提供する。
この方法はまた、異なる遺伝子型を有する同種のプロト
プラストの融合にも適用することができる。
プラストの融合にも適用することができる。
個々の種又は遺伝子型を有する植物のプロトプラストは
、植物組織を別々に稀釈培地中で、酵素消化することに
よって得ることができる。例えば、カオ（Ｋａｏ）の培
地から誘導される培地中で。
、植物組織を別々に稀釈培地中で、酵素消化することに
よって得ることができる。例えば、カオ（Ｋａｏ）の培
地から誘導される培地中で。
セルラーゼ、ヘミセルラーゼ、又はペクチナーゼのよう
な酵素を作用させることによって得ることができる。
な酵素を作用させることによって得ることができる。
この方法においては、カルシウム塩、特に増化カルシウ
ムを融合化剤として用いることが重要である。融合化溶
液はポリエチレングリコールを含まないことが好ましい
が、グリシン＊ｓｍのような緩衝液中に含まれたマンニ
トールを含んでいてもよい。実際、メデイカゴのプロト
プラストは、ポリエチレングリコールを用いた融合処理
に対して耐性が低いように思える。分離されたプロトプ
ラストは融合化溶液中に懸濁され、３２℃で約１５分間
係たれる。
ムを融合化剤として用いることが重要である。融合化溶
液はポリエチレングリコールを含まないことが好ましい
が、グリシン＊ｓｍのような緩衝液中に含まれたマンニ
トールを含んでいてもよい。実際、メデイカゴのプロト
プラストは、ポリエチレングリコールを用いた融合処理
に対して耐性が低いように思える。分離されたプロトプ
ラストは融合化溶液中に懸濁され、３２℃で約１５分間
係たれる。
遠心及び洗ｔｌＩｒ後、融合操作の結果得られたプロト
プラスＩ・を暗所にて約１０日間インキュベートする。
プラスＩ・を暗所にて約１０日間インキュベートする。
プロトプラストを次に、カオの培地から誘導される培地
中で、新鮮な培地を定期的に供給しながら、拡散光中で
培養する。
中で、新鮮な培地を定期的に供給しながら、拡散光中で
培養する。
得られた胚様体を次にろ紙上で培養し１．固体培地上に
植える。
植える。
約６カ月後、得られた苗を調べ、親と異なる性質を有し
ているかどうかをチェックする。
ているかどうかをチェックする。
支ム勇」
２種のアルファルファ、すなわちメデイカゴ・サチバと
メディカゴ・ファルカタを親として用いた。
メディカゴ・ファルカタを親として用いた。
プロトプラストは、セルラーゼ、ヘミセルラーゼ及びペ
クチナーゼを含む酵素溶液を、カオの培地（Ｍｏｌｅｃ
、 Ｇｅｎ、 Ｇｅｎｅｔ、 １５０，２２５−２３０
．１１１７７）から誘導された以下の組成を有する培地
で稀釈した溶液中で、暗所において２６℃の温度下で１
５時間ないし１６時間培養することによって得られた。
クチナーゼを含む酵素溶液を、カオの培地（Ｍｏｌｅｃ
、 Ｇｅｎ、 Ｇｅｎｅｔ、 １５０，２２５−２３０
．１１１７７）から誘導された以下の組成を有する培地
で稀釈した溶液中で、暗所において２６℃の温度下で１
５時間ないし１６時間培養することによって得られた。
Ｎ Ｈｔ、Ｎ Ｏ３：ｅｏｏ、ｏｏ ｍｇ／ ＩＫ Ｎ
Ｏ，： １，９００．００ ｍｇ／１Ｇａｅｌ、＠２
Ｈ２０： ｆｔ００．００ ｍｇ／１Ｍｇ５Ｏｔｆ＠
？Ｈ，０二 ３００．００ ｍｇ／ＩＫ Ｈ２Ｐ ％
： Ｉ ７０−００ ｍ ｇ ／ ＩＫｃａｌ ： ３
００．００ ｍｇ／ＩＫ Ｉ Ｏ，７５ｍｇ／Ｉ Ｈｓ Ｂ Ｏｓ ３ 、００ ｍ ｇ ／ ｌＭｎ５Ｏ
，φＨ，０・１０．００ ｍｇ／ ｌＺｎＳＯ４・７Ｈ
，０・２．００ ｌ１１ｇ／ ｌＮａＭｏＯ４＋＋２Ｈ
，０−０，２５ｍｇ／ｌＣｕ５Ｏ，弓Ｈ，０−０，０２
５ｍｇ／ ｌＣｏＣｌ１ｅ８Ｈ，０−０，０２５ｍｇ／
ｌＥ Ｄ Ｔ Ａ ８ｍｌ／Ｉ イノシト−ル １００．００ ｍｇ／ｌニコチンアミド
１．ＧＯｍｇ／ｌ ピリドキシ７ ＩＩＨＣ：Ｉ １．００ ｍｇ／ｌチア
ミ７ ・ＭＣＩ １０．００ ｍｇ／ＩＤ−パントテン
酸カルシウムニ０．５０ ｍｇ／１葉酸 ０．２０ ｍ
ｇ／ｌ ｐ−アミノ安息香酸 ０．０１ ｍｇ／ｌビオチン ０
．００５ ｆｆＩｇ／ｌ コリンクロライド ・ ０．５０ ｍｇ／ｌリボフラビ
ン ０．１０ ｆｆ１ｇ／ｌアスコルビン酸 １．００
１１Ｉｇ／ｌビタミンＡ Ｏ，００５ｍｇ／ｌ ビタミｙ Ｄ、 ０．００５ ｍｇ／ｌビタミンＢ、、
０．０１ ｍｇ／ｌ グルコース ： １１０，４００．００ ｍｇ／ｌショ
糖 １２５゜００ ｍｇ／１ ７７ り）−７，１２５，００ｍｇ／ｌリポース １２
５．００ ｍｇ／ｌ キシＤ −ス１２５．００ Ｂ／１ マンノース １２５．００ Ｂ／１ ラムノース ： １２５．００ ｍｇ／ｌセロヒオース
： １２５．００ ｍｇ／ｌソ）ｌｉピト− ル１２５
．００ ｍｇ／ｌマンニト−ル １２５．００ ｍｇ／
ｌイ１機酸（ｐ）Ｉ＝５−５） ピルビン醜すトリウム ５ ｍｇ／Ｉ クエン酸 １０ ｍｇ／ｌ リンゴＷＩＪ ＩＯＩＩＩｇ／ｌ フマル酸 １０ ｍｇ／１ ２．４−Ｄ Ｏ，２ｌｌ１ｇ／ｌ セアチン ０．５ ｍｇ／Ｉ Ａ、Ｎ、Ａ、 １．０ ｍｇ／Ｉ Ｎ、Ｚ、アミン １２５ ｍｇ／ｌ 蒸留水 ： １０００ ｍｌ （ＮａＯＨでｐＨを５．７に調整し、ろ過する）酵素溶
液を除去し、プロトプラストを培地で１回洗い、 ２５
０，０００個／１の嬌度になるように懸濁した。
Ｏ，： １，９００．００ ｍｇ／１Ｇａｅｌ、＠２
Ｈ２０： ｆｔ００．００ ｍｇ／１Ｍｇ５Ｏｔｆ＠
？Ｈ，０二 ３００．００ ｍｇ／ＩＫ Ｈ２Ｐ ％
： Ｉ ７０−００ ｍ ｇ ／ ＩＫｃａｌ ： ３
００．００ ｍｇ／ＩＫ Ｉ Ｏ，７５ｍｇ／Ｉ Ｈｓ Ｂ Ｏｓ ３ 、００ ｍ ｇ ／ ｌＭｎ５Ｏ
，φＨ，０・１０．００ ｍｇ／ ｌＺｎＳＯ４・７Ｈ
，０・２．００ ｌ１１ｇ／ ｌＮａＭｏＯ４＋＋２Ｈ
，０−０，２５ｍｇ／ｌＣｕ５Ｏ，弓Ｈ，０−０，０２
５ｍｇ／ ｌＣｏＣｌ１ｅ８Ｈ，０−０，０２５ｍｇ／
ｌＥ Ｄ Ｔ Ａ ８ｍｌ／Ｉ イノシト−ル １００．００ ｍｇ／ｌニコチンアミド
１．ＧＯｍｇ／ｌ ピリドキシ７ ＩＩＨＣ：Ｉ １．００ ｍｇ／ｌチア
ミ７ ・ＭＣＩ １０．００ ｍｇ／ＩＤ−パントテン
酸カルシウムニ０．５０ ｍｇ／１葉酸 ０．２０ ｍ
ｇ／ｌ ｐ−アミノ安息香酸 ０．０１ ｍｇ／ｌビオチン ０
．００５ ｆｆＩｇ／ｌ コリンクロライド ・ ０．５０ ｍｇ／ｌリボフラビ
ン ０．１０ ｆｆ１ｇ／ｌアスコルビン酸 １．００
１１Ｉｇ／ｌビタミンＡ Ｏ，００５ｍｇ／ｌ ビタミｙ Ｄ、 ０．００５ ｍｇ／ｌビタミンＢ、、
０．０１ ｍｇ／ｌ グルコース ： １１０，４００．００ ｍｇ／ｌショ
糖 １２５゜００ ｍｇ／１ ７７ り）−７，１２５，００ｍｇ／ｌリポース １２
５．００ ｍｇ／ｌ キシＤ −ス１２５．００ Ｂ／１ マンノース １２５．００ Ｂ／１ ラムノース ： １２５．００ ｍｇ／ｌセロヒオース
： １２５．００ ｍｇ／ｌソ）ｌｉピト− ル１２５
．００ ｍｇ／ｌマンニト−ル １２５．００ ｍｇ／
ｌイ１機酸（ｐ）Ｉ＝５−５） ピルビン醜すトリウム ５ ｍｇ／Ｉ クエン酸 １０ ｍｇ／ｌ リンゴＷＩＪ ＩＯＩＩＩｇ／ｌ フマル酸 １０ ｍｇ／１ ２．４−Ｄ Ｏ，２ｌｌ１ｇ／ｌ セアチン ０．５ ｍｇ／Ｉ Ａ、Ｎ、Ａ、 １．０ ｍｇ／Ｉ Ｎ、Ｚ、アミン １２５ ｍｇ／ｌ 蒸留水 ： １０００ ｍｌ （ＮａＯＨでｐＨを５．７に調整し、ろ過する）酵素溶
液を除去し、プロトプラストを培地で１回洗い、 ２５
０，０００個／１の嬌度になるように懸濁した。
懸濁液を次のように分配した。
２ｍｌのメディカゴ・サチへのプロトプラストを含むチ
ューブ １本 ２ｍｌのメディカゴ拳ファルカタのプロトプラストを含
むチューブ １本 （以上、プロトプラストの生存を調べるための対照） ４ｍｌのメディカゴ・サチへのプロトプラストを含むチ
ューブ １本 ４ｍｌのメディカゴ・ファルカタのプロトプラストを含
むチューブ １本 （以上、融合操作後の生存を調べるための対照） ２ｍｌのメディカゴ・サチへのプロトプラストと２１の
メディカゴ・ファルカタのプロトプラストを含むチュー
ブ ４本 （融合操作のため） プロトプラストの生存を調べるための対照のためのチュ
ーブ以外の全てのチューブをｌｏｏｇで４分間遠心し、
上清を除去した。次に２１の融合化溶液を加えた。融合
化溶液は、０−７４ ｇのＣａＧ、ｌ＞ｌｌ２Ｈ２０と
９．５ｇノマンニトールトが、１００１１１（７）グリ
シン緩衝液（０，３７５ｇのグリシンを含む）に解けた
溶液である。
ューブ １本 ２ｍｌのメディカゴ拳ファルカタのプロトプラストを含
むチューブ １本 （以上、プロトプラストの生存を調べるための対照） ４ｍｌのメディカゴ・サチへのプロトプラストを含むチ
ューブ １本 ４ｍｌのメディカゴ・ファルカタのプロトプラストを含
むチューブ １本 （以上、融合操作後の生存を調べるための対照） ２ｍｌのメディカゴ・サチへのプロトプラストと２１の
メディカゴ・ファルカタのプロトプラストを含むチュー
ブ ４本 （融合操作のため） プロトプラストの生存を調べるための対照のためのチュ
ーブ以外の全てのチューブをｌｏｏｇで４分間遠心し、
上清を除去した。次に２１の融合化溶液を加えた。融合
化溶液は、０−７４ ｇのＣａＧ、ｌ＞ｌｌ２Ｈ２０と
９．５ｇノマンニトールトが、１００１１１（７）グリ
シン緩衝液（０，３７５ｇのグリシンを含む）に解けた
溶液である。
ＰＨをｌ０１４に調整し、溶液をろ過することによって
殺菌した。
殺菌した。
ハスツールヒヘットを用いてプロトプラストをこの溶液
に懸濁し、チューブを３２℃の水槽中に１５分間漬けた
。
に懸濁し、チューブを３２℃の水槽中に１５分間漬けた
。
チューブを次に８０ｇで５分間遠心した。次にプロトプ
ラストを以下の組成を有する塩溶液（フレアーソン塩、
フレアーソンら、 Ｄｅｗ、 Ｂｉｏｌ、 ３３゜１３
０−１３７（１９７３））で１回洗い、次に培地で１回
洗い、５０，０００プロトプラスト／腸１に懸濁し、直
径５ ｃ＋ｓの前処理したペトリ皿にそれぞれ３．５１
づつ入れ、パラフィルムで密封した。
ラストを以下の組成を有する塩溶液（フレアーソン塩、
フレアーソンら、 Ｄｅｗ、 Ｂｉｏｌ、 ３３゜１３
０−１３７（１９７３））で１回洗い、次に培地で１回
洗い、５０，０００プロトプラスト／腸１に懸濁し、直
径５ ｃ＋ｓの前処理したペトリ皿にそれぞれ３．５１
づつ入れ、パラフィルムで密封した。
このプロトプラストを２６℃において暗所にてｌＯ日間
培養し、次に拡散光の下で培養した。
培養し、次に拡散光の下で培養した。
培養７日後、全ての皿について分裂が観察され、培養物
を次のように稀釈した。それぞれの皿の内容物の４７５
を別の皿に移し１皿に残った培養物に、新鮮な培地を加
えてもとの量にした（この方法は、培養中におけるフェ
ノールの生産による損失を制限する）。
を次のように稀釈した。それぞれの皿の内容物の４７５
を別の皿に移し１皿に残った培養物に、新鮮な培地を加
えてもとの量にした（この方法は、培養中におけるフェ
ノールの生産による損失を制限する）。
培養物を次に拡散光の中に入れ、１ｍ＋ｓの小さな胚様
体が得られるまで７日ごとに新鮮な培地を加えた。次に
これらの胚様体を、固体培地に植えるまでろ紙上で培養
した。
体が得られるまで７日ごとに新鮮な培地を加えた。次に
これらの胚様体を、固体培地に植えるまでろ紙上で培養
した。
融合化率は、操作がチューブ内で行なわれるために観察
することが困難であるけれども、５ないし１０％であっ
たろうと推定される。
することが困難であるけれども、５ないし１０％であっ
たろうと推定される。
再生した植物のいくつかのマーカーを調査した。マーカ
ーは細胞質性（雄性生殖不能症）及び抜性（酵素的マー
カー、植物の生物測定学、花の色）ののものである。こ
のようにして異型融合の結果物を検出することが可能で
ある。このようにして、種々の雑種が得られた。
ーは細胞質性（雄性生殖不能症）及び抜性（酵素的マー
カー、植物の生物測定学、花の色）ののものである。こ
のようにして異型融合の結果物を検出することが可能で
ある。このようにして、種々の雑種が得られた。
２つの遺伝子型の親のバンド領域に蓄積する、ペルオキ
シダーゼとβアミラーゼとのザイモグラム（ｚｙａｏｇ
ｒａｍ）によって、並びに、メディカゴ・サチバとメデ
ィカゴ・ファルカタの花の色を混ぜた色の花をっけたこ
とによって、融合の結果物として十分に生育したいくつ
かの体細胞雑種を同定することができた。他の植物につ
いては、酵素分析により、得られた結果物が部分的に体
細胞雑種であることが示された。
シダーゼとβアミラーゼとのザイモグラム（ｚｙａｏｇ
ｒａｍ）によって、並びに、メディカゴ・サチバとメデ
ィカゴ・ファルカタの花の色を混ぜた色の花をっけたこ
とによって、融合の結果物として十分に生育したいくつ
かの体細胞雑種を同定することができた。他の植物につ
いては、酵素分析により、得られた結果物が部分的に体
細胞雑種であることが示された。
代理人鈴江武彦
第１頁の続き
■Ｉｎｔ、ＣＪ’ 識別記号 庁内整理番号＠発明 者
イベント・ダット フランス国。
イベント・ダット フランス国。
ナス ５
■出願 人 アソシアシオン・デ・ フランス国。
フレアトウール・ド・
バリエテ・フラジニー
ル（アーセーベーエ
フ）
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 （＋）ａ）２種のアルファルファ又は異なる遺伝子型を
有する２つのアルファルファのプロトプラストを分離し
、 ｂ）得られたプロトプラストを融合し、及びＣ）融合化
操作後、植物を再生させる工程を含む、アルファルファ
の体細胞雑種の製造方法。 （２）上記ｂ）工程において、カルシウム塩が融合化剤
として用いられる特許請求の範囲第１項記載の方法。 （３）融合化溶液は塩化カルシウムを含むがポリエチレ
ングリコールを含まない、特許請求の範囲第２項記載の
方法。 （４）プロトプラストは、稀釈培地中で植物組織の断片
を酵素消化することによって得られる特許請求の範囲第
１項ないし第３項のいずれか１項に記載の方法。 （５）融合化は、ａ）工程で得られたプロトプラストを
、塩化カルシウムとマンニトールとを含む融合溶液に懸
濁することによって行なわれる特許請求の範囲第１項な
いし第４項のいずれか１項に記載の方法。 （８）再生は、 ｂ）工程で得られた融合プロトプラス
ト許請求の範囲第１項ないし第５項のいずれか１項に記
載の方法。 （７）培地はカオの培地又はこれから誘導された培地で
ある特許請求の範囲第１項ないし第６項のいずれかＩＸ
Ｊｉに記載の方法。 （８）アルファルファの２種の親株はメディカゴ・サチ
バとメディカゴ会ファルカタである特許請求の範囲第１
項ないし第７項のいずれか１項に記載の方法。
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| FR8306024 | 1983-04-13 | ||
| FR8306024A FR2544167B1 (fr) | 1983-04-13 | 1983-04-13 | Procede d'obtention d'hybrides somatiques de luzernes par fusion de protoplastes |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS6091927A true JPS6091927A (ja) | 1985-05-23 |
Family
ID=9287803
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP59074818A Pending JPS6091927A (ja) | 1983-04-13 | 1984-04-13 | アルフアルフアの体細胞雑種の製造方法 |
Country Status (5)
| Country | Link |
|---|---|
| EP (1) | EP0125159B1 (ja) |
| JP (1) | JPS6091927A (ja) |
| AT (1) | ATE32914T1 (ja) |
| DE (1) | DE3469762D1 (ja) |
| FR (1) | FR2544167B1 (ja) |
Families Citing this family (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS61265087A (ja) * | 1985-05-21 | 1986-11-22 | Mitsui Toatsu Chem Inc | プロトプラストの培養方法 |
| GB2195656B (en) * | 1986-06-26 | 1991-04-24 | Oji Paper Co | Mass propagation through short primordia |
| RU2367146C1 (ru) * | 2008-06-24 | 2009-09-20 | Федеральное государственное образовательное учреждение высшего профессионального образования "Горский государственный аграрный университет" | Способ селекции бобовых трав |
Family Cites Families (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| GB1310119A (en) * | 1970-02-13 | 1973-03-14 | Nat Res Dev | Plant culture |
| US4300310A (en) * | 1980-07-28 | 1981-11-17 | The Board Of Regents Of The University Of Nebraska | Identification and sorting of plant heterokaryons |
-
1983
- 1983-04-13 FR FR8306024A patent/FR2544167B1/fr not_active Expired
-
1984
- 1984-04-11 DE DE8484400719T patent/DE3469762D1/de not_active Expired
- 1984-04-11 EP EP84400719A patent/EP0125159B1/fr not_active Expired
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