JPS609490A - 細胞の融合方法 - Google Patents
細胞の融合方法Info
- Publication number
- JPS609490A JPS609490A JP59116778A JP11677884A JPS609490A JP S609490 A JPS609490 A JP S609490A JP 59116778 A JP59116778 A JP 59116778A JP 11677884 A JP11677884 A JP 11677884A JP S609490 A JPS609490 A JP S609490A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- cells
- cell
- electric field
- fusion
- membrane
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
- C12N5/10—Cells modified by introduction of foreign genetic material
- C12N5/12—Fused cells, e.g. hybridomas
- C12N5/16—Animal cells
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N13/00—Treatment of microorganisms or enzymes with electrical or wave energy, e.g. magnetism, sonic waves
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Immobilizing And Processing Of Enzymes And Microorganisms (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
本発明は、互に隣接し合った複数の細胞の間の膜橋（Ｍ
ｅｍｂｒａｎ’ｂｒｕｋｅｎ）の形成と細胞の融合（Ｆ
ｕｓｉｏｎ ）とに通じる膜構造の障害を発生させるた
めに細胞を化学薬品例えばポリエチレングリコールでま
たは不活化したウィルス例えばセンダイウィルスで処理
する細胞融合方法に関す ′る。
ｅｍｂｒａｎ’ｂｒｕｋｅｎ）の形成と細胞の融合（Ｆ
ｕｓｉｏｎ ）とに通じる膜構造の障害を発生させるた
めに細胞を化学薬品例えばポリエチレングリコールでま
たは不活化したウィルス例えばセンダイウィルスで処理
する細胞融合方法に関す ′る。
懸濁液中の二つの細胞は、触れ合って両方の細胞の膜の
間に緊密な接触が起こると、膜の構成要素が移動性なの
で互に合体する（ｖｅｒｓｃｈｍｅｌｚｅｎ）。
間に緊密な接触が起こると、膜の構成要素が移動性なの
で互に合体する（ｖｅｒｓｃｈｍｅｌｚｅｎ）。
しかしこのような自発的な細胞の合体（融合）は自然条
件では観察されないか又は非常にまれに観察されるに過
ぎない。既に知られている例１ノ（ 外は、有性生殖のｐ際の精子による卵細胞の装着である
。自発的融合（５ｐｏｎｔａｎｅ Ｆｕｓｉｏｎ）はり
ン脂質と他の膜成分との陰電荷によって妨げられる。該
陰電荷は、細胞がわずかな距離に接近したときに細胞を
反抗さぜる。しかし細胞合体（Ｚｅｌｌｖｅｒｓｃｈｍ
ｅｌｚｕｎｇ）には、両方の膜が１０’ｍ以下の距離に
まで接近し得ることが必要である。
件では観察されないか又は非常にまれに観察されるに過
ぎない。既に知られている例１ノ（ 外は、有性生殖のｐ際の精子による卵細胞の装着である
。自発的融合（５ｐｏｎｔａｎｅ Ｆｕｓｉｏｎ）はり
ン脂質と他の膜成分との陰電荷によって妨げられる。該
陰電荷は、細胞がわずかな距離に接近したときに細胞を
反抗さぜる。しかし細胞合体（Ｚｅｌｌｖｅｒｓｃｈｍ
ｅｌｚｕｎｇ）には、両方の膜が１０’ｍ以下の距離に
まで接近し得ることが必要である。
工業薬品で行われる細胞の融合は、広い応用範囲におい
て重要である。この融合は例えば、起源の異なった二つ
の細胞（これらは進化上互に隔たりすぎているべきでな
い）の合体によって雑種細胞（Ｈｙｂｒｉｄ、ｚｅｌｌ
ｅｎ ）をつくるのに使用することができる。その際、
完全な植物を再生するととのできる植物細胞から細胞の
雑種（Ｚｅｌｌｈｙｂｒｉｄｅ）をつくることができる
か又は、例えば腫瘍及び白血病に対するモノクローナル
抗体を得ることのでへる動物細胞から細胞の芒種をつく
ることができる。
て重要である。この融合は例えば、起源の異なった二つ
の細胞（これらは進化上互に隔たりすぎているべきでな
い）の合体によって雑種細胞（Ｈｙｂｒｉｄ、ｚｅｌｌ
ｅｎ ）をつくるのに使用することができる。その際、
完全な植物を再生するととのできる植物細胞から細胞の
雑種（Ｚｅｌｌｈｙｂｒｉｄｅ）をつくることができる
か又は、例えば腫瘍及び白血病に対するモノクローナル
抗体を得ることのでへる動物細胞から細胞の芒種をつく
ることができる。
例として、医学的及び薬学的視野から非常に重要な、リ
ンパ球細胞と骨髄腫細胞との合体を挙げることができる
。特定のリンノ（球細胞は生体内の異物に対して、例え
ば血管の中へ注射された異種タンパク質に対して、抗体
を形成する。
ンパ球細胞と骨髄腫細胞との合体を挙げることができる
。特定のリンノ（球細胞は生体内の異物に対して、例え
ば血管の中へ注射された異種タンパク質に対して、抗体
を形成する。
リンパ球細胞を単離してとれを腫瘍細胞例えば骨髄腫細
胞と融合させる場合には、両方の親細胞の特性をもつい
わゆる雑腫細胞（Ｈｙｂｒｉｄｏｒｒ＋ｚｅｌｌｅ）が
生じるチャンスがある。この細胞は抗体をしかも特異的
に、関係のある異物に対する抗体だけを生産する（いわ
ゆるモノクローナル抗体）。
胞と融合させる場合には、両方の親細胞の特性をもつい
わゆる雑腫細胞（Ｈｙｂｒｉｄｏｒｒ＋ｚｅｌｌｅ）が
生じるチャンスがある。この細胞は抗体をしかも特異的
に、関係のある異物に対する抗体だけを生産する（いわ
ゆるモノクローナル抗体）。
この細胞は不死であり、通常の分化した細胞例えばリン
パ球細胞と反対に永久に培養基中で増殖する。
パ球細胞と反対に永久に培養基中で増殖する。
二つの細胞の膜の間の距離がわずかな場合に生じる電気
曲尺ばつ力が特定の薬品例えばポリエチレングリコ−／
ｌ／（ＰＥＧ）または不活化したウィルスを使用すると
消えるということが既に知られている。ウィルスもＰＥ
Ｇも両方の細胞膜を架橋させ、その結果緊密な膜の接触
が生じる。
曲尺ばつ力が特定の薬品例えばポリエチレングリコ−／
ｌ／（ＰＥＧ）または不活化したウィルスを使用すると
消えるということが既に知られている。ウィルスもＰＥ
Ｇも両方の細胞膜を架橋させ、その結果緊密な膜の接触
が生じる。
同時にウィルス及びＰＥＧによって障害（ｓｔ２ｒｕｎ
ｇｅｎ）が膜構造に生じ、それは非生理的多作に調節す
ること例えば高濃度のカルシウムイオンを加えること及
び非常に高いまだは低いｐＨ値を選択することによって
更にひどくなる３、この障害は、膜の接触ゾーンに穴が
生じそしてそれによってリン脂質橋がｌｉ’ｔｔ接δＩ
ＩＩ胞膜の間に形成されるということをひき起こす。こ
のこと（よ、新しい単位が形成されて両方の細胞が合体
する結果になる。
ｇｅｎ）が膜構造に生じ、それは非生理的多作に調節す
ること例えば高濃度のカルシウムイオンを加えること及
び非常に高いまだは低いｐＨ値を選択することによって
更にひどくなる３、この障害は、膜の接触ゾーンに穴が
生じそしてそれによってリン脂質橋がｌｉ’ｔｔ接δＩ
ＩＩ胞膜の間に形成されるということをひき起こす。こ
のこと（よ、新しい単位が形成されて両方の細胞が合体
する結果になる。
しかし、既知の方法を実施する場合には、互に合体され
るべき細胞の数を制御することができない。一方では、
細胞含有溶液の細胞濃度が低過ぎると＃１とんど融合生
成物がイリられない；というのけ細胞が互に接触しない
からである。
るべき細胞の数を制御することができない。一方では、
細胞含有溶液の細胞濃度が低過ぎると＃１とんど融合生
成物がイリられない；というのけ細胞が互に接触しない
からである。
他方では、細胞含有溶液の遠心分離によっても得ること
のできる融合に十分な細胞濃度だと、制御されない状態
で、二、三、四または五重の各細胞から成る生成物が得
られる。
のできる融合に十分な細胞濃度だと、制御されない状態
で、二、三、四または五重の各細胞から成る生成物が得
られる。
特に起源の異なつγ奇つの細胞の合体による雑種細胞の
形成については、前記の既知の方法は非常に不満足であ
る。なぜなら、新式の特性のコンビネーシゴンを示す細
胞の雑種は、前記の既知の方法の実施によっては先ず時
間のかかる選択法を使用して単離されなければならない
からである。完全な植物を再生させることのできる植物
に細胞から細胞の雑種を、まだは（例えば腫瘍及び白血
病に対→−る）モノクローナル抗体を得ることのできる
動物細胞から細胞の雑種を、得るのにはそれぞれほんの
二つの細胞を互に融合させる融合技術が必要である。
形成については、前記の既知の方法は非常に不満足であ
る。なぜなら、新式の特性のコンビネーシゴンを示す細
胞の雑種は、前記の既知の方法の実施によっては先ず時
間のかかる選択法を使用して単離されなければならない
からである。完全な植物を再生させることのできる植物
に細胞から細胞の雑種を、まだは（例えば腫瘍及び白血
病に対→−る）モノクローナル抗体を得ることのできる
動物細胞から細胞の雑種を、得るのにはそれぞれほんの
二つの細胞を互に融合させる融合技術が必要である。
既知の方法の使用のもとて二つのまだは予め決めた数の
Ｍｉ胞の制御融合（ｋｏｎｔｒｏ］、１１ｅｒｔｅＦｕ
ｓｉｏｎ）を可能にする細胞融合方法を提供するのが本
発明の課題である。
Ｍｉ胞の制御融合（ｋｏｎｔｒｏ］、１１ｅｒｔｅＦｕ
ｓｉｏｎ）を可能にする細胞融合方法を提供するのが本
発明の課題である。
との課題は本発明では、細胞を更に、障害発生剤で処理
するために細胞が予定の整列（Ａｕ５ｒｉ ｃｈｔｕｎ
ｇ ）で並列する（ ａｎｅ １ｎａｎｃｌｅ ｒｒｅ
１ｈｅｎ）ように細胞の大きさに応じて５ ｋＨ２な
いし２λ４Ｈ２の周波数及び１０ Ｖ ７ｃｍないし２
［３００Ｖ／ｃｍの強さの、外部の、不均質電場にさ
らすことによって解決される。
するために細胞が予定の整列（Ａｕ５ｒｉ ｃｈｔｕｎ
ｇ ）で並列する（ ａｎｅ １ｎａｎｃｌｅ ｒｒｅ
１ｈｅｎ）ように細胞の大きさに応じて５ ｋＨ２な
いし２λ４Ｈ２の周波数及び１０ Ｖ ７ｃｍないし２
［３００Ｖ／ｃｍの強さの、外部の、不均質電場にさ
らすことによって解決される。
交番電場（ｅｌｅｋｔｒｉθｃｈｅｎ Ｗｅｃｈｓｅｌ
ｆｅｌｄ ）での細胞の整列はＢｉｏｃｈｉｍｉｃａ
ａｔ Ｂｉｏｐｈｙｅｉｃａ Ａｃｔａ。
ｆｅｌｄ ）での細胞の整列はＢｉｏｃｈｉｍｉｃａ
ａｔ Ｂｉｏｐｈｙｅｉｃａ Ａｃｔａ。
６９４ （１９Ｆ３２）、 ２２７〜２７７’（Ｅｌｅ
ｋｔｒｉｃ Ｆｉｅｌｄ −ＭｅｄｉＦＬｔｅｄ Ｆｕ
ｓｉｏｎ Ａｎｄ Ｒｅ１ａｔｅｃｌ Ｅｌｅｋｔｒｉ
ｃａｌＰｈｅｎｏｍｅｎａ、 Ｕ、Ｚｉｍｍｅｒｍａｎ
ｎ）から既に知られている。この既知の処理−これの経
過は顕微鏡で観察することができる□によって、少なく
とも二つの細胞の間の胆液’ｌ’ｌｌｌ！ （Ｍｏｍｂ
ｒａｎｋｏｎｔａｋｔ）が、交番のわずかに不均質の場
（Ｆｅ１ｄ）の適用（Ａｎｌｅｇｅｎ ）によって起こ
される。この場合細胞は、非導電性の壁でつくられた空
間が細胞含有懸濁液の収容のために用意されている部屋
の中に入っている。この部屋の空間へ（例えば白金線か
ら成る）少なくとも二本の電極が、細胞が電極間に形成
された交番電場にさらされている電極間に局限される領
域がつくられるようにはみ出ている。細胞が電場で移動
中に互に接近すると、電場によって、細胞の分極プロセ
スに制約されて、相互に引く複数の双極子（Ｄｉｐｏｘ
ｅ）が生じる（いわゆる誘電泳動）。
ｋｔｒｉｃ Ｆｉｅｌｄ −ＭｅｄｉＦＬｔｅｄ Ｆｕ
ｓｉｏｎ Ａｎｄ Ｒｅ１ａｔｅｃｌ Ｅｌｅｋｔｒｉ
ｃａｌＰｈｅｎｏｍｅｎａ、 Ｕ、Ｚｉｍｍｅｒｍａｎ
ｎ）から既に知られている。この既知の処理−これの経
過は顕微鏡で観察することができる□によって、少なく
とも二つの細胞の間の胆液’ｌ’ｌｌｌ！ （Ｍｏｍｂ
ｒａｎｋｏｎｔａｋｔ）が、交番のわずかに不均質の場
（Ｆｅ１ｄ）の適用（Ａｎｌｅｇｅｎ ）によって起こ
される。この場合細胞は、非導電性の壁でつくられた空
間が細胞含有懸濁液の収容のために用意されている部屋
の中に入っている。この部屋の空間へ（例えば白金線か
ら成る）少なくとも二本の電極が、細胞が電極間に形成
された交番電場にさらされている電極間に局限される領
域がつくられるようにはみ出ている。細胞が電場で移動
中に互に接近すると、電場によって、細胞の分極プロセ
スに制約されて、相互に引く複数の双極子（Ｄｉｐｏｘ
ｅ）が生じる（いわゆる誘電泳動）。
本発明による方法では単に二つのまたは予定数の細胞の
制御融合が化学薬品または不活化ウィルスの使用によっ
て可能にされるだけではない。それどころか更に、本発
明による方法の使用によって、今までに知られている方
法を障害発生剤の配量に関してもつと正確に調査するか
才たは最適にする可能性が与えられる。
制御融合が化学薬品または不活化ウィルスの使用によっ
て可能にされるだけではない。それどころか更に、本発
明による方法の使用によって、今までに知られている方
法を障害発生剤の配量に関してもつと正確に調査するか
才たは最適にする可能性が与えられる。
細胞を細胞の整列のために約２ないし５分間交番電場に
さらすのが合目的的である。この時間の長さは一般に、
細胞の連なシ（ＺｅｌｌθｎｒθｉｈｅまだはＺθ］１
θｎｒｅｉｈｅｎ ）をつくるのに充分である。
さらすのが合目的的である。この時間の長さは一般に、
細胞の連なシ（ＺｅｌｌθｎｒθｉｈｅまだはＺθ］１
θｎｒｅｉｈｅｎ ）をつくるのに充分である。
細胞含有溶液のそしてそれと共に細胞の望ましくない加
熱を避けるために電場を合目的的に細胞の連なりの形成
後に遮断する。次に、細胞の機能が現われるまで細胞の
連なりを、交番電場を時々数秒間再挿入することによっ
て維持すれば充分である。
熱を避けるために電場を合目的的に細胞の連なりの形成
後に遮断する。次に、細胞の機能が現われるまで細胞の
連なりを、交番電場を時々数秒間再挿入することによっ
て維持すれば充分である。
障害発生剤としてポリエチレングリコールまたはセンダ
イウィルスを使用する場合には、本発明による方法の特
に好ましい実施態様では先ず該障害発生剤を、細胞な懸
濁液の形で含有する溶液に、予め考慮した配景−Ｃ加え
、次に細胞の連なりを電場によってつくり、次いでカル
シウムイオンを細胞の膜に障害を起こさせるために加え
る。なお、センダイウィルスを使用する場合には温度を
３７℃に上げる。この方法では該障害発生剤の作用は、
細胞の整列後に初めて生じる。
イウィルスを使用する場合には、本発明による方法の特
に好ましい実施態様では先ず該障害発生剤を、細胞な懸
濁液の形で含有する溶液に、予め考慮した配景−Ｃ加え
、次に細胞の連なりを電場によってつくり、次いでカル
シウムイオンを細胞の膜に障害を起こさせるために加え
る。なお、センダイウィルスを使用する場合には温度を
３７℃に上げる。この方法では該障害発生剤の作用は、
細胞の整列後に初めて生じる。
本発明によ不方法を使用する場合には、生じた細胞の連
なシの中の細胞の融合をたやすく顕微鏡で観察すること
ができるので、種々の配量の障害発生剤をテストするこ
と及び特定の細胞の種類のために最適にすることが可能
である。
なシの中の細胞の融合をたやすく顕微鏡で観察すること
ができるので、種々の配量の障害発生剤をテストするこ
と及び特定の細胞の種類のために最適にすることが可能
である。
実施例１
赤白血病細胞（いわゆるフレンド細ｌ包）を４１．５％
のポリエチレングリコール（ｐＥＧ； Ｍｗ６ｏｎｏ）
と１５％のジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）との、保
温した等張の０．３モルのマンニット溶液に加えた。
のポリエチレングリコール（ｐＥＧ； Ｍｗ６ｏｎｏ）
と１５％のジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）との、保
温した等張の０．３モルのマンニット溶液に加えた。
この懸濁液を電極間隔が３００μｍである融合室へ入れ
た。次にｘｏｏＶ／ｃ−ｍの電場強度（Ｆｅ１ｄｓｔａ
、ｒｋｅ ）と２１４Ｈｚの周波数とを有する交番電場
（ＷθＣｈＥｌｅｌｆｅｌａ）を細胞の連なシが生じる
廿で約３分間適用した。その際所定の細胞の野洞濃度（
約１ ｏ ’ ／７． ）で優先的に２または３個の細
胞から成る鎖が生じた。細胞の連なりが生じた後に交番
電界（ｅｌｅｋｔｒｉｓｃｈｅ Ｗｅｃｈｅｅｌｆｅｌ
、ａ）を遮断し、融合室に入っている細胞含有溶液に注
意深く、１０ｍＭのＣａＣ７１！２を０．３モルのマン
ニット溶液中に含有する溶液を加えた。カルシウムイオ
ンの添加によって細胞の融合が鎖の内部でＰＩ！ｌ！Ｇ
によってひき起こされた。
た。次にｘｏｏＶ／ｃ−ｍの電場強度（Ｆｅ１ｄｓｔａ
、ｒｋｅ ）と２１４Ｈｚの周波数とを有する交番電場
（ＷθＣｈＥｌｅｌｆｅｌａ）を細胞の連なシが生じる
廿で約３分間適用した。その際所定の細胞の野洞濃度（
約１ ｏ ’ ／７． ）で優先的に２または３個の細
胞から成る鎖が生じた。細胞の連なりが生じた後に交番
電界（ｅｌｅｋｔｒｉｓｃｈｅ Ｗｅｃｈｅｅｌｆｅｌ
、ａ）を遮断し、融合室に入っている細胞含有溶液に注
意深く、１０ｍＭのＣａＣ７１！２を０．３モルのマン
ニット溶液中に含有する溶液を加えた。カルシウムイオ
ンの添加によって細胞の融合が鎖の内部でＰＩ！ｌ！Ｇ
によってひき起こされた。
実施例２
￥雄側１に記載したように赤白血病細胞を融合室で反番
電場によって細胞の連なりに整列させた。しかし、細胞
含有液中にはＰＢ２Ｇが含まれておらずに約２ Ｘ １
０５ＨＡＵ ／ＴｎＱ、 （赤面アＲ凝集単位）の濃度
の不活化したセンダイウィルス（Ｓｅｎｄａｉ−Ｖｉｒ
ｅｎ ）が含まれていた。細胞の連なりが生じた後に交
番電界を遮断し、二倍量の一約４ｍ１４／ｌのＣａＣｅ
２を等張Ｎａ ＯＡ溶液のリン酸塩緩衝液中に含有する
一溶液に加えた。それに続＜３７℃への温度上昇が融合
を起こさせた。
電場によって細胞の連なりに整列させた。しかし、細胞
含有液中にはＰＢ２Ｇが含まれておらずに約２ Ｘ １
０５ＨＡＵ ／ＴｎＱ、 （赤面アＲ凝集単位）の濃度
の不活化したセンダイウィルス（Ｓｅｎｄａｉ−Ｖｉｒ
ｅｎ ）が含まれていた。細胞の連なりが生じた後に交
番電界を遮断し、二倍量の一約４ｍ１４／ｌのＣａＣｅ
２を等張Ｎａ ＯＡ溶液のリン酸塩緩衝液中に含有する
一溶液に加えた。それに続＜３７℃への温度上昇が融合
を起こさせた。
代理人江崎光好
代理人江崎光史
第１頁の続き
０発 明 者 クリスチアン・マチュケドイソ連邦共和
国アルスドルフ ・ウィルトストラ−セロ３
国アルスドルフ ・ウィルトストラ−セロ３
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 １、 互に隣接し合った複数の細胞の間の膜橋の形成と
該細胞の融合とに通じる膜構造の障害を発生させるため
に＃Ｉ胞を化学薬品例えばポリエチレングリコール及び
カルシウムイオンまだは不活化したウィルス例えばセン
ダイウィルスで処理する細胞の融合方法にして、細胞を
前記障害発生剤にえる処理に追加して該細胞が予定の腕
側で互に並ぶように細胞の大きさに応じて５ ＫＨ２な
いし２ＭＨ２の周波数及び１０Ｖ／ｃｒｎないし２００
０ Ｖ／ｃｍの強さの、外部の、不均質電場にさらすこ
とを特徴とする細胞の融合方法。 ２、細胞を細胞の連なりが生じるように約２ないし５分
間交番電場にさらす、特許請求の範囲第１項記載の方法
。 ３ 細胞の連なりの形成後に交番電場が遮断されそして
細胞の連なりの維持のためにだけ数秒間ずつ再挿入され
る、特許請求の範囲第１項または第２項記載の方法。 ４、障害発生剤としてポリエチレングリコールを細胞含
有溶液に加え、次に細胞の連なりを交１！ｆ電場で形成
させそして次にカルシウムイオンを、細胞の膜に障害が
発生するように加える特許請求の範囲第１項から第３項
までのいずれかに記載の方法・ ５、障害発生剤として不活化したセンダイウィルスを加
え、次に細胞の連なりを交番電場で形成させそして次に
カルシウムイオンヲ、細胞の脆に障害が発生するように
加える特許請求の範囲第１項から第３項までのいずれか
に記載の方法。
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| DE33212260 | 1983-06-11 | ||
| DE19833321226 DE3321226C2 (de) | 1983-06-11 | 1983-06-11 | Verfahren zur Fusion von Zellen |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS609490A true JPS609490A (ja) | 1985-01-18 |
Family
ID=6201306
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP59116778A Pending JPS609490A (ja) | 1983-06-11 | 1984-06-08 | 細胞の融合方法 |
Country Status (3)
| Country | Link |
|---|---|
| EP (1) | EP0128567A3 (ja) |
| JP (1) | JPS609490A (ja) |
| DE (1) | DE3321226C2 (ja) |
Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2007295922A (ja) * | 2006-04-03 | 2007-11-15 | Tosoh Corp | 細胞融合装置及びそれを用いた細胞融合方法 |
| JP2008194029A (ja) * | 2007-01-19 | 2008-08-28 | Tosoh Corp | 細胞融合装置及びそれを用いた細胞融合方法 |
| JP2008259493A (ja) * | 2007-03-19 | 2008-10-30 | Tosoh Corp | 細胞融合装置およびそれを用いた細胞融合方法 |
Families Citing this family (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| DE3507398A1 (de) * | 1985-03-02 | 1986-09-04 | Bayer Ag, 5090 Leverkusen | Methode zur fusionierung biologischer zellen mit hilfe elektrischer impulse |
| EP0386086B1 (en) * | 1987-10-09 | 1996-05-29 | Baylor College Of Medicine | Method for cell poration and cell fusion using radiofrequency electrical pulses |
| US4970154A (en) * | 1987-10-09 | 1990-11-13 | Baylor College Of Medicine | Method for inserting foreign genes into cells using pulsed radiofrequency |
| WO2021054448A1 (ja) * | 2019-09-20 | 2021-03-25 | 美智子 甲賀 | ペプチド並びにそれを含む細胞融合剤及びがん治療用医薬組成物 |
-
1983
- 1983-06-11 DE DE19833321226 patent/DE3321226C2/de not_active Expired
-
1984
- 1984-06-08 JP JP59116778A patent/JPS609490A/ja active Pending
- 1984-06-08 EP EP84106606A patent/EP0128567A3/de not_active Withdrawn
Non-Patent Citations (2)
| Title |
|---|
| BIOCHIMICA ET BIOPHYSICA ACTA=1982 * |
| J.MEMBRANE BIOL=1982 * |
Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2007295922A (ja) * | 2006-04-03 | 2007-11-15 | Tosoh Corp | 細胞融合装置及びそれを用いた細胞融合方法 |
| JP2008194029A (ja) * | 2007-01-19 | 2008-08-28 | Tosoh Corp | 細胞融合装置及びそれを用いた細胞融合方法 |
| JP2008259493A (ja) * | 2007-03-19 | 2008-10-30 | Tosoh Corp | 細胞融合装置およびそれを用いた細胞融合方法 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| EP0128567A3 (de) | 1986-07-23 |
| EP0128567A2 (de) | 1984-12-19 |
| DE3321226C2 (de) | 1985-05-09 |
| DE3321226A1 (de) | 1984-12-13 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Ris | THE ANNUAL INVITATION LECTURE ULTRASTRUCTURE AND MOLECULAR ORGANIZATION OF GENETIC SYSTEMS | |
| Jollès et al. | High temperature crystallization of lysozyme: an example of phase transition | |
| Adolph et al. | Isolation of a protein scaffold from mitotic HeLa cell chromosomes | |
| DE69232560D1 (de) | Verfahren zur isolierung und fusion von zellen | |
| Sherbet et al. | Characterisation of ionogenic groups and estimation of the net negative electric charge on the surface of cells using natural pH gradients | |
| JPS609490A (ja) | 細胞の融合方法 | |
| Gopalakrishnan et al. | Epigenetic activation of phenylalanine hydroxylase in mouse erythroleukemia cells by the cytoplast of rat hepatoma cells. | |
| Kalish et al. | Membrane isolation on polylysine-coated glass beads. Asymmetry of bound membrane | |
| Stafford III | Effect of various anions on the stability of the coiled coil of skeletal muscle myosin | |
| Chernomordik et al. | Evidence that the spectrin network and a nonosmotic force control the fusion product morphology in electrofused erythrocyte ghosts | |
| Wivel et al. | Structural organization of murine intracisternal A particles | |
| Millner et al. | Investigation of the spatial relationships between photosystem 2 polypeptides by reversible crosslinking and diagonal electrophoresis | |
| Zimmermann et al. | Electro‐Fusion of Cells: Principles and Potential for the Future | |
| Tsong | [25] Electric modification of membrane permeability for drug loading into living cells | |
| Freedman | Cross-linking reagents and membrane organization | |
| Durham | The cause of irreversible polymerisation of tobacco mosaic virus protein | |
| Benga et al. | Water exchange through erythrocyte membranes: biochemical and nuclear magnetic resonance studies re-evaluating the effects of sulfhydryl reagents and of proteolytic enzymes on human membranes | |
| Majumdar et al. | Fusion of human erythrocytes induced by uranyl acetate and rare earth metals | |
| BENJAMIN | Selective in vitro Methylation of Rat Chromatin Associated Historie after Partial Hepatectomy | |
| EP0278487A3 (de) | Verfahren zur Inaktivierung hüllhaltiger Viren in mittels einer Zelle in vitro hergestellten Protein-Präparationen | |
| Cortas et al. | Anomalous mobilities of Na, K-ATPase α subunit isoforms in SDS-PAGE: identification by N-terminal sequencing | |
| Strous et al. | Synthesis of lens protein in vitro The lens cell-free system | |
| Wood | Proteins that participate in nucleotide excision repair of DNA in mammalian cells | |
| Hill et al. | Proteins of the newt germinal vesicle nucleus | |
| Kuehl | The state of deoxyribonucleic acid in the cell nucleus |