JPS6095349A - 多層分析要素 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 本発明は、多層分析要素に関するものである。

さらに詳しくは、本発明は、特に微量成分も含めて体液
中の成分の分析、特に定量分析に適した乾式多層分析要
素に関するものである。

［従来技術］ 体液などの液体試料中に含まれている成分の分析方法と
しては、分析操作の簡略化を目的として開発された乾式
法が多く利用されるようになってきている。この乾式法
に利用される試験用具の代表的な例としては、分析対象
の成分（アナライト）を含有する液体試料を展開するた
めの展開層、アナライトとの接触により直接的または間
接的に何らかの検知可能な反応を示す試薬を含有する少
なくとも一つの試薬層、そして光透過性支持体とを基本
構成として含むシート、フィルム、ストリップ、テープ
などの形態にある乾式の多層分析要素（多層分析材料あ
るいは多層分析素子ともいう）が知られている。これら
の多層分析要素を用いる分析操作は一般に、アナライト
を含有する液体試料を多層分析要素の展開層（液体試料
展開層）に点着した後、必要によりその分析要素をイン
クベーションし、次いでそこで発生した発色もしくは変
色のような検知可能な反応を分光測定装置などを用いて
検知測定すること番とより実施される。

多層分析要素中には、アナライトと反応する試、薬、ま
た場合によっては更に、アナライトの反応により生成し
た生成物と反応する試薬などが含有されている。これら
の試薬としては、それぞれの分析の目的に応じて適当な
ものが選択されるが、用いられる試薬のなかには、光、
熱、環境ｐＨなど環境条件の影響を受けて変質しやすい
ものかのる。また、反応活性を示すために特定の範囲の
ｐＨ条件を要求するものなど、その環境のｐＨ条件を考
慮する必要がある試薬も少なくない。

多層分析要素におけるアナライトの検出方式としては、
予め分析要素内に呈色性試薬を含有させておき、アナラ
イトもしくはアナライトと他の試薬との反応生成物と該
呈色性試薬とを反応させて発色もしくは変色を生じさせ
るようにした検出系が広く利用されているが、このよう
な検出系の色素前駆体のひとつとして、ジアゾニウム塩
が広く用いられ、ている。このジアゾニウム塩は反応が
鋭敏で、かつ入手が容易であるところから各種のアナラ
イトの分析のための呈色性試薬として用いられているが
、光の影響を受けて分解しやすいとの欠点がある。ジア
ゾニウム塩が光により容易に分解することは従来より知
られており、その対策として、ジアゾニウム塩が低い環
境ｐＨ５すなわち酸性側にて比較的安定に保存されると
ころから、ジアゾニウム塩を酸性物質と共存させる方法
が知られている。なかでもジアゾニウム塩を層状に形成
させる際にバインダーとして働き、かつ酸性を示す重合
体であるカルボン酸系ポリマーをジアゾニウム塩に共存
させる方法はジアゾニウム塩を含有する分析要素の製造
において良く利用されている。しかしながら、カルボン
酸系ポリマーによるジアゾニウム塩の安定化能力は必ず
しも満足できるものとはいえない。

［発明の目的］ 本発明者は、ジアゾニウム塩を分析試薬もしくは分析試
薬の一成分として用いる多層分析要素中におけるジアゾ
ニウム塩の安定化に有効な材料をめて研究を行なった結
果、ジアゾニウム塩を、特定の硬化スルホン酸樹脂との
接触下に置くことにより、高い安定性をもって保存させ
ることかでＳることを見い出し本発明に到達した。

［発明の構成］ 本発明は、ジアゾニウム塩を含有する試薬層お−よび光
透過性支持体層をこの順に積層してなる基本構成を有す
る、液体試料中のアナライトを分析するための多層分析
要素であって、 該試薬層に、特定の硬化スルホン酸樹脂が含まれている
ことを特徴とする多層分析要素を提供するものである。

本発明において用いられる硬化スルホン酸樹脂は、下記
の二種類に分けることができる。

（■）２−アクリルアミド−２−メチルプロパンスルホ
ン酸および／または２−メタクリル−２−メチルプロパ
ンスルホン酸から誘導される基を構成繰り返し単位とし
て１０モル％以上含む付加重合体がエポキシ化合物によ
り架橋されてなる硬化スルホン酸樹脂、および （ｎ）２−アクリルアミド−２−メチルプロパンスルホ
ン酸、２−メタクリル−２−メチルプロパンスルホン酸
およびスチレンスルホン酸からなる群より選ばれるスル
ホン酸基含有モノマーから誘導される基、および水酸基
含有子ツマ−から誘導される基を、構成繰り返し単位と
してそれぞれｉｏモル％以上含む付加重合体が硬化剤に
より架橋されてなる硬化スルホン酸樹脂。

なお、本発明の多層分析要素のジアゾニウム塩を含有す
る試薬層の上には液体試料展開層が積層されていること
が好ましい。また、液体試料展開層とジアゾニウム塩を
含有する試薬層とからなる複層構成は、ジアゾニウム塩
を含有する多孔性試薬層をもって代えることもできる。

すなわち、ジアゾニウム塩含有試薬層を多孔性とするこ
とにより、該試薬層に液体試料展開層の機能をも持たせ
ることができる。あるいはジアゾニウム塩含有試薬層を
、ビリルビン、もしくはアミラーゼのような酵素などの
高分子のアナライトがその試薬層に浸入することができ
るような程度の多孔性とすることもできる。

本発明において用いる硬化スルホン酸樹脂は、多層分析
要素中においてジアゾニウム塩の保存に好ましい酸性の
環境ｐＨを付与し、かつジアゾニウム塩のバインダーと
しても有効に作用するため、たとえばビリルビンの分析
などを目的とした検出試薬としてジアゾニウム塩を利用
する多層分析要素においてジアゾニウム塩を含有する試
薬層の形成に有効に用いることができる。

また」二記硬化スルホン酸樹脂は、アミラーゼもしくは
アミラーゼの基質などの酵素もしくは酵素の基質をアナ
ライトとして多層分析要素内で酵素反応を進行させたの
ち、その反応生成物（たとえばジアゾニウム塩のカプラ
ーを結合した小糖類またはグルコース）の生成量を、ジ
アゾニウム塩とその反応生成物との反応によって形成さ
れる色素の発色濃度を測定することにより定量し、アナ
ライトの分析を行なうことからなる酵素もしくは酵素の
基質の分析を目的とした多層分析要素においても、その
ジアゾニウム塩の安定な保存の目的に有効に利用するこ
とができる。

なお、上記のような酵素もしくは酵素の基質の分析を目
的とした多層分析要素において試薬層に含有させたジア
ゾニウム塩の安定化をはかるために上記の硬化スルホン
酸樹脂を用いる場合には、該試薬層と互いに液体接触す
ることにより共同して該ジアゾニウム塩の反応時におけ
る環境ＰＨを調整することのできる耐拡散性塩基含有層
を付設することもできる。これは、ジアゾニウム塩が安
定に保存されるｐＨ環境（酸性環境）と、目的の酵素反
応が円滑に進行するｐＨ環境とが相違する場合において
特に重要である。

すなわち、たとえばアミラーゼが関与する酵素反応は、
中性もしくは塩基性の環境下で円滑に進行することが知
られているが、この環境条件はジアゾニウムの安定な保
存に適したＰＨ条件と相反している。このような場合に
おいて、上記の硬化スルホン酸樹脂を含有させてジアゾ
ニウム塩を酸性環境下に置くように形成した試薬層に、
該試薬層と互いに液体接触することにより共同して該ジ
アゾニウム塩の反応時における環境ｐＨを調整すること
のできる耐拡散性塩基含有層を付設することにより、ア
ナライトを含有する液体試料を多層分析要素内に導入す
る前においては、該試薬層のｐＨ環境は酸性に維持され
、一方、液体試料が多層分析要素内に導入された場合に
は、上記耐拡散性塩基含有層が上記試薬層と該液体を介
して接触するために該試薬層のｐＨ環境が緩衝されて中
性側あるいは塩基性側に移行する。すなわち、硬化スル
ホン酸樹脂を含有させて酸性環境としたジアゾニウム塩
含有試薬層と耐拡散性塩基含有層との組合せを利用する
ことによりジアゾニウム塩を安定に保存し、かつ所望の
酵素反応の円滑な進行を可能にする多層分析要素を得る
ことができる。また、本発明において用いる硬化スルホ
ン酸樹脂は、上記の耐拡散性塩基含有層と組合せた場合
などにおいて、安定なｐＨ環境を容易に提供できるとの
利点もあり、多層分析要素のへインダー成分もしくはｐ
Ｈｗ４節成分として非常に有効である。

次に本発明の詳細な説明する。

本発明の多層分析要素は、一層もしくは二層以上の試薬
層、そして光透過性で一般に液体不透過性の支持体が順
に積層してなる基本構成を有するものである。また、前
述のように試薬層の上には液体試料展開層を積層するの
が望ましい。

上記の基本構成において、液体試料展開層および光透過
性支持体の材料とその構成は既に公知である。本発明に
おいて利用する液体試料展開層および光透過性支持体の
材料および構成は公知技術に従って任意に選択すること
ができる。

本発明の多層分析要素の試薬層には、アナライトの直接
的もしくは間接的な検出試薬として機能するジアゾニウ
ム塩、そして含有硬化スルホン酸樹脂が含まれている。

本発明の試薬層は多孔性試薬層あるいは非多孔性の試薬
層のいずれの形態であってもよい。試薬層を多孔性とす
る場合には、たとえば、液体試料展開層の材料として知
られている織物あるいは不織布などを基体として、これ
にジアゾニウム塩と硬化スルホン酸樹脂、そして所望に
より他の試薬を含有させてジアゾニウム含有の多孔性試
薬層とすることができる。また、微粒子状の有機物質も
しくは無機物質を硬化スルホン酸樹脂で結合した形態の
多孔性試薬層にジアゾニウム塩が含有されている態様で
あってもよい。

なお、本発明の多層分析要素の試薬層として好ましいの
は１．ジアゾニウム塩を含有する多孔性試薬層の形態に
あるものである。

本発明の多層分析要素の試薬層に検出試薬として含まれ
るジアゾニウム塩については特に制限はなく、各種のア
ナライトの直接的もしくは間接的な検出試薬として分析
要素に含ませて使用することのできるものである限り、
いずれのものでもよい。そのようなジアゾニウム塩の代
表例としては、２，５−ジメトキシベンゼンジアゾニウ
ム、ｐ−（ジメチルアミノ）ベンゼンジアゾニウム、ｐ
−（シクロへキシルアミノ）ベンゼンジアゾニウム、２
．５−ジメトキシ−４−モルホリノベンゼンジアゾニウ
ム、２−メトキシ−５−ドデシルオキシ力ルポニルベン
セ゛ンジアゾニウム、ｐ−スルホベンゼンジアゾニウム
、２−メトキシ−５−［β−（２，４−ジ−ｔ−アミル
フェノキシ）エトキシカルボニル］ベンゼンジアゾニウ
ムなどジアゾニウムの塩化物、それらジアゾニウムのテ
トラフルオロポレート、ヘキサフルオロポレート、ヘキ
サフルオロアルミネート、トリクロロジンケート、およ
びＰ−１ルエンスルフオネートなどを挙げることができ
る。なおここに例示したジアゾニウム塩、およびその他
の使用可能なジアゾニウム塩についてはｌｒＬｉｇｈｔ
　５ｅｎｓｉｔｉｖｅ　Ｓｙｓｔｅｍｓｊ　（Ｊａｒｏ
ｍｉｒ　Ｋｏｓａｒ著、Ｊｏｈｎ　Ｗｉｌｅｙ　＆　５
ｏｎｓ、Ｉｎｃ、、１８６５年発行）　２０１−２１４
頁に詳しい記載がある。

また、本発明におけるジアゾニウム塩は、澱粉などのよ
うな高分子物質、あるいは他の化合物に結合した状態に
あってもよい。

本発明の試薬層に含まれる硬化スルホン酸樹脂は、前述
のように（Ｉ）と（Ｉｆ）に大別することができる。（
Ｉ）は２−アクリルアミド−２−メチルプロパンスルホ
ン酸および／または２−メタクリル−２−メチルプロパ
ンスルホン酸から誘導される基を構成繰り返し単位とし
て１０モル５以上（好ましくは８０モル％以上、さらに
好ましくは実質的に１００モル％）含む付加重合体がエ
ポキシ化合物により架橋されてなる硬化スルホン酸−メ
チルプロパンスルホン酸、２−メタクリ、ルー２−メチ
ルプロパンスルホン酸およびスチレンスルホン酸からな
る群より選ばれるスルホン酸基含有上ツマ−から誘導さ
れる基、および水酸基含有モノマーから誘導される基を
構成繰り返し単位としてそれぞれ１０モル％以上含む（
好ましくは、前者が２０モル％以上、後者が３０モル％
以上であり、さらに好ましくは、前者が２０〜７０モル
％、後者が８０〜３０モル％である）付加重合体が硬化
剤により架橋されてなる硬化スルホン酸樹脂である。

上記の（ｎ）の硬化スルホン酸樹脂の製造に用いられる
水酸基含有モノマーの例としては、ヒドロキシエチルア
クリレート、ヒドロキシメチルメタクリレ−１・、ヒド
ロキシプロピルアクリレート、ヒドロキシプロピルメタ
クリレート、ヒドロキシエチルアクリルアミド、ヒドロ
キシエチルメタクリルアミド、ビニルアルコール、メタ
リルアルコール、ヒドロキシスチレン、ビニルベンジル
アルコール、ヒドロキシエチルビニルエーテル、ヒドロ
キシメチルアクリルアミドおよびヒドロキシメチルメタ
クリルアミドなどを挙げることができ名。

また、上記の硬化スルホン酸樹脂の製造に用いられる付
加重合体は他のモノマーとの共重合体であってもよい。

そのような七ツマ−の例としてＣ±、スチレン、酢酸ビ
ニル、アクリロニド−ノル、エチレン、プロピレンン、
インブチレン、ブタジェン、イソプレン、メチルビニル
エーテル、エチルビニルエーテル、アクリル酸、アクＩ
Ｊ　）し酸エステル、メタクリル酸、メタクリル酸エス
テル、アクリルアミド、メタクリルアミド、Ｎ−ヒ′ニ
ルピロリドン、塩化ビニル等があげられる。

これまでに述べた重合体は公知の方法により製造するこ
とができる。

本発明の硬化スルホン酸樹脂の製造のため番ご用いられ
る硬化剤は（Ｉ）の硬化スフレホン酸樹脂の場合はエポ
キシ樹脂であり、また（Ｕ）の硬化スルホン酸樹脂の場
合は、エポキシ化合物、ニイ曲以上のイソシアネート化
合物およびホルムアルデヒドエポキシ化合物の具体例に
ついては、「エポキシ樹脂ｊプラスチック材料講座ｌ、
橋本邦之編著、（日刊工業新聞社１８Ｂ８年発行）にＮ
羊しく記載されており、たとえば、ビスフェノールＡ型
、／＼ロゲン化ヒビスフエノール型レゾルシン型、ビス
フェノールＦ型、テトラヒドロキシフェニルメタン型、
ノボランク型、ポリグリコール型、グリセリントリエー
テル型等のエポキシ化合物を使用することができる。

硬化剤として用いられる二価以上のインシアネート化合
物の例としては、トリレンジイソシアネート、ジフェニ
ルメタンジイソシアネート、キシリレンジイソシアネー
ト、およびヘキサメチレンジイソシアネートを挙げるこ
とができる。

硬化剤として用いられるホルムアルデヒド誘導体の例と
しては、メチロール尿素、トリメチロールメラミン、お
よびジイソプロピルホルマールを挙げることができる。

硬化剤の添加量は、硬化スルホン酸樹脂の用途および所
望の硬化度にあわせて変動させる力く、一般には、硬化
性スルホン酸樹脂に対して１．２５重量％以上、好まし
くは５〜５０重量％の範囲力）ら選択される。

本発明で用いられる硬化スルホン酸樹脂は、硬化性スル
ホン酸樹脂（硬化前の伺加重合体）と硬化剤とを接触さ
せながら加熱することにより製造することができる。そ
の際の加熱温度は樹脂の組成および硬化剤の種類などに
より異なるが、一般には２０〜１２０°Ｃの温度範囲、
好ましくは３０〜１００°Ｃの温度範囲から選択される
。

前述のように本発明の硬化スルホン酸樹脂は、その製造
時に用いる硬化剤の添加量を調節することにより、所望
の硬化度の硬化スルホン酸樹脂として得ることができる
。

なお、本発明の試薬層に含まれるスルホン酸樹脂は、一
般に試薬層のバインダーとして機能することができるた
め、本発明の多層分析要素の試薬層の最も単純な構成と
しては、ジアゾニウム塩がスルホン酸基含有硬化スルホ
ン酸樹脂中に実質的に均一に分散された構成がある。ま
た、他の態様としてはバインダーとして硬化スルホン酸
樹脂とともに他の樹脂、たとえば、カルボン酸系ポリマ
ーを併用する態様があり、また、ジアゾニウム塩以外の
試薬が共存していてもよい。

本発明の多層分析要素には、前記の液体試料展開層、試
薬層および光透過性支持体以外にも、所望により、光反
射層、光遮蔽層、拡散防止層、試薬層と間に設けられる
接着性付与層などのような従来の多層分析要素において
知られている各種の層を設けることができる。

たとえば、多層分析要素をアミラーゼなどの酵素もしく
は基質の分析に利用する場合には、基質含有層もしくは
酵素含有層などを試薬層に併設することもできる。なお
、このような基質含有層もしくは酵素含有層を設ける場
合には、それらの層もしくは前記試薬層に好ましくは隣
接する位置に併設する耐拡散性塩基含有層をも設けるこ
とが好ましい。この耐拡散性塩基含有層は、殻前記のス
ルホン酸基含有硬化スルホン酸樹脂とジアゾニウム塩と
を含む試薬層に、少なくとも該試薬層と互いに液体接触
することにより共同して該ジアゾニウム塩の反応時にお
ける環境ｐＨを調整することのできるような関係にて付
設することが好ましい。

上記の耐拡散性塩基含有層に含有される耐拡散性塩基は
塩基性ポリマーであることが好ましく、そのような塩基
性ポリマーの例としては、２−ビニルピリジン、４−ビ
ニルピリジン、Ｎ−ビニルイミダゾール、ｌ−ビニル−
３−アルキル−２゜３−ジヒドロイミダゾール（すなわ
ちｌ−ビニル−３−アルキル−４−イミダシリン）［好
ましくは、ｌ−ビニル−３−エチル−２，３−ジヒドロ
イミダゾール、ｌ−ビニル−３−メチル−２，３−ジヒ
ドロイミダゾール、ｌ−ビニル−３−ベンジル−２，３
−ジヒドロイミタゾール等］、２−ビニル−１−アルキ
ルイミダゾール［好ましくは２−ビニル−１−メチルイ
ミダゾール、２−ビニル−１−エチルイミダゾール、２
−ビニル−１−ベンジルイミダゾール等］　（ジアルキ
ルアミノ）アルキルアクリレート［好ましくは、β−（
ジメチルアミノ）メチルアクリレート、β−（ジメチル
アミノ）エチルアクリレート、β−（ジエチル−アミノ
）エチルアクリレート、β−モルホリノエチルアクリレ
ート、γ−（ジメチルアミノ）プロピルアクリレート等
］、（ジアルキルアミノ）アルキルメタクリレート　［
好ましくは、β−（ジメチルアミノ）メチルメタクリレ
ート、β−（ジメチルアミノ）エチルメタクリレート、
β−（ジエチルアミノ）エチルメタクリレート、β−モ
ルホリノエチルメタクリレート、γ−（ジメチルアミノ
）プロピルメタクリレート等］、Ｎ−［（ジアルキルア
ミノ）アルキルコアクリルアミド［好ましくは、Ｎ−し
くジメチルアミノ）プロピルコアクリルアミド等］、お
よびＮ−［（ジアルキルアミノ）アルキル］メタクリル
アミド［好ましくは、Ｎ−［（ジメチルアミノ）プロピ
ル］メタクリルアミド等コからなる群より選ばれる一種
以上の不飽和結合を有する千ツマ−の重合体、もしくは
上記のモノマーと他の不飽和結合を有する千ツマ−との
共重合体である。なお、上記の塩基性ポリマーに関する
記載にある「他の不飽和結合を有するモノマー」の例と
しては、スチレン、ジビニルベンゼン、アクリルアミド
、Ｎ−置換アクリルアミド、メタクリルアミド、Ｎ−置
換メタクリルアミド、アクリル酸エステル、メタクリル
酸エステルおよびＮ−ビニルピロリドンを挙げることが
できる。

塩基性ポリマーは複数種のものの混合物としても用いる
ことができ、また、ゼラチン、ポリビニルアルコールな
どの他の水溶性ポリマーとの混合物または疎水性ポリマ
ーの水性ラテックスとの混合物としても用いることがで
きる。

次に本発明の実施例を示す。

ゼラチン下塗り層を有する無色透明のポリエチレンテレ
フタレー）　（ＰＥＴ）フィルム支持体（厚さ１８０舊
ｍ）の上に下記の各層を順次塗布形成することによりア
ミラーゼ活性定量用多層分析要素を製造した。

（１）呈色反応層 １主産皿遁 ２−メトキシ−５−テトラデシル オキシカルボニルベンゼンジアゾ ニウムテトラフルオロボレート　５０　ｍ　ｇヒドロキ
シプロピルメタクリレート・ ２−アクリルアミド−２−メチル プロパンスルホンｍ重合体 ［モル比５０　：　５０．３０％水・ エタノール（容量比１　：　１）水溶液、２５℃の粘度
：　５４０ｃｐ、ｓ］　４００ｍｇブタンジオール ジグリシジルエーテル　２０　ｍ　ｇ 蒸留水　２ｍ９゜ エタノール　２ｍ文 アセトン　１ｍ文 脱旦り乏戊 均−に溶解して調製した上記の塗布液を６０°ＣでＰＥ
Ｔ支持体上に塗布したのち、これを乾燥して呈色反応層
を形成した。乾燥後の呈色反応層の厚さは４ルｍであっ
た。

（２）拡散防止層 蒸留水５０　ｍ　ｆＬと二酸化チタン微粉末８０ｇとを
ホモジナイザーを用いて混合分散させ、ついでアカロー
ス３％水溶液３００ｇとｐ−ノニルフェノキシグリセリ
ン０．５ｇを添加して均一な分散液とした。　この分散
液を呈色反応層の上に塗布して乾燥することにより拡散
防止層を形成した。

乾燥後の拡散防止層の厚さは６ｋｍであった。

（３）基質層 澱粉に反応性カプラー２−［８−ヒドロキシ−３，６−
ビス（ナトリウムスルホナト）−１−ナフチルアミノ］
−４，６−ジクロロ−ｓ−トリアジンを平均１８：１（
ｉ！２粉中のグルコース単位数：反応性カプラー分子数
）の割合で結合させたカプラー澱粉１０ｇとｐ−ノニル
フェノキシグリセリン（２５％水溶液）２ｇとをｐＨ７
の０．２Ｍ燐酸カリウム緩衝液に溶解し、得られた溶液
を拡散防止層の上に塗布し乾燥することにより基質層を
形成した。乾燥後の基質層の厚さは２．８ルｍであった
。

（４）多孔性展開層 基質層を水で湿らせ、この上に、厚さ１５０ｋｍ、平均
孔径３．ＯｐＬｍのメンブランフィルタ−（ＦＭ−３０
０：富士写真フィルルム■製）を軽く圧力をかけて接着
して多孔性展開層とした。

このようにして得られた多層分析要素をＰＥＴフィルム
側から観察したところ、二酸化チタン微粉末含有拡散防
止層は平滑で、ひび割れなどの異常現象は見られなかっ
た。

［多層分析要素の評価］ 上記のアミラーゼ活性定量用多層分析要素の展開層の上
にアミラーゼ溶液（新鮮なヒト唾液を７％アルブミン含
有生理食塩水で希釈することにより得た１、５００Ｕ／
ｕの活性値を有するもの）１０ＪＬｉをスポットしたの
ち３７°Ｃで１５分間インクペーションした。

ついで、波長５６０　ｎｍにおける発色光学濃度をＰＥ
Ｔフィルム側から反射測光した結果、光学濃度は０．８
８であった。

一方、呈色反応層の形成材料として用いたヒドロキシプ
ロピルメタクリレート・２−アクリルアミド−２−メチ
ルプロパンスルホン酸重合体（硬化性重合体）をメチル
ビニルエーテル・マレイン酸モノメチル共重合体（モル
比５０ニア５０）に変えた以外は同様にしてアミラーゼ
活性定量用多層分析要素を製造した。

このようにして得られた多層分析要素をＰＥＴフィルム
側から観察したところ、二酸化チタン微粉末含有拡散防
止層には多数のひび割れが見られた。

またこれについて同様な発色試験を行なった発色の光学
濃度は０．５１であった。

呈色反応層形成のだめの塗布液の組成を変えた以外は実
施例１と同様にしてゼラチン下塗り層を有する無色透明
のＰＥＴフィルム支持体の上に呈色反応層、拡散防止層
、基質層そして多孔性展開層を順次塗布形成することに
よりアミラーゼ活性定量用多層分析要素を製造した。

（１）呈色反応層 ２−メトキシ−５−テトラデシル オキシカルボニルベンゼンジアゾ ニウムテトラフルオロポレート　５０　ｍ　ｇ２−アク
リルアミド−２−メチルプロ パンスルホン酸重合体（２０％水溶液、２５°Ｃの粘度
：　２５００ｃｐｓ）４００ｍｇジエチレングリコール □ジグリシジルエーテル　３０　ｍ　ｇ蒸留水　１ｍ文 メタノール　３ｍ父 アセトン　１ｍｍ 立腹口Ｅ域 均−に溶解して調製した上記の塗布液を６０°ＣでＰＥ
Ｔ支持体上に塗布したのち、これを乾燥して呈色反応層
を形成した。乾燥後の呈色反応層の厚さは４１℃ｍであ
った。

このようにして得られた多層分析要素をＰＥＴフィルム
側から観察したところ、二酸化チタン微粉末含有拡散防
止層は平滑で、ひび割れなどの異常現象は見られなかっ
た。

［多層分析要素の評価］ 上記のアミラーゼ活性定量用多層分析要素の展開層の上
に実施例１で用いたものと同じアミラーゼ溶液ｔｏ＝ｉ
をスポットしたのち３７℃で１５分間インクベーション
した。

生成した発色は実施例１と同様に高い光学濃度を示し、
上記の多層分析要素はアミラーゼ活性定量用多層分析要
素として有利に用いることができることが確認された。

［実施例３］ 多孔性展開層としてＰＥＴ＃ｌｌ維と綿繊維との混紡ブ
ロード布（混紡比、ＰＥＴ繊維：綿繊維７５：２５．１
００番ブロード）を、ポリアクリルアミド（平均重合度
１万８千）０．８％水溶液１５０ｇとＰ−ノニルフェノ
キシグリセリン２５％水溶液１ｇからなる水溶液に浸漬
し乾燥したものを用いた以外は実施例１と同様にしてア
ミラーゼ活−性定量用多層分析要素を製造した。

ｒの上−）ζ１．ｆ得られた多層分析要素をＰＥＴフィ
ルム側から観察したところ、二酸化チタン微粉末含有拡
散防止層は平滑で、ひび割れなどの異常現象は見られな
かった。

この多層分析要素について実施例１と同様にして評価を
実施したところ、実施例１と同様に高い光学濃度を示し
、この分析要素はアミラーゼ活性定量用多層分析要素と
して利用に用いることができることが確認された。

特許出願人　富士写真フィルム株式会社代理人　弁理士
　柳川泰男

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １゜ジアゾニウム１を含有する試薬層および光透過性支
   持体層を二の順に積層してなる基本構成を有する、液体
   試料中のアナライトを分析するための多層分析要素であ
   って、 該試薬層に、２−アクリルアミド−２−メチルプロパン
   スルホン酸および／または２−メタクリル−２−メチル
   プロパンスルホン酸から誘導される基を構成繰り返し単
   位として１０モル％以上含む付加重合体がエポキシ化合
   物により架橋されてなる硬化スルホン酸樹脂が含まれて
   いることを特徴とする多層分析要素。 ２゜上記付加重合体が、２−アクリルアミド−２−メチ
   ルプロパンスルホン酸および／または２−メタクリル−
   ２−メチルプロパンスルホン酸から誘導される基を構成
   繰り返し単位として８０モル％以上含む付加重合体であ
   ることを特徴とする特許請求の範囲第１項記載の多層分
   析要素。 ３゜上記付加重合体が、実質的に２−アクリルアミド−
   ２−メチルプロパンスルホン酸および／または２−メタ
   クリル−２−メチルプロパンスルホン酸から誘導される
   基からなる構成繰り返し単位のみから構成されているこ
   とを特徴とする特許請求の範囲第１項記載の多層分析要
   素。 ４゜上記試薬層の上に液体試料展開層が積層されている
   ことを特徴とする特許請求の範囲第１項記載の多層分析
   要素。 ５゜ジアゾニウム塩を含有する試薬層および光透過性支
   持体層をこの順に積層してなる基本構成を有する、液体
   試料中のアナライトを分析するための多層分析要素であ
   って、 該試薬層に、２−アクリルアミド−２−メチルプロパン
   スルホン酸、２−メタクリル−２−メチルプロパンスル
   ホン酸およびスチレンスルホン酸からなる群より選ばれ
   るスルホン酸基含有上ツマ−から誘導される基、および
   水酸基含有子ツマ−から誘導される基を構成繰り返し単
   位としてそれぞれ１０モル％以上含む付加重合体が硬化
   剤により架橋されてなる硬化スルホン酸樹脂が含まれて
   いることを特徴とする多層分析要素。 ６゜上記水酸基含有モノマーが、ヒドロキシエチルアク
   リレート、ヒドロキシメチルメタクリレート、ヒドロキ
   シプロピルアクリレート、ヒドロキシプロピルメタクリ
   レート、ヒドロキシエチルアクリルアミド、ヒドロキシ
   エチルメタクリルアミド、ビニルアルコール、メタリル
   アルコール、ヒドロキシスチレン、ビニルベンジルアル
   コール、ヒドロキシエチルビニルエーテル、ヒドロキシ
   メチルアクリルアミドおよびヒドロキシメチルメタクリ
   ルアミドからなる群より選ばれるものであることを特徴
   とする特許請求の範囲第５項記載の多層分析要素。 ７゜上記硬化剤が、エポキシ化合物、二価以上のインシ
   アネートおよびホルムアルデヒド誘導体からなる群より
   選ばれるえらばれるものであるこ、とを特徴とする特許
   請求の範囲第５項記載の多層分析要素。 ８゜上記付加重合体が、該スルボン酸基含有子ツマ−か
   ら誘導される基と水酸基含有上ツマ−とを構成繰り返し
   単位としてそれぞれ２０モル％以−ヒと３０モル％以上
   含むものであることを特徴とする特許請求の範囲第５項
   記載の多層分析要素。 ９゜上記試薬層の上に液体試料展開層が積層されている
   ことを特徴とする特許請求の範囲第５項記載の多層分析
   要素。