JPS6111664A - プロスタグランジン類の酵素免疫測定用試薬組成物及び該組成物を用いたプロスタグランジン類の測定方法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 〔産業上の利用分野〕 本発明は、プロスタグランジン類（以下、　ＰＧｓと略
記する。）の酵素免疫測定（ＥＩＡ）用試薬組成物及び
該組成物を用いたＰＧｓの測定方法に関する。

さらに詳しく述べると、本発明はＰＧＩ！Ｉを被検体と
する第２抗体固相法（以下、　ＤＡＳＰ法と略記する。

）によるＥＩＡに用いられる試薬組成物及び該組成物を
用いたＰＧｓの測定方法に関する。

〔従来の技術〕

今日、さまざまな病態における血中あるいは尿中のＰＧ
ｓが測定され、病態とＰｅａとの関連が議論されている
〔日本臨床、３８巻、　　１１３９頁（１９８０年）診
照のこと〕。それに伴って、ＰＧｓの測定法においても
、より簡便な操作で微量の検体を精度よく定量すべき改
良がなされてきている。現在、ＰＧｓの測定法としては
、大別して （１）　　ガスクロマトグラフィー質量分析法（ＧＯ−
ＭＳ法）、 （２）　　放射性標識を用いたラジオイムノアッセイ法
（ＲＩＡ法）及び ＜３１　　ＥＩＡ法 が知られている。さらにＥＩＡ法としては、第１抗体固
相法（単に固相法ともいう。）と第２抗体液相法（単に
２抗体法（ＤＡ法）ともいう。）が知られている〔例え
ば、日本化化学会１９８３年総会講演要旨集、７９７頁
（１９８３年）及び石川栄治ら編、「酵素免疫測定法」
、第２版（１９８２年）５．医学書院発行（以下、文献
゛Ａ”と略記する。）４０３頁参照のこと〕。

Ｇｏ−ＭＳ法は基準法として高い評価を受けている方法
であり、ＲＩＡ法は高感度で比較的多竺の生体試料を測
定しうるすぐれた方法であり、いずれもよく知られた方
法である。

第１抗体固相法によるＥＩＡ法とは、固相化した抗体に
対して、生体試料中の被測定ＰＧｓと酵素標識したＰＧ
ｓとを競合させて免疫反応させた後、酵素活性を測定す
ることによって試料中のＰＧｓを定量する方法である。

また第２抗体液相法によるＥＩＡ法とは、第１抗体に対
して生体試料中の被測定Ｐｅｓと酵素標識したＰＧｓを
競合させて免疫反応させた後第２抗体で沈降させ、沈殿
中の酵素活性を測定することによって試料中のＰＣＢ’
ｚ定量す漬方法である。

一方、別の従来技術としてＤＡＳＰ法によるＥＩＡ法が
ある（詳細は文献１Ａ”、３５頁参照のこと）。

この方法は第１抗体に対して生体試料中の被測定物質と
酵素標識（た被測定物質を競合させて免疫反応させた後
、固相化した第２抗体に結合１分離させ、第２抗体に・
結合した標識抗原の酵素活性を測定することによって試
料中の被測定物質を定量する方法である。

ＤＡＳＰ法によるＥＩＡ法を、ＰＧｓ以外の種々の被測
定物質に応用した例としては、 ＋１）　　プロゲステロンの測定（特開昭５１−９１３
２５号明細書参照のこと）、 （２）ある種の抗ガン剤の測定←特開昭５７−１４８２
５３号明細書参照のこと）、 （３）クレンブテロールの測定（特開昭５７−１９２８
６７号明細書参照のこと）、 （４）マイトマイシンＣの測定（特開昭５８−１６７９
６１号明細書参照のこと） 等が知られているが、ＤＡＳＰ法にＰＧｓ　を応用した
例は全く見い出されていない。

〔発明が解決しようとする問題点〕

しかしながら、従来のＰＣＴｓの測定法はいずれも重大
な欠点を有しており、より簡便な操作セ微量の検体を高
感度で定量できるものは皆無である。

スナワち、ｃ、ｃ−Ｍｓ法においては、臨床的に応用す
るためには、生体試料中よりＰＧｓｔｌ−抽出し、測定
に適した誘導体に変換するなど煩雑かつ高度な技術を要
する前処理が必須でおる。このため多量の試料を必要と
し、また一度に測定できる試料数に限シがある。さらに
分析に必要な設備が高価であり、一般的とは言えない。

ＲＩＡ法は、放射性同位元素を用いることから、特定の
管理施設で有資格者が取シ扱う必要がある。

さらに放射性標識試薬の質が時間的経過に伴って変化す
ることから安定した測定系の維持が困難であるという欠
点がある。

第１抗体固相法は、第１抗体を固相化することから、高
価で貴重なＰＣ，を用いて作製した第１抗体が大量に必
要となシネ経済である。ざらに固相化した第１抗体を用
いて、標識、非標識の抗原と競合させるので、測定検体
中の共線物の影響を受けやすく精度が劣るという欠点が
ある。

さらに第２抗体液相法においては、ｂｏｕｎｄ　　とｆ
ｒｅｅ　の分離のために大量の第２抗体が必要であシ、
かつ分離のための遠心分離などの煩雑な操作が必要であ
る。さらに測定精度が劣るという欠点がある。

さらにＤＡＳＰ法によるＥＩＡ法は、　ＰＧ８以外の被
測定物に応用した例はいくつか知られているが（前記し
た〔従来の技術〕欄のＤＡＳＰ法の項参照）、被測定物
の種類によって検出範囲及び検出限界が大きくばらつい
ておシ、この方法をＰＣ−ｓに適応した場合に、はたし
て実用可能ガ検出範囲、検出限界及び精度が得られるか
どうかはまったくわからない状態にあるといえる。

〔問題点を解決するための手段〕

本発明者等はよシ簡便な操作で微量の検体（ＰＧｓ）を
高感度で定量できる測定法の確立を目ざして研究開発を
進め、その中でＰＣ，をＤＡＳＰ法によるＥＩＡ法によ
って測定することに着目し、その可能性について鋭意検
討を重ねた結果、その測定に初めて成功し、実用可能で
あることを見い出した。

しかも驚くべきことに、検出限界、検出範囲及び検出精
度の点で非常にすぐれていること管見い出し本発明を完
成した。

すなわち、本発明は少なくとも次の試薬、試薬（Ａｌ　
：　ＰＧＢとタン白との結合物を第１動物に投与して得
られる第１抗体、 試薬（Ｂ）：酵素標識されたＰＧｓからなる抗原、及び
試薬（Ｂ）：第１動物の血清あるいはｒ−グロブリンを
第２動物に投与して得られた第２抗体を固相に結合させ
た結合物 からなるＰＣ，ＢのＥＩＡ用試薬組成物、及び該組成物
を用いたＰＧｓの測定方法に関する。

本発明の組成物は、上記（Ａ）、（Ｂ）及び（Ｃ）で示
される試薬を必須の構成要件とするものであるが、これ
以外に必要に応じて、検量線作成用の標準ＰＧａ、標識
酵素の活性を測定するのに必要な試薬一式（例えば、基
質、基質溶解液、酵素反応停止液など）、緩衝化剤等を
含んでいてもよい。

本発明に含まれるＰ−１すなわち本発明の組成物を用い
て測定することができるＰＣ８とは、ＰＣ骨格を有する
ブロスタン酸の誘導体であって、それが有する官能基（
例えば、カルボキシル基またはアミ７基）とタン白とを
結合させたものを動物に投与した場合に抗体を形成する
ようなＰＧｓであれば何でもよく、いわゆるアラキドン
酸カスケードを構成するＰＣ８であって安定な形で存在
しうるものであれば特に限定されない。そのようなＰＣ
８としては、ＰＣ系化合物、トｐンボキサン（以下、Ｔ
Ｘと略記する。）系化合物及びロイコトリエン（以下Ｌ
Ｔと略記する。）系化合物が挙げられ。

具体的には、ＰＧＡ１．　ＰＧＡ２．　ＰＧＡ３．　Ｐ
ＣＢ□、　ＰＧＢ２゜ＰＧＢ　　ＰＧＣ、ＰＧＣ２，Ｐ
ＧＣ３，ＰＧＤｌ、　ＰＧＤ２．　ＰＧＤ３゜ＦＯＥｌ
、　ＰＧＥ２．　ＰＧＥ３．　ＰＧｌｌｉ’□、　、　
ＰＧ−Ｆ２．　、　ＰＧＥ３．　、−ＰＣＩ□、　ＰＧ
Ｉ　２．　ＰＧＩ３．　ＴＸＢｌ、　ＴＸＢ２．　ＴＸ
Ｂ３．　ＬＴＡ３゜ＬＴＡ４．　ＬＴＡ５．　ＬＴＢ３
．　ＬＴＢ４．　ＬＴＢ５．　ＬＴＣ３，ＬＴＣ４゜Ｌ
ＴＣ５，ＬＴＤ３．ＬＴＤ４．ＬＴＤ５．ＬＴＥ３．Ｌ
ＴＥ４．ＬＴＥ５、またはそれらの生体中での代謝物、
例えばＰＧＦ−ＭＵＭ　（ＰＧＦ２ａの主要尿中代謝物
、後記実施例１中の構造式を参照のこと。）、ＰＧＥ−
ＭＵＭ　（ＰＧＥ２の主要尿中代謝物、後記実施例２中
の構造式を参照のこと。）、６−ケドーＰＣ，Ｆ１ａ（
ＰＧＩ２の代謝物）を挙げることができる。ここで例示
された化合物は、いずれも生体内物質及びそれらの代謝
物と考えられているものであるが１本発明に含まれるＰ
Ｃ８としては、さらに上記化合物に修飾を行なった、化
学的に合成された誘導体及びそれらの代謝物をも含みう
るものである。本発明に含まれるＰＧｓのうち、好まし
いものとしてはＰＧＥｓ　＊　ＰＧＦｓ　、　ＰＧＩｓ
　＋ＴＸＢｓ　、　ＬＴＣｓ　、　ＬＴＤｓ　、　ＬＴ
Ｅｓ及びそれらの生体中での代謝物、例えばＰＧＦ　−
ＭＵＭ、２．３−　：）ツルーＰＧＦ１ａ。

ＰＧＥ−ＭＵＭ、６−ケドーＰＧＦ１ａ及び２，３−ジ
ノル−ＴＸＢｌが挙げられる。

本発明を構成する各試薬の調製方法について述べる。

試薬体）である第１抗体は、ＰＧｓのカルボキシル基ま
たはアミン基あるいは新たに導入した特性基とタン白の
特性基、例えばアミノ基、メルカプト基、水酸基等を結
合する反応に付し、得られたＰＧ−タン白結合物を適当
なアジュバントと懸濁混合した後、第１動物に投与、感
作し、その血清を採取、処理することによシ調製される
。適当なタン白としてはアルノミン、グロノリン、サイ
クログロノリン、ヘモシアニン、エデスチン等カ挙ケら
れるが、好ましくはアルジミンである。ハプテン、すな
わちＰｅａとタン白を結合する反応は公知であシ、例え
ば文献“Ａ″、８２頁に詳しく記載されている。す々わ
ち適当な溶媒（例えば、リン酸緩衝液）中、ＰＣ８とタ
ン白を直接結合できる場合には、カルボジイミド法、酸
無水物法等、好ましくは、シクロヘキシルカルボジイミ
ドまたはｌ−エチル−３−（３−０メチルアミノプロピ
ル）カルボジイミｒを縮合剤として用いる方法、またＰ
Ｃ８とタン白を直接結合できない場合には、この分野で
公知の架橋剤、例えば１．５−ジンルオロ−２，４−ジ
ニトロインゼンを用いる方法を用いて行なわれる。反応
後、目的物はカラムクロマトグラフィにかけて単離精製
される。アジュバントはこの分野で公知のものなら何で
もよいが、例えばフロイント（Ｆｒθｕｎｄ　）の完全
または不完全アジュバントや水酸化アルミニウムが挙げ
られる。感作方法もまた公知である。すなわち九８とタ
ン白の結合体を上記のアジュバントとの懸濁液とし、適
当な動物（例えばラット、マウス、モルモット、ウサギ
、ネコ、イヌ、ヒツジ、ヤギ等）に適当な投与間隔を設
けて、数ケ月間にわたって投与して感作する。

感作後感作動物の血清を採取゛して、公知の処理を行な
うことによシ、目的とする第１抗体が得られる７　（臨
床検査、２６巻＋７）、７７７ページ（１９８２年）（
以下、文献゛Ｂ”と略記する。）参照のこと〕。

実際にはＰＧｓの測定においては、検体中に測定しよう
とするＰＧ８以外に多数の構造類似ＰＧａが存在する場
合が多い。従って測定しようとするに８に特異性の高い
抗体を得る必要がある。例えば、にＦ−ＭＵＭの場合に
はふたつのカルボキシル基を有しているので、α鎖のカ
ルボキシル基をδ−ラクトン体の形で保護してからタン
自と結合させ、抗体上つくることによりＰＧＦ　−ＭＵ
Ｍ　Ｋ％異性の高い抗体が得られる。ＰＧＥ　−Ｍｔｙ
Ｍの場合にはアルカリ処理してビシクロ体にしてからタ
ン白と結合させることによシ、ＰＣ，Ｅ−ＭＵＭに特異
的な抗体が得られる。さらにＬＴＯ４では分子内に３個
のカルボキシル基を有しているので、（後記実施例４中
の構造式を参照のこと）、混合酸無水物法では特異的か
つ選択性の高い抗体を得ることはできない。そこで分子
内にただ１個存在するアミノ基に注目し、これをタン自
と架橋剤管用いて結合することにょ）選択性の高い抗体
を得ることができる。

試薬（Ｂ）である抗原は、ＰＧｓを酵素で標識すること
によって調製される。すなわち、　ＰＣ８と酵素の結合
は、前記した試薬（Ａ）の調製方法中、ＰＣ８とタン白
を結合する反応と同様にして行なわれる。

好ましくは、インブチルクロロホルメート等を用いる混
合酸無水物法または４−（Ｎ−マレイミ、トメチル）シ
クロヘキサン−１−カルボン酸Ｎ−ヒドロキシサクシン
イミドエステルを架橋剤として用いる方法が挙げられる
。ここで用いられるＲｉは測定しようとするんｓでもよ
いし、そのほかの任意のＰＣ，であってもよい。使用さ
れる酵素としては、一般ｉｃ　ＥＩＡで用いられる酵素
であれば何でもよく、例エバマレートチヒドロゲナーゼ
、グルコース−６−リン酸脱水素酵素、グルコース酸化
酵素、投ルオキシダーゼ、アセチルコリンエステラーゼ
、アルカリホスファターゼ、グルコアミラーゼ、リゾチ
ーム、β−Ｄ−ガラクトシダーゼ等が挙げられ、好まし
くはβ−Ｄ−ガラクトシダーゼである〔文献”Ａ”、６
７頁参照のこと〕。ここでも酵素標識ＰＧｓの特異性を
高めるため、試薬体）の調製方法で述べたような工夫を
行なうことができる。また必要に応じて酵素と結合する
ＰＧ　ｓＯ量を変えることによって測定感度を上げるこ
とができる。

試薬（Ｃ）である第２抗体は、試薬０．）の第１抗体を
調製する際に用いた感作動物と同種の動物の血清あるい
はγ−グロブリンを一般に知られた方法で、別種の動物
に投与、感作して調整することができる〔文献”Ｂ”参
照のこと〕が、異種動物の血清に対する抗体は市販され
ているのでそれを利用してもよい。第２抗体と固相との
結合は、一般によく知られている方法によって行なわれ
る。すなわち物理的吸着や化学的結合が用いられる。固
相の材質は、一般のＥＩＡに用いられるものであれば何
でもよいが、例えばアガロース、デキストラン、セルロ
ース等の多糖類、ポリスチレン等の合成樹脂、ガラス、
あるいはポリアクリルアミド等が挙げられる。その形状
は分離が容易であればどのような形のものでもよいが、
例えば小球、小試験管、テコーノ、繊維状のもの、マイ
クロプレートがよい。

好ましくはポリスチレンポールまたはガラスピーズであ
る。詳細については千畑一部編、固定化酵素（１９７５
年、講談社発行）参照のこと。

本発明の組成物に組み込むことのできる検量線作成用の
標準ＰＧ、、標識酵素の活性を測定するのに必要な試薬
一式、緩衝化剤等はすべて公知の方法によシ調製するこ
とができる。

さらに、本発明は、本発明の試薬組成物を用いるＰＣ８
の測定方法をも含有するものである。測定方法は次のよ
うにして行なわれる。すなわち、（１）　　試薬（Ａ）
及び試薬（Ｂ）及びＰＣ８を含有する被検体を混合し、
競合的に抗原抗体反応を行なった（これを第１反応とす
る。）後、試薬Ｃ）を加えて、抗原抗体結合物を固相化
した第２抗体に結合させ（これを第２反応とする。）、
次に結合した酵素標識ＰＧｓの酵素活性を測定するか、
あるいは（ｉ）　　先に試薬（Ａ）と被検体中のＰＣ８
とを抗原抗体反応に付しくこれを第１反応とする。）、
得られた抗原抗体結合物に試薬（Ｃ）を加えて、固相化
した第２抗体に結合させた（これを第２反応とする。）
後、試薬（Ｂ）ｆ、加えて競合的に酵素標識抗原を結合
させ（これを第３反応とする。）、結合した酵素標識器
８の酵素活性を測定することによシ行なわれる。

いずれの方法も好ましく、被測定物質の種類によって、
いずれかの方法を選択する必要がある。

例えば被測定物質がＰＧＦ−ＭＵＭ、　ＰＣ，Ｅ−ＭＵ
ＭまたはＴＸＢ２の場合には（１）法が好ましく、ＬＴ
Ｃ４の場合には（１）法が好ましい。

（１）法の第１反応及び（ｉ）法の第１反応及び第２反
応は、２５〜３７℃１．１〜４時間で行なわれる。この
範囲の反応温度と時間においては、測定感度が左右され
ない安定した測定が可能である。（１）法の第２反応と
（ｉ）法の第３反応は４℃７゛−夜かけて行なわれる。

酵素活性を測定する方法は公知の方法によシ行なわれる
〔文献“Ａ”、２１頁参照のこと〕。

〔実施例〕

以下に実施例を示し本発明をさらに詳細に説明するが、
本発明はこれらの実施例によって限定されるものではな
い。

実施例　ｌ ＰＧＦ−ＭＵＭは次の構造式を有する。

またＰＧＦ−ＭＵＭのδ−ラクトン体は、次の構造式を
有する化合物であって化学的に簡単に合成される。

ＰＧＦ−ＭＵＭのδ−ラクトン体４■と牛血清アルブミ
ン（以下、ＢＳＡと略記する。）８■をそれぞれ０．０
１　Ｍリン酸緩衝液（ＰＨ７，３）４ｙに溶かした後に
両者を混合し、これに１−エチル−３−（３−ジメチル
アミノプロピル）カルボジイミド塩酸塩４〜金加えた後
、塩酸でｐＨ５，５に調整し、窒素ガス雰囲気下、４℃
で２４時間反応させた。得られた反応液を、０．１５Ｍ
塩化ナトリウムを含有する０、０１Ｍリン酸緩衝液（Ｐ
Ｈ７，３）で４℃で２４時間透析した後凍結乾燥して人
工抗原８．４■を得た。ＰＧＦ−ＭＵＭのＢＳＡに対す
る結合率は、３Ｈ−ＰＧＦ　−ＭＵＭを反応系に添加す
ることによシ算出した。その結果、　　ｌ　Ｏｍｏｔ　
ＰＧＦ　−ＭＵＭ／ｍｏｌ　ＢＳＡであった。得られた
人工抗原１ＷＩ９を生理食塩水０．５−に溶かし、フロ
イントの完全アジュバント０．５１Ａ！ｅ加えて懸濁し
た後、白色雄家兎のを部及び爪裏に皮肉注射して免疫し
た。２週間ごとに６回免疫を行ない、最後の感作後２週
間目で頚動脈よシ採血し、室温で３０分間放置した後埠
心分離によ）血清を集め第１抗体を得た。第１抗体は凍
結乾燥後−２０’Ｃで保存した。

ジオキサン２５μｌに溶かしたトリーループチルアミン
２．５μ７Ｓジオキサ７２５μｌに溶かしたインジチル
クロロホルメート１．３μｌ及びジオキサン５０μｌに
溶かしたｐＧｐ−ＭｕＭのδ−ラクト５ン体２ｍｇの混
合物を１０℃で３０分間反応させた後、得られた反応混
合物を、０．５チ炭酸水素ナトリウム水溶液０，７ｎｌ
に溶かしたβ−Ｄ−ガラクトシダーゼ（ベーリンガーマ
ンハイム社製造）　０．４■の溶液に１０℃で１０分間
かけて滴下した。得られた溶液を窒素ガス雰囲気下、４
℃で２時間放置した後、セファデックスＧ−２５カラム
（登録商標、ファルマシア社製）　（１，Ｏｘ　２０ｃ
ＩＩＬ）によシ精製してＦＭＯを得た。

（３）第２抗体固相（以下、ＤＡＳＰボールという。）
の調製法 ウサギのｒ−グロブリン山羊抗血清（第１ラジオアイソ
トープ社製造）を用い、Ｎａ２ＳＯ２分画とＤＥＡＥ−
セルローズカラムクロマトグラフィにより第２抗体Ｉｇ
Ｇ画分を調製した〔免疫実験操作法−（日本免疫学会ｔ
ｉＡ　）　ＩＶ、　１１３７Ｊｊ　（１９７５年）参Ｊ
Ｔｔ’１のこと〕。１〜／ｄの濃度になるように第２抗
体ＩｇＧを溶解した０、０５　Ｍリン酸緩衝液（ＰＨ７
，４）５００ａＪにポリスチレンボール３０００個を浸
し、室温で２時間、さらに４℃で一夜放置して吸着させ
、目的とするＤＡＳＰボールを得た。

キットは次の各試薬よ多構成される。

（→緩衝液：０．３Ｍ塩化ナトリウム、３ｍＭ塩化マグ
ネシウム、０．３チＢＳＡ及び０．３チアジ化ナトリウ
ムを含む３０　ｍＭリン酸緩衝液（ｐＨ６，８）　２５
０　Ｍ、　　使用時に水で３倍希釈して用いる（以下、
Ｂｕｆ−Ａという）。

（ｂ）標準ＰＧＦ　−ＭＵＭ　：　Ｂｕｆ　−Ａよｆｉ
　ＢＳＡを除いた溶液ｌ―にＰＧＦ−■Ｎのδ−ラクト
ン体５００ｒＬＩを溶解したもの。

（Ｃ）第１抗体：前記（１）で調製した第１抗体をＢｕ
ｆ−Ａで４０万倍希釈したもの６０−〇 （ｄ）ＦＭＯ：　　前記（２）テ調製したＦＭＯｅ６０
ｎＶｙｄ　（１り濃度で含むＢｕｆ　−Ａ　１２　’ｒ
ｒＬ１．　・（ｇ）ＤＡＳｐボール：前記（３）でｇ製
したＤＡＳＰボール１００個をＢｕｆ　−Ａ　Ｉｏｏ　
Ｍに浸漬したもの。

（ｆ）酵素基質＝０．５チマンニットを含むｌｏｍＭリ
ン酸緩衝液ＣＰＨ７，０）　１２ｍＪｉｃ４−メチルウ
ムベリ７エリルーβ−Ｄ−ガラクトシド（４−ｍｅｔｈ
ｙｌｕｍｂｅｌｌｉｆｅｒｙｌ−β−り−ｇａｉａｃｔ
ｏｓｉｄｅ　）を溶解させて；　濃度がＱ、５ｍＭとな
るようにした後凍結乾燥したもの２本。使用時にはＢｕ
ｆ　−Ａ　３０　ｎｌに溶解して０．２−で使用する。

ω）酵素反応停止液：１Ｍグリシン緩衝液（ＰＨ１０，
５）３０ｄ０使用時に水で１０倍希釈して用いる。

＋５１　　＋４１で調製したキットを用いたＰＧＦ−Ｍ
ＵＭの測定尿検体は凍結融解尿を１０分間遠心分離（３
０００回転）した上清を用いた。

第１反応として、尿検体あるいは種々の濃度のＨ準ＰＧ
Ｆ−ＭＵＭ　（キット中ｆ：）（ｈ）　）　ｚ　ｏ　ｐ
ｉｔに第１抗体〔キット中の（ｃ））０．５ｍｌを加え
、３７℃で１時間反応させた。第２反応として、第１反
応液に１検体につき１個０ＤＡＳＰボール〔キット中の
（ｅ）〕を加え、３７℃で２時間反応させた。第３反応
として、ＤＡＳＰボールを含んだ第２反応液Ｖｃ１１ｉ
′ＭＯ〔キット中の（ｄ）　、ｌ　ｏ、ｔ　ｒｔｔｌを
加え、４℃で一夜反応返せた。

反応終了後、上清を捨て、２．５ｄのＢｕｆ−Ａ　Ｃキ
ット中の（α）〕で２回洗浄した。次にＤＡＳＰボール
に結合したβ−Ｄ−ガラクトシダーゼの活性を測定する
ため、ポールを酵素基質〔キット中の（イ）〕０．５ｄ
中で３７℃で３０〜６０分間反応させた。反応は酵素反
応停止液〔キット中のη））２．５ｄを加えて停止した
。生成した４−メチルウンベリフェロンの螢光を励起波
長３６０ＭＬ、螢光波長４５０　ｎｍにおいて測定して
、第１図に示す検量曲線を得た。

本発明の試薬組成物を用いる測定により、１０〜５００
０Ｐ、ｌｉ＋の範囲で尿中ＰＧｌｉ’　−ＭＵＭの測定
が可能であった。

５０種の検体について実施例１で得られた測定値Ｙと同
様の測定をＲＩＡ法で行った場合の測定値Ｘ　（Ｐｒｏ
ｓｔａｇｌａｎｄｉｎｓ、　１０巻、５４９〜５５５ば
一ジ（１９７５年）Ｋ記載。〕との相関関係を第２図に
示す。

Ｙ＝１．１７１３Ｘ＋６．３８６４　　相関係数：　ｒ
＝０．９６０６であって、非常によく相関していること
がわかる。

実施例１の試薬組成物を用いて、健常者の随時尿中のＰ
ＧＦ−ＭＵＭレベルを測７定したところ、３．１〜６０
．０す、屓（平均値：２４、■±１３．２ルＬ匂、ル＝
２１）であった。

実施例　２ ＰＧＥ　−ＭＵＭは次の構造式を有する。

Ｐ（１，Ｅ−ＭＵＭは、アルカリ処理によシ簡単に次式
に示す安定なＰＧＥ　−ＭＵＭのビシクロ体に変換され
る。

ＰＧＥ　−ＭＵＭ　（Ｄビシクロ体４■とＢＳＡ８ｍｇ
を用いて、実施例１−（１）と同様にして第１抗体を得
た。

ＰＧＥ　−ＭＵＭのＢＳＡに対する結合率は１０　ｍｏ
ｌ　ＰＣ，Ｅ−ＭＵＭビシクロ体／　ｍｏｌ　ＢＳＡ　
テあツタ。

（２）　　β−Ｄ−ガラクトシダーゼ標識Ｐ（ｒＥ−Ｍ
ＵＭ　（以ＰＧＥ　−ＭＵＭのビシクロ体１００μＩと
β−Ｄ−ガラクトシダーゼ０．４■を用いて、実施例１
−（２１と同様にしてＥＭＯを得た。

（３）第２抗体固相（以下、ＤＡＳＰボールという。）
の調製法 実施例１−（３１と同様にして調製した。

キットは次の各試薬よシ構成される。

（α）緩衝液＝１＝実施例１−＋４１−（α）で調製し
た緩衝液２５０−０　使用時に水で３倍希釈して用いる
（以下、Ｂｕｆ−Ａという）。

（ｈ）緩衝液−２：　０．１チアジ化ナトリウムを含む
５０ＴｎＭリン酸緩衝液５００１Ｌ１０ （Ｃ）緩衝液−３：　０．５１ゼラチンを含むＢｕｆ　
−Ａ　Ｉｏｏ　ｙｄ。

（ｒＬ）変換液：４規定水酸化ナトリウム水溶液１０ｄ
。

（＝）中和液：４規定塩酸１０１Ｒ１，。

（イ）標準ＰＧＥ　−ＭＵＭ　：　ＰＣＴＥ　−ＭＵＭ
　ｔｖビシクロ体５００ｎ５’を、Ｂｕｆ　−Ａよ、９
　ＢＳＡを除いた溶液ｌ−に溶解したもの。

（１）第１抗体：前記（１）で調製した第１抗体をＢｕ
ｆ　−Ａで３０万倍希釈したもの６０ｄ０ （Ａ）ＥＭＯ：前記（２）で調製したＥＭＯを５　Ｑ　
Ｑ　４／ｋｌの濃度で含むＢｕｆ−Ａ　ｌ　２ｖｔｌ。

（ｊ）ＤＡＳＰボーＡ／：実施例１−＋４１−（ｇ）で
調製したＤＡＳＰボールと同じもの。

（ｊ）酵素基質：実施例１−＋４１−び）で調製した酵
素基質と同じもの。

（＆）酵素反応停止液：実施例１−１４１−（５１）で
調製した酵素反応停止液と同じもの。

（５）　　（４＋で調製したキラ・トを用いたＰＧＥ−
ＭＵＭの測定前処理として、遠心分離した凍結融解床の
上清ｏ、１１ｆＬｌに変換液〔キット中の（ｄｌ：１０
．１−を加え室温で１時間反応させた後、中和液〔キッ
ト中の（ｅ）〕０．１鯰を加え、さらに緩衝液−２〔キ
ット中の（ｂ）〕５ｄで希釈して尿検体として用いた。

第１反応として、尿検体あるいは種々の濃度の標準ＰＧ
Ｅ−ＭＵＭ　（キット中のＶ））ｏ、ｔｍｚに第１抗体
〔キット中の（ｙ））０．５１Ｌｌを加え、３７℃で１
時間反応させた。第２反応として、第１反応液に１検体
につき１個０ＤＡＳＰ−ボール〔キット中の（Ｊを加え
、３７℃で２時間・反応させた。第３反応として、ＤＡ
ＳＰポールを含んだ第２反応液にＥＭＯ〔キット中の（
Ａ）　）　ｏ、ｚ　ｄを加え、４℃でｌ複反応させた。

反応終了後、上清を捨て、２．５１１ＬｔのＢｕｆ−Ａ
　（キット中の（ａ）〕で２回洗浄した。次にＤＡＳＰ
ポールに結合したβ−Ｄ−ガラクトシダーゼの活性を実
施例１−（５１と同様にして測定し、第３図に示す検量
曲線を得た。

本発明の試薬組成物を用いる測定によ！０．０．５〜２
０００Ｐｇの範囲で尿中のＰＣ，Ｅ　−ＭＵＭのビシク
ロ体の測定を可能であった。

３９種の検体について実施例２で得られた測定値Ｙと同
様の測定をＲＩＡ法で行った場合の測定値Ｘ　（Ａｄｖ
ａｎｃｅｓ　ｉｎ　Ｐｒｏｓｔａｇｌａｎｄｉｎｓ。

Ｔｈｒｏｍｂｏｘａｎｅ　ａｎｄ　Ｌｅｕｋｏｔｒｉｅ
ｎｅ　Ｒｅ５ｅａｒｃｈ、　１１巻。

１９１−７１９６−Ｓ−ジ（１９８３年）に記載。〕　
との相関関係を第４図に示す。

Ｙ＝１．２４７Ｘ＋４．３９５　　　相関係数：　ｒ、
＝０．９８４１であって、非常によく相関していること
がわかる。

実施例　３ ＴＸＢ２は次の構造式を有する。

Ｈ ＴＸＢ２４■とＢ５Ａ３■を用いて、実施例Ｉ−（１）
と同様にして第１抗体を得た。ＴＸＢ２０ＢＳＡに対す
る結合率は９．４　ｍｏｌ　ＴＸＢ２／ｒｒｕｙｌ　Ｂ
ＳＡ　テアツタ。

ＴＸＢ２２５０μｇとβ−Ｄ−ガラクトシダーゼ０．４
■を用いて、実施例１−（２）と同様にしてＴＢＧを得
た。

（３）第２抗体固相（以下、ＤＡＳＰボールという。）
の調製法 ガラスピーズ約ｌ０００個を蛋白分解酵素を含む洗剤に
１夜浸し十分に洗浄した後５００℃で５時間乾燥した。

得られたビーズを２−の３−アミノプロピルトリエトキ
シシランを含むアセトン１００＋ｔ／に浸し４５℃で２
４時間放置した後、アセトンで数回洗浄し室温で乾燥し
た。次に１％ゲルタールアルデヒド水溶液に浸し室温で
１時間放置した後、水及び０．２５Ｍリン酸緩衝液（Ｐ
Ｈ７，５）で十分に順次洗浄した。実施例１−（３）で
調製した第２抗体Ｉｇ０１３〜を溶解した０、２５Ｍリ
ン酸緩衝液ＣｐＨ７，５）ｔｏｏ　ｍＪにビーズを浸し
４℃で一夜放置して吸着させ、目的とするＤＡＳＰボー
ルを得た。

キットは次の各試薬よ多構成される。

（α）緩衝液：実施例１−ｔ４＋ｆ（α）で調製した緩
衝液２５０−〇使用時に水で３倍希釈して用いる （以下、Ｂｕｆ　−Ａという）。

＜ｈ＞標準ＴＸＢ２　：　ＴＸＢ２５００　ｎ９を、Ｂ
ｕｆ−Ａよ、９　ＢＳＡを除いた溶液１１に溶解したも
の。

（Ｃ）第１抗体：前記（１）で調製した第１抗体をＢｕ
ｆ　−Ａで２０万倍希釈したもの６０ゴ。

（ｃＬ）　ＴＢＧ　　：前記（２）で調製したＴＢＧ　
ｔ　１２０　ｎｇＡｉＬｌ　１７）濃度で含むＢｕｆ−
Ａ　Ｉ２１１Ｍ！。

（ｇ）　’ＤＡＳＰボール：前記（３）で調製したＤＡ
ＳＰボール１００個をＢｕｆ−Ａ１００ｍに浸漬したも
の。

に）酵素基質：実施例１−（４１−（ｆ）で調製した酵
素基質と同じもの。

（！Ｉ）酵素反応停止液：実施例１１４１−（ｙ）で調
製した酵素反応停止液と同じもの。

（５１（４１で調製したキットを用いたＴＸＢ２の測定
遠心分離によシ血球成分を除去したラット腹水ｆ：Ｂｕ
ｆ−ＡＣキット中の（α）〕で１０倍希釈したものを検
体として用いた。

第１反応として、検体あるいは種々の濃度の標準ＴＸＢ
２〔キット中の（ｈ）　）　ｏ、ｔ　ｍに第１抗体〔キ
ット中の（Ｃ）　）　０．５　ｍｌを加え、３７℃で１
時間反応させた。第２反応として、第１反応液に１種体
につき１個のＤＡＳＰボール〔キット中の（ε）〕を加
え、３７℃で２時間反応させた。第３反応として、ＤＡ
ＳＰボールを含んに第２反応液にＴＢ（、（キット中の
（ｄ）　）　ｏ、１ｊＩ７１を加え、４℃で１夜反応さ
せた。

反応終了後、上清を捨て、２．５ｄのＢｕｆ−Ａ（キッ
ト中）（α）〕で２回洗浄した。次にＤＡＭＰボールに
結合したβ−Ｄ−ガラクトシダーゼの活性を実施例１−
（５）と同様にして測定し、第５図に示す検量曲線を得
た。

本発明の試薬組成物を用いる測定により、２〜１０００
１ｇの範囲で腹水中のＴＸＢ２の測定が可能であった。

８種の検体について実施例３で得られた測定値Ｙと同様
の測定をＲ１法で行なった場合の測定値Ｘとの相関関係
を第６図に糸す。

Ｙ＝０．９９６Ｘ＋０．４３０　　相関係数：　ｒ＝０
．９９４７であって、非常によく相関していることがわ
かる。

実施例　４ ＬＴＣ４は次の構造式を有する。

■ ＮＨ２ （１）第１抗体の調製法 ＬＴＣ４２，５〜を０．１Ｍリン酸緩衝液（７）Ｂ７．
２．　　脱気後アルゴンガスで置換）Ｑ、５ｍｌに溶解
し、１．５−ジンルオロ−２，４−：）ニトロベンゼン
（ＤＦＤＮＢ）ｔＯηを含むメタノール０．７　ｄ　を
加え、２４℃で３０分間かきまぜた。反応終了後アルゴ
ンガスでメタノールを留去した後ジエチルエーテル（Ｑ
、５ｍＪＸ３回）で未反応のＤＦＤＮＢ　を抽出除去し
た。溶液中に残存するジエチルエーテルをアルゴンガス
で留去した後、Ｂ５Ａｌ０１ｖ′ｆ：、含む０．２Ｍの
ボレート緩衝液（ｐＨ８，５、脱気後アルゴンガスで置
換）ｌｄｅ加え、アルゴンガス雰囲気上遮光条件で室温
で２日間静置した。反応゛終了後、反応液を遮光下にセ
ファデックスＧ−２５カラム（登録商標、ファ〃マシア
社製）　（Ｌ、０Ｘ５０ｃ！ｒＬ）に負荷し、蒸留水（
脱気後アルゴンガスで置換）で溶出し蛋白画分を回収し
た後、凍結乾燥して人工抗原９．８■を得た。

ＬＴＧ、　ノＢＳＡに対する結合率は、８．１４ｍ０１
ＬＴＣ４／岬ｉｓＡであった。

得られた人工抗原１１ｖを生理食塩水Ｑ、５１１ＬＩＫ
溶解し、フロイントの不完全アジュバントｌ−を加えて
、アルゴンガス雰囲気上懸濁した後、家兎背部頚部約Ｌ
５ケ所に皮下投与して免疫した。３週間ごとに４回免疫
金行ない、最後の感作後１０日０で採血し、遠心分離に
より血清を集め第１抗体を得た。

ＬＴＣ，１００μｇを０．０７５．Ｍリン酸緩衝液（Ｐ
Ｈ７，２、脱気後アルゴンガスで置換）１ｍ７に溶解し
、ここへ４−（Ｎ−マレイミドメチル）シクロヘキサン
−１−カルボン酸Ｎ−ヒト９０キシサクシンイミドエス
テル（ＭＣＡＥ）ｌ＃を含むテトラヒドロフラン溶液０
．１１１１７ｔ−加え、アルビンガス雰囲気下２４℃で
３０分間反応させた。反応終了後テトラヒト日ソランを
アルゴンガスで留去し、未反応のＭＣＡＥ　ｆｆｉジエ
チルエーテル（ｌＫ７！Ｘ３回）で抽出して除去した。

水層に残存するジエチルエーテルをアルゴンガスで十分
留去してＬＴＣ；４のシフ盲ヘキシルマレイミド誘導体
を得た。得られたシクロヘキシルマレイミド誘導体を、
β−Ｄ−ガラクトシダーゼ１．５■を含む０．０７５Ｍ
リン酸緩衝液（Ｐ）Ｉ７．２、脱気後アルビンガスで置
換）ｌｄにアルゴンガス雰囲気下で滴下した。滴下終了
後この混合液を２４℃で３０分間かきまぜた。反応混合
物をセファデックスＧ−２５カラム（登録商標、ファル
マシア社製）（ｔ、０Ｘ５０ｃＩＩＬ）で精製してＬの
を得た。

（３）　　第２抗体固相（以下、ＤＡＳＰボールという
。）の調製法 実施例１−（３１と同様にして調製した。

キットは次の各試薬よ多構成される。

（α）緩衝液：実施例１−（４１−（α）で調製した緩
衝液２５０ｄ０使用時に水で３倍希釈して用いる （以下、Ｂｕｆ−Ａという）。

（Ａ）標準ＬＴＧ４：　ＬＴＣ４５００ｒＬ＆を、Ｂｕ
ｆ−ＡよＪ　ＢＳＡを除いた溶液（脱気後アルゴンガス
で置換）■−に溶解したもの。

（Ｃ）第１抗体：前記（１）でｖ！４製した第１抗体を
Ｂｕｆ７Ａで１．５万倍希釈したもの６０４゜ （ｄ）　ＬＣＣＴ：前記（２）で調製したＬＯＧ　１８
００’ｇをＢｕｆ−Ａ（脱気後アルゴンガスで置換）１
２１に溶解したもの。

（ｇｌ　ＤＡＳＰボール：実施例１−ｔ４）−（Ｉりで
調製したＤＡＳＰボールと同じもの。

（イ）酵素基質：実施例１−（４１−（イ）で調製した
酵素基質と同じもの。

（ｇ）酵素反応停止液：実施例Ｌ−（４１−（ｙ）で調
製した酵素反応停止液と同じもの。

（５）　　（４１で調製したキットを用いたＬＴＣ４の
測定検体として実施例３−（５１に示した前処理を行な
ったラット腹水を用いた。

第１反応として、検体あるいは種々の濃度の標準ＬＴＣ
４（キット中の（ｈ）　）　０．１−に第１抗体〔キッ
ト中の（Ｃ）　）　０．５−とＬ工〔キット中の（ｄ）
　）０．１　ｍを加え、２５℃で１時間反応させた。第
２反応として、第１反応液に１検体につき１個０ＤＡＳ
Ｐボール〔キット中の（ｇ）〕を加え、４℃で１夜反応
させた。反応終了後、上清を捨て、２．５１＋１１のＢ
ｕｆ−Ａ〔キット中の（α）〕で２回洗同じた。次ｆｃ
Ｉ）ＡＳＰボールに結合したβ−Ｄ−ガラクトシダーゼ
の活性を実施例１−＋５１と同様にして測定し、第７図
に示す検量曲線を得た。

本発明の試薬組成物を用いる測定により、１０〜５００
０１９の範囲で腹水中のＬＴＣ４の測定が可能であった
。

１２種の検体にろいて実施例４で得られた測定値Ｙと同
様の測定をＲＩＡ法で行なった場合の測定値Ｘとの相関
関係を第８図に示す。

Ｙ＝０．９８０Ｘ＋２２．４２　　相［Ｊ係数：　ｒ＝
０．９７９であって、非常によく相関していることがわ
かる。

〔効果〕

本発明の測定用試薬を用いた測定においては、実施例か
らもわかるように、よシ簡便な操作で微量の検体の定量
が可能である。しかも検出範囲、検出限界及び精度の点
でも非常にすぐれている。

本発明方法と従来法における検出範囲、検出限界及び精
度の比較を第１表に示す。

１）シグナｐｙ　（Ｓｉｇｎａｌ）／／イズ（Ｎｏｉｓ
ｅ　）比のことで、測定法の目安としてよく用いられる
。Ｓ／Ｎ比が大きい程精度がよいとされる。

２）特開昭５７−１４８２５３号明細書に記載された数
値３）特開昭５７−１９２８６７号明細書に記載された
数値４）特開昭５８−１６７９６１号明細書に記載され
た数値表かられかるように、本発明方法は （１）　　ＲＩＡ法との比較において、検出限界の点で
２〜８倍すぐれており、 （Ｉｉ）第２抗体液相法との比較において、精度の点で
２〜２０倍す”ぐれておシ、 （ｉｌｌ）　　ＰＧ以外の物質を被測定物とするＤＡＳ
Ｐ法との比較においては、検出範囲及び検出限界が同程
度のものもあるが、検出限界の点で非常にすぐれている
ことがわかる。特にＰＣ以外の物質を被測定物とするＤ
ＡＳＰ法はこれ以外にもいくつか知られているが、被測
定物の種類によって検出範囲及び検出限界が大きくばら
ついている。

これ以外にも、本発明の測定方法 は、次のよりなｌｒｆ徴を有している。

＋１１　　ＧＣ−ＭＳ法に比べ前処理が簡単であり、一
度に多数の測定が可能である。

＋２）ＲＩＡ法のような特定の管理施設で有資格者が取
扱う必要がなく、標識試薬も長期にわた９安定である。

（３）第１抗体固相法はど第１抗体を必要とせず、経済
的であるうえ、測定検体中の共雑物の影響を受げにくい
。

（４）第１抗体に対する第２抗体を固相化していること
から、第１抗体固相法及び第２抗体液相法に比べ汎用性
にすぐれている。すなわちＰＯ２の第」抗体の種類をか
えるだけで、第２抗体を結合させた固相、すなわち試薬
（Ｃ）を共通に用いて種々のＰＧｓに対する測定用組成
物を組むことができる。

（５）第２抗体液相法に比べ、必要な第２抗体が少なく
てすみ、さらにｂｏｕｎｄとｆ　ｒ’ｅｅ　の分離が簡
単である（遠心分離などの煩雑な操作が不要で（６）第
２抗体固相法は第２抗体液相法に比べ再現性にすぐれ、
また測定系の自動化も可能である。

すなわち、例えば固相に用いる小球の中に磁石を埋めこ
んでおくことによシ、小球の洗滌、移動などが簡単に行
なえるし、またマイクロプレートを用いて、その各ウェ
ルに第２抗体を結合させておけば、ウェル内で反応させ
、ウェルごとに酵素活性を自動的に測定することも可能
である。

【図面の簡単な説明】

第１図はＰ（１，Ｆ　−ＭｔＪＭの標準検量曲線、第２
図は実施例りで得られた測定値とＲＩＡ法で得られた測
定値との相関関係を示すグラフ、第３図はＰＧＥ−ＭＵ
Ｍの標準検量曲線、第４図は実施例２で得られた測定値
とＲＩＡ法で得られた測定値との相関関係を示すグラフ
、第５図はＴＸＩ３２の標準検量曲線、第６図は実施例
３で得られた測定値とＲＩＡ法で得られた測定値との相
関関係を示すグラフ、第７図はＬＴＧ４の標準検量曲線
、第８図は実施例４で得られた測定値とＲ１法で得られ
た測定値との相関関係を示すグラフである。 代理人　弁理士（８１０７）佐々木清隆（ほか３名） 第１図 糸も 召 ギ （０１゜ ＰＧＦ−１＼４ＵＭ（ｐｑＪ 第　　２　　図 ＰＩＡ域（ｎｇ／ｍｕり 扱＋＠−２ 第　　４　　図 第　　６ＷＡ Ｙ ＲＩＡ’、桓ρ９１技ｆ−） ５４蚤ドー 第　　８　　図 ■ ＲＩＡΔ’：、（ｐｇ／＊イ４（） 手続補正書 昭和５９年　７　月ユＺ日 補正をする者 事件との関係、特許出願人 名称　　小野薬品上來株式会社 １８１１〜１２　　　　　　　　テコーゾ　　　　　　
チューブ２ａ　　　４　　　　　　　　　　　０．４ｍ
、ｌｉ’　　　　　　　２．５ｍＦ４１　　表中の「実
施例トに　　　ＰＧＥ−ＭＵＭ　　　　　ＰＧＦ−ＭＵ
Ｍよる測定」の行

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １、少なくとも次の試薬、 試薬（Ａ）：プロスタグランジン類とタン白との結合物
   を第１動物に投与して得られる第１抗 体、 試薬（Ｂ）：酵素標識されたプロスタグランジン類から
   なる抗原及び 試薬（Ｃ）：第１動物の血清あるいはγ−グロブリンを
   第２動物に投与して得られる第２抗体 を固相に結合させた結合物 からなるプロスタグランジン類の酵素免疫測定用試薬組
   成物。 ２、特許請求の範囲第１項記載の試薬（Ａ）、（Ｂ）及
   び（Ｃ）以外に、 試薬（Ｄ）：標準プロスタグランジン類、 試薬（Ｅ）：標識酵素の活性を測定するのに必要な試薬
   一式、及び 試薬（Ｆ）：緩衝化剤 からなる特許請求の範囲第１項記載の酵素免疫測定用試
   薬組成物。 ３、プロスタグランジン類がＰＧＥ類、ＰＧＦ類または
   それらの生体中での代謝物である特許請求の範囲第１項
   または第２項記載の酵素免疫測定用試薬組成物。 ４、少なくとも次の試薬、 試薬（Ａ）：ＰＧＥ＿２の主要尿中代謝物のビシクロ体
   と牛血清アルブミンとの結合物を第１動物 に投与して得られる第１抗体、 試薬（Ｂ）：β−Ｄ−ガラクトシダーゼで標識されたＰ
   ＧＥ＿２の主要尿中代謝物のビシクロ体から成る抗原及
   び 試薬（Ｃ）：ウサギのγ−ブロブリン山羊抗血清からな
   る第２抗体を固相に結合させた結合物 からなる特許請求の範囲第３項記載のＰＧＥ＿２の主要
   尿中代謝物の酵素免疫測定用試薬組成物。 ５、少なくとも次の試薬、 試薬（Ａ）：ＰＧＦ＿２＿αの主要尿中代謝物のδ−ラ
   クトン体と牛血清アルブミンとの結合物を第１ 動物に投与して得られる第１抗体、 試薬（Ｂ）：β−Ｄ−ガラクトシダーゼで標識されたＰ
   ＧＦ＿２＿αの主要尿中代謝物のδ−ラクトン体からな
   る抗原及び 試薬（Ｃ）：ウサギのγ−グロブリン山羊抗血清からな
   る第２抗体を固相に結合させた結合物 からなる特許請求の範囲第３項記載のＰＧＦ＿２＿αの
   主要尿中代謝物の酵素免疫測定用試薬組成物。 ６、プロスタグランジン類がＴＸＢ類またはそれらの生
   体中での代謝物である特許請求の範囲第１項または第２
   項記載の酵素免疫測定用試薬組成物。 ７、少なくとも次の試薬、 試薬（Ａ）：ＴＸＢ＿２と牛血清アルブミンとの結合物
   を第１動物に投与して得られる第１抗体、 試薬（Ｂ）：β−Ｄ−ガラクトシダーゼで標識されたＴ
   ＸＢ＿２からなる抗原及び 試薬（Ｃ）：ウサギのγ−グロブリン山羊抗血清からな
   る第２抗体を固相に結合させた結合物 からなる特許請求の範囲第６項記載のＴＸＢ＿２の酵素
   免疫測定用試薬組成物。 ８、プロスタグランジン類がＬＴＣ、ＬＴＤまたはＬＴ
   Ｅ類またはそれらの生体中での代謝物である特許請求の
   範囲第１項または第２項記載の酵素免疫測定用試薬組成
   物。 ９、少なくとも次の試薬、 試薬（Ａ）：ＬＴＣ＿４と牛血清アルブミンとの結合物
   を第１動物に投与して得られる第１抗体、 試薬（Ｂ）：β−Ｄ−ガラクトシダーゼで標識されたＬ
   ＴＣ＿４からなる抗原及び 試薬（Ｃ）：ウサギのγ−グロブリン山羊抗血清からな
   る第２抗体の固相に結合させた結合物 からなる特許請求の範囲第８項記載のＬＴＣ＿４の酵素
   免疫測定用試薬組成物。 １０、試薬（Ａ）〔プロスタグランジン類とタン白との
   結合物を第１動物に投与して得られる第１抗体〕及び試
   薬（Ｂ）〔酵素標識されたプロスタグランジン類からな
   る抗原〕及びプロスタグランジン類を含有する被検体を
   混合し、競合的に抗原抗体反応を行なつた後、試薬（Ｃ
   ）〔第１動物の血清あるいはγ−グロブリンを第２動物
   に投与して得られる第２抗体を固相に結合させた結合物
   〕を加えて、抗原抗体結合物を固相化した第２抗体に結
   合させ、次に結合した酵素標識プロスタグランジン類の
   酵素活性を測定することを特徴とする酵素免疫測定法に
   よるプロスタグランジン類の測定方法。 １１、試薬（Ａ）〔特許請求の範囲第１０項記載と同じ
   意味を表わす。〕と被検体中のプロスタグランジン類と
   を抗原抗体反応に付し、得られた抗原抗体結合物に試薬
   （Ｃ）〔特許請求の範囲第１０項記載と同じ意味を表わ
   す。〕を加えて、固相化した第２抗体に結合させた後、
   試薬（Ｂ）〔特許請求の範囲第１０項記載と同じ意味を
   表わす。〕を加えて競合的に酵素標識抗原を結合させ、
   結合した酵素標識プロスタグランジン類の酵素活性を測
   定することを特徴とする酵素免疫測定法によるプロスタ
   グランジン類の測定方法。