JPS61124867A - 免疫学的試験用試験カード - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 本発明は媒体忙支持された光反応領域が形成されたこと
およびそれが存在することを検出するだめの方法に関す
る。本発明の特別な面については本発明は支持媒体内に
おける粒子あるいは塊状粒子の検出方法に関する。本発
明のさらに特別な面については、本発明は従来からの免
疫学的な診断試験手順における、抗原とそれに関連した
抗体との間に膠着化が生じていることを検出するための
方法に関する。また、本発明の範囲には、本発明の該方
法全英節するための検査器および試験カードも含まれる
。

多くの病的状態、および妊娠のようなある種の非病的状
態は、よく知られた免疫学的原理を用いて日常的に診断
される。人間の体あるいは動物の体は外的なたん白質（
抗原）に対して曝されると体の自然的な防御機構が刺激
され、侵入してきた抗原に対抗する抗体をつくシ出す。

該抗原とそれに対抗する抗体とが適当な条件の下で互に
他と接触すると、膠着化あるいは集塊化が生じ、一般く
該抗原あるいは抗体のいずれよりも溶解しにくい複合体
が形成される。この抗原と抗体との反応は大部分の免疫
学的診断試験の基礎である。大部分の試験では、患者か
らの血清あるいはその他の体液を含有した試験媒体に対
して、既知の抗原あるいは抗体を含有した試薬が加えら
れる。もし膠着すことができる。

効果的な診断手順を提供するためには、試験媒体の中に
膠着化が存在するかしないかについて簡単に見きわめな
ければならない。このことは、膠着化がゆるやかに進行
し、あるいは集塊化粒子の寸法が裸眼で観察する（は小
さすぎるといった、多くの抗原−抗体系統に関しては問
題であった。

この問題は、既知の試薬を形成するために、抗原あるい
は抗体に対してポリスチレンラテックスのよりな担体材
料を加えることによって幾らか軽減されてきている。試
験手順においては、ラテックスたん白質試薬を用いるこ
とＫよって、観察するのによシ大きく、かつよシ容易に
集塊が形成される。しかしながら、担体材料が存在する
時でさえも、試験媒体中の膠着化を眼で観察するのは多
くの場合困難である。結果として、多くの免疫学的診断
手順の正確さは、試験ｆ：実施する技術者の個々の技能
および経験に大きく左右されることになる。

支持媒体中の粒子形成あるいはその存在を検出するため
に、多くの装置が開発されてきている。

これらの装置のうちの幾つかは、免疫学的診断試験の領
域の中で特別な応用をされてきた。しかしながら、これ
らの装置の大部分は、複雑で、光学的かつ電子工学的に
費用のかかる、測定装置が必要であったシ、あるいは、
結果の解釈が困４かつ（あるいは）それに時間がかかる
といったある種の欠点を有している。

本発明めシステムは先行技術システムに関する多くの欠
点を克服し、支持媒体内での光反応領域を検出するため
の便利で、効率のよい、使用簡単な、安価な装置を提供
する。

ここで用いている１光反応領域“という言葉は。

媒体に支持され、該支持媒体とは光伝送特性の異４った
、分離的な領域あるいは実在物であって、一般的には粒
子または粒子の塊であり、単一層またはフィルムにおけ
る光伝送性の孔や開口のような中断個所すなわち不連続
部分であり、かつ水中の油滴のように混濁液の中に存在
するような媒体中に分散された物質の分離的な小滴であ
るような分離的な領域あるいは実在物を意味する。

゛媒体によって支持されポ。

という又は、特定の光反応領域が媒体中に包含されてい
ること、例えば流体あるいはデルの中に粒子が包含され
ていること、あるいは該領域がフィルムのような基板の
表面上に沈積していることを意味する。

本発明のシステムは、媒体に支持された光反応領域を観
察するために１シンチレーシヨン１と呼ばれる現象を利
用する。シンチレーションは多数層の光の場において個
々の光線がでたらめに点滅した時に発生されるスパーク
効果あるいはフリッカ−効果である。

本発明は媒体によって支持された、予じめ選択された寸
法領域の中で、光反応領域を検出する方法において、該
媒体を多数照明点源とシンチレーションを検出するだめ
の装置との間に配置することと、該媒体を通して該シン
チレーション検出装置の方へ向けられた多数の分離的な
光線によって、該媒体を照らすことと、該光線と該媒体
との間に相対運動を生じさせることとを包含する光反応
領域の検出方法を提供する。あるいは、多数の照明点源
と媒体とが互いに他と離れている時に扛、シンチレーシ
ョン検出装置は光線、あるいは媒体に対して、あるいは
その両方に対して相対的に動かされる。光反応領域が支
持媒体の中に存在する時には、光線はこれらの領域と反
応して無作為的くまばやいたりあるいはきらめいたシす
る。

この方法は微小な光反応領域を観察するための便利な手
段を提供するが、これらの領域は拡大しなければ観察不
可能である。この方法は特に、従来の免疫学的試験にお
ける抗原と抗体との反応の存在することを郭定するため
の医療診断分野（利用するのに適している。これはまた
、血液のクロスマツチング試験における赤血球間の反応
を検出したり、細菌を郭定したシ、また以下（述べるよ
うな他の利用に対してもよく適している。該方法はまた
医療分野以外で、眼で見るにはあまシに小さすぎるよう
な媒体内の粒子あるいは非均−物質の存在ｔｍ認するの
が望ましいような分野においても広範な適応性を有して
いる。

本方法は、特に最も巾広い寸法でいうと約０．５から２
５０ミクロンの寸法領域、好ましくは、１ないし８０ミ
クロンの寸法領域に入った光反応領域を検出するのに適
している。粒子あるいは粒子の塊を検出する場合に、約
０．５ミクロンよシ小さな粒子は一般的にシンチレーシ
ョンよりも光散乱を起し、また２５０ミクロンよシ大き
な粒子は視覚的強化装置を用いなくとも容易く観察でき
る。

例えば、非連続的な単一層における中断個所のように、
特別的でない光反応領域が検出された場合は、それらは
一般的に上述した寸法領域と同一の寸法領域（なってい
るのであろう。本発明をさらに記述していけば明らかに
なるように、本発明の方法はまた粒子を支持している媒
体における光反応領域の存在を郭定するとともに、その
寸法を明確に郭定するためにも利用できる。

本発明のシステムにおける重要な要素は、チルの照明点
源と、支持媒体を該多数の照明点源とシンチレーション
検出装置との間に配置するための装置と、光線と支持媒
体との間に相対的な運動を生じさせるための装置とであ
る。

本発明ｔ−冥施するのに有用な多数照明点源は、好まし
くは電灯のような単光源から光を取入れてそれを多数の
分離的な光線に分割するような、伝送面あるいは反射面
である。従って、該分離的な光線は、上方から照らされ
た適当な後方反射面によって、あるいは微小な孔あるい
は透明領域を有した、下方から照らされる不透明な面に
よってつくシ出される。

特に有用な多数照明点源はガラスビードを固定した単一
層、例えば、黒色樹脂で構成された後方反射面である。

この型の面は単一光源によって上方から照らすことがで
き、各々のガラスビードは反射光線を発する。ガラスビ
ードの寸法、および樹脂の屈折率が反射光線の直径を明
確に郭定するであろう。このをの後方反射面は米国、ミ
ネソタ州、セントボールのスリーエム社からスコッチラ
イトの商標名で市販されている。

利用可能な他の後方反射面にはその中に後方反射性のビ
ードを含有した液体フィルムがある。そのような面の例
としてはコジットという後方反射性ビード（米国、ミネ
ソタ州セントボールのスリーエム社）を含有したフィル
ムがある。

本発明の目的に関していうと、直接的な光線を多数の分
離的な光線に分割する丸めに、各種の他の型の面を利用
することができる。光を伝送するために適当に小さく、
分離的な孔あるいは透明な領域を有している面ならどの
ようなものでも利用することができる。％に適している
のは写真技術に普通に用いられている網版スクリーンで
ある。

また光学繊維の束の断面によって形成された面も有用で
ある。元を分離的な領域へ伝送するようなつや消しガラ
ス面、浮彫シを施した面、およびその他の面もまた適し
ている。多数の照明点源によってつくられた光線は均一
である必要もなく、また規則的に並んでいる必要もない
。

支持媒体を照らす個々の光線の直径は該面内の光伝送領
域の直径に左右され、また後方反射面の場合には、個々
の後方反射部分１例えば、ガラスビードの直径に左右さ
れる。該光線の直径は顕微鏡写真の技術によって容易に
測定することができる。。特別な試験手順において、多
数の照明点を発生させるための面を選択する場合に、検
出しようとする光反応領域の寸法に対して幾つかの考慮
を与えなければならない。

約０．５ないし２５０ミクロンの寸法領域において特別
な、あるいは特別ではない光反応領域をシンチレーショ
ン法によって検出するために、該支持媒体は好ましくは
多数照明点によって照らされ。

個々の光線の直径（顕微鏡写真的に測定したもの）と、
該領域の直径上の比は約５０対１ないし１対１０である
。この比の正確な値は広範な制限値の中にあって重要な
ものではなく、最適な条件は、支持媒体と多数の照明点
面との距離とか、移動速度とか、領域の光伝送特性とい
った要因によって郭定され、各試験によって変化するで
あろう。大部分の目的に関していうと、直径１０ないし
１００ミクロンの光線を発生する面が用いられるであろ
う。

上述したように、シンチレーションを起させるためには
、個々の光線と支持媒体との間、あるいは試験媒体と光
線とが互いに他と離隔されている場合には、シンチレー
ション検出装置と試験媒体との間、あるいはシンチレー
ション検出装置と光線との蘭に相対面な運動全行なわせ
なければならない。この運動は支持媒体を静止した多数
の照明点面に対して相対的に水平方向あるいは上下に動
かすことによって簡単に行なわれる。この時の移動速度
は光反応領域の寸法および光線の寸法によっては、大き
く変動してもかまわない。非常罠小さな粒子、例えば、
０．８ミクロンの粒子が流体媒体の中で懸濁されている
場合には、シンチレーションをつくシ出すのに外部発生
的な運動は必要でない。これは明らかに流体内の粒子の
固有的な無作為運動（ブラウンの運動）をするためであ
る。

もつと大きな領域、例えば、５．０ミクロンおよびそれ
以上になると、移動速度は一般的に１ないし３０ｃＩｒ
Ｌ／分の範囲内に入るであろう。とにかく、最適の移動
速度は、検査員が支持媒体を光源に対して相対的に各種
方向へ、手動で動かすことによシ容易に経験的に郭定さ
れる。

シンチレーション効果は普通は最も簡単に観察すること
ができる。しかしながら、シンチレーショ／を検出する
ための他の装置も技術的に使用可能でアシ、該システム
の中でも用いることができる。そのような装置の例とし
てはソリッドステート式のスキャニングアレイ、例えば
、チャージカップリング装置や、フライングスポットス
キャナー、あるいはイメージデテクターがあシ、これら
各々は記憶装置に連結されている。シンチレーションの
情報を集めるために連続的な写真を用いてもよい。

支持媒体は好ましくは多数照明点の面とシンチレーショ
ン検出装置との間において薄い層あるいはフィルムとし
て配置される。これは支持媒体が検出しようとしている
粒子を包含している液体である場合には最も重要なこと
であシ、この場合には、液体の薄層は粒子が上方あるい
は下方から互いにマスクをかけてしまう可能性を減らす
であろう。このマスキング効果によって粒子はよシ大き
く見え、その結果幾らか歪んで見えることになる。

従って、液体支持媒体は一般的に多数照明面上に直接、
１＠あるいは数滴として配置されるか、あるいはプラス
チックフィルムあるいはガラススライドのような透明な
平旦面上に配置されて、該面からは離隔配置される。該
支持媒体は透明な基板の表面上に、粒子を含有した液体
の蒸発あるいは空気中からの粒子の沈澱によって、沈積
された乾燥したフィルムであってもよい。

媒体によって支持された光反応領域の濃度を比較的低く
保つこともまた望ましいことである。この濃度が高いと
、結果として光線との反応が多すぎて、従ってあらゆる
時点において点滅する光線の数を減少させることになる
。最適の濃度は実施している試験の型によって幾分変化
するが、一般的には、媒体が液体の時には支持媒体にお
ける光反応領域の濃度は１０体積幅以下であるべきであ
る。乾燥フィルム媒体を用いている時には、液体が蒸発
する前の液体中の粒子の濃度もまた、好ましくは１０体
積チ以下である。

本発明は支持媒体中において光反応領域の存在すること
を検出するのに広範な有用性を有している。特に医療分
野においては、生物学的材料を含んだ粒子塊状化反応全
検出するのに可屈である。

１生物学的材料°という言葉は生命のある有機体−の中
で発見されたシ、するいはその一部分である、すべての
物質を示す、粒子塊状化反応においては、検出しようと
する特定の生物学的材料と反応することが知られ、かつ
塊状化反応を起させることが知られた試薬が一般的に用
いられる。従来からこのようにして検出されてきた生物
学的材料は細胞であり、例えば、血Ｈｈるいは細菌、お
よび各種の抗原、抗体である。代表的な粒子塊状化反応
には膠着化試験があシ、妊娠、リウマチファクター、伝
染性単核症、はれた紅斑症、シん病、細菌性伝染病、等
を検出するために用いられる。これらの試験は一般的に
２つの型からなシ、直接型と間接型とがある。膠着化は
直接試験では陽性反応を示し、間接試験では陰性反応を
示す。直接型の膠着化試験は代表的には担体粒子、例え
ばポリスチレンラテックスを用い、これは郭定しようと
する生物学的材料と反応することのできる物質によって
被覆されている。間接試験では郭定しようとする生物学
的材料で被覆された担体粒子である１試薬と、膠Ｎ剤の
第２試薬とを用いる。従来の膠着化試験は流体媒体の中
で行なわれ、試験サンプルは一般的には血液や、尿、等
の体液である。膠着化されていないラテックス試薬は、
普通は直径１ミクロン以下の粒子でつくられておシ、ミ
ルク状の外観を呈している。膠着化反応は一般的には肉
眼で見ることのできる塊状粒子によって示されるが、そ
こでは数ミクロンのラテックス粒子が直径数百ミクロン
の粒子と合着している。

本発明による方法と検査器を用いると、塊状粒子が裸眼
で見える程に十分大きくなる前に、膠着化現象の存在を
検出することが可能である。従って、感度の改良が結果
として得られる。さらに、全ての塊状粒子が、その全体
的な構成あるいは形状に係わりなく、１つの観察可能な
現象、シンチレーションという結果を生じるので、その
読取シ性が著しく改良される。これは従来の肉眼的に観
察された塊の解釈と異なっていて、従来ではその試験お
よび検査員によっては、その呼び万も、例えば、塊、斑
紋、小粒等に変化する。粒子塊状化反応を観察するため
にシンチレーションを用いることの他の利点は、検皇員
がサンプルを全体的に見ることができ、数ミクロンとい
う微小なものまで解像できるという点にある。助けを借
シない普通の眼では直径約５０ミクロンぐらいの小さな
ものしか解像できないので、伝統的な技術による解像と
同一のものを得るためには拡大することに頼らねばなら
ない。拡大の手段に頼ると、視野が拡大の程度に直接関
連して制限を受ける。

本発明のシステムはまた乾燥状態における反応粒子の試
験を行なうための便利な方法を提供する。

この方法によって血液のクロスマツチング試験や、発熱
抗原の試験や、細菌確認試験、等がうまく行なわれる。

これらの試験に関していうと、例えば。

細胞のような粒子の予じめ郭定された濃度の試験溶液あ
るいは懸濁液を、清潔な面上に配置し、液体ｋＷ発させ
ることが望ましい。該濃度および表面領域は、粒子間に
反応が生じない場合には、本質的に連続的な単一層ある
いはフィルムが該面上に沈積されるように選ばれる。該
連続的な単一層は光を均一に伝送し、該フィルム七本方
法によって調べてもシンチレーションは見られないであ
ろう。もし粒子間に少しでも反応が生じると、粒子と粒
子との反応の結果として〒断個所が生じ、非連続的な単
一層が沈積されるであろう。これらの中断個所は多数の
照明点によって照らされると、シンチレーションを生じ
さぜる原因となるであろう。

当業界においては、粒子がその寸法を減少させるような
（例えは細胞溶解）ある種の反応もまた。

本システムによって観察できることが明らかであろう。

液体媒体においては、粒子崩壊の結果、粒子寸法がシン
チレーションにとって重要な寸法以下に減少し、シンチ
レーションが消滅してしまう。

乾燥状態においては、予しめ定められた表面領域上で乾
燥される懸濁液の濃［’に慎重に選択すると、乾燥前に
粒子崩壊が生じない場合にはシンチレーションを発生し
、完全乾燥する前に粒子崩壊が生じる場合にはシンチレ
ーションを発生しないようなフィルムをつくシ出すこと
ができる。

シンチレーション法を用いて、各種の光反応領域の寸法
を郭定することも可能である。これは、既知の寸法の光
線を発生する多数照明点面を選択することにより行なわ
れ、これによって既知の寸法以上の光反応領域のみがシ
ンチレーションを発生させるであろう。この手順を続け
る場合には、移動速ｆ’ｒ慎重に制御することも重要で
ある。光線の寸法と、粒子の寸法と、移動速度との間の
関係は後述の実施例５に説明されている。

医療分野以外の分野においても、本発明は気体媒体ある
いは液体媒体における重要な寸法の汚染物が存在するの
を検出するために用いることができる。該方法は媒体中
に光反応領域が存在することを認識することが望ましい
ような他の多くの応用と同様に、相滴定の終点、２よび
各種解析試験で微小な沈澱物の存在することを郭定する
ためＫも用いることができる。

本発明は添付図面を参照すると容易に理解することがで
きるであろ５゜ 第１図においては検査器１０の外観が示されておシ、該
検査器は検査員がシンチレーションｔ−見るための窓１
４ｔ−有した接眼部１２ｔ−包含する。

ハウジング１６が検査員の視界を取囲んでおシ、室内の
照明からのまぶしい光が入るのを防いでいる。ハウシン
グ１６の下部（は７レーム１８に取付けられ、かつそれ
によって支持されている。検査台２０が７レーム１８に
取付けられ、その上面が接眼部１４全通して観察できる
ように位置づけられている。該検査台２０は検査を行な
っている間は試験媒体のサンプルを支持する。該検査台
２０は好ましくはそれにあたる光からのまぶしさを減ら
すために黒色あるいは暗色をしておシ、フレーム１８に
よって枢軸的に支持され、垂直方向に円弧を横いて動く
ことができる・ようになっている。指押え２２が検査台
２０から連続的にのびだしており、検査員はこれによっ
て検査台２０の動きを手動制御できるようになっている
。本実施例においては、検査台２０上には、固定された
ガラスピードを包含するシート状の後方反射表面が位置
される。分析すべき試料は該後方反射表面上に直接沈積
されるか、あるいは該後方反射表面上に置かれた薄い光
学的プレートあるいはフィルム上に沈積される。

第２図は検査器１０の断面図であシ、ハウジング１６は
ランプ２４と、集光レンズ２６と、ビームスプリッタ２
８とを支持し、かつそれらを取囲んでいる。ランプ２４
は）−ウゾング１６の後部中央に支持され、該検査器内
での光源を形成するフィラメント２５を有している。ラ
ンプ２４はフィラメント２５の最長寸法部分が検査台２
０の長さ方向に平行になるように、７レームの頂部に取
付けられている。ランプ２４はどのような可視波長の光
あるいは多数波長の元を発生してもよい。ランプ２４の
好ましい実施例は４０ワツトの白熱灯でるる。

集光レンズ２６はランプ２４の前方に隔置されておシ、
ランプ２４ηふらの光を平行光線として集光し伝送する
ｔめＫ、該レンズの軸は水平になっていて、かつランプ
２４のフィラメント２５の中心を通過するように７にっ
ている。ここで説明しているレンズに７レネルレンズで
める。

ビームスプリッタ２８は、巣元レンズ２６によって伝送
された平行光線の軌道の中で、ハウシング１６によって
支持され、また該集光レンズからの元の一部分を検査台
２０上へ反射させるために該レンズおよびランプの光学
軸に対しである角度ｆｔｚして傾斜している。検査台２
０上に後方反射表面が配量されると、該ビームスプリッ
タ２８から反射された光の一部分は該表面から直接的に
後方反射され、該ビームスプリツタ２８ｆ、通シ、さら
に窓１４を通シ、検査員の眼の中に入る。ここで説明し
ている実施例においては、該ビームスシリツタ２８は半
銀鏡であシ、集光レンズ２６に対向した面上に銀メッキ
されている。

Ｍ、責合２０は検査員によって移動されるように構成さ
れている。ここで説明している実凡例においては、検査
台２０は枢軸シャフト３０に取付けられ、かつそれに支
持され、検量台２０ｔ？垂直方向に約２５にの円弧を描
いて動かせるようになっている。該検査台ｚＯにはばね
部材３２が取付けられ、かつ該検査台の動きを制御する
ために該枢軸シャフト３０に対して撃擦的に取付けられ
ている。

第３図は、従来の免疫学的試ｐ、ｔ−行なうために、本
発明の検査器に関して用いられる試料カードの上面の平
面図である。該試料カード３４は平旦でほぼ長方形の基
板３６を包含し、該基板は従来の免疫学的試薬の乾燥沈
積体を含有した少なくとも１つの区画的な試験領域３８
ｔ−その表面上に有している。該基板３６の試験領域３
日内における部分は、検査台上に置かれた時には多数の
照明点を発生することが可能でなければならず、また光
源によって照らされなければならない。好ましくは、該
基板は固定的ながラスピードを包含する後方反射面を有
し、該ガラスピードが上βλら照らされた時に１多数の
照明点を発生させるであろう。あるいは、該基板は、下
から照らされた時く多数の照明点を発生させる網板スク
リーンのように、微小孔あるいは透明部分を有した材料
でつくってもよい。乾燥された免疫学的試料は該基板上
めるいは透明なフィルム上でＮ接に乾燥させてもよく、
あるいは該基、板上に置かれかつそれに接着された板上
でＩ接乾燥させてもよい。該免疫学的試料はその準備方
法として試料カード上に位置させてもよく、それらを再
構成し、本体流体と混合させる方法は、例えば、米国特
許第５，６６６，４２１およびｇ　５，７７０，３８３
．において既に知られておシ、記述されている。

免疫学的試薬が再構成され、かつ適当な本体流体と混合
されると、試験カードが検査台上に置かれ、談合が検査
員によってゆつくシ動かされる。

もしシンチレーションが観察されると、膠着あるいは粒
子凝集が発生し、結晶穴の光反応領域が生じていると結
論することができる。・試験カード上には多数の試験領
域を設けてもよい。３つの試験領域を設けることがしば
しば有用である。というのは未知のサンプルを陽性コン
トロールおよび陰性コントロールと同時に比較すること
ができるからである。

第４図は本発明の検査器の他の実施例を示しておシ、そ
こでは検査器４０は、ランプ４４によって下から照らさ
れるとそれ自身で多数の照明点を発生させることのでき
る検査台４２を包含する。

あるいは、該検査台４２は透明であってもよく、また下
から照らされると多数の照明点を発生することのできる
面をその上に配置してもよい。説明している実施例にお
いては、ランプ４４は螢光灯である。操作くおいては、
多数の照明点を発生する表面あるいは表面上に置かれた
光学的板の上に。

分析しようとする液体サンプルを直接沈積させてもよい
。乾燥サンプルを分析する場合には、該サンプルは一般
的に多数照明面上に置かれた光学的板上に配置される。

個々の光線とサンプル内の粒子との間には、該光学板′
ｔ−該表面上で動かすことによって相対運動が発生され
る。

第５図は４０ワツトの白熱灯によって上から照らされた
、固定のガラスピードを包含した後方反射面の顕微鏡写
真でおる。個々の光源は典壓的〈は直径１５ないし８０
ミクロンである。視覚による検査を行なうと、眼のスト
レスを防ぐために、光源の寸法に対して何らかの考察を
得ることができるはずである。

添付図面は本発明の好ましい実施例を示しているが、該
検査器は多くの形に構成することが可能であシ、また該
装置の要素をノ・クゾングの中に入れることの必要性も
ない。試験を行なう時に室内が元弁暗ければ全ての要素
さえ存在すれば、ノ・ウジングがなくともシンチレーシ
ョンｔＭ察することができる。多数の照明点を発生させ
るために後方反射面が用いられる場合には、光源と適当
なレンズを包含した手づかみ式の検査器を用いることも
で迷る。シンチレーションを観察するために、後方反射
面と関連して、米国特許第３，８３２，０５８に記述さ
れているような適当な手づかみ式の検査器を用いること
ができる。

本発明をさらに理解するためには、次の非限定的な実施
例を参照するとよいであろう。

実施例１ アンチヒユーマン　コリオニック　ゴナトドローン（ア
ンチ争エッチ・シー・ジー）で被覆された直径約Ｏ，Ｓ
　ミクロンの粒子でできた従来のラテックス試薬はワム
ボールのダツプ妊娠試験キット（米国、コネチカット州
、スタン７オードのワム？−ル研究所）からのものを用
いた。人間の尿を２つのサンプルとして用いた。第１サ
ンプル（サンプルＡ）は妊娠していない人間からとった
ものでオシ、測定できる程のヒユーマン　コリオニツり
　ゴナドトロぎン（エッチ・シー・ソー）ハ含んでいな
かった。第２サンプル（サンプルＢ）は妊婦からとった
ものであシ、滴定濃度が２５．６国際単位／ミリリット
ル（工ｕ／ｍＪ）　　のエッチ・シー・ジーを包含して
いた。

サンプルＢ、１、Ｋ対してテン。ゾルＡ、３、を混合し
、それを連続希釈して、エッチ・シー・シーの濃度’ｋ
Ｋにした尿サンプルをつくシ出した。

２５マイクロリツトルのアンチ・エッチ・シー・シー　
ラテックス（約１０分間超音波処理したもの）、’ｔ、
ｚｓマイクロリットルの各尿テンプルとを混合した。こ
の混合物を毎分１２０回転の速さで２ないし１２分間回
転さ讐た。この混合物は、該試薬と尿との混合換金試験
スライドの表面上に滴下させ、該スライドｔ−１分間ゆ
るやかに振動させるといつ之ワムボールの標準的なダツ
ゾ手順によって、膠着化を監視した。該混合物の様子を
ラテックスコントロールの様子と比較した。もし試験混
合物の中に膠着化がみられ、ラテックスコントロールの
田にみられなければ、この試験体は陽性であると見なさ
れる。

該混合物はまた本発明によるシンチレーション法によっ
ても膠着化を監視された。各サンプルの数滴がスコッチ
ライト後方反射面（直径１５ないし８０ミクロンのガラ
スビードを包含している）上に滴下された。該表面は第
１図に示しだと同様な検査器の中で、４０ワツトの白熱
灯によって照らされた。スコッチライト面上の流体は、
約１６ｃＩｒＬＺ分の速さで垂直方向の円弧上を動され
、サンプル内の粒子の運動を行なわせた。試験の結果は
次表（示す。

上の結果によると、シンチレーション法は明らかな陰性
反応から陽性反応だと見分ける能力を改良し、またこの
システムが従来方法に勝る改良点を提供するということ
がわかる。

実施例２ 試験 リウマチ７アクタ一侵度の減少量がわかっている人間の
血清に関するサンプルを、ワムボール研究所（米国、コ
ネチカット州、スタンフォード）からりウマチファクタ
ーの試験器として市販されているＲ３スクリーン試験器
を用いて解析した。このＲ３スクリーン試験器に関して
従来方法を用いた場合に陰性コントロールと区別のつか
ない結果を提供するようなテンプルを選択した。この手
順は、を間接光を用いて暗黒背景のもとで観察すること
とからなっていた。陽性反応を示す試験管の中では、膠
着化したラテックスは完全に試験管の底に沈むか、るる
いは、肉眼では懸濁状になった粗大な塊を見ることがで
きる。陰性反応を示す試験管の中では、膠着化がおこら
ず、懸濁液も均一に乳液状になったままである。選択し
たサンプルは上記したＲ３スクリーン試験器において１
つの規定値として定められている１／８０の滴定１１１
度を有している。

このサンプルを次に本発明によるシンチレーション法を
用いて試験した。Ｒ３スクリーン試験試薬を用いた（ハ
イランドグリシン−サライン試薬Ｋｆｔ換えることもあ
る）。この後の手順としては、１滴の血清と１滴の緩衝
溶液とをスコッチライト面（直径１５ないし８０ミクロ
ンの固定的なガラスビードを包含する）上で混合し、こ
れに２滴のラテックス試薬を加え、これｔ−３分間攪拌
する。

該表面は液俸が該混合′ｆＷＪ円で分かれ、粒子運動が
生じるように傾けられ、手づかみ式の後方反射検ｉ器（
スライド・オー・ライト、米国、ライス’：Ｘ　７　’
／　７　州、ラシネニあるライスコンシンエレクトロニ
クス社製）を用いて照らした。

多数のサンプル対土で行なわれている膠着化反応の結果
を、（１つはりクマチファクタが陰性のもの、他は１７
８ｏ　　の滴定４に度を有した弱陽性のもの）従来方法
およびシンチレーション法によって読み取るように３人
の人間に依頼した。全てのケースについて同一の試薬と
同一の混合手順が用いられ、サンプルは無作為的に取出
した。各サンプルについて記録し、零から４までの評価
を出し、４ｔ−膠着度が最高のものとして示した。各方
法によって得られた后果について比較した。

行なった。この結果、シンチレーション法によって解析
した弱陽性サンダルは陰性サンプルよシも十分大きな平
均記録が得られたのに対し、従来方法によって解析した
弱陽性サンプルは実際には陰性サンプルよシも小さな平
均記録が得られた。これらの結果から、本発明によるシ
ステムの感度が改善されたことがわかる。

実施例３ 本実施例は、不質的に連続的な単一層を形成するために
、清潔なフィルム上の単位表面積毎に塗付し、かつ乾燥
させるべき、本質的に無反応的な赤血球の懸濁液の最適
濃度ｆ、選択することを実証しようとするものである。

本質的に連続的な単一層は光を均一的に伝送し、従って
、シンチレーションは生じない。

燐酸緩衝塩の中で３回洗滌された血球から、２５重量％
の０型赤血球の懸濁液を、燐酸緩衝塩の中で準備した。

この＠ｇ、ｔ−燐酸緩衝塩で希釈したものは、清潔なフ
ィルム上で均一的に沈積さぞた時には、次の表に示した
ような濃度（血球量／ＣＩｒＬ２）を示した。

各々の乾燥されたフィルムを、多数の照明点の光源とし
て２つの１５ワツトの螢光灯によって下から照らされた
、各種寸法の網版スクリーンを用いて、そのシンチレー
ションを試Ｍした。この結果も上の表に示してあり、そ
こではシンチレーションの程度ｔ−Ｏから３までの比率
″として示しである。零はシンチレーションがなかった
ことを示す。

十％というのはほとんどシンチレーションのなかったこ
と全示し、また＋１、＋２はそれぞれ弱、および中間の
シンチレーションを示している。

この実施例からの情報、例えは、連現的な単一層になる
ような、本質的に無反応的な血球の懸濁濃度は、血球間
のわずかな反応でも検出するための条件を選択するのに
有効である。無反応的な赤血球の８濁ａ度と、清潔なフ
ィルム上の表面積とは、清潔なフィルム上で乾燥させた
時に連続的な単一層を与えるような最適条件に帰結する
ように選択した。これらの条件のもとで測定された血球
のクロス−マツチは次の実施例４のようになった。

禾実施例からの情報はまた血球溶解のような粒子崩壊を
検出するための試験を行なうのにも有用である。血球の
最適製置と、血球のやや非連続的な単一層を結果として
つくシ出すよう荘沈積およびその後の乾燥のための最適
な表面積とが郭定される。非連続的な単一層は本発明の
方法によって検査した場合にシンチレーションをつくシ
出すことになろう。この沈積単位面積めたシの血球濃度
を用いて、血球溶解が生じているかどうかを郭定するこ
とができる。溶解した血球は全ての血球と同一の非連続
的な単一層に存在することなく、従って溶解した血球は
シンチレーションを発生させないでろろう。実施例５は
血球溶解の英検について記述している。

実施例４ 血液のクロス・マツチング試験 次のような混合物を準備し、それをシンチレーション法
を用いて解析した。即ち、（１）　Ａ１温赤血球の懸濁
塩を１滴と、Ａ凰およびＢ型赤血球に対する抗血清を２
滴；と（２）Ａ２型赤血球の懸濁塩を１滴と、Ａ塁およ
びＢ型赤血球に対する抗血清ｔ−１／ｇｏ　　に希釈し
たものを２滴；と（３）０梨赤血球の懸濁塩？：１滴と
、Ａ型およびＢ型赤血球に対する抗血ｆｆ、２滴；とい
った混合物である。該懸濁塩は各々、３回洗滌された赤
血球を約５重量％含んでいた。（抗血清はオルソダイア
グノスティック、オルン７アーマシューテイカル社から
得７’ｃ、）各混合物を薄い層として透明のプラスチッ
クフィルム上に塗付し、該フィルムｔ−２００ミクロン
ずつ均一的に離された（孔の中心と隣の孔の甲心との距
離）５０ミクロンの孔を包含した網版スクリーン上に配
置した。該網版スクリーンをその下から２つの１５ワツ
トの螢光灯で照らした。該プラスチックフィルムを網版
スクリーンに対してゆつくシ（約１０ないし２０　ｃ！
ｒＬ／分）動かした。

混合物（１）は直ちにシンチレーションを見せたが、粒
子塊が大きく厄長じていくにつれて次第に消滅していっ
た。混合物（２）は湿った状態ではわずかなシンチレー
ションしか見せなかったが、水分が蒸発した後に見ると
あざやかなシンチレーションを見せた。

混合物（３）は湿った状態でも、乾燥した状態でも本質
的にシンチレーションを示さなかった。混合物（２）と
（３）とは共に、普通の、顕微鏡以外の、装置で見た場
合に、塊状のものは見られなかった。

実施例５ 溶解されていない血球と溶解した血球とを区別するのに
シンチレーション法が利用できるかどうかを郭定するた
めに２つの試験溶液を準備した。

第１の溶液はＤ型緩衝のストレプトリジンを１．５ｍｌ
　（レデーレ研究所からのもの）と５％濃度の０車券皿
球２ａ、５ｔｎｔとを含有していた。第２の溶液にＯＷ
緩衝のストレプトリジンを１．０＋＋＋Ｊ（レデーレ研
究所のもの）と、Ｏ型ストレプトリジンを０．５ｍ１（
レデーレ研究所のもの）と、血球溶解醇素と、５チ′Ｉ
！に匿の０梨赤皿球を０．５１Ｌｌとを含有していた。

第１溶液あるいは第２溶液を含んだ清潔なプラスチック
フィルムを、既に窒気で乾燥された状態で、それぞれ直
径１４．２５．４９．８０ミクロンの孔を有した一連の
網版スクリーン上に配置したａ該スクリーンを２つの１
５ワツト螢光灯によって下から照らし、該フィルムを約
１０ないし２０ス／分の速さで動かした。各々のケース
についてシンチレーションの翌無を調べた。結果は次表
に要約しである。

２５ミクロン孔を有する網版スクリーンが、この試験条
件のもとての、溶解されていない赤血球と溶解された赤
血球とを区別するのに最も有効であることがわかる。

実施例６ 本実施例はシンチレーション発生を最適化させるための
粒子寸法と、個々の光線の寸法と、移動速度との間に存
在する関係を説明する。

標準試料として、デューク研究所から得た５・０および
２０．０ミクロン直径のポリスチレン粒子と、メリサイ
エンス社から得た０・８ミク；ン直径の粒子とを用いた
。これらの粒子は懸濁水溶液として、１４Ｚいし８０ミ
クロン直径の孔を有した一連の網版スクリーンの各々に
対して、下から照らして試験した。

否々の粒子寸法、および各々の網版スクリーンの孔寸法
に対して、シンチレーションの現われる時の速＃を郭定
した。その結果を次表に要約した。

表において、各グループの中の２つの速腿数値のうち、
最初の数値はシンチレーションが現われる時の速度であ
シ、第２の数値はシンチレーションが消滅する時の速度
である。

１４　　　　　０／３．８　　　　　１．２／８．６　
　１．５／１！ｉ、１２５　　　　　　０１５．４　　
　　　１．３／１３．０５２　　　　　０／１４．２　
　　　１．８／１６．７　２．１／１８．４５０　　　
　ＺづシＥ９ン無し ８０　　　　７づシづタン無し　　４．８／２１　　　
３．８／２０．０このデータは粒子寸法が１大するにつ
れてシンチレーション金発生させるのにも、止めるのに
もよシ速い速度が要求されることを示している。しかし
ながら、もし粒子濃度が、粒子がグル−プとしてふるま
うような濃度にまで増大されると、非粒子スペースが該
効果を支配するようになシ、またシンチレーションを発
生させるためには速度を落とすことが必要となろう。す
べての粒子寸法に関して、シンチレーションを観察する
ために、網版スクリーンの孔寸法（即ち個々の光線の寸
法）が増大するにつれて、よシ速い速度が必要となる０
、８ミクロン程の小さな粒子になるとシンチレーション
をつくるのに外部的に発生させる速度は必要でなくなる
。非常に小さな粒子（０，８ミクロン）が比較的大きな
光線（５０ないし８０ミクロン）で照らされる場合には
シンチレーションは見られない。これらのデータはまた
シンチレーションが厳密には１全部か零か１といった現
象ではなく、その質と量とが異なってくることを示して
いる。

この実験に用いた粒子は不透明体ではなく、むしろ従来
の兇疫学的試験に用いられたと同様な半透明のポリスチ
レン粒子であった。不透明粒子を用いると結果は少し異
なるかもしれない。

実施例７ 本冥厖例は空気中に粒子が存在することを検出し、証明
するためにシンチレーション法ｋＭいることによって説
明するものである。

２７リツトルの袋の中に５０マイクログラムのカざシル
（米国、マサチュセツシュ州、ボストンのＩビット社製
の蒸発されたシリカのグレードＭ−５）を分散し懸濁さ
せた。２０ｃＩｒＬ×３０ｃＩｒＬのポリエステルフィ
ルム（米国、ミネソタ州、セントボールのスリーエム社
製の４ミル厚さの写真用ペースを塗付した写真フィルム
）の片側の全面およびその反対側の半面に、取外し可能
な保護フィルムｔ−ηλぶせた。このポリエステルフィ
ルムをカポシルの蒸発されたシリカ粒子を含んだ袋の甲
へ１・５分間用るした。このように露出させた後、保ｒ
！ｉフィルムを取除き、該ポリエステルフィルムの露出
された領域と保護された領域の両者についてシンチレー
ション試験を実施した。多数の照明点の源として、下か
ら２個の１５ワツト螢光灯によって照らされた各種寸法
の網版スクリーンを用いた。その結果を次の表に示すが
、ここではシンチレーションの程度ｔ−ｏから＋３の比
ぶて示している。零はシンチレーションの無かったこと
を示し、＋１、＋２）＋３はそれぞれ弱い、中間の、そ
して強いシンチレーションがあったことを示している露
出フィルム　保護フィルム ｉ４　　　　　　　　　　　　　　　＋１　　　　　　
　　　　　　　０２５　　　　　　　　　　　　　　　
＋１　　　　　　　　　　　　　０４９　　　　　　　
　　　　　　　　＋２　　　　　　　　　　　　　０８
０　　　　　　＋２ないし＋３０ シンチレーシヨンが最もよく観察できたのは、フィルム
が多数の光源から約０．５　ｆｍ離れ、検ｉ員が多数の
光源から約４０ないし４５ｃ！ｒｔ離れている場合でめ
った。

実凡例８ 本実施例は相滴定の終点を郭定するためにシンチレーシ
ョンの利用について説明するものである。

−遍の４塩化炭紫／インプロパツールの体積／体積混合
物を撫備し、この１０ゴを水で滴定し、ロゾヤースおよ
びオズソゴモンヤンによって記述された従来方法（１９
６３年のタランタ誌、第１０巻、６３３頁−６３９頁）
において、混濁終点まで滴定した。この１０Ｒ１の混合
物を本発明の方法でも滴定し、シンチレーショ／の発生
開始を終点として利用した。多数の照明点は、２つの１
５ワツト螢光灯を包含した光源箱によって下から照らさ
れた、直径８０ミクロンの孔を有した網版スクリーン（
孔中心と孔中心との距離が２００ミクロン）によってつ
くシ出した。

従来方法による分析 ８０／２０　　　　　　　０，３０ ７０１５０　　　　　　　０・４０ ６０／、４０　　　　　　　０．８０ ５０１５０　　　　　　　０．８２ ４０／６０　　　　　　　１・５９ ５０７７０　　　　　　　２．６０ ２０７８０　　　　　　　５．１７ １０７９０　　　　　　　９．７７ シンチレーシヨン法による分野 ８ｏ／２ｏｏ、１５ ７０７３０　　　　　　　０．２７ ６０７４０　　　　　　　０．４２ ５０７５０　　　　　　　０．５５ ４０／６０　　　　　　　１・１８ ３０／７０　　　　　　　２・４６ ２０７８０　　　　　　　５．２５ １０７９０　　　　　　　９．７５ 本笑実施はシンチレーション法のさらに他の利用法につ
いて説明しておシ、これは従来方法によるよりも速く、
かつ均一的に相訓定終点を読み取ることができる。

【図面の簡単な説明】

第１図は本発明に関して構成された検査器の前部、頂部
、および１個部を示した透視図、第２図は第１図の腺２
−２に沿ったみた断面図、第３図は該検歪器に用いるた
めの、多数の照明点をつくシ出す表面を有した試験カー
ドの平面図１第４図る。 図において １０・・・検査器 １４・・・検査窓 １６・・・ハウジング ２０・・・検査台 ２４・・・ランプ ３４・・・試験カード ３６・・・後方反射面 ３８・・・試験領域

Claims (4)

【特許請求の範囲】
1. （１）免疫学的試験を行なうための試験カードにおいて
   、乾燥された免疫学的試験試薬を含有する少なくとも１
   つの試験領域を区画した平坦な基板を包含し、これによ
   つて該区画された領域は単一の光源によつて照らされた
   時に多数の照明点を生じることができることを特徴とす
   る試験カード。
2. （２）特許請求の範囲第１項記載の試験カードにおいて
   、該区画された領域は後方反射面を包含することを特徴
   とする試験カード。
3. （３）特許請求の範囲第２項記載の試験カードにおいて
   、該後方反射面は固定的なガラスビードを包含すること
   を特徴とする試験カード。
4. （４）特許請求の範囲第１項記載の試験カードにおいて
   、該区画された領域は網版スクリーンを包含することを
   特徴とする試験カード。