JPS61128166A - クレアチン及びクレアチニンの一斉分析法 - Google Patents
クレアチン及びクレアチニンの一斉分析法Info
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- JPS61128166A JPS61128166A JP24985584A JP24985584A JPS61128166A JP S61128166 A JPS61128166 A JP S61128166A JP 24985584 A JP24985584 A JP 24985584A JP 24985584 A JP24985584 A JP 24985584A JP S61128166 A JPS61128166 A JP S61128166A
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- creatine
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- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/70—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving creatine or creatinine
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Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
（イ）産業上の利用分野
この発明は、逆相カラムクロマトグラフィを利用して、
試料中のクレアチンとクレアチニンとを分離して分析す
る一斉分析法に関する。
試料中のクレアチンとクレアチニンとを分離して分析す
る一斉分析法に関する。
（ロ）従来技術
クレアチンとクレアチニン含有試料の例えば血清中のク
レアチンは原発性筋疾患、筋炎、筋萎縮、甲状腺機能亢
進症などで増加し、また血清中のクレアチニンは腎機能
障害の適確な指標として知られている。従来両成分とも
Ｊａｆｆｅ反応を用いた比色法により測定が行われてい
るが再現性と感度に若干問題を有している。また高速液
体クロマトグラフィ （ＨＰ Ｌ Ｃ”）による両成分
の分析法としては、グラジェント溶離法で両者を分離し
ニンヒドリンを反応試薬してポストカラム反応を行い螢
光検出する方法が知られているが（Ｈｉｒａｇａ、 Ｙ
、。
レアチンは原発性筋疾患、筋炎、筋萎縮、甲状腺機能亢
進症などで増加し、また血清中のクレアチニンは腎機能
障害の適確な指標として知られている。従来両成分とも
Ｊａｆｆｅ反応を用いた比色法により測定が行われてい
るが再現性と感度に若干問題を有している。また高速液
体クロマトグラフィ （ＨＰ Ｌ Ｃ”）による両成分
の分析法としては、グラジェント溶離法で両者を分離し
ニンヒドリンを反応試薬してポストカラム反応を行い螢
光検出する方法が知られているが（Ｈｉｒａｇａ、 Ｙ
、。
Ｋｉｎｏｓｈｉｔａ、Ｔ、 ； Ｊ、Ｃｈｒｏｍａｔｏ
ｇｒ、 ２２６．４３ （１９８１））、この方法は両
成分のみを測定する手段としては若干複雑な方法である
。また血清中クレアチニンだけの測定については、一定
組成の移動相を用いるＨＰＬＣに付してクレアチニンを
分離し紫外吸光度検出器を用いて測定する方法が報告さ
れているが（Ａｍｂｒｏｓｅ、 Ｒ，Ｔ、、 Ｋｅｔｃ
ｈｕｍ、 Ｄ、 Ｆ、、Ｓｍ１ｔｈ、 Ｊ。
ｇｒ、 ２２６．４３ （１９８１））、この方法は両
成分のみを測定する手段としては若干複雑な方法である
。また血清中クレアチニンだけの測定については、一定
組成の移動相を用いるＨＰＬＣに付してクレアチニンを
分離し紫外吸光度検出器を用いて測定する方法が報告さ
れているが（Ａｍｂｒｏｓｅ、 Ｒ，Ｔ、、 Ｋｅｔｃ
ｈｕｍ、 Ｄ、 Ｆ、、Ｓｍ１ｔｈ、 Ｊ。
Ｗ、、 ； Ｃ１１ｎ、 Ｃｈｅｍ、 ２９．２５６
（１９８３） ） 、クレアチンについては同様の報
告がない。また上記の血清中のクレアチンをｆ（ＰＬＣ
によって分離して紫外吸光度検出器を用いて行う際は、
感度の要求から波長を２１０ ｎｍ付近の短波長に設定
する必要があり、血清中の夾雑物が影響して測定が困難
であった。
（１９８３） ） 、クレアチンについては同様の報
告がない。また上記の血清中のクレアチンをｆ（ＰＬＣ
によって分離して紫外吸光度検出器を用いて行う際は、
感度の要求から波長を２１０ ｎｍ付近の短波長に設定
する必要があり、血清中の夾雑物が影響して測定が困難
であった。
上記のように、クレアチンとクレアチニン含有試料の両
成分を一斉に高感度で再現性良好にしかも簡便に分析す
る方法は知られていない。
成分を一斉に高感度で再現性良好にしかも簡便に分析す
る方法は知られていない。
（ハ）目的
この発明は、上記状況においてなされたものであって、
クレアチンとクレアチニン含有試料の両成分を分離して
両者を高感度で良好な再現性にて簡便に分析する方法を
提供するごとを目的とするものである。
クレアチンとクレアチニン含有試料の両成分を分離して
両者を高感度で良好な再現性にて簡便に分析する方法を
提供するごとを目的とするものである。
（ニ）構成
この発明は、クレアチン及びクレアチニン含有試料をそ
のままか、又は該試料を予め除蛋白処理に付した後逆相
カラムクロマトグラフィに付して試料中の夾雑物を除去
して得たクレアチンとクレアチニン含有溶出液を、酸性
移動相の逆相イオンペアカラムクロマトグラフィに付し
てクレアチンとクレアチニンとを分離溶出し、得られた
溶離液の紫外線吸光度を測定してクレアチンとクレアチ
ニンとを分析することを特徴とするクレアチン及びクレ
アチニンの一斉分析法を提供するものである。
のままか、又は該試料を予め除蛋白処理に付した後逆相
カラムクロマトグラフィに付して試料中の夾雑物を除去
して得たクレアチンとクレアチニン含有溶出液を、酸性
移動相の逆相イオンペアカラムクロマトグラフィに付し
てクレアチンとクレアチニンとを分離溶出し、得られた
溶離液の紫外線吸光度を測定してクレアチンとクレアチ
ニンとを分析することを特徴とするクレアチン及びクレ
アチニンの一斉分析法を提供するものである。
この発明の方法で分析されるクレアチン及びクレアチニ
ン含有試料としては、両成分を含有する水溶液などはも
とより、生体の血清や尿などが挙げられる。
ン含有試料としては、両成分を含有する水溶液などはも
とより、生体の血清や尿などが挙げられる。
この発明の方法において、試料の除蛋白処理法としては
、通常の方法を用いることができ、例えば試料に過塩素
酸を加えて振盪し、遠心分離して蛋白を除去する方法な
どが挙げられる。
、通常の方法を用いることができ、例えば試料に過塩素
酸を加えて振盪し、遠心分離して蛋白を除去する方法な
どが挙げられる。
また上記除蛋白処理の後に行う逆相カラムクロマトグラ
フィは次のごとき方法で行うことができる。すなわち分
離カラムとしてはシリカゲルを担体とし、これにオクタ
デシル基、オクチル基、トリメチル基などを化学結合さ
せた固定相を有する化学結合型逆相カラムが用いられ、
例えばＢｏｎｄＥｌｕｔ Ｃ１８及び同Ｃ８（Ａｎａｌ
ｙｔｉｃｈｅｍ ｆｔｅｒｎａｔｉｏｎａ１社製）など
が挙げられる。移動相としてはｐ＋＋が２．０〜７．０
の緩衝液例えばリン酸ナトリウム、リン酸カリウムなど
の緩衝液が用いられる。
フィは次のごとき方法で行うことができる。すなわち分
離カラムとしてはシリカゲルを担体とし、これにオクタ
デシル基、オクチル基、トリメチル基などを化学結合さ
せた固定相を有する化学結合型逆相カラムが用いられ、
例えばＢｏｎｄＥｌｕｔ Ｃ１８及び同Ｃ８（Ａｎａｌ
ｙｔｉｃｈｅｍ ｆｔｅｒｎａｔｉｏｎａ１社製）など
が挙げられる。移動相としてはｐ＋＋が２．０〜７．０
の緩衝液例えばリン酸ナトリウム、リン酸カリウムなど
の緩衝液が用いられる。
またこの発明における逆相イオンペアクロマトグラフィ
は次のごとき方法で行うことができる。
は次のごとき方法で行うことができる。
すなわち分離カラムとしては、シリカゲルを担体としこ
れにオクタデシル基、オクチル基、トリメチル基などに
１Ｃ１＠＄固定相を有する化学結合型逆相カラムが用い
られ、例えば品性製作所製のＳｈｉｍ −ｐａｃｋ
ＣＬ Ｃ−ＯＤ Ｓ 、 Ｚｏｒｂａｘ ＯＤ Ｓ
（デュポン社！りなどが挙げられる。移動相としては例
えばリン酸ナトリウム、リン酸カリウムなどの緩衝液に
、保持時間調節用のアセトニトリルなどの有機溶媒とか
、イオンペア試薬としてアルキル硫酸ナトリウム、アル
カンスルホン酸ナトリウム、強酸強塩基の塩などを適宜
添加し、得られた混合液のｐＨをリン酸などで２，０〜
３．０に調整したものが用いられる。
れにオクタデシル基、オクチル基、トリメチル基などに
１Ｃ１＠＄固定相を有する化学結合型逆相カラムが用い
られ、例えば品性製作所製のＳｈｉｍ −ｐａｃｋ
ＣＬ Ｃ−ＯＤ Ｓ 、 Ｚｏｒｂａｘ ＯＤ Ｓ
（デュポン社！りなどが挙げられる。移動相としては例
えばリン酸ナトリウム、リン酸カリウムなどの緩衝液に
、保持時間調節用のアセトニトリルなどの有機溶媒とか
、イオンペア試薬としてアルキル硫酸ナトリウム、アル
カンスルホン酸ナトリウム、強酸強塩基の塩などを適宜
添加し、得られた混合液のｐＨをリン酸などで２，０〜
３．０に調整したものが用いられる。
両成分の検出は波長が約２１０ ｎｍの紫外線の吸光度
を測定して行われる。
を測定して行われる。
また、試料に夾雑物が含まれていない場合には紫外線吸
光度の代りに屈折率を用いることができる。
光度の代りに屈折率を用いることができる。
（ホ）実施例
次にこの発明の方法を実施例によって説明する。
実施皿上
下記の純クレアチンとクレアチニンを含をする標準液の
試料を下記の分析条件で分析した。得られたクロマトグ
ラムを第１図に示したがクレアチンとクレアチニンが高
感度で分析されていることが分かる。なおこの分析を繰
り返したが良好な再現性で分析することができた。
試料を下記の分析条件で分析した。得られたクロマトグ
ラムを第１図に示したがクレアチンとクレアチニンが高
感度で分析されていることが分かる。なおこの分析を繰
り返したが良好な再現性で分析することができた。
ｉ）試料
クレアチンとクレアチニン各々１■／ｄ１含有の水溶液
５０μｌ（和光純薬工業製試薬特級使用）ｉｉ ）分析
条件 ａ分離カラム Ｓｈｉｍ−ｐａｃｋ ＣＬ Ｃ−〇 Ｄ Ｓ
（５，Ｑ＋＋ｎ φ Ｘ１５ｃｍＬ）ｂ移動相 ３０ｍＭラウリル硫酸ナトリウムを含有する１００ｍＭ
リン酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ２゜１）及びアセトニト
リルを３：１の体積比で混合し、この混合液のｐＨをリ
ン酸によって２．１に調整したもの。
５０μｌ（和光純薬工業製試薬特級使用）ｉｉ ）分析
条件 ａ分離カラム Ｓｈｉｍ−ｐａｃｋ ＣＬ Ｃ−〇 Ｄ Ｓ
（５，Ｑ＋＋ｎ φ Ｘ１５ｃｍＬ）ｂ移動相 ３０ｍＭラウリル硫酸ナトリウムを含有する１００ｍＭ
リン酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ２゜１）及びアセトニト
リルを３：１の体積比で混合し、この混合液のｐＨをリ
ン酸によって２．１に調整したもの。
Ｃ分離条件
カラム温度 ５５℃
移動相送液速度 ２ｍｌ／ｍ１ｎｄ紫外線吸光度
測定器 品性紫外吸光度検出器 ５ＰＤ−２Ａ （２１０ｎｍ吸光度） 実上拠１ ヒト血清（２００μβ）を前記実施例１のｉｉ ）分析
条件と同じ条件で分析し、得られたクロマトグラムを第
２図に示した。
測定器 品性紫外吸光度検出器 ５ＰＤ−２Ａ （２１０ｎｍ吸光度） 実上拠１ ヒト血清（２００μβ）を前記実施例１のｉｉ ）分析
条件と同じ条件で分析し、得られたクロマトグラムを第
２図に示した。
第２図によればクレアチンとクレアチニンが高感度で分
離され、その後に多量の夾雑物が分離されていることが
分かる。またこの分析を繰返したが高感度、良好な再現
性でクレアチンとクレアチニンとを分析できた。
離され、その後に多量の夾雑物が分離されていることが
分かる。またこの分析を繰返したが高感度、良好な再現
性でクレアチンとクレアチニンとを分析できた。
実濾Ｉ叱エ
ヒト血清（２００μｌ）を下記条件で分析した。
ｉ）試料の除蛋白処理
上記試料に１規定の過塩素酸溶液１００μｇを加えて振
盪し、１２０００ ｒ、ｐ、ｍ、で２分間遠心分離して
その上澄液を採取する。
盪し、１２０００ ｒ、ｐ、ｍ、で２分間遠心分離して
その上澄液を採取する。
ｉｉ）クレアチンとクレアチニン両成分の溶出上記上澄
液１００μ＃をＢｏｎｄ Ｅｌｕｔ Ｃ１８（Ａｎａ
ｌｙｔｉｃｈｅｍ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａ１社製）
を通過させる。さらに４００μｌの０．４ Ｍ リン酸
ナトリウム緩衝液（ｐＨ２，０）をカラムに注入してク
レアチンとクレアチニンを溶出させる。
液１００μ＃をＢｏｎｄ Ｅｌｕｔ Ｃ１８（Ａｎａ
ｌｙｔｉｃｈｅｍ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａ１社製）
を通過させる。さらに４００μｌの０．４ Ｍ リン酸
ナトリウム緩衝液（ｐＨ２，０）をカラムに注入してク
レアチンとクレアチニンを溶出させる。
ｉｉｉ ）前記両成分の分析
上記溶離液の５０μβを実施例１の分析条件ｉｉ ）に
よって分析し、得られたクロマトグラムを第３図に示し
た。
よって分析し、得られたクロマトグラムを第３図に示し
た。
第３図から明らかなように、実施例２のクロマトグラム
（第２図）における１０分以後の夾雑物の大きなピーク
が消失していることが分かる。なおこの分析を繰り返し
たが良好な再現性で分析することかできた。
（第２図）における１０分以後の夾雑物の大きなピーク
が消失していることが分かる。なおこの分析を繰り返し
たが良好な再現性で分析することかできた。
上記実施例２と３の結果からみて、試料が血清や尿のよ
うにクレアチンとクレアチニン以外の夾雑物を多量に含
有する場合に、実施例３のように試料を予め除蛋白処理
した後逆相カラムクロマトグラフィに付して夾雑物を除
去してクレアチンとクレアチニンとをｔ容出させておい
てから、その溶出液を逆相イオンペアクロマトグラフィ
に付した方が分析所要時間を短かくすることができるこ
とが分かる。
うにクレアチンとクレアチニン以外の夾雑物を多量に含
有する場合に、実施例３のように試料を予め除蛋白処理
した後逆相カラムクロマトグラフィに付して夾雑物を除
去してクレアチンとクレアチニンとをｔ容出させておい
てから、その溶出液を逆相イオンペアクロマトグラフィ
に付した方が分析所要時間を短かくすることができるこ
とが分かる。
（ハ）効果
この発明によれば、クレアチンとクレアチニン含有試料
の両成分を高感度で再現性良好に、簡便に分析すること
ができる。
の両成分を高感度で再現性良好に、簡便に分析すること
ができる。
第１図はクレアチンとクレアチニン含有の標準試料をこ
の発明の方法で分析した実施例で得たクロマトグラム、
第２図と第３図はヒト血清をこの発明の方法で分析した
実施例で得たクロマトグラムである。
４．−”−。 代理人 弁理士 野 河 信 太 部 ・ｒテ Ｉｎｊ。 （今） 第２図 （今） （令）
の発明の方法で分析した実施例で得たクロマトグラム、
第２図と第３図はヒト血清をこの発明の方法で分析した
実施例で得たクロマトグラムである。
４．−”−。 代理人 弁理士 野 河 信 太 部 ・ｒテ Ｉｎｊ。 （今） 第２図 （今） （令）
Claims (1)
- １、クレアチン及びクレアチニン含有試料をそのままか
、又は該試料を予め除蛋白処理に付した後逆相カラムク
ロマトグラフィに付して試料中の夾雑物を除去して得た
クレアチンとクレアチニン含有溶出液を、酸性移動相の
逆相イオンペアカラムクロマトグラフィに付してクレア
チンとクレアチニンとを分離溶出し、得られた溶離液の
紫外線吸光度を測定してクレアチンとクレアチニンとを
分析することを特徴とするクレアチン及びクレアチニン
の一斉分析法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP59249855A JPH0760152B2 (ja) | 1984-11-27 | 1984-11-27 | クレアチン及びクレアチニンの一斉分析法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP59249855A JPH0760152B2 (ja) | 1984-11-27 | 1984-11-27 | クレアチン及びクレアチニンの一斉分析法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS61128166A true JPS61128166A (ja) | 1986-06-16 |
| JPH0760152B2 JPH0760152B2 (ja) | 1995-06-28 |
Family
ID=17199186
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP59249855A Expired - Lifetime JPH0760152B2 (ja) | 1984-11-27 | 1984-11-27 | クレアチン及びクレアチニンの一斉分析法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH0760152B2 (ja) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPH02310468A (ja) * | 1989-05-25 | 1990-12-26 | Shiseido Co Ltd | クレアチニン，ホモバニリン酸及びバニルマンデル酸の自動分析装置 |
-
1984
- 1984-11-27 JP JP59249855A patent/JPH0760152B2/ja not_active Expired - Lifetime
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| ANALYTICAL BIOCHEMISTRY=1980 * |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPH02310468A (ja) * | 1989-05-25 | 1990-12-26 | Shiseido Co Ltd | クレアチニン，ホモバニリン酸及びバニルマンデル酸の自動分析装置 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPH0760152B2 (ja) | 1995-06-28 |
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