JPS61132189A - ダイズグリシニンｃＤＮＡ - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 本発明はダイズ貯蔵タンパク質に対応し、ダイズ種子よ
り得られ、ショ糖密度勾配遠心法により１８Ｓよりやや
重い画分に得られるメツ・センジャーＲＮＡ　（以下ｍ
ＲＮＡと略す。）およびその調製法に関する。

ダイズ種子に蓄えられる物”質の主なものとしてタンパ
ク質、脂質およびフィチン酸塩などが知られているが、
これらの貯蔵物質が種子の登熟過程でどのように合成さ
れ、蓄積されるのかを知ることは種子生理学的見地から
はもとより食品化学の面からも重要である。

本発明者はダイズ貯蔵タンパク質の生理学的役割、生産
方法等について研究を重ねてきたが、その過程において
ダイズ種子からダイズ貯蔵タンパク質に対応するｍＲＮ
Ａを抽出することに成功し、このｍＲＮＡからこれに対
応する相補的ＤＮＡ（以下ｃＤＮＡと略す。）を調製す
ることに成功した。このようにして得たＤＮＡを微生物
細胞内あるいは植物細胞内で発現させることにより目的
とするダイズ貯蔵タンパク質を製造することができる。

本発明はダイズ貯蔵タンパク質に対応し、ダイズ種子よ
り得られ、ショ糖密度勾配遠心法による分画により１８
５よりやや重い画分に得られるｍＲＮＡおよびその製造
法を提供するものである。

本発明のｍＲＮＡは、上記したようにダイズ貯蔵タンパ
ク質に対応し、ショ糖密度勾配遠心法やゲル濾過法によ
る分画ならびにアガロース電気泳動法により１８５より
やや重い画分として得られるものであり、このｍＲＮＡ
はダイズ種子より抽出分離することによって製造できる
。

本発明に用いるｍＲＮＡの材料としては種々の過程、た
とえば全熟期にあるダイズ種子を使用できる。

ダイズ種子よりダイズ貯蔵タンパク質に対応するｍＲＮ
Ａを抽出するには種子の種類を問わず常法によって行な
えばよい。たとえば組織を２〜５容のＮ　Ｐ　−４０，
Ｓ　Ｄ　Ｓ、　Ｔｒｉｔｏｎ　Ｘ−４００などの界面活
性剤とフェノール溶液を混合してホモゲナイザーや凍結
融解などの物理的方法を用いて細胞を破砕、可溶化し、
遠心した後の上清に冷エタノールを加えてＲＮＡを沈殿
させる。

また、必要に応じてダイズ貯蔵タンパク質に対応する抗
体を用いてダイズ貯蔵タンパク質合成途上のポリゾーム
を沈降せしめ、これによりｍＲＮＡを界面活性剤などで
抽出する方法を行なうことができる。

また、本発明のｍＲＮＡの精製については、オリゴｄＴ
−セルロース、ポリＵ−セファロースなどの吸着カラム
による精製法２等速（ｉｓｏｋｉｎｅｔｉｃ）なショ糖
密度勾配遠心法による分画等によって行なうことができ
る。このような精製操作により本発明のｍＲＮＡは１８
Ｓよりやや重い画分として得られる。

上記の如くして得られたｍＲＮＡが目的とするダイズ貯
蔵タンパク質に対応するものであることを確認するため
には、ｍＲＮＡをタンパク質に翻訳させ、その抗体等を
用いてそのタンパク質を同定する等の方法を行なえばよ
い。たとえばｍＲＮＡをタンパク質に翻訳するのによく
用いられる系であるＲｅｔｉｃｕｌｏｃｙｔｅ−１ｙｚ
ａｔｅ（綱状赤血球ライゼート）　、　Ｗｈｅａｔ　ｇ
ｅｒｍ　　（コムギ胚芽）などの無細胞系でタンパク質
に翻訳させることが行なわれる。

かくして得られたダイズ貯蔵タンパク質ｍＲＮＡの最大
の利用法は、これらのｍＲＮＡよりインビトロでｃＤＮ
Ａを合成し、適当なベクターなどに組み込んで微生物あ
るいは植物等でダイズ貯蔵タンパク質を生産することを
可能ならしめることにある。

このようなｃＤＮＡの合成は通常、試験管内で次のよう
な方法で行なうことができる。ｍＲＮＡを鋳型としてオ
リゴｄＴをプライマーとしてｄＡＴＰ、ｄＧＴＰ、ｄＣ
ＴＰ、ｄＴＴＰの存在下で逆転写酵素によりｍＲＮＡと
相補的な単鎖ｃＤＮＡを合成し、アルカリ処理で鋳型ｍ
ＲＮＡを分解・除去した後、オリゴｄＣを付加し、次い
でオリゴｄＧをプライマーとして単鎖ｃＤＮＡを鋳型に
して逆転写酵素あるいはＤＮＡポリメラーゼを用いて二
重鎖ｃＤＮＡを合成する。このようにして得られたＤＮ
Ａ両端を必要によりエキソヌクレアーゼで処理し、それ
ぞれに適当なりＮＡを接続しあるいはアニーリング可能
な組合わせの塩基を複数個重合せしめる。しかる後、こ
れを微生物ベクターに組み込む。組み込む方法はベクタ
ーを適当な制限酵素で切断し、必要により適当なリンカ
−またはアニーリング可能な組み合せの塩基を複数個重
合せしめる。このように加工した二重鎖ＤＮＡとベクタ
ーＤＮＡを混合し、リガーゼを用いて接続せしめる。

得られた組み換えＤＮＡはベクターの宿主微生物に導入
する。宿主微生物としてはエシェリヒア：コリ等のエシ
ェリヒア属の微生物、バチルス・ズブチリス等のバチル
ス属の微生物、サツカロミセス・セレビシェ等のサツカ
ロミセス属の微生物などが好適である。これらの微生物
に使用されるベクターを以下に例示する。（蛋白質核酸
酵素２６巻４号（１９８１）参照）ＥＫ系プラスミドベ
クター（ストリンジェント型）のｐ　５ＣＩＯＩ　、　
　ｐＲＫ３５３　。

ｐ　ＲＫ６４６．　ｐ　ＲＫ２４８．　ｐ　Ｄ　Ｆ４１
等、ＥＫ系プラスミドベクター（リラックスド型）のＣ
ａ１Ｅｌ。

ｐＶＨ５１、ｐＡＣ１０５，Ｒ５Ｆ２１２４．　　ｐＣ
Ｒ１゜ｐＭＢ９．ＢＲ３１３、ｐＢＲ３２２，ｐＢＲ３
２４゜ｐ　Ｂ　Ｒ３２５，ｐ　Ｂ　Ｒ３２７，ｐ　Ｂ　
Ｒ３２Ｂ、　ｐ　Ｋ　Ｙ２２８９゜ｐＫＹ２７００．ｐ
ＫＮ８０．ｐＫＣ７，ｐＫＢ１５８゜ｐＭＫ２００４．
ｐＡｃＹｃｌ、ｐＡｃＹｃ１８４゜λｄｕ１等、λｇｔ
系ファージベクターのλｇｔ・λＣ２゜λｇｔ・　λＢ
、　λＷＥＳ−λＢ　＋、λＺ　Ｊ　ｖｉｒ　・　λＢ
　＋。

λＡＬＯ−λＢ、λＷ　Ｅ　Ｓ　・Ｔｓ６２２．　　λ
Ｄａｍ等。

シャロンベクターのシャロン４Ａ、　　シャロン３Ａ。

シャロン１６Ａ、シャロン１３Ａ、シャロン１４Ａ、シ
ャロン１５Ａ、シャロン８．シャロン１０．シャロン１
７、シャロン２０等、チオライス（Ｔｉｏｌｌａｉｓ）
グループベクターのＬ　５１２．λＺＥＱＳ、　　λＺ
ＹＶ５φ。

λＺＵＶ）２．　　λＺＵＶ１３．　　λＹＥＱＳφ１
゜λＹＥＱＳφ、λＹＥＱＳφ３．λＢａｍ、　　λＳ
ｓｔ等、枯等閑枯草菌スミドベクターｐ　Ｔ　Ａ　１０
１５゜ｐ　Ｌ　Ｓ１５．　　ｐＴＡ１０２０．　　ｐＬ
　Ｓ２Ｂ、　　ｐ　Ｌ　３１３゜ｐ　ＴＡ１０５０．　
　ｐ　Ｔ１０６０．　　ｐ　ＴＡ１０３０．　　ｐ　Ｔ
Ａ１０３１等、スタフィロコッカス由来のプラスミドベ
クターｐＴ１２７．ｐ　Ｃ１９４，ｐ　Ｃ２２１，ｐ　
Ｃ２２３，ｐ　ＵＢ１１２゜ｐ　Ｕ　ＢＩＩＯ，ｐ　Ｓ
　ＡＯ５０１，ｐ　Ｓ　Ａ２１００．　　ｐ　Ｅ１９４
゜ｐＴＰ４．ｐＴＰ５等、酵母ベクターｐ　Ｊ　Ｄ　Ｂ
２１９゜ＹＥｐ１３．ＹＲｐ７．ＹＴｐｌ、ｐＹＣ，ｐ
ＴＣ２゜微生物のベクター、たとえばｐＢＲ３２２など
のＰｓｔｌあるいはＥｃｏＲｌ　５ｉｔｅなど目的に応
じた個所に組み込み、適当な宿主にトランスホームして
そのダイズ貯蔵タンパク質を宿主中で発現させることが
できる。

得られたｍＲＮＡがダイズ貯蔵タンパク質に対応する遺
伝情報を存してることを以下の方法により確認する。

Ｒｅｔｉｃｕｌｏｃｙｔｅ　１ｙｚａｔｅあるいは−ｈ
ｅａｔ　ｇｅｒｍの系を用いＰｏ５ｓｉｔｉｖｅ　ｈｙ
ｂｒｉｄ　５ｅｌｅｃｔｉｏｎ　ａｎｄ　１ｎｖｉｔｒ
。

ｔｒａｎｓｌａｔｉｏｎ法によりダイズ貯蔵タンパク質
であｐ　Ａ　Ｌ　１０５０ヘクターを用いて遺伝子を植
物に導入する。

組み換えＤＮＡを挿入する場合ｔｍｒのリーダー配列に
１ｎ−ｆｒａｎ＋ｅに接続し、終止コドン領域もｔｍｒ
のものを利用する。

上述のようにダイズ種子より本発明のｍＲＮＡを調製す
る方法を以下の実施例により詳しく説明する。なお、本
実施例に示す以下のダイズ種子より得られる貯蔵タンパ
ク質に対応するｍ　ＲＮ　Ａの場合にも本発明は全く同
様に実施できる。ものであり、本発明の範囲に含まれる
。

実施例１ （１）完熟ダイズからグリシニン（ダイズ主要貯蔵タン
パク質の１つ）を精製し、酸性（以下、Ａと略称する。

）サブユニットを分離、精製する。

このＡサブユニットは分子量約３５〜４０にで、互いに
免疫化学的に強い交叉性を示す。そこで、個々のＡサブ
ユニットに特異的な抗血清を調製する。抗血清の調製法
としては、たとえば特定サブユニットでウサギに十分免
疫（ｈｙｐｅｒｉｍｍｕｎｉｚａｔｉｏｎ）　Ｌ／て得
た抗血清に、他の酸性サブユニットタンパクの凍結乾燥
粉末を加えて吸収操作を繰り返す方法が適用できる。特
異性の検定は、オクテルローニイのゲル内二重拡散法と
ウェスタンプロット法によった。

（２）登熟中期（開花後３８日目）のダイズ子葉から膜
結合型ポリソームを調製し、５ＤＳ−フェノール法とポ
リＵ−セファロースカラム法でｍＲＮＡを精製する。一
方、同じ時期の子葉から同様にして全ｍ　ＲＮ　Ａを調
製する。この全ｍＲＮＡ標品の一部はシｇ糖密度勾配遠
心法（ショ糖１０％（−八）−３０％（ｗ／ｗ））によ
り分画し、赤血球無細胞タンパク合成系における翻訳産
物の免疫化学的解析でグリシニンｍＲＮＡ濃縮画分を同
定する。

（３）上記（２）の全ｍＲＮＡに対するｃＤＮＡライブ
ラリーを以下に記述する方法に従って作製する。

１）ｓｓ−ｃＤＮＡの合成と鋳型ｍＲＮＡのアルカリ分
解シリコナイズしたエソベンドルチューブ（１，５ｍ　
ｌ　）に１０ｐｌのＸ１０ｃＤＮＡ緩衝液（０，５Ｍト
リス−塩酸、　１．４　Ｍ塩化カリウム、　０．８　Ｍ
酢酸マグネシウム）、３μｌのＲＮａｓｉｎ（生化学工
業４０ｕ／μｌ　、　５μｊ！のｄＡＴＰ、５．ｃｒ６
のｄＧＴＰ、４μｌのｄＣＴＰおよびｄ　ＴＴ　Ｐ。

２４μｌのオリゴ（ｄＴ）　＋２−Ｉｌｌ　　（Ｐ−Ｌ
Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌｓ社製、　０．２　ｒｒｑ／ｍ
ｌ　）　、　　８　ｕ　ｌのアクチノマイシンＤ　（０
，４μｇ／μ７り、１μｌの０．１　ＭＤＴＴ。

６μｌの（α−”Ｐ）ｄＡＴＰおよび１０μｌのｍＲＮ
Ａ　（１μｇ／ＩＩ　ｊｌ！、　６５℃、１０分間処理
した後、急冷したちの）をこの順番に加えて混合して酵
素を加えて軽く混合し、１秒間遠心してこの混液（１０
０μｌ）を４２℃で６０分間保温する。

反応液に２０μでの５Ｍ塩化ナトリウム、１６μβの２
５０　ｍＭＥＤＴＡ、２　ｕ　１の２０％ＳＤＳおよび
６２μ２の蒸留水を加えて反応を止める。

これにフェノール混液（１０ｍＭトリス−塩酸（ｐＨ８
，３）−２ｍＭＥＤＴＡで飽和したフェノール液）２０
０μ２を加えて激しく振盪する。

遠心して水層をとり、残りのフェノール層に　　。

１２２μβの蒸留水、４８μ２の５Ｍ塩化ナトリウム溶
液を加えて再抽出し、先の水層と合わせてエーテル処理
をして混入したフェノールを除去した後、３０μｌの酢
酸カリウム（ｐ　Ｈ５，０）と６００　μｌの冷エタノ
ールを加えてエタノール沈殿する（ドライアイス−エタ
ノール中で３０分間または一７０℃で１時間）。

この操作により約３〜５μｇのｃＤＮＡが得られる。こ
の５ｓ−ｃＤＮＡを減圧乾燥し、４５μｌの蒸留水を加
えて溶解する。

これに５μβの５Ｎ水酸化ナトリウム溶液を加えて混合
し、１秒間遠心して液をチューブの底に集めて２５°Ｃ
で一晩保温し、ｍＲＮＡを分解する。

５０ｐｌのＨｅｐｅｓ　−Ｋ　ＯＨ（ｐ　Ｈ７，４）　
緩衝液を加えた後、ウルトロゲルＡｃＡ４４のカラム（
ゲルペントの高さ２８ｃｍ）にのせて約０．６＋ｎｊ２
ずつ分画する。ｖｏｉｄ　ｖｏｌｕｍｅ画分（この条件
ではフラクション番号６〜８，０Ｍサーベイメーターで
チェックまたは液体シンチレーションカウンターを用い
て（、ｅｒＢｎｋｏｖ法で測定）を集める・この画分に
１／１０容量の３Ｍ酢酸カリウム、２倍量の冷エタノー
ルを加えて一７０℃で１時間放置後遠心沈殿させ、２回
７０％エタノールで沈殿物を洗い（沈殿物をはがさない
ように静かにエタノールを重層し、１０分間遠心しなか
らｒｉｎｓｅする）、減圧乾燥する。

１ｉ）ｓｓ−ｃＤＮＡの３°−ＯＨ末端へのｄＣホモポ
リマーの付加 ｉ）で調製乾燥した５ｓ−ｃＤＮＡ（シリコナイズした
エソペンドルフチューブに入ってい、る）に２５μｉの
蒸留水を加えて溶解し、遠心して底に集めて６５℃で１
０分間処理し、急冷する。再び１秒間遠心し、これに５
μβのＸ１０ＴｄＴ緩衝液（１，４Ｍカコジル酸カリウ
ム（ｐ　Ｈ７，６）　、　０．６　Ｍ　Ｉ−リス塩基（
１９，３ｇのカコジル酸（ｆｒｅｅ　ａｃｉｄ）と７．
２ｇのトリズマ・ベース（Ｓｉｇｍａ社製）を５０ｍｊ
２の再蒸留水に溶かし、水酸化カリウムの粉末を加えて
ｐＨを７．６に調整、滅菌する）、５μｌの塩化コバル
ト　５μｌのＤＴＴおよび５μｌのｄＣＴＰを加え十分
に混合し遠心する。

これに５μｆｆのＴｄＴ　（４ｕ／μｊ２）を加えて軽
く混合し、１５℃で１０分間保温する。この反応混液に
１０μｌの５Ｍ塩化ナトリウム、４μｌの２５０ｍ　Ｍ
　Ｅ　Ｄ　Ｔ　Ａ　、　３６　ｐ　（ｔの蒸留水を加え
７０°Ｃで５分間熱処理する。

フェノール抽出後エタノール沈殿、洗浄後乾燥する。

山）ｄｓ　−ｃＤＮＡの作製 上記ｉｉ）で作製した３”末端にｄＣホモポリマーを付
加した５ｓ−ｃＤＮＡ標品（シリコナイズしたエソペン
ドルフチューブ中で乾燥保存したもの）に２６μｌの蒸
留水を加えて十分に溶解し、６８℃。

５分間処理後急冷する。

１秒間遠心後、１０ｐｌのＸ１０ｃＤＮＡＩＪｌ衝液。

１μＪ（７）ＤＴＴ、１０μＡのｄＡＴＰ、ｄＧＴＰ。

ｄＣＴＰおよびｄＴＴＰ、１５μ２のオリゴ（ｄＧ）＋
□〜１８を加えて混合後遠心し、次いで１３μβの逆転
写酵素（５，８ｕ／μｍ）を加えて４２℃で１時間保温
する。

反応液に２０μｌの５Ｍ塩化ナトリウム、８μｌの２５
０　ｍＭＥＤＴＡ、２　ｐ　ｅの２０％ＳＤＳおよび７
０μβの蒸留水を加えて反応を停止させる。

常法に従ってフェノール抽出、エタノール沈殿。

洗浄および乾燥後、４０μｌの蒸留水を加えて溶解し、
６２°ｃ、　　５分間処理後急冷し、遠心する。

これにＸ　１０　Ｋ　１ｅｎｏ−緩衝液（０，６７ＭＫ
−リン酸緩衝液（ｐ　Ｈ７，４）、　６７ｍＭ塩化マグ
ネシウム、　１０ｍ　Ｍ　Ｄ　Ｔ　Ｔ　）を１Ｏｐｌ、
ｄＡＴＰ、ｄＧＴＰ。

ｄＣＴＰおよびｄＴＴＰの各１０μβずつを加えて。

よく混合した後、ＤＮＡポリメラーゼＩ　　（Ｋ　ｌｅ
ｎｏｗ酵素、５　ｕ／μｌをＬＯｐｌ加えて３７℃で１
時間反応させる。

４０μｌの５Ｍ塩化ナトリウム、１６μβの２５０ｍＭ
ＥＤＴＡ、４／１１の２０％ＳＤＳおよび１４０１！の
蒸富水を加えて反応を止めた後、フェノール抽出、エタ
ノール沈殿を常法に従って行なう。必要とあれば、この
段階でゲル電気泳動または中性ショ糖密度勾配法により
低分子のｄｓ　−ｃＤＮＡを除去することもできる。

ｄｓ　−ｃＤＮＡに１００　μｌの蒸璽水を加えて溶解
し、ウルトロゲルＡｃＡ４４のカラム（ゲルペッドの高
さ２８ｃｍ）にのせて約０．６ｍ／ずつ分画しｖｏｉｄ
　ｙｏｌｕｍｅ画分を集める（溶出パターンは液体シン
チレーションカウンターを用いたＧ　ｅｒｅｎｋｏｖ法
で測定する）。

この画分に１／１０量の３Ｍ酢酸カリウム、２倍量の冷
エタノールを加えて一７０℃で１時間放置後、生じたｄ
ｓ　−ｃＤＮＡの沈殿を遠心乾燥により回収し、洗浄、
減圧乾燥する。

ｉｖ）プラスミドへ挿入のためのｄｓ−ｃＤＮＡの末端
加工 上記ｉｉｉ　）で調製したｄｓ　−ｃＤＮＡに３１ｐ／
ｌの蒸留水を加えて溶解し、５μ２のＸ１０ＴｄＴ緩衝
液、５μｌのｄＣＴＤを加えて十分混合した後、３μｌ
のＴｄＴを加えて３７℃で５分間保温する。

反応後、１０μｌの５Ｍ塩化ナトリウム、４μｌの２５
０ｍＭＥＤＴＡおよび３６μｌの蒸留水を加えて７０℃
で５分間処理した後、常法に従ってフェノール抽出、エ
タノール沈殿、洗浄および減圧乾燥を行なう。

ｖ）Ｐｓｔ工切断３°末端オリゴｄＧ付加ｐＢＲ３２２
とのアニーリング ｄｓ−ｃＤＮＡ溶液（４５０μＪ）に５０μｅの×１０
アニーリング緩衝液（０，ＩＭ）リス−塩酸（ｐＨ７，
５）、１Ｍ塩化ナトリウム、　１０　ｍ　Ｍ　ＥＤＴ　
Ａ　）を加えて十分混合し、その１００μｌをとりエッ
ペンドルフチューブ（１，５ｍ　ｌ　、　　シリコナイ
ズしたもの）に入れる。これに１μβのｐ　Ｂ　Ｒ３２
２（オリゴ（ｄ　Ｇ）　＋ｏ−ｔｏｔａｉｌｅｄ）を加
えて混合し、６８℃。

５分間処理した後、４３℃にした恒温水槽中に移し２時
間保温する。

恒温槽のスイッチを切り、少なくとも２時間以上（−晩
そのまましておいてもよい）放置して室温まで下げた後
、チューブを４℃に保存する。

Ｖｉ）　形を転ｔＡ　（トランスフォーメーション）Ｄ
ａｇｅｒｔとＥｈｒｌｉｃｈの方法によりＲＲＩを宿主
として８．２　Ｘｌ０６〜１．４〜１０’個形質転換株
／μｇ＋）ＢＲ３２２ＤＮＡの転換効率を得た。

（４）（２）のグリシニン中間サブユニ７トｍＲＮＡの
濃縮画分に対するｆｆ２ｐ標識ｃＤＮＡを作製しプロー
ブとする。

（５）上記（４）で作製したプローブを用いて（３）の
ｃＤＮＡライブラリーの中からグリシニンサブユニット
クローンをコロニーハイブリダイゼイション法で選別す
る。１０２３個のクローンのうち２２個が陽性であった
。

６）上記（５）で得た２２個のクローンの中から挿入部
分の長さがＩｋｂ以上のクローン（１６個）を選び”ｐ
ｏｓｉｔｉｖｅ　ｈｙｂｒｉｄ　５ｅｌｅｃｔｉｏｎ　
ａｎｄ　１ｎｖｉｔｒ。

ｔｒａｎｓｌａｔｉｏｎ　”法によりグリシニンｃＤＮ
Ａクローンを同定した。このうちの１つは約２ｋｂの挿
入部分を持っていた。このクローンをプローグとしたノ
ーザンプロットハイブリダイゼイションの結果からグリ
シニンｍＲＮＡの長さは約２．２　ｋｂであり、作製さ
れたＣＤＮＡは完全長に近い。

クローニングしたｃ　ＤＮＡのうちの−っグリシニンＡ
３　Ｂ、サブユニットｃＤＮＡの構造は第１表の通りで
あった。

実施例２ 実施例１と同様の方法で得られたもう一つのグリシニン
Ａｓ　Ａａ　８３サブユニツトｃＤＮＡの構造は第、２
表の構造であった。

第２表 （ダイズグリシニンＡｓＡａＢｉ　ＣＤＮＡ・・・・・
・・・・・・・・・・・・＾、ＡＣＴＴＡＡＴＴ、ＡＴ
ＴＡＡＣＡＣＴα￥工Ｇ！ｌい。べｘ。Ａ′υ工〜Ｔき
ｘ品バｃｔ”６ｃ！腎人に聞。侍。バｃＩＡ″ｃｃ’：
ａｔ！Ｊｆ、ｈＡｓ”６ｒ！’ＸＴｒ！’ｑｌａ’ｄｈ
ｒ？ｔ！！ｃ是＾、、、＜！、、１ＧＧ９゜υｃ’ｄ’
ｒｃ”ｄｃ４ｉ。ｃ”ｒ’ｃｃ”￥ｃＱ、ｚｃ’ｄ’ｃ
佇ｃ）’Ｊ弓＾ｄ７ｏ佇の塩基配列） 。党。何。Ａｓ話Ｇ１ＩＣ□へ−ｐｐｃ　！’＋’ｒ　
ｃ”（：’Ｔ計ＩＣ４）ｃＡＡ′Ａ′ｃｃ！”ｃ＋：Ｊ
７’、＝？ｘｃ’￥。故。一覧。作。打Ｔｃ’７．ｘ♂
弘ｕＴ＆。稗弓＾８Ｃ侘ｃＡ１′Ａ′Ｔ花Ｃ〜。砿。作
。Ｕ儲響ｃへＡ花ＡＪ’ｄ’、ａ、ｃ”（、ｙｃ？’ｄ
’、ｘｃ”ｒ’ｒｃ５’ｃ’、＝、、、４’＋’ｒＡ弦
Ａ何ＡＡ’″Ａ′。侶νυ隊旨。打、ハフ。

ｃ　４′ｆｏＴｃ”ｅｒｒ　ｃ’Ｘ　ｃ　侍。、Ａ、ｎ
　ＴＪＩ、ｕ。花へ、Ｆ。

ｃ廓Ｔｒ２゜ＡＴπＴ　ｇ弘ｃ’２Ｔ！覧♂υ儒９゜エ
ベ花。＆］Ａ′ｃｃ”ｆＴａ”ｄ晶ｃ’Ｘｈ；”ｒ！ｃ
ｔ！’ｃ’ｒ、ペヒＧ。く訃、！覧背ｃ　ＡＩ’ｒ；、
Ｂぎ覧♂覧＆儒覧＜Ｘ　。、ｐ；ｏ、ＧＩＡＩＧＪ弘Ｊ
覧Ｊｆ　ＧＪｇ侘覧ｃ党Ｇ♂ｖｄ覧テ恥佇。バ。ノーだ
。

＜８ＡＡＡｒ、３ＧＡＬ翫Ｇ弘１１ｐ　ｃ、Ｖ％Ｊ　ｏ
、Ｔｈ、ｒ弓Ｑ。

れ鴫ＡＣＡＡＣＡＡＣ媒ＧＡＡＧＡＴＧＡへｆｔＪＡＴ
（ｌＦＩＡ′Ａ（！′Ａｐ弓ト♂ｘＴ♂２．．Ｐｌｙ、
ａ新！ｒ、、Ｇ覧彷Ｔｌ’ｔ！ｃ−ｐＭｃ’ｒ３ＡＡＬ
￥９ｃ’Ｘｈ８’ＸＡ♂−＆Ｇ♂”Ｉｎｃ　ａ’ｊ：　
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♂’ｃ：、ＢｒＴｃ叔ｃ背、ｉ）、ｇ’ｄｘｃ”ｆｃ譜
＆ＡｃＰビニ♂冒。ＡＬ＾謬謬♂υＪ覧ｌビ。ノυ＾り
ＧＪ＾謄：１０４０　　　　　　１０品 ａ’ｔ：Ａａ’Ｘ　Ａ　４ＸＡ　ｃ”ｃ’ｒ　Ｊ”Ｘ　
Ａ　、＝’而面Ａ　孕ｃ　ｃ鞘ｉ、、”６　Ａ　ｒ’ｃ
ｈ　Ａ”。

稗。ＡＬ覧益工♂懸＆ＧＡＡ孔弘Ｔ♂冒Ｔ♂υａζＴ打
λ♂〜Ｇ”（１’　Ｔ　ｃ”ｄ’ｃ　、ａ；％ＴＸ”６
Ｔαｃ　ｃ”３６．ｊＴｃ　！Ｍｃ　ｃ！’ｖ正”ｇ　
ｃ　（！”Ｉ’Ｃ♂１Ａｌａ　　Ｇｌｎ　　Ｔｙｒ　　
Ｖａｔ　　ａＱｏＬｅｕ。Ｎｙｒ。Ａｙ；；。Ａ２．　
、Ｇｌ、ｙ、　＋１．ｐ、　、７ｙ００００ＡＡ１′２
１ｒＪＴ０ＴＴＣ占９ｏ１３ｏ。

ＡＡｓ、ｎｃ、Ｓｙ、、：：ＧＩ望ｃＴｙ、ｒＴＪＶ、
品、、ＴＩＢｇ、♂’＆ｘａ’ｔｉ、ａｙ：’Ｘｈａ’
ｄ謄’。

＆Ｔｔｄ”ｃ’Ａｃ”ｔ’ｃ佇ｃｃＴｃＪ’ｄ”ｒｅ”
、Ｓｃｃ’￥ｆｆｌ、５υＢ、：”ｄ’ｃｃ？旨。、５
１、ａ、Ｉ　ｏＧｖ、、ｌ　ＧＧ１２ＧＧｇ　ｏにｌ、
ｎ　０％、〜、　Ｇ四’ｊｌ、＋、、、＜１．、ｙ、、
［’１ｙｃＧ１ＡＡＴｃｃ”ｃ’Ａｃ”ｒ’ｃさＴＡｓ
”ｃｒｃ絹耐￥ｃＡ’Ｋｃｃ’２ｙ、ｇ’ｒ’ｃ佇仕υ
響′ｃｒＴ認ｃＡＡ′Ａ″ｃｃ”？ｒ％ｃ’ｆｃ、ａＦ
’Ｊｒｃ’、’、ａ？６．ｇ’ｒ’ｃデｅ６．ＧＩＩｔ
、３　Ｔ侍Ｃ牝。）父。ｃＰ’ｃｐＴ、３３品押侵覧＆
＾ｄシｃ打ａＡ　Ｇ　ＣＡ　Ｔ　Ｇ合晶ＧＧＴＧＴＧＡ
ＧんゾｃＡｃｃｃｃ習逼Ｔ　Ｔ　Ａ　Ｔ　Ｇ　Ａ　ｒへ
ＴＧＡＴＡＡＴＡＡＡＡＡＧＴＡＴＧＧＣＣＣＡＴＧＴ
ＡＣＣへＴＣＣＣ。

＋７６０　　　　　　　　　　　１７７０　　　　　　
　　　　　１７８０ｉ：ｒＴセ。ｃｆ’ｔ、ｏ。１７ｒ
ｒ？４．品♂’＆ｈ　ｌ覧２”６ｃ、４赳ＦＴ（３，ａ
、ｃ？”、／Ｔ、＝”ｒ、＝、ｃ”ｃ：、ｙｃ”ｃｈｃ
”ｇｒ、＝”ｃ’ｒ、ｇ、ｐｘ’Ｚｃ（！”ａ政ｃａＩ
ＡｕＡ♂黙ｃ”Ｚｈｃ新ｔ！’Ｘ＾４”！ｒ１ｏ＾ で で ！　ＣＦｔ、’、ｆ、、Ｔ　Ｃ’”／’！’　Ｃ背Ｃ”
Ｉ’高Ａ　’Ａ。Ｊ’ｃ’ｒ、＝？Ｘ６ｇ’ｃ’ｒ！Ａ
牝ｃＣＬ￥′Ｃ♂ｒｃ！ｃにＩｎ佇ｃ　ｃ”Ａ’　Ａさ
一茫ｒ＾＾ Ｚｃ湘Ｔｃ”？、ｘｃ”＝”Ｔ％ｒＴｒ鯖。、５２ｔ”
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Claims (2)

【特許請求の範囲】
1. （１）ダイズ貯蔵タンパク質に対応し、ダイズ種子より
   得られ、ショ糖密度勾配遠心法による分画により１８Ｓ
   よりやや重い画分に得られるメッセンジャーＲＮＡ。
2. （２）ダイズ貯蔵タンパク質に対応し、ショ糖密度勾配
   遠心法により１８Ｓよりやや重い画分に得られるメッセ
   ンジャーＲＮＡをダイズ種子より抽出し分画することを
   特徴とするメッセンジャーＲＮＡの調製法。