JPS6127400B2 - - Google Patents
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Description
本発明は、CP−55358と称される新規抗生物質
複合体に関し、より詳しくは、その複合体中に含
まれるCP−56063およびCP−56064と称される２
つの主たる抗生物質に関する。この複合体はイン
ドの土壌サンプルから得られた新規ストレプトマ
イセス（streptomyces）倍養物N409−40から得
られた。化学的には、これら２つの主たる抗生物
質はラクトン環が16員であるマクロライド化合物
である。しかし、これらの抗生物質は公知の16員
マクロライド、たとえばタイロシンとは５位の炭
素に以前に知られていない糖成分が付加している
点で異なる。 本発明は式 の化合物から選択される新規マクロライド抗生物
質およびその医薬として適当な酸付加塩を提供す
る。ただし式中R1は式 の基であり、R2は式 の基である。 式およびの化合物は抗菌剤として有用であ
り、培養物N409−40と称されるストレプトマイ
セス・アルブス（streptomyces albus）の新規
な亜種の培養物によつて得られる。この新規な亜
種のストレプトマイセス・アルブス（ロツシドリ
ア）ワツクスマン・エンド・ヘンリシ亜種インデ
イカス・ハン新亜種（streptomyces albus
（Rossi Doria）Waksman and Henrici subsp.
indicus Huang subsp.nov.）（ATCC39012）と
命名された。 本発明の抗生物質複合体は培養物N409−40と
称される新しい微生物の発酵によつて生産され、
該微生物はインドの土壌サンプルから得られた。
培養物N409−40は米国コネチコツト州グロトン
のフアイザー・インコーポレーテツドのLiang
H.Huangによつて特性をしらべられ確認され
た。 培養物N409−40は放線菌目の細い菌系、胞子
のらせん状の鎮および細胞壁中のLL−ジアミノ
ピメリン酸を有し、ストレプトマイセス属の特性
を有することがわかつた： 培養物N409−40を斜面培地から液体ATCC培
地172に移し、28℃で４日間振とう培養した。次
いでこれを新しいATCC培地172に移し、同一条
件下にさらに４日間インキユペートした。培養物
を遠心分離し、滅菌蒸留水で３回洗い、放線菌目
の確認に通常使用される培地上に移した。28℃で
インキユベーシヨンを行ない、結果を種々の時間
に測定した。14日目に測定するのがもつともふつ
うである。 培養物の特性をしらべるために使用した確認培
地およびそれらの組成についての参考文献は次の
とおりである： １ トリプトン酵母エキスプロス−（ISP＃１培
地、デイフコ） ２ 酵母エキス−麦芽エキス寒天−（ISP＃２培
地、デイフコ） ３ オートミール寒天（ISP＃３培地、デイフ
コ） ４ 無機塩−でんぶん寒天−（ISP＃４培地、デ
イフコ） ５ グリセリン−アスパラギン寒天−（ISP＃５
培地、デイフコ） ６ ペプトン−酵母エキス鉄寒天−（ISP＃６培
地、デイフコ） ７ ツアペツクー庶糖寒天−S.A.Waksman、
The Actinomycetes、Vol.2、medium no、
１、p.328、1961 ８ グルコースアスパラギン寒天−上記文献
medium no.2、p.328 ９ ベネツトの寒天−上記文献medium no.30、
p.331 10 エマーソンの寒天−上記文献medium
no.28、p.331 11 栄養寒天−上記文献medium no.14、p.330 12 ゴードンとスミスのチロシン寒天−R.E.
Gordon and M.M.Smith、Jr.Bact.69：147−
150、1955 13 カゼイン寒点−上記文献 14 マレイン酸カルシウム寒天−S.A.
Waksman、Bact.Rev.21：１−29、1957 15 ゼラチン−R.E.Gordon and J.M.Mihm.Jr.
Bact.73：15−27、1957 16 でんぷん−上記文献 17 有機硝酸塩プロス−上記文献 18 デキストロース硝酸塩プロス−S.A.
Waksman、The Actinomycetes、Vol ２、
medium no.1、p.328、1961、30ｇの庶糖の代
りに３ｇのデキストロースを使用し寒天を省
略。 19 ばれいしよにんじん寒天−M.P.
Lecheralier、Jr.Lab.and Clinical Med.71：
934−944、1968ただし、30ｇのばれいしよ、
2.5ｇのにんじんおよび20ｇの寒天のみ使用。 20 ２％水道寒天 21 スキムミルク−デイフコ 22 セルロースの利用 (a) H.L.Jensen、Proc.Linn.Soc.N.S.W.55：
231−248、1930 (b) M.Lerine and H.W.Schoenlein、Ａ
Compilation of Culture Media、medium
no.2511、1930 23 炭水化物−ISP＃９培地、デイフコ 24 温度範囲−ATCC Culture Collection
Catalogue、第12版、p.329、1976のATCC
medium 172。 培養物N409−40は下記特性を示した。色は通
常の用語およびカラー・ハーモニイ・マニユアル
（Color Harmony Manual）第４版の色片を参照
して記述した。 酵母エキス−麦芽エキス寒天 生育中位ないし良好、無色ないしクリーム色
（2ca）、薄いないし盛り上がりあり、しわあり、
気中菌糸体なし、裏面は表と同一、可溶性色素淡
い黄色がかつた色（21c）。 オートミール寒天 生育中位、黄色がかつた白色、わずかに盛り上
がりあり、なわらか、気中菌糸体白、まばら、裏
面は表と同一、可溶性色素なし。 無機塩−でんぷん寒天 生育中位ないし良好、黄色がかつた白色ないし
淡い黄色がかつた色（2eaないし2ga）、薄いか盛
り上がりあり、なめらかないししわあり、気中菌
糸体白色、まばら、裏面表と同一、可溶性色素茶
色がかつた色（31e）。 グリセリン−アスパラギン寒天 生育中位、淡いラペンダー色（3ec）、薄くなめ
らか、気中菌糸体ないし、裏面は表と同一、可溶
性色素、非常に淡いラベンダー色（3ca）。 ゴードンおよびスミスのチロシン寒天 生育中位、クリーム色（2ca）、薄くなめらか、
気中菌糸体なし、裏面は表と同一、可溶性色素淡
い黄色がかつた色（2ea）。 ツアペツクー庶糖寒天 生成中位、淡い黄色がかつた色（2ca）、薄くな
めらか、気中菌糸体白色、まばら、裏面は表と同
一、可溶性色素淡い黄色がかつた色（2ca）。 グルコースアスパラギン寒天 生育乏しい中位、クリーム色（2ca）、薄いか盛
り上がりあり、なめらかないししわあり、気中菌
糸体なし、裏面と同一、可溶性色素なし。 マレイン酸カルシウム寒天 生育中位、淡い黄色がかつた色ないし黄色がか
つた色（１1/2ca、１1/2eaないし１1/2ia）、薄
い、なめらか、気中菌糸体なし、裏面は淡い黄色
がかつた色、可溶性色素なし。 カゼイン寒天 生育中位、淡い黄色がかつた色（１1/2ca）、薄
い、なわらか、気中菌糸体なし、裏面は表面と同
じ、可溶性色素淡い黄色がかつた色（2ga）。 ベネツトの寒天 生育良好、クリーム色ないし黄色がかつた色
（2ca、2eaないし2ga）、盛り上がつており、粗い
しわないしひび割れあり、気中菌糸体あり、裏面
は表と同一、可溶性色素淡い黄色がかつた色
（2ea）。 エマーソンの寒天 生育良好、クリーム色（2ca）、盛り上がりあ
り、細かいしわあり、気中菌糸体なし、表裏同
一、可溶性色素淡い黄色がかつた茶色（21c）。 栄養寒天 生育乏しく、無色ないしクリーム色（2ca）、薄
い、なめらか、気中菌糸体、裏面は表と同一、可
溶性色素なし。 ゼラチン寒天 生成中位ないし良好、クリーム色（2ca）、わず
かに盛り上がり、なめらかあるいは近縁部にし
わ、気中菌糸体なし、裏面は表と同一、可溶性色
素なし。 ばれいしよにんじん寒天 生育乏しいか中位、淡い黄色がかつた色（１1/
２ca）、薄い、なめらか、気中菌糸体白色、わず
か、裏面は表と同一、可溶性色素なし。 水道水寒天 生育良好、無色ないし白色、薄い、なめらか、
気中菌糸体白色、まばら、裏面は表と同一、可溶
性色素なし。 培養物N409−40は下記生化学特性を示した：
メラニン生成せず；二硫化水素生成；ゼラチン液
化；でんぷん加水分解；硝酸塩を還元して亜硝酸
塩とし；両方のセルロースブロス上で生育および
分解せず、ミルクを凝固およびペプトン化せず；
カゼイン分解（＋）；マレイン酸カルシウム分解
（＋）；チロシン分解（＋）；グルコース、イノ
シトール、フラクトース；および庶糖を炭水化物
源として利用；アラビノース、マンニトール、メ
リビオース、ラフイノース、ラムノース、および
キシロースは炭水化物源として利用せず。 形態学的特徴はツアペツク−庶糖寒天上で16日
間インキユベーシヨンした後観察した。培養物
N409−40は下記特性を示した：白色系統の胞子
塊；基軸分枝の胞子柄、密生；緻密なら旋形ある
いは希に胞子鎖当り３〜７回巻いたゆるいら旋形
の胞子鎖、ら旋の直径小、しばしば房の中で密集
し、胞子鎖当り10〜50胞子；球状、卵形ないし楕
円形の胞子、直径0.7〜1.0μｍ、たとえば0.8〜
1.1×0.7−0.9μｍ、なめらか。以上走査電子顕微
鏡での所見。 培養物N409−40の温度対生育速度の関係は次
のとおりである：21℃、良好な生育；28℃、すぐ
れた生育；37℃、生育乏しい；45℃、生育乏し
い。 培養物N409−40についての全細胞および糖の
分析はBecker、B.et al.、Appl.Microbiol.、12：
421−423、1964；およびLecheralier、M.P.、J.
Lab.Clin.Msd.、71：934−944、1968の方法を使
用して行なつた。結果は次のとおり：全細胞加水
分解物はLL−ジアミノピメリン酸、ガラクトー
スおよびポースを含有する。 培養物N409−40は白色系統の胞子、コイル状
の胞子鎖、なめらかな胞子、およびメラニン反応
陰性を特徴とする。この培養物はストレプトマイ
セス・アルブス（streptomyces albus）に近似
しており、ストレプトマイセス・アルブス
（streptomyces albus）ATCC3004の培養物（タ
イプカルチヤー）を使用して比較する。両方の培
養物はコイル状に巻いた胞子鎖およびなめらかな
表面の白色胞子の塊を産生し、メラニン反応陰
生、硫化水素生成陽性である。 N409−40と異なり、ストレプトマイセス・ア
ルブスATCC3004はアラビノース、マンニツトお
よびキシロースを利用するが、イソシトールは利
用しない。酵母エキス−麦芽エキス寒天上、ツア
ペツク庶糖寒天、グルコースアスパラギン寒天、
エマーソンの寒天、および栄養寒天において、ス
トレプトマイセス・アルブスATCC3004のコロニ
ーは白色であるが、N409−40のコロニーは気中
菌糸体がない為クリーム色である。オートミル寒
天、グリセリン−アスパラギン寒天、グルコース
アスパラギン寒天、および栄養寒天上、ストレプ
トマイセン・アルブスATCC3004はN409−40の
ような合体した垢状物としてではなく個々に離れ
たコロニーとして生育する。さらに、ストレプト
マイセス・アルブスATCC3004は酵母エキス−麦
芽エキス寒天、無機塩−でんぷん寒天、ツアペツ
ク庶糖寒天およびエマ−ソンの寒天上で可溶性色
素を生成しない。これらの類似性と相異を根拠に
して、培養物N409−40はストレプトマイセス・
アルブス（s.albus）の新しい亜種を表わすと考
えられ、ストレプトマイセス・アルブス（ロツシ
ドリア）ワツクス・エンド・ヘンリシ亜種インデ
イカスハン新亜種（streptomyces albus（Rossi
Doria）Waksman and Henrici subsp.indicus
Huang subsp.nov.と命名し、アメリカン・タイ
プ・カルチヤー・コレクシヨン（ATCC）（米
国、メリーランド州ロツクビル）にATCC39012
という番号で寄託されている。この培養物の
ATCCでの寄託の氷続性および公衆への分譲は特
許された場合特許権の存続期間を通して確保され
る。培養物の分譲は37CFR1.14および35USC112
にもとずき出願が係属している限り可能である。
寄託微生物の公衆への分譲に対するすべての制限
は特許付与と同時に完全に除かれる。 この発明の抗生物質複合体はストプトマイセ
ス・アルブス亜種インデイカスATCC39012を発
酵させ、発酵ブロスから該複合体を抽出すること
によつて得られる。式およびの化合物はクロ
マトグラフイーまたは向流分配のような古典的方
法によつて該複合体から得られる。 ストレプトマイセス・アルブス亜種インデイカ
スATCC39012の発酵はストレプトマイセス・フ
ラデイアエ（streptomyces fradiae）からマクロ
ライド抗生物質タイロシンを得るのに使用される
と類似の条件下に行なうことができる。一般に、
ストレプトマイセス・アルブスATCC39012は24
〜36℃で水性栄養培地中撹拌し通気しながら深部
培養条件下に生育できる。該栄養培地は、でんぷ
んまたはグリセリンのような資化性炭素源；大豆
ひきわり粉、カザミノ酸および酵母抽出物のよう
な有機窒素物質；穀物可溶性成分、魚粉および綿
実粉のような生育物質；鉄、銅および亜鉛のよう
な微量元素を含有する鉱塩；および緩衝剤として
の炭酸カルシウムまたはリン酸カルシウムを含有
する。 接種物は培養物N409−40をインキユベートし
た斜面またはルー（Roux）ボトルからの菌体を
こすりつけることによつて調製される。まず最初
に斜面およびルーポトル上で生育させるのに適し
た固体培地はATCC培地No.172である。 ATCC172 成 分 量（ｇ/） グルコース 10 可溶性でんぷん 20 酵母エキス ５ NZアミンＡ（フンコ）* ５ 炭酸カルシウム １ 蒸留水を加えて1000mlにする。 PHをKOHで7.0とする。 寒天を20ｇ/加える。 ＊ カゼインの酵素分解物を精製したもの。 斜面からの菌体を使用して振とうフラスコある
いは接種タンクのいずれかを接種する。又は別法
として、接種タンクを振とうフラスコから接種す
る。振とうフラスコにおいては、生育は一般は１
または３日のうちに最大に達したが、接種タンク
では生育は通常接種から20〜40時間のうちにもつ
とも有利な時期が来る。発酵槽は接種フラスコま
たはタンクからの生育ブロスで完全に無菌条件下
に接種し、12〜30時間発酵させる。振とうフラス
コ中では振とう器上の振とうによつて、タンク中
では1/2〜２容量の空気／ブロスの容量／分の速
度でスパージヤーを通して滅菌した空気を通気す
ることによつて通気し続けた。振とう（撹拌）の
スピードは使用した撹拌器のタイプに依存し、振
とうフラスコは通常150〜200サイクル／分振とう
し、発酵槽は300〜600回転／分撹拌する。 滅菌はすべての時間を通じて保持する。温度は
24℃〜36℃に維持した。発酵の間の泡立ちは精製
大豆油のような滅菌した消泡剤で抑制できる。あ
るいは接種後補給のためにまたは必要に応じて無
菌的に適当な消泡剤を使用できる。 発酵の間の抗生物質の生産状況および、発酵ブ
ロスおよび回収流の生物活性は黄色ブドウ球菌
（staphylococcus aureus）または枯草菌
（Bacillus subtilis）の感受性菌株を使用するブ
ロスの生物検定によつて監視できる。黄色ブドウ
球菌ATCC6538および枯草菌ATCC6633はこの目
的のために適当な菌株である。標準的なプレード
による検定技術を使用する。すなわち、ブロスで
飽和したフイルターペーパーデイスクの周囲の阻
止帯を抗生物質の効力の測定に使用する。シリカ
ゲルを使用する薄層クロマトグラフイーは発酵培
地で生産された抗生物質を分析する有用な道具で
あり、粗製および精製された物質の組成物は発酵
ブロスから抽出される。ブロスおよび回収流中の
成分は、クロロホルムとメタノール９：１の混合
物中のアナルテク（Analtech）シリカゲルGFプ
レートを使用し、抗生物質を254ｍμの紫外線で
可視化することによつて検出できる。該プレート
に黄色ブドウ球菌あるいは枯草菌を接種した寒天
を重ね合わせて37℃で16時間インキユペートして
抗生物質を検出できる。 この発明の抗生物質複合体は酢酸エチルｎ−ブ
タノール、クロロホルムまたはメチルイソブチル
ケトンのような揮発性水非混和性有機溶媒を使用
して全ブロスをPH７〜10で抽出することによりス
トレプトマイセス・アルブス亜種インデイカス
（streptomyces albus subsp.indicus）
ATCC39012の発酵ブロスから回収できる。別法
として菌糸体は全ブロスから除去でき、次いで
液は全ブロスについてと同じ方法で抽出される。
これにより有機溶媒中抗生物質複合体の溶液が得
られる。酸性PH（たとえばリン酸でPH3.5に調節
された水を使用）で抗生物質複合体を水に逆抽出
し、次いでPH７〜10で酢酸エチル、ｎ−ブタノー
ル、クロロホルムまたはメチルイソブチルトンの
ような水非混和性揮発性有機溶媒中に再抽出し
た。有機溶媒を真空蒸発除去し、残渣をヘキサン
と撹拌した。このヘキサンを除去し、抗生物質を
通常固体として得る。この粗製抗生物質複合体は
クロマトグラフイーまたは向流分配によつて各成
分に分離できる。 式およびの化合物は酸付加塩を形成し、そ
れらの酸付加塩は本発明の範囲内であるものと考
えられる。該酸付加塩はマクロライド化合物につ
いての標準的方法、たとえば式またはの化合
物の適当な溶媒（たとえば酢酸エチル、アセト
ン、メタノール、エタノールまたはブタノール）
中溶液を化学量論的等量の適当な酸を含有する溶
液といつしよにすることによつて製造される。も
し塩が沈殿したら取する。別法としては溶媒の
蒸発によつて回収できる。特に価値があるのは硫
酸塩、塩酸塩、臭化水素酸塩、硝酸塩、リン酸
塩、クエン酸塩、酒石酸塩、パモエート、過塩素
酸塩、スルホサリチル酸塩、ベンゼンスルホン酸
塩、４−トルエンスルホン酸塩および２−ナフチ
レンスルホン酸塩である。 本発明の抗生物質複合体は特定のグラム陽性お
よびグラム陰性微生物に対して抗菌活性を示す。
この抗菌活性は標準的方法によつて種々の微生物
に対する該複合体の最小阻止濃度（MIC）を測定
することによつて示すことができる。MICは抗生
物質に対する感受性試験についての国際的協同研
究（Ericcson and Sherris、Acta、Pathologica
et Microbiologia Scandinav.Supp.217、
SectionB：64−68（1971））によつて推奨される
方法によつて測定できる。これは脳心臓浸出
（BHI）寒天および接種反復装置を使用する。一
晩生育させた試験管を100倍に希釈して標準的接
種物として使用した。（約0.002mlに20000〜10000
細胞が寒天表面に接種される；20mlのBHI寒天／
シヤーレ）被験化合物の12回２倍希釈物を使用し
た。当初の濃度は50mcg/mlであつた。37℃で18
時間後プレートを測定する際単一コロニーは無視
した。試験微生物の感受性（MIC）は肉眼で判断
して生育を完全に阻止することのできる化合物の
最小濃度とした。 抗生物質複合体の抗生物質活性および式およ
びの２つの大きな成分ならびにその医薬として
適当な塩は哺乳類の感受性微生物によつて生じた
細菌感染症の治療に適する。特に、本発明の抗生
物質またはその塩は大きな農場動物、たとえば
馬、牛および豚および家で飼うペツト、たとえば
ネコおよび犬の細菌感染症の治療に有用である。 この発明の抗菌性化合物またはその塩を哺乳類
に使用するとき、化合物単独で投与することがで
き、あるいは他の抗生物質および／又は医薬用担
体または希釈剤と混合できる。該担体または希釈
剤は意図する投与方法にもとづいて選択される。
たとえば、経口投与する場合、本発明の抗菌性化
合物はシロツプ、エリキシル、水溶液および水性
懸濁液等の形で標準的医薬操作によつて使用でき
る。活性成分対担体の割合は意図する剤型によつ
て変化するが、割合は通常１：６〜６：１（重量
比）であり、好ましくは１：１〜１：４である。
本発明の抗菌性化合物は非経口的に投与すること
もでき、筋肉内、腹腔内、皮下および静脈内投与
できる。これらの目的のために、活性成分の滅菌
溶液が調製されるのがふつうで、これらの溶液の
PHは適当に調節され緩衝化される。静脈内投与の
ために、溶質の総濃度をコントロールして製剤を
等張にする。 前述のとおり、本発明の抗菌性化合物はペツト
や農場動物に使用され、使用される日用量はタイ
ロシンのような他のマイクロライド抗生物質と有
意には異ならないであろう。担当獣医が最終的に
患者に適当な投与量を決定できるであろうが、こ
れは個々の動物と体重と反応ならびに動物の症状
の性質と重症度によつて変化するものと考えられ
る。 本発明の化合物は通常経口的に20〜約50mg／Kg
（体重）／日の範囲、非経口的には約10〜約30
mg／Kg（体重）日、通常何回かに分けて投与でき
る。ある場合にはこれらの範囲以外の投与量を使
用する必要もあろう。 下記例は説明のためにのみ示される。 例 ストレプトマイセス・アルブス
（streptomyces Albus）ATCC39012の発酵 下記培地を調製した： 成 分 量（ｇ／リツトル） セレロース 10 とうもろこしでんぷん 20 酵母エキス（デイフコ） ５ NZアミンＡ（フムコ（Humko））* ５ 塩化コバルト 0.002 水を加えて全量を１リツトルとする。PH7.1〜7.2 ＊ カゼインの酵素分解物を精製したもの。 上記培地を300ml振とうフラスコ当り40mlずつ
入れ、120℃；15p.s.iで30分間滅菌した。冷却
後、この培地に、寒天中のATCC172培地上で生
育させたストレプトマイセス・アルブス亜種イン
デイカス（streptomyces albus subsp.indicus）
斜面培養物ATCC39012の生育力ある菌体懸濁液
を接種した。これらのフラスコを28℃で１1/2な
いし２1/2インチの振巾を有するロータリーシエ
ーカー上で150〜200回／分（CPM）２〜４日間
振とうした。次いでこの振とう培養物を使用して
下記培地の１つを２リツトル含有する４リツトル
発酵容器に接種した：
複合体に関し、より詳しくは、その複合体中に含
まれるCP−56063およびCP−56064と称される２
つの主たる抗生物質に関する。この複合体はイン
ドの土壌サンプルから得られた新規ストレプトマ
イセス（streptomyces）倍養物N409−40から得
られた。化学的には、これら２つの主たる抗生物
質はラクトン環が16員であるマクロライド化合物
である。しかし、これらの抗生物質は公知の16員
マクロライド、たとえばタイロシンとは５位の炭
素に以前に知られていない糖成分が付加している
点で異なる。 本発明は式 の化合物から選択される新規マクロライド抗生物
質およびその医薬として適当な酸付加塩を提供す
る。ただし式中R1は式 の基であり、R2は式 の基である。 式およびの化合物は抗菌剤として有用であ
り、培養物N409−40と称されるストレプトマイ
セス・アルブス（streptomyces albus）の新規
な亜種の培養物によつて得られる。この新規な亜
種のストレプトマイセス・アルブス（ロツシドリ
ア）ワツクスマン・エンド・ヘンリシ亜種インデ
イカス・ハン新亜種（streptomyces albus
（Rossi Doria）Waksman and Henrici subsp.
indicus Huang subsp.nov.）（ATCC39012）と
命名された。 本発明の抗生物質複合体は培養物N409−40と
称される新しい微生物の発酵によつて生産され、
該微生物はインドの土壌サンプルから得られた。
培養物N409−40は米国コネチコツト州グロトン
のフアイザー・インコーポレーテツドのLiang
H.Huangによつて特性をしらべられ確認され
た。 培養物N409−40は放線菌目の細い菌系、胞子
のらせん状の鎮および細胞壁中のLL−ジアミノ
ピメリン酸を有し、ストレプトマイセス属の特性
を有することがわかつた： 培養物N409−40を斜面培地から液体ATCC培
地172に移し、28℃で４日間振とう培養した。次
いでこれを新しいATCC培地172に移し、同一条
件下にさらに４日間インキユペートした。培養物
を遠心分離し、滅菌蒸留水で３回洗い、放線菌目
の確認に通常使用される培地上に移した。28℃で
インキユベーシヨンを行ない、結果を種々の時間
に測定した。14日目に測定するのがもつともふつ
うである。 培養物の特性をしらべるために使用した確認培
地およびそれらの組成についての参考文献は次の
とおりである： １ トリプトン酵母エキスプロス−（ISP＃１培
地、デイフコ） ２ 酵母エキス−麦芽エキス寒天−（ISP＃２培
地、デイフコ） ３ オートミール寒天（ISP＃３培地、デイフ
コ） ４ 無機塩−でんぶん寒天−（ISP＃４培地、デ
イフコ） ５ グリセリン−アスパラギン寒天−（ISP＃５
培地、デイフコ） ６ ペプトン−酵母エキス鉄寒天−（ISP＃６培
地、デイフコ） ７ ツアペツクー庶糖寒天−S.A.Waksman、
The Actinomycetes、Vol.2、medium no、
１、p.328、1961 ８ グルコースアスパラギン寒天−上記文献
medium no.2、p.328 ９ ベネツトの寒天−上記文献medium no.30、
p.331 10 エマーソンの寒天−上記文献medium
no.28、p.331 11 栄養寒天−上記文献medium no.14、p.330 12 ゴードンとスミスのチロシン寒天−R.E.
Gordon and M.M.Smith、Jr.Bact.69：147−
150、1955 13 カゼイン寒点−上記文献 14 マレイン酸カルシウム寒天−S.A.
Waksman、Bact.Rev.21：１−29、1957 15 ゼラチン−R.E.Gordon and J.M.Mihm.Jr.
Bact.73：15−27、1957 16 でんぷん−上記文献 17 有機硝酸塩プロス−上記文献 18 デキストロース硝酸塩プロス−S.A.
Waksman、The Actinomycetes、Vol ２、
medium no.1、p.328、1961、30ｇの庶糖の代
りに３ｇのデキストロースを使用し寒天を省
略。 19 ばれいしよにんじん寒天−M.P.
Lecheralier、Jr.Lab.and Clinical Med.71：
934−944、1968ただし、30ｇのばれいしよ、
2.5ｇのにんじんおよび20ｇの寒天のみ使用。 20 ２％水道寒天 21 スキムミルク−デイフコ 22 セルロースの利用 (a) H.L.Jensen、Proc.Linn.Soc.N.S.W.55：
231−248、1930 (b) M.Lerine and H.W.Schoenlein、Ａ
Compilation of Culture Media、medium
no.2511、1930 23 炭水化物−ISP＃９培地、デイフコ 24 温度範囲−ATCC Culture Collection
Catalogue、第12版、p.329、1976のATCC
medium 172。 培養物N409−40は下記特性を示した。色は通
常の用語およびカラー・ハーモニイ・マニユアル
（Color Harmony Manual）第４版の色片を参照
して記述した。 酵母エキス−麦芽エキス寒天 生育中位ないし良好、無色ないしクリーム色
（2ca）、薄いないし盛り上がりあり、しわあり、
気中菌糸体なし、裏面は表と同一、可溶性色素淡
い黄色がかつた色（21c）。 オートミール寒天 生育中位、黄色がかつた白色、わずかに盛り上
がりあり、なわらか、気中菌糸体白、まばら、裏
面は表と同一、可溶性色素なし。 無機塩−でんぷん寒天 生育中位ないし良好、黄色がかつた白色ないし
淡い黄色がかつた色（2eaないし2ga）、薄いか盛
り上がりあり、なめらかないししわあり、気中菌
糸体白色、まばら、裏面表と同一、可溶性色素茶
色がかつた色（31e）。 グリセリン−アスパラギン寒天 生育中位、淡いラペンダー色（3ec）、薄くなめ
らか、気中菌糸体ないし、裏面は表と同一、可溶
性色素、非常に淡いラベンダー色（3ca）。 ゴードンおよびスミスのチロシン寒天 生育中位、クリーム色（2ca）、薄くなめらか、
気中菌糸体なし、裏面は表と同一、可溶性色素淡
い黄色がかつた色（2ea）。 ツアペツクー庶糖寒天 生成中位、淡い黄色がかつた色（2ca）、薄くな
めらか、気中菌糸体白色、まばら、裏面は表と同
一、可溶性色素淡い黄色がかつた色（2ca）。 グルコースアスパラギン寒天 生育乏しい中位、クリーム色（2ca）、薄いか盛
り上がりあり、なめらかないししわあり、気中菌
糸体なし、裏面と同一、可溶性色素なし。 マレイン酸カルシウム寒天 生育中位、淡い黄色がかつた色ないし黄色がか
つた色（１1/2ca、１1/2eaないし１1/2ia）、薄
い、なめらか、気中菌糸体なし、裏面は淡い黄色
がかつた色、可溶性色素なし。 カゼイン寒天 生育中位、淡い黄色がかつた色（１1/2ca）、薄
い、なわらか、気中菌糸体なし、裏面は表面と同
じ、可溶性色素淡い黄色がかつた色（2ga）。 ベネツトの寒天 生育良好、クリーム色ないし黄色がかつた色
（2ca、2eaないし2ga）、盛り上がつており、粗い
しわないしひび割れあり、気中菌糸体あり、裏面
は表と同一、可溶性色素淡い黄色がかつた色
（2ea）。 エマーソンの寒天 生育良好、クリーム色（2ca）、盛り上がりあ
り、細かいしわあり、気中菌糸体なし、表裏同
一、可溶性色素淡い黄色がかつた茶色（21c）。 栄養寒天 生育乏しく、無色ないしクリーム色（2ca）、薄
い、なめらか、気中菌糸体、裏面は表と同一、可
溶性色素なし。 ゼラチン寒天 生成中位ないし良好、クリーム色（2ca）、わず
かに盛り上がり、なめらかあるいは近縁部にし
わ、気中菌糸体なし、裏面は表と同一、可溶性色
素なし。 ばれいしよにんじん寒天 生育乏しいか中位、淡い黄色がかつた色（１1/
２ca）、薄い、なめらか、気中菌糸体白色、わず
か、裏面は表と同一、可溶性色素なし。 水道水寒天 生育良好、無色ないし白色、薄い、なめらか、
気中菌糸体白色、まばら、裏面は表と同一、可溶
性色素なし。 培養物N409−40は下記生化学特性を示した：
メラニン生成せず；二硫化水素生成；ゼラチン液
化；でんぷん加水分解；硝酸塩を還元して亜硝酸
塩とし；両方のセルロースブロス上で生育および
分解せず、ミルクを凝固およびペプトン化せず；
カゼイン分解（＋）；マレイン酸カルシウム分解
（＋）；チロシン分解（＋）；グルコース、イノ
シトール、フラクトース；および庶糖を炭水化物
源として利用；アラビノース、マンニトール、メ
リビオース、ラフイノース、ラムノース、および
キシロースは炭水化物源として利用せず。 形態学的特徴はツアペツク−庶糖寒天上で16日
間インキユベーシヨンした後観察した。培養物
N409−40は下記特性を示した：白色系統の胞子
塊；基軸分枝の胞子柄、密生；緻密なら旋形ある
いは希に胞子鎖当り３〜７回巻いたゆるいら旋形
の胞子鎖、ら旋の直径小、しばしば房の中で密集
し、胞子鎖当り10〜50胞子；球状、卵形ないし楕
円形の胞子、直径0.7〜1.0μｍ、たとえば0.8〜
1.1×0.7−0.9μｍ、なめらか。以上走査電子顕微
鏡での所見。 培養物N409−40の温度対生育速度の関係は次
のとおりである：21℃、良好な生育；28℃、すぐ
れた生育；37℃、生育乏しい；45℃、生育乏し
い。 培養物N409−40についての全細胞および糖の
分析はBecker、B.et al.、Appl.Microbiol.、12：
421−423、1964；およびLecheralier、M.P.、J.
Lab.Clin.Msd.、71：934−944、1968の方法を使
用して行なつた。結果は次のとおり：全細胞加水
分解物はLL−ジアミノピメリン酸、ガラクトー
スおよびポースを含有する。 培養物N409−40は白色系統の胞子、コイル状
の胞子鎖、なめらかな胞子、およびメラニン反応
陰性を特徴とする。この培養物はストレプトマイ
セス・アルブス（streptomyces albus）に近似
しており、ストレプトマイセス・アルブス
（streptomyces albus）ATCC3004の培養物（タ
イプカルチヤー）を使用して比較する。両方の培
養物はコイル状に巻いた胞子鎖およびなめらかな
表面の白色胞子の塊を産生し、メラニン反応陰
生、硫化水素生成陽性である。 N409−40と異なり、ストレプトマイセス・ア
ルブスATCC3004はアラビノース、マンニツトお
よびキシロースを利用するが、イソシトールは利
用しない。酵母エキス−麦芽エキス寒天上、ツア
ペツク庶糖寒天、グルコースアスパラギン寒天、
エマーソンの寒天、および栄養寒天において、ス
トレプトマイセス・アルブスATCC3004のコロニ
ーは白色であるが、N409−40のコロニーは気中
菌糸体がない為クリーム色である。オートミル寒
天、グリセリン−アスパラギン寒天、グルコース
アスパラギン寒天、および栄養寒天上、ストレプ
トマイセン・アルブスATCC3004はN409−40の
ような合体した垢状物としてではなく個々に離れ
たコロニーとして生育する。さらに、ストレプト
マイセス・アルブスATCC3004は酵母エキス−麦
芽エキス寒天、無機塩−でんぷん寒天、ツアペツ
ク庶糖寒天およびエマ−ソンの寒天上で可溶性色
素を生成しない。これらの類似性と相異を根拠に
して、培養物N409−40はストレプトマイセス・
アルブス（s.albus）の新しい亜種を表わすと考
えられ、ストレプトマイセス・アルブス（ロツシ
ドリア）ワツクス・エンド・ヘンリシ亜種インデ
イカスハン新亜種（streptomyces albus（Rossi
Doria）Waksman and Henrici subsp.indicus
Huang subsp.nov.と命名し、アメリカン・タイ
プ・カルチヤー・コレクシヨン（ATCC）（米
国、メリーランド州ロツクビル）にATCC39012
という番号で寄託されている。この培養物の
ATCCでの寄託の氷続性および公衆への分譲は特
許された場合特許権の存続期間を通して確保され
る。培養物の分譲は37CFR1.14および35USC112
にもとずき出願が係属している限り可能である。
寄託微生物の公衆への分譲に対するすべての制限
は特許付与と同時に完全に除かれる。 この発明の抗生物質複合体はストプトマイセ
ス・アルブス亜種インデイカスATCC39012を発
酵させ、発酵ブロスから該複合体を抽出すること
によつて得られる。式およびの化合物はクロ
マトグラフイーまたは向流分配のような古典的方
法によつて該複合体から得られる。 ストレプトマイセス・アルブス亜種インデイカ
スATCC39012の発酵はストレプトマイセス・フ
ラデイアエ（streptomyces fradiae）からマクロ
ライド抗生物質タイロシンを得るのに使用される
と類似の条件下に行なうことができる。一般に、
ストレプトマイセス・アルブスATCC39012は24
〜36℃で水性栄養培地中撹拌し通気しながら深部
培養条件下に生育できる。該栄養培地は、でんぷ
んまたはグリセリンのような資化性炭素源；大豆
ひきわり粉、カザミノ酸および酵母抽出物のよう
な有機窒素物質；穀物可溶性成分、魚粉および綿
実粉のような生育物質；鉄、銅および亜鉛のよう
な微量元素を含有する鉱塩；および緩衝剤として
の炭酸カルシウムまたはリン酸カルシウムを含有
する。 接種物は培養物N409−40をインキユベートし
た斜面またはルー（Roux）ボトルからの菌体を
こすりつけることによつて調製される。まず最初
に斜面およびルーポトル上で生育させるのに適し
た固体培地はATCC培地No.172である。 ATCC172 成 分 量（ｇ/） グルコース 10 可溶性でんぷん 20 酵母エキス ５ NZアミンＡ（フンコ）* ５ 炭酸カルシウム １ 蒸留水を加えて1000mlにする。 PHをKOHで7.0とする。 寒天を20ｇ/加える。 ＊ カゼインの酵素分解物を精製したもの。 斜面からの菌体を使用して振とうフラスコある
いは接種タンクのいずれかを接種する。又は別法
として、接種タンクを振とうフラスコから接種す
る。振とうフラスコにおいては、生育は一般は１
または３日のうちに最大に達したが、接種タンク
では生育は通常接種から20〜40時間のうちにもつ
とも有利な時期が来る。発酵槽は接種フラスコま
たはタンクからの生育ブロスで完全に無菌条件下
に接種し、12〜30時間発酵させる。振とうフラス
コ中では振とう器上の振とうによつて、タンク中
では1/2〜２容量の空気／ブロスの容量／分の速
度でスパージヤーを通して滅菌した空気を通気す
ることによつて通気し続けた。振とう（撹拌）の
スピードは使用した撹拌器のタイプに依存し、振
とうフラスコは通常150〜200サイクル／分振とう
し、発酵槽は300〜600回転／分撹拌する。 滅菌はすべての時間を通じて保持する。温度は
24℃〜36℃に維持した。発酵の間の泡立ちは精製
大豆油のような滅菌した消泡剤で抑制できる。あ
るいは接種後補給のためにまたは必要に応じて無
菌的に適当な消泡剤を使用できる。 発酵の間の抗生物質の生産状況および、発酵ブ
ロスおよび回収流の生物活性は黄色ブドウ球菌
（staphylococcus aureus）または枯草菌
（Bacillus subtilis）の感受性菌株を使用するブ
ロスの生物検定によつて監視できる。黄色ブドウ
球菌ATCC6538および枯草菌ATCC6633はこの目
的のために適当な菌株である。標準的なプレード
による検定技術を使用する。すなわち、ブロスで
飽和したフイルターペーパーデイスクの周囲の阻
止帯を抗生物質の効力の測定に使用する。シリカ
ゲルを使用する薄層クロマトグラフイーは発酵培
地で生産された抗生物質を分析する有用な道具で
あり、粗製および精製された物質の組成物は発酵
ブロスから抽出される。ブロスおよび回収流中の
成分は、クロロホルムとメタノール９：１の混合
物中のアナルテク（Analtech）シリカゲルGFプ
レートを使用し、抗生物質を254ｍμの紫外線で
可視化することによつて検出できる。該プレート
に黄色ブドウ球菌あるいは枯草菌を接種した寒天
を重ね合わせて37℃で16時間インキユペートして
抗生物質を検出できる。 この発明の抗生物質複合体は酢酸エチルｎ−ブ
タノール、クロロホルムまたはメチルイソブチル
ケトンのような揮発性水非混和性有機溶媒を使用
して全ブロスをPH７〜10で抽出することによりス
トレプトマイセス・アルブス亜種インデイカス
（streptomyces albus subsp.indicus）
ATCC39012の発酵ブロスから回収できる。別法
として菌糸体は全ブロスから除去でき、次いで
液は全ブロスについてと同じ方法で抽出される。
これにより有機溶媒中抗生物質複合体の溶液が得
られる。酸性PH（たとえばリン酸でPH3.5に調節
された水を使用）で抗生物質複合体を水に逆抽出
し、次いでPH７〜10で酢酸エチル、ｎ−ブタノー
ル、クロロホルムまたはメチルイソブチルトンの
ような水非混和性揮発性有機溶媒中に再抽出し
た。有機溶媒を真空蒸発除去し、残渣をヘキサン
と撹拌した。このヘキサンを除去し、抗生物質を
通常固体として得る。この粗製抗生物質複合体は
クロマトグラフイーまたは向流分配によつて各成
分に分離できる。 式およびの化合物は酸付加塩を形成し、そ
れらの酸付加塩は本発明の範囲内であるものと考
えられる。該酸付加塩はマクロライド化合物につ
いての標準的方法、たとえば式またはの化合
物の適当な溶媒（たとえば酢酸エチル、アセト
ン、メタノール、エタノールまたはブタノール）
中溶液を化学量論的等量の適当な酸を含有する溶
液といつしよにすることによつて製造される。も
し塩が沈殿したら取する。別法としては溶媒の
蒸発によつて回収できる。特に価値があるのは硫
酸塩、塩酸塩、臭化水素酸塩、硝酸塩、リン酸
塩、クエン酸塩、酒石酸塩、パモエート、過塩素
酸塩、スルホサリチル酸塩、ベンゼンスルホン酸
塩、４−トルエンスルホン酸塩および２−ナフチ
レンスルホン酸塩である。 本発明の抗生物質複合体は特定のグラム陽性お
よびグラム陰性微生物に対して抗菌活性を示す。
この抗菌活性は標準的方法によつて種々の微生物
に対する該複合体の最小阻止濃度（MIC）を測定
することによつて示すことができる。MICは抗生
物質に対する感受性試験についての国際的協同研
究（Ericcson and Sherris、Acta、Pathologica
et Microbiologia Scandinav.Supp.217、
SectionB：64−68（1971））によつて推奨される
方法によつて測定できる。これは脳心臓浸出
（BHI）寒天および接種反復装置を使用する。一
晩生育させた試験管を100倍に希釈して標準的接
種物として使用した。（約0.002mlに20000〜10000
細胞が寒天表面に接種される；20mlのBHI寒天／
シヤーレ）被験化合物の12回２倍希釈物を使用し
た。当初の濃度は50mcg/mlであつた。37℃で18
時間後プレートを測定する際単一コロニーは無視
した。試験微生物の感受性（MIC）は肉眼で判断
して生育を完全に阻止することのできる化合物の
最小濃度とした。 抗生物質複合体の抗生物質活性および式およ
びの２つの大きな成分ならびにその医薬として
適当な塩は哺乳類の感受性微生物によつて生じた
細菌感染症の治療に適する。特に、本発明の抗生
物質またはその塩は大きな農場動物、たとえば
馬、牛および豚および家で飼うペツト、たとえば
ネコおよび犬の細菌感染症の治療に有用である。 この発明の抗菌性化合物またはその塩を哺乳類
に使用するとき、化合物単独で投与することがで
き、あるいは他の抗生物質および／又は医薬用担
体または希釈剤と混合できる。該担体または希釈
剤は意図する投与方法にもとづいて選択される。
たとえば、経口投与する場合、本発明の抗菌性化
合物はシロツプ、エリキシル、水溶液および水性
懸濁液等の形で標準的医薬操作によつて使用でき
る。活性成分対担体の割合は意図する剤型によつ
て変化するが、割合は通常１：６〜６：１（重量
比）であり、好ましくは１：１〜１：４である。
本発明の抗菌性化合物は非経口的に投与すること
もでき、筋肉内、腹腔内、皮下および静脈内投与
できる。これらの目的のために、活性成分の滅菌
溶液が調製されるのがふつうで、これらの溶液の
PHは適当に調節され緩衝化される。静脈内投与の
ために、溶質の総濃度をコントロールして製剤を
等張にする。 前述のとおり、本発明の抗菌性化合物はペツト
や農場動物に使用され、使用される日用量はタイ
ロシンのような他のマイクロライド抗生物質と有
意には異ならないであろう。担当獣医が最終的に
患者に適当な投与量を決定できるであろうが、こ
れは個々の動物と体重と反応ならびに動物の症状
の性質と重症度によつて変化するものと考えられ
る。 本発明の化合物は通常経口的に20〜約50mg／Kg
（体重）／日の範囲、非経口的には約10〜約30
mg／Kg（体重）日、通常何回かに分けて投与でき
る。ある場合にはこれらの範囲以外の投与量を使
用する必要もあろう。 下記例は説明のためにのみ示される。 例 ストレプトマイセス・アルブス
（streptomyces Albus）ATCC39012の発酵 下記培地を調製した： 成 分 量（ｇ／リツトル） セレロース 10 とうもろこしでんぷん 20 酵母エキス（デイフコ） ５ NZアミンＡ（フムコ（Humko））* ５ 塩化コバルト 0.002 水を加えて全量を１リツトルとする。PH7.1〜7.2 ＊ カゼインの酵素分解物を精製したもの。 上記培地を300ml振とうフラスコ当り40mlずつ
入れ、120℃；15p.s.iで30分間滅菌した。冷却
後、この培地に、寒天中のATCC172培地上で生
育させたストレプトマイセス・アルブス亜種イン
デイカス（streptomyces albus subsp.indicus）
斜面培養物ATCC39012の生育力ある菌体懸濁液
を接種した。これらのフラスコを28℃で１1/2な
いし２1/2インチの振巾を有するロータリーシエ
ーカー上で150〜200回／分（CPM）２〜４日間
振とうした。次いでこの振とう培養物を使用して
下記培地の１つを２リツトル含有する４リツトル
発酵容器に接種した：
【表】
【表】
＊ カゼインの酵素分解物。
１mlの消泡剤を加え、容器を密封し120℃15p.
s.iで45分間滅菌した。容器に１つ（２％）また
は２つ（４％）の振とうフラスコの内容物を接種
し、30℃で12〜30時間発酵し、1700回転／分
（RPM）で撹拌し、ブロスに１容量／容量／分の
割合で通気した。発酵が完了したとき（枯草菌
（B.subtilis）ATCC6633に対する抗生物質デイス
ク検定にもとづく）、発酵を停止させ、全ブロス
を過した。液をメチルイソブチルケトンまた
は酢酸エチルでPH9.0で抽出した。有機相を水性
層から吸引により引り出し、該有機相を加熱して
真空濃縮して粘稠な油状物を得た。 例 ストレプトマイセス・アルブス亜種インデイカ
スATCC39012の発酵物からの２つの主成物の
単離および特性 ストレプトマイセス・アルブス亜種インデイカ
ス（streptomyces albus supsp.indicus）
ATCC39012の1000ガロン発酵物２つを300ガロン
のメチルイソブチルケトンで抽出した。メチルイ
ソブチルケトン層を15ガロンずつの酸性の水（PH
3.5）で２回抽出した。これらの抽出物をいつし
よにして6N NaOHでPHを9.0に上昇せしめた。次
いで水性相を７ガロンのクロロホルムで抽出し
た。このクロロホルムを蒸発させて黄色油状物
（25ｇ）を得た。この油状物を１リツトルのヘプ
タンで研和し、生じた固体を取し、新しいヘプ
タンで洗つて2.6ｇの固体を得た。 上記2.6ｇの固体をCHCl3−MeOH−NH4OH
（92：８：１）の混合物中カラム級シリカゲル60
（メルク）を充填した2.5×100cmカラムでクロマ
トグラフイーにかけた。同じ溶媒を使用してカラ
ムを溶出した。流速は10ml／分で、１分毎に１つ
の画分を採取した。各画分を薄層クロマトグラフ
イーで検査し、２つの主たる抗生物質成分を含有
する画分をいつしよにし、真空蒸発させた。これ
により1.0ｇの抗生物質複合体を固体として得
た。この個体を同じ条件を使用してシリカゲル上
で再びクロマトグラフイーにかけて150mgの抗生
物質複合体を得た。抗生物質複合体（KBrデイス
ク）の赤外線スペクトルは2.95、3.45、5.80、
6.20、6.90、7.25、7.65、8.30、9.30、9.95、
10.25および11.85ミクロンに有意の吸収帯を示し
た。この抗生物質複合体（メタノール中）の紫外
線吸収スペクトルは238ｍμ（Ｅ1% 141）と279
ｍμ（Ｅ1% 80.5）に吸収極大を示した。 元素分析値：実測値：Ｃ、59.00；Ｈ、8.45；
Ｎ、148％ 例 抗生物質複合体の分離 抗生物質複合体を逆相C18シリカゲルカラムを
使用して各成分に分離した。溶出剤はメタノール
−水−２−アミノエタノール（55：45：0.5）の
混合物を使用した。流速は５ml／分で１分毎に１
つの画分を集めた。カラムは254nｍ紫外線検出
計で監視した。溶出した主成分は式で表わされ
るもので、少量成分は式で示される。下記物理
化学データは個々の成分について測定された。 式 分子式 C44H75O17N 分子量 889 融点 210〜215℃（分解） 元素分析値：Ｃ、59.90；Ｈ、7.97；Ｎ、1.69％ 施光度〔α〕D＝−57゜（Ｃ＝１、CH3OH） 紫外線238nｍ；Ｅ１cm１％＝151 白色無定形固体 赤外線スペクトル（4000〜200cm１域）（KBr
錠）： 3440、2985、2935、1720、1690、1620、1170お
よび1080cm-1。 式 分子式 C44H75O16N 分子量 873 融点 118〜130℃（分解） 紫外線282nｍ；Ｅ１cm１％＝186 無定形固体。 これら２つの化合物の溶解性は類似しており、
クロロホルム、メタノール、エタノールおよび酢
酸エチルに可溶；ヘプタンと水に不溶である。
１mlの消泡剤を加え、容器を密封し120℃15p.
s.iで45分間滅菌した。容器に１つ（２％）また
は２つ（４％）の振とうフラスコの内容物を接種
し、30℃で12〜30時間発酵し、1700回転／分
（RPM）で撹拌し、ブロスに１容量／容量／分の
割合で通気した。発酵が完了したとき（枯草菌
（B.subtilis）ATCC6633に対する抗生物質デイス
ク検定にもとづく）、発酵を停止させ、全ブロス
を過した。液をメチルイソブチルケトンまた
は酢酸エチルでPH9.0で抽出した。有機相を水性
層から吸引により引り出し、該有機相を加熱して
真空濃縮して粘稠な油状物を得た。 例 ストレプトマイセス・アルブス亜種インデイカ
スATCC39012の発酵物からの２つの主成物の
単離および特性 ストレプトマイセス・アルブス亜種インデイカ
ス（streptomyces albus supsp.indicus）
ATCC39012の1000ガロン発酵物２つを300ガロン
のメチルイソブチルケトンで抽出した。メチルイ
ソブチルケトン層を15ガロンずつの酸性の水（PH
3.5）で２回抽出した。これらの抽出物をいつし
よにして6N NaOHでPHを9.0に上昇せしめた。次
いで水性相を７ガロンのクロロホルムで抽出し
た。このクロロホルムを蒸発させて黄色油状物
（25ｇ）を得た。この油状物を１リツトルのヘプ
タンで研和し、生じた固体を取し、新しいヘプ
タンで洗つて2.6ｇの固体を得た。 上記2.6ｇの固体をCHCl3−MeOH−NH4OH
（92：８：１）の混合物中カラム級シリカゲル60
（メルク）を充填した2.5×100cmカラムでクロマ
トグラフイーにかけた。同じ溶媒を使用してカラ
ムを溶出した。流速は10ml／分で、１分毎に１つ
の画分を採取した。各画分を薄層クロマトグラフ
イーで検査し、２つの主たる抗生物質成分を含有
する画分をいつしよにし、真空蒸発させた。これ
により1.0ｇの抗生物質複合体を固体として得
た。この個体を同じ条件を使用してシリカゲル上
で再びクロマトグラフイーにかけて150mgの抗生
物質複合体を得た。抗生物質複合体（KBrデイス
ク）の赤外線スペクトルは2.95、3.45、5.80、
6.20、6.90、7.25、7.65、8.30、9.30、9.95、
10.25および11.85ミクロンに有意の吸収帯を示し
た。この抗生物質複合体（メタノール中）の紫外
線吸収スペクトルは238ｍμ（Ｅ1% 141）と279
ｍμ（Ｅ1% 80.5）に吸収極大を示した。 元素分析値：実測値：Ｃ、59.00；Ｈ、8.45；
Ｎ、148％ 例 抗生物質複合体の分離 抗生物質複合体を逆相C18シリカゲルカラムを
使用して各成分に分離した。溶出剤はメタノール
−水−２−アミノエタノール（55：45：0.5）の
混合物を使用した。流速は５ml／分で１分毎に１
つの画分を集めた。カラムは254nｍ紫外線検出
計で監視した。溶出した主成分は式で表わされ
るもので、少量成分は式で示される。下記物理
化学データは個々の成分について測定された。 式 分子式 C44H75O17N 分子量 889 融点 210〜215℃（分解） 元素分析値：Ｃ、59.90；Ｈ、7.97；Ｎ、1.69％ 施光度〔α〕D＝−57゜（Ｃ＝１、CH3OH） 紫外線238nｍ；Ｅ１cm１％＝151 白色無定形固体 赤外線スペクトル（4000〜200cm１域）（KBr
錠）： 3440、2985、2935、1720、1690、1620、1170お
よび1080cm-1。 式 分子式 C44H75O16N 分子量 873 融点 118〜130℃（分解） 紫外線282nｍ；Ｅ１cm１％＝186 無定形固体。 これら２つの化合物の溶解性は類似しており、
クロロホルム、メタノール、エタノールおよび酢
酸エチルに可溶；ヘプタンと水に不溶である。
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 １ 式 の化合物からなる群より選択される化合物および
その医薬として適当な酸付加塩。 （式中R1は式 の基であり、R2は式 の基である。） ２ 式 である特許請求の範囲第１項記載の化合物および
その医薬として適当な塩。 ３ 式 である特許請求の範囲第１項記載の化合物および
その医薬として適当な塩。
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US06/374,223 US4411892A (en) | 1982-05-03 | 1982-05-03 | Tylosin macrolide antibiotics from streptomyces |
| US374223 | 1982-05-03 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS58213795A JPS58213795A (ja) | 1983-12-12 |
| JPS6127400B2 true JPS6127400B2 (ja) | 1986-06-25 |
Family
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Family Applications (1)
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|---|---|---|---|
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| Country | Link |
|---|---|
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| EP (1) | EP0094176B1 (ja) |
| JP (1) | JPS58213795A (ja) |
| AT (1) | ATE15049T1 (ja) |
| CA (1) | CA1200516A (ja) |
| DE (1) | DE3360601D1 (ja) |
| DK (1) | DK194283A (ja) |
| ES (1) | ES522064A0 (ja) |
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| MX9308001A (es) * | 1992-12-21 | 1994-08-31 | Lilly Co Eli | Premezcla para piensos de animales que contiene tilosina y procedimiento para su obtencion. |
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| US4252898A (en) * | 1979-05-23 | 1981-02-24 | Eli Lilly And Company | Antibiotics A6888C and A6888X |
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| HU189519B (en) * | 1980-07-24 | 1986-07-28 | Eli Lilly And Co,Us | Process for preparing 2'''-o-demethyl-macrocin derivatives |
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-
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- 1983-04-28 EP EP83302403A patent/EP0094176B1/en not_active Expired
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