JPS6141553B2 - - Google Patents
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- JPS6141553B2 JPS6141553B2 JP16410179A JP16410179A JPS6141553B2 JP S6141553 B2 JPS6141553 B2 JP S6141553B2 JP 16410179 A JP16410179 A JP 16410179A JP 16410179 A JP16410179 A JP 16410179A JP S6141553 B2 JPS6141553 B2 JP S6141553B2
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- serine
- glycine
- medium
- growth
- resistant
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
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- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
Description
本発明は発酵法によるＬ−セリンの製造方法に
関するものである。 さらに詳しくはシユードモナス属に属したグリ
シンからＬ−セリンを生産する能力を有し、かつ
クロロアセチルセリンまたはカーボベンゾオキシ
セリンまたはグリシンヒドロキサメートに耐性を
有する変異株を、グリシンを含有する栄養培地中
に培養し、培地中に生成蓄積したＬ−セリンを採
取することを特徴とする発酵法によるＬ−セリン
の製造方法である。 発酵法によるＬ−セリンの製造方法としては、
コリネバクテリウム属やシユードモナス属等の微
生物により、グリシンより製造する方法が知られ
ている。 本発明者等は、Ｌ−セリンの製造方法について
鋭意研究を重ねた結果、シユードモナス属に属し
クロロアセチルセリン、カーボベンジルオキシセ
リン、グリシンヒドロキサメートに抵抗性を有す
る変異株の多くが、グリシンより高い収率でＬ−
セリンを生成蓄積する事実を見出した。 本発明において用いる微生物は、シユードモナ
ス属に属しクロロアセチルセリン、カーボベンジ
ルオキシセリン、グリシンヒドロキサメートに耐
性を有する変異株である。耐性を有する変異株と
は、親株にくらべこれらの薬剤に対し生育阻害の
程度が低下したような株をいう。これらの変異株
を採取するには、公知の変異処理法である紫外
線、薬剤処理、γ−線照射などの変異処理を親株
に施した後、親株に生育できないような量のクロ
ロアセチルセリン、カーボベンジルオキシセリ
ン、グリシンヒドロキサメート等を含有する寒天
培地または液体培地に生育できる菌株を選択すれ
ばよい。本発明に使用する変異株として具体的に
はシユードモナス ロドメチロフアシエンス
AJ 11503FERM−P5308（カーボベンジルオキシ
セリン耐性）、シユードモナス ロドメチロフア
シエンスAJ 11504 FERM−P5309（クロロアセ
チルセリン耐性）、シユードモナス ロドメチロ
フアシエンス AJ 11505 FERM−P5310（Ｄ−
セリン耐性、グリシンヒドロキサメート耐性）、
シユードモナス ロドメチロフアシエンス AJ
11506 FERM−P5311（グリシンヒドロキサメー
ト耐性）をあげることができる。これらの変異株
はシユードモナス ロドメチロフアシエンス
AJ 11261、FERM−P4531を親株としてさらに変
異誘導して得られたものである。親株AJ 11261
からの変異誘導方法は次の通りである。 メタノール２ml/dlを含有する肉汁液体培地で
30℃、24時間培養したシユードモナス ロドメチ
ロフアシエンス AJ 11261の菌体をニトロソグ
アニジン250μｇ/mlを含む50ｍＭリン酸バツフア
ー（PH7.0）10mlに懸濁し、この懸濁液を30℃、
15分間振盪する。振盪後菌体を洗浄して適当に稀
釈し、Ｄ−セリン、クロロアセチルセリンあるい
はカーボベンゾキシセリン、またはグリシンヒド
ロキサメートを0.1〜10mg/ml添加した。メタノー
ル1.5ml/dl含有の最少生育培地、KH2PO40.06
％、（NH4）2HPO40.2％、MgSO4・7H2O0.02％、
NaCl 0.05％、FeSO4・7H2O0.001％、MnSO4・
nH2O0.0005％に菌体を接種し、30℃で７〜15日
間培養した培養液を、メタノール２ml/dl含有ブ
イヨン寒天平板培地に塗布し、30℃で２〜４日間
培養して生育してきたコロニーの中からＬ−セリ
ン生産性の優れたものを採取した。 なおこれらの変異株の具体的な採取方法は、最
少生育培地KH2PO40.06％、（NH4）2HPO40.2％、
MgSO4・7H2O0.02％、NaCl 0.05％、FeSO4・
7H2O0.001％、MnSO4・nH2O0.0005％、メタノ
ール1.5％の組成の倍地５mlを試験管に入れ、さ
らにＤ−セリン、クロロアセチルセリン、カーボ
ベンゾオキシセリン、グリシンヒドロキサメート
等の薬剤を０〜1000mg/dlになるように各々試験
管に入れた。これらの各薬剤の入つた試験管に、
メタノール２％含有肉汁スラントで30℃48時間培
養した親株AJ 11261を50ｍＭリン酸バツフアー
（PH7.0）10mlに懸濁し、その懸濁液を0.1ml接植
し30℃、２〜４日間振盪培養を行つた。各濃度の
薬剤の入つた培養終了液の菌増殖度を波長562n
ｍで測定することにより、各薬剤に対する生育阻
止濃度を知ることができた。したがつて耐性変異
株の採取は、ニトロソグアニジンによる変異処理
後の親株を各薬剤（Ｄ−セリン、クロロアセチル
セリン、カーボベンゾキシセリン、グリシンヒド
ロキサメート）の生育阻止濃度以上添加された最
少生育培地に接種し、30℃、７〜15日間培養し、
生育してきた耐性変異株をメタノール２％含有肉
汁プレートに撤き生育してきたコロニーを分離し
た。 各薬剤に対する生育阻止濃度及び抵抗性変異株
採集濃度を第１表に示す。
関するものである。 さらに詳しくはシユードモナス属に属したグリ
シンからＬ−セリンを生産する能力を有し、かつ
クロロアセチルセリンまたはカーボベンゾオキシ
セリンまたはグリシンヒドロキサメートに耐性を
有する変異株を、グリシンを含有する栄養培地中
に培養し、培地中に生成蓄積したＬ−セリンを採
取することを特徴とする発酵法によるＬ−セリン
の製造方法である。 発酵法によるＬ−セリンの製造方法としては、
コリネバクテリウム属やシユードモナス属等の微
生物により、グリシンより製造する方法が知られ
ている。 本発明者等は、Ｌ−セリンの製造方法について
鋭意研究を重ねた結果、シユードモナス属に属し
クロロアセチルセリン、カーボベンジルオキシセ
リン、グリシンヒドロキサメートに抵抗性を有す
る変異株の多くが、グリシンより高い収率でＬ−
セリンを生成蓄積する事実を見出した。 本発明において用いる微生物は、シユードモナ
ス属に属しクロロアセチルセリン、カーボベンジ
ルオキシセリン、グリシンヒドロキサメートに耐
性を有する変異株である。耐性を有する変異株と
は、親株にくらべこれらの薬剤に対し生育阻害の
程度が低下したような株をいう。これらの変異株
を採取するには、公知の変異処理法である紫外
線、薬剤処理、γ−線照射などの変異処理を親株
に施した後、親株に生育できないような量のクロ
ロアセチルセリン、カーボベンジルオキシセリ
ン、グリシンヒドロキサメート等を含有する寒天
培地または液体培地に生育できる菌株を選択すれ
ばよい。本発明に使用する変異株として具体的に
はシユードモナス ロドメチロフアシエンス
AJ 11503FERM−P5308（カーボベンジルオキシ
セリン耐性）、シユードモナス ロドメチロフア
シエンスAJ 11504 FERM−P5309（クロロアセ
チルセリン耐性）、シユードモナス ロドメチロ
フアシエンス AJ 11505 FERM−P5310（Ｄ−
セリン耐性、グリシンヒドロキサメート耐性）、
シユードモナス ロドメチロフアシエンス AJ
11506 FERM−P5311（グリシンヒドロキサメー
ト耐性）をあげることができる。これらの変異株
はシユードモナス ロドメチロフアシエンス
AJ 11261、FERM−P4531を親株としてさらに変
異誘導して得られたものである。親株AJ 11261
からの変異誘導方法は次の通りである。 メタノール２ml/dlを含有する肉汁液体培地で
30℃、24時間培養したシユードモナス ロドメチ
ロフアシエンス AJ 11261の菌体をニトロソグ
アニジン250μｇ/mlを含む50ｍＭリン酸バツフア
ー（PH7.0）10mlに懸濁し、この懸濁液を30℃、
15分間振盪する。振盪後菌体を洗浄して適当に稀
釈し、Ｄ−セリン、クロロアセチルセリンあるい
はカーボベンゾキシセリン、またはグリシンヒド
ロキサメートを0.1〜10mg/ml添加した。メタノー
ル1.5ml/dl含有の最少生育培地、KH2PO40.06
％、（NH4）2HPO40.2％、MgSO4・7H2O0.02％、
NaCl 0.05％、FeSO4・7H2O0.001％、MnSO4・
nH2O0.0005％に菌体を接種し、30℃で７〜15日
間培養した培養液を、メタノール２ml/dl含有ブ
イヨン寒天平板培地に塗布し、30℃で２〜４日間
培養して生育してきたコロニーの中からＬ−セリ
ン生産性の優れたものを採取した。 なおこれらの変異株の具体的な採取方法は、最
少生育培地KH2PO40.06％、（NH4）2HPO40.2％、
MgSO4・7H2O0.02％、NaCl 0.05％、FeSO4・
7H2O0.001％、MnSO4・nH2O0.0005％、メタノ
ール1.5％の組成の倍地５mlを試験管に入れ、さ
らにＤ−セリン、クロロアセチルセリン、カーボ
ベンゾオキシセリン、グリシンヒドロキサメート
等の薬剤を０〜1000mg/dlになるように各々試験
管に入れた。これらの各薬剤の入つた試験管に、
メタノール２％含有肉汁スラントで30℃48時間培
養した親株AJ 11261を50ｍＭリン酸バツフアー
（PH7.0）10mlに懸濁し、その懸濁液を0.1ml接植
し30℃、２〜４日間振盪培養を行つた。各濃度の
薬剤の入つた培養終了液の菌増殖度を波長562n
ｍで測定することにより、各薬剤に対する生育阻
止濃度を知ることができた。したがつて耐性変異
株の採取は、ニトロソグアニジンによる変異処理
後の親株を各薬剤（Ｄ−セリン、クロロアセチル
セリン、カーボベンゾキシセリン、グリシンヒド
ロキサメート）の生育阻止濃度以上添加された最
少生育培地に接種し、30℃、７〜15日間培養し、
生育してきた耐性変異株をメタノール２％含有肉
汁プレートに撤き生育してきたコロニーを分離し
た。 各薬剤に対する生育阻止濃度及び抵抗性変異株
採集濃度を第１表に示す。
【表】
なおシユードモナス ロドメチロフアシエンス
（Pseudomonas rhodomethylofaciens）AJ 11261
FERM−P4531は新菌種に分類されたものであ
り、その菌学的性質は以下の通りである。 (a) 形 態 (1) 細胞の形および大きさ： 大型の桿菌、1.0〜1.5×２〜５ミクロン (2) 細胞の多形性の有無： あり、ポリβ−ハイドロオキシ酪酸の顆粒を
菌体内に形成 (3) 運動性の有無 鞭毛の着生状態：有り 極
鞭毛 (4) 胞子の有無、形状、大きさ、部位：なし (5) グラム染色性：陰性 (6) 抗酸性：陰性 (b) 各培地における生育状態 (1) 肉汁寒天平板培養：中等の生育、円形、全
縁、 半レンズ状、約質、黄橙色、不透明 (2) 肉汁寒天斜面培養：中等の生育、糸状、赤
橙色、 不透明、水溶性色素は生成しない (3) 肉汁液体培養：中等の生育、リング状 (4) 肉汁ゼラチン穿刺培養： 上部に生育、好気的 液化しない (5) リトマス・ミルク：変化なし (c) 生理学的性質 (1) 硝酸塩の還元：陽性 (2) 脱窒反応：陰性 (3) MRテスト：陰性 (4) VPテスト：陰性 (5) インドールの生成：陰性 (6) 硫化水素の生成：陰性 (7) デンプンの加水分解：陰性 (8) クエン酸の利用： Koser培地 微弱に利用する Christensen培地微弱に利用する (9) 無機窒素源の利用：（メタノール培地） 硝酸塩 利用する アンモニウム 利用する (10) 色素の生成：生成せず (11) ウレアーゼ：陰性 (12) オキシダーゼ：陽性 (13) カタラーゼ：陽性 (14) 生育の範囲 温度 10〜38℃ 41℃では生育できない PH ６〜８ (15) 酸素に対する態度：好気性
（Pseudomonas rhodomethylofaciens）AJ 11261
FERM−P4531は新菌種に分類されたものであ
り、その菌学的性質は以下の通りである。 (a) 形 態 (1) 細胞の形および大きさ： 大型の桿菌、1.0〜1.5×２〜５ミクロン (2) 細胞の多形性の有無： あり、ポリβ−ハイドロオキシ酪酸の顆粒を
菌体内に形成 (3) 運動性の有無 鞭毛の着生状態：有り 極
鞭毛 (4) 胞子の有無、形状、大きさ、部位：なし (5) グラム染色性：陰性 (6) 抗酸性：陰性 (b) 各培地における生育状態 (1) 肉汁寒天平板培養：中等の生育、円形、全
縁、 半レンズ状、約質、黄橙色、不透明 (2) 肉汁寒天斜面培養：中等の生育、糸状、赤
橙色、 不透明、水溶性色素は生成しない (3) 肉汁液体培養：中等の生育、リング状 (4) 肉汁ゼラチン穿刺培養： 上部に生育、好気的 液化しない (5) リトマス・ミルク：変化なし (c) 生理学的性質 (1) 硝酸塩の還元：陽性 (2) 脱窒反応：陰性 (3) MRテスト：陰性 (4) VPテスト：陰性 (5) インドールの生成：陰性 (6) 硫化水素の生成：陰性 (7) デンプンの加水分解：陰性 (8) クエン酸の利用： Koser培地 微弱に利用する Christensen培地微弱に利用する (9) 無機窒素源の利用：（メタノール培地） 硝酸塩 利用する アンモニウム 利用する (10) 色素の生成：生成せず (11) ウレアーゼ：陰性 (12) オキシダーゼ：陽性 (13) カタラーゼ：陽性 (14) 生育の範囲 温度 10〜38℃ 41℃では生育できない PH ６〜８ (15) 酸素に対する態度：好気性
【表】
【表】
(17) ポリ−β−ヒドロキシ酪酸の蓄積：＋
(18) 栄養要求性：なし
【表】
【表】
(20) その他の性質
Ｌ−セリンヒドロオキシメチルトランスフエ
ラーゼ活性：陽性 ヒドロオキシピルビン酸レダクターゼ活性：
陽性 本菌種は上記の如く、グラム陰性の桿菌で極単
鞭毛を有しており運動性があり好気的である。ま
た糖より酸を生成する性質があり、バージエイズ
マニユアル第８版によるとシユードモナス属に属
する。また栄養要求性がないこと、菌体内にポリ
−β−ハイドロオキシ酪酸を蓄積すること、アル
ギニンの資化性がないこと、赤色の色素を有する
等の特徴で既知の菌種とは異なる新菌種と判断し
シユードモナス ロドメチロフアシエンスと命名
した。 本発明の上記変異株を培養する倍地は、グリシ
ンの他に炭素源、窒素源、無機イオン、ビタミ
ン、アミノ酸等の有機微量栄養素を含有するもの
であれば合成培地、天然培地のいずれでも使用す
ることができる。グリシンは倍地に予め添加して
おいてもよく、あるいは培養途中に添加してもよ
い。又変異株の生育の阻害が軽減するよう培地中
のグリシン濃度が低くなるよう少量づつ分割添加
してもよい。 炭素源としてはメタノールが最適であるが、適
当な菌株を選択すればエタノール、プロパノール
等のアルコール類、蟻酸、酢酸等の有機酸類、グ
ルコース等の炭水化物も使用できるものがある。 窒素源としてはアンモニア水、アンモニウム
塩、硝酸塩、アミノ酸その他の通常用いられてい
るいずれの窒素源も使用できる。 無機イオンとしてはカリ、マグネシウム、鉄、
マンガン、カルシウム、クロール、硫酸、リン酸
等のイオンを必要に応じ使用する。 さらに有機微量栄養素としてビタミン類、アミ
ノ酸類、コーンステイーブリカー、酵母エキス、
肉エキス、大豆蛋白加水分解物等を添加してもよ
い。 培養は好気的条件で行うのがよく、PHは通常５
〜９の範囲で好ましくは中性附近がよい。培養温
度は25〜37℃の範囲で培養するのが望ましい。培
地のPH調整はCaCO3、酸、アルカリ溶液、アン
モニアガス等によつて行う。培養を好気条件下で
２〜８日間行うことにより、発酵終了液中に著量
のＬ−セリンが蓄積される。培養終了液よりＬ−
セリンを回収するには、イオン交換樹脂法を用い
る方法等一般に知られている通常の回収方法によ
つて行なうことができる。 以下、本発明を実施例により具体的に説明す
る。 実施例 １ KH2PO40.05％、（NH4）2SO40.5％、MgSO4・
7H2O0.04％、NCl 0.05％、FeSO4・7H2O0.001
％、MnSO4・nH2O0.0005％、酵母エキス0.2％、
メタノール1.5％（別殺菌）、CaCO35％、（PH
7.0）の組成の培地20mlを500ml容坂口フラスコに
入れ殺菌した。これにメタノール２％含有肉汁ス
ラントで30℃、48時間培養した第１表に示す菌株
を各々１白金耳接種し、31.5℃で振盪培養を行な
つた。培養24時間後にメタノール1.5％を添加
し、さらに24時間培養してからグリシン1.5％、
メタノール４％を添加し、その後さらに48時間培
養を行なつた。Ｌ−セリンの生成量は第２表に示
すとうりであつた。
ラーゼ活性：陽性 ヒドロオキシピルビン酸レダクターゼ活性：
陽性 本菌種は上記の如く、グラム陰性の桿菌で極単
鞭毛を有しており運動性があり好気的である。ま
た糖より酸を生成する性質があり、バージエイズ
マニユアル第８版によるとシユードモナス属に属
する。また栄養要求性がないこと、菌体内にポリ
−β−ハイドロオキシ酪酸を蓄積すること、アル
ギニンの資化性がないこと、赤色の色素を有する
等の特徴で既知の菌種とは異なる新菌種と判断し
シユードモナス ロドメチロフアシエンスと命名
した。 本発明の上記変異株を培養する倍地は、グリシ
ンの他に炭素源、窒素源、無機イオン、ビタミ
ン、アミノ酸等の有機微量栄養素を含有するもの
であれば合成培地、天然培地のいずれでも使用す
ることができる。グリシンは倍地に予め添加して
おいてもよく、あるいは培養途中に添加してもよ
い。又変異株の生育の阻害が軽減するよう培地中
のグリシン濃度が低くなるよう少量づつ分割添加
してもよい。 炭素源としてはメタノールが最適であるが、適
当な菌株を選択すればエタノール、プロパノール
等のアルコール類、蟻酸、酢酸等の有機酸類、グ
ルコース等の炭水化物も使用できるものがある。 窒素源としてはアンモニア水、アンモニウム
塩、硝酸塩、アミノ酸その他の通常用いられてい
るいずれの窒素源も使用できる。 無機イオンとしてはカリ、マグネシウム、鉄、
マンガン、カルシウム、クロール、硫酸、リン酸
等のイオンを必要に応じ使用する。 さらに有機微量栄養素としてビタミン類、アミ
ノ酸類、コーンステイーブリカー、酵母エキス、
肉エキス、大豆蛋白加水分解物等を添加してもよ
い。 培養は好気的条件で行うのがよく、PHは通常５
〜９の範囲で好ましくは中性附近がよい。培養温
度は25〜37℃の範囲で培養するのが望ましい。培
地のPH調整はCaCO3、酸、アルカリ溶液、アン
モニアガス等によつて行う。培養を好気条件下で
２〜８日間行うことにより、発酵終了液中に著量
のＬ−セリンが蓄積される。培養終了液よりＬ−
セリンを回収するには、イオン交換樹脂法を用い
る方法等一般に知られている通常の回収方法によ
つて行なうことができる。 以下、本発明を実施例により具体的に説明す
る。 実施例 １ KH2PO40.05％、（NH4）2SO40.5％、MgSO4・
7H2O0.04％、NCl 0.05％、FeSO4・7H2O0.001
％、MnSO4・nH2O0.0005％、酵母エキス0.2％、
メタノール1.5％（別殺菌）、CaCO35％、（PH
7.0）の組成の培地20mlを500ml容坂口フラスコに
入れ殺菌した。これにメタノール２％含有肉汁ス
ラントで30℃、48時間培養した第１表に示す菌株
を各々１白金耳接種し、31.5℃で振盪培養を行な
つた。培養24時間後にメタノール1.5％を添加
し、さらに24時間培養してからグリシン1.5％、
メタノール４％を添加し、その後さらに48時間培
養を行なつた。Ｌ−セリンの生成量は第２表に示
すとうりであつた。
【表】
【表】
Claims (1)
- １ シユードモナス属に属し、グリシンからＬ−
セリンを生産する能力を有し、かつクロロアセチ
ルセリン、又はカーボベンジルオキシセリン又は
グリシンヒドロキサメートに耐性を有する変異株
を、グリシンを含有する培地中に培養し、培養液
中に生成蓄積したＬ−セリンを採取することを特
徴とするＬ−セリンの製造方法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP16410179A JPS5688798A (en) | 1979-12-19 | 1979-12-19 | Preparation of l-serine by fermentation method |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP16410179A JPS5688798A (en) | 1979-12-19 | 1979-12-19 | Preparation of l-serine by fermentation method |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS5688798A JPS5688798A (en) | 1981-07-18 |
| JPS6141553B2 true JPS6141553B2 (ja) | 1986-09-16 |
Family
ID=15786775
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP16410179A Granted JPS5688798A (en) | 1979-12-19 | 1979-12-19 | Preparation of l-serine by fermentation method |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS5688798A (ja) |
Families Citing this family (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4528273A (en) * | 1983-11-22 | 1985-07-09 | W. R. Grace & Co. | Microorganism strains for the fermentative preparation of L-serine |
-
1979
- 1979-12-19 JP JP16410179A patent/JPS5688798A/ja active Granted
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPS5688798A (en) | 1981-07-18 |
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