JPS6143995B2 - - Google Patents
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- Publication number
- JPS6143995B2 JPS6143995B2 JP57208947A JP20894782A JPS6143995B2 JP S6143995 B2 JPS6143995 B2 JP S6143995B2 JP 57208947 A JP57208947 A JP 57208947A JP 20894782 A JP20894782 A JP 20894782A JP S6143995 B2 JPS6143995 B2 JP S6143995B2
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- oxygen
- carbon dioxide
- bacteria
- present
- gas
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Expired
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- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Description
本発明は、嫌気性細菌を培養するための一定の
炭酸ガス濃度のガス雰囲気を簡単につくり出すた
めの脱酸素剤に関するものである。 嫌気性細菌は、チトクローム酵素系を持たない
ため、分子状酸素を利用することができず、普通
の培養方法では生育しないものである。すなわ
ち、無酸素状態のみで生育するものであるため、
細菌生育培地を完全に無酸素状態に保持する必要
があり、いろいろな工夫が必要であり、かつ特別
な器具、装置が必要であつた。そのうえ、これら
の器具、装置の操作にはかなりの熟練を要した。 この様な嫌気性細菌の培養のため、分子状酸素
すなわち遊離酸素を除去するためには、下記のよ
うに多くの方法が知られている。 (イ)重層法：最も簡単な方法であり、培地の表面
にワセリン、流動パラフイン、寒天などを重層し
て空気の侵入をさえぎる方法。 (ロ)高層固形培地培養法：ぶどう糖寒天地、普通
寒天地等予め煮沸、急冷したものに混合培養する
か、あるいは穿刺培養する方法。この方法は、培
地の内深部には酸素が侵入しない事を利用したも
のである。 (ハ)空気置換法：鉄槽またはデシケーター等の壁
の厚いガラス槽の中に菌を接種した培地を納め、
真空ポンプで槽内の空気を除き、そのままあるい
は水素または窒素ガス等で置換して発育させる。
この方法に比較的多く用いられるものに細谷の嫌
気性培養器がある。この方法は、物理的方法とし
て確実であるが、真空ポンプ、ガスボンベ、圧力
計等の諸器具が必要であり、また煩雑な操作が必
要である。 (ニ)化学的酸素吸収法：この方法は化学反応によ
り、酸素を吸収、除去してしまい密封系内を嫌気
性を保つものである。用いる化学薬品によりシユ
ートンサツク法およびローゼンタールのクロム硫
酸法がある。 シユートンサツク法：焦性没食子酸と炭酸ナト
リウムの混合物を吸収させ、嫌気性細菌を発育さ
せる方法。 ローゼンタールのクロム硫酸法：金属クロムと
硫酸の反応により、水素を発生させ酸素を吸収す
る方法。 Cr＋H2SO4→CrSO4＋H2 4CrSO4＋2H2SO4＋O2→2Cr（SO4）３＋2H2O (ホ)還元剤等を培地に加える方法：培地内に還元
性物質を加えて培地内を嫌気性状態にするもので
ある。このような培地として肝片肝臓ブイヨン、
細谷システインブイヨン等がある。 (ヘ)生物学的方法：好気性細菌の呼吸を利用して
器内の分子状酸素を減らし、その中で嫌気性細菌
を培養する方法。 予め盛んに培養した霊菌又は枯草菌の菌苔が必
要である。 以上の方法は、その目的に応じてそれぞれ長所
を有しているが、嫌気性状態にするためには、そ
れぞれ煩雑な操作が必要である。又、近年嫌気性
細菌の培養においては、炭酸ガスが必要と考えら
れており、無酸素炭酸ガス存在雰囲気下の培養が
一般化しつつある。 本発明の目的は、上記の要望にかなつた一定炭
酸ガス濃度の嫌気性雰囲気を、簡便に作り出すた
めの脱酸素剤を提供し、従来細菌検査室の整つた
大規模病院又は医学研究機関においてのみ可能で
あつた嫌気性細菌の培養を、保健所や一般の医
院、病院にまで可能とするものである。 また本発明の目的は、本発明者等が出願した特
願昭56―147246号における嫌気性細菌の培養法に
おいて使用可能な機能を有する脱酸素剤を提供す
ることである。 本発明の脱酸素剤は、化学反応により、６時間
以内に密封系内の分子状酸素を吸収除去すると同
時に、炭酸ガスを発生させ嫌気性細菌の種類に応
じた適した炭酸ガス濃度雰囲気に達成させ、その
ままの状態で維持可能である。 具体的には、本発明の脱酸素剤は、アスコルビ
ン酸またはその塩、２種以上のアルカリ性化合物
および金属塩からなる。 以下本発明を詳細に説明する。 主剤で、粒径が50〜80メツシユのものが好まし
く、中でもＬ―アスコルビン酸ナトリウムが反応
性が優れている。 また２種以上のアルカリ性化合物は、以下に示
す反応の反応系内のPHを中性から弱アルカリ性
に維持し、かつ水分を均一に付与しながら発生す
る炭酸ガスの濃度を調節するものである。 このアルカリ性化合物は少なくとも結晶水を含
む炭酸アルカリ、炭酸水素アルカリを含むもので
ある。 具体的には、結晶水を有する炭酸アルカリは、
Na2CO3・10H2O，BeCO3・4H2O，MgCO3・
3H2O，KNaCO3・6H2Oがあげられ、また炭酸水
素アルカリは、KHCO3・NaHCO3があげられ
る。 金属塩は、主剤の酸素吸収速度を速くするため
のもので、鉄化合物また銅化合物が適しており、
中でも溶解度の大きい硫酸第一鉄・７水塩が適し
ている。 以下本発明の脱酸素剤の反応を、主剤がＬ―ア
スコルビン酸ナトリウムを用いた場合で説明す
る。 また本発明の脱酸素剤は、上記反応をより速く
するため活性炭を加えたものである。 以下に本発明の具体的な配合例を示す。 Γ配合例 Ｌ―アスコルビン酸ナトリウム ６重量部 炭酸ナトリウム・10水塩 ８〜12重量部 炭酸水素ナトリウム ６〜12重量部 硫酸第一鉄・７水塩 １重量部 活性炭 ５重量部 上記組成比内で選定する事により、密封系内の
酸素濃度を、６時間以内にガスクロマトグラフに
て検出限度以下に減少させ、かつ30〜50％程度の
炭酸ガス濃度を得る事が出来る。又組成物の最終
形状には限定されず、粉末顆粒、ダブレツト状で
あつてもかまわない。そのために形状付与剤とし
て、結晶セルロースタルク、アラビアガム、デキ
ストリン、でんぷん、リン酸ナトリウム等を微量
添加する事が可能である。 本発明は、以上のような組成および配合比から
なるので、組成物中に均一に水分を分布すること
ができ、酸素吸収および炭酸ガス発生の反応を一
定にすることができる。 この反応に必要な水分を混合時、充填時または
使用時に外部から自由水を添加した場合、反応は
発生するが、水分が均一に分布されなかつたり、
反応が一定に進まず、所望のガス雰囲気を得るの
には好ましくない。 またアルカリ性化合物が少なくとも炭酸アルカ
リおよび炭酸水素アルカリを含むものでなく、炭
酸アルカリ単独の場合は、炭酸ガス濃度を30％以
上に保つことができず、一方炭酸水素アルカリ単
独の場合は酸素吸水速度が遅く、所望のガス濃度
を達成することができない。 次に本発明の脱酸素剤の使用方法について説明
する。 脱酸素剤の使用量は、密封系内の大気量及び酸
素吸収除去に要する許容時間によつて変り、一般
に5000〜10000秒／100c.c.（JIS P8117ガーレー式
透気度）の通気性を有する包装材料により包装
し、使用する。 本発明の脱酸素剤の実際の使用方法は、培養す
べき嫌気性細菌を接種したシヤーレ、コルベン培
養試験管や各種検査検体を収容したジヤー又は酸
素、炭酸ガス、水蒸気等のガス透過度の小さいフ
レキシブルな合成樹脂袋体に併置するだけで良
く、極めて簡便に嫌気状態を得る事が可能であ
る。 また、本発明の脱酸素剤は大気との反応開始に
おいて、発熱あるいは吸熱する事がほとんど無
く、かつ広い温度範囲で反応が開始する。そのた
め、中、高温細菌のみならず、低温細菌の培養に
も使用可能であり、更に大気との反応時水分を放
散又は吸収する事がないので、密封容器内の培地
を過度に乾燥させたり、露結現象を生じたりする
事はない。 以下、本発明の実施例について説明する。 ＜実施例１＞ 下記表１の組成の脱酸素剤を用いて、密封系内
の酸素濃度と炭酸ガス濃度を測定した。
炭酸ガス濃度のガス雰囲気を簡単につくり出すた
めの脱酸素剤に関するものである。 嫌気性細菌は、チトクローム酵素系を持たない
ため、分子状酸素を利用することができず、普通
の培養方法では生育しないものである。すなわ
ち、無酸素状態のみで生育するものであるため、
細菌生育培地を完全に無酸素状態に保持する必要
があり、いろいろな工夫が必要であり、かつ特別
な器具、装置が必要であつた。そのうえ、これら
の器具、装置の操作にはかなりの熟練を要した。 この様な嫌気性細菌の培養のため、分子状酸素
すなわち遊離酸素を除去するためには、下記のよ
うに多くの方法が知られている。 (イ)重層法：最も簡単な方法であり、培地の表面
にワセリン、流動パラフイン、寒天などを重層し
て空気の侵入をさえぎる方法。 (ロ)高層固形培地培養法：ぶどう糖寒天地、普通
寒天地等予め煮沸、急冷したものに混合培養する
か、あるいは穿刺培養する方法。この方法は、培
地の内深部には酸素が侵入しない事を利用したも
のである。 (ハ)空気置換法：鉄槽またはデシケーター等の壁
の厚いガラス槽の中に菌を接種した培地を納め、
真空ポンプで槽内の空気を除き、そのままあるい
は水素または窒素ガス等で置換して発育させる。
この方法に比較的多く用いられるものに細谷の嫌
気性培養器がある。この方法は、物理的方法とし
て確実であるが、真空ポンプ、ガスボンベ、圧力
計等の諸器具が必要であり、また煩雑な操作が必
要である。 (ニ)化学的酸素吸収法：この方法は化学反応によ
り、酸素を吸収、除去してしまい密封系内を嫌気
性を保つものである。用いる化学薬品によりシユ
ートンサツク法およびローゼンタールのクロム硫
酸法がある。 シユートンサツク法：焦性没食子酸と炭酸ナト
リウムの混合物を吸収させ、嫌気性細菌を発育さ
せる方法。 ローゼンタールのクロム硫酸法：金属クロムと
硫酸の反応により、水素を発生させ酸素を吸収す
る方法。 Cr＋H2SO4→CrSO4＋H2 4CrSO4＋2H2SO4＋O2→2Cr（SO4）３＋2H2O (ホ)還元剤等を培地に加える方法：培地内に還元
性物質を加えて培地内を嫌気性状態にするもので
ある。このような培地として肝片肝臓ブイヨン、
細谷システインブイヨン等がある。 (ヘ)生物学的方法：好気性細菌の呼吸を利用して
器内の分子状酸素を減らし、その中で嫌気性細菌
を培養する方法。 予め盛んに培養した霊菌又は枯草菌の菌苔が必
要である。 以上の方法は、その目的に応じてそれぞれ長所
を有しているが、嫌気性状態にするためには、そ
れぞれ煩雑な操作が必要である。又、近年嫌気性
細菌の培養においては、炭酸ガスが必要と考えら
れており、無酸素炭酸ガス存在雰囲気下の培養が
一般化しつつある。 本発明の目的は、上記の要望にかなつた一定炭
酸ガス濃度の嫌気性雰囲気を、簡便に作り出すた
めの脱酸素剤を提供し、従来細菌検査室の整つた
大規模病院又は医学研究機関においてのみ可能で
あつた嫌気性細菌の培養を、保健所や一般の医
院、病院にまで可能とするものである。 また本発明の目的は、本発明者等が出願した特
願昭56―147246号における嫌気性細菌の培養法に
おいて使用可能な機能を有する脱酸素剤を提供す
ることである。 本発明の脱酸素剤は、化学反応により、６時間
以内に密封系内の分子状酸素を吸収除去すると同
時に、炭酸ガスを発生させ嫌気性細菌の種類に応
じた適した炭酸ガス濃度雰囲気に達成させ、その
ままの状態で維持可能である。 具体的には、本発明の脱酸素剤は、アスコルビ
ン酸またはその塩、２種以上のアルカリ性化合物
および金属塩からなる。 以下本発明を詳細に説明する。 主剤で、粒径が50〜80メツシユのものが好まし
く、中でもＬ―アスコルビン酸ナトリウムが反応
性が優れている。 また２種以上のアルカリ性化合物は、以下に示
す反応の反応系内のPHを中性から弱アルカリ性
に維持し、かつ水分を均一に付与しながら発生す
る炭酸ガスの濃度を調節するものである。 このアルカリ性化合物は少なくとも結晶水を含
む炭酸アルカリ、炭酸水素アルカリを含むもので
ある。 具体的には、結晶水を有する炭酸アルカリは、
Na2CO3・10H2O，BeCO3・4H2O，MgCO3・
3H2O，KNaCO3・6H2Oがあげられ、また炭酸水
素アルカリは、KHCO3・NaHCO3があげられ
る。 金属塩は、主剤の酸素吸収速度を速くするため
のもので、鉄化合物また銅化合物が適しており、
中でも溶解度の大きい硫酸第一鉄・７水塩が適し
ている。 以下本発明の脱酸素剤の反応を、主剤がＬ―ア
スコルビン酸ナトリウムを用いた場合で説明す
る。 また本発明の脱酸素剤は、上記反応をより速く
するため活性炭を加えたものである。 以下に本発明の具体的な配合例を示す。 Γ配合例 Ｌ―アスコルビン酸ナトリウム ６重量部 炭酸ナトリウム・10水塩 ８〜12重量部 炭酸水素ナトリウム ６〜12重量部 硫酸第一鉄・７水塩 １重量部 活性炭 ５重量部 上記組成比内で選定する事により、密封系内の
酸素濃度を、６時間以内にガスクロマトグラフに
て検出限度以下に減少させ、かつ30〜50％程度の
炭酸ガス濃度を得る事が出来る。又組成物の最終
形状には限定されず、粉末顆粒、ダブレツト状で
あつてもかまわない。そのために形状付与剤とし
て、結晶セルロースタルク、アラビアガム、デキ
ストリン、でんぷん、リン酸ナトリウム等を微量
添加する事が可能である。 本発明は、以上のような組成および配合比から
なるので、組成物中に均一に水分を分布すること
ができ、酸素吸収および炭酸ガス発生の反応を一
定にすることができる。 この反応に必要な水分を混合時、充填時または
使用時に外部から自由水を添加した場合、反応は
発生するが、水分が均一に分布されなかつたり、
反応が一定に進まず、所望のガス雰囲気を得るの
には好ましくない。 またアルカリ性化合物が少なくとも炭酸アルカ
リおよび炭酸水素アルカリを含むものでなく、炭
酸アルカリ単独の場合は、炭酸ガス濃度を30％以
上に保つことができず、一方炭酸水素アルカリ単
独の場合は酸素吸水速度が遅く、所望のガス濃度
を達成することができない。 次に本発明の脱酸素剤の使用方法について説明
する。 脱酸素剤の使用量は、密封系内の大気量及び酸
素吸収除去に要する許容時間によつて変り、一般
に5000〜10000秒／100c.c.（JIS P8117ガーレー式
透気度）の通気性を有する包装材料により包装
し、使用する。 本発明の脱酸素剤の実際の使用方法は、培養す
べき嫌気性細菌を接種したシヤーレ、コルベン培
養試験管や各種検査検体を収容したジヤー又は酸
素、炭酸ガス、水蒸気等のガス透過度の小さいフ
レキシブルな合成樹脂袋体に併置するだけで良
く、極めて簡便に嫌気状態を得る事が可能であ
る。 また、本発明の脱酸素剤は大気との反応開始に
おいて、発熱あるいは吸熱する事がほとんど無
く、かつ広い温度範囲で反応が開始する。そのた
め、中、高温細菌のみならず、低温細菌の培養に
も使用可能であり、更に大気との反応時水分を放
散又は吸収する事がないので、密封容器内の培地
を過度に乾燥させたり、露結現象を生じたりする
事はない。 以下、本発明の実施例について説明する。 ＜実施例１＞ 下記表１の組成の脱酸素剤を用いて、密封系内
の酸素濃度と炭酸ガス濃度を測定した。
【表】
上記組成の脱酸素剤をそれぞれ通気性包材で包
装し、空気容量600mlのガスバリヤー性プラスチ
ツク袋（塩化ビニリデン塗工ポリプロピレン／ポ
リエチレン）に封入し、35〜37℃の状態で６時間
後のガス濃度を測定した。 その結果を表２に示す。
装し、空気容量600mlのガスバリヤー性プラスチ
ツク袋（塩化ビニリデン塗工ポリプロピレン／ポ
リエチレン）に封入し、35〜37℃の状態で６時間
後のガス濃度を測定した。 その結果を表２に示す。
【表】
表２から明らかなように本発明の脱酸素剤であ
るＡ―２は、所定のガス濃度が得られたが、それ
以外のものは、所定のガス濃度が得られなかつ
た。 ＜実施例 ２＞ 実施例１の脱酸素剤を用い、第１図に示すよう
に通気性袋２に封入した脱酸素剤をガム寒天培地
（日水製薬）５にＢ・mecaninogenicus SS・
intermedius（以下Ａ細菌という）、Ｂ・
mecaninogenicus SS・mecanigenicus（以下Ｂ
細菌という）およびレンサ球菌（以下Ｃ細菌とい
う）をそれぞれ接種したシヤーレ１と嫌気性指示
薬のフイルデスーマクルントツシス指示薬を含ん
だ脱脂綿とを実施例１で用いたガスバリヤー性プ
ラスチツク袋４により密封し、37℃で48時間培養
し、細菌の発育状態を外側から観察した。 また同時に実施例１の脱酸素剤以下に脱酸素剤
としてエージレスＺ―200（三菱瓦斯化学社製）
を用い同様の実験をした。 その結果を表３に示す。
るＡ―２は、所定のガス濃度が得られたが、それ
以外のものは、所定のガス濃度が得られなかつ
た。 ＜実施例 ２＞ 実施例１の脱酸素剤を用い、第１図に示すよう
に通気性袋２に封入した脱酸素剤をガム寒天培地
（日水製薬）５にＢ・mecaninogenicus SS・
intermedius（以下Ａ細菌という）、Ｂ・
mecaninogenicus SS・mecanigenicus（以下Ｂ
細菌という）およびレンサ球菌（以下Ｃ細菌とい
う）をそれぞれ接種したシヤーレ１と嫌気性指示
薬のフイルデスーマクルントツシス指示薬を含ん
だ脱脂綿とを実施例１で用いたガスバリヤー性プ
ラスチツク袋４により密封し、37℃で48時間培養
し、細菌の発育状態を外側から観察した。 また同時に実施例１の脱酸素剤以下に脱酸素剤
としてエージレスＺ―200（三菱瓦斯化学社製）
を用い同様の実験をした。 その結果を表３に示す。
【表】
【表】
〓 ±：一部のみ繁殖〓
第１図は、本発明の使用例を示す説明図であ
る。
る。
Claims (1)
- １ アスコルビン酸またはその塩、少なくとも結
晶水を含む炭酸塩および炭酸水素アルカリを含む
アルカリ性化合物および金属化合物からなり、６
時間以内に密封系内の酸素ガス濃度を0.1％以
下、炭酸ガス濃度を30〜50％とする嫌気性細菌培
養用脱酸素剤。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP20894782A JPS5998686A (ja) | 1982-11-29 | 1982-11-29 | 嫌気性細菌培養用脱酸素剤 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP20894782A JPS5998686A (ja) | 1982-11-29 | 1982-11-29 | 嫌気性細菌培養用脱酸素剤 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS5998686A JPS5998686A (ja) | 1984-06-07 |
| JPS6143995B2 true JPS6143995B2 (ja) | 1986-09-30 |
Family
ID=16564773
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP20894782A Granted JPS5998686A (ja) | 1982-11-29 | 1982-11-29 | 嫌気性細菌培養用脱酸素剤 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS5998686A (ja) |
Families Citing this family (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| DE69818893T2 (de) * | 1997-04-01 | 2004-05-19 | Mitsubishi Gas Chemical Co., Inc. | Kulturatmosphäreregulator und Verfahren zum Züchten von anaeroben Bakterien |
Family Cites Families (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS5473140A (en) * | 1977-11-21 | 1979-06-12 | Toppan Printing Co Ltd | Agent for preserving freshness of food |
| JPS584913B2 (ja) * | 1978-01-31 | 1983-01-28 | 凸版印刷株式会社 | 嫌気性細菌の培養法 |
-
1982
- 1982-11-29 JP JP20894782A patent/JPS5998686A/ja active Granted
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPS5998686A (ja) | 1984-06-07 |
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