JPS6144355A - 癌の測定用キット - Google Patents

癌の測定用キット

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JPS6144355A
JPS6144355A JP59165351A JP16535184A JPS6144355A JP S6144355 A JPS6144355 A JP S6144355A JP 59165351 A JP59165351 A JP 59165351A JP 16535184 A JP16535184 A JP 16535184A JP S6144355 A JPS6144355 A JP S6144355A
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Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 産業上の利用分野 本発明は体液中の癌関連抗原、特に正常細胞の癌化や脱
分化により産生される糖蛋白、糖脂質および糖抗原を免
疫血清学的検査法により定性、定ユし、癌を診断する方
法に関する。
従来の技術 従来、癌の特異的免疫血清学的検査法には、癌持′Ａ糖
蛋白をｆＦｆｔ診断用マーカーとして測定する方法が行
われている。これらの方法は、糖蛋白質の蛋白質部分の
免疫原性を利用する方法であり、腫瘍７−カーとしては
、例えば、α−フェトプロテイン（以下ＡＦＰという）
、癌胎児性抗原（以下ＣＥＡという）、Ｔ−グルタミル
トランスペプチダーゼ（以下ｒ−ＧＴＰという）、ヒト
絨毛性ゴナドトロピン（以下ＨＣＧという）等が挙げら
れる。
発明が解決しようとする問題点 例えば、血清ＡＦＰ値の測定は、原発性肝癌の特異的免
疫血清学的診断法として知られているが、その上昇が軽
度の場合には、肝細胞の再生によるのか、肝癌細胞によ
るものなのか、鑑別が困難である。八ＦＰは、原発性肝
癌のほか、卵巣Ｉ！瘍やときとして、胃癌、膵癌よりの
肝転移（転移性肝癌）でもときとして著しく増加するｋ
め、単なる量的変動からは癌の鑑別診断が難しい。
問題点を解決するための手段 本発明者は、細胞の癌性変化に伴い、その体液中には未
分化型細胞（特に癌細胞）により産生される癌関連糖抗
原が放出されること、該勘抗原は正常な分化型細胞から
産生されるものとは立体的な構造に部分的相違が見られ
ること、さらには糖結合蛋白質であるレクチンは、これ
ら勘抗原の部分的な立体構造を特異的に認識することに
着目した結果、吸着交叉免疫電気泳動法（以下ＡＣＩＥ
という）を用いてレクチン結合性を分析する方法におい
て、泳動後の発色系にバーオキンダーゼ（以下ＰＯＤと
いう）標識プロティンＡと４−メトキシ−１−ナフトー
ルおよび過酸化水素からなる高感度な検出法を用いるこ
とにより分析の精度を上げ、測定時間の短縮ができるこ
と、さらには、レクチンの結合特異性を任意に組み合わ
せることにより癌の種類を明確に鑑別することができる
ことを見出し、本発明を完成した。
作　　　　用 以下本発明の詳細な説明する。
本発明は、体液中の癌関連糖抗原とレクチンとの結合性
をＡＣＩＥにより分析し、得られる分析結果をＬｍまた
は２種以上組合わせて癌の４１１Ｑを鑑別することによ
り癌の診断を行う方法に関する。
さらにＡＣＩＥにおける発色にＰＯＤ［識プロティンへ
と４−メトキシ−１−ナフトールおよび過酸化水素とか
らなる検出法を用いれば、より高感度に癌の診断が行な
える。
本発明で使用される体液としては、８柵の体液、例えば
、血液１尿、唾液、胃液、腸液、膵液、胆汁、細胞組織
液、浮腫液、腹水、胸水、心通液。
関節液、脳を髄液、羊水、性器分泌液、母乳、鼻汁、喀
痰、涙、汗等が挙げられるが就中、血液を血清または血
漿として使用するのが好ましい。
癌関連糖抗原としては、ＡＦＰ、ＣＥΔ、ＨＣＧ。
γ−ＧＴＰ等が挙げられる。
本発明で使用されるレクチンとしては、α−Ｄ−グルコ
ースおよびα−Ｄ−マンノースト特異的に結合するレク
チンとしてタチナタマメレクチン（以下［ｏｎ＾という
）、及びレンズマメレクチ／（以下ＬＣＨという）が、
Ｎ−アセチルガラクトサミ／と特異的に結合するレクチ
ンとしてインゲンマメレクチン（以下Ｐ）（Ａという）
のイソレクチンであるＰＩ（八−Ｅが、β−Ｄ−ガラク
トースと特異的に結合するレクチンとしてヒマの実レク
チン（以下ＲＣＡきいう）のイソレクチンであるＲＣＡ
−１が、Ｎ−アセチルグルコサミンと特異的に結合する
レクチンとして、バンデリアマメレクチン（以下ＢＳＡ
という）のインレクチンであるＢＳＡ−■等が挙げられ
る。
本発明方法において、癌関連糖抗原の分離・同定はＡＣ
ＩＥ法を利用するのが好ましい。すなわち、癌関連糖抗
原含有試料をレクチン含有ゲル内で一次元に泳動分離し
た後、分離された各分画を抗血清を含んだゲル内で二次
元の方向に泳動し、発色させることにより各分画を鋭い
沈降峠として、定ｍ的に検出することができる。レクチ
ン結合性はこの泳動距離の特異的な変化から求められる
。
本発明方法においてＡＣＩＥ後の発色に１１酵素免疫測
定法を用いる。特にＰ　ＯＤａ’ｆｌｋブＯナインΔと
４−メトキシ−１−ナフトールおよび過酸化水素とから
なる発色系は、高感度、高分離能、鮮明、迅速かつ簡便
な方法であり、癌の確定的診断には極めて有用な方法で
ある。
レクチンとの結合性による癌の診断は、単独でもある程
度は可能であるが、充分とは言えず、レクチンとの結合
性を２梯以上組み合わけることにより、より明確に行え
る。組み合わせとしては測定物質の種類により異なるが
、例えばＡＦＰの分析には、ＣｏｎＡ、ＬＣＨ等が挙げ
られる。
詳細には、胎児性蛋白の１任であるＡＦＰは原発性肝癌
や性腺の奇形種、卵巣腫瘍の患者血中に出現する糖蛋白
質である。ＡＣＩＥを用いるとレクチン結合性の差から
ＡＦＰは数種類に分画される。すなわち、例えばＣｏｎ
Ａを用いると、ＡＦＰはＣｏｎＡに結合する分画とＣｏ
ｎＡに結合しない分画の２分画に分かれ、個体発生学的
にはＣｏｎΔ結合ＡＦＰは肝細胞に、ＣｏｎＡ非結合Ａ
ＦＰは卵黄嚢に由来することが知られている。本発明に
おいて、原発性肝癌患者の血／１ｌＡＦＰを分析すると
、大多数の胎生期の肝細胞に由来するＡＦＰ分画（ａ峠
というンの他、ＩＦｆＢ卵黄嚢由来の分画（ｂ峰という
）が認められる。一方転移性肝癌患者の血清ＡＦＰはす
べて卵黄嚢由来の分画くｂ峰）が認められる。同様にＬ
Ｃ）（において、胎生期のＡＦＰはＡ峰、Ｂ峠、Ｃ峰、
Ｄ峰の４分画に分かれる。ＡＦＰ産生部位の経時的変化
から、Ａ峰と０部は肝細胞由来の分画、Ｂ峰とＤ峰は卵
黄嚢由来の分画であると分析される。原発性肝癌および
転移性肝癌それぞれのＡＦＰ分画パターンをみると原発
性肝癌ではすべてへ峰、Ｃ峰のみ認められるが、転移性
肝癌ではへ峰、Ｃ峰以外にＢ峰が認められる。すなわち
、原発性肝癌では胎生期の肝細胞で産生されるＡＦＰ分
画が主として出現するのに対し、転移性肝癌では胎児肝
由来のＡＦＰ以外に卵黄奮で産生される分画も認められ
る。従って卵黄嚢由来のＡＦＰ分画を指標することによ
り原発性肝癌と転移性肝癌の鑑別診断は可能となる。
さらには、他のレクチン、ＰＨＡ−Ｅ、ＲＣＡ−１，Ｂ
ＳＡ−Ｈにおいて、羊水中のＡＦＰは、経時的に特異的
な変動を示さないが、癌患者血清中のＡＦＰでは、特異
的な分画パターンを示す。
癌関連糖抗原は複雑な立体構造を示すが、各レクチンは
このＷｔ造を部分的に認識しているので、１種類のレク
チンの糖特異的結合性だけでは癌の診断は明確には行え
ない。ＣｏｎＡ、ＬＣＨ。
ＰＩ−１Δ−Ｅ、ＲＣＡ−１，ＢＳＡ−■の５種類のレ
クチンを適宜に組み合わせることで、より明確に癌関連
糖抗原の立体構造を識別させ、これにより＋＝Ｗ別を確
定的に診断することができる。
本状を実施するにあたって、検体量、レクチンのｍ、Ｐ
ＯＤ標識プロティ／Ａの量および比率。
基質のｍ１反応時間、温度、電気泳動の条件は測定する
物質の種類、レクチンの種類、使用する受容体の力価、
支持体の種類等によって異なるので各測定について最も
適切な条件を実験的に決める。
以下に、本発明の実施の態様を具体的に示す。
一定量の体液５μ１以上好ましくは５〜ｌＯμ！を、レ
クチン含有ゲル上−次元電気泳動により拡散させる。−
次元泳動後、分離された各分画を抗血清を含んだゲル内
で二次元の方向に泳動し、Ｕ票免疫測定法により検出す
る。
レクチン濃度は測定物質およびレクチンの種類により異
なるが、一般的に分離能は濃度にも依存する。本発明方
法においては、高感度な検出法であるので低濃度のレク
チン、２００〜６００μｓ／ｍｌでも容易に分離できる
。
ゲル支持体は特に限定されないが、二次元の吸着交叉免
疫電気泳動の場合には特に電気浸透度の低いアガロース
を用いた方が、ゲルの歪みが少なく良い。ゲル支持体の
ＩＡ調製法通常の方法を採用できる。蒸留水、ｐＨ８，
６附近のバルビタール緩衝液またはトリス塩酸緩衝液等
の希釈液に一定量のアガロースを添加し、静かに攪拌下
、６０〜８０℃に加温して溶解し所定の平板に流し、放
冷してゼリー状に凝固させる。
ゲルのＱ度は、通常０．５〜２１口重量％、特に０．８
〜Ｌ、０重量％が好ましく、必要により防腐剤を添加し
ても良い。
またこのゲルは、長時間泳動すると発熱のためゲルの表
面が乾煙して、歪みの原因にもなる。さらにレクチンと
識語抗原の結合は一般的に低温はど強いので、泳動は１
５℃以下、好ましくは５〜１０℃で行うと良い。例えば
電子冷却泳動８ｉｌｉｉ！等を用いると低濃度のレクチ
ンでも効率よく分離でき乙。
ＡＣＩＥの一次元の泳動距離は、一般的に長くする程分
離は良いが、レクチンもその分泌量となり、泳動時間も
長くなるので６ｃｍ以上であれば十分である。泳動用の
コントロールマーカーには、色素〔例えばブロムフェノ
ールブルー（以下ＢＰＢという）〕結合アルブミンを検
体と平行して流すが、ＡＦＰの場合には、ＢＰＢ結合γ
ルブミンが６〜７ｃｍ附近まで泳動すれば十分である。
一方、二次元の泳動も長時間を要する（通常は１６時間
以上）が、本発明における検出法は測定感度が鋭敏であ
るため２〜６時間、好ましくは２〜４時間泳動すれば十
分である。
次に本発明を実施例を用いて具体的に説明するが、本発
明は以下の実施例によってその範囲を限定されるもので
はない。
実施例１゜ ＬＣＨ［ファルマシア・ファインケミカルズ社（スウェ
ーデン）製］−ＡＣＩＥによる肝癌の鑑別診断 （ａｌ　　被検サンプルの調製： 原発性肝癌４８例、転移性肝癌８例の各血清を正常ヒト
血１ｆＪ（Ａ　Ｆ　Ｐ　：　５部ｇ／ｍｌ以下）で希釈
し、Ａ　Ｆ　Ｐ　３［１，０００ｎｇ　／ｍｌ　ｊｄ下
に！Ａ瞥しサンプルとした。
（ｂ）ＬＣＨ含有アガロース板の作製（−次元泳動用）
： １．０％アガロース（Ｆ　ＭＣＭａｒｉｎｅ　Ｃｏ１１
ｏｉｄｓＤｉｖｉｓｉｏｎ社（米）製、ｐＨ８，６、イ
オン強度０．０５のバルビタール緩衝液で溶解〕にＬＣ
Ｈを２００μｇ　／ｍｌ混合した。このＬＣＨ含有アガ
ロースゲルｌ　５ｍｌをゲルボンド（ＦＭＣＭａｒｉｎ
ｅ　Ｃｏ１１ｏｉｄｓ　Ｄｉｖｉｓｉｏｎ社Ｌ　　１１
０Ｘ１２５ＤＩＩＤ）上に流し込み、凝固させて、厚さ
約１１１ＩｌのＬＣＨ含有アガロース板を作製した。
（Ｃ）抗ΔＦＰ血清含有アガロース板の作製（二次元泳
動用）： １゜θ％アガロースｌＱｍｌに抗ＡＦＰ血清（ダコ（Ｄ
ＡＫＯ）社（デンマーク）製〕２０μｌを混合した。こ
の抗ＡＦＰ血清含有アガロースゲル１０ω１を上記と同
じゲルボンドに流し込み、Ｕ固させて厚さ約１關の抗Ａ
ＦＰ血清含有アガロース板を作製した。
（ｄ）ＰＯＤ標識プロティンＡ希釈液の調製：ＰＯＤ標
識プロティンＡ（Ｉ！、Ｙ、Ｌ＾８０ＬＡＴＯＲＩＢＳ
社（米）製）２０ｕｌに、希釈液（ＮａＣｊ！１４．０
ｇをバルビタールＩ衡液（ｐＨ８，６）１！に溶解した
もの）ｌＱｍｌを混合し、０．２％ＰＯＤ標識プロティ
ンＡ希釈液とした。
（ｅ）　　発色用試液の調製： ４−メトキシ−１−ナフトール〔アルドリッチ（＾Ｉｄ
ｒｉｃｈ　）社（米）製）　２００ｐｌ、　０．（１５
Ｍトリス緩衝液（トリスヒドロキンメチルアミ／メタン
１２．１１４ｇ／ｆｆｉと０．１Ｍ　　）ｌｃｊ！を１
００ニア７で混合した液、ｐＨ７，６）ｌＱｍｌおよび
３０％ＨｚＯｔ１１１！ｉを使用直前に混合し発色用試
液とした。
（ｆ）ＡＦＰの測定： （１）で得たサンプルｌＯμＥをら）で調製したＬＣＨ
含有アガロース板の孔（直径４關）に注入し、−次元電
気泳動を行った。泳動は、バルビタール緩衝液（ｐ　８
８．６　）を用いて、３ｍＡ／ｃａ、９０分１１０℃冷
却下に行った。また対照としてヒト血清アルブミンくシ
グマ社製。
ｆｒａｃｔｉｏｎＶ、　０．０１％ＢＦＢ５μｆ含有）
を用い、約６ｃ＋ｅ泳動した位置に印をつけた。
−次元電気泳動後、アガロース板を飲助方向と平行に約
ＩＩＩＪの巾で切り取り、（Ｃ）で調製した抗ＡＦＰ含
有アガロース板に密着させ、−次元展開方向に対して直
角方向に２．５ｍＡ／ｃｍ、　３時間、１０℃冷却下に
二次元電気泳動を行った。
泳動後、吸着バット（日本商事社製）で２〜３分間処理
して脱蛋白したのち、リン酸緩衝液（ｐ　Ｈ７，２＞で
３０分間洗浄した。再び吸着バットを用いて砲煙し、実
施例１−（Ｃ１で調製したＰＯＤ標識プロティンＡ　１
０ｍｌを平板上に流しｊこ。３０分間反応後、再び吸容
バットによる乾逼、洗浄［リン酸緩衝液（ｐ　Ｈ７，２
）で３０分間〕、吸着バットによる砲煙を上記と同様に
繰り返したのち、（Ｃ）で調製した発色試液Ｉ　Ｑ＋ｎ
ｌを加え、２〜３分間反応させた。２〜３分間水洗し、
吸着バットで砲煙させて、−次元電気泳動で辱たアルブ
ミンの位置から二次元電気泳動で現れた泳動ビークまで
の距離を測定した。
その結果、ＬＣＨ−ＡＣＩ　Ｅによる肝癌患者血清の代
表的な泳動像は、（１）Ａ峰のみが単独に出現するタイ
プ（Ｉ型）、（２）Ｃｆｉのみが単独に出現するタイプ
（■型）、（３）Ａ峰とＣ峰の２峰が出現するタイプ（
■型）　、（４）　Ａ峰あるいはＣ峰以外にＢ峰も出現
するタイプ（■型）に分かれる。
■型はさらにＡ峰とＣ峰の量的な違いによって（ａ）　
Ａ峰の方がＣ１より高いタイプ（Ｉ［Ｉａ型）、（ｂ）
Ｃ峰の方がＡ１より高いタイプ（Ｉ［Ｉｂ型）に分かれ
る。
また■型は（ａ）　Ａ峰とＢ峰の２峰が出現するタイプ
（１’Ｖａ型）、（ｂ）Ａ峰　Ｂ峠、Ｃ峠の３！樫が出
現するタイプ（］’Ｖｂ型）、（ｃ）Ｂ峰のみ出現する
タイプ（ｒＶｃ型）に分かれる。
第１表に示される通り、原発性肝癌血清中のＡＦＰは■
型、■型およびｍ型に分画されるが、転移性肝癌ではす
べて■型に分画され、原発性。
転移性＋１Ｔ癌の鑑別に有用である。
？！１表 ＬＣＨ−ＡＣＩＥによるＡＦＰ分画発現頻度Ｉ　型　　
　　　　　　　　　八　　　　　　　　　２（４，２％
　）００■型　　　　　Ｃ６（１２，５％）００■型 ｌｎａ型　　　Ａ≧Ｃ２１（４３，７％）００［［Ｉｂ
型　　　Ａｒｃ　　　１９（３９，６％）００■型 ｒＶａｕ　　　　ＡＢ　　　　０　　０　　　４　（Ｊ
ｏ、０％）ｌＶｈ型　　　ＡＢＣＯＯ２（２５，０％）
実施例２゜ ＣｏｎＡ−ＡＣＩＥによる肝癌の鑑別診断実施例１と同
様の血清サンプルを用いて、ＬＣＨにひえてＣＣｎΔ（
ファルマシア・ファインケミカルズ社製）含有アガロー
ス板（ＣｏｎＡ：６００μｇ　／ｍｌ　）を用いる以外
は実施例１と同様の方法で行った。
その結果、（、ｏｎＡ−ＡＣＩＥによる肝癌患者血清の
代表的な泳動像は、（１）ａ峠のみ出現するりイブ（Ｉ
Ｕ）、（２）ａ峰、ｂ峰の２分画が出現するタイプ（２
型）および（３）ｂ峰のみ出現するタイプ（３型〉に分
かれる。
第２表および第３表に示される通り、原発性肝癌血清中
のＡＦＰは１型（ａ峠のみ）および２型（ａ峰〉ｂ峰）
に分画されるが、転移性肝癌では２型（ａＩＩ！＜ｂ＠
Ｓ）および３型に分画され、原発性、転移性肝癌の鑑別
に有用である。
第２表 Ｃａｎ＾−ＡＣＩＥによるＡＦＰ分画の発現頻度ｌ型　
　　　ａ　　　　３０　（６２，５％）　０２型　　　
　　ａ　ｂ　　　　１８　（３７，５％）６（７５％）
３ｆｆｉ　　　　　　　　　ｂ　　　　　　　０　　　
　　　　　　　２（２５％）＊１１度について２回以上
測定し、１度でも２型が出た例はすべて２型に分類した
。
第３表 Ｃｏｎ＾−八〇１εの２型に右けるｂｕの高さと肝癌の
４ｇＪ頌検討数　　　１８　　　５ ｂ自重の高さ 平均％　１４．１　＋３．６°’　　４４．５＋２０．
２８２範　　　　囲　　　　　８〜１２　　　　　　　
１７　〜６８京１１度例について数回測定した場合には
高い方の値を採用。
峠　１度例について数回測定した場合には低い方の値を
採用。
実施例３゜ ＰＨＡ−Ｅ−ＡＣＩＥによるＡＦＰ産生疾患の鑑別診断 原発性肝癌５例、転移性肝癌４例、卵巣腫瘍４例、！Ｉ
丸腫瘍１例の各血清について、ＬＣＨに替え−ｃ　Ｐ　
ＨＡ　−Ｅ　（Ｂ、　Ｙ、　ＬＡＢＯＬＡＴＯＲＩＢｓ
社製、アメリカン含をアガロース板（ＰＨＡ−Ｅ二２（
１０μｇ／ｍｌ　）を用いる以外は、実施例１と同様の
方法で行った。泳動のピークは第４表に示す泳動距離か
らＡ峰、Ｂ峰、Ｃ峠、Ｄ峰の４分画に命名した。
第４表 泳動距離による各ピークの分類 その結果、ＰＨＡ−Ｅ−ＡＣＩＥによる各種癌患者血清
の泳動像は、（１）Ｃ峰のみ、Ｄ峰のみまたはＣ峰、Ｄ
峰の２分画がそれぞれ出現するタイプ（ｌ型）および（
２）Ａ峰、Ｃ峰の２分画、Ｂ峰のみ。
Ｂ峰、Ｃ峰の２分画またはＢ峰、Ｃ峰、Ｄ峰の３分画が
それぞれ出現するタイプ（２型）に分かれた。２型にお
いては、Ａ＃ＩまたはＢ峰のいずれかが出現することが
特徴である（第５表下線表示）。
羊水中のＡＦＰはＰｌ−１Δ−Ｅ’−ＡＣＩＥにおいて
給金との間に特異的な変動は認められない。しかし癌患
者血清においては、第５表に示す如く、一定の傾向が認
められた。
第５表 ］ 実施例４゜ ＲＣＡ−１〜八ＣＩＥＩこよるへＦＰ産生戻患の鑑別診
断 実施例３と同様の血清サンプルを用いて、ＬＣＩ−１に
替えてＲＣＡ−１（Ｂ、Ｙ几＾Ｂ口ＬＡＴＯＩＩＩＥＳ
社製）含有アガロース板（ＲＣＡ　−１：　２００ＪＪ
ｇ／＋ｏｌ）を用いる以外は、実施例１と同様の方法で
行った。
泳動のピークは第４表に示す泳動距離からＡ峠。
Ｂ峰、Ｃ峠、Ｄ峰の４分画に命名した。
その結果、ＲＣＡ−１−八ＣＩＥによる各種癌患者血清
の泳動像は（１）Ｃ峰のみ、Ｄ峰のみまたはＣ峰、Ｄ峠
の２分画がそれぞれ出現するタイプ（ｌ型）、（２１Ａ
峰、Ｃ峰の２分画、Ａ峰、Ｄ峰の２分画またはＡ峰、Ｃ
峰、Ｄ峰の３分画がそれぞれ出現するタイプ（２型）お
よび（３）Ａ峰、Ｂ峰。
Ｄ峠の３分画またはＢ１１．Ｄｌｊの２分画がそれぞれ
出現するタイプ（３型）に分かれた。２型および３型に
おいては、Ａ峰および／またはＢ峰が出現することが特
徴である（男６表下梓表示）。
羊水中のＡＦＰは、ＲＣＡ−ｆ−ＡＣＩＥにおいて給金
との間に特異的な変動は認められない。
しかし、癌患者血清においては第６表に示す如（、一定
の傾向が認められた。
第　　　　６　　　　表 ＲＣＡ−１−ＡＣＩＥによるＡＦＰ分画の発現頻度２　
型　　　ΔＣ１Δ口、ＡＣＤ　　　　　　　　０　　　
　　　　　　　　２　　　　　　　　　３　　　　　　
　　　１実施例５゜ ＢＳＡ−Ｉｔ−ＡＣＩＥによるＡＦＰ産生疾患の鑑別診
断 実施例３と同様の血清サンプルを用いて、ＬＣ）Ｉに替
えてＢＳＡ−Ｉｔ　（ε、Ｙ几＾ＢＯＬＡＴＯＲＩ日Ｓ
社製）含有アガロース板（ＢＳＡ−ＩＩ：２００μｇ　
／ｍｌ　）を用いる以外は、実施例１と同様の方法で行
った。
泳動のピークは、第４表に示す泳動距離からＡ峰、Ｂ峰
、Ｃ峰、Ｄｆｉの４分画に命名した。
その結果、ＢＳＡ−■−ＡＣＩＥによる各種癌患者血清
の泳劾像は、（１）Ｃ峰のみまたはＤ峰のみ出現するタ
イプ（ｌ型）、および（２）Ａ峰、Ｂ峰。
Ｄｆｉの３分画、またはＢ峰、Ｄ峠の２分画が出現する
タイプ（２型）に分かれた。２型においては、Ａ峰およ
び／またはＢ峰が出現することが特徴である（第７表下
線表示）。
羊水中（７）ＡＦＰは、ＢＳＡ−１１−ＡＣＩＥｌ、ｌ
：おいて、給金との間に特異的な変動は認められない。
しかし、癌患者血清においては′Ｊ！７表に示す如く、
一定の傾向が認められた。
第７表 ＢＳＡ−■−＾ＣＩＢによるＡＦＰ分画の発現頻度実施
例６゜ ＣｏｎＡとＬＣＨの組み合わせによる癌の鑑別診断 実施例２において鑑別が曖昧な症例、すなわちＣｏｎＡ
で２型に属した患者血清中、原発性肝癌でｂ峰が高値（
１４％以上）を示した症例（４例）および、転移性肝癌
でｂ峰が低値（４５％以下）を示した症例（６例）につ
いて、ＬＣＨによる分画パターン（実施例１）の結果を
照合した。
その結果、原発性肝癌はすべて■型に、転移性肝癌はす
べて■型に属した。
実施例７゜ Ｃ０ｎＡとＰＨＡ−Ｅの組み合わせによる癌の鑑別診断 実施例２に右いて鑑別が曖昧な症例、すなわちＣｏｎＡ
で２型に属した患者血清中、原発性肝癌でｂ峰が高値（
１４％以上）を示した症例、および転移性肝癌でｂ峰が
低値（４５％以下）を示した症例のうち、その数例の患
者血清について、ＰＨＡ−Ｅでの分画パターンを検討し
た実施例３の結果を照合した。
その結果、原発性肝癌はｌ型に、転移性肝癌はいずれも
２型に属した。
実施例８゜ ＰＨＡ−ＥとＲＣＡ−１の組み合わせによる癌の鑑別診
断 実施例３および実施例４にふいて鑑別が曖昧な症例、す
なわちＰＨＡ−Ｈにおいて、１型を示した卵巣腫瘍患者
血清は、ＲＣＡ−１では３型に分類された。
また、ＲＣＡ−１で１型を示した転移性肝癌患者血清は
、ＲＨＡ−Ｅでは２型に分類された。
実施例９゜ ＰＨＡ−ＥとＢＳＡ−１１の組み合わせによる癌の鑑別
診断 実施例３および実施例５において鑑別が曖昧な症例、す
なわちＰＨＡ−Ｅにおいて、１型を示した卵し！ｌｌｌ
瘍患者血清は、ＢＳＡ−■ではｌ型に分類された。
また、ＢＳＡ−ｎで１型を示した転移性肝癌患者血清は
、ＰＨＡ−Ｅでは２型に分類された。
実施例１０゜ ＲＣＡ−１とＬＣＨの組み合わせによる癌の鑑別診断 実施例４において鑑別が曖昧な症例、すなわちＲＣＡ−
１において、ｌ型を示した転移性肝癌患者血清は、ＬＣ
Ｈ（実施例２）ではｒＶｂ型に分類された。
実施例１１゜ ＲＣＡ−１とＢＳＡ−ＩＩの組み合わせによる癌の鑑別
診断 実施例４および実施例５において鑑別が曖昧な症例、す
なわちＲＣＡ−１においてｌ型を示した転移性肝癌患者
血清は、Ｂ　Ｓ　Ａ　−ＩＩでは２型に分類された。
また、ＢＳＡ−ｎで１型を示した転移性肝癌患者血清青
は、ＲＣＡ−１では３型に分類された。
実施例１２ ＢＳＡ−ＩｔとＬＣＨの組み合わせによる癌の鑑別診断 実施例５において鑑別が曖昧な症例、すなわちＢＳＡ−
［［で１型を示した転移性肝癌患者血清は、ＬＣＨ（実
施例２）では■ｂ型に分類された。
上記の如く、ＣｏｎＡ、ＬＣＨ，ＰＨＡ−Ｅ。
ＲＣＡ−１，ＢＳＡ−口の５種類のレクチンを相捕的に
任意組み合わせることにより、癌をより明確に鑑別診断
することが可能となった。
発明の効果 上記の如く本発明によれば、体液中の癌関連糖抗原を有
利に分析し、これにより癌を鑑別診断することができる
。臨床的に非常に有用である。
特許出願人　協和メデプクス株式会社 代表者　若　木　重　敏　　　　。

Claims (7)

    【特許請求の範囲】
  1. （１）体液中の癌関連糖抗原とレクチンとの結合性を吸
    着交叉免疫電気泳動法により分析し、得られる分析結果
    を２種以上組合わせて癌の種類を鑑別することを特徴と
    する癌の診断法。
  2. （２）癌関連糖抗原が、α−フェトプロテイン、ヒト絨
    毛性ゴナドトロピン、癌胎児性抗原、またはγ−グルタ
    ミルトランスペプチダーゼである特許請求の範囲第１項
    記載の診断法。
  3. （３）レクチンがタチナタマメレクチン、レンズマメレ
    クチン、ヒマの実レクチン、インゲンマメレクチン、ま
    たはバンデリアマメレクチンである特許請求の範囲第１
    項記載の診断法。
  4. （４）吸着交叉免疫電気泳動法における発色を、パーオ
    キシダーゼ標識プロテインＡと４−メトキシ−１−ナフ
    トールおよび過酸化水素とからなる高感度検出法により
    行う特許請求の範囲第１項記載の診断法。
  5. （５）体液中の癌関連糖抗原とレクチンとの結合性を吸
    着交叉免疫電気泳動法により分析して癌の種類を鑑別す
    ることによる癌の診断法において、吸着交叉免疫電気泳
    動法における発色を、パーオキシダーゼ標識プロテイン
    Ａと４−メトキシ−１−ナフトールおよび過酸化水素と
    からなる高感度検出法により行うことを特徴とする癌の
    診断法。
  6. （６）癌関連糖抗原が、α−フェトプロテイン、ヒト絨
    毛性ゴナドトロピン、癌胎児性抗原、またはＴ−グルタ
    ミルトランスペプチダーゼである特許請求の範囲第４項
    記載の診断法。
  7. （７）レクチンがタチナタマメレクチン、レンズマメレ
    クチン、ヒマの実レクチン、インゲンマメレクチンまた
    はバンデリアマメレクチンである特許請求の範囲第４項
    記載の診断法。
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