JPS6162459A - 骨の修復用コラーゲン製剤 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 ［技術分野］ 本発明はを椎！＃物、特に哺乳動物及び人間の骨の修復
に関する。さらに詳しくは、本発明はコラーゲンを基礎
とする移植材料を用いて骨の伝導による補修を促す骨の
修復方法に関する。このコラーゲン材料は高度に精製さ
れた非免疫性のものであり、望ましい場合は、被移植体
と異なる種に属するものでも良い、このコラーゲンは、
皮膚又は骨由来の材料又はこれらの混合物からの再構成
材料である。

［技術的背景］ 欠陥のある骨の修復は何世紀にも亘って人類を悩まして
きた問題である。比較的最近までは折れた骨を固定し骨
組織が損傷部に自然に再生長するのに頼るのが唯一の実
用的な方法だった。だがしかし、外科技術の進歩によっ
て、移植した骨代用物を損傷を受けた骨や病気の骨構造
体の補填のみならず、骨格構造中の先天的及び後天的な
欠陥の修復にさえ利用できるようになった。

それ以来、広範な材料か利用され、管全体、例えば股関
節部（米国特許第３．８２０，１８７号）や歯（米国特
許第４．ｒ８Ｂ、４８８号）を置換するだめの精妙な方
法か開示されている。使用された材料の中には、チタニ
ウム（ＥＰ公開００７１２４２．１９８３年２月９日：
米国特許第３，９１８，１００号）等の金属類、酸化ア
ルミニウム（米国特許第３，９１９，７２３号）等のセ
ラミック類、成形もしくは処理した骨（米国特許第３，
３１８，７７４　）　、及び例えば可撓性のマット状に
圧縮した骨粉（米国特許第２，８２１．１４５号）等の
種々の骨製剤がある。

骨格組織が無機成分と有機成分を含むことはどくから知
られている。恐らくは骨構造の強度と硬さを担っている
無機成分の大半はリン酸カルシウム、つまりヒドロキシ
アパタタイトの形で存在する。また、有機成分は主とし
て単一の種類の蛋白質、つまりコラーゲンから構成され
、これは弾性を保持して骨構造が不当にもろくなるのを
防止している。もちろん骨格組織は生きているので、骨
構造中には代謝活性のある付加的な有機成分が存在しな
ければならず、こうした骨細胞やその活性な代謝物が自
然治癒過程や治療の維持過程に寄与している。

しかしながら、骨の主成分は量的にはコラーゲンとセラ
ミックなので、同様の又は異なるセラミック材料並びに
種々の型のコラーゲン製剤を含む多様な再構成に移植物
も使用されている。例えば、林（Ｈａｙａｓｈｉ、　Ｋ
、、　ｅｔ　ａｌ、　Ａｒｃ　ＯｒｔｈｏｐＴｒａｕｍ
ａｔ　Ｓｕｒｇ　（１９８２）　９９：２６５．及び米
国特許第４，３１４，３８０号）を参照の事。

骨の修復は次の二つのうちのいずれかの機構又はこれら
が組み合わさった４ｙ１構で起きることが判っている。

すなわち、伝導修復（ｃｏｎｄｕｃｔｉｖｅｒｅｐａｉ
ｒ）においては既に骨細胞としての特性を備えた細胞（
座骨細胞）が近接する骨から欠陥部の空間に移動し直接
骨を形成する。この場合は（非特異的な栄養素以外は）
何部特別な因子は必要としない。しかしながら、誘導修
復（ｉｎｃｌｕｃｔｉｏｎｒｅｐａｉｒ）においてはこ
の過程の前に１分化していない複数の可能性を持った細
胞の座骨細胞への変換がなされる。座骨細胞は先ず軟骨
を形成し、これが石灰化されて変質し骨に変わる。この
様にする能力を得るためには特定の蛋白質因子を必要と
する。これらの因子の性質は現時点では理解されていな
い。伝導修復、誘導修復のいずれについても、宿主の生
体組織から＠量的な骨格組織が提供される必要がある。

従って、こうした過程を媒介する移植物は、欠陥のある
骨や除去された骨の代替物として働くのではなく、むし
ろ欠けている組織の再生を活性化するための基質的支持
体として（動　く　。

従って、まさにこうしたことを目的として、欠陥のある
骨格Ｍｉ織用又は骨や歯の病巣用の移植物を考案する試
みがなされている。これらの移植物は欠けている骨の組
成を模倣するものではなくて、４１１シ造的な支持体、
及び最終的に隣接する新鮮な骨から生じる骨の沈着物を
徐々に侵入させる案内基質として働く、こうした支持体
は単に基質的支持体としての機能を提供する（つまり、
伝導修復を媒介する）だけでなく、現在「骨形成因子」
（ＯＦ）又は「骨形態発生蛋白質Ｊ　　（ＢＭＰ）とし
て知られているものを付与することによって、さらに未
分化の細胞の反骨細胞への分化を促す因子を含む場合も
ある。コラーゲンは骨の成長に伴う代謝的に生存可能な
細胞中で既に良く知られた物質なので、誘導的骨修復及
び伝導的修復のいずれの目的のためにも、大部分がコラ
ーゲンから成る移植物を使用する試みがなされている。

誘導修復に有用な移植物については、米国特許第４．２
９４，７５３に骨形態発生蛋白質の製造方法が開示され
ている。恐らく前述の特許のＥＭＰとは異なる、ＯＦの
精製方法が米国特許第４，４３４，０９４号（１９８４
年２月２８日発行）に開示されている。これらの因子は
骨中、並びに移植片の製造に使用され恐らくはこの因子
を有効な形で放出する。無機成分を除去した骨の粒子製
剤中に天然に存在する。

これらの因子は精製及び未精製の形で多くの移植片に使
用されている。

また、伝導的骨修復活性のための基質として、すなわち
原細胞を骨発生細胞に成熟させるための因子を含まず従
って伝導修復を媒介する製剤として、コラーゲン製剤の
みを利用しようとする試みについて開示した研究者もい
る。

フレケラ−（Ｋｒｅｋｅｌｅｒ、　Ｖ、　Ｇ、、　ｅｔ
　ａｌ、　Ｊ。

０ｒａｌ　Ｓｕｒｇ　　（１９８１）　１０　：　５ｕ
ｐｐ１．　ｌ　：　１５１）は自己由来の海綿質、コラ
ーゲン製剤（コラーゲンフリース；商標名、ペンタファ
ーム社）、及び結合畠ル順 性ゼラチンについてピーグル犬の鱒欠陥用充填物として
の有効性を比較した。これらの製剤は人工的に設けた骨
の空洞中に単に充填し、癒着過程をポリクロム逐次ラベ
リングで追跡した。コラーゲンフリースは癒着を媒介す
ることが判ったが。

自己由来の海綿質移植片に比較すると効果が小さかった
。

上述の製剤で用いたコラーゲンフリースは豚の皮膚から
米国特許第４，０８６，０８３号に開示の方法に従って
製造したものである。豚の皮膚を細かく分割し、洗剤で
脱脂後洗浄する０次いでペプシンで消化して粘稠な懸濁
液とし飽和塩溶液を加えてコラーゲンを沈殿させる。こ
の沈殿物を鎖中に懸濁した後、塩溶液中に繊維状の白色
沈殿物として再沈殿させる。沈殿物を必要な回数洗浄し
てからアルコール洗浄して脱塩する。精製コラーゲンを
酸溶液中に懸濁し、凍結乾炊する。これをγ線照射で滅
菌するが、この工程で製剤が劣化や架橋する場合がある
。この製剤はコラーゲンフリース（Ｃ：ｏｌｌａｇｅｎ
　ｆｌｅｅｃｅ）の名称で市販され、何件かの他の骨の
修復の研究に使用されている。

ジョーズ等（Ｊｏｏｓ、　Ｕ、、　ｅｔ　ａｌ、　Ｂｉ
ｏｍａｔｅｒｉａｌｓ（＋９８０）　１　：　２３〜２
Ｇ）コラーゲンフリースを人工的に傷つけたウサギの下
顎骨の移植片として利用し、２週間後に欠陥が網状の骨
粉で満たされ、４週間後には完全に骨化することを見出
した。ゼ・ントマン等（ＺｅＬｚｒｎａｎｎ、　Ｄ、、
　ｅｔ　ａｌ、　５ｃｈｖｅｉｚ　ＭｓｃｈｒＳａｂｎ
ｈｅｌｉｋ　（１９８２）　９２　：　１１９）も：ラ
ーゲ７７り一スを移植片として用いて顔面外科における
骨の再生に成功した。スプリンゴラム等（Ｓｐｒｉｎｇ
ｏｒｕｍ。

Ｈ，Ｗ、、　ｅｔ　ａｔ、　Ｚ、　０ｒｔｈｏｐ　（１
９７７）　１１５　：　８８Ｂ）はコラーゲンフリース
を皮質層の欠陥に用いて同様の結果を得た。

ジャフィ等（Ｊａｆｆｅｅ、　Ａ、、　ｅｔ　ａｔ、　
Ａｒｃｈｓ　０ｒａｌＢｉｏｌ　（１８７８）　２３　
：　４１５；　１ｂｉｄ、　（１ｆ３８２）　２７　：
　９９９）は犬の皮膚から酢酸抽出しトリクロロ酢酸／
エタノールで精製して製造したコラーゲン溶液を使って
、犬におけるアクリル酸樹脂歯移植片の固定に成功した
ことを報告している。固定に成功した移植片は１年後に
も損われなかった。

クラシン９（Ｃｕｃｉｎ、　Ｒ，Ｌ、、　ｅｔ　ａｔ、
　Ｎａｖ　ＹｏｒｋＳｔａｔｅ　Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ
　Ｍｅｄｅｃｉｎｅ　（１９７９）　１８５Ｂ　）は、
γ線照射した、子牛の皮膚からのアテロペプチド・コラ
ーゲンをウサギの肋骨の修復に使用した。

また、ゼラチン状スポンジ材料又は自己由来の骨粉で支
持して、犬の頭蓋の穴の修復に使用した。

恐らくテロペプチドを含んだままで、γ線照射により架
橋したコラーゲン製剤の歯髄腔の充填及び皮下［骨化用
、移植片としての利用が、それぞれＥＰ公開００１２４
４３　（１９８０年６月２５日）及びＥＰ公開００１２
９５９　（１９８０年７月９日）で開示されている。

［Ｍ決すべき問題点］ 上述のコラーゲン修復方法はいずれも完全には成功して
おらず、炎症が起きたり（特に被移植部と異種のコラー
ゲンを用いた場合）癒着が不完全だったりする０本発明
は上述の欠点を解消することを基本目的とし、内方に成
長する骨修復組織を、所定の骨細胞から修復が望まれる
欠陥に伝達し得る移植可能なコラーゲン製剤を提供する
ことを課題とする。

［発明の開示］ 本発明は、被移植部とは異種のコラーゲンを使用可能な
ため、多量に入手することができ、極めて応用性が広い
、さらに、本発明は耐応力性を要求される広範囲の用途
に対して極めて適用性が高い。

本発明は欠陥に、（必要であれば）修復される１１１と
は異種の生物から得た。精製非免疫原性コラーゲンを移
植することによって１ｆ＋乳類（特に人間）の骨の欠陥
を修復したり、骨格基質を再生したりする方、法を提供
する。従って、本発明は高度に精製され、新しい骨の生
長のための基質を提供し得る汎用コラーゲン製剤を使っ
て生体組織の骨の欠陥の自然な修復機構を媒介する方法
も提供する。

本発明の方法においては、生きている距骨細胞（ｏｓｔ
ａｏｐｒｏｇｅｎｉｔｏｒ　ｃｅｌｌ）を含む新鮮な骨
を欠陥部に露出し、これを骨及び皮膚のいずれか又は両
方から得た組成物であるコラーゲン製剤と接触させる。

骨起源のコラーゲンは無機成分を除去した骨（ＤＭＢ）
から製造し、テロペプチドを事実上除去したＩ型から実
質的に構成される。これは、誘導修復を媒介する因子を
破壊し、かつテロペプチドを除去するトリプシン等のコ
ラーゲン非分解性の蛋白質分解酵素でＤＭＢを処理して
製造する。

この物質は粉末状で得られ、骨コラーゲン粉末（Ｂ　Ｃ
Ｐ）と言う、皮膚起源のコラーゲンは主として１型コラ
ーゲンで少量のｍ型を含み、典型的には子牛の皮膚から
得られる。この型のコラーゲンはザイダーム（Ｚｙｄｅ
ｒｎ、商標名）コラーゲン移植物という名称で市販され
ている。ｚｃｒを典型とするこのコラーゲン製剤は再構
成された微繊維状のアテロペプチドコラーゲンである。

さらに、皮膚起源のコラーゲン製剤は移植する前に凍結
乾燥することができる。

これらのペプチドの混合物のＢＣＰとＺＣＩの比を変化
させることによって修復材料の物性を調節し、欠陥の特
定の要求や周囲環境に適応させることができる。

号って本発明は一つの視点において、（ａ）生きている
距骨細胞を有する新鮮な骨の表面を欠陥部に露出し、（
ｂ）前記欠陥部にコラーゲン製剤を充填し新鮮な骨の表
面と接触させることから成る骨の欠陥の修復方法に関す
る。前記コラーゲン製剤は精製再構成アテロペプチド微
繊維状皮膚コラーゲン又は骨コラーゲン粉末（前記した
定義の通り）、或いはこれらの混合物である。

精製再構成微繊維状コラーゲンは凍結乾炊体でも良い、
この凍結乾燥製剤（凍結乾燥コラーゲンゲル又はＬＯＧ
）は取り扱い易く圧延もしくは注型して板状にすること
がで、キ、これは容易に移植物（片）として利用できる
。

皮ＩＧ起源のコラーゲンは典型的には皮膚から、可溶化
形態への解離、ろ過による滅菌、及びテロペプチド除去
後の微繊維形態への再構成という工程を経て製造する０
代表的な製剤は軟部組織の修復に有用だと記載されてお
り、この目的のためにザイダー・ム・コラーゲン移植物
（ＺＣＩ）の名で市販されている。これの製造方法は米
国特許第３．９４Ｊ０７３号に詳細に記載されている。

骨ニラーゲン粉末は無機成分を除去した骨（ＤＭＢ）か
ら得られ、実質的に、テロペプチドを除去されたＩ型コ
ラーゲンから成る。これはＤＭＢをトリプシンで処理し
て製造する。トリプシンは骨形成及びテロペプチドに関
連する因子を共に破壊する。この方法によって得られる
骨コラーゲン粉末（Ｂ　ＣＰ）は−上述の好ま１〜い性
ｒｊと共に耐応力性も有し、骨格の欠陥用の負荷支持体
となる。

本発明は別の諸視点においては、本発明に有用なコラー
ゲン製剤及びその製造方法に関する。

［発明の実施態様］ Ａ、定義 本明細書において、骨の欠陥の「伝導」（ｃｏｎｄｕｃ
ｔｉｖｅ）修復とは欠けている骨が補充される過程又は
所望の新しい骨が成長する過程のことを言い、序め指令
を受けた龜ｏａ＋＋ａｉｔｔｅｄ、即ち分化した）座骨
細胞（ｏｓｔｅｏｐｒｏｇｅｎｉｔｏｒ　ｃｅｌｌ）の
代謝を含む、これらの細胞は、一般に骨形成性又は形態
発生性蛋白因子として知られる蛋白因子による誘導なし
に軟骨及び／又は骨を生成することができるこの過程は
分化した細胞によって骨形生が直接的に行われる機能を
含むが、分化した細胞の生成に蛋白因子の添加は必要と
しない。

未分化の細胞の座骨細胞への変化は生体に固有の蛋白質
によっても行われ得ることは理解される。しかし、ここ
で定義する「伝導性」骨修復は外部から供給される支持
基質のみによって媒介されるもので、異種の生体組織や
非内在的な骨形成因子は提供しない。

「骨の欠陥」とは骨Ｍｌ識の付着が望まれる骨格組織の
隙間のことで、この隙間は生体に対する傷害もしくは生
体の骨格組織の先天性異常又は劣化によって生じる。こ
うした欠陥は単なる骨折、病気による骨組織の崩壊、病
気の骨組織又は望まし舷形 くない先天性異常の外科的な除去、或いは餅央外科又は
美容外科の結果として生じることがある。

「新鮮な骨」とは健康な状態にあり、切開して生体組織
を露出すること等によって処理される生体組織の骨格系
中の骨のことを言う０本発明の方法において欠陥部の骨
の再生用に生きている細胞を提供するためには、新鮮な
骨を欠陥部に接触させる必要があることが判っている。

「コラーゲン製剤」とは主成分としである種のコラーゲ
ン蛋白質を含む組成物を言う。

「異種のＪ　（ｘｅｎｏｇｅｎｅｉｃ）とは治療される
生体中の種（ｓｐｅｃｉｅｓ）とは異なる種について言
う。

「不純物を含まない」又は「精製された」とは自然状ｙ
にでコラーゲン等の製剤中に通常伴われる不純物の存在
しないことを言う。すなわち、子牛の皮膚から調製した
コラーゲンは、子牛の皮Ｉ＋Ｗ以外の成分を実質的に除
去してしまえば不純物を含まず、骨からのコラーゲン製
剤について言えば骨以外の成分を除去すれば不純物を含
まないことになる。

「再構成（ｒｅｃｏｎｓｔｉｔｕｔｅｄ）　Ｊコラーゲ
ンとは３本らせん状の分子をテコペプチド伸長部が付い
た状態又は付いていない状態で別々に分離して溶液中に
導入し、次いで微繊維状（Ｆｉｂｒｉｌｌａｒ）に再構
成したコラーゲンのことを言う、この形状において微繊
維は細長いコラーゲン分子から成り、相互にじぐざぐ状
に重なり合って長さの約１／４の幅を有する。この結果
、帯状構造をなし、さらに凝集して繊維状になることが
できる。

「実質的に架橋がない」とはテロペプチドを除去し本来
の架橋形成能力を欠く製剤としたコラーゲンについてい
う、この様な製剤は、例えばグルタルアルデヒド処理し
たり、こうした結合の擬似的な形態を形成するような処
理を行うことによって意図的に架橋させない限り実質的
に架橋しない。例えば高温やγ線照射等の滅菌を目的と
してしばしば行われる処理により、らせん状分子間に付
加的に架橋が形成される０本発明に使用される製剤では
、皮膚起源のコラーゲンを溶液中に分散したままの状態
で微細ろ過（ｆｆｌｉｃｒｏｆｉｌｔｒａｔｉｏｎ）　
して滅菌した後滅菌条件下で処理するので望ましくない
架橋の形成が回避される。

「骨コラーゲン粉末Ｊ　　（ＢＣＰ）とは無機成分を除
去した骨起源のコラーゲンの精製アテロペプチド製剤を
言う。この製剤は実質的にコラーゲン自体から成り１代
謝的に活性な蛋白質を含まない。これは骨由来なので１
型コラーゲンから成り、骨において見られる固有の３次
元構造と良く似た構造を持つ。

Ｂ、詳細な説明 Ｂ１．　　適用 本発明が適用される骨の欠陥には、骨格組織を完全化す
るために充填する必要がある骨組織中の空所が含まれる
０本発明の方法の適用手段として適当な骨欠陥修復の医
学的又は獣医学的な方法には、整形外科、病気の骨組織
の除去並びに重ね合わせ又は補てつによる補充、ゆるん
だ歯の固定、尚の補充、外傷の修復等がある０本発明の
コラーゲン製剤の的確な適用方法は、当業者に理解され
る通り、骨の欠陥の性質並びに選択する治療法によって
変化する。しかしながら一般的には、本発明の組成物は
ペースト状又はゲル状となし、ペーストを欠陥部に外科
的に充填して欠陥部の形状に成形することができる０本
発明のコラーゲン製剤は、また、混合してより希薄な懸
濁液とすれば欠陥部に注入することもできる。だが、い
ずれの場合も治療すべき欠陥部は先ず洗浄して新鮮な骨
の表面を露出させ、生きている骨細胞が欠陥部と連通ず
るようにしなければならない、新鮮な骨の表面は、恒久
的な骨構造の合成に要する管厚細胞を得るために必要と
なる。

Ｂ２．　　コラーゲン製剤 天然コラーゲンは大部分が三重らせん構造から成り、こ
のらせん構造はグリシンが２種類のアミノ酸（通常、プ
ロリン及びヒドロキシプロリン）に結合したトリプレッ
トシーケンスの繰り返しを含み、従ってグリシンが鎖中
で３個目ごとに現れる。さらに、全てのコラーゲン鎖の
各端末には、グリシンのトリプレットシーケンスを含ま
ずらせん状でない領域が存在する。これらの領域は大抵
のコラーゲン製剤に伴う免疫原性に関連するものと考え
られる。免疫原性は、こうした領域を除去して「アテロ
ペプチド」コラーゲンとすることによって大力消去でき
る。これはトリプトシン又はペプシン等の蛋白質分解酵
素による消化によって達成できる。こうした蛋白質分解
酵素の特異性の違いのためテロペプチド除去の完全さに
差が生じる。従って最も完全に除去し得る特定の蛋白質
分解酵素が好ましい、こうした酵素としてトリプシンが
あり、これは実質的に全てのテロペプチド部を除去する
ことができる。

非らせん状のテロペプチド領域は架橋を形成して微ｉｎ
　維構造を安定化するためにも必要である。

これらの領域はりジン残基に架橋可能なアルデヒド類を
含む。必要な場合は、アテロペプチドコラーゲンは人工
的に架橋しなければならない。

全てのコラーゲンは上述の特性を共有するが、コラーゲ
ンは三重らせんの個々の鎖におけるアミノ酸の正確な順
序、炭水化物含量、及びジスルフィド架橋の存在の有無
に基づいて約１０種類に品分類されている。＠も普通の
亜をはＩ型び■型で、Ｉ型は皮膚、腓及び骨中に存在し
繊維芽細胞から形成される。また、■型は主に皮膚中に
存在する。他の型は特殊な膜又は軟骨、もしくは細胞表
面に存在する。Ｉ型及び■型はそのらせん中に回数のア
ミノ酸を含むが、三重らせんのＣ端末に近接する２個の
システィンを含みこれで内部的に架橋し得るが、■型は
これを含まない。

１１１、ｌコラーゲンは１本のα２（Ｉ）ｍと２木のα
１（Ｉ）鎖を含み、この各々がその三重の領域に１０１
４のアミノ酸を含む。また、各々の錦上には数イｌ＋Ｉ
　　ｎ）：４．！　　ｋ　ｌｋ　　＋＋ｎ　　ｂし４）
　ｈ（）ｉプｒ　す　ス　　　　ｍ　　Ｊ［＋＋　　１
−１　−　　）ｔ’　　・ノＪ斗αｌ　　（ＩＩＩ）　
　（３本の鎖）シか含まず、これらはその三重らせん領
域に１０２６の残基を含む、前述のように、ｍ型コラー
ゲンの三重領域のカルボキシ端末にある一対の近接シス
ティンにより内部架橋が安定化される。いずれのコラー
ゲンも短い非三重らせん状の端部（テロペプチド）を含
む。本発明に用いる再構成微繊維状アテロペプチドコラ
ーゲンは■型及びＩＩ型の両方のアテロペプチド形態を
含むが、骨コラーゲン粉末は専ら１型のアテロペプチド
形態から成る。

両層１源コラーゲノ 本発明の組成物として有用なアテロペプチド再構成微繊
維状皮膚コラーゲン製剤の代表的なものとして１通常前
品名ザイダーム（ＺＹ［ＩＥＲ’Ｍ）　・コラーゲン移
植物（ＺＣＩ）として販売されている。精製子牛皮膚起
源アテロペプチドコラーゲン再構成微繊維状懸薊物があ
る。

これ及び他の皮措°起源精製アテロペプチド再構成微１
Ｂ　雄状コラーゲンは当業者に良く知られている。ＺＣ
Ｉはしわ取りや皮后直丁への製剤の注入による凹んだ傷
害部の修復を始めとして、軟部組織に広く利用されてい
る。しかしながら、この様な製剤は、ＯＦをも含み誘導
的骨修復を目的とする支持材料との関連使用を除、くと
、骨の修復には使用されていない、こうした応用例は米
国特許出願番号３４８，４１４　　（１８８２年２月１
２日出願）に開示されている。

このコラーゲン製剤は子牛の皮膚から得たものなので、
主として１型コラーゲンと約１〜５％の■型コラーゲン
を含む、アテロペプチドコラーゲンは適当なろ過技術を
使って溶液中に８％したままの状態で滅菌されるので劣
化や架橋が生じない、これを微繊維状に再構成し滅菌条
件下で包装する。

（工人下金台） ′喝　・ゴ１゛１５・・　１コラーゲンこのコラーゲン
を凍結乾燥して凍結乾燥コラーゲンゲル（ＬＣＧ）とす
ると、移植又は充填された空所中にしっかりと固定化し
、優れた構造保持性により所望の位置からの移動に抵抗
する能力を示す、さらに、ＬＯＧマトリックスは移植部
分への骨組織の癒合や再生長を支持するという望ましく
、かつ必要な性質を示す。後により詳細に説明する様に
、本発明のＬＣＧ９剤はｐＨ１凍結速度、及び凍結時の
懸濁液の濃度を制御して広範な物性を得ることができる
。所望する特性にかかわらず、本発明のＬＯＧ製剤の特
徴の一部は、実質的に不純物を含まないアテロペプチド
再構成微陽雄状コラーゲンから成ることにある。この製
剤を微細ろ過によって滅菌後、滅菌条件下で処理しても
、やはり架橋は実質的に存在しない、付加的に凍結乾燥
処理するとマット状になり、はさみ又は鋭い刃物を使う
だけで簡単に切断して医療用の適当な形状にすることが
できるほどの結合力を示す、このマットを濡らすとパテ
状の材料が得られ、これは任意の形状に成形して欠陥部
に挿入することができる。

他の形態の医療用凍結乾燥コラーゲンについても開示さ
れているが、これらは本発明のコラーゲン製剤とは異な
る。へチスタ（Ｂａｔｔｉｓｔａ、米国特許第３，４７
１，５９８号）は牛の皮膚を塩醇で処理して膨憫後コラ
ーゲン繊維を分離して得られる中間的な微結晶形態のコ
ラーゲン製剤の凍結乾燥体を開示している。このコラー
ゲンは精製しておらず、テレペプチドも除去していない
、この様にして製造した材料は吸水性スポンジとして適
するが、不純物を含み免疫原性を有するため、明らかに
直接的な医療用には適さない。さらに、この中間的形感
の製造に用いる酸がスポンジ中に残存する。クンツ等（
Ｋｕｎｔｚ　ｅｔ　ａｌ　、米国特許第３゜３６８．９
１１号）は、酸が残存しないようにバチスタの使用した
比軟的不揮発性の酸の代わりにカルボン酸を用いる吸水
性コラーゲンスポンジの製造方法を開示した。この製剤
には実質的に純粋なコラーゲン繊維を用いることが開示
されているが、テレペプチドは除去していない、宮田（
Ｊｉｙａｔａ、米国特許第４，２９４，２４１号）は皮
膚包帯用の凍結乾燥フラーゲンシートを開示している。

このシートは微繊維状に再構成したアテロペプチドコラ
ーゲンから製造されるが、本発明のＬＯＧとほこ、れら
が人工的に架橋されている点で異なる。リース（Ｒｉｅ
ｓ、米国特許第４，０６６．０８３号）は、傷の治療用
の市阪製品、コラーゲンフリース（ｆｌ：ｏｌｌａｇｅ
ｎ　　ｆｌｅｅｃｅ　、商標名）の製造方法を開示して
いる。ラックとダニエルス（Ｌｕｃｋ、Ｄａｎｉｅｌｓ
、　　米国特許第４．２３３．３６０号）は凍結屹爆製
剤について記載しているが、これは本発明のようなマッ
トではなく発泡体になる。

本発明のＬＣＧは通常、精製再構成微繊維状アテロペプ
チドコラーゲン、例えばザイグーム（Ｚｙｄｅ　ｒ耐　
エコラーゲン移植物又はザイダームＩＩコラーゲン移植
物（共に牛の支局′から製造した再構成コラーゲン製剤
の商標名）から製造される。

能の再構成精製皮膚コラーゲン原料１例えば他の哺乳動
物の皮ハリｉも用いることができる。しかしいずれの場
合も、出発材料は、可溶化した形態から再構成した実質
的に純粋なコラーゲン微繊維とする工程によって、これ
らの原料から製造しなければならない。さらに、テロペ
プチドは適当な工程、例えばトリプシン消化等によって
除去しなければならない。典型的にはこうした精製製剤
は出発材料を微細に分割後、酵素及び／又は適当なｐＨ
条件下で非コラーゲン物質を破壊又は抽出し、続いてコ
ラーゲンをトリプシン等の消化性酵素で処理してテロペ
プチドを除去し、微細ろ過して滅菌し、ｐＨ及び塩濃度
を適当に調節して（つまり、酸性から中性で）コラーゲ
ン微繊維を再構成して製造する。この様な製剤は当業者
に知られており、事実、これを用いた製品が市販されて
いる。

凍結乾燥形態の製造への再構成コラーゲンの使用は、滅
菌過程での劣化防止の観点からも重要である。コラーゲ
ンは製造過程の一段階で可溶化形をとるため微細ろ過が
可能で、この工程は完全に中性の工程なので構造にＷＪ
著な化学的、物理的な変化か生じない。以後の工程を滅
菌状７．！？で実施すれば、これ以北は＆１．菌を必要
としないので、生成物に加熱又はγ線照射等のより過酷
な滅菌条件を用いた場合に生じる様な劣化や架橋が生じ
ない。

本発明のＬＣＧの製造においては、適当なコラーゲンの
懸面液を温度約２０〜１００　ｍ　Ｈ／　ｍ文として注
型するか、シート状に押出成形する。これらの成形体を
続いて約−１０〜−５０゛Ｃで凍結後コンデンサー温Ｊ
Ｒ約−４５〜−５５°Ｃ、シェルフ温度約−３０℃とし
て約１０〜１００ｍ１ｌｌｉ−ｔａｒｒで凍結乾燥する
。１〜７日間日間凍結乾燥後シェル変温１５〜２５℃に
上昇し、さらに２４時間後に凍結乾燥器からＬＯＧを取
り出す。

別法として、可溶化形の精製コラーゲンを用いることも
できる。この様な溶液は精製アテロペプチドコラーゲン
を約ｐＨ２〜３で水溶液中に溶解し、随時微細ろ過で滅
菌後、例えばリン酸塩緩衝液を用いてｐＨをほぼ中性と
し再構成形態を沈澱させて製造する。生成した沈Ｓコラ
ーゲンを遠心分離法で採集し、ペレント化したコラーゲ
ンを中性の緩衝液中に再懸濁させて前述のように処理す
る。

特定の用途においてより優れた結果が得られる、前述の
方法の改良方法に相当する別の凍結乾燥形態がある。コ
ラーゲン懸瀾液を滅菌した培養板（例えば、３５ｍｍ）
中に注型し、得られた注型体をスパチュラ等で平滑にす
る６次いでこの注型体を凍結し約−１００〜−５０℃、
好ましくは約−８０°Ｃに１時間保持後凍結乾燥する。

約１０〜１００　ｍ１ｌｌｉｔｏｒｒ約２４時間凍結乾
燥して乾燥させ、厚さ数ｍｍの多孔質のマットを得る。

を緑り且文二ｊ！ 本発明で用いる骨コラーゲン粉末（ＢＣＰ）は無機成分
を除去した骨から得たもので、従ってそのコラーゲン成
分は専らＩ型コラーゲンである。

このコラーゲン製剤は従来製造された形態のコラーゲン
とは物理的、化学的特性が異なる新物質であり、乾燥粉
末状で便利に貯蔵することができる。通富、牛、豚等の
哺乳動物の骨、好ましくは緻密な骨を洗浄、凍結、粉砕
後、常法を用いて塩酸等の適当な酸で無機物を除去する
。残存有機物を分離し、蛋白質分解酵素を逐次的にもし
くは組み合わせて使用して消化する。オリバーとグラン
ド（Ｏｌｉｖｅｒ、　Ｇｒａｎｔ、　　英国特許、ＧＢ
１５６５３４０Ａ）が記載する様に、非コラーゲン質の
蛋白を選択的に劣化させるトリプシン等の中性蛋白質分
解酵素が好ましい。ペプシン等の特定の酸性蛋白質分解
酵素はコラーゲンを部分的に消化するので好ましくない
、非蛋白性の骨成分もコンドロイチナーゼ、ヒアルロニ
ダーゼ、及び種々のヌクレアーゼ等の適当な酵素を用い
て除去できる。もちろんコラゲナーゼの使用は不適当で
ある。適当なＩ！ｆ素を使用して処理した後の不溶性物
質はＢＣＰ形の精製アテロペプチドから成る。これはγ
線照射又は加熱等の既知の方法で滅菌後使用することが
できる。トリプシン処理後に残存する全てのテロメゾチ
ドリ残存抗原性効果が緩和されるので、この型のコラー
ゲンでの架橋の存在は好ましい場合が多い。

この様にして得たＢＣＰは新規なものである。

これは木質的に１型コラーゲンから成り、見掛は上、骨
コラーゲンの元の分子構造を保持しているが、テロペプ
チドは含まない。

このＢＣＰは、適当に前処理した骨の欠陥中に圧入して
使用するために生理的緩衝液中に再懸渇する。

乱立］ 混合物を使って本発明の移植片又はペースト状修復材料
を製造する場合は、材料の取り扱い上の必要性及び修復
部位にかかることが予想される応力に対処するのに必要
な物性に応じた比率範囲の、ＺＣＩ等の再構成微繊維状
アテロペプチドコラーゲンの懸濁液及びＢＣＰを使って
製造する。

ＢＣＰ量を増すと組成物に耐重量性及び耐応力性を付与
することができるのに対して、ＺＣＩに対するＢＣＰ比
率を減らすと柔軟性が増し適用性が良くなる。従って本
発明の方法は、従来方法に比較して生体の欠陥を修復す
る際、その性質に応じて極めて順応性に富む。

比率の範囲はもちろんいずれかの成分を単独で使用でき
るほど大きい。好適な混合物は欠陥の性質によるので、
一般的に好ましい単一の範囲は特定できない、だが、一
般的には１重量がかかる欠陥部に対しては約５０％ＺＣ
Ｉ７５０％ＢＣＰ〜約１０％ＺＣＩ／９０％ＢＣＰ　（
重量％）の範囲が好ましく、歯根膜又は表面部の欠陥に
対しては約９０％ＺＣＩ／ｌ　Ｏ％ＢＣＰ〜約５０％Ｚ
ＣＩ１５０％ＢＣＰ　（重量％）が好ましい、（上記の
比率はＺＣＩの３５　ｍ　ｇ　／　ｍ文懸濁液を想定し
たもので、重量は全懸濁液の重量を言う、）ｃ、　　、
ｔ＋ 以下に本発明を説明するが、これは本発明を限定しよう
とするものではない。

Ｃ，Ｉ　　Ｚ立上ｌｊ ザイダーム・コラーゲン移植物（Ｃｏ　ｌ　ｊａｇａｎ
Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ、カリフォルニア州、パロアル
トから購入）を再構成微繊維状アテロペプチド成分とし
て使用した。再構成天然型コラーゲン微１ａｍを濃度的
３５ｍｇ／ｍｕで用いた。この製剤は加工時にろ過して
滅菌したので、加熱又は照射等の劣化を被むる工程は受
番すていない。

Ｃ，２Ｌ且旦１濃 Ａ、　微細ろ過で滅菌した約ｐＨ２〜３のペプシン町溶
化牛皮コラーゲン水溶液をリン＃塩緩衝液でｐＨ７，４
に：ＡｆｒＡシた。沈鍛したコラーゲンを遠心分離して
捕集後、ｐＨ７，４のリン酸塩緩衝液中に濃度３５ｍｇ
／ｍｕで懸濁させた。懸潤液をシート状に注型し、この
シートを一２５℃で凍結後コンデンサ一温度−５０℃、
　２５　ｍ１ｌｌｉ−ｔａｒｒで凍結乾燥した。凍結乾
燥したシートを一３０″Ｃで５日間貯蔵後、温度を再び
２０°Ｃに上げ使用直前の２４時間保持した。

Ｂ、　別法（或いは改良法）として、約５ｃｃのザイダ
ーム・コラーゲン移植物（インブラント）を滅菌した３
５ｍｍ組織培養板中に注型し。

スパチュラで平滑化した。このコラーゲンゲルを凍結し
、−８０°Ｃに約１時間保持した。続いてコラーゲンゲ
ルを乾燥するまで約２４時間凍結乾燥し、直（￥３５　
ｍｍ　、圧さ３〜５ｍｍの多孔質白色ディスクを得た。

Ｃ，３旦３二二ｍ五Ａつ− 牛の大腿骨を手洗いして付着する軟部組織を除き、骨の
関節端を骨端板近くで除去して本質的に緻富な骨を得た
。骨幹を液体窒素（Ｔ−Ｎ２　）で冷却し、軸方向に割
って骨髄を取り除いた６緻密な骨片をＬＮ２温度でショ
ークラッシャーを使って粒径５ｍｍ以下の破片に破砕し
た。この骨片をハンマーミルを使い、やはりＬＮ、温度
で粉砕した。

骨粉を流水下でふるって、１２５〜２５０ｐｍと２５０
〜４５０　ｐｍの２つの粒径部分に分１すた。この２種
類の粒径部分を平行して、個別に加工した。

０．５Ｍ　　ＨＣｌを用い（骨粉１ｇに対してＨＣｕＣ
ｕ溶液２立 酸と交換して、室温下３時間かけて骨粉から無機成分を
除去した。集機成分除去工程の終りに，骨粉を３回水洗
し酸溶性無機物を除去した．無機物を除去した骨粉を，
蛋白質分解処理に先立って凍鯖乾燥した。

凍結乾燥した骨粉をトリプシンで消化した（０．５ｍｇ
／ｍ文　ＮａＮ３を含む０．１ＭＮａ７　ＨＰＯ４１ｍ
Ｊ１当り骨粉５０ｍｇ及びトリプシン２ｍｇ；すなわち
トリプシン：骨粉＝１２５）。酵素による消化を１５°
Ｃで１０口間行った。消化上澄液をビュレｙ）法で加温
性蛋白質について分析し、消化の進行を監視した。

トリプシン消化生成物を除くため、骨粉を沈降させてか
ら上澄み液を分離し、同体分に４ＭＮａＣＪ１溶液（１
０：ｌ／容積二重量）を加えた。骨粉を室温で１時間攪
拌し、その時点で粉末を沈降させてデカンテーションし
た。４ＭＮａＣＭによる抽出を合計３回繰り返した。

塩化ナトリウムを除くため、１０倍量の米国薬局方注射
用水（ＷＦＩ）中でＮａＣ１抽出についての記載と同様
にして１０分間攪拌して６回洗浄した。

次いで骨粉を１０倍量のアセトンで２回抽出し存在する
全ての脂質を除去した。アセトン抽出後、骨粉をＷＦＩ
で５回洗浄し、真空ろ過してから凍結乾燥して骨コラー
ゲン粉末（Ｂ　ＣＰ）を得た。

ＢＣＰ試料を脂質、グリコスアミノグリカン（４１ｙｃ
ｏｓａｍｉｎｏ−ｇｌｙｃａｎ）　、及びアミノ酸組成
物について化学的に、残存トリプシン、半券血球細胞、
及び牛コラーゲンテロペプチド（コラーゲンの抗原性端
末）について免疫学的に、さらに超微細構造について電
子顕微鏡的に分析した。トリプシン処理が進むにつれて
、好ましくは４〜１０日で、ＢＣＰは次第にテロペプチ
ドをほとんど含まない純粋の工型牛コラーゲンになった
。電子ｍ徽鏡により、特徴的な帯状をなすコラーゲン微
繊維と牛骨の組織が認められた。また、アミノ酸組成か
ら、化学的に純粋なコラーゲンであることが判った・ この様にして製造したＢＣＰには２種類の粒径があり、
さらに第１表に示すようにトリプシン処理度合の異なる
ものがあった。全ての試料は１．５Ｍｒａｄでγ線照射
して滅菌した。

第１表 ＢＣＰ試料の要約 ２２　　　、　　　１２５−２５０　　　　０２Ａ　　
　　　　１２５−２５０　　　　１２Ｂ　　　　　　１
２５−２５０　　　　４２Ｃ１２５−２５０１０ ３Ｚ　　　　　　２５０−４２５　　　　０３Ａ　　　
　　　２５０−４２５　　　　１３Ｂ　　　　　　２５
０−４２５　　　　４３Ｃ２５０−４２５ｔ。

Ｃ，４ＢＣＰ　　ＺＣＩｇ合、°Ｉ ＡＮ項で２０及び３Ｃと命名した骨コラーゲン粉末（Ｂ
　ＣＰ）を５５７４５（重量比）で混合し、１．５Ｍｒ
ａｄでγ線照射して滅菌した。

この滅菌ＢＣＰ混合物を使って２パツチのＢＣＰ／ＺＣ
Ｉ混合物を製造した。すなわち、乾燥ＢＣＰ　０．３３
　ｇをＺ　ＣＩ　（３５ｍ　ｇ／　ｍ文）懸濁液、つま
り固体公約０．８７　ｇ　Ｘ　Ｏ，０３５ｇ　／　ｍ立
として）　０．６７ｇと混合しＺＣＩの３３％ＢＣＰ混
合物を調製した。また、ＢＣＰＯ，１７ｇをＺＣＩ（３
５ｍｇ／ｍ文懸濁液）　０．８３ｇと混合して第２の混
合物を調製した。これらの材料をそれぞれ十分に混合し
て１〜Ｖｉｃｃの注射器に満たし、以下の手順に用いた
。

Ｃ，５ＺＣＩによるろ　・陥　−′ 生後６〜８週間の４５匹のラットに麻酔をかけ、頭皮を
反転して頭蓋骨膜を除去した。歯科用ドリルを使って頭
蓋側壁骨に３Ｘ７ｍｍの貫通欠陥を左右対称に設けた。

０．１に記載した注入可能なコラーゲンゲ・ルを小型ス
パチュラを使って欠陥中に充填し、頭皮を元に戻して縫
合した。欠陥内の癒合速度を移植後２，４．８及び１８
ａｌ’ｆＪ後にＸ線並びに組織学的に監視した。

２週間後にはコラーゲンゲル内に組織学的に新しい骨細
胞（骨芽細胞）の島と基質が認められた。４週間後まで
には大半の事例で新しい骨が欠陥全体に広がり、欠陥の
切断端部間の融合物及びこの新しい骨が生じ始めた。８
〜１６週間の間に。

新旧の骨の結合部がほとんど見分けられなくなった。ま
た、新しい骨は再構成されて、欠陥部に元から存在する
骨に典型的な明瞭な骨髄腔を有する機雷な骨の・層とな
った。ラットから除り去った頭蓋のＸ線から、１６週間
後の欠陥中に多量のＸ線不透過性の骨の存在が確認され
た。移植していない左右対称の頭蓋側壁管欠陥を有する
ラットでは観察期間１６週間では顕著な癒合は認められ
なかった。後者の場合、骨形成活動は欠陥の切断端の小
部分に限定され、欠陥の残部はゆるい結合組織で満たさ
れていた。

この様に、再構成コラーゲン繊維によって、伝導骨生長
の支持基質を提供するための新規で有用な方法が得られ
る。

Ｃ１６ＬＣＧ　Ｆいるし石ノ陥　−′ 生後約８週間のラットに麻酔を施し、頭皮を反転して頭
蓋骨１１りを除去した。歯科用ドリルを使って頭蓋側壁
の骨に３Ｘ７ｍｍの貫通欠陥を左右対称に設けた。Ｃ，
２Ｂに準じて製造した凍結乾燥コラ−ケンを欠陥より若
干大きめの細片状に切断し、移植片が欠陥部にしっかり
封入されるようにした。一部の細片は欠陥中に乾燥状態
で入れその中で水和させたが、一部は移植に先立って水
和させた。移植後、頭皮を元に戻して縫合し、た。欠陥
内部の癒合速度を、移植２及び４週間後に組織学的に評
価した。

２週間後には移植片中に結合組織及び血管が十分浸潤し
たが、新しい骨の形成は極めて限定されていた。前項に
記載した型の非移植欠陥は癒合せず軟部組織で満たされ
たままだったが、修復した欠陥では２８日後までには移
植片全体に新しい骨の形成が認められた。また、欠陥の
切断端部と移植片の界面に早くも既存の骨との融合の徴
候が認められた。５６日後までには、明瞭な骨髄腔を有
する成熟した骨の存在が欠陥全体に認められた。

ＬＯＧは容易に切断して、伝導骨生長を支持可能な挿入
物を成形することができる。得られた凍結乾燥再構成コ
ラーゲン繊維のマットはこの目的に好適な材料である。

Ｃ，７六　、゛へ　ＢＣＰの一゛ 生後６週間のラットに麻酔を施し、頭蓋の左右の壁管に
３Ｘ７ｍｍの欠陥を設けた。歯科用ドリルで頭蓋に貫通
孔を開け、前述の様にして調製したＢＣＰを滅菌食１ｆ
ｉ水で湿温後欠陥に充填した。対照用欠陥は未充填のま
ま残した。前記第１表のＢＣＰ試料２Ｂ　、３Ｚ、３Ａ
、３Ｂ、及び３Ｃを試験した。移植後２及び４週間後に
試料を採取し、組織学的に検査した。

試料３Ｚ（トリプシン消化実施せず）及び３Ａ〔トリプ
シン消化１日）は抗原性成分の証拠を伴う炎症を示した
。試料２Ｂ　、　３Ｂ　、及び３Ｃは２週間で多核性細
胞反応、骨芽細胞反応を伴うＢＣＰの消化、並びに新し
い縁布な骨の沈着を示した。４週間の時点で、移植片全
体に多量の骨が形成され、新旧骨の融合の徴候が認めら
れた。対照欠陥には切断端部で僅かな骨の生長が認めら
れたに過ぎなかった。

ＢＣＰ試料３ｚを移植したラットの血清中にはＢＣＰに
対する循環抗体が存在した。試験した他のＢＣＰ試料は
抗体反応を誘発しなかった。

これらの結果を第２表に要約して示す。

第２表 ３２　　　　＋　　　　＋＋＋　　　　　−＋７３Ａ　
　　　　　　　＋　　　　　　　　　＋　　　　　　　
　　　　十−３Ｂ　　　　＋＋　　　＋　　　　　−−
３Ｇ　　　　＋＋　　　＋　　　　−−２Ｂ　　　　＋
＋　　　＋　　　　　−−ＢＣＰ試料２Ｚ　、　２Ａ　
、　２Ｂ　、及び３Ｂ。

３０ｍｇをリン酢塩で緩衝した食塩水（ＰＢＳ）７ｍｌ
に懸瀾させ、ラントの腹腔内に注入した。

１．３．＋４．及び２８日後に腹腔をＰＢＳ　　１００
ｍ文で潅流して細胞を選別計数及び全数計数し、炎症の
定・π的尺度とした。また、ＢＣＰ移植片を組織学的に
検査し、血清を循環抗体の尺度とした。

全試料で１日後に遷移的な好中球反応が認められ、この
材料に特異的な性質に関連するものと考えられた。３，
１４．及び２８日の時点では応答細胞はマクロファージ
が支配的になり、移植片の組織学的検査によれば２８日
後において明らかに多量のＢＣＰの消化が認められた。

極く微量の免疫性細胞（リンパ球）が常時存在した。血
清学検査の結果、２Ｚを移植したラットでＢＣＰに対す
る抗体の１ｌ１３ｉ定都、がかなりの量に達することが
判った。

２Ａ、２Ｂ、２Ｃ，又は３Ｂを移植したラットでは抗体
反応が発現しなかった。

ＥＣＰは伝導機構での骨の修復に有用な、骨を原料とす
る新規な基材である。骨コラーゲン粉末（Ｂ　ＣＰ）は
骨の欠陥部の形状にすることができる損逸した骨の耐応
力性の補填物で、新しい骨の生長を支持する。

生後６〜８週間のラット２４匹に麻酔を施し１頭蓋の左
右の側管に３×７１の欠陥を設けた。歯科用ドリルを使
って頭蓋に貫通孔を設け、前記の様にして製造した２種
類のＢ　ＣＰ　／　Ｚ　ＣＩ　混合物を孔中に充填した
。対照欠陥にはＢＣＰ又はＺＣＩ単体を充填するか未充
填とした。移植後２及び４週間後に試料を採取し組織学
的に検査した。

ＢＣＰ／ＺＣＩｇ合物を充填した欠陥では移植後２週間
で普通よりも早い骨の生長が生じた、だが、ＢＣＰ／Ｚ
ＣＩｇ合物は必ずしも均一でないため、欠陥の特定部位
に存在するコラーゲン質移植片中の支配種（つまり、Ｂ
ＣＰ又はｚｃ　Ｂによって骨の形成パターンが変化した
。

４週間目までにはＢＣＰ／Ｚ、ＣＩ混合物のＺＣ工成分
中で新しい骨が多量に形成され。

ＢＣＰ粒子は新しい骨形性活性の中心部に取り込まれつ
つあった。これが早期の再構成と相俟って、欠陥部に広
がる所しい骨の外観が１４日の時点よりも均一性を帯び
ていた。移植した対照欠陥（つまり、ＥＣＰ単独及びＺ
ＣＩ単独）には上述の研究でｒ＆察された特徴的な形式
の骨充生活性が認められた。移植しなかった対照欠陥で
は欠陥の切断端部に僅かな骨の生長が認められたに過ぎ
なかった。

弾性のゲル状懸濁物を形成する精製アテロペプチド再構
成微繊維状コラーゲンと圧縮強度を付与する骨コラーゲ
ン粉末との相対量を変えることによって、伝導による骨
の修復に適する基質を得る上で、多様性に富む有用な移
植材料を製造できる。

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １、）（ａ）欠陥部に新鮮な骨を露出し、 （ｂ）（ｉ）骨コラーゲン粉末、 （ｉｉ）精製アテロペプチド再構成微繊維状皮膚コラー
   ゲン、 （ｉｉｉ）精製アテロペプチド再構成微繊維状皮膚コラ
   ーゲンの凍結乾燥ゲル、及び （ｉｖ）（ｉ）及び（ｉｉ）の混合物 から成るグループから選択される一つ のコラーゲン製剤を前記欠陥中に充填 して前記新鮮な骨と接触させることを 特徴とする哺乳動物の骨の欠陥の伝導 修復方法。 ２、）前記（ｉｉ）及び（ｉｉｉ）のコラーゲン製剤を
   子牛の皮膚から製造することを特徴とする請求の範囲第
   １項に記載の方法。 ３、）前記（ｉｉｉ）のコラーゲン製剤をマット状に押
   出成形したことを特徴とする請求の範囲第１項に記載の
   方法。 ４、）前記（ｉｉ）及び（ｉｉｉ）のコラーゲン製剤が
   実質的に架橋していないことを特徴とする請求の範囲第
   １項記載の方法。 ５、）懸濁液から凍結乾燥した精製アテロペプチド再構
   成微繊維状皮膚コラーゲン製剤から実質的に成る再構成
   コラーゲン繊維の凍結乾燥マット。 ６、）前記コラーゲンが実質的に架橋していないことを
   特徴とする請求の範囲第５項に記載の凍結乾燥マット。 ７、）（ａ）精製アテロペプチド再構成微繊維状皮膚コ
   ラーゲンの懸濁液を板状に注型し、 （ｂ）注型生成物を凍結乾燥する工程から成る骨移植片
   としての使用に適した凍結乾 燥コラーゲンマットの製造方法。 ８、）実質的に骨コラーゲン粉末から成ることを特徴と
   する精製コラーゲン製剤。 ９、）無機成分を除去した骨粉をトリプシン及びペプシ
   ンから選ばれた少なくとも一種類の蛋白質分解酵素で処
   理することを特徴とする、骨の欠陥の修復への使用に適
   する骨コラーゲン粉末の製造方法。